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    Practica 5 - Carbohidratos

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    Este documento describe los procedimientos para determinar azúcares reductores en miel utilizando dos métodos: titulación con reactivo de Fehling y espectrofotometría con reactivo de DNS. El objetivo es demostrar el poder reductor de los carbohidratos presentes en la muestra biológica. Se explican los materiales, reactivos y pasos para ambos métodos, incluyendo preparación de soluciones patrón, tratamiento de muestras, lectura de resultados y cálculos para determinar la concentración de azúcares

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    PRACTICA 5 -CARBOHIDRATOS

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    PRACTICA 5 -CARBOHIDRATOS

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    Prácticas de Bioquímica Mgr.

    Soledad Bornás Acosta


    ________________________________________________________________________________
    PRÁCTICA 4

    CARBOHIDRATOS

    1. INTRODUCCION

    Los carbohidratos, llamados también glúcidos o hidratos de carbono, son compuestos


    polifuncionales que contienen grupos carbonilo (aldehído o cetónico) y grupos hidroxilo o
    alcohólicos. Por lo tanto, poseen propiedades de aldehídos o cetonas y de alcoholes
    polihidroxílicos. Estos biopolímeros están muy difundidos en la naturaleza y pueden
    clasificarse en monosacáridos (como la glucosa, fructosa, ribosa y otros), oligosacáridos
    (dentro de este grupo podemos mencionar a los disacáridos como la sacarosa, lactosa,
    celobiosa, maltosa y otros) y polisacáridos (tenemos al almidón, celulosa, pectinas y otros).
    Constituyen una importante fuente de energía, a comparación de otros nutrientes producen
    una combustión más limpia en las células y deja menos residuos en el organismo. La glucosa
    es un combustible celular por excelencia, oxidándose aeróbicamente hasta obtener CO2 más
    H2O y liberar la energía metabólica, la cual es utilizada para el desarrollo, construcción de la
    parte estructural del organismo, también sirven como material para la síntesis de otro tipo de
    compuestos y juega un rol importante en la bioenergética de la célula.
    Los carbohidratos pueden ser identificados mediante su poder reductor, especialmente los
    monosacáridos y algunos disacáridos, por poseer su grupo funcional intacto, ya que a través
    del mismo pueden reaccionar como reductores con otras moléculas.

    2. OBJETIVOS
     Demostrar el poder reductor de los carbohidratos presentes en una muestra
    biológica.

    3. MATERIAL Y METODOS

    3.1. MATERIALES
    3.1.1. Materiales biológicos
     Miel

    3.1.2. Materiales de vidrio


     Tubos de ensayo
     Pipetas
     Bureta
     Matraz
     fiolas
     Cubetas

    3.1.3. Reactivos
     Dextrosa 0,5%
     Glucosa 2g/L
     Reactivo de DNS
     Reactivo Fehling A y B
     Azul de metileno
     Agua destilada

    3.1.4. Equipos y otros


     Espectrofotómetro
     Cocina eléctrica

    3.2. METODOS

    1
    Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta
    ________________________________________________________________________________
    Mediante la observación y exploración se aplicará el método de absorción utilizando el
    espectrofotómetro y método de titulación.

    4. PROCEDIMIENTO
    4.1. Determinación de azúcares reductores por titulación
     Colocar una solución de dextrosa 0,5% a una bureta para la titulación.
     En un matraz colocar el reactivo Fehling A 5mL y el reactivo Fehling B 5mL
     Luego agregar 4 gotas de azul de metileno y 25mL de agua destilada.
     Calentar hasta ebullición constante y titular, hasta el viraje de color azul al color rojo
    ladrillo.
     Repetir el procedimiento utilizando una muestra de miel (10g enrazar hasta 100mL
    de agua destilada).

    4.2. Determinación de azucares reductores por DNS


     Preparar los siguientes sistemas:
    B S D

    Agua destilada 0,5mL

    Glucosa 2g/L 0,5mL

    Muestra 0,5mL

    Reactivo de DNS 2,5mL 2,5mL 2,5mL

     Llevar a ebullición los sistemas por 5 minutos y dejar enfriar por 10 minutos
    aproximadamente en un recipiente con hielo.
     Luego agregar 3mL de agua destilada y agitar.
     Leer la absorbancia registrada en el espectrofotómetro a 540nm de longitud de onda
    (dentro de los 30minutos).

    5. RESULTADOS
     Esquematizar el procedimiento de los experimentos.
     Mediante cálculos matemáticos determinar la concentración de azúcares
    reductores.

    6. CONCLUSIONES

    7. CUESTIONARIO
    7.1. ¿Por qué la sacarosa no es un carbohidrato reductor?
    7.2. ¿Mediante qué otras pruebas podemos determinar a los carbohidratos?
    7.3. ¿Qué importancia tiene el tubo blanco y el tubo estándar en el método de
    espectrofotometría?
    7.5. ¿Explique el fundamento del DNS para determinar azúcares reductores?

    8. BIBLIOGRAFIA

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    Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta
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