Lectura Procesamiento e Inclusión

DESHIDRATACIÓN, ACLARAMIENTO E
IMPREGNACIÓN
Los tres pasos del procesamiento de tejidos (deshidratación, aclaramiento e

impregnación) son pasos secuenciales designados para remover toda el agua que se pueda
extraer de los tejidos y reemplazarla con un medio que se solidifique a temperatura
ambiente para así permitir la realización de cortes semifinos de estos tejidos.
El paso de deshidratación consiste en una batería de alcoholes en grado crecientes,
el más utilizado es el etanol.
El paso de aclaramiento cumple dos funciones, extraer o reemplazar el reactivo
deshidratante y facilitar la impregnación del tejido, gracias a que el reactivo utilizado en la
impregnación es soluble en éste. Los agentes aclarantes (o intermediarios) utilizados deben
ser miscibles tanto con el agente deshidratante como con el medio de inclusión, él más
usado para este propósito es el xilol o xileno, generalmente empleado para inclusión en
parafina por su compatibilidad con muchos tipos y tamaños de especímenes.
La parafina histológica es el medio de impregnación hidrófobo más utilizado en el
procesamiento rutinario de los tejidos. La parafina histológica es una mezcla de
hidrocarburos sólidos derivados del petróleo y polímeros plásticos, es blanca o incolora,
más o menos traslúcida, inodora y existen de distintos tipos, cada una con un punto de
fusión distinto de alrededor de los 45°C a 60°C.
Batería de Deshidratación, Aclaramiento e Inclusión en Parafina
Los procesadores automáticos de tejido

perfeccionaron el procesamiento mediante la adición
de agitación, vacio y temperatura. Los
procesadores automáticos también logran que estos
tres pasos tengan lugar durante la noche y sin la
presencia del personal.
IMPREGNACIÓN DE TEJIDOS
Como habíamos mencionado, el proceso de inclusión consiste en agregar un medio

de soporte en los intersticios del tejido, con el fin de endurecerlos para la obtención de
cortes delgados y de grosor uniforme.
Existen medios de inclusión Hidrófilos, que no necesitan deshidratación de los

tejidos y se utilizan después de la fijación y lavado de las muestras. Los medios de
inclusión Hidrófilos son:
a) Gelatina.
b) Agar.
Y medios de inclusión Hidrófobos como las Parafinas o Paraplast y resinas (ej.

Epóxidos) ó plásticos, estos son el medio de inclusión más apropiado para la mayor parte
de los fines que persigue la investigación histológica y requiere previa deshidratación de los
tejidos. Es indispensable hacer cortes muy finos de (3 a 5 micrones). La ventaja de la
parafina o Paraplast es que los tejidos pueden ser conservados indefinidamente sin que haya
alteración ninguna. Al utilizar resinas o plásticos, es posible obtener secciones finas (1
micrón de espesor) o bien, ultrafinas (para microscopia electrónica).
La celoidina es una forma purificada de nitrocelulosa, en el pasado era más
ventajoso que usar parafina como medio de inclusión porque proveía mejor apoyo tanto
para especímenes duros (ej. Hueso) como blandos (ej. Ojos). Con la introducción de nuevas
clases de parafina ya no es ventajoso el uso de celoidina. La celoidina no requiere calor
durante ninguno de los pasos del procesamiento y, por lo tanto, se recomienda para la
impregnación e inclusión de muestras que pudieran ser afectadas por el calor.
Ventajas Desventajas
1. El procedimiento consume tiempo (6 a 7 días) 7. Causa menos contracción y
2. Atrae la humedad muy rápidamente, endurecimiento de los tejidos, que
dificultando su solidificación. Los bloques la parafina.
quedan blandos. 8. La relación entre los componentes
3. Los bloques requieren almacenamiento en celulares están bien preservados
alcohol 70° u 80°. 9. Es excelente para el estudio de
4. La cuchilla y el bloque deben conservarse embriones y especímenes grandes.
húmedos en alcohol de 70° y 80°.
5. Es extremadamente difícil obtener secciones de
menos de 10 micras.
6. Necesita éter, material altamente inflamable y
volátil.
1
Esquema simple de una Batería de deshidratación para especímenes pequeños y
grandes:
PASOS TIEMPO
1 Alcohol de 70% 15 min a 1 hora
2 Alcohol de 95% I 15 min a 1 hora
3 Alcohol de 95% II 15 min a 1 hora
4 Alcohol de 100% I 15 min a 1 hora
5 Alcohol de 100% II 15 min a 1 hora
6 Alcohol de 100% III 15 min a 1 hora
7 Partes iguales de Alcohol 100° y Xilol 15 min
8 Xilol I 15 min a 1 hora
9 Xilol II 15 min a 1 hora
10 Parafina 60ºC I 20 min a 1 hora
11 Parafina 60ºC II 20 min a 1 hora
12 Parafina 60 ºC III 30 min a 1 hora
Inclusión final en parafina, confección del taco
INCLUSIÓN FINAL
Al momento de hacer la inclusión final, el tejido se halla completamente

impregnado y se procede a la inclusión definitiva del material a estudiar a modo de bloque
o taco de inclusión.
Para este paso se pueden utilizar moldes de plásticos, metálicos (barras de Leuckart,
perfiles de aluminio) o de cartulina. Se vierte la parafina caliente a 60° en los moldes,
evitando la formación de burbujas de aire. Después se traslada al molde el tejido con ayuda
de una pinza tibia, depositando el tejido en la posición más adecuada para el corte, esta
operación es indispensable ya que cuando la parafina se ha solidificado resulta imposible
conocer la orientación del tejido. Una vez orientado el tejido se espera a que en la
superficie observable de parafina se forme una película sólida. Luego, se toma el molde y
se introduce en agua fría o se enfría en una platina refrigerada. El agua debe cubrir
rápidamente la superficie de la parafina del molde de inclusión. Al cabo de 15 minutos, el
bloque queda completamente solidificado y se puede desprender fácilmente del molde.
2
En el caso de utilizar cassettes de inclusión, estos se complementan con moldes de
acero inoxidable o plásticos, en donde la canastilla principal del cassette sirve de soporte a
la inclusión, estos sistemas aparte de ahorrar parafina, se complementan con una pinza de
anclaje presente en el micrótomo, especialmente adaptado para ello.
Moldes metálicos Moldes plásticos Barras de Moldes de silicona

Leuckart
3
ORIENTACIÓN DEL ESPECÍMEN.
(AFIP. Métodos Histotecnológicos, 1995: 35-40)
4
5
6
7
8
TISSUE MICROARRAY
El Tissue Microarray (TMA) es un potente instrumento para la investigación,

ayudando al análisis masivo del perfil molecular de la patología tumoral, facilitando y
acelerando el traslado de la información obtenida a la práctica clínica, obviando muchas de
las limitaciones de las técnicas convencionales.
El microarray de tejido (o micromatriz tisular) se construye adquiriendo muestras
cilíndricas de cientos de tumores o zonas de interés a partir de los bloques de parafina.
Todos los cilindros así obtenidos se incorporan a un bloque de parafina receptor que puede
contener hasta 600 muestras y que es a su vez cortado en múltiples secciones para llevar a
cabo ensayos mediante técnicas inmunohistoquímicas o de hibridación in situ fluorescente.
De cada bloque pueden ser tomadas muestras de 0,6 ó 1 mm de diámetro y 3-4 mm

de longitud mediante un arrayer e incluidas a modo de matriz en un nuevo bloque
“receptor” de parafina. De este bloque se realizan secciones de 6-8 micras para cada
laminilla.
9
1 2
3 4
1. Instrumento manual para la construcción de Tissue Array

2. Perforación del bloque aceptor
3. Recolección de muestra desde bloque dador
4. Bloque aceptor completo
10
1 2
1. Corte histológico teñido con H&E del bloque dador

2. Zona de perforación de (1) aumentada
3. Distintos análisis morfológicos y moleculares in situ posible de realizar en cortes de
Tissue microarrays
REFERENCIA
1. Mumenthaler, SM. et al. Tissue Microarrays: Construction and Utilization for Biomarker
Studies. Methods of Cancer Diagnosis, Therapy and Prognosis, 2008, Volume 1, 217-234, DOI:
10.1007/978-1-4020-8369-3_17
2. Bubendorf, L. et al. Tissue microarray (TMA) technology: miniaturized pathology archives for
high-throughput in situ studies. J Pathol. 2001 Sep;195(1):72-9.
3. Storz M., Moch H. Tissue Microarrays and Biomarker Validation Molecular Genetic
Pathology 2008, Part I, 133-140, DOI: 10.1007/978-1-59745-405-6_4
4. Berger AJ., et al. Computational Imaging, and Statistical Analysis of Tissue Microarrays:
Quantitative Automated Analysis of Tissue Microarrays Computational and Statistical
Approaches to Genomics 2006, 381-403, DOI: 10.1007/0-387-26288-1_18
5. J.A. Lorente Garín, et al. Desarrollo de un microarray tisular (TMA) para el estudio
inmunohistoquímico del patrón de expresión molecular en el cáncer de próstata (Parte 1). Actas
Urol Esp 2006; 30 (1): 25-32
11

Lectura Procesamiento e Inclusión

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Lectura Procesamiento e Inclusión

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Lectura Procesamiento e Inclusión

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

DESHIDRATACIÓN, ACLARAMIENTO E

Los tres pasos del procesamiento de tejidos (deshidratación, aclaramiento e

Batería de Deshidratación, Aclaramiento e Inclusión en Parafina

Los procesadores automáticos de tejido

Como habíamos mencionado, el proceso de inclusión consiste en agregar un medio

Existen medios de inclusión Hidrófilos, que no necesitan deshidratación de los

Y medios de inclusión Hidrófobos como las Parafinas o Paraplast y resinas (ej.

Al momento de hacer la inclusión final, el tejido se halla completamente

Moldes metálicos Moldes plásticos Barras de Moldes de silicona

El Tissue Microarray (TMA) es un potente instrumento para la investigación,

De cada bloque pueden ser tomadas muestras de 0,6 ó 1 mm de diámetro y 3-4 mm

1. Instrumento manual para la construcción de Tissue Array

1. Corte histológico teñido con H&E del bloque dador

También podría gustarte