Fisiología Bacteriana

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Descargado por Maria Renee Lopez Villarroel

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Por Roberto Rustom Laura Meléndez y Matías San Martín Microbiología General Clase
n°05 04/06/02
Odontología II año U. de Chile
¾
¾ GGeenneerraalliiddaaddeess::
Dentro de lo que la fisiología bacteriana y tal como su nombre lo dice, nosotros nos vamos a preocupar por
aquellas funciones que lleve a cabo el microorganismo y que sean esenciales para la vida de él, ya en términos muy
generales esto es fisiología. El estudio de la fisiología nos ayuda a determinar cuando el producto de una bacteria es
dañina o es inocua para el organismo.
¾
¾ CCoonntteexxttoo ddee eessttuuddiioo::
Nosotros no podemos estudiar la fisiología aisladamente, sino que debemos contextualizarla, esto significa
estudiar, en este caso particular, todas las funciones de la célula bacteriana, ya sea en su hábitat natural o en su
hábitat artificial, como puede ser por ejemplo los medios de cultivo.
Esto nos va a permitir explicarnos una serie de fenómenos que ocurren en la relación hospedero-parásito, es
decir en la relación microorganismo- organismo superior.
Los microorganismos no están en forma aislada, sino que nosotros los vamos a encontrar como poblaciones
celulares, poblaciones de distintas especies las que se interrelacionan entre sí, ya sea en forma negativa, en forma
positiva o en forma neutra. De esta manera se encuentran los microorganismos en la naturaleza.
Sin embargo, gran parte del estudio y conocimiento que nosotros tenemos de la célula bacteriana se ha
logrado por el estudio de unas pocas especies aisladas en hábitat artificiales, a pesar de esto, nosotros hemos
podido extrapolar este conocimiento a la vida real.
♦ Importancia:
Esto es importante para obtener la funcionalidad de la célula bacteriana y su relación Hospedero –
Parásito, para así saber si es bueno o malo y, por lo tanto, controlar su crecimiento ya sea positivo (en el laboratorio)
ó negativo en el humano por medio de fármacos.
¾
¾ PPrriinncciippiioo ffuunncciioonnaall ddee ttooddaa ccéélluullaa
Las funciones que son esenciales para la vida del microorganismo son realizadas por las enzimas, cada grupo
bacteriano posee un equipo enzimático diferente y esto esta determinado genéticamente, esto lleva a que las
células bacterianas presenten distintos requerimientos.
Cap II: Fisiología bacteriana

Prof.: Silva Descargado por Maria Renee Lopez Villarroel
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♦ Características generales:
9 Las enzimas son proteínas
9 Sintetizadas por células vivas
9 Aumentan la velocidad de las reacciones (intra o extracelulares) sin alterar el equilibrio químico de
la reacción.
9 Las enzimas tienen afinidad por el sustrato
9 No se consumen durante la reacción lo cual es bastante significativo para la célula porque significa
economía para la bacteria, en este caso.
9 Algunas enzimas o grupos enzimáticos requieren para su funcionamiento óptimo de activadores;
cofactores cuando se trata de iones y cuando se trata de moléculas orgánicas no proteicas generalmente
derivados del complejo vitamínico B, hablamos de coenzimas.
9 La actividad de estas enzimas se ve afectada por condiciones físicas y químicas medio ambientales,
ellas trabajan en un rango bastante estrecho de pH y T°, sobre todo me refiero a pH y T° medio
ambientales y también al interior de la célula bacteriana, sobre todo aquellas enzimas que se encuentran el
células bacterianas que están en contacto directo con el hospedero humano, recordemos que el medio
humano funciona en rangos bastante estrechos de T° y pH.
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¾ CCllaassiiffiiccaacciióónn::
Existen muchas clasificaciones para las enzimas, de acuerdo al sitio donde cortan, a la función, etc. Pero desde el
punto de vista nuestro, es decir, microbiológico, consideramos que la clasificación más apropiada es aquella que
permite subdividirlas en dos grandes grupos:
I. Las enzimas extracelulares o exoenzimas

II. Enzimas intracelulares.
I. Enzimas extracelulares:
Son sintetizadas por la célula bacteriana y son secretadas al exterior, en el caso de los microorganismos
gram + nosotros las vamos a localizar o las pesquisamos en la membrana celular por su cara externa.
En el caso de los microorganismos gram - estas enzimas son secretadas al espacio periplásmico. La función
principal de estas enzimas extracelulares es actuar sobre aquellos sustratos que están en el medio externo a la
célula bacteriana, actuar sobe macro moléculas las que van a derivar hasta componentes esenciales, los que como
componentes esenciales tienen la posibilidad de ingresar a la célula bacteriana para ser utilizado, ya sea con fines
energéticos para biosíntesis posterior.
♦ Enzimas Importantes
Dentro de las exoenzimas de relevancia en la relación hospedero-parásito está la:
1) Hialuronidasa que actúa sobre el ácido hialurónico actúa sobre el ácido hialurónico
2) Tenemos en la misma categoría las condroitinsulfatasas, actúa sobre el condroitinsulfato, que son importantes
componentes de la matriz extracelular del hospedero.
3) Coagulasa: Es una enzima capaz de formar una coraza y, por lo tanto, no es afectada por antibióticos, antígenos
etc.

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Í La importancia que reviste esto para el microorganismo es, primero, le proporciona una fuente de nutrientes
al microorganismo y por otro lado la presencia de las exoenzimas tiene gran relevancia desde el punto de vista del
hospedero humano puesto que en este caso particular de las hialuronidasa y las condroitinsulfatasas constituyen un
factor de virulencia es un factor que nos agrede a nosotros, porque va a permitir que el microorganismo invada al
destruir la matriz extracelular de los tejidos. Otra enzima de gran relevancia que les puedo mencionar son las
proteinasas o proteasas producidas por algunos patógenos periodontales como:
9 P. Gingivalis, este grupo de
enzimas producido por este patógeno que actúa sobre los tejidos periodontales produce gran destrucción sobre
los tejidos de soporte del diente, podemos mencionar que destruye colágeno, algunas de éstas proteasas
tienen la particularidad de actuar sobre las inmunoglobulinas o los anticuerpos, estas son importantes en la
respuesta defensiva que monta el hospedero contra algunos de estos patógenos, otra acción de estas
proteasas es la que ejercen sobre la fibronectina de la matriz extracelular, esto permite que se adhiera a los
residuos aminoacidicos de la fibronectina dando así adhesión a los tejidos del hospedero, esto permite la
colonización, luego la infección y luego la infección gingival.
9 Β-Lactamasas o Penilisimasas:
Son enzimas capaces de destruir el anillo β-Lactámico de la penicilina
II. Enzimas intracelulares:

También son sinterizadas por la célula bacteriana y quedan confinadas al interior de la célula, nosotros las
podemos cara citosólica, ahí encontramos o podemos aislar las enzimas intracelulares y dentro de estas tenemos
miles de grupos enzimáticos y la función principal es llevar a cabo todas aquellas reacciones metabólicas.
AANNEEXXOO DDEE EENNZZIIMMAASS

¾ Enzimas Hidrolizantes
♦ SACAROLITICAS
Producen la ruptura de los hidratos de carbono, conformación de ácido,
gas o ambos.
a) ACIDO
El microorganismo se debe sembrar en un medio de cultivo sólido o
líquido con el hidrato de carbono en estudio, más un indicador de pH,
generalmente se emplea el tornasol, el que cambia de color de acuerdo al
pH presente en el medio. Es así que si tenemos una acidificación del
medio de cultivo, este virará de azul a rojo, lo cual nos indicará que la
reacción es positiva para la producción de ácido.
b) GAS
Se utiliza un medio de cultivo liquido con el hidrato de carbono en estudio. A este medio de cultivo, se le deposita
en su interior un tubito de vidrio en posición invertida (campana). Si a partir de esa vía metabólica se produce gas,
este se acumula en el interior de la campana desplazando ésta hasta la superficie, con formación de burbujas que se
visualizan en el interior de la campana.

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c) REACCION DE VOGUES PROSKAUER

Se utiliza el medio de Vogues Proskauer, el que dentro de su
composición tiene glucosa, este nos permite verificar la presencia de un
compuesto intermediario del metabolismo de la glucosa, el acetil-metil-
carbinol. Para evidenciar la presencia de este intermediario, es necesario
efectuar una reacción química.
Una vez que tenemos un desarrollo suficiente en el medio de cultivo del
microorganismo que deseamos identificar, se efectúa la prueba de Yogues-
Proskauer, que consiste en agregar a una fracción del medio de cultivo, 5
gotas de alfa-nafltol y 5 gotas de hidróxido de potasio al 40%
Esta reacción se debe llevar a cabo en presencia de Oxigeno, por lo tanto el tubo debe airearse mediante
agitación permanente.
LLLaaa rrreeeaaacccccciiióóónnn pppooosssiiitttiiivvvaaa ssseee eeevvviiidddeeennnccciiiaaa pppooorrr lllaaa aaapppaaarrriiiccciiióóónnn dddeee uuunnn cccooolllooorrr rrrooojjjooo eeeooosssiiinnnaaa (tubo del medio, los otros son; el 1°
es control y el 3° sin sembrar).
d) REACCION DE ROJO DE METILO

Se utiliza la otra fracción del cultivo en medio de Yogues Proskauer
para agregarle gotas de una solución de rojo de metilo, hablamos de una
reacción positiva cuando el medio toma un color rojo intenso, esto nos
indica que el pH del medio de cultivo es igual o inferior a 4,5. (tubo del
medio, los otros son; el 1° es control y el 3° sin sembrar).
♦ PROTEOLITICAS
a) GELATINA
Es necesario sembrar por picadura el microorganismo en un medio de cultivo con gelatina, la licuefacción de la
gelatina después de un periodo adecuado de incubación, nos indicará que la reacción es positiva para la presencia de
la enzima gelatinasa.
b) CALDO HUEVO
Se prepara un tubo de caldo corriente con un trocito de clara de huevo coagulada mediante calor. La reacción se
evidencia al observar la solubilización de el cubito de huevo, esto nos indica la presencia en ese microorganismo de
enzimas proteolíticas por lo tanto, en este caso hablamos de una reacción positiva.
c) INDOL
Es un derivado del metabolismo de las proteínas específicamente de la
ruptura del Triptófano, su presencia la podemos evidenciar sembrando el
microorganismo en un medio que contenga Triptófano, tal es el caso del agua
peptonada o bien en Mio medio.
Í En el primero se evidencia la presencia de indol realizando la reacción de
Weil-Legal, la que consiste en agregar al caldo después de un periodo adecuado
de cultivo- 5 gotas de nitroprusiato de sodio al 5%, 5 gotas (de hidróxido de
sodio al 30% y 5 gotas de ácido acético glacial. Si la reacción es positivia, es
decir, hay producción de Indol, el medio tomará un color azul verdoso (sin foto).
Í En el medio Mio basta con agregar sobre la superficie del medio 5 a 6 gotas
de reactivo de Kovacs, la reacción positiva se evidencia por la aparición de un
color rojo intenso.

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d) UREA
Este compuesto corresponde también a un derivado del metabolismo de las proteínas.
Nos permite evidenciar la presencia de la ureasa, la cual descompone la urea dando origen a
metabolitos alcalinos (amonio, amoníaco). Esta característica es la que nos permitirá
evidenciar la acción enzimática, mediante la adición al medio de cultivo, de un indicador de
pH, rutinariamente se emplea el rojo fenol que viene ya adicionado al medio de cultivo.
Si la reacción es positiva el medio tomará un color rojo intenso.
d) HIDROGENO SULFURADO
Este corresponde también a un derivado del metabolismo de las proteínas
específicamente de los aminoácidos azufrados. Se emplean los medios agar plomo (es
un agar corriente con subacetato de plomo) o bien agua peptonada a la que se le adiciona
a más o menos 1 cm, del caldo una tira de papel embebida en sub-acetato de plomo.
En el primer caso se debe sembrar el microorganismo por picadura muy cerca de la

pared del tubo. Si hay producción de hidrógeno sulfurado el agar tomo un color negro en
la zona de la picadura, esto debido a la formación de sulfuro de plomo. En el caso del
agua peptonada una re
reacción positiva la evidenciamos a través del ennegrecimiento de
la tira de papel en la zona cercana al medio de cultivo.
♦ ENZIMAS REDUCTORAS
La acción de las reductasas se pone de manifiesto por los medios de cultivo coloreados. La acción reductora de
estas enzimas decolora al colorante del medio de cultivo. Agares o caldos con rojo neutro virarán del rojo al amarillo
por acción de la enzima.
♦ ENZIAMAS COAGULANTES
Coagula la leche sin alterar su pH. Se siembra el microorganismo en un tubo con leche tornasolada. Si hay
producción de las enzimas coagulantes (fermento lab) la leche coagula. No hay variación del tornasol pues no hay
variación del pH. Este coágulo puede ser disuelto, si el inicroorganismo además posee propiedades proteolíticas
(caseinasa). También puede producir la coagulación de la leche por la fermentación del azúcar (coagulación ácida), en
este caso, el tornasol vira al rojo por la presencia de nietabolitos ácidos derivados de la degradacion de la lactosa.
♦ ENZIMAS CITOLITICAS
Acá encontramos a las hemolisinas, las cuales tienen la particularidad de actuar sobre los glóbulos rojos,
produciendo su destrucción ya sea parcial o total, Para ello se emplean medios con sangre (agar sangre).
Si después de cultivar a un microorganismo por un tiempo adecuado, observamos alrededor de la colonia:

9 un halo transparente hablamos de una beta hemólisis
9 si por el contrario se observa un halo verdoso, decimos que es una alfa hemólisis
9 si no hay hemólisis se habla de gama hemólisis.

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¾ Requerimientos bacterianos
Cada grupo bacteriano tiene distintos grupos enzimáticos lo que esta determinado genéticamente y obviamente
estos grupos enzimáticos son los que van a requerir distintas condiciones ambientales y distintas condiciones
nutricionales, entonces lo que tenemos que ver en definitiva son cuales son los requerimientos para que esta célula
bacteriana funcione y para que las enzimas de esta funcionen.
En términos generales tenemos 2 tipos de requerimientos son:
9 Requerimientos ambientales
9 Requerimientos nutricionales.
♦ Requerimientos medioambientales Bacterianos

Los factores ambientales importantes que requiere la célula bacteriana para que su equipo enzimático funcione
para llevar a cabo todas las funciones o actividades esenciales para la vida del microorganismo, en términos bien
generales los que se consideran de relevancia son:
I. PH
II. Tensión de oxígeno
III. Fuerza iónica
IV. Presión osmótica
V. T°
1. PH
Vamos a ver como se clasifican los organismos por sus requerimientos de pH, aquí yo me refiero a condiciones de
ph medio ambientales, nosotros sabemos que en el interior de la célula bacteriana o las enzimas bacterianas
funcionan en rangos de pH bastante restringidos, ellos mantienen el pH dentro de un determinado rango gracias al
sistema de movimiento de protones que existe en la membrana de la célula bacteriana. Cuando nosotros hablamos
de clasificación según rango de pH, estarnos hablando de pH medio ambiental.
En general el pH interno se mantiene dentro de un mismo rango, son muy pocas las variaciones y es muy cercano
al optimo que nosotros conocemos; pH 6-7.
1) En primer lugar tenemos al grupo de los neutrófilos que son aquellos microorganismos que crecen en rango
de 6 a 8, con un óptimo de 7-7.4 que es más o menos el óptimo del organismo hospedero. Lógicamente dentro de
este grupo nosotros encontramos las bacterias que viven en contacto con el organismo hospedero, principalmente
aquellos que forman parte de la flora bacteriana normal que posee el ser humano.
2) Posteriormente tenemos el grupo de alcalófilas que son microorganismos que crecen en rangos o medio
ambiente de pH bastante elevado, pH alcalino. Aquí distinguimos algunas especies bacterianas que viven en el
intestino, son muy pocas especies, pero las hay.
3) Para el final el grupo de los acidófilas que son aquellos microorganismos que crecen en rangos de pH
ambientales que van de 3 a 4, quiero hacer hincapié en este grupo puesto que aquí encontramos dos especies
bacterianas de gran relevancia en patología bucal, como son S. Mutans y Lactobacilus Acidophilus, estos tienen la
particularidad de proliferar en un medio ambiente con este pH, 3 o 4, y estos a pesar de estar en un medio de pH
ácido siguen produciendo ácidos, particularmente L. Acidophilus, lo cual baja aún más el pH del medio ambiente y
esto constituye un factor seleccionador para estas especies, (crean un microambiente) dentro de los que es
cavidad bucal estas son prácticamente las únicas especies capaces de proliferar y aumentar en numero en este rango
de pH, cabe notar que en cavidad bucal se aíslan aproximadamente alrededor de 350 a 400 especies. La
particularidad de seguir produciendo ácido de las especies mencionadas constituye un factor de virulencia para
estos microorganismos, que son los agentes etiológicos de la caries. ***Los hongos son más tolerantes al Ph

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2. Según T°
Igual que en el, caso anterior de acuerdo a la T° nosotros podemos clasificar a los microorganismos en tres
grandes grupos, siempre aquí me refiero a T° medio ambiental. Ésta es una variable muy importantes para el
crecimiento, multiplicación y sobrevivencia de las bacterias.
A medida que aumenta la t°, aumenta la velocidad de reacción, de la misma forma cuando baja la t°, pero va a
llegar un punto en que esta proporcionalidad se detiene, éstos rangos se denominan t° cardinales, mínimas, máximas y
óptimas que son más menos características para cada especie.
El mecanismo de tolerancia de los rangos de t° es por los cambios de fluidez de la membrana plasmática donde
ésta no deja ingresar moléculas cuando no existe la t° adecuada.
1) Tenemos en primer lugar al grupo de los psicrófilos que son aquellos microorganismos que crecen en T°
bajas, entre los 15 y 20 °C. Se puede concluir que la M.P. tiene una gran cantidad de ácidos grasos saturados y con
una membrana que se hace más fluida, por lo tanto es esencial la composición de la M.P.
2) Tenernos un grupo de microorganismos de microorganismos mesófilos que crecen entre 30 y 37 °C.
3) Tenemos el grupo de los termófilas que crecen entre los 50 y 60 °C.
4) Por último tenemos al grupo de las Hipertermófilas que soportan t° sobre los 80°, éste tipo de bacteria se
hayan en los volcanoes pudiendo soportar incluso shocks térmicos de 500°

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Lógicamente los microorganismos que tienen interés para nosotros están dentro del 2° grupo, porque son
aquellos que están en estrecho contacto con el hospedero humano.

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Í Es importante destacar que frente a cambios bruscos de T° o alzas térmicas de corta duración los
microorganismos presentan respuestas, que se conocen como respuestas al heat-shock o shock térmico, esto
consiste en la síntesis transitoria de proteínas que son resistentes a las T°, de esta manera el microorganismo se
protege o protege sus proteínas que son naturalmente sensibles, esto es transitorio, o sea sí nosotros
prolongamos el alza térmica nosotros vamos a lograr finalmente destruir al microorganismo, este fundamento se
emplean para destruir microorganismos en la esterilización. Las t° bajas no sirven para esterilizar (sólo mueren
algunas no todas) pero sí sirven para conservar
3. Tensión de oxigeno
De acuerdo a la tensión de oxígeno los microorganismos también se pueden clasificar en 2 grandes grupos.
Aerobios:
• Tenemos el grupo de los aerobios obligados o aerobios estrictos y son aquellos que requieren
de la presencia de oxígeno para su desarrollo, osea, funcionan con una alta tensión de oxígeno (20%) donde emplean
el oxígeno como el aceptor final de los electrones.
• Después tenemos a los microorganismos facultativos que crecen sin presencia de oxigeno o en
presencia de él. Dentro de este grupo se encuentran la mayoría de las bacterias patógenas que estudiaremos en
este curso. En el agar Veillón presentan desarrollo a lo largo de toda la columna de agar. Este agar posee glucosa a
una concentración de un 10% como sustancia reductora del oxígeno molecular, en este medio de cultivo los
microorganismos se desarrollan en toda la extensión del tubo.
• Microaerofilios: funcionan con bajas tensiones de oxígenos entre un 1 a un 12%.
Anaerobios:
• Aerotolerantes: No ocupan el oxígeno, pero este gas le es inocuo, es decir, son bacterias que
se desarrollan en anaerobiosis, pero que pueden sobrevivir durante un lapso de tiempo en un ambiente aerobio,
dentro de este grupo se encuentran algunas de las bacterias bucales que tienen gran importancia en patología
peníodontal..
• Anaerobios obligados o anaerobios estrictos que son microorganismos para los cuales el
oxígeno es tóxico. Para lograr su cultivo, se recurre a técnicas de cultivo especiales, generalmente, se emplean
medios enriquecidos los cuales deben ser cultivados en condiciones de anaerobiosis, lo que actualmente se logra a
través de preparados comerciales tales como el dispensador Gas-Pack, el que debe ser activado en receptáculos
herméticos o jarras (Jarra Gas - Pack), en las cuales libera H2 y C02, el 02 presente en el interior del receptáculo es
reducido por el H2 formándose H20 y quedando en el interior de la jarra un ambiente rico en C02, el cual es ideal para
el desarrollo de los microorganismos anaerobios.
Í En los anaerobios estrictos una vez que ingresa el oxígeno a la célula bacteriana es reducido por
enzimas intracelulares hasta formar peróxido, (el oxígeno se reduce a ión superóxido) este proceso también ocurre
en la célula aerobia de los aerobios obligados y en los facultativos, pero a diferencia de estos dos grupos en el
grupo de los anaerobios obligados no encontramos una enzima que es vital para destruir éstos radicales que son
tremendamente tóxicos para la célula bacteriana y esta enzima es la superoxidodismutasa, ésta se encuentra en los
aerobios obligados y en los facultativos, y que tiene la particularidad de destruir los radicales, que se forman en
el interior de la célula bacteriana, a peróxidos.

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Detección de la Catalasa.
Ciertos grupos bacterianos tienen la particularidad de degradar el
agua oxigenada derivada del metabolismo aeróbico, el cual es altamente
tóxico para las células en general, es por esta razón que todos los grupos
bacterianos poseen tipos enzimáticos para resolver esta situación. Dentro
de ellos tenemos las catalasas que se ponen en evidencia tomando un
trocito de la colonia bacteriana de un medio que no contenga sangre y
sumergirlo en un tubo con H2O2. La reacción positiva se evidencia por un
burbujeo a partir del trocito de colonia.
4. Presión osmática y fuerza iónica

Las bacterias soportan rangos bastante amplios de presiones osmóticas internas y de fuerzas iónicas
externas, ahora el microorganismo mantiene su presión osmática en un rango aceptable gracias a un sistema de
transporte de iones potasio hacia el interior de la célula, mediante este sistema el microorganismo mantiene una
presión osmótica intracelular equilibrada. De la misma manera el microorganismo mantiene la fuerza iónica tras la
expresión de moléculas que mueven muchas cargas al mismo tiempo. O sea para estos parámetros el
microorganismo posee mecanismos reguladores para mantenerlos equilibrados.

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Cap II: Fisiología bacteriana

I. Las enzimas extracelulares o exoenzimas

Cap II: Fisiología bacteriana

II. Enzimas intracelulares:

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Cap II: Fisiología bacteriana

c) REACCION DE VOGUES PROSKAUER

d) REACCION DE ROJO DE METILO

Cap II: Fisiología bacteriana

En el primer caso se debe sembrar el microorganismo por picadura muy cerca de la

Si después de cultivar a un microorganismo por un tiempo adecuado, observamos alrededor de la colonia:

Cap II: Fisiología bacteriana

♦ Requerimientos medioambientales Bacterianos

Cap II: Fisiología bacteriana

2) Tenernos un grupo de microorganismos de microorganismos mesófilos que crecen entre 30 y 37 °C.

3) Tenemos el grupo de los termófilas que crecen entre los 50 y 60 °C.

Cap II: Fisiología bacteriana

Cap II: Fisiología bacteriana

• Microaerofilios: funcionan con bajas tensiones de oxígenos entre un 1 a un 12%.

Cap II: Fisiología bacteriana

4. Presión osmática y fuerza iónica

Cap II: Fisiología bacteriana

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