Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología

Laboratorio de Biotecnología Farmacéutica

Practica 3. Extracción y determinación de actividad biológica de

una proteína (lectinas)

Equipo 1 5FM2

Integrantes:

· Acosta Rodríguez María Fernanda

· Ayllón Ornelas Brenda Karen
· Fierro Leos Ariadna
· González Hernández Luisa Fernanda
· Mendoza Narez René

Profesoras:

· M. en C. Flor Selene Villalobos Escobedo

· Dra. Estela Flores Gómez

Fecha de entrega: 09/05/2022

OBJETIVOS
Objetivo general

• Adquirir los conocimientos teórico-prácticos para la obtención de compuestos

proteicos con actividad hemoaglutinante a partir de extractos vegetales.
Objetivos específicos

• Determinar la actividad hemoaglutinante de diferentes extractos de lectinas de

semillas de diferentes especies vegetales.
• Determinar cuantitativamente la cantidad de lectinas en cada extracto a través del
método Bradford.
• Confirmar los pesos moleculares de las lectinas obtenidas mediante el uso de geles
de poliacrilamida (SDS-PAGE).
INTRODUCCIÓN
El término lectina se aplica a proteínas con capacidad de unirse a carbohidratos o
glicoproteínas de origen no inmune que reconocen de manera específica carbohidratos de
la superficie celular o en suspensión, aglutinan células y precipitan glicoconjugados, las
lectinas poseen por los menos dos sitios de reconocimiento a carbohidrato, de ahí su
capacidad para aglutinar células (Hernández, Pérez, Martínez, Ortiz y Gisela, 2005).
Se asume que las lectinas son multivalentes y que su especificidad es ampliamente
dependiente de un monosacárido terminal. Algunas lectinas presentes en plantas y frutas
pueden aglutinar eritrocitos de diferentes grupos sanguíneos, por lo que también se les
conoce como fitohemaglutininas (Vázquez, Rivadeneyra y Díaz, 2012).
La presencia de lectinas fue observada por primera vez por Wander and Waddell a
mediados del siglo XIX, quienes identificaron que la toxicidad de los frutos de Abrus
precatorius, se encontraba en una fracción precipitada en alcohol a partir de un extracto
acuoso obtenido de los frutos. Fue a finales del siglo XIX, que se obtuvieron las primeras
evidencias de la presencia de proteínas en extractos de plantas con la habilidad de aglutinar
eritrocitos a las que se llamó hemaglutininas o fitohemaglutininas. En 1888 Peter Hermann
Stillmark describió que los extractos del ricino y otros vegetales de la familia Euphorbiaceae
eran capaces de aglutinar eritrocitos de animales, como ratones, caballos, perros y gatos.
En ese mismo año, Hellín también demostró la presencia en los extractos de Abrus
precatorius de la hemaglutinina tóxica Abrina. En 1936 Summer y Howell reportaran que
la Concavalina A aglutinaba células como eritrocitos, levaduras y también precipitaba
soluciones de glicógeno, observando que la hemoaglutinación era inhibida por la sacarosa
y demostrando por primera vez la especificidad de las proteínas por el azúcar,
introduciendo el término lectina definidas como: Proteínas o Glicoproteínas de origen no
inmune, fijadoras de carbohidratos con capacidad para aglutinar y precipitar
glicoconjugados. (Vázquez, Rivadeneyra y Díaz, 2012)
Las lectinas se encuentran principalmente en hojas, tallos, corteza y frutos. Sin embargo, se
considera que las lectinas se encuentran en mayor cantidad en las hojas y corteza, y que la
concentración de lectinas varía de acuerdo a las diferentes partes del vegetal y entre una
especie y otra (Van Damme y col., 1998; Hernán-dez y col., 2005). A nivel celular las lectinas
son sintetizadas, procesadas y transportadas como proteínas que se sintetizan en el retículo
endoplásmico rugoso y posteriormente se acumulan en vacuolas y organelos llamados
vacuolas de almacenamiento de proteínas (Maree, 2005). Existen estudios en semillas de
frijol (Paseolous vulgaris), cuyas lectinas se localizan en las células de los cotiledones.
El sitio de unión del carbohidrato en la mayoría de las lectinas de leguminosas involucra una
combinación de puentes de hidrógeno, interacciones hidrofóbicas y fuerzas de Van der
Waals (Linda y col., 2004). La estructura cuaternaria de las lectinas también puede
contribuir al reconocimiento del glicano. La habilidad de cada subunidad de ligar azúcares
individualmente puede llevar a la única unión cruzada de la estructura.
Químicamente las lectinas están formadas por residuos de aminoácidos, con un alto
contenido de ácido glutámico/glutamina, ácido aspártico, asparagina, serina, glicina, y bajo
contenido de lisina. De acuerdo con su forma y al número de cadenas polipeptídicas se
clasifican en: diméricas, tetraméricas, octaméricas y decaméricas. (Brinda y col., 2005).
Cada unidad polipeptídica que compone a una lectina puede contener uno o varios
sitios enlazantes a carbohidratos, por lo cual la lectina puede reconocer específicamente
hasta dos de diez carbohidratos diferentes de manera específica, tales como D-Glucosa, D-
Manosa, D-Fucosa, D-Xilosa, D-Galactosa, DGlucosamina, D-Galactosamina, N-acetil D-
glucosamina, N-acetil Galactosamina, y el N-ácido acetil ácido neuramínico,la estabilidad de
la estructura nativa de la mayoría de las lectinas es debida a interacciones hidrofóbicas
(Sharmistha y col., 2005).
El interés de su estudio de las lectinas se debe a las diversas actividades biológicas que
pueden inducir, tales como aglutinación de eritrocitos humanos y animales
(hemaglutinación), aglutinación de células malignas, actividad inmunosupresora, etc. En
virtud de esta propiedad se han convertido en herramientas útiles no sólo para la
purificación de polisacáridos, glicoproteinas y glicolípidos, sino también para evidenciar la
topología de superficies celulares y los cambios inducidos por transformaciones de las
mismas (Rodríguez, Riquelme, Valverde y Gattuso, 2004).
Fenómeno de la hemoaglutinación
La aglutinación consiste en la agregación sistemática de células mediada por
macromoléculas especifica (anticuerpos o lectinas) que reconocen estructuras moleculares
determinadas (antígenos) sobre la superficie celular. Este proceso, depende del número de
determinantes antigénicos y de su localización sobre la célula, como así también del tipo de
macromolécula y del medio de reacción. Los antígenos definidos por estructuras de
azúcares son productos indirectos de genes, entre estos, se encuentran los de los grupos
sanguíneos A, B y O, Lewis y Secretor.
La distribución de los ligandos en la superficie de la membrana es diferente para cada
aglutinina utilizada, lo cual depende de la afinidad y del sitio de unión específico. A medida
que aumenta el poder aglutinante de la aglutinina, el aglutinado toma una forma esférica.
La mayoría de las lectinas aglutinan eritrocitos de todos los grupos sanguíneos, actuando a
la misma dilución y por lo tanto no son específicas de grupo. Las específicas aglutinan
eritrocitos humanos preferentemente de un determinado grupo sanguíneo. Esta
especificidad permite usar a las lectinas como reactivo de tipificación de grupo sanguíneo y
en la identificación de individuos secretores (Rodríguez, Riquelme, Valverde y Gattuso,
2004).
Electroforesis en gel de poliacriamida
La electroforesis es una técnica de separación de moléculas cargadas por migración en un
campo eléctrico. Las moléculas se separan en función de su carga eléctrica, desplazándose
al electrodo de carga contraria y a mayor velocidad cuanto mayor es la carga de la molécula.
La electroforesis en geles de poliacrilamida es uno de los métodos más utilizados para la
purificación, análisis y caracterización de proteínas. La técnica permite separar moléculas
cargadas y explota diferencias en movilidad cuando se les somete a la acción de un campo
eléctrico. La electroforesis se lleva a cabo sobre un soporte inerte, generalmente sobre
geles de poliacrilamida (PAGE). (Maldonado y Jorrín, s.f.)
Tras terminar la electroforesis no se observan las proteínas de las muestras utilizadas. Tan
sólo los marcadores de peso molecular, que están pre-teñidos. Para ello, se utiliza un
método de tinción, uno de los métodos más sencillos y comunes es la tinción con el
colorante azul Coomassie. Este colorante nos permite detectar entre 0.1 y 0.5 µg de
proteína en el gel. El azul de Coomassie se une fuertemente a la proteína por una
combinación de atracción electrostática a aminoácidos básicos e interacciones hidrofóbicas
entre fenilalanina y los grupos fenilo del colorante, permitiendo observar bandas azules en
los sitios del gel donde se encuentra la proteína. (Menor, 2019).
Aplicaciones farmacéuticas de las lectinas

Efectos antitumorales
En el campo de la quimioterapia contra el cáncer, el estudio de las lectinas ha jugado un rol
importante. Diferentes estudios in vivo e in vitro con numerosas lectinas de plantas han
demostrado que poseen actividad antitumoral (efecto inhibitorio en el crecimiento del
tumor) y actividad anticarcinogénica (efecto inhibitorio en la inducción del cáncer por
carcinógenos) (Abdullaev, 1997).

Castillo-Villanueva A, et al. Lectinas vegetales y sus efectos en el cáncer. Rev Invest Clin 2005; 57 (1): 55-64
Alimentos funcionales para prevenir enfermedades
Las lectinas presentes en frutas y plantas comestibles, si bien hasta el momento no son de
interés nutrimental, para la ciencia de los alimentos si deben ser de gran importancia por
su amplio potencial como agentes terapéuticos de origen biológico para la prevención y
retardo en la manifestación de enfermedades (Díaz et al., 2012).
Así mismo Díaz y colaboradores informan que los campos de aplicación biológica-funcional
ubica a las lectinas en campos de investigación como:
1. La evaluación de la producción de citoquinas (interferón e interleuquinas) y la
expresión de sus receptores en cultivos de linfocitos provenientes de pacientes con
enfermedades de alto impacto social como el síndrome de inmunodeficiencia
adquirida (SIDA), la tuberculosis y la leishmaniosis.
2. La caracterización de algunos aspectos relacionados con la respuesta inmune y
fenómenos asociados con ellas como la inmunosupresión.
3. La actividad antiviral de lectinas frente al VIH y el virus de la hepatitis B, así como la
susceptibilidad y resistencia que éstos puedan desarrollar frente a lectinas.
4. Evaluación de la efectividad de terapias antirretrovirales de acuerdo con la
respuesta de los linfocitos a la estimulación con las lectinas antes y después de la
terapia, como por ejemplo en terapias contra el VIH.
5. El análisis de las funciones linfoproliferativas y citotóxicas en células mononucleares
causadas por algunas drogas.
6. La influencia nutricional en la proliferación de linfocitos y su cinética de
proliferación.
7. Inducción de la expresión de genes.
8. La detección de anormalidades cromosómicas.
9. En el campo de la glicoterapia y de la glicobiotecnología.
METODOLOGÍA
Extracción de lectinas.
Prueba de hemoaglutinación.

Cuantificación de proteína con el reactivo de Bradford. (Modificado de Hartree, 1972)

Electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)

Tratamiento de la muestra.

Preparación del Gel

Montaje de la cámara de electroforesis y corrimiento del gel.

Tabla 1. Fundamento de los reactivos utilizados en la práctica.

Reactivo Fundamento
Solución Es utilizada como diluente y solución de lavado (Solucion Salina 0.85%, s.f.).
isotónica (NaCl
0.85%)
Solución Se pueden utilizar solución salina tamponada para los pasos de enjuague y
amortiguadora lavado en diversos procedimientos de laboratorio. En BD Phosphate Buffered
(PBS 0.015 M, Saline (pH 7.2), el cloruro sódico proporciona protección osmótica a las
pH 7.2, 0.15 M células. Además, los fosfatos suministran un pH fisiológico estable que
NaCl). también es importante para el mantenimiento de la viabilidad de las células.
 El cloruro sódico proporciona protección osmótica de las células microbianas
(BD Phosphate Buffered Saline (pH 7.2) , 2003).
SD - SPAGE El fundamento hacer que el movimiento de la proteína en el soporte sólido
(gel) por acción del campo eléctrico sea exclusivamente proporcional a su
peso molecular.
Detergente, su papel es la desnaturalización y el establecimiento de una
relación carga-tamaño constante en la proteína, de modo que la movilidad
de la proteína durante la electroforesis sea exclusivamente proporcional a su
peso molecular. (Menor-Salvan., SDS-PAGE: ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA, 2019)
Amortiguador La separación tiene lugar en el gel separador. Este gel realiza la separación a
del gel un pH 8.8. Antes de que las proteínas entren en el gel separador, pasan por
separador pH un gel concentrador. (Menor-Salvan., SDSPAGE: ELECTROFORESIS EN GEL DE
8.8 POLIACRILAMIDA, 2019)
Amortiguador A pH 6.8, que evita que las proteínas se dispersen en el gel y provoca que
del gel todas las proteínas de las muestras se alineen en una fina banda que entra al
separador pH mismo tiempo y a la misma velocidad en el gel concentrador. (Menor-
6.8 Salvan., SDS-PAGE: ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA, 2019)
Persulfato de El persulfato de amonio forma los radicales libres queinducen la
amonio al 10% polimerización de la acrilamida y la bisacrilamida (Montaje del gel en el
p/v equipo de electroforesisy separación electroforética, s.f.).
TEMED La tetrametiletilenodiamina (TEMED) acelera la reacción de polimerización
de la acrilamida, pues propaga la generación de radicales libres. Facilita la
reacción por la que se forma el polímero de acrilamida (Reactivos empleados
en la electroforesis de DNA y de proteínas, s.f.).
Solución de azul Se trata de un compuesto coloreado y con carga, utilizado para comprobar el
de bromofenol progreso de la electroforesis. Más detalles. En la electroforesis, por su menor
10 mg/mL tamaño, se mueve más rápido que las proteínas o que la mayoría de
moléculas de DNA (aquéllas superiores a 300 pb), es decir, marca el "frente
de avance". Puesto que su color azul-violeta es bien visible, permite detener
la electroforesis con la confianza de que las moléculas de proteína o DNA no
se hayan salido del gel (Reactivos empleados en la electroforesis de DNA y de
proteínas, s.f.).
Solución La solucione que se utilizan para teñir los geles de poliacrilamida-SDS,
teñidora contiene ácido acético y se reaprovecha para otras tinciones (Estudio
estructural de complejos de oligonucleótidos ricos en adenina y timina con la
proteína HMGB1, s.f.).
Solución Tiene el fin de eliminar el exceso de colorante residual (Irazábal, Gutiérrez, &
desteñidora Rodríguez, 2011).
Marcadores de Los marcadores de peso molecular de proteínas (14-212 kDa) están
peso molecular diseñadas para determinar aproximadamente el peso molecular de proteínas
para proteínas por medio de electroforesis de SDS poliacrilamida (Marcadores de proteínas,
s.f.).
Solución de La Solución de Acrilamida InstaPAGE es una solución de acrilamida
Acrilamida premezclada: bisacrilamida para verter geles de poliacrilamida utilizados en
30%- la secuenciación y la electroforesis de proteínas (Solución Instapage
Bisacrilamida Acrilamida 30%, s.f.).
0.8%
RESULTADOS

Figura 1 Resultado equipo 1 Frijol Negro Phaseolus Vulgaris.

Montaje de la cámara de electroforesis vertical

Figura 2 Componentes de una cámara de electroforesis vertical.

Figura 3 Ensamblado de los vidrios y espaciadores de la cámara de electroforesis.

Figura 4 Procedimiento de ensamblaje de la cámara de electroforesis vertical.

 Figura 5 Sistema de electroforesis vertical ensamblado.

Tabla 2 Resultados de las muestras del extracto de agua de remojo, epitelio y endospermo de todos los equipos.

Equipo Muestra Agua de Cascarilla Endospermo Conclusión

remojo (Epitelio)
1 Phaseolus - + ++ Se encuentran más en
vulgaris el endospermo
(Frijol )
2 Lens culinaris - - +++ Las lectinas presentes
(Lenteja) exclusivamente en el
endospermo
3 Cicer - - +++ Las lectinas se
arietinum encuentran en el
(Garbanzo) endospermo
4 Lens culinaris + + ++ Lectinas presentes en
(Lenteja) agua de remojo,
epitelio y endospermo
5 - - - - Solo vinieron 1er sesión
no procesaron
6 Ricinus - - - -
communis
(Higuerilla)
Figura 6 Gel A Muestras del Equipo 1 Frijol negro, 2 Lenteja y 3 Garbanzo.

Figura 7 Gel A Muestras del Equipo 4 y 5 de Lenteja.

Con base en el gel utilizado en laboratorio (Precision Plus Protein™ All Blue Prestained Protein
Standards #1610373) buscamos en bibliografía el marcador de PM.

Figura 8. Precision Plus Protein™ All Blue Prestained Protein Standards #1610373

Tabla 3 Distancia en cm de cada banda y PM.

Distancia (cm) PM Log PM

0.8 10 1
0.9 15 1.1760
2.1 20 1.3010
3.4 25 1.3979
4 37 1.5682
5.5 50 1.6989
6.2 75 1.8750
6.9 100 2
7.4 150 2.1760
7.9 250 2.3979
Gráfica 1 Distancia vs Log (PM)
 Tabla 4. Resultados de peso molecular de las muestras de todos los equipos

Equipo 1 Phaseolus vulgaris 2 Lens culinaris 3 Cicer arietinum

Carril 1 2 3 4 5 6 7 8 9
No. de Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño
Proteína de de de de de de de de de
proteína proteína proteína proteína proteína proteína proteína proteína proteína
(kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD)
1 77.90 74.96 87.44 100.21 103.22 103.22 103.22 109.52 107.52
2 49.09 49.09 55.10 89.033 94.45 89.03 94.44 103.22 103.22
3 40.5 40.5 60.60 75.76 76.78 79.09 93.90 91.70
4 30.94 45.43 63.35 60.61 64.29 76.78 76.78
5 32.079 53.63 53.04 53.83 60.60 60.60
6 23.513 47.82 47.83 49.25 47.83 52.27
7 15.055 32.07 31.60 47.83 30.53 47.83
8 23.51 24.21 32.07 24.94 24.21
9 15.53 15.53 23.51 22.55 21.51
10 15.53 15.01 19.39
11 12.53 14.02 16.98

Equipo 5 4 Lens culinaris

Carril 1 2 3 4 5 6 7 8 9
No. de Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño Tamaño
Proteína de de de de de de de de de
proteína proteína proteína proteína proteína proteína proteína proteína proteína
(kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD) (kD)
1 123.99 123.99 123.99 123.99 123.99 123.99 123.99 123.99 123.99
2 119.64 119.64 119.64 119.64 119.64 123.99 123.99 123.99 123.99
3 107.48 107.48 107.48 107.48 107.48 119.64 119.64 119.64 119.64
4 89.90 89.90 89.90 89.90 99.72 107.48 107.48 107.48 107.48
5 88.31 88.31 88.31 88.31 89.90 99.72 99.72 99.72 99.72
6 62.90 62.90 62.90 62.90 88.31 89.90 89.90 89.90 89.90
7 56.31 56.31 56.31 56.31 62.90 88.31 88.31 88.31 88.31
8 44.80 44.80 44.80 44.80 56.31 62.90 62.90 62.90 62.90
9 36.81 36.81 36.81 36.81 44.80 56.31 56.31 56.31 56.31
10 30.14 30.14 30.14 30.14 36.81 44.80 44.80 44.80 44.80
11 24.85 24.85 24.85 24.85 30.14 36.81 36.81 36.81 36.81
12 18.67 18.67 18.67 18.67 24.85 30.14 30.14 30.14 30.14
13 18.67 24.85 24.85 24.85 24.85
18.67 18.67 18.67 18.67
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Hemaglutinación con lectinas
Posterior al proceso de extracción de lectinas de distintas leguminosas y plantas, descrito
en la metodología, se realizó una prueba de hemaglutinación con sangre tipo A+, como se
muestra en la tabla 2, donde indica que la aglutinación sanguínea del frijol (Phaseolus
vulgaris) se produce con principalmente en el endospermo, en la lenteja (Lens culinaris) del
equipo 2 se indica que las lectinas se encuentran exclusivamente en el endospermo, en
cambio en la muestra de lentejas del equipo 4 indican que las lectinas se encuentran
presentes en agua de remojo, epitelio y endospermo; Finalmente en el caso del garbanzo
(Cicer arietinum) las lecitinas se encuentran en el endospermo.
Todas las muestras aglutinaron, por lo que se infiere que las lectinas extraídas producen
aglutinación el en tipo sanguíneo A+.
En las plantas se han detectado lectinas, principalmente en los cotiledones y endospermos
de las semillas y constituyen del 2 al 10 % del total de las proteínas de éstas (Mendoza et
al., 2007).
Debido a lo anterior en la figura 1 se observa mayor aglutinación de todas las muestras en
el endospermo.
La actividad biológica de las lectinas es una consecuencia directa de capacidad de
reconocimiento y unión a carbohidratos específicos en la superficie de la membrana. Las
lectinas se enlazan a los monosacáridos de la membrana celular y actúan enviando señales
y entregando mensajes a las células, causando cambios bioquímicos en la célula que se
expresan como la aglutinación. El proceso de reconocimiento de las lectinas y sus
receptores es instantáneo y está asociado al mecanismo de inmunidad innata (Patnaik y
col., 2012).
Según experimentos realizados por Barragán y colaboradores en 2014, los resultados
obtenidos permiten afirmar que las semillas de Phaseolus vulgaris L. presentan lectinas con
actividad hemaglutinante en glóbulos rojos de los diferentes grupos sanguíneos (ABO). Esto
permite afirmar que la lectina de Ph. Vulgaris L. no presenta especificidad para los grupos
sanguíneos ABO de glóbulos rojos humanos.
De igual manera, un estudio realizado por Salgado en 2006, muestra que todos los grupos
sanguíneos (ABO) presentaron hemaglutinación con lectinas de Phaseolus vulgaris.

Figura 9. Hemaglutinación con lectinas de Phaseolus vulgaris (Salgado, 2016).

En consecuencia, las lectinas obtenidas por el frijol Phaseolus vulgaris no permiten realizar
estudios de tipificación sanguínea del grupo ABO.
Para el caso de la lenteja Lens culinaris y el garbanzo (Cicer arietinum) según Grant, en 1983
indica que ambos casos presentan actividad hemaglutinante en grupos O+ y AB+, por lo que
también se infiere que aglutinará en los grupos A+ y B+. Igualmente, estos no permitirán
realizar tipificación sanguínea del grupo ABO.
Electroforesis SDS-PAGE
Se analizaron 18 muestras de las distintas variedades de semillas, en las figuras 6 y 7 se
observan los resultados de la electroforesis.
Las lectinas son en su mayoría glucoproteínas, es decir, proteínas que poseen una fracción
carbohidrato en su estructura; sin embargo, aparte de esto no hay una estructura común
para todas ellas, por ello los pesos moleculares fluctúan significativamente.
Peso molecular lectinas de frijol Phaseolus vulgaris

Figura 10. Peso molecular de lectina de Phaseolus vulgaris, (Salgado, 2006).

Como indica Salgado en 2016 el peso molecular de las lectinas de Phaseolus vulgaris obtenido por
medio de electroforesis SDS-PAGE es de 28 kDa.

Otro artículo indica que las lectinas del frijol negro tienen un peso de 31 kDa (Fabre et al.,
1998).
Así mismo Mancera en 2021, indica que el peso molecular de las lectinas de las leguminosas
Phaseolus vulgaris es de 30 kDa.
La lectina purificada de semillas de Phaseolus vulgaris (isoforma PHA-L) con un peso
molecular de 32 kDa y con la capacidad de aglutinar leucocitos; la lectina purificada de
semillas de Phaseolus vulgaris (isoforma PHA-E) con un peso molecular de 34 kDa y con la
capacidad de aglutinar eritrocitos (Chrispeels y Raikhel, 1991).
Por lo tanto, se establece un rango de peso molecular de lectinas contenidas en Phaseolus
vulgaris es de entre 28 a 34 kDa considerando todas las isoformas (PHA-E y PHA-L).
Como se muestra en la figura 6, en el primer carril se realizó la muestra del epitelio,
obteniéndose pesos moleculares de 77.90, 49.09 y 40.50 kDa, lo cual indica que, de acuerdo
con la bibliografía reportada, no se encuentran lectinas presentes en la muestra, sin
embargo, la prueba de aglutinación indica que existían lectinas en la muestra. Seguido del
carril número 2, se encontraron pesos moleculares de 74.9, 49.09, 40.5, 30.9 y 22.74 kDa,
encontrándose lectinas de peso molecular de 30.9 kDa. Finalmente, en el carril número 3
proveniente de la muestra de agua de remojo se encontraron pesos moleculares de 87.44
y 55.10 kDa, indicando la ausencia de lectinas que en relación con la prueba de aglutinación
afirman que en el agua de remojo no se encuentran lectinas.
Peso molecular de lenteja (Lens culinaris)
Se ha reportado que las lectinas de leguminosas por lo general se componen de dos o cuatro
subunidades, con un peso molecular aproximado de 25-30 kDa por subunidad (Casas
Corredor et al., 2016).
Por otra parte, Bermejo y colaboradores en 2021, afirman que el peso moléculas de las
lectinas de lenteja (LCA) es de 32 kDa.
Sin embargo, la empresa Medicago indica que la lectina o aglutinina (LCA) de Lens culinaris
tiene dos subunidades y un peso molecular de 46 kDa.
Por lo tanto, se concluye que pueden existir lectinas de 30 a 46 kDa.
En la figura 6, carril 4, 5 y 6, se muestran los resultados de electroforesis de la muestra de
lenteja, en el carril 4 y 6 se obtuvieron diversas proteínas y aunque había proteínas con
pesos moleculares dentro del rango establecido de lectinas no se consideraron ya que en la
prueba de aglutinación no se encontró presencia de las mismas realizada con la muestra del
equipo 2, por otra parte el carril 5 donde se utilizó la muestra de endospermo se
encontraron lectinas de peso molecular de 32.07 kDa y otras proteínas.
En la figura 7 se muestran los resultados de electroforesis de otras muestras de lenteja,
considerando que el marcador de peso molecular se contaminó, se utilizó el marcador de
la figura 6. En los carriles 2, 3, 4 y 7 se mostraron bandas corridas e imposibles de leer, esto
pudo deberse a la alta concentración de proteínas presentes en la muestra. Finalmente, en
los carriles restantes se observan bandas de entre los 30 a 46 kDa, pudiéndose encontrar
lectinas concordando así con la prueba de aglutinación realizada con la muestra del equipo
4.
Peso molecular de garbanzo (Cicer arietinum)
Gautam y colaboradores en 2018 indican que la lectina de garbanzo demuestra diversidad
en los pesos moleculares. En 1983, Kolberg et al. aislaron una lectina de 47 kDa de semillas
de Cicer arietinum. En 2005, estudios anteriores informaron sobre la cristalización y la
caracterización preliminar por rayos X de una lectina de garbanzo con un peso molecular de
43 kDa compuesta por dos subunidades idénticas (Katre et al. 2005).
Encontrándose así pesos moleculares de 43 a 47 kDa.
En la figura 6, carril 7, 8 y 9 se observan la electroforesis de la muestra de la extracción de
lectinas de garbanzo, sin embargo, en relación con la prueba de aglutinación solo deberían
existir lectinas en el carril número 9 ya que son las encontradas en el endospermo,
encontrándose así lectinas de peso molecular de 47.83 kDa, las proteínas extraídas en el
agua de remojo y en epitelio no se considerarán a pesar de que se encuentran dentro de
los pesos moleculares establecidos.
CONCLUSIONES

• En todas las muestras, se encontró la mayor cantidad de lectinas en el

endospermo.
• Las lectinas de Phaseolus vulgaris, Lens culinaris y Cicer arietinum no presentan
especificidad en los antígenos ABO y no permiten realizar estudios de
tipificación sanguínea.
• Se encontraron lectinas de las tres especies analizadas (Phaseolus vulgaris, Lens
culinaris y Cicer arietinum) por medio de la prueba de hemaglutinación.
• Se confirmó la presencia de lectinas mediante la comparación de pesos
moleculares a partir de electroforesis SDS-PAGE.
• Las lectinas extraídas de frijol, lentejas y garbanzo producen aglutinación el en
tipo sanguíneo A+.
• Con base en su peso molecular se encontró lectinas de P. vulgaris en el
endospermo, con un tamaño de 30.94 kD.
• De acuerdo con la prueba de aglutinación se encontraron lectinas de P. vulgaris
en epitelio y en endospermo, sin embargo, se observa una mayor concentración
en el endospermo.
REFERENCIAS

• Abdullaev FI, González de Mejía E. Antitumor effect of plantlectins. Natural

toxins 1997; 5: 157-63.

• Barragán, J. A., Zerpa, S. I., Castillo, M. S., Haro, I. R., & Villazón, C. O. (2014).
LECTINAS DE Phaseolus vulgarisL. var ñuña “ñuña” Y SU ESPECIFICIDAD
HEMOAGLUTINANTE FRENTE A GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y
LEVADURAS. SCIÉNDO, 15(2). Recuperado a partir de
https://revistas.unitru.edu.pe/index.php/SCIENDO/article/view/485
• BD Phosphate Buffered Saline (pH 7.2) . (2003). Obtenido
de https://legacy.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/hb/ce/ba/es-ba-257204.pdf
• Bermejo, C. J., Maglia, F., Palacios, T., Espósito, M. A., Cazzola, F., Guindón, M.

F., Gatti, I., & Cointry, E. L. (2021). APPLICATION OF DIFFERENT

METHODOLOGIES IN LENTIL (Lens culinaris MEDIK) BREEDING. Journal of

Basic and Applied Genetics, 32(Issue 2), 32–39.

https://doi.org/10.35407/bag.2021.32.02.04
• Brinda, A. Surolia, M. y Vishveshwara, S. (2005). “Insights into the quaternary
association of proteins through structure graphs: a case study of lectins”.
Biochemistry Journals. 391:1–15.
• Casas Corredor, Z. Y., Reyes Montaño, E. A., & Vega Castro, N. A. (2016).
LECTINAS CON DOMINIO DE LEGUMINOSA: CARACTERÍSTICAS
ESTRUCTURALES Y UTILIDAD COMO AGENTES INSECTISTÁTICOS E
INSECTICIDAS. Chilean Journal of Agricultural & Animal Sciences, 32(2), 157–
169. https://doi.org/10.4067/s0719-38902016000200009
• Castillo-Villanueva A, et al. Lectinas vegetales y sus efectos en el cáncer. Rev Invest
Clin 2005; 57 (1): 55-64
• Chrispeels, M.; Raikhel, N. 1991. Lectins, Lectins genes, and their role in plant
defense. Plant Cell. Vol. 3, 1-9.
• Díaz-Sobad, Rafael, & Vázquez-Luna, Alma, & Rivadeneyra- Domínguez, Eduardo
(2012). Lectinas en frutas y plantas comestibles: nuevas posibilidades de interacción
entre la ciencia de los alimentos y la biomedicina. CienciaUAT, 6(3),60-66.[fecha de
Consulta 1 de Mayo de 2022]. ISSN: 2007-7521. Disponible en:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=441942927008
• Estudio estructural de complejos de oligonucleótidos ricos en adenina y timina con
la proteína HMGB1. (s.f.). Obtenido
de ETSEIB: https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2117/77742/Garcia_Gom
ez_Sonia_TFM.pdf?sequence=1&isAllowed=y
• Fabre C. et al. Characterization and sugar-binding properties of arcelin-1, an
insecticidal lectin-like protein isolated from kidney bean (Phaseolus vulgaris L. cv.
RAZ-2) seeds. Biochemical Journal, v. 329, n. October 2016, p. 551–560, 1998a.
• Gautam AK, Gupta N, Narvekar DT, Bhadkariya R, Bhagyawant SS.
Characterization of chickpea (Cicer arietinum L.) lectin for biological activity.
Physiol Mol Biol Plants. 2018 May;24(3):389-397. doi: 10.1007/s12298-018-0508-
5. Epub 2018 Mar 20. PMID: 29692547; PMCID: PMC5911256.
• Hernández P, Pérez E, Martínez L, Ortiz B y Gisela. (2005). LAS LECTINAS
VEGETALES COMO MODELO DE ESTUDIO DE LAS INTERACCIONES
PROTEÍNA-CARBOHIDRATO. REB, Vol. 24, 21-27.
• Irazábal, A. L., Gutiérrez, R. T., & Rodríguez, S. V. (2011). INGENIERÍA EN
BIOTECNOLOGÍA ANÁLISIS INSTRUMENTAL. Coordinación de Universidades
Politécnicas, CDMX. Obtenido
de https://upzmg.edu.jalisco.gob.mx/sites/upzmg.edu.jalisco.gob.mx/files/m.a_anali
sis_instrumental.pdf
• Linda, J. R, Michael, B. L, y William, H. G (2004). “The Molecular Mechanics of P-
and L-Selectin Lectin Domains Binding to PSGL-1”. Biophysical Journal. 86 (1):
544–554.
• Maldonado A. y Jorrín J.. ((S.F)). Electroforesis desnaturalizante en geles de
poliacrilamida. Análisis de proteínas de hojas de Arabidopsis thaliana . 29/04/22, de
Departamento de Bioquímica y Biología Molecu Sitio web:
https://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/16%20ELECTROFORESIS%20GELES%20PAA.pdf
• Marcadores de proteínas. (s.f.). Obtenido
de cientifica senna: https://www.cientificasenna.com/producto/marcadores-de-
proteinas/#:~:text=Los%20marcadores%20de%20peso%20molecular%20de%20pro
te%C3%ADnas%20(14%2D212%20kDa,desde%20200%2C000%20hasta%2039%
2C200%20kDa.
• Maree, D. (2005). “Lectins passive defence role in plants”. Biologist. 52(2):74-79.
• Mendoza, W., Gandolfo, L., Ponce, L., Novello, J., & Marangoni, S. (2007).
ESTUDIOS ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE UNA LECTINA AISLADA DE
SEMILLAS DE CAESALPINIA SPINOSA KUNTZE (TARA). Idesia
(Arica), 25(2). https://doi.org/10.4067/s0718-34292007000200006
• Menor C. (2019). SDS-PAGE: ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA. 29/04/22, de ChemEvol Sitio web:
https://chemevol.web.uah.es/wp/sds-page-electroforesis-en-gel-de-poliacrilamida/
• Menor-Salvan., C. (2019). SDS-PAGE: ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA. Obtenido de http://www3.uah.es/chemevol/index.php/sds-
page-electroforesis-engel-de-poliacrilamida/
• Montaje del gel en el equipo de electroforesisy separación electroforética. (s.f.).
Obtenido de
Farmacopea: http://www.anmat.gov.ar/webanmat/fna/flip_pages/Farmacopea_Vol_I
/files/assets/basic-html/page183.html
• Patnaik, B.B., Saha, A.K., Bindroo, B.B. y Han, Y.S. (2012). “Lectins as possible
candidates towards antimicrobial defense in silkworm, Bombyx mori L”. African
Journal of Biotechnology. 11(50): 11045-11052.
• Reactivos empleados en la electroforesis de DNA y de proteínas. (s.f.). Obtenido
de Biomodel: http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/reactivos.htm#BPB
• Rodriguez V, Riquelme B, Valverde J. y Gattuso S.. (2004). CARACTERIZACION
DEL EFECTO AGLUTINANTE DE LECTINAS DE LA FAMILIA DE LAS
FABACEAS SOBRE LOS ERITROCITOS HUMANOS MEDIANTE EL
ANALISIS DE IMÁGENES. ANALES AFA, Vol. 16
• Salgado, Julia.(2006). PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y
FISICOQUÍMICA DE LECTINAS DE FRIJOL Y AMARANTO CULTIVADOS
EN EL ESTADO DE
HIDALGO. https://repository.uaeh.edu.mx/bitstream/bitstream/handle/123456789/
11052/Purificaci%C3%B3n%20y%20caracterizaci%C3%B3n%20bioqu%C3%AD
mica%20y%20fisicoqu%C3%ADmica%20de%20lecitinas%20de%20fr%C3%ADjo
l%20y%20amaranto%20cultivados%20en%20el%20estado%20de%20hidalgo.pdf?
sequence=1
• Sharma, A., Ng, T. B., Wong, J. H., & Lin, P. (2009). Purification and
Characterization of a Lectin from Phaseolus vulgaris cv. (Anasazi Beans). Journal of
Biomedicine and Biotechnology, 2009, 1–9. https://doi.org/10.1155/2009/929568
• Sharmistha, S., Nivedita, M., Gyanendra, K., Kanika, B. y Avadhesha, S. (2005).
“Unfolding Studies on Soybean Agglutinin and Concavalina A tetramers: A
Comparative Account”. Biophysucal Journal. 88:1300-1310
• Solución Instapage Acrilamida 30%. (s.f.). Obtenido
de Cientifica senna: https://www.cientificasenna.com/producto/acrilamida-en-
solucion-instapage/
• Solucion Salina 0.85%. (s.f.). Obtenido de
XDOC: https://xdoc.mx/documents/solucion-salina-085-no-esteril-para-uso-enla-
5f1b4758264b1#
• Vázquez A, Rivadeneyra E y Díaz R.. (2012). LECTINAS EN FRUTAS Y
PLANTAS COMESTIBLES: NUEVAS POSIBILIDADES DE INTERACCIÓN
ENTRE LA CIENCIA DE LOS ALIMENTOS Y LA BIOMEDICINA. CienciaUat,
Vol. 23, 60-66.
• Van Damme, E.J.M., Peumans, W.J., Pusztai, A. y Bardocz, S. (1998). Handbook
of Plant Lectins: Properties and Biomedical Applications. USA. Wiley & Sons. 127-
145.