FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TESIS

EVALUACIÓN DEL CONTENIDO DE BIXINA EN Bixa orellana L.

(ACHIOTE) DEL BANCO DE GERMOPLASMA DE ZUNGAROCOCHA
- FACULTAD DE AGRONOMIA - UNAP

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

INGENIERO (A) EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

PRESENTADO POR:

MARIA TERESA BARRERA RUIZ

JESSY LUIS UTIA LINARES

ASESOR (ES):

Ing. ALENGUER GERÓNIMO ALVA ARÉVALO, Dr.

Ing. JORGE YSAAC VILLACRÉS VALLEJO, MSc

Iquitos, Perú

2019

i
ii
 1. MIEMBROS DEL JURADO

El jurado calificador asignado certifica que el trabajo de investigación

“EVALUACIÓN DEL CONTENIDO DE BIXINA EN Bixa orellana L. (ACHIOTE)

DEL BANCO DE GERMOPLASMA DE ZUNGAROCOCHA - FACULTAD DE

AGRONOMIA – UNAP”, de responsabilidad de los Bachilleres MARIA TERESA

BARRERA RUIZ y JESSY LUIS UTIA LINARES; ha sido detalladamente

revisado por los miembros del jurado, quedando autorizado para la sustentación.

……………………………………..

Fernando Tello Celis

Ingeniero en Industrias Alimentarias
CIP: 47489
PRESIDENTE

…………………………………….. ……………………………………..

Elmer Trevejo Chávez Juan Alberto Flores Garazatúa

Ingeniero Pesquero Ingeniero en Industrias Alimentarias
CIP: 18492 CIP: 31646
MIEMBRO TITULAR MIEMBRO TITULAR

iii
 2. AUTORIZACIÓN DEL ASESOR
Ing. Alenguer Gerónimo Alva Arévalo Dr., profesor principal del Departamento de

Ingeniería de Alimentos y Jorge Ysaac Villacrés Vallejo Msc., docente de la

Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad Nacional de la Amazonia

Peruana.

INFORMA:

Que los Bachilleres MARIA TERESA BARRERA RUIZ y JESSY LUIS UTIA

LINARES, han realizado bajo mi dirección, el trabajo contenido “EVALUACIÓN

DEL CONTENIDO DE BIXINA EN Bixa orellana L. (ACHIOTE) DEL BANCO DE

GERMOPLASMA DE ZUNGAROCOCHA - FACULTAD DE AGRONOMIA –

UNAP”, y considerando que el mismo reúne los requisitos necesarios para ser

presentado ante el jurado calificador, a tal efecto damos pase para su

sustentación y posterior obtención del título de Ingeniero en Industrias

Alimentarias.

AUTORIZO: A los bachilleres a presentar el Trabajo final de carrera, para

proceder a su sustentación cumpliendo así con la normativa vigente que regula

los Grados y Títulos de la Facultad de Industrias Alimentarias en la Escuela de

Ingeniería en Industrias Alimentarias de la Universidad de la Amazonia Peruana.

…………………………………….. …………………………………….
Dr. Ing. Alenguer G. Alva Arévalo Jorge Ysaac Villacrés Vallejo Msc.

iv
 3. DEDICATORIA

 MARIA TERESA BARRERA RUIZ

A Dios por darme fuerza y ayudarme a

superar las dificultades a lo largo de mi
carrera.
A mi padres que me dieron la vida
José Barrera Pinedo y Raquelita Ruiz
Alvarado, porque confiaron en mi
capacidad, dándome mucho amor y
ejemplo de superación y por el apoyo
incondicional, ellos son el motor y
motivo para seguir adelante en mi día
a día.

A mis tíos Zoila Patricia Ruiz Alvarado y

Celin Peñaherrera Vásquez por quererme
y apoyarme siempre, dándome muchos
ánimos, esto también se los debo a
ustedes por ser parte de mi vida.

A mi hermana Delicia Barrera

Sánchez y mis abuelitos Hirma
Teresa Alvarado Naro y Francisco
Ruiz Vargas porque contribuyeron y
estuvieron pendiente para el logro de
mi meta.

Y a mi amiga Maria y Katherine por su

alegría, apoyo y su gran amistad en
todos estos años.

A todos ellos se los agradezco desde el fondo de mi corazón.

v
 DEDICATORIA

 JESSY LUIS UTIA LINARES

En primer lugar a Dios, por darme

fortaleza e iluminarme en cada paso que
he dado.

A mi padre Willian Utia Huanaquiri y a

mi madre Regina Linares Moreno por
el apoyo incondicional que me
brindaron a lo largo de mi carrera
universitaria, por enseñarme a cultivar
el valor del trabajo, la humildad y la
responsabilidad. Los amo y son un
ejemplo a seguir.

A mi abuela Maria Teresa Huanaquiri

Icahuate por su sabiduría, consejo y
apoyo para poder terminar mi carrera.

Y a mis Tías: Peggy, Gladys, Hilda e

Isabel por darme consejos sabios y en
estar pendiente de mi proceso como
profesional.

vi
 4. AGRADECIMIENTO
A la Universidad Nacional de la Amazonia Peruana por ser nuestro centro de
estudios y a la Facultad de Industrias Alimentarias, por haberme brindado los
conocimientos necesarios en mi formación profesional y todas las facilidades para
el desarrollo del presente trabajo de investigación.

Al Proyecto de Investigación tecnológica: Obtención de morfotipos

promisorios de Bixa orellana L. “Achiote” en base a estudios integrados
para la producción de colorantes y biomasa, Iquitos-Perú; por permitirnos ser
parte de este proyecto y por brindarnos el apoyo necesario para nuestro proyecto
de tesis.

A mis asesores, Dr. Alenguer Gerónimo Alva Arévalo y el Ing. Jorge Ysaac
Villacrés Vallejo Msc., por sus orientaciones, apoyos, consejos y paciencia
incondicional, que hicieron posible la culminación satisfactoria del presente
trabajo.

Al Dr. Gabriel Emilio Vargas Arana jefe del Laboratorio de Química de

Productos Naturales por el aporte final en nuestro trabajo de investigación. Y
facilitarnos las instalaciones del Instituto de Investigación de la Amazonia
Peruana (IIAP).

También agradecer al Instituto De Medicina Tradicional (IMET) por

proporcionarme los equipos y sus instalaciones para realizar las observaciones y
comparaciones en sus laboratorios.

A los miembros del Jurado Calificador, por sus orientaciones y consejos

desinteresados, con los que no hubiera sido posible el término del presente
trabajo.

Maria Teresa Barrera Ruiz Jessy Luis Utia Linares

vii
 INDICE

Páginas
PORTADA ......................................................................................................................... i

1. ACTA DE SUSTENTACIÓN ......................................................................................... ii

2. MIEMBROS DEL JURADO ......................................................................................... iii

3. AUTORIZACIÓN DEL ASESOR ................................................................................. iv

4. DEDICATORIA ............................................................................................................... v

5. AGRADECIMIENTO .................................................................................................... vii

INDICE GENERAL ...................................................................................................... viii

6. INDICE DE CUADROS .............................................................................................. xiv

7. INDICE DE FIGURAS.................................................................................................. xv

8. LISTA DE ANEXO ....................................................................................................... xvi

9. RESUMEN ................................................................................................................... xvii

ABSTRACT ................................................................................................................ xviii

INTRODUCCIÓN............................................................................................................ 1

CAPÍTULO I: MARCO TEÓRICO ............................................................................... 3

1.1. ANTECEDENTES ........................................................................................ 3

1.2. BASES TEÓRICAS ..................................................................................... 6

1.2.1. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA ................................................................ 6

1.2.1.1. Planta .............................................................................................. 6

1.2.1.2. Hojas ............................................................................................... 7

1.2.1.3. Flores .............................................................................................. 8

1.2.1.4. Floración ......................................................................................... 8

1.2.1.5. Polinización ..................................................................................... 8

1.2.1.6. Fruto o Capsula............................................................................... 9

1.2.1.7. Semilla .......................................................................................... 10

viii
 1.2.1.8. Color ............................................................................................. 11

1.2.1.9. Requerimientos y Condiciones Climáticas .................................... 11

1.2.2. CLASIFICACIÓN ............................................................................... 12

1.2.3. VARIEDADES ................................................................................... 12

1.2.3.1. Frutos Redondos........................................................................... 13

1.2.3.2. Frutos Cónicos .............................................................................. 13

1.2.3.3. Frutos Lanceolados....................................................................... 13

1.2.4. TAXONOMÍA ..................................................................................... 13

1.2.5. ORIGEN: ........................................................................................... 14

1.2.6. DISTRIBUCIÓN Y HÁBITAT DEL ACHIOTE .................................... 15

- Distribución ................................................................................... 15

- Hábitat ........................................................................................... 15

1.2.7. USOS ................................................................................................ 16

- Usos en la Industria ...................................................................... 16

- Goma Alimentaria ......................................................................... 16

- Cosmético ..................................................................................... 16

- Insecticida ..................................................................................... 17

- Medicinal ....................................................................................... 17

- Alimento para Animales ................................................................ 17

1.2.8. COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA SEMILLA DE ACHIOTE .............. 18

1.2.8.1. Características Fisicoquímicas de la Semilla de Achiote .............. 18

1.2.9. COLORANTE .................................................................................... 20

1.2.9.1. Definición ...................................................................................... 20

1.2.9.2. Colorantes Naturales .................................................................... 20

1.2.9.2.1. Ventajas de los Colorantes Naturales ................................... 21

1.2.9.3. Clasificación de los Colorantes Naturales ..................................... 21

1.2.9.3.1. Flavonoides. .......................................................................... 21

ix
 1.2.9.3.2. Carotenoides ......................................................................... 21

1.2.9.3.3. Quinonas ............................................................................... 21

1.2.9.3.4. Derivados del indol (indigoides) ............................................ 22

1.2.9.3.5. Derivados de dihidropilano. ................................................... 22

1.2.9.3.6. Derivados de delfinidina. ....................................................... 22

1.2.9.3.7. Grupo betaleína..................................................................... 22

1.2.9.3.8. Grupo xantonas. .................................................................... 22

1.2.9.3.9. Grupo clorofila ....................................................................... 22

1.2.9.3.10. Grupo tanino – pirogallo y catecol ....................................... 22

1.2.9.4. Colorantes Artificiales ................................................................... 22

1.2.10. Colorante del Achiote ........................................................................ 23

1.2.11. BIXINA .............................................................................................. 23

1.2.11.1. Bixina y sus características ........................................................ 23

1.2.11.2. Estructura Química .................................................................... 24

1.2.12. MÉTODOS DE EXTRACCIÓN PARA LA OBTENCIÓN DEL

COLORANTE DE LA SEMILLA DE ACHIOTE .................................. 24

1.2.12.1. Tipos de Extracción.................................................................... 25

1.2.12.1.1. Extracción con Agua ............................................................ 25

1.2.12.1.2. Extracción Alcalina .............................................................. 25

1.2.12.1.3. Extracción con Solventes .................................................... 26

1.2.12.1.4. Extracción Enzimática ......................................................... 26

1.2.12.2. Factores que Influyen en la Extracción ...................................... 26

1.2.12.2.1. Tamaño del Grano ............................................................... 26

1.2.12.2.2. Solvente Adecuado ............................................................. 26

1.2.12.2.3. Temperatura Óptima ........................................................... 27

1.2.13. Factores que Afectan la Extracción ................................................... 27

1.2.13.1. Tipo de Solvente ........................................................................ 27

x
 1.2.13.2. Criterio de Selección del Solvente ............................................. 27

1.2.13.3. Temperatura .............................................................................. 27

1.2.13.4. Agitación del Fluido .................................................................... 28

1.2.13.5. Relación Solvente Sólido ........................................................... 28

1.2.14. TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN .................................................... 28

1.2.14.1. Espectrofotometría ..................................................................... 28

1.2.14.2. Análisis de Cromatografía Liquida de Alta Eficacia (HPLC) ...... 29

1.2.14.2.1. Sistema de Bombeo ............................................................ 29

1.2.14.2.2. Tipos de Empaquetado........................................................ 29

1.2.14.2.3. Volumen y Tiempo de Retención ......................................... 30

1.2.14.2.4. Factor de Capacidad ........................................................... 30

1.3. DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BASICOS ................................................... 31

2. CAPÍTULO II: HIPÓTESIS Y VARIABLES ............................................................. 37

2.1. FORMULACIÓN DE LA HIPÓTESIS ......................................................... 37

2.2. VARIABLES Y SU OPERACIONALIZACIÓN ............................................ 38

3. CAPÍTULO III: METODOLOGÍA ............................................................................... 39

3.1. TIPO Y DISEÑO ........................................................................................ 39

3.1.1. Tipo de estudio .................................................................................. 39

3.1.2. Diseño de estudio: ............................................................................. 39

3.2. DISEÑO MUESTRAL................................................................................. 39

3.3. PROCEDIMIENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS .............................. 40

3.3.1. Selección del área o ámbito de estudio ............................................. 40

3.3.2. Materiales .......................................................................................... 40

3.3.2.1. Materia prima: Bixa orellana L. (Achiote) ...................................... 40

3.3.2.2. Equipos ......................................................................................... 40

3.3.2.3. Materiales del laboratorio usados: ................................................ 42

3.3.2.4. Reactivos y Solventes usados: ..................................................... 43

xi
 3.3.3. EXTRACCIÓN DEL COLORANTE Bixa orellana L. (Achiote) ........... 44

3.3.3.1. Proceso Experimental para la extracción del colorante de

Bixa orellana L. (Achiote) .............................................................. 44

3.3.4. ANÁLISIS A REALIZAR .................................................................... 47

3.3.4.1. ANÁLISIS DE HUMEDAD DE LAS SEMILLAS FRESCAS,

SECAS Y COLORANTE-POLVO DE BIXA ORELLANA L.
(ACHIOTE) .................................................................................... 47

3.3.4.2. METODOLOGÍA ANALÍTICA (ANÁLISIS CUALITATIVO Y

CUANTITATIVO)........................................................................... 48

3.3.4.2.1. Análisis Espectrofotométrico UV-VIS .................................... 48

3.3.4.2.2. Análisis de HPLC .................................................................. 49

3.4. PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE LOS DATOS ................................... 50

3.5. ASPECTOS ÉTICOS ................................................................................. 50

4. CAPÍTULO IV: RESULTADOS ................................................................................. 51

4.1. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD DE LAS SEMILLAS FRESCAS,

SECAS Y COLORANTE - POLVO DE Bixa orellana L. (ACHIOTE) .......... 51

4.2. ANÁLISIS DE LA BIXINA POR MÉTODO

ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VIS ....................................................... 53

4.2.1. Análisis cualitativo de la Bixina presente en la Bixa orellana L. ........ 53

4.2.2. Análisis cuantitativo de la Bixina ....................................................... 55

4.2.3. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA BIXINA POR MEDIO DE

UV-VIS .............................................................................................. 56

4.3. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA BIXINA POR EL MÉTODO

DEL HPLC. ................................................................................................ 57

4.4. BALANCE DE LA MATERIA PRIMA Bixa orellana L. (ACHIOTE)............. 60

5. CAPÍTULO V: DISCUSIÓN........................................................................................ 61

5.1. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD DE LAS SEMILLAS FRESCAS,

SECAS Y COLORANTE-POLVO DE Bixa orellana L. (ACHIOTE) ............ 61

5.2. ANÁLISIS CUALITATIVO DE BIXINA POR UV-VIS. ................................. 62

xii
 5.3. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE BIXINA POR UV-VIS ............................... 62

5.4. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA BIXINA POR EL MÉTODO

DEL HPLC ................................................................................................. 63

5.5. COMPARACIÓN DE LAS CANTIDADES DE BIXINA OBTENIDAS POR

MÉTODO DE UV-VIS Y DE ALTA EFICIENCIA (HPLC) ........................... 64

CAPÍTULO VI: CONCLUSIONES ................................................................................. 66

CAPÍTULO VII: RECOMENDACIONES ....................................................................... 67

CAPÍTULO VIII: FUENTES DE INFORMACIÓN ........................................................ 68

ANEXOS ............................................................................................................................ 73

xiii
 5. INDICE DE CUADROS
Cuadro 1: Clasificación botánica de Bixa. orellana L. (Achiote) .......................... 12
Cuadro 2: Nivel Taxonómico de Bixa. orellana L. (Achiote) ................................ 13
Cuadro 3: Composición química del grano de achiote ........................................ 18
Cuadro 4: Composición de semilla de achiote sin colorante en base seca
y en base húmeda ............................................................................... 19
Cuadro 5: Composición nutricional de la semilla de achiote (mg/100g) .............. 19
Cuadro 6: Composición del pigmento de la semilla de achiote (g/100g) ............. 20
Cuadro 7: Operación de las Variables para la Evaluación del Contenido de
Bixina ................................................................................................ 38
Cuadro 8: Humedad de Semilla Fresca .............................................................. 51
Cuadro 9: Humedad de Semilla seca .................................................................. 52
Cuadro 10: Humedad de Extracto (Polvo) ........................................................... 52
Cuadro 11: Barrido de Semilla Seca ................................................................... 53
Cuadro 12: Barrido de Extracto (Polvo) ............................................................... 54
Cuadro 13: Absorción de las Bixina de diferentes combinaciones ...................... 55
Cuadro 14: Contenido Total de Bixina (%) .......................................................... 56
Cuadro 15: Datos de la estandarización de la curva ........................................... 58
Cuadro 16: Datos de Cuantificación de Bixina del extracto colorante seco
de la semilla de achiote (Bixa orellana L.) por medio del
HPLC (mg/ml) ................................................................................. 59
Cuadro 17: Balance de la Materia Prima (Recolección) ...................................... 60
Cuadro 18: Morfotipos similares con mayor contenido de bixina
(semilla seca y polvo) ...................................................................... 64
Cuadro 19: Morfotipos que difieren con menor cantidad de bixina
en semillas secas ............................................................................ 64

xiv
 6. INDICE DE FIGURAS

Figura 1: Planta de Bixa orellana L. (Achiote) .............................................................. 6

Figura 2: Hojas frescas del achiote ................................................................................ 7
Figura 3: Coloración de flores del achiote ..................................................................... 8
Figura 4: Formas de Capsulas del achiote................................................................ 10
Figura 5: Semillas frescas del achiote.......................................................................... 10
Figura 6: Colores del grano de achiote ........................................................................ 11
Figura 7: Estructura química de Bixina ........................................................................ 24
Figura 8: Diagrama de Flujo para la obtención del colorante a partir de las
semillas de achiotes ...................................................................................... 44
Figura 9: Espectro UV-Vis del Morfotipo para bixina en acetona de
Semilla Seca. Ver en Anexo. ....................................................................... 54
Figura 10: Espectro UV-Vis del Morfotipo para bixina en acetona del
Extracto (Polvo). Ver en Anexo ................................................................... 55
Figura 11: Grafica de la Curva estándar Bixina .......................................................... 58

xv
 7. LISTA DE ANEXO

ANEXO 1: Variedades de Achiote Bixa orellana L. de once Morfotipos .............. 73

ANEXO 2: Semillas Secas de los once Morfotipos .............................................. 74
ANEXO 3: Ficha del grado de Maduración .......................................................... 75
ANEXO 4: a) Concentración de Semilla Seca ..................................................... 80
ANEXO 5: b) Concentración de Extracto (Polvo) ................................................. 81
ANEXO 6: Espectro de Análisis Cualitativos de Semillas secas de once
Morfotipos en UV-Vis. ....................................................................... 82
ANEXO 7: Espectro de Análisis Cualitativos de Extracto – Polvo de once
Morfotipos en UV-Vis. ....................................................................... 85
ANEXO 8: Concentración del Colorante con Acetona y Acetonitrilo para
HPLC ................................................................................................. 88
ANEXO 9: Datos del cromatograma .................................................................... 89
ANEXO 10: Datos de Cuantificación de Bixina del extracto colorante seco
de la semilla de achiote (Bixa orellana L.) por medio
del HPLC (ug/ml) ............................................................................. 90
ANEXO 11: Descripción del Proceso para la Extracción del Colorante de Bixa
orellana L. (Achiote) ........................................................................ 91
ANEXO 12: Certificado de Constancia del Achiote .............................................. 95

xvi
 8. RESUMEN

El presente trabajo de investigación consistió en evaluar el contenido de bixina,

fueron recolectados 11 morfotipos de Bixa orellana L. (Achiote), en la cual se

desarrolló un estudio descriptivo comparativo. Para la extracción del colorante

natural de las semillas secas que fueron sometidas a KOH al 2 %, acetona y

acetonitrilo. El colorante filtrado fue secado a temperatura de 56 a 58ºC durante 6

horas hasta obtener el colorante en polvo. El contenido de bixina fue hecho por

espectrofotometría UV-Vis. Los valores fueron calculados de acuerdo a la ley de

Beer. El análisis hecho por cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC) fue

detectado a 455 nm y comparando con un estándar. Los resultados obtenidos

indican que los morfotipos 11, 1, 10 y 9 tiene la mayor concentración de bixina

con 30.49, 28.57, 26.78 y 26.37 % respectivamente. Y la cuantificación de la

bixina en HPLC fueron los morfotipos 9, 10, 11 y 1 con 27, 27, 24 y 21%

respectivamente.

Palabras claves: bixina, Bixa orellana L., morfotipos.

xvii
 ABSTRACT

The present research work consisted of evaluating the content of bixin, 11

morphotypes of Bixa orellana L. (Achiote) were collected, in which a comparative

descriptive study was developed. For the extraction of the natural dye the dried

seeds were subjected to 2% KOH, acetone and acetonitrile. The filtered dye was

dried at a temperature of 56 to 58 ° C for 6 hours until the powder dye was

obtained. Bixin content was done by UV-Vis spectrophotometry. The values were

calculated according to Beer's law. The analysis made by high efficiency liquid

chromatography (HPLC) was detected at 455 nm and compared to a standard.

The results obtained indicate that morphotypes 11, 1, 10 and 9 have the highest

concentration with 30.49, 28.57, 26.78 and 26.37% respectively. And

quantification with HPLC were morphotypes 9, 10, 11 and 1 with 27, 27, 24 and

21% respectively.

Keywords: bixina, Bixa orellana L., morphotypes.

xviii
 INTRODUCCIÓN
Bixa orellana L. (Achiote), es una planta de gran potencial y es originaria de las

regiones tropicales y subtropicales de América del Sur y América Central (Huerta

y Ostos, 2014), es una especie de fácil adaptación. La Amazonía peruana es una

región rica en diversidad biológica que son los ecosistemas y los recursos

genéticos como la flora y fauna. La bixina es un pigmento carotenoide que es el

principal colorante que se encuentra en la cubierta exterior del fruto (Centro

Nacional de Tecnología Agropecuaria y Forestal, 2010). Y se usan en

diferentes industrias tales como lácteos, cárnicos, cosméticos, entre otras. Las

semillas despigmentadas se usa en los subproductos alimenticios de algunos

animales por su alto contenido de carbohidratos (Engelhardt, 2014). El uso y

consumo en antiguas civilizaciones del Perú, los nativos empleaban al achiote

para pintar sus cuerpos y para protegerse de las picaduras de insectos.

Bixa orellana L. (achiote) es uno de los colorantes más conocidos y de mayor

aplicación en diferentes industrias es el que se obtiene a partir de la semilla de

achiote “Annatto” (Devia y Saldarriaga, 2003). En la actualidad en el Perú, se

utiliza para colorear y sazonar alimentos caseros, en la Industria Alimentaria

(colorear los quesos, mantequillas, etc.). El uso de los colorantes de origen

natural se ha incrementado en los últimos años, es así, que desde el 2005 al

2009, su demanda se incrementó a 35%, y esto debido a que las legislaciones de

algunos países requieren la utilización de estas sustancias en las industrias

alimenticias, farmacéuticas y cosméticas (Pérez, 2003; Cabrera & Piza, 2010).

1
Con este trabajo se evaluó el contenido de Bixina de 11 Morfotipos de Bixa

orellana L. (Achiote) del Banco de Germoplasma en Zungarococha - Facultad de

Ciencias Agronómicas - UNAP.

La Facultad de Ciencias Agronómicas tiene un Taller de investigación en plantas

medicinales que se encuentran instalados desde hace 10 años un Banco de

Germoplasma de la especie Bixa orellana L. La producción del colorante

dependerá de la variabilidad de la especie, siendo necesario evaluar el

rendimiento y el contenido en estos morfotipos de achiote. Por medio de la

siguiente investigación se llegó a determinar el (los) mejor (es) morfotipo (s) lo

cual permitirá fomentar el cultivo de plantas selectas, creando una nueva fuente

de trabajo e ingresos, ya que la demanda de colorantes naturales y la exportación

del mismo se han incrementado. Con los resultados de este estudio experimental,

se beneficiarán las empresas interesadas en este nuevo producto porque ya

tendrán todos los parámetros físicos y químicos para obtener el producto final. La

presente investigación comprende de un tipo de estudio cuantitativo y un diseño

No experimental – Descriptivo comparativo. Y evaluar la concentración de Bixina

de los 11 morfotipos, mediante espectrofotometría de UV -Vis (Espectrofotómetro)

y la cromatografía líquida (HPLC).

2
 CAPÍTULO I: MARCO TEÓRICO

1.1. ANTECEDENTES

Cabrera y Piza (2010); Informaron que los países como Perú, México, Brasil,

Ecuador y Bolivia son los mayores productores de colorantes naturales, teniendo

a sus principales consumidores e importadores a Japón, Europa y Estados

Unidos. Gomes y Salome (2015); Afirman que Brasil es el único responsable del

57% de la producción mundial del achiote. Es así, hacen una reiteración sobre el

mercado de achiote, señalando que el 90% del total corresponde al consumo de

colorantes naturales en Brasil y al 70% de colorantes naturales corresponde al

mundo.

Huerta y Ostos (2014); Se basaron en la obtención de la Bixina y usaron

diferentes métodos para extracción con diferentes solventes (NaOH, KOH,

acuoso, etc.), con el solvente KOH se obtiene un colorante de mejor calidad y

rendimiento, extrae más del 30 % del colorante de la semilla de achiote y la

empresa KALSEC (2001) ha comprobado que el KOH es indicado para el

proceso. Sin embrago Reyes (2015); Utilizó como solventes: agua, solución

acuosa de KOH al 1%, 2% y 3%, a escala laboratorio.

Alfaro y Aspiros (2015); Tuvo como finalidad la obtención del colorante de la

semilla de Bixa orellana L. y realizó mediante el método de álcali acuoso con los

solventes KOH al 2%, H2SO4 al 10% para la precipitación del colorante a un ph 2

– 2.5, se secó la pasta y se pesó. Mediante el Espectrofotómetro se hizo a un

barrido de absorbancias entre 300- 600 nm para el análisis ultravioleta. Según

3
Aguilar (1998) y Devia (2005); realizo la caracterización del colorante mediante

una longitud de onda por lo cual el colorante tiene la máxima absorbancia, tomó

1g de muestra del colorante con una solución de KOH al 5%. Finalmente se utilizó

el método de UV-Vis para un barrido de absorbancias entre 300 y 600 nm,

obteniendo a través de una longitud de onda máxima lo cual estuvo comprendida

entre 450 y 500 nm.

Según Taboada y Salm (1997); Reportaron que la obtención de semillas para el

análisis a de bixina eligieron 45 plantas de achiote que posteriormente

clasificaron 9 diferentes variedades. La metodología que utilizaron estos autores

para la característica morfológica fue del programa de naciones unidas y para la

extracción del colorante utilizaron el hidróxido de sodio a 0.1 N con una

absorbancia de 453 nm, indican que no todas las variedades de achiote cumplen

con las exigencias mínimas del mercado y algunos pueden llegar a un contenido

de pigmento superior al 3 % del colorante.

Según Rehm y Espig (1991); Indican que desde la antigüedad, el hombre ha

usado pigmentos de origen vegetal para teñir sus vestidos, para darle color a sus

comidas y bebidas, y para embellecer su cuerpo. Destacan que, el colorante

juega un papel grande, en las industrias modernas de alimentos y cosméticos.

Devia y Saldarriaga (2003); Cabrera y Piza (2010); Indicaron que en los últimos

años los colorantes sintéticos han estado relacionados a efectos cancerígenos a

la piel. Por estas razones, se espera que en pocos años sean remplazados por

colorantes naturales seguros y de costo accesible a la población.

4
Pérez et al., (2003); Afirman que la semilla del achiote es un colorante inofensivo,

es así, la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha reconocido su nula

toxicidad tanto para el consumo humano como para su aplicación en la piel. En

segundo lugar, representa una sustancia con alta resistencia a los agentes

químicos, por lo que resulta muy apropiada para colorear todo tipo de alimentos y

bebidas.

Jaramillo (1992); Afirma que el colorante del achiote se encuentra depositado en

la capa que recubre la semilla, formada de componentes insolubles como la

celulosa, hemicelulosa y pectina. Cabe señalar en la naturaleza existen enzimas

que se encargan de degradar estos compuestos en azucares más simples.

Situación que puede aprovecharse para facilitar la liberación del pigmento en el

achiote, sin la necesidad de emplear sustancias toxicas para lograrlo.

Devia y Saldarriaga (2003); Jaramillo (1992); Señalan que el colorante del

achiote se usa en las industrias de los derivados lácteos, cárnicos, grasas,

helados, condimentos, cerámica, pintura, tintes, jabones, esmaltes, teñido de

sedas y telas de algodón y en la industria. Sin embargo, también se emplean en la

industria de los cosméticos y la farmacéutica. Guirola et al., (2010); Reportan que

los colorantes son sustancias que pueden tener un origen natural o artificial y son

usadas para potenciar el color de algunos alimentos, teñir algunos textiles e

incluso para realizar obras de arte.

Bonilla (2009); Instituto Nacional de Salud (2013); Informaron que en la

especie Bixa orellana L. se han identificado treintaicinco componentes, de los que

se encuentran en mayor proporción: acetato de farnesilo (11,6%), acetato de

5
occidentalol (9,7%), espatulenol (9,6%), ishwarane (9,1%), bixina y norbixina. Es

así, que la cantidad total de bixina y norbixina varían significativamente, donde

los valores comunes son de 2 – 5%, lo cual el contenido podría alcanzar sobre los

7% del peso seco de las semillas. Sin embargo, el de Centro Nacional de

Tecnología Agropecuaria y Forestal (2010), se presenta como isómero

geométrico del tipo cis, pero que puede convertirse a su forma trans, más estable.

Además, es insoluble en agua y soluble en cloroformo, aceites vegetales, acetato

de etilo y propilenglicol.

1.2. BASES TEÓRICAS

1.2.1. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
1.2.1.1. Planta

Son de rápido desarrollo, miden de 3 ó 10 metros de altura, en su hábitat natural y

en plantaciones comerciales. El tallo puede medir 30 centímetros de diámetro.

Posee una copa densa, en forma globosa. Follaje extendido de más de 10 metros

de diámetro en arboles dejados a libre crecimiento (Bonilla, 2009).

Figura 1: Planta de Bixa orellana L. (Achiote)

Fuente: Elaboración propia

6
 1.2.1.2. Hojas

Son simples, cordiformes o acorazonados, tienen un ápice acuminado y un borde

cortado; son de color verde oscuro, y varían en su tamaño del tipo de achiote que

se cultive. Las hojas tiernas son de color cobrizo en el haz (cara superior) y

cuando maduran el envés (cara inferior) es de color plateado y se vuelven

ásperas (Bonilla, 2009).

Figura 2: Hojas frescas del achiote

Fuente: Elaboración Propia

Las hojas de Bixa orellana L. contienen bixaganeno, ishwarano (aceite esencial)

entre otros mono y sesquiterpenos; flavonoides como 7 - bisulfato de apigenina, 7

- bisulfato de luteolina, 8 - bisulfato de hipolaetina, glucósido de apigenina,

bisulfato de apigenina, hipoaletina, cosmosiina; flavonas, antocianidinas y

sesquiterpenlactonas; carotenoides como bixina, norbixina, orelina, β-caroteno,

criptoxantina, metilbixina, zeaxantina y luteína; ácido tomentósico; vitaminas;

proteínas; azúcares; celulosa; grasas; calcio; fierro; diterpenos como

farnesilacetona, geraniol, geranil formato, ácido gálico (benzenoide) y ácido

alfitólico Bonilla, J (2009) y Pérez et al (2003).

7
 1.2.1.3. Flores

Flores compuestas, de sexualidad hermafroditas, que poseen cáliz de cinco

pétalos libres, de prefloración imbricada y cinco sépalos. Estambres indefinidos,

libres en la base; filamentos filiformes, de color blanco, amarillo y violeta.

Dependiendo de la color de la flor las capsulas son verdes, rojizas o amarillas.

Flores blancas, capsulas verdes y flores rosadas, capsulas rojizas (Bonilla,

2009).

a) Flor Blanca b) Flor Rosado Suave c)Flor Rosada Fuerte

Figura 3: Coloración de flores del achiote
Fuente: Elaboración Propia

1.2.1.4. Floración

El tiempo de floración dura entre 3 a 4 meses, florece en la estación húmeda. En

Centro américa hay plantas de achiote que inicia su floración en los meses de

julio y septiembre. Su máxima floración es en agosto (Bonilla, 2009).

1.2.1.5. Polinización

Los principales insectos polinizadores en las poblaciones naturales son las

abejas, hormigas y las mariposas. La apertura de las flores se inicia desde las

4.00 a.m. y 5.00 a.m. y el grano de polen permanece viable durante 10 a 11

horas. En el achiote la polinización es Entomófila (Bonilla, 2009).

8
 1.2.1.6. Fruto o Capsula

Tienen diferentes tipos de formas pueden ser redondas, acorazonadas,

lancetadas y oblongas. Están cubiertos por pubescencias, que pueden ser largos,

medianos, cortos, y en otros que no muestran. Son verdes, rojas ocres y

amarillas. Algunas variedades poseen dehiscencia y otras no. Esta puede ser

completa e incompleta. La dehiscencia es una condición que puede manejarse

haciendo muestreos para efectuar la cosecha en el momento oportuno y que es

cuando el fruto ya no cede a la presión de los dedos (Bonilla, 2009). En su

interior se encuentran las semillas grandes cubiertas de pelo algodonoso y arilo

de variados colores (Aguirre, Merino, & Gutierrez, 2006).

La capsula está compuesta de 2 lóbulos, aunque debido a cruzamientos naturales

hay frutos o capsulas de tres segmentos conteniendo mayor número de semillas.

El fruto contiene semillas, entre 20 y 55, la cual parece estar ligada a la

polinización. El fruto en el exterior posee unas protuberancias de forma triangular

y en el interior una placenta donde se aloja la semilla. La capsula aún no

madurado la placenta es de color amarillo verdoso, cuando alcanza la madurez y

se seca el color cambia a café claro/oscuro con una mancha de forma triangular

en la parte central (Bonilla, 2009).

9
a) Lancetada b) Oblonga c) Acorazonada
Figura 4: Formas de Capsulas del achiote
Fuente: Elaboración Propia

1.2.1.7. Semilla

Llegan a medir de 3.5 a 5 milímetros de longitud, tiene una forma piramidal se

encuentra dentro de una placenta por la parte más puntiaguda, siendo sostenida

por un pedúnculo. En la parte gruesa tienen manchas circulares, color negro

(Bonilla, 2009).

Figura 5: Semillas frescas del achiote

Fuente: Elaboración Propia

La semilla está formada por una membrana porosa, la cual empiezan a formarse

los colorantes bixina, a través de esa membrana forma una capa cerosa que

10
contienen los colorantes rojos o amarillos cuando la semilla ha madurado y está

seca, es donde empieza a formarse el colorante (Bonilla, 2009).

1.2.1.8. Color

Son dos clases de colores en el grano, el de color rojo (claro) y el anaranjado

(oscuro); en el primero que van desde el más intenso hasta el más claro. En el

segundo, su producción es muy reducida, porque durante el proceso de

polinización por medio de los insectos estas cambian de coloración a rojo; éstas

son las características de los dos tipos de semillas (Roberto, 2008).

a) Color anaranjado b) Color rojo

Figura 6: Colores del grano de achiote
Fuente: Roberto (2008)

1.2.1.9. Requerimientos y Condiciones Climáticas

La temperatura ideal se encuentra dentro de los 20 y 38 ºC. La temperatura media

anual es de 27 ºC, con una estación seca de 4 a 7 meses. El tiempo de luz que

requiere consta de 10 h diarias, distribuidas sobre su copa, con el objetivo de su

mayor fructificación en su etapa de floración. Incluso puede crecer y producir bajo

condiciones de sombra moderada. La humedad relativa óptima para este cultivo

varía entre el 60 % y 80 %, si se sobrepasa, hay presencia de hongos

11
especialmente el mildiu polvoriento y la presencia excesiva de insectos dañinos

(Payes, 2017).

1.2.2. CLASIFICACIÓN

Cuadro 1: Clasificación botánica de Bixa. orellana L. (Achiote)

REINO PLANTAE (VEGETAL)

Subreino Tracheobionfa
División Magnoliofita
Supervisión Espermatofita
Subdivisión Angiosperma
Magnoliopsida
Clase (Dicotiledonea)

Subclase Dilleniidae
Orden Violales (Parietales)
Familia Bixacea
Bixa Orrellana linneo, upatensis
Genero grosscurdy, platicarpa,
urucurana, shporrocarpat, azara R y P.
Especies
Fuente: Reyes (2012)

1.2.3. VARIEDADES

El achiote es una especie alogama tiene alto porcentaje de polinización cruzada

que se propaga por semilla y en la descendencia se expresa en variedad de

formas, tamaño y coloración de las capsulas y plantas. El achiote es un cultivo

con una amplia variabilidad genética. Que tienen un orden del 56 % entre árboles

y el 14 % entre panículas en un mismo árbol, donde es difícil poder encontrar

plantas con características fenotípicas que definan el tipo de planta, aunque hay

caracteres que se mantienen en este cultivo. Están relacionados con el color de la

flor; la capsula depende del tipo de forma: redonda, acorazonada, lancetada,

oblonga, con setas o sin setas (Bonilla, 2009).

12
 1.2.3.1. Frutos Redondos

Son las que contienen mayor concentración de Bixina, llegando a tener entre

10.55% y 7%. Su tamaño y cantidad de pelos varía. Cuando está maduro no se

abre; la apertura de las capsulas se da, cuando los racimos se han pasado de

corte (Magfor, 1987).

1.2.3.2. Frutos Cónicos

Son las que contienen un intermedio de Bixina entre el 7% y 4%. El color y

cantidad de pelos son variables. Producen hasta dos veces al año y sus capsulas

no se abren (Magfor, 1987).

1.2.3.3. Frutos Lanceolados

Son las que tienen menor contenido de Bixina, conocido como, pico de pájaro,

tienen un excelente rendimiento. Sus capsulas no se abren cuando maduran,

tienen poco pelo o pubescencias y variables en color y tamaño (Magfor, 1987).

1.2.4. TAXONOMÍA

Los nombres comunes de esta especie son achiote o bija.

Cuadro 2: Nivel Taxonómico de Bixa. orellana L. (Achiote)

NIVEL TAXONÓMICO
DIVISIÓN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
ORDEN Malvales
FAMILIA Bixaceae
GENERO Bixa
ESPECIE Orellana
Fuente: Gonzales (1992)

13
 1.2.5. ORIGEN:

Los españoles, al descubrir el mundo se encontraron con muchas variabilidades

de plantas. Una de ellas es Bixa orellana L. (achiote), cuyo nombre se da en

honor al conquistador Francisco de Orellana quien fue el primer explorador del rio

Amazonas en 1541. El achiote fue utilizado en las civilizaciones Aztecas, Maya e

Incas, el uso más antiguo fue en los aztecas que lo utilizaban al extracto como

tinte en el cuerpo, textil, para mejorar el sabor del cacao y dar color a sus bebidas

(Pineda et al., 2015).

Bixa orellana L. denominado “achiote”, originaria de América tropical,

posiblemente del suroeste de la amazonia, tiene una vida útil de hasta 50 años,

presentando su primera cosecha dentro de 15 a 18 meses, obteniendo

rendimientos entre 800 y 960 kg/ha, aunque sus producciones llegan hasta 2.500

kg/ha en plantaciones con un buen manejo agrícola. Los principales exportadores

son Perú, México, Costa Rica, El Salvador y Brasil, siendo Perú el principal

productor con un 35% a nivel mundial, mientras que Estados Unidos es el

principal demandante de esta especie vegetal bajo la forma de polvo (Bonilla,

2009; Centro Nacional de Tecnología Agropecuaria y Forestal, 2010).

Bixa orellana L. tiene una alta demanda para la industria alimentaria mundial ya

que la bixina extraída de sus semillas aporta una de las tonalidades del color rojo

más puro y natural que existe, para la elaboración de quesos, refrescos,

condimentos y otros productos alimenticios (Food and Drugs Administration,

2001).

14
 1.2.6. DISTRIBUCIÓN Y HÁBITAT DEL ACHIOTE

- Distribución

Bixa orellana L. (achiote), es una planta que se encuentra en regiones tropicales y

sub tropicales de América del sur y América central. Principalmente se cultiva en

Perú seguido por ecuador, Colombia, México, Brasil, Cuba, República dominicana

y Jamaica. También que se encuentran en regiones de Asia y medio oriente. El

achiote en una planta selvática con flores de colores llamativos y miden

aproximadamente desde los 3 hasta los 10 metros. Estas características

dependen de cada región, clima y las condiciones del suelo (Huerta y Ostos,

2014).

Prospera en una diversidad de suelos con buen drenaje. La distribución del

achiote en el Perú está circunscrita a los departamentos de Amazonas, Cuzco,

Huánuco, Junín, Lima, Loreto, Madre de Dios, San Martín y Ucayali, desde 0-

1000 m.s.n.m. (Brack, 1997).

- Hábitat
o
Requiere un clima cálido y húmedo, con una temperatura de 20 C a 26 o C y un

lugar soleado hasta una altura de 2.000 m s.n.m., crece en todo tipo de suelos,

con preferencias por los suelos bien drenados, neutros y ligeramente alcalinos

(Lim, 2015).

El achiote si es sembrado en suelos profundos, fértiles, con buen drenaje interno

y externo, sin compactación que afecte el crecimiento, podemos asegurar buenos

rendimientos; si son sembrados en terrenos pobres, con minina fertilidad los

15
rendimientos es menor. El achiote se adapta bien a los suelos que sean

profundos, francos arenosos y de textura liviana. Los suelos óptimos son aquellos

que tienen una profundidad mayor de 1 m, lo ideal es de tres metros. El achiote

no resiste en suelos mal drenados, que posean una capa dura llamada talpetate

(Bonilla, 2009).

1.2.7. USOS

El achiote tiene una amplia variedad de usos, que pueden beneficiar de manera

directa al ser humano, ya sea en medicina, en la industria, en la agronomía,

maderables entre otros (Narciso, 2012).

- Usos en la Industria

Son principalmente utilizadas en las industrias de los derivados lácteos, cárnicos,

helados, cosméticos, condimentos, cerámica, pintura, tintes, jabones, etc. y en la

industria farmacéutica (Devia y Saldarriaga, 2003).

- Goma Alimentaria

De las ramas de Bixa orellana L. Se obtiene una goma que es similar a la goma

arábiga. Es comestible (fruta, bebida, dulces, semilla, aceite, verdura), Como

condimento y saborizantes de comidas tradicionales mexicanos por ejemplo, la

cochinita pibil y el pibil de pollo, platillos yucatecos (Zotyen, 2002).

- Cosmético

El aceite de las semillas Bixa orellana L. Es emoliente tiende a tener un alto

contenido en carotenoides que provee propiedades antioxidantes. Se usa en

16
productos como: cremas, lociones y champú, para el cuidado de la piel (Zotyen,

2002).

- Insecticida

Algunos indígenas en américa del sur usan el achiote, corteza y fruto (cascara)

agregándole grasa para frotarse la piel y para las picaduras de mosquitos. La

mancha que deja es muy intensa (Zotyen, 2002).

- Medicinal

Tiene propiedades y acciones: astringente, antiséptico, emoliente, antibacterial,

antioxidante, cicatrizante, etc. La utilización de la semilla y el fruto se consideran

un antídoto eficaz contra envenenamiento por Jatropha Curcas (dolores

abdominales, diarrea, vómitos, irritación de garganta, gastroenteritis) y

Manihotesculenta (manifestaciones disneicas y hasta la muerte del sujeto). Las

semillas trituradas ayuda a combatir el sarampión, enfermedades del riñón y es

ligero purgante. El aceite de las semillas se usa con buen éxito para combatir

contra la lepra. La pulpa es buena para tratar quemaduras y ampollas

(Compendio de Agronomía Tropical, 2014).

- Alimento para Animales

La semilla despigmentada se utiliza como remplazó de subproductos de trigo en

la alimentación de vacunos, ovinos, cerdos, aves de corral y cuyes. La semilla de

achiote tiene alto nivel de carbohidratos por lo que puede reemplazar entre el 30 y

50% del maíz utilizado en la dieta de pollos (Artieda, 2010).

17
 1.2.8. COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA SEMILLA DE ACHIOTE

Cuadro 3: Composición química del grano de achiote

COMPOSICIÓN QUÍMICA (%)

Humedad 8 – 13
Proteína 13 – 14.24
Celulosa 13.8
Fibra Cruda 18.48
Almidones 11.45
Carbohidratos totales 39.91
Ceniza 4.50 – 7.97
Energía 54 kcal
Fuente: Devia, J. & L. Saldarriaga (2003)(

1.2.8.1. Características Fisicoquímicas de la Semilla de Achiote

La semilla de está constituida por tres partes: una parte externa (resina roja que

contiene los pigmentos), una película y la parte interna que incluye el endocarpio

y una membrana (Espinosa, 1987).

La composición de estas partes es la siguiente:

 Parte interna: (10% de la semilla fresca).

 Pericarpio: 1.1% aceites esenciales, 3% sustancia cerosa con acción

paralizante sobre los parásitos de los intestinos mamíferos.

 Endocarpio: 8% a 11% aceites esenciales, 1.5% a 1.8% cenizas.

 Testa: (20% de la semilla fresca) 1% a 1.65% resinas, 0.05% aceites

esenciales.

 Parte externa: (70% en peso de la semilla fresca) 40% a 45% celulosa,

20% a 28% agua, 4.5% a 5% pigmentos.

La composición de la semilla aún sin colorante es importante porque se utiliza en

la alimentación de los animales. Tal como se muestra en el cuadro 4.

18
Cuadro 4: Composición de semilla de achiote sin colorante en base seca y en
base húmeda

Análisis Base Húmeda Base Seca

Humedad 9.30% „
Proteína 16.15% 17.80%
Ceniza 5.05% 5.56%
Grasa 3.39% 3.73%
Carbohidratos 66.11% 72.82%
Material
9.19% 10.13%
Insoluble
Calcio 0.39% 0.42%
Fosforo 0.43% 0.47%
Hierro 104.9 ppm 115.73 ppm
Potasio 1.42% 1.56%
Zinc 76.0 ppm 83.87 ppm
Magnesio 0.33% 0.36%
Fuente: CNTAF (2003)

La composición química y nutricional de la semilla de achiote es muy variada

como puede observarse en el cuadro 5.

Cuadro 5: Composición nutricional de la semilla de achiote (mg/100g)

Componentes Unidades(mg/100g)
Calcio 7
Fosforo 10
Hierro 1.4
Vitamina 45
Riboflavina 0.2
Niacina 1.46
Tiamina 0.39
Ácido Ascórbico 12.5
Fuente: Velásquez (2007)

Los pigmentos que se encuentran en la parte más externa tienen diferentes

compuestos según se muestra en la cuadro 6.

19
Cuadro 6: Composición del pigmento de la semilla de achiote (g/100g)

Componentes Unidades (g/100g)

Proteínas 12.3-13.2
Pectina 0.23
Carbohidratos 39.91-47.90
Ceniza 5.44-6.92
Taninos 0.33-0.91
Pentosanos 11.35-14.97
Carotenoides 1.21-2.30
Fuente: Velásquez (2007)

1.2.9. COLORANTE
1.2.9.1. Definición

Son sustancias de color intenso que se usan para producir un alto grado de

coloración cuando se dispersan en otros materiales o se hacen reaccionar con los

mismos por medio de un proceso que, cuando menos temporalmente, destruye la

estructura cristalina de las sustancias. Este último punto es la característica que

distingue a los colorantes de los pigmentos, que casi siempre se aplican en forma

de agregados a cristales insolubles (Payes, 2017).

1.2.9.2. Colorantes Naturales

Es aquella materia prima que tiene origen vegetal o animal. Se dividen en varios

grupos: colorantes naturales, tintes naturales y pigmentos naturales. Los

colorantes naturales son productos que se complementa a los alimentos para

brindar un color específico. Los tintes naturales se utilizan para teñir telas,

madera y cuero. Los pigmentos naturales son los compuestos de dar color visible

de una planta; son utilizados por la industria farmacéutica (Payes, 2017).

20
 1.2.9.2.1. Ventajas de los Colorantes Naturales

Presentan una alta compatibilidad con los sistemas vitales, que se diferencian con

colorantes sintéticos que se bioacumulan y pueden alterar el metabolismo. La

mayoría son biodegradables. Da origen a prácticas productivas novedosas y a

mayor sostenibilidad económica y ecológica (Payes, 2017).

1.2.9.3. Clasificación de los Colorantes Naturales

Los colorantes naturales se clasifican en:

1.2.9.3.1. Flavonoides: son colorantes amarillos y anaranjados.

Muchas especies botánicas contienen flavonoides, casi

el 50 por ciento de tintes naturales son flavonoides. Se

dividen en cuatro grupos principales: flavonol,

flavonona, calcona y antocianina. El perejil y el cártamo

contiene colorantes flavonoides.

1.2.9.3.2. Carotenoides: colorantes amarillos y anaranjados.

Se dividen en dos grupos principales caroteno y

xentofila.

1.2.9.3.3. Quinonas: colorantes púrpura, escarlata, anaranjado y

rojo siena. Se dividen en dos grupos: antraquinona y

naftoquinona. La rubbia cochinilla y la hena se

encuentran dentro de esta clasificación. Poseen buena

resistencia a la luz solar.

21
 1.2.9.3.4. Derivados del indol (indigoides): colorantes azul y

púrpura. Presentan la máxima resistencia a la luz y

capacidad para fijarse sobre cualquier tipo de soporte.

Ejemplo el añil.

1.2.9.3.5. Derivados de dihidropilano: colorantes rojo y violeta.

Ejemplo: palo de Brasil.

1.2.9.3.6. Derivados de delfinidina: colorantes azules. Ejemplo:

hierba de pollo.

1.2.9.3.7. Grupo betaleína: colorantes rojos. Se encuentran en la

remolacha roja, la pitahaya y la tuna roja.

1.2.9.3.8. Grupo xantonas: colorantes amarillos. Su estructura es

parecida a la de las quinonas. El mango contiene

pigmentos amarillos de xantonas.

1.2.9.3.9. Grupo clorofila: son colorantes que se encuentran en

plantas verdes.

1.2.9.3.10. Grupo tanino – pirogallo y catecol: colorante café

proveniente del castaño (Reyes, 2015).

1.2.9.4. Colorantes Artificiales

Los colorantes artificiales son sustancias que se obtienen a partir de compuestos

inorgánicos. Las ventajas, que tienen los colorantes sintéticos frente a los

22
naturales son: Tiene mayor intensidad de coloración que dan mayor gama de

colores, y son más estables tanto a la luz como a la temperatura (Bueno, 2000).

1.2.10. Colorante del Achiote

Hay dos productos principales que son la bixina y la norbixina, el pigmento se

encuentra en la superficie carnosa (arilo rojo-naranja) que envuelve a la semilla

del achiote, son compuestos, clasificados como carotenoides (Velásquez, 2007).

La bixina tiene una estructura química con un grupo carboxílico libre y otro

esterificado en los extremos de la molécula. Dando las características de un ácido

orgánico y los dobles enlaces conjugados forman una estructura química con una

alta resonancia dándole una estabilidad excepcional y un alto poder colorante; es

insoluble en agua, soluble en etanol y fácilmente soluble en éter, soluciones

alcalinas, cloroformo, ácido acético y en los aceites (Guzmán et al., 1992).

La bixina está bajo forma CIS, lo cual no es corriente para los carotenoides. En

cambio, la forma TRANS aparece muy fácilmente por isomerización. La norbixina

diácida, es insoluble en agua donde es transformada en sales solubles de agua

por el ataque de una base (Espinosa, 1987).

1.2.11. BIXINA
1.2.11.1. Bixina y sus características

La bixina es un pigmento carotenoide soluble en aceite, cuya fórmula es:

C25H30O4 y de color rojo, y es un colorante que se encuentra cubierta en la parte

exterior de la semilla del achiote “Bixa orellana L.” así es empleado en la industria

23
alimentaria u otros, es un isómero del tipo Cis, donde se convierte en trans,

mientras que la bixina es un colorante liposoluble y la norbixina es hidrosoluble. Y

el annatto es la denominación dada al extracto crudo. La Bixina es un colorante

natural que se extrae de las semillas del Achiote y está ubicado en el segundo

lugar, detrás del Carmín de Cochinilla, en volumen de exportaciones de

colorantes naturales y tiene una tendencia creciente. En el Perú el cultivo de

achiote tiene condiciones agrónomas y climatológicas de muy buena calidad

(Trelles, 2009).

1.2.11.2. Estructura Química

Figura 7: Estructura química de Bixina

Fuente: Silva et., (2008)

1.2.12. MÉTODOS DE EXTRACCIÓN PARA LA OBTENCIÓN DEL

COLORANTE DE LA SEMILLA DE ACHIOTE

Se basan únicamente, en la extracción de un sólido con un solvente adecuado. El

sólido es el colorante que se encuentra en la superficie de la semilla, el solvente

será en algunos casos, solamente agua, en otros podrá ser cloroformo, etc.

(Castro, 1978).

24
 1.2.12.1. Tipos de Extracción
1.2.12.1.1. Extracción con Agua

Es un método tradicional muy conocido que permite obtener el pigmento del

achiote. Las semillas deben ser lavadas con agua caliente o fría con condiciones

de agitación (Guzmán et al., 1992).

La pulpa remojada es decantada y pasa después a un evaporador con agua,

donde la pasta de achiote es recolectada (Guzmán et al., 1992).

Finalmente la pasta se seca a una temperatura estable y luego debe ser triturada,

para obtener el polvo (Guzmán et al., 1992).

1.2.12.1.2. Extracción Alcalina

Las semillas, se prepara en solución alcalina con una concentración de 0.5% a

2% (KOH o NaOH) por 12 horas. Luego se separa la solución coloreada y las

semillas que quedan se mezclan con otra parte de la solución de KOH o NaOH y

se agitan durante un tiempo experimentalmente. Luego de la agitación, se

separan las semillas nuevamente, se lavan con solución de KOH o NaOH y se

secan. A esta solución básica se le baja su pH con ácido sulfúrico o ácido

clorhídrico, después se filtra al vacío para que el proceso sea rápido y obtener

una pasta que se seca. Finalmente debe ser molido para conseguir el polvo

(Devia y Saldarriaga, 2003).

25
 1.2.12.1.3. Extracción con Solventes

Hay tipos de solventes que extraen fácilmente el extracto de la semilla del achiote.

Como: aceites vegetales, glicoles alcalinos o solventes volátiles, como: el etanol,

acetona, tricloroetileno, etc. Se ponen en contacto con la semilla para extraer el

pigmento. El solvente se recupera por destilación (Guzmán et al., 1992).

1.2.12.1.4. Extracción Enzimática

Debe tener un contacto las semillas de achiote con agua que contenga una o

más enzimas de tipo “alfa” por un tiempo y a una concentración suficiente para

extraer la totalidad del pigmento (Guzmán et al., 1992).

Las semillas se separan de la dispersión acuosa del pigmento y finalmente se

seca.

1.2.12.2. Factores que Influyen en la Extracción

Los factores para una buena extracción, esta resumido por los siguientes:

1.2.12.2.1. Tamaño del Grano

Para seleccionar las semillas para la extracción, está comprobado que tienen un

buen tamaño adecuado (Castro, 1978).

1.2.12.2.2. Solvente Adecuado

Para una buena elección del solvente, se tiene en cuenta una baja viscosidad,

para el colorante más el solvente circulen libremente por el sistema de extracción

(Castro, 1978).

26
 1.2.12.2.3. Temperatura Óptima

Para la Bixina la temperatura debe ser moderada, porque a temperaturas altas

produce una degradación que no es necesariamente lo que queremos obtener

(Castro, 1978).

1.2.13. Factores que Afectan la Extracción

Son las siguientes:

1.2.13.1. Tipo de Solvente

El solvente pertenece a un líquido que es capaz de disolver una sustancia

compatible que se halla en un sólido o líquido según sea el caso.

La extracción con solventes no destruye las sustancias, solamente las separa

concentrándolas en su seno, para su posterior refinación con otros

procedimientos y técnicas (Ullauri, 2010).

1.2.13.2. Criterio de Selección del Solvente

Son extraídas con etanol, para sus posteriores estudios y utilizaciones. Sin

embargo el agua es unos de los mejores solvente al considerar su poder de

extracción en fase solido líquido (Ullauri, 2010).

1.2.13.3. Temperatura

La temperatura cumple una función positiva en la solubilidad del solido en el

líquido, donde aumenta la velocidad de extracción. Para extracciones de solutos

orgánicos se tiene en cuidado con la influencia de la temperatura en la estructura

molecular del sólido (Ullauri, 2010).

27
 1.2.13.4. Agitación del Fluido

Aumenta la difusión de la masa en líquido, aumemtando la transferencia de masa,

la agitación de partículas evita una sedimentación y da uso del área interfacial

generando mayor efectividad (Ullauri, 2010).

1.2.13.5. Relación Solvente Sólido

El gradiente de concentración del soluto entre la fase sólida y la fase liquida varia

al agregar mayor o menor cantidad de solvente a una cantidad fija de sólido, o

viceversa. Así se establece una relación sólido solvente por unidad de masa o

por unidad de volumen. Adicionar gran cantidad de solvente (aumentar relación)

facilita en cierto grado la extracción, a la vez que aumenta su velocidad. Pero esto

implica la disolución del extracto, aumentando así la cantidad de energía

requerida en la separación del soluto (Espinosa, 1993).

1.2.14. TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN

1.2.14.1. Espectrofotometría

La espectrofotometría es una técnica analítica, que son los más usados para la

identificación de colores. La región visible del espectro se examina normalmente

como el primer paso para identificar un color desconocido. Un espectro de

absorción UV-Visible normalmente se muestra como una gráfica de absorbancia

vs. Longitud de onda (FAO/WHO, 2006).

28
Espectrofotometría de absorción: cumplen una función en medir la absorción

selectiva por moléculas o iones, de electromagnética. La espectrofotometría de

absorción abarca la siguiente longitud de onda y número de onda (FAO/WHO,

2006).

1.2.14.2. Análisis de Cromatografía Liquida de Alta Eficacia (HPLC)

Este tipo de cromatografía por medio de una columna, separa los componentes

de una mezcla basándose en los tipos de interacciones químicas entre las

sustancias analizadas y la columna de cromatografía (Pech, 2015).

1.2.14.2.1. Sistema de Bombeo

Son dos tipos de bombas mecánicas: Las bombas de tipo jeringa impulsada por

un tornillo y la bomba aspirante (Pech, 2015).

1.2.14.2.2. Tipos de Empaquetado

Son: Fase normal (se basaba en fases estacionarias muy polares y en fase móvil

se usaba un disolvente relativamente no polar) y fase inversa (la fase

estacionaria es no polar y la fase móvil es un disolvente relativamente polar)

(Pech, 2015).

29
 1.2.14.2.3. Volumen y Tiempo de Retención

El volumen de fase móvil se conoce como volumen de retención, que transporta la

banda de soluto a partir del punto de inyección a través de la columna, hasta el

detector en el punto máximo del pico del soluto (Pech, 2015).

1.2.14.2.4. Factor de Capacidad

Se define como factor de retención, es un parámetro experimental que se aplica

para describir las velocidades de migración de los solutos en columnas (Pech,

2015).

30
 1.3. DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BASICOS

Acorazonadas: De figura de corazón.

Alogama: Son aquellas especies que se producen por

polinización cruzada.

Annatto: Extracto crudo.

Antibacterial: Sirve para controlar o matar las bacterias.

Antigonorreicas: Que sirve para controlar la gonorrea.

Antioxidantes: Que evita la oxidación.

Antiséptico: Que sirve para destruir los gérmenes.

Ápice: La punta de una hoja.

Arilo (apéndices de la semilla): Cobertura carnosa de ciertas semillas. Esta

puede crearse de una estructura frutal llamada falsa

fruta producida en muy pocas especies de

Gimnospermas (Payes, 2017).

Ásperas: Es cuando esta duro y carece de suavidad.

31
Bixina: Colorante natural del achiote y es soluble en aceite o

grasas, insoluble en agua.

Cáliz (de la flor): Conjunto de sépalos de una flor.

Carotenoides: También son llamados tetraterpenoides. Son pigmentos

orgánicos que se encuentran en las plantas y otros

organismos fotosintéticos. Brindan el color amarillo,

anaranjado o rojo a algunos vegetales. (Reyes, 2015).

Cordiformes: En forma de corazón.

Dehiscencia (del fruto): Característica de que cuando están llegando a la

madurez se abren para que la semilla salga de la

cápsula o vaina para continuar con la propagación de la

especie.

Disneicas: Problemas respiratorios.

Emoliente: Dícese del medicamento que sirve para ablandar una

dureza o tumor.

Entomófila: Es la polinización por los insectos.

32
Erisipela: Inflamación microbiana de la dermis de la piel,

caracterizada por el color rojo y comúnmente

acompañada de fiebre.

Eritema: Enrojecimiento en la piel.

Estambres: Son los órganos masculinos para que desarrollen las

flores.

Extractos: Sustancia obtenida por extracción de una parte de una

materia prima, a menudo usando un solvente (Payes,

2017).

Flavonoides: Son pigmentos naturales presentes en vegetales.

Brindan color amarillo y anaranjado a muchas especies

botánicas. Se divide en cuatro grupos principales:

flavonol, flavonona, calcuna y antocianina (Reyes,

2015).

Filamentos (de la flor): Es una de las partes reproductivas masculinas de la

flor.

Filiformes: En forma de hilos.

Gastroenteritis: Es la infección del estómago a través virus.

33
Hermafroditas: Es la planta que tiene los dos géneros en la misma flor

o planta.

Hidrosoluble: Soluble en agua.

HPLC: Cromatografía de líquidos de alto rendimiento (high-

performance liquid chromatography) (Payes, 2017).

Lancetadas: Cápsulas en forma de lanza.

Liposoluble: Soluble en aceite o grasas.

Lóbulos: Gajo pequeño

Mildiu polvoriento: Es un hongo, que aparece en las hojas y tallos con un

polvo blanco.

Norbixina: Colorante natural del Achiote es soluble en aceite,

insoluble en agua (Reyes, 2015).

Oblongas: Más largo que ancho.

Panícula: Es un racimo ramificado de flores, que quiere decir las

ramas son a la vez racimos.

34
ph: Potencial hidrógeno que define si una sustancia es

ácida, neutra o alcalina.

Pedúnculo: Es aquello donde se cuelgan las flores o los conos.

Prefloración: Es una fase de transición de crecimiento a floración.

Piramidal: Es aquello que tiene forma de una pirámide.

Pubescencias (del Fruto): Es el conjunto de pelos suaves que cubren al fruto.

Sépalo (de las flores): Es cada pieza que forma el Cáliz.

Setas: Cerdas parecidas a los cepillos, en algunos vegetales.

Soluble: Término para designar al fenómeno cualitativo del

proceso de disolución como para expresar

cuantitativamente la concentración de las soluciones

(Payes, 2017).

Solvente: Sustancia que puede disolver y producir con otra una

mezcla homogénea (Payes, 2017).

35
Talpetate: Capa de suelo con estructura laminar que impide el

desarrollo de las raíces en forma vertical así como la

infiltración de agua.

Taninos: Sustancia astringente contenida en los vegetales

(maderas).

Terpenos: son hidrocarburos que se encuentran en los aceites

volátiles obtenidos de las plantas, principalmente de los

frutos cítricos.

Testa: El tegumento de la semilla; en la mayoría de las

semillas de leguminosas la testa se compone de cuatro

estratos: una cutícula, las células malpigianas, las

células osteoesclerides, las células mesófilas.

36
 2. CAPÍTULO II: HIPÓTESIS Y VARIABLES

2.1. FORMULACIÓN DE LA HIPÓTESIS

Los once (11) morfotipos de la especie Bixa orellana L. que se encuentra en el

centro Experimental de Plantas Medicinales de la Facultad de Agronomía de la

UNAP, ubicado en Zungarococha, distrito de San Juan Bautista, contienen

elevado rendimiento del colorante natural con alta presencia de Bixina.

37
 2.2. VARIABLES Y SU OPERACIONALIZACIÓN

Cuadro 7: Operación de las Variables para la Evaluación del Contenido de Bixina

Variable Definición Tipo por Indicador Escala de Categorías Valores de las Medio de
su medición Categorías Verificación
naturaleza
Independiente Son diferentes Frutos o Cualitativa Ordinal
(X): capsulas, de tipos de formas
Morfotipos de redondos, lancetadas, con Características Amarillo Verde Ficha del
Bixa orellana L.: pubescencias largas, de los frutos Verde Pintón grado de
Del 01 al 11 medianas, cortos y otras que Rojo Maduro Maduración
no la tienen. Guinda
Lila

Características Rojo
de las semillas Amarillo
Dependiente Es el colorante natural Cuantitativa Tipo de continua Bajo 3-4% Ficha de
(Y): extraído de la cubierta Extracción Medio 5-6% control
Contenido de externa de la semilla. Alto 7%
bixina:

Fuente: Elaboración Propia

38
 3. CAPÍTULO III: METODOLOGÍA

3.1. TIPO Y DISEÑO

3.1.1. Tipo de estudio: Estudio de enfoque cuantitativo, tipo no

experimental, descriptivo comparativo y de corte transversal.

Cuantitativo.- Debido a que examinaremos los datos de manera científica, o más

específicamente en forma numérica.

3.1.2. Diseño de estudio:

No Experimental – Descriptivo comparativo.- Se aplicará un diseño no

experimental descriptivo comparativo; con factores de estudio, niveles y

tratamientos para los 11 morfotipos.

Transversal.- Estudia a las diferentes muestras en un mismo tiempo.

3.2. DISEÑO MUESTRAL

Descripción Simple M1 O1

M2 O2

M3 O3
. .
Comparativo . .
. .
. .
M11 O11

O1  O2  O3  ………. O11

39
 3.3. PROCEDIMIENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
3.3.1. Selección del área o ámbito de estudio

El presente trabajo de investigación se realizó en el laboratorio del Instituto de

Medicina Tradicional (IMET) – ESSALUD, en el laboratorio de Química de

Productos Naturales – Instituto de Investigación de la amazonia peruana (IIAP) y

en Planta Piloto de la FIA-UNAP en los laboratorios de ingeniería de Alimentos,

Fisicoquímica de la ciudad de Iquitos, Provincia de Maynas, Región Loreto.

3.3.2. Materiales
3.3.2.1. Materia prima: Bixa orellana L. (Achiote)

El ámbito de estudio se ubica en el Taller de Investigación: Cultivo y Conservación

de plantas Medicinales Amazónicas - Zungarococha, Facultad de Ciencias

Agronómicas - UNAP, ubicado al margen derecho de la carretera Iquitos - Puerto

Almendra a 45 minutos de la ciudad de Iquitos. La ubicación geodésica el área

experimental es: 18M 0680866 – 9576388, siendo su altitud promedio es de 101

msnm. Los suelos se caracterizan por su textura franco arcilloso, ácidos y pobres

en nutrientes. El área seleccionada de 5000 m 2 corresponde a una plantación de

Bixa orellana L. “Achiote” establecida hace 10 años producto de la colecta de

diferentes morfotipos. Está asociada con la especie Copaifera paupera “Copaiba”.

3.3.2.2. Equipos

 Balanza Analítica: Marca: Sartorius, Modelo: Practum, Capacidad

Máxima: 120 g

 Deshumificador: Marca: Humidity central

40
 Equipo de Filtración con Bomba de Vacío:

- Bomba: Marca: mrc Chemically, Modelo: CVP-13.

- Regulador de Voltaje (Ac. AUTOMATIC VOLTAGE

REGULATOR): Modelo: NIPPON AMERICA, Año: 1928.

 Estufa: Marca: memmert. Modelo: UM - 800

 Espectrofotómetro: Modelo: Genesys 6, Marca: THERMOSpectronic,

Utilidad: Medición de intensidad de luz absorbida, Proveedor: Kessel S.A.

 Vortex: Marca: Heidolph, Type: REAX Control, No: 541 – 1100 – 00 – 0.

 HPLC: Marca: lachrom elite y está compuesto por:

- Modelo: ORGANIZADOR DE SOLVENTES FASE MOVIL: Parte:

890-0852, Unidad: 890-6160, Serie: 17E22-052. 50/60Hz, 100-240V-

400VA.

- Modelo: L-2455 DETECTOR DE ARRASTRE DIODE: Parte: 890-

0442, Unidad: 890-4900, Serie: 17E03-023, 240V-4.2ª (MAX).

- Modelo: L-2485 DETECTOR DE FLUORECENCIA UV: Parte: 890-

0472, Unidad: 890-2070, Serie: 22E78-023. 50/60Hz, 100-115/220-

240V-400V-450VA.

- Modelo: L-2130 BOMBA: Parte: 890-0852. Unidad: 890-6160,

Serie: 17E22-052. 50/60Hz, 100-240V-400V.

- Modelo: L-2350 COLUMNA: Parte: 890-0352. Unidad: 890-4020,

Serie: 1826-029.

 Selladora de Bolsa: Marca: OPALUX, Código Producto: OP-400 A 220 v/

240 V 50/60 HZ, WATTS: 600 W.

 Refrigeradora: Marca: COLDEX.

41
 3.3.2.3. Materiales del laboratorio usados:

 Termómetro

 Micropipeta

 Probeta Graduada

 Fiola o Matriz Aforado

 Embudo

 Embudo de Buchner

 Matraces de Erlenmeyer

 Vasos de Precipitado

 Morteros y Pilón

 Espátula

 Colador

 Frascos de Vidrios

 Tubos de Ensayo

 Gradilla

 Cubeta de cuarzo

 Gas Nitrógeno

 Bolsas Trilaminado

 Papel Filtro

 Papel de Aluminio

 Guantes

42
 3.3.2.4. Reactivos y Solventes usados:

 Patrón (Bixina): Nombre: Bixina >=90.0 % HPLC, Fórmula: C25H30O4.

Peso molecular: 394.50 g/mol, Temperatura de almacenamiento: -20 ºC.

Pureza: 99.1 %, Aspecto: Forma: Sólido/Color: Rojo, Punto de fusión: 190

– 198 ºC.

 Hidróxido de Potasio (KOH): Aspecto: Sólido, Color: Granulometría, Olor:

Inodoro, pH: 13,5 (sol. 0,1 M), Punto de fusión/punto de congelación: 360

ºC, Punto inicial de ebullición e intervalo de ebullición: 1.327 ºC, Densidad

relativa: (20/4) 2,04, Solubilidad: 1.120 g/l agua 20ºC.

 Ácido Sulfúrico (H2SO4): Punto de ebullición (se desconoce): 340 ºC,

Punto de fusión: 10 ºC, Densidad relativa (agua = 1): 1.8, Solubilidad en

agua: miscible, Presión de vapor kPa a 146ºC: 0.13, Densidad Relativa de

vapor (aire = 1): 3.4.

 Acetona: Punto de ebullición: 56 ºC. Punto de Fusión: -95ºC, Densidad

Relativa (agua = 1): 0.8, Solubilidad en agua: miscible, Presión de vapor

20ºC, Densidad Relativa de vapor (aire = 1): 2.0, Punto de inflamación: -

18ºC c.c, Viscosidad, mm2/s a 40 ºC: 0.34.

 Acetonitrilo: Aplicación de gradiente de acetonitrilo para Cromatografía de

Líquidos, Peso de ebullición: 81.6 ºC, Densidad: 0.786 g/cm3 (20 ºC),

Límite de explosión: 3.0 – 17 %(v), Punto de inflamabilidad: 2 ºC.

 Ácido Acético Glacial 100%: Punto de ebullición: 116 – 118 ºC ,

Densidad: 1.05 g/ cm3b20 ºC), Límite de explosión: 4 -19.9 %(V), Punto de

Inflamabilidad: 39 ºC.

43
3.3.3. EXTRACCIÓN DEL COLORANTE Bixa orellana L. (Achiote)

3.3.3.1. Proceso Experimental para la extracción del colorante de

Bixa orellana L. (Achiote).

Recepción de la
Materia prima

Selección

Obtención de la
semilla

Secado bajo Sombra

KOH 2%
Extracción 12 horas
12 horas

Filtración

H2SO4 al
Precipitación 10%

Filtración

T= 56º - 58
Secado
ºC por 6

Molido

Empaquetado

Almacenado

Figura 8: Diagrama de Flujo para la obtención del colorante a partir de las semillas
de achiotes.

44
DESCRIPCIÓN DEL PROCESO PARA LA EXTRACCIÓN DEL COLORANTE

DE Bixa orellana L. (ACHIOTE)

 Recepción de la Materia Prima:

Fueron recolectadas del centro Experimental de Plantas Medicinales de la

Facultad de Ciencias Agronomía de la UNAP, con sede en la ciudad de Iquitos en

el distrito de San Juan Bautista.

 Selección:

Se seleccionaron los achiotes en buen estado para que el proceso sea eficiente.

 Obtención de Semilla:

Las semillas del achiote fueron obtenidas al apretar manualmente al fruto.

 Secado bajo Sombra:

Las semillas fueron secadas en un Deshumificador a una temperatura entre 40 y

50 ºC para que la humedad fuera eliminada en forma de vapor y así tener un

rápido secado.

 Extracción:

La semilla seca y pesada se le adicionó una solución alcalina con KOH al 2%,

dejándole en reposo por 12 horas.

 Filtración:

Posteriormente se separaron los residuos sólidos (semillas), de la solución

coloreada, haciendo una filtración con un colador.

45
  Precipitación:

Para proceder a la precipitación del colorante se utilizó una solución de H2SO4 al

10%.

 Filtración:

Una vez precipitado se procedió a la filtración al vació a -750 mbar para obtener la

pasta conocida como colorante o Annatto.

 Secado:

La pasta es secado en una estufa a una temperaturas de 56º - 58 ºC por 6 horas.

 Molido:

La pasta seca fue molida en un mortero con pilón obteniéndose en forma de

polvo.

 Empaquetado:

El polvo fue empaquetado en bolsas trilaminados de alta densidad, las cuales

serán selladas herméticamente para evitar ganancias de humedad u otros efectos

determinantes, y así mantener la calidad para los análisis respectivos.

 Almacenado:

El producto terminado será almacenado en un ambiente fresco (18 °C a 24°C), y

oscuro para que los rayos de luz no afecten la composición química del producto.

46
 3.3.4. ANÁLISIS A REALIZAR
3.3.4.1. ANÁLISIS DE HUMEDAD DE LAS SEMILLAS FRESCAS,
SECAS Y COLORANTE-POLVO DE BIXA ORELLANA L.
(ACHIOTE)

El análisis fue realizado por el “Método A.O.A.C 950.46”. Se basa en el contenido

de agua de las muestras: semillas frescas, semillas secas y polvo -

Bixa orellana L.

Pasos a seguir:

 Se pesó por triplicado 1 g de las muestras en placas de vidrio.

 Se colocan en la estufa a una temperatura de 105 ºC por 05 horas.

 Se retira de la estufa transcurrido el tiempo y se coloca en el desecador.

 Dejar enfriar y pesar.

El porcentaje de humedad se obtiene mediante la siguiente formula:

A1 − A2
%H= X 100
A3

Dónde:

A1= Peso de la placa de vidrio más muestra

A2= Peso final de las 05 horas

A3= Peso de la muestra

47
 3.3.4.2. METODOLOGÍA ANALÍTICA (ANÁLISIS CUALITATIVO Y
CUANTITATIVO)
3.3.4.2.1. Análisis Espectrofotométrico UV-VIS

Usando una adaptación de la metodología descrita por la FAO/WHO (2006).

 Pesar 0.300 g de semillas seca y 0.030 g de colorante (polvo).

 Extraer el pigmento con 6 ml de acetona hasta quedar incoloras.

 Con una pipeta de 0,1 ml se absorbió 1.000 ul del pigmento diluido y se

colocó en otro vaso de precipitado.

 Dejar secar.

 Resuspender con 40 ml de acetona.

 Leer a una absorbancia de 487 nm.

 Colocarlo en el equipo para realizar la lectura respectiva.

 Calibrar el equipo del espectrofotómetro con la muestra blanca (acetona) y

luego se realizó la lectura de la muestra.

 Mediante el espectrofotómetro UV-Vis se hace un barrido de absorbancias

entre 300 nm y 700 nm.

 Con los datos de masa de extracto seco y el valor de absorbancia, la

concentración de la muestra se determinó aplicando la ecuación (1), que se

basa en la ley de Beer.

1
= % …….ec (1) (KATO et al., 1992)

Dónde:

X =% de bixina (g / 1 g de muestra).

m = masa de la muestra (g).

V = volumen inicial de extracción (ml).

Vi = volumen de dilución (ml).

48
di = volumen de alícuota para dilución; (ml).

A = absorbancia leída en la longitud de onda de 487 nm.

1%
1 = coeficiente de absorbancia (3090).

dc = trayectoria óptica de la célula (1,0 cm).

Para convertir el resultado obtenido en un porcentaje de bixina, se multiplica por

el factor 1,076.

3.3.4.2.2. Análisis de HPLC

Para el análisis de HPLC, se usó un equipo marca LaChrom Elite proveniente el

IIAP, los extracto de annatto se realizó en la columna C18 con los solventes:

acetonitrilo/ ácido acético al 0,5% (70:30 v/v), en condiciones isocráticas a una

– 1
velocidad de flujo de 1,0 ml. min . Las muestras se detectaron a 455 nm. Se

utilizó estándar de bixina para la identificación y cuantificación.

Se preparó una solución madre de bixina (1mg por 10 ml en acetonitrilo = “100

ppm”). Se utilizó 5 concentraciones para generar la calibración: 100 ppm, 50 ppm,

25 ppm, 10 ppm y 5 ppm.

Para realizar la prueba del HPLC se sigue el siguiente procedimiento:

 Pesar 1 g de semilla seca, en un tubo de ensayo (a).

 Extraer el pigmento con 6 ml de acetona y se agito con un vortex hasta

quedar incoloras.

 Con una micropipeta de 0,1 ml se absorbió 1.000 ul del pigmento diluido y

se colocó en un tubo de ensayo (b).

 Secar con gas Nitrógeno 2 a 5 min.

 Resuspender con 10 ml de acetonitrilo.

 Homogenizar la muestra en un vortex durante 2 a 5 minutos.

49
  Encender el equipo del HPLC, y programar la metodología.

 Se pinchó con una con una jeringa de 1 ml y se añadió 0.1ul de muestra en

el HPLC (marca lachrom elite), las muestras se detectaron a 455 nm., el

corrido es de 15 minutos.

3.4. PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE LOS DATOS

Los datos obtenidos fueron analizados mediante estadísticas descriptivas para el

cálculo del contenido de bixina (desviación estándar, promedio) utilizando Excel

2010 y obtener los resultados.

3.5. ASPECTOS ÉTICOS

Las muestras serán tomadas de 11 morfotipos de achiote, los que serán

sometidos a diversos muestreos de semillas para determinar el colorantes y

tratando de no alterar los procesos biológicos normales y las demás insumos,

serán tomadas solamente lo necesario, para el desarrollo de la investigación.

Para los Trabajos de Laboratorio se tendrá en cuenta las Normas de Bioseguridad

establecido para los laboratorios de fotoquímica y farmacología.

50
 4. CAPÍTULO IV: RESULTADOS

4.1. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD DE LAS SEMILLAS

FRESCAS, SECAS Y COLORANTE - POLVO DE Bixa
orellana L. (ACHIOTE)

Los experimentos se realizaron por triplicado.

Cuadro 8: Humedad de Semilla Fresca

% HUMEDAD (SEMILLA FRESCA)

PROMEDIO
MORFOTIPOS 1 2 3
M1 81.14 81.13 81.62 81.30 ± 0.23
M2 76.24 76.00 76.42 76.22 ± 0.17
M3 70.41 69.95 70.26 70.21 ± 0.19
M4 76.49 76.33 76.18 76.33 ± 0.13
M5 75.70 76.45 76.44 76.20 ± 0.35
M6 63.52 59.68 61.47 61.56 ± 1.57
M7 74.72 74.95 71.97 73.88 ± 1.36
M8 54.67 55.19 54.50 54.79 ± 0.29
M9 59.19 58.30 58.32 58.60 ± 0.42
M10 62.41 64.87 62.51 63.27 ± 1.14
M11 75.05 75.68 78.88 76.54 ± 1.68
Fuente: Elaboración Propia

En el morfotipo 1 contiene mayor cantidad de humedad con 81.30% y en el

morfotipo 8 contiene menor cantidad de humedad con 54.79%. Las diferentes

muestras fueron secadas a una temperatura de 105 ºC por 5 horas en una estufa.

51
Cuadro 9: Humedad de Semilla seca

% HUMEDAD (SEMILLA SECA)

MORFOTIPOS
1 2 3 PROMEDIO
M1 11.18 11.40 11.93 11.51 ± 0.31
M2 9.65 9.88 9.78 9.77 ± 0.09
M3 8.53 8.45 7.46 8.15 ± 0.49
M4 15.28 14.87 15.02 15.06 ± 0.17
M5 17.41 12.47 12.31 14.07 ± 2.37
M6 14.90 15.21 15.19 15.10 ± 0.14
M7 10.34 10.32 10.5075 10.40 ± 0.08
M8 9.07 9.87 8.37 9.10 ± 0.61
M9 12.41 11.04 12.53 11.99 ± 0.68
M10 13.36 13.66 15.82 14.28 ± 1.09
M11 12.97 12.94 11.47 12.46 ± 0.70
Fuente: Elaboración Propia

En el morfotipo 6 contiene mayor cantidad de humedad con 15.10% y el morfotipo

3 contiene menor cantidad con 8.15%. Las diferentes muestras fueron secadas a

una temperatura de 105 ºC por 5 horas en una estufa.

Cuadro 10: Humedad de colorante (Polvo)

% HUMEDAD COLORANTE –
MORFOTIPO POLVO PROMEDIO
S
1 2 3
M1 5.59 6.05 5.16 5.60 ± 0.36
M2 5.87 5.26 5.14 5.42 ± 0.32
M3 6.24 6.7107 6.33 6.43 ± 0.20
M4 7.15 6.73 5.83 6.57 ± 0.55
M5 7.83 6.35 7.049 7.08 ± 0.60
M6 6.14 5.95 6.67 6.25 ± 0.30
M7 7.25 6.63 6.98 6.96 ± 0.25
M8 7.98 8.07 8.25 8.10 ± 0.11
M9 6.76 6.87 7.61 7.08 ± 0.38
M10 7.61 7.32 7.36 7.43 ± 0.13
M11 6.62 7.81 5.85 6.76 ± 0.80
Fuente: Elaboración Propia

52
En los morfotipo 8 contiene mayor contenido de humedad con 8.10% y el

morfotipo 2 contiene menor cantidad con 5.42%. Las diferentes muestras fueron

secadas a una temperatura de 105 ºC por 5 horas en una estufa.

4.2. ANÁLISIS DE LA BIXINA POR MÉTODO

ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VIS
4.2.1. Análisis cualitativo de la Bixina presente en la Bixa
orellana L.

Cuadro 11: Barrido de Semilla Seca

SEMILLA SECA
MORFOTIPO PICO 1 PICO 2 PICO 3
(ACHIOTE)  ABS  ABS  ABS
(nm) (A) (nm) (A) (nm) (A)
M1 432 1.689 456 1.901 386 1.509
M2 483 1.808 - - - -
M3 - - - - - -
M4 430 0.857 457 1.069 486 0.884
M5 - - - - -
M6 433 1.537 456 1.907 486 1.601
M7 - - - - - -
M8 - - - - - -
M9 436 1.435 460 1.960 490 1.373
M10 435 2.685 460 3.155 490 2.576
M11 435 2.649 460 3.057 490 2.458
Fuente: Elaboración Propia

En el cuadro 11, se muestra el barrido de la semilla seca de los once morfotipos

con su longitud de onda y sus absorbancias.

53
 Figura 9: Espectro UV-Vis del Morfotipo para bixina en acetona de Semilla
Seca. Ver en Anexo.
Fuente: Elaboración Propia

Cuadro 12: Barrido del colorante (Polvo)

COLORANTE
MORFOTIPO PICO 1 PICO 2 PICO 3
(ACHIOTE  ABS  ABS  ABS
(nm) (A) (nm) (A) (nm) (A)
M1 432 1.328 457 1.819 487 1.577
M2 426 0.697 - - - -
M3 430 0.385 457 0.484 486 0.405
M4 431 0.424 457 0.578 487 0.499
M5 - - - - - -
M6 424 0.267 - - - -
M7 - - - - - -
M8 - - - - - -
M9 434 0.648 460 0.893 488 0.775
M10 436 0.733 460 1.023 488 0.893
M11 431 0.780 457 1.072 487 0.929
Fuente: Elaboración Propia

En el cuadro 12, se muestra el barrido del extracto (polvo) de los once Morfotipos

con su longitud de onda y sus absorbancias.

54
 Figura 10: Espectro UV-Vis del Morfotipo para bixina en acetona del
Extracto (Polvo). Ver en Anexo
Fuente: Elaboración Propia

4.2.2. Análisis cuantitativo de la Bixina

Cuadro 13: Absorción de las Bixina de diferentes combinaciones

MORFOTIPOS SEMLLA SECA COLORANTE

(ACHIOTE)  ABS  ABS
(nm) (A) (nm) (A)
M1 487 1.436 487 1.552
M2 487 0.311 487 0.309
M3 487 0.257 487 0.381
M4 487 0.848 487 0.482
M5 487 0.230 487 0.094
M6 487 1.402 487 0.138
M7 487 0.441 487 0.050
M8 487 0.208 487 0.027
M9 487 1.325 487 0.746
M10 487 2.403 487 0.879
M11 487 2.408 487 0.789
Fuente: Elaboración Propia

En el cuadro 13, se observa las absorbancias de la Semilla Seca y Colorante con

una misma longitud de onda 487 nm.

55
 4.2.3. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA BIXINA POR MEDIO DE
UV-VIS

Para calcular el porcentaje de bixina se utilizó la siguiente Ecuación descripta por

(KATO et al., 1992):
1
= 1%
1

Cuadro 14: Contenido Total de Bixina (%)

Colorante
Morfotipos Semilla Seca % %
(Polvo)
1 26.5557 28.57 33.4844 36.03
2 1.9638 2.11 2.9630 3.19
3 5.1182 5.51 5.1916 5.59
4 6.8608 7.38 3.2839 3.53
5 2.7067 2.91 1.2809 1.38
6 13.9607 15.02 2.2330 2.40
7 7.1359 7.68 0.6164 0.66
8 4.8956 5.27 0.4369 0.47
9 24.5030 26.37 10.7300 11.55
10 24.8854 26.78 16.2552 17.49
11 28.3377 30.49 15.3204 16.48
Fuente: Elaboración Propia

Analizando el cuadro 14, se muestra en la Semilla Seca el Morfotipo 11, 1, 10 y 9

contiene mayor cantidad de Bixina y en el Colorante - Polvo los Morfotipo 1, 10,

11 y 9 son los que contienen mayor cantidad de Bixina en el análisis de UV-Vis.

56
 4.3. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA BIXINA POR EL
MÉTODO DEL HPLC.
Calculo del estándar con diferentes concentraciones

𝟏 𝐦𝐠 𝐦𝐠 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝐮𝐠 𝐮𝐠
= 𝟎, 𝟏 ∗ = 𝟏𝟎𝟎 /𝐩𝐩𝐦
𝟏𝟎 𝒎𝒍 𝐦𝐥 𝟏 𝐦𝐠 𝐦𝐥

Ejemplo de la segunda concentración.

V1 . C1 = V2 . C2
V1 . 100 ppm = 5 ml . 50 ppm
V1 = 5 ml . 50 = 2,5 ml = (50 ppm)
100

Nº concentraciones
1 100 ppm
2 50 ppm
3 25 ppm
4 10 ppm
5 5 ppm

En el siguiente cuadro se muestran las concentraciones usadas para la

determinar el porcentaje de Bixina.

57
Cuadro 15: Datos de la estandarización de la curva

CONCENTRACIÓN
(ug/ml) AREA
5 6880119
10 12088791
25 22308850
100 68962404
* 50 se obvio debido a la desviación

Curva Estandar Bixina

80000000
70000000 y = 641170x + 5E+06
R² = 0.9984
60000000
50000000
Area

40000000
30000000
20000000
10000000
0
0 20 40 60 80 100 120
Concentracón (ug/ml)

Figura 11: Grafica de la Curva estándar Bixina

Fuente: Elaboración Propia

En la figura 11, se observa la gráfica de la curva del estándar de Bixina, se obtuvo

datos exactos en el HPLC, mediante las diferentes concentraciones ver cuadro

16, que proporciona una buena linealidad y precisión del procedimiento. El tiempo

de retención fue de 15 minutos.

58
Cuadro 16: Datos de Cuantificación de Bixina del colorante de la semilla seca de achiote (Bixa orellana L.) por medio del HPLC
(mg/ml)

CONCENTRACION mg/ml
MORFOTIPOS PROMEDIO D.S ± %
1 2 3
1 0.2300 0.2098 0.2007 0.2135 0.0122 0.21 ± 0.01 21
2 0.1226 0.1183 0.1206 0.1205 0.0018 0.12 ± 0 12
3 0.0651 0.0743 0.1033 0.0809 0.0163 0.08 ± 0.01 8
4 0.1618 0.2365 0.1349 0.1777 0.0430 0.18 ± 0.04 18
5 0.0123 0.0144 0.0137 0.0135 0.0009 0.01 ± 0 1
6 0.1170 0.1346 0.1421 0.1313 0.0105 0.13 ± 0.01 13
7 0.0530 0.1104 0.0493 0.0709 0.0280 0.07 ± 0.02 7
8 0.0120 0.0144 0.0125 0.0130 0.0011 0.01 ± 0 1
9 0.2502 0.2343 0.3263 0.2703 0.0402 0.27 ± 0.04 27
10 0.2742 0.2948 0.2438 0.2709 0.0210 0.27 ± 0.02 27
11 0.2199 0.2199 0.2843 0.2413 0.0304 0.24 ± 0.03 24
Fuente: Elaboración Propia

En el cuadro 16 se trata de la conversión de ug/ml a mg/ml. Nos muestra que los morfotipos 10, 9, 3, 11 contienen mayor cantidad

de bixina: 27%, 27%, 24% y 21%, es decir, que estos morfotipos tienen mayor cantidad de colorante o annatto.

59
 4.4. BALANCE DE LA MATERIA PRIMA Bixa orellana L.
(ACHIOTE)
Cuadro 17: Balance de la Materia Prima (Recolección)

Peso de Peso de Extracto

semillas semillas polvo
Morfotipos Frutos fresca secas (g) Rendimiento
(Kg) (g) %

M1 500 1.090 318 84 26.30

M2 500 1.478 487 89 18.20
M3 500 1.428 381 92 24.22
M4 500 1.501 554 88 15.80
M5 500 1.763 664 64 9.58
M6 500 1.410 507 44 8.73
M7 500 1.413 466 46 9.78
M8 500 1.305 325 65 19.84
M9 500 1.250 356 152 42.70
M10 500 1.087 352 71 20.20
M11 500 0.871 302 55 18.18
Fuente: Elaboración Propia

En el cuadro 17, trata del rendimiento de 500 frutos de los once morfotipos de

achiote, nos muestra que el mayor porcentaje fue extraído del morfotipo 9 y

siendo el menor rendimiento el morfotipo 6, fue extraído con KOH al 2%.

60
 5. CAPÍTULO V: DISCUSIÓN

5.1. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD DE LAS SEMILLAS

FRESCAS, SECAS Y COLORANTE-POLVO DE Bixa
orellana L. (ACHIOTE)

- Humedad de Semilla Fresca

En el cuadro 8 obtenemos que los morfotipos de mayor cantidad de humedad

tiene el M1 y el menor el M8 varía desde el 81.30% hasta 54.79%. Los datos

reportados por Wu y Flores (1961) aseguran haber encontrado un morfotipo de

84.4% que es similar a uno de nuestros accesos encontrados. Rueda y Niño

(2004) reportan resultados de 20 - 25% de humedad que es menor a nuestros

resultados. En los morfotipos M8, M9 y M10 representan la menor cantidad de

humedad, podría ser que el tiempo de cosecha fue cuando las semillas se

estaban secando dentro del fruto, por lo tanto estos resultados se pueden deber a

ese estadio del fruto.

Los achiotes trabajados por Rueda; Niño (2004) y Wu; Flores (1961) no especifica

el tipo de morfotipo.

- Humedad de Semilla Seca

En el cuadro 9 obtenemos que los morfotipos de mayor cantidad de humedad

tiene el M6 y el menor el M3 varía desde 15.10% hasta 8.15%. Comparando con

Wu y Flores (1961) indica un resultado 5.6% que es similar al morfotipo 3 y 6, se

encuentra dentro los rangos normales de humedad obtenido en una estufa,

además tanto en la temperatura y el tiempo utilizados son los datos que se

obtiene en una estufa. En algún lugar Wu y Flores (1961) no especifica la

metodología del secado.

61
 - Humedad del colorante (Polvo)

Para obtener el colorante en polvo se trabajó con KOH al 2%. En el cuadro 10

tenemos los resultados obtenidos de humedad del colorante (polvo) teniendo los

siguientes datos: M1al 5.60%%; M2 al 5.42%; M3 al 6.43%; M4 al 6.57%; M5 al

7.08%; M6 al 6.25%; M7 al 6.96%; M8 al 8.10%; M9 al 7.08%; M10 al 7.43%; M11

al 6.76%. Comparando los resultados obtenidos de humedad del colorante (polvo)

contiene similar porcentaje de humedad obtenidos por Yalta (2016) con un valor

de 8.86%.

5.2. ANÁLISIS CUALITATIVO DE BIXINA POR UV-VIS.

En el cuadro 11 Se hizo un barrido de 300-600 nm para hallar la máxima

absorción de bixina. En los M1, M4, M6, M9, M10 y M11 indican los picos

adecuados de bixina, el M2 tiene sospechas de bixina y los que no reportaron

presencia de bixina son los M3, M5, M7, M8. Estos datos son similares según la

FAO-WHO (2006) podemos afirmar que estos datos corresponden a la

caracterización de bixina de las cuales especifica los tres picos fundamentales.

Exceptuando que no se llegó a tener datos de los morfotipos mencionados por

que contienen menor cantidad de bixina.

5.3. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE BIXINA POR UV-VIS

Para la obtención del colorante en polvo se realizó un método de extracción

alcalina, para la cuantificación se usó el método descripto por la FAO/WHO (2006)

y para calcular el contenido de bixina se aplicó la ecuación de ley de Beer,

obteniendo como resultados el contenido de Bixina del M1 al 36.03%, M2 3.19%,

M3 5.59%, M4 3.53%, M5 1.38%, M6 2.40%, M7 0.66%, M8 0.47%, M9 11.55%,

62
M10 17.49% y M11 16.48%.Taboada y Salm (1997) realizaron una extracción

alcalina (NaOH), ellos obtuvieron en la variedad: Y1 el 3.07%, Y2 1.89%, Y3

1.27%, Y4 2.46%, Y5 2.42%, P 4.01%, C1 2.51%, C2 2.20%, C3 0.84%, donde

los M1, M9, M10 Y 11, demuestran valores de contenido de bixina elevados y las

demás accesiones son similares según el autor mencionado. Reyes (2015) realizó

dos tipos de exaración alcalina y acuoso, con agua obtuvieron 22.70% y con

KOH analizaron tres tipos de concentraciones al 1%-14.86, al 2%-13.50 y al 3% -

14.45 y presenta un rendimiento extractivo de 6,23% ± 1,28% y con el agua da un

valor de 1,41% ± 1,10%. Por lo cual demostramos presencia de mayor contenido

de bixina en algunas accesiones y similares en otras accesiones realizadas.

5.4. ANÁLISIS CUANTITATIVO DE LA BIXINA POR EL

MÉTODO DEL HPLC

Se realizó la identificación y cuantificación de Bixina por Cromatografía liquida de

alta eficiencia (HPLC), se analizaron semillas secas de once Morfotipos de

achiote. Para la cuantificación de la curva patrón se usó Bixina al 90% de pureza.

Obteniendo como resultado el contenido de Bixina del M1 al 21.3%, M2 12%, M3

8%, M4 17.7%, M5 1%, M6 13%, M7 7%, M8 1%, M9 27%, M10 27% y M11 24%.

Payes (2017) realizo varios tratamientos al azar con el colorante que obtuvieron:

t1.pH1 al 17.38%, t1.pH2 20.33%, t1.pH3 26.77%, t2.pH1 35.98%, t2.pH2

35.70%, t2.pH3 39.68%, t3.pH1 42.89%, t3.pH2 40.72%, t3.ph3 40.52%. Es así,

son datos similares a nuestro trabajo de investigación realizado.

63
 5.5. COMPARACIÓN DE LAS CANTIDADES DE BIXINA
OBTENIDAS POR MÉTODO DE UV-VIS Y DE ALTA
EFICIENCIA (HPLC)

Cuadro 18: Morfotipos similares con mayor contenido de bixina (semilla seca y
polvo)

UV-Vis UV-Vis. HPLC Semilla

Morfotipos semilla seca Colorante seca
(%) (%) (%)
M1 28.57 36 21
M9 26.37 11.5 27
M10 26.78 17.4 27
M11 30.49 16.48 24
En el cuadro 18 muestra que los morfotipos 1, 9, 10, 11 en ambas metodologías

tienen alta contenido de bixina, tanto en semilla seca y en colorante.

Cuadro 19: Morfotipos que difieren con menor cantidad de bixina en semillas
secas

UV-Vis UV-Vis. HPLC semilla

Morfotipos semilla seca Colorante seca
(%) (%) (%)
M2 2.11 3.19 12
M3 5.51 5.59 8
M4 7.38 3.53 18
M5 2.91 1.38 1
M6 15.02 2.40 13
M7 7.68 0.66 7
M8 5.27 0.47 1
En el cuadro 19 muestra que los morfotipos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 en ambas

metodologías tienen menor contenido de bixina, tanto en semilla seca y en

colorante.

64
Fennema (2000) indica que los colorantes para alimentos provienen básicamente

de la síntesis química de algunos elementos y de la extracción de colorante que

se encuentra en organismos vivos como los tejidos de las plantas, insectos y en

otros organismos que contienen color, como de la semilla de achiote que contiene

uno de los colores más utilizados en el ramo de la industria alimentaria. En otros

colorantes de origen natural, el achiote ha tomado una gran importancia debido a

que no representa un riesgo de salud a diferencia de los colorantes provenientes

de síntesis química, de los cuales se ha comprobado su responsabilidad en el

desarrollo de enfermedades en los consumidores.

65
 CAPÍTULO VI: CONCLUSIONES

Los análisis nos ha permitido diferenciar cuál de los morfotipos se adapta mejor

en la obtención de bixina en las condiciones del terreno del centro experimental

de Plantas Medicinales de la Facultad de Ciencias Agronómicas de la UNAP,

ubicado en el distrito de San Juan Bautista (Zungarococha) , Iquitos-Perú, siendo

los morfotipos que contienen mayor y menor contenido de bixina.

En el análisis por UV-Vis mostraron presencia cualitativa - cuantitativa de los 11

morfotipos y los cálculos realizados para los análisis nos han permitido identificar

que los morfotipos M1, M9, M10, M11 tienen mayor cantidad de bixina y no

presentan presencia los otros.

En el análisis por alta eficiencia (HPLC) nos permitió trabajar que los morfotipos

M1, M9, M10, M11 tienen mayor presencia de bixina y los morfotipos M2, M3, M4,

M5, M6, M7, M8 obtienen menor cantidad de bixina.

Para el análisis de HPLC la extracción de colorante se realizó diferentes tiempos

de agitación en un vortex, en los morfotipos 1, 4, 5, 9, 10 y 11 se agitaron en 15

minutos, en el morfotipo 3 se agitó a un tiempo de 12 minutos y en los morfotipos

2, 6, 7 con un tiempo de 10 minutos.

Se obtuvo un producto en polvo, con un buen manejo experimental, de las cuales

los once morfotipos dan diferentes rendimientos de extractos.

66
 CAPÍTULO VII: RECOMENDACIONES

- Hacer extracciones e involucrar otras tecnologías para tener menos errores

en la cuantificación de bixina, y estudiar la nor-bixina presente en la Bixa

orellana L. (achiote).

- En nuestra región Loreto hay gran biodiversidad de fauna, se recomienda

hacer varios trabajos de investigación en temas relacionados a diferentes

tipos de extracción de colorantes.

- Fomentar el cultivo del achiote de los once morfotipos en otros terrenos

parecidos al centro experimental de Plantas Medicinales de la Facultad de

Agronomía de la UNAP, ubicado en el distrito de San Juan Bautista

(Zungarococha), Iquitos-Perú, y así tener mayor investigación de esta

materia prima.

67
 CAPÍTULO VIII: FUENTES DE INFORMACIÓN

1. AGUILAR, N. Optimización de parámetros (temperatura, concentración de

hidróxido de sodio, tiempo de agitación) para extracción de bixina del
achiote (Bixa orellana L.) por el método alcalino. Tesis. Universidad
Nacional del Altiplano.1998.

2. AGUIRRE, Z; GUTIERREZ, M.; MERINO, B. Principales familias de

árboles, arbustos y hierbas del sur del ecuador. Loja, Ec, 2006, VOL.52.

3. ALFARO AVALOS, Katterine yudit; ASPIROS FREYRE, Eva del Pilar.

Obtención de un colorante natural de la semilla Bixa orellana (achiote),
como alternativa para uso cosmético. 2015.

4. ARTIEDA, D. estudio investigado del achiote, cultivo, producción, usos y

aplicación en la gastronomía. 2010.

5. BONILLA, J. manual del cultivo del achiote. Proyecto de desarrollo de la

cadena de valor y conglomerado agrícola. 2009.

6. BRACK, A. Amazonia peruana: comunidades indígenas. Conocimientos y

tierras tituladas, 1997.

7. BUENO, J. Alimentación: Equipos y tecnología. Primera Edición. España,

2000. p p.87-92.

8. CABRERA, I; PIZZA, E., importancia económica del valor agregado de los

derivados del achiote en el mercado interno y externo como alternativa de
desarrollo comercial y agroindustrial del sector empresarial de manabí.
Tesis doctoral. periodo 2005-2008. 2010.

9. CASTRO, M. Obtención de la Bixina a partir de la cubierta de las semillas

de achiote (Bixa orellana L.), Tesis, Universidad Nacional de Ingeniería.
Lima. 1978.

10. CNTAF. Manual técnico. El cultivo del Achiote, Bixa Orellana L. El

Salvador. 2003.

11. Centro Nacional de Tecnología Agropecuaria y Forestal. Manual técnico: el

cultivo del achiote, Bixa orellana L, 2010. Disponible en:
http://www.cich.org/publicaciones/3/CNTAF-Manual-Tecnico-del-
Achiote.pdf.

12. Compendio de Agronomía Tropical. Instituto Interamericano de

Cooperación para la Agricultura San José, Costa Rica. 2014 Noviembre.
Disponible en: http://urologiaperuana.blogspot.com/2012/05/el-achiote-en-
eltratamiento de-la.html

68
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72
 ANEXOS
ANEXO 1: Variedades de Achiote Bixa orellana L. de once Morfotipos

M1 M2 M3

M4 M5 M6

M7 M8 M9

M10 M11
Fuente: Elaboración Propia

73
ANEXO 2: Semillas Secas de los once Morfotipos

M1 M2 M3

M4 M5 M6

M7 M8 M9

M10 M11

Fuente: Elaboración Propia

74
ANEXO 3: Ficha del grado de Maduración

CLASIFICACION DE Bixa orellana L. SEGÚN GRADO

Morfotipos Color de flores Frutos: Color, forma, pubescencia y otros

01 Blancas Amarillo verdoso claro débil, globosas, cónica, con abundante pubescencias
cortas verdosas.
MEDIDAS:
Ancho : 3 cm
Largo : 4.2 cm
Pubescencia: 0.3 mm

02 Blancas Verde claro débil, globosas, con abundante pubescencia

largas verduscas.
MEDIDAS:
Ancho : 3 cm
Largo : 5.8 cm
Pubescencia: 0.6 mm

75
03 Blancas Verde claro debil, de forma punta de lanza, con escasa
pubescencia.
MEDIDAS:
Ancho : 3 cm
Largo : 5.5 cm
Pubescencia: 1 cm

04 Blancas Verde claro fuerte, de forma punta de lanza, con escasa

pubescencia y pequeños restos de órganos florales de
forma curvada hacia el pedúnculo dispuestos en la base
de los frutos.
MEDIDAS:
Ancho : 3.5 cm
Largo : 6.5 cm
Pubescencia: 0.5 mm

76
05 Rosadas Verde – Rojizas débil globosas achatadas en los
costados, poca pubescencia.
MEDIDAS:
Ancho : 2.3 cm
Largo : 6.4 cm
Pubescencia: 0.9 mm

06 Rosadas Verde – Rojizas intensas, globosas achatadas en los costados, abundantes

pubescencia cortas rojizas.
MEDIDAS:
Ancho : 2.2 cm
Largo : 6 cm
Pubescencia: 0.5 mm

77
07 Rosadas
Rojas intensas, globosas, abundante pubescencia.
MEDIDAS:
Ancho : 3.5 cm
Largo : 5 cm
Pubescencia: 1 cm

08 Rosadas Rojas intensas, globosas achatadas en los costados,

abundantes pubescencias de color rojo intenso.
MEDIDAS:
Ancho : 3.5 cm
Largo : 6.5 cm
Pubescencia: 0.8 mm

09 Rosadas Rojas intensas, globosa achatada, abundante

pubescencia.
MEDIDAS:
Ancho : 5.4cm
Largo : 8.8 cm
Pubescencia: 1 cm

78
 10 violetas Rojizas intensas, curveada, poca pubescencia cortas
rojizas.
MEDIDAS:
Ancho : 3.5 cm
Largo : 5.5 cm
Pubescencia: 0.5 mm

11 violetas Lila, de forma punta de lanza, no tiene pubescencia.

MEDIDAS:
Ancho : 3 cm
Largo : 6.7 cm

Fuente: Elaboración Propia

79
ANEXO 4: a) Concentración de Semilla Seca

Peso de Peso de Vasos

Masa del
Vasos con Muestras CONCENTRACIÓN
MORFOTIPOS Colorante
Vacíos secas (mg/ml)
(g)
(g) (g)
M1 48.683 48.6844 0.0014 0.0350
M2 51.0002 51.0043 0.0041 0.1025
M3 47.7544 47.7557 0.0013 0.0325
M4 50.0877 50.0889 0.0012 0.0300
M5 51.1686 51.1708 0.0022 0.0550
M6 51.1668 51.1694 0.0026 0.0650
M7 47.9881 47.9897 0.0016 0.0400
M8 48.2096 48.2107 0.0011 0.0275
M9 48.265 48.2664 0.0014 0.0350
M10 49.1607 49.1856 0.0249 0.6225
M11 47.987 47.9892 0.0022 0.0550
Fuente: Elaboración Propia

Se calculó la Concentración de la Masa del Colorante (Semilla Seca) de los once

Morfotipos.

Para los cálculos de la concentración se utilizó la siguiente formula.

Fórmula para calcular: C=m/V

Dónde:

C: Concentración (mg/ml)

m: masa del colorante (g)

V: Volumen de dilución (ml)

80
ANEXO 5: b) Concentración de Extracto (Polvo)

Peso de Peso de Vasos

Masa del
Vasos con Muestras CONCENTRACIÓN
MORFOTIPOS Colorante
Vacíos secas (mg/ml)
(g)
(g) (g)
M1 48.6818 48.683 0.0012 0.0300
M2 48.6816 48.6843 0.0027 0.0675
M3 51.1668 51.1687 0.0019 0.0475
M4 48.2618 48.2656 0.0038 0.0950
M5 47.5491 47.551 0.0019 0.0475
M6 48.6945 48.6961 0.0016 0.0400
M7 48.6823 48.6844 0.0021 0.0525
M8 50.0872 50.0888 0.0016 0.0400
M9 50.9996 51.0014 0.0018 0.0450
M10 45.7641 45.7655 0.0014 0.0350
M11 48.6832 48.6842 0.001 0.0250
Fuente: Elaboración Propia

Se calculó la Concentración de la Masa del Colorante (Polvo) de los once

Morfotipos.

81
ANEXO 6: Espectro de Análisis Cualitativos de Semillas secas de once
Morfotipos en UV-Vis.

a) Espectro UV-Vis del Morfotipo 01 b) Espectro UV-Vis del Morfotipo 02

c) Espectro UV-Vis del Morfotipo 03 d) Espectro UV-Vis del Morfotipo 04

82
e) Espectro UV-Vis del Morfotipo 05 f) Espectro UV-Vis del Morfotipo 06

g) Espectro UV-Vis del Morfotipo 07 h) Espectro UV-Vis del Morfotipo 08

83
i) Espectro UV-Vis del Morfotipo 09 j) Espectro UV-Vis del Morfotipo 10

k) Espectro UV-Vis del Morfotipo 11

84
ANEXO 7: Espectro de Análisis Cualitativos de Extracto – Polvo de once
Morfotipos en UV-Vis.
a) Espectro UV-Vis del Morfotipo 01 b) Espectro UV-Vis del Morfotipo 02

c) Espectro UV-Vis del Morfotipo 03 d) Espectro UV-Vis del Morfotipo 04

85
e) Espectro UV-Vis del Morfotipo 05 f) Espectro UV-Vis del Morfotipo 06

g) Espectro UV-Vis del Morfotipo 07 h) Espectro UV-Vis del Morfotipo 08

86
i) Espectro UV-Vis del Morfotipo 09 j) Espectro UV-Vis del Morfotipo 10

k) Espectro UV-Vis del Morfotipo 11

87
ANEXO 8: Concentración del Colorante con Acetona y Acetonitrilo para HPLC

CONCENTRACIÓN
MORFOTIPOS PROMEDIO D.S ±
1 2 3
1 2.09 2.00 2.73 1.9550 0.6191 1.96 ± 0.62
2 2.18 2.08 2.10 2.0900 0.0640 2.09 ± 0.06
3 1.17 1.79 1.37 1.8325 0.7102 1.83 ± 0.71
4 0.85 1.2 0.73 1.6950 1.3419 1.70 ± 1.34
5 1.14 1.17 1.08 2.0975 1.6761 2.10 ± 1.68
6 1.63 1.82 1.78 2.8075 1.8446 2.81 ± 1.84
7 1.27 1.3 1.37 2.7350 2.4627 2.74 ± 2.46
8 1.42 1.63 1.61 3.1650 2.7927 3.17 ± 2.79
9 1.5 1.12 3.06 3.6700 3.1620 3.67 ± 3.16
10 1.34 1.28 1.65 3.5675 3.7165 3.57 ± 3.72
11 1.57 1.51 1.85 3.9825 4.0536 3.98 ± 4.05
Fuente: Elaboración Propia

88
ANEXO 9: Datos del cromatograma

TIEMPO DE TIEMPO TIEMPO

MORFOTIPOS REPETICIÓN AREA
RETENCIÓN INICIO FINAL
1 10,660 152785410 9,83 11,99
1 2 10,547 139821774 9,73 11,73
3 10,5 133999249 9,63 11,76
1 10,473 83793895 9,79 11,41
2 2 10.453 81027608 9,77 11,36
3 10,420 82520718 9,74 11,26
1 10,5 46914471 9,75 11,29
3 2 10,48 52778036 9,74 11,31
3 10,48 71393496 9,74 11,48
1 10,333 108991592 9,54 11,59
4 2 10,473 156953790 9,69 12,01
3 10,467 91722464 9,67 11,97
1 10,467 12982326 9,86 11,27
5 2 10,453 14334511 9,84 11,31
3 10,473 13882340 9,86 11,57
1 10,473 80226912 9,76 11,51
6 2 10,473 91550979 9,76 11,51
3 10,447 96347383 9,76 11,48
1 10,447 39106288 9,76 11,47
7 2 10,46 76012362 9,76 11,54
3 10,4 36767666 9,71 11,42
1 10,447 12779715 9,87 11,13
8 2 10,433 14360284 9,81 11,24
3 10,413 13110782 9,81 11,18
1 10,4 165739045 9,59 11,99
9 2 10,4 155564675 9,59 11,93
3 10,47 214651931 9,61 12,31
1 10,473 181172064 9,66 11,98
10 2 10,46 194409991 9,68 12,11
3 10,467 161622906 9,67 11,98
1 10,46 165413867 9,65 13,09
11 2 10,447 146274483 9,62 13,56
3 10,413 187634779 9,59 13,02
Fuente: Elaboración Propia

89
ANEXO 10: Datos de Cuantificación de Bixina del extracto colorante seco de la semilla de achiote (Bixa orellana L.) por
medio del HPLC (ug/ml)

AREA CONCENTRACIÓN ug/ml

MORFOTIPOS PROMEDIO
1 2 3 1 2 3
1 152785410 139821774 133999249 229.9978 209.8112 200.7445 213.5178
2 83793895 81027608 82520718 122.5660 118.2584 120.5834 120.4692
3 46914471 52778036 71393496 65.1382 74.26883 103.2564 80.8878
4 108991592 156953790 91722464 161.8032 236.4887 134.9121 177.7347
5 12982326 14334511 13882340 12.2999 14.4055 13.7014 13.4690
6 80226912 91550979 96347383 117.0115 134.6451 142.1139 131.2569
7 39106288 76012362 36767666 52.9795 110.4487 49.3379 70.9221
8 12779715 14360284 13110782 11.9844 14.4457 12.5000 12.9767
9 165739045 155564675 214651931 250.1689 234.3256 326.3348 270.2764
10 181172064 194409991 161622906 274.2008 294.8146 243.7593 270.9249
11 165413867 146274483 187634779 249.6625 219.8592 284.2644 251.2620
Fuente: Elaboración Propia

90
ANEXO 11: Descripción del Proceso para la Extracción del Colorante de Bixa
orellana L. (Achiote)

 Recepción de la Materia prima:

 Selección:

 Obtención de Semilla:

Obtención de semillas Semillas frescas

Fuente: Elaboración Propia

91
 Secado bajo sombra:

Secado bajo Sombra Semillas Secas

 Extracción:

Extracción de semillas Secas

 Filtración:

Filtración o tamizado de las semillas para la obtención del extracto

Fuente: Elaboración Propia

92
 Precipitación:

Precipitación del extracto con H2SO4 al 2%

 Filtración al vacío

Filtración al vació a (-750 mbar) para obtener la pasta conocida como

colorante o (Annatto).

 Secado:

Secado de la Pasta al 56ºC - 58ºC

Fuente: Elaboración Propia

93
 Molido:

Obtención del Polvo

 Empaquetado:

Empacado del Polvo

 almacenamiento.

Almacenamiento

Fuente: Elaboración Propia

94
ANEXO 12: Certificado de Constancia del Achiote

95