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para fines NO acadmicos. La Universidad conservar en el ms amplio sentido la propiedad de la informacin contenida. Cualquier reproduccin de parte o totalidad de la
informacin, por cualquier medio, existir la obligacin de citar que su fuente es "Universidad Santo Toms" con indicacin La Universidad se reserva el derecho a cambiar estos
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SESIN 1

UNIDAD: INTRODUCCIN AL ESTUDIO DE LA HISTOLOGA.

I.- OBJETIVOS DE LA SESIN:
Al trmino de la sesin, los alumnos debern ser capaces de definir el significado de la
histologa y la importancia de su estudio, como ciencia fundamental en el mbito de la
salud. Debern tambin conocer la secuencia de pasos que permiten obtener un
preparado histolgico apto para ser estudiado en microscopa de luz.

II.- TEMAS:
Naturaleza y objeto de la Histologa y sus relaciones con otras materias.
Breve resea histrica.
Examen e interpretacin de los cortes en microscopa ptica.
Nociones bsicas de tcnicas histolgicas.
Concepto de tejido y su clasificacin morfofuncional.


III.- LECTURA PREVIA (Control Syllabus):

La histologa como disciplina morfolgica, investiga las propiedades estructurales de los
tejidos animales y vegetales y su estrecha relacin de dependencia con la funcin que
desempean.

Las clulas que constituyen los tejidos miden entre 5 y ms de 100 m de dimetro,
siendo por lo tanto visibles al ojo humano, slo mediante el empleo de un instrumento
fundamental, el microscopio.

El microscopio de luz, inventado en el siglo XVII, permiti que Hooke, un investigador
ingls, describiera en un tejido vegetal, la presencia de pequeas unidades o celdillas que
denomin clulas. Posteriormente Bichat, anatomista francs, en el siglo XVIII, realiz
una clasificacin macroscpica de los tejidos humanos, basndose en las diferentes
texturas que ellos presentaban. Ms tarde, empleando un microscopio de luz, se confirm
la presencia de diferentes tejidos en el organismo.

El nacimiento formal de la histologa como ciencia, ocurri en el siglo XIX, con la
formulacin de la Teora celular de Schwan, en la que plante que todos los seres vivos
se encuentran constituidos por clulas.

Las clulas constituyentes de los tejidos, son incoloras, resultando transparentes a la
observacin directa. Esto motivo durante el siglo XIX, el desarrollo de tcnicas
adecuadas de tincin, que confirieran un suficiente contraste a sus estructuras,
permitiendo la visualizacin de sus detalles morfolgicos y organelos presentes.

Para el estudio histolgico de un rgano o tejido, se requiere obtener trozos o muestras
pequeas de este, para su tratamiento y montaje en un portaobjetos y posterior
visualizacin en un microscopio.


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Los cortes obtenidos en una estructura, pueden ser transversales, longitudinales u
oblicuos, con relacin al eje mayor del rgano. Esta direccin de corte depender del
tejido y estructuras que se requiera observar.

Para poder estudiar las caractersticas de los distintos tejidos, es necesario someterlos a
una serie de pasos denominados tcnicas histolgicas, previo a su observacin al
microscopio.

Los procedimientos de la TCNICA HISTOLGICA se resumen en las etapas siguientes:
1.- Obtencin de una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar; existen 2 formas:
Necropsia: Examen u obtencin de tejido de un organismo muerto.
Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visin) Examen u obtencin de tejido de un
organismo vivo.
2.- FIJACIN, este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias qumicas
que tienen varias finalidades:
a. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado
in vivo.
b. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparacin de finas pelculas de
ste.
c. Destruir bacterias y grmenes que pudieran encontrarse en ellos.
d. Interrumpir los procesos celulares dinmicos que ocurren con la muerte celular.

Esto se logra al inactivar enzimas celulares, que de otra manera iniciaran la autolisis y
llevaran a la degeneracin post mortem.

La fijacin mantiene las estructuras al generar la formacin de enlaces entre las protenas
constituyentes del tejido.

Los agentes ms usados para Microscopia de Luz son el Formaldehdo al 5% y Formol
al 10%.

3.- DESHIDRATACIN, despus de que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador
y se deshidrata.

Debido a que gran parte del tejido est constituida por agua, la muestra se somete a una
serie gradual de soluciones acuosas deshidratantes, en concentracin creciente (de
menor a mayor), por ejemplo, Alcohol Etlico. Se inicia con alcohol al 70 %, continuando
luego con soluciones al 80%, 90%, 96% y 100 % para eliminar el agua. Esto permite que
el agua sea removida en forma lenta, sin romper o deformar el tejido.

4.- ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIN, luego de deshidratar el tejido, se somete a
una sustancia que es miscible, tanto con el alcohol como con el medio de inclusin a
utilizar.


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En la mayora de los casos se utiliza como medio de inclusin Parafina lquida. La
sustancia comnmente utilizada para aclarar es el Xilol. El xilol slo es soluble en alcohol
al 100%. Se llama aclaramiento ya que el tejido se torna transparente o claro, esto se
debe a que cambia su ndice de refraccin.

NOTA: El alcohol y el xilol disuelven los lpidos de la clula, por lo cual al extraerse
tambin se extraen las grasas y los lpidos constituyentes de la clula.

5.- INCLUSIN O IMPREGNACIN, a fin de que se puedan obtener cortes
suficientemente finos para ser observados al microscopio.

Los tejidos tienen que ser incluidos y envueltos por una sustancia de consistencia firme.
Las sustancias usadas para este fin en microscopa ptica son la gelatina y la parafina.

El objeto de la inclusin es:
Distinguir entre s las clulas y la matriz extracelular, superpuestas en un tejido.
Tener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y corte.
La inclusin se logra al infiltrar la parafina liquida o cualquier medio de inclusin en estado
lquido al tejido, que disuelve el medio de aclaramiento y penetra en el tejido. Por lo
general se coloca la muestra de tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida a
60-64 C, colocando la muestra en una estufa.

Debido al calor, el xilol se evapora y los espacios anteriormente ocupados por el, son
ahora ocupados por la parafina. Despus se coloca la muestra y un poco de parafina
fundida en un molde de metal de forma cuadrada o rectangular y se deja solidificar a
temperatura ambiente, formndose un bloque slido de parafina con el trozo de tejido
incluido, a este bloque se le denomina Taco.

Los medios de inclusin para Microscopia Electrnica comnmente utilizados son resinas
polimerizadas o epoxi como: Epon, Mikropa y Araldit.

6.- CORTE o SECCIN, el taco ahora se puede cortar en lminas lo suficientemente
delgadas como para permitir el paso de la luz a travs de l.

La mayor parte de los preparados para microscopia ptica tienen un grosor entre 3 a 10
micrmetros (habitualmente 5 m). Para realizar estos cortes se utiliza un aparato
llamado MICROTOMO.

Para Microscopa Electrnica se requieren cortes ms delgados (denominados ultra finos)
de aproximadamente 25 a 100 nm. de espesor y de 0.5 mm. de lado medio. Para esto se
utiliza un MICROTOMO CON HOJA DE VIDRIO O DIAMANTE. Una vez preparados, se
montan sobre rejillas de cobre con un dimetro de 3mm.


7.- DESPARAFINADO E HIDRATACIN, los cortes todava no son aptos para su
examen con el microscopio, puesto que los tejidos se hallan infiltrados en parafina.

Los cortes se colocan sobre un portaobjetos a los que se les ha agregado una pequea
cantidad de Albmina, la cual acta como adhesivo.

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La parafina se elimina en un solvente orgnico, como xilol, en el cual la parafina es
miscible, para luego rehidratar la muestra, hacindola pasar por una serie de
graduaciones decrecientes de alcohol etlico.

8.- TINCIN, los cortes todava no son aptos para su examen con el microscopio,
puesto que los tejidos son transparentes.

Una vez rehidratado, se procede a teir el tejido. Los colorantes ms utilizados son la
HEMATOXILINA y la EOSINA.

FUNDAMENTOS QUMICOS DE LA COLORACIN
La EOSINA es un colorante cido y sus propiedades tintoriales pueden ser explicadas
sobre la base de lo que se sabe de la accin de las anilinas cidas. La HEMATOXILINA
aunque no es un colorante bsico tpico, posee propiedades muy semejantes a las
anilinas bsicas.
Un colorante cido es una sal cuya base es incolora y su cido es coloreado (eosina o
eosinato de sodio). La molcula de anilina presente en este tipo de colorante, tiene una o
ms cargas negativas positivas en su porcin coloreada.
Los colorantes cidos reaccionan con los GRUPOS CATINICOS de los componentes
celulares, por ejemplo, los grupos CARBOXILO de las protenas.
Esto confiere una tincin acidfila (afn con lo cido) a estructuras como el citoplasma de
las clulas, las fibras musculares, algunos conectivos, etc. La reaccin de estos grupos
vara segn el pH.
Un colorante bsico es una sal cuya base es coloreada y el cido es incoloro
(hematoxilina, azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). En este caso, las
molculas de anilina tienen una o ms cargas positivas en su porcin coloreada.
Los colorantes bsicos reaccionan con los grupos ANINICOS de los componentes
celulares, por ejemplo los grupos fosfato de los cidos nuclicos (ADN y ARN).
Esto confiere una tincin basfila (afn con los colorantes bsicos) a estructuras como el
ncleo celular y los ribosomas presentes en el REr.
Para que la muestra pueda mantenerse de modo permanente, se coloca un cubreobjeto,
con un medio adecuado para el MONTAJE (por ejemplo una gota de Blsamo de Canad
o similar).

9.- OBSERVACIN AL MICROSCOPIO PTICO, una vez seco el preparado, este se
encuentra en condiciones de ser observado al microscopio. Es importante verificar que el
cubreobjetos este ubicado hacia arriba en la platina del equipo.

En el microscopio ptico (M.O.) consta de un sistema estativo, un sistema ptico y un
sistema de iluminacin.

El sistema estativo consiste en una columna eje, que en su extremo superior lleva un
soporte para el sistema ptico y en su extremo inferior posee una base o pie donde va
colocada la platina, las pinzas y el revolver que contiene a las lentes de objetivos.

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El sistema ptico posee 2 tipos de lentes:

1) Lente de aumento del ocular con un aumento de 10x.
2) Lente de aumento de objetivos, con aumento de 4x, 10x, 40x y 100x.

Al observar con lente objetivo 4x, la muestra estar aumentada 40 veces (10 x 4)

El sistema de iluminacin del M.O. consiste en una fuente de luz, que puede iluminar
desde arriba (luz incidente) o desde bajo la platina (luz transmitida).

El microscopio electrnico (M.E.) utiliza un haz de electrones de ubicacin superior. El
poder de resolucin, es decir la capacidad de ver separadas dos estructuras contiguas, es
mucho mayor que la resolucin del microscopio ptico.


IV.- ACTIVIDAD PREVIA COMPLEMENTARIA:
No hay por ser la primera clase.

V.- METOLOGA DE LA SESIN:
Terica: Clases expositivas con apoyo de material audiovisual.
Prctica: Empleo y manejo de microscopio ptico Tcnica histolgica.

VI.- LECTURA POST SESIN: