Prereporte 2 Bioseparaciones ITESO

INSTITUTO TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE OCCIDENTE
Pre-reporte 2: SEPARACIÓN Y RUPTURA DE BIOMASA PARA LA OBTENCIÓN DE
METABOLITOS INTRACELULARES DE INTERÉS
Bioseparaciones
Profesor: Guillermo Flores cosio
Alumno: Jesús Israel Campos Hueso ib703835 
Fecha: 15 de febrero de 2022

1. Cuestionario
Separación de biomasa
1. ¿Qué objetivo cumple la separación de biomasa celular de un medio de cultivo? Enlista y

describe el fundamento de las principales tecnologías mecánicas de separación.
La biomasa es generalmente de los principales sólidos en una fermentación u operación de un

biorreactor. Si se desea la obtención de células para la recuperación de un metabolito intracelular,
entonces el objetivo es separar las células del medio de cultivo para su posterior extracción. Si el
metabolito es extracelular, separar la biomasa para su purificación o concentración sería el objetivo
principal. (Alvin, Sokhansanj, Miu, & Cannayen, 2006)
Las principales tecnologías mecánicas de separación son: (Keller, Friedmann, & Boxman, 2001)
- Filtración: Es un proceso de separación sólido-líquido a través de un filtro (malla de tamaños

de poro reducidos) para disminuir la concentración de sólidos suspendidos en el medio.
- Centrifugación: Es un proceso que utiliza la fuerza centrífuga para separar sólido-líquido o
líquido-líquido basado en la diferencia de tamaños y densidades.
- Clarificación: Es un proceso que elimina la turbidez de un medio líquido con baja cantidad de
sólidos, obteniendo un líquido más claro.
- Membranas: Es un proceso que separa partículas de diferentes tamaños a partir de la
diferencia de concentración en un líquido.
- Purificación: Es un proceso que concentra el (los) producto(s) deseado(s) a través de
distintos equipos. Se puede purificar por nanofiltración, columnas de afinidad, separación
magnética, etc.
- Aglomeración: También llamado floculación es un proceso que las partículas se une entre sí
precipitando y removiendo por otra técnica o método. Puede ser por cambios físicos o
químicos o bien termodinámicos del medio.
- Lavado: Es un proceso donde se añade medio limpio, o agua para eliminar impurezas o bajar
la concentración del medio o bien recuperación de solutos.
2. Elabora un catálogo de por lo menos tres equipos industriales empleados en la separación

de biomasa celular (incluye el nombre, fundamento, especificaciones de interés e imagen
del equipo).
Centrífuga tubular
Es un tipo de centrifugador esbelto con una entrada de medio líquido por abajo, separación de fase
sólido-líquido por una canasta hueca en medio o bien formando una torta en las paredes del equipo.
Se hace una separación de densidades del líquido restante saliendo el líquido ligero por una salía y el
pesado por otra.
Filtración lecho empacado
Es un tipo de proceso donde se hace pasar un medio líquido por diferentes tipos de tierras con
diferentes porosidades donde los sólidos se van quedando retenidos en los diferentes surcos que se
van formando por el paso del líquido a través del sólido poroso. El flujo va de abajo hacia arriba.
Ósmosis inversa
Es un tipo de proceso de membranas donde se aplica una presión externa al fluido haciendo que
pasen exclusivamente cierto tipo de moléculas a través de difusión líquido-sólido. Disminuyendo la
concentración de contaminantes.
Extracción de metabolitos de interés
3. Indica tres ejemplos de metabolitos (proteínas recombinantes, enzimas, plásmidos, vacunas

y pigmentos) que requieren de una ruptura celular para obtención.
Dímero trehalosa sintetizado por S. cerevisiae, vitamina B12 producida por Methanosarcina sp, 6-
pentil-D pirona (aroma de coco) producida por Trichoderma harzianum
4. Elabora una tabla que contenga los siguientes encabezados: método de rompimiento
celular, técnica y principio.
Método de Técnica Principio
rompimiento celular
Químico Choque osmótico Por diferencia de concentración de sales se produce
un estado hipotónico rompimiento celular por exceso
de agua en el interior
Químico Digestión enzimática A través de la catálisis de enzimas se rompe la
membrana celular
Físico Homogenización Se hacen pasar células a alta presión a través por un
orificio muy pequeño lisándola por estrés.
Químico Disolución de lípidos Se añade tolueno (10% en base a biomasa) que es
absorbido por la membrana celular expandiéndola y
rompiendo la célula
Físico Ultra sonicación Por cavitación sónica se rompen las células
violentamente.
5. Elabora un catálogo de por lo menos tres equipos industriales empleados para la ruptura
celular (incluye el nombre, fundamento, especificaciones de interés e imagen del equipo).
Molino de perlas
Es un proceso que utiliza un método físico para lisar las células violentamente. Es un equipo esbelto
con discos que movilizan el fluido y contienen pequeñas perlas de vidrio que lisan mecánicamente
las células.
Homogenizador de alta presión
Se hace pasar el medio líquido con células a través de un orificio más pequeño que el diámetro del
microorganismo, y por muy alta presión se lisan por estrés mecánico liberando el citoplasma al
medio líquido.
Ultrasonicador
Es un equipo en donde se pasa el medio líquido a un recipiente que emite frecuencias a 20 kHz y
2000W donde se producen burbujas que implosionan (cavitación) produciendo altos flujos
rompiendo las células por estrés hídrico.
Extracción de celulasas por Pleurotus ostreatus
Fermentación sólida: En una campana de bioseguridad, los matraces con el sustrato estéril (maíz,
arroz, cáscara de frutas) se inocularon con 5% de semilla de la cepa de P. ostreatus, posteriormente
se colocó un tapón de algodón y se dejaron incubar a una temperatura ambiente (30 ˚C promedio)
por 5 y 10 días.
Extracto crudo enzimático: A los 5 y 10 d de fermentación sólida, el contenido del matraz se extrajo y
se depositó en un mortero con agua destilada en relación 1:1.5, se maceró por 20 min, se filtró a
través de gasas y se prensó manualmente para obtener el extracto crudo enzimático (ECE). El ECE se
centrifugó por 25 min a 9,710 x G y 4 °C. Al sobrenadante se le cuantificó la actividad enzimática de
celulasas y lacasas. (Santillan, 2019)
Extracción de selenometionina por Saccharomyces cerevisiae
En un matraz erlenmeyer de 250 mL se colocaron 50 mL de YEPD autoclavado, posteriormente se

adicionaron 0,011 g de levadura seca. El matraz se colocó en baño maría utilizándose dos
condiciones para la activación: 42°C durante 15 minutos como activación A (AcA) y 36 C durante 20
minutos como activación B (AcB) (ambas condiciones según indicaciones del fabricante). Después de
la activación se retiró el matraz, se mezcló el YEPD con la levadura y se colocó Componente g/L
Extracto de levadura 10,0 Glucosa 20,0 Peptona 20,0 39 en el agitador a 30°C y 200 rpm en
condiciones aeróbicas durante 24 horas.
En la cámara de bioseguridad, se adicionó 10% del inóculo (5 mL del cultivo de 24 horas de

Saccharomyces cerevisiae, con AcA a cada matraz erlenmeyer de 250 mL conteniendo 45 mL de
medio líquido YEPD autoclavado. Después de inocular los matraces, se colocaron en condiciones
aeróbicas en el agitador a 30°C y 200 rpm. Transcurridas 5 horas de crecimiento, después de la
inoculación, se agregaron volúmenes de disolución de selenito de sodio en todos los medios
experimentales, excepto en uno (control), con el propósito de obtener concentraciones de 0
(control), 2, 4, 6, 8 y 10 mg Se(IV)/L. Luego de la adición, se continuó la agitación de todos los
cultivos a 30°C y 200 rpm hasta completar 72 horas. En el caso de AcB se repitió el mismo
procedimiento mencionado hasta completar 48 horas.
Los cultivos de levadura en la fase estacionaria (72 y 48 horas) se colocaron en tubos falcón de 50 mL
de capacidad, luego se separó la biomasa de levadura del sobrenadante (medio de cultivo) mediante
centrifugación a 4°C y 4000 x g rpm durante 10 minutos. Después de la separación, la biomasa de
levadura recuperada se colocó a - 20°C y el sobrenadante a 4°C. (Best, 2019)

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- Filtración: Es un proceso de separación sólido-líquido a través de un filtro (malla de tamaños

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