Rompimiento Celular

Rompimiento celular
El rompimiento celular es una operación unitaria de gran importancia industrial. Algunos de los
productos biotecnológicos producidos a escala industrial son extra celulares y no requieren ser
extraídos de la célula. Cuando el producto de interés es intracelular, una vez realizada la cosecha de
células una operación necesaria para la liberación del producto es el rompimiento de la célula misma.
Un ejemplo de algunos de estos procesos son los mostrados a continuación
Algunos de los aspectos más fundamentales a analizar para llevar a cabo esta operación son.
 Estructura de la pared celular.

 Sistemas celulares de secreción.
 Métodos de rompimiento celular.
 Métodos de permeabilización celular.
Estructura de la pared celular.

Las paredes celulares de las bacterias son rígidas y porosas, debido a que las bacterias poseen una
elevada presión osmótica interna y frecuentemente pueden hallarse expuestas a diferentes condiciones
ambientales externas. Las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas poseen
una característica molecular común: en ambas existe un rígido esqueleto de peptidoglicano o mureína.
Sistemas Celulares de Secreción
Se llama secreción al movimiento de un soluto a través de la membrana celular hacia el exterior de la

célula. También se considera como secreción cuando, como en el caso de algunas proteínas, éstas
quedan atrapadas en el espacio periplásmico o entre la membrana y la pared celular. En la producción
de proteínas de interés comercial los mecanismos de secreción y la modificación post-traduccional que
sufren algunas de estas proteínas en su ruta de secreción, son de gran importancia en el desarrollo de
los procesos correspondientes.
Métodos de Rompimiento Celular
Una gran variedad de métodos de rompimiento celular es usada en el laboratorio, pero sólo algunos de
ellos a escala industrial. Los métodos de rompimiento celular pueden ser divididos en métodos
químicos y métodos mecánicos.
.
Métodos químicos
 Choque osmótico:
El rompimiento de células por medio de choque osmótico se fundamenta en el conocimiento del fenó-
meno de ósmosis. Cuando una membrana semipermeable separa dos soluciones de diferente concentra-
ción de soluto, se produce un movimiento neto de agua a través de la membrana hacia el compartimen-
to que contiene el soluto más concentrado. La presión osmótica es la fuerza que debe aplicarse para
contrarrestar la fuerza del flujo osmótico producido.
El rompimiento celular por choque osmótico consiste en la carga de un volumen dado de células dentro
de agua pura. La célula se expande debido a que contiene solutos que ocasionan un flujo osmótico del
agua hacia su interior. Esta expansión puede conducir a su lisis o rompimiento. La factibilidad del uso
de este método depende de la resistencia mecánica de las células de interés.
 Disolución lipídica:
La extracción por solventes ha sido usada para la disolución selectiva de ciertos componentes celula-
res. Un gran número de solventes orgánicos han sido investigados en el laboratorio para ser utilizados
con este
fin, sin embargo su uso es limitado debido a que pueden inhibir severamente las actividades biológicas.
La técnica de disolución lipídica es relativamente simple, típicamente se añade a la suspensión celular
un volumen de tolueno aproximadamente igual al 10% de la biomasa. El tolueno es absorbido dentro
de los lípidos de la pared celular, lo que produce la expansión de la pared y la ruptura de ésta. El conte-
nido celular es liberado y entonces puede ser separado el producto de interés.
 Digestión enzimática:
La digestión enzimática consiste en el empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el rompi-
miento celular. Una de las enzimas más utilizada en la digestión enzimática de bacterias es la lisozima.
Esta enzima
rompe el enlace _ 1-4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetil glucosamina de la capa de peptido-
glicano de la pared celular, provocando el rompimiento de la pared y consecuentemente la ruptura de la
célula. El alto costo de las enzimas no permite que esta técnica sea usada ampliamente en el rompi-
miento celular a nivel industrial a pesar de ser altamente selectiva.
 Solubilización de membranas por saponificación:

Este método de lisis consiste en la solubilización de la membrana celular a un pH alto con un agente
alcalino, (v.g. hidróxido de sodio, NaOH) en presencia de un detergente (v.g. dodecil sulfato de sodio,
SDS). El papel del detergente es solubilizar la membrana celular, eliminando las interacciones interfa-
ciales no covalentes entre proteínas y lípidos, lo que provoca la liberación de todos los componentes
intracelulares y además promueve la desnaturalización de proteínas y ácidos nucleicos
Metodos mecánicos.
En el rompimiento de células a gran escala se han preferido los métodos mecánicos. Las técnicas em-
pleadas son: la molienda húmeda en molinos de perlas agitados a alta velocidad (esfuerzo de corte sóli-
do), la homogeneización a alta presión (esfuerzo de corte líquido) y los microfluidizadores.
 Molino de perlas de alta velocidad:
Los molinos de perlas de alta velocidad constan fundamentalmente de un cilindro en posición horizon-
tal (o vertical) llamado cámara de molienda, un agitador que consiste de una flecha giratoria sobre la
que se monta un sistema de discos, barras o anillos que provoca el movimiento del contenido del mo-
lino, y una gran cantidad de pequeñas perlas de vidrio que son los elementos activos de molienda. Estos
molinos son utilizados a nivel industrial para la desintegración de bacterias, levaduras, algas y hongos
microscópicos
Los principales parámetros operacionales para este tipo de equipo son los siguientes:
 Homogeneizador de Alta Presión:
Los homogeneizadores de alta presión son los equipos más ampliamente utilizados para el rompimiento
celular a gran escala. El homogeneizador de más amplio uso es el Manton-Gaulin, sin embargo existen
otros tipos de homogeneizadores como el Microfluidizador. Un homogeneizador de alta presión del
tipo Manton-Gaulin consta de dos partes principales: una bomba de pistón de alta presión y una válvu-
la. El número de pistones de la bomba depende del tamaño del homogeneizador, en los equipos de la-
boratorio las bombas constan de uno o dos pistones, mientras que las de los equipos industriales tienen
de tres a cinco.
Los parámetros operacionales mas importantes para este tipo de equipo son los siguientes:
 Microfluidizador:
El microfluidizador es un homogeneizador de alta presión que tiene un mecanismo de rompimiento

celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin. Su mecanismo de rompimiento utiliza una
bomba de alta presión manejada con aire y una cámara especial de rompimiento conectada a un dispo-
sitivo de contrapresión. La suspensión celular se divide en dos corrientes haciéndola pasar a presión a
través de dos microcanales de sección transversal de 2 × 100 μm. Seguidamente las corrientes son im-
pactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared estacionaria de la cámara de rompimiento. Median-
te este mecanismo la energía de entrada se disipa casi instantáneamente produciéndose la ruptura celu-
lar.

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