Virus entomopatógenos

Hilda Gómez Ramirez

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 Generalidades
• Poseen apenas un tipo de ácido nucleico, DNA o
RNA
• Tienen composición química simple (ácido
nucleico y proteína y en el caso de los virus
provistos de membrana, carbohidratos y lípidos)
• No contienen información que generen energía.
• Tienen dimensiones submicroscópicas
• Se replican por un proceso de montaje y no de
crecimiento/división.
• Son parásitos celulares obligatorios
 Características de los virus
entomopatógenos

• Presentan una doble cadena de ADN circular-superembobinada

• Sobre el ácido nucléico existe una capa de proteína conocida

como cápsido, que tiene forma tubular; el nucleocápsido es el
conjunto formado por el ADN y el cápsido

• El virión constituye la parte infectiva del virus y está compuesto

por una envoltura que puede contener uno o más
nucleocápsidos

• Existe una matriz protéica paracristalina que cubre a uno o más

viriones, estructura a la que se conoce como cuerpo de
inclusión.
A. Partícula de un Polihedrovirus
B. Corte transversal de un polihedron
C. Diagrama de un corte tranversal de un polihedron
 VIRUS ENTOMOPATOGENOS

-Baculoviridae solo afecta artrópodos

 Insectos
 Crustáceos
 Ácaros

Afectan a insectos y vertebrados:

-Reoviridae
-Poxviridae
-Picornaviridae
-Densoviridae
-Rhabdoviridae
-Iridioviridae
 VIRUS ENTOMOPATOGENOS
MAS IMPORTANTE

BACULOVIRIDAE

POLIHEDROSIS GRANULOSIS
NO OCLUSIVO
NPV VG
 VIRUS DE INVERTEBRADOS

Presentan cuerpos de
Poliedrovirus VPN Inclusión proteicos y son
Granulovirus VG visibles al M.óptico.

POLIEDROVIRUS: Muchos viriones cubiertos de capa lipoproteica

0.5-15 micras de diámetro, presentan nucleocápsides helicoidales
en forma de bastoncitos de 30 a 35 nm de diámetro y 250 a 300 nm
de longitud .

GRANULOVIRUS: Ovales, cilíndricos, específicos para Lepidópteros,

1 viriones, 0.2 micras de diámetro.

NO OCLUSIVOS :No tienen cuerpos de inclusión, se han

encontrado en Coleópteros.
 Virus no oclusivos
• Poseen un nucleocápsido por envoltura y
no forman cuerpos de inclusión, se han
• encontrado en Coleópteros.
• Ejm. Virus no oclusivo del escarabajo del
coco Oryctes rhinoceros (L.) suprimió a la
plaga en palmas de coco por casi cuatro
años en islas del Pacífico sur pero
requiere un manejo continuo para
mantener su eficacia.
 Virus que afectan insectos
• Familia Poxviridae: Entomopoxvirinae:
Entomopoxvirus A (Coleópteros), B
(Lepidópteros y ortópteros) y C ( Dípteros)
• Familia Iridoviridae: Iridovirus y
Chloriridovirus
• Familia Polydnaviridae: Ichnovirus y
Bracovirus
• Familia Parvoviridae: Densovirinae:
Densovirus, Iteravirus, Contravirus
• Virus con dsRNA
• Familia Reoviridae: Cypovirus
(Cytoplamic Polihedrosis)
• Familia Binarviridae: Entomobirnavirus
 Familia Baculoviridae
• Es la familia de mayor interés en la
entomología aplicada, infectan a más
de 600 especies de insectos de los
órdenes Lepidoptera, Hymenoptera,
Coleoptera, Diptera, Neuroptera,
Siphonaptera, Tysanoptera y Trichoptera y
algunos crustáceos tales como cangrejos
y camarones.
• El potencial de los baculovirus para el control de plagas de
insectos fue inicialmente reconocido a comienzos de 1900.
Desde entonces, numerosos baculovirus se han usado para
control el especialmente los aislados de insectos
pertenecientes a los órdenes Lepidoptera a partir del cual se
han aislado la mayoría de baculovirus, Hymenoptera y
Coleoptera
• En 1949 se empezaron a utilizar patógenos como plaguicidas
biológicos. Desde entonces, los baculovirus se han
considerado candidatos importantes para el control, ya que en
1930 fueron observados regulando poblaciones de insectos en
Europa y Norte América
• El baculovirus más estudiado ha sido el virus de la polihedrosis
nuclear de Autographa californica (Speyer) (Lapidoptera:
Noctuidae) (AcVPN). Este fue uno de los primeros virus
descritos y el interés en su estudio empezó cuando se observó
que controlaba poblaciones de A. californica, las cuales
destruían masivamente cultivos de alfalfa
 Baculovirus
• Ha sido aislado a partir de
lepidópteros, aunque también infectan
himenópteros, dípteros, tricópteros,
tisanuros y homópteros.
• Comprende el único grupo de virus que
ha probado ser inofensivo a
microorganismos, otros invertebrados
no insectos, vertebrados y plantas.
 Nucleopoliedrovirus
• Virus de la Poliedrosis Nuclear – VPN.
Inducen la formación o aparición de
estructuras poliédricas, formadas de
poliedrina, una proteina codificada por
el virus, que contiene numerosas
partículas virales en el interior del
núcleo de las célula infectadas
 Granulovirus
• Los VG tienen sólo un nucleocápsido por
envoltura, y presentan inclusiones virales
en forma de gránulos, de 0,15 x 0,5 µm
que generalmente contienen sólo un
virión.
• Encontrado solo en lepidópteros
 Modo de acción de los VPN
• Por ingestión de alimento contaminado, vía oral.
• Partículas virales se disuelven en el pH alcalino
del intestino medio (ph 9 – 11.)
• Se une a membrana plasmática del intestino
medio y penetra al núcleo celular.
• Replicación del virus.
Ciclo de infección de un insecto por un VPN (Alves, 1990)

Tejidos infectados en orden cronológico

• Cuerpo graso
• Hipodermis
• Tráquea
• Envoltura de los músculos
• Envoltura de los nervio
• Músculos,
• Ganglios
• Células del pericardio
 Síntomas por infección por VPN
• Cesan de alimentarse.
• Movilidad del insecto se reduce.
• Algunos presentan manchas en el tegumento o zona
ventral.
• Geotropismo negativo, los insectos enfermos se
dirigen a las partes superiores de las plantas y
mueren en forma invertida con la cabeza hacia abajo
permaneciendo sujetas por las propatas a la planta.
• Presentan integumento muy frágil, fácilmente se rompe
liberando un fluido café grisáceo que contienen los
cuerpos de inclusión.
El insecto muere después de 6 a 7 días de infectado
• Estos virus son excelentes candidatos
puesto que generalmente infectan
insectos en un limitado rango de
huéspedes.
• Su replicación es limitada a invertebrados
y no hay evidencia de resistencia.
• Además, no presentan patogenicidad
cruzada sobre plantas, mamíferos, aves,
peces o insectos no blanco
PRESENCIA DE MANCHAS EN LARVA ENFERMA
Rotura de cutícula por infección de VPN

Spodoptera sp. Agraulis sp.

Larvas virósicas con apariencia de V invertida
CUERPOS DE INCLUSION DE VPN
 Síntomas de infección por VG
• Síntomas menos específicos.
• Cesan de alimentarse.
• Aparición de manchas en la parte ventral
o lateral del cuerpo de la larva
hospedante.
• Hinchazón del cuerpo.
• Mueren entre 4 – 25 días
Virus de la Granulosis en S. eridania
Virus de la granulosis en polilla de papa
• El virus que se tiene en
producción es el
Granulovirus de la “polilla
de la papa” Phthorimaea
operculella que es usado
para la papa semilla en
almacén
• Los virus son
patógenos
obligatorios por
lo que su
producción se
realiza en su
mismo
hospedero
Control de calidad

• Se realiza de
cada lote de
producción,
para mantener
la calidad del
bioinsecticida.
VIRUS ENTOMOPATOGENOS
 Formas de transmisión
• Los insectos enfermos liberan las partículas virales
a través del vómito y sus heces fecales
• Epidermis frágil y su ruptura causa la liberación del
las partículas virales, estas partículas virales se
dispersan sobre tejidos vegetales contaminándolos
y si algún otro insecto los ingiere también adquiere
la infección.
• Autodiseminación natural, los adultos desarrollados
de larvas infectadas propagan la enfermedad a su
progenie
• Autodisemiación inducida, atraer mariposas del
campo hacia trampas tratadas superficialmente con
preparados de baculovirus.
PRODUCCION DE VIRUS ENTOMOPATOGENOS

IN VIVO IN VITRO

CRIA DE INSECTOS CULTIVO DE TEJIDOS

Alto costo
Crías y dieta Instalaciones especiales
 Métodos de producción in vivo
• Los insectos infectados pueden ser
obtenidos de dos formas:
• 1°. En la recolección en el campo de insectos
contaminados con el virus. No es muy
recomendable por la gran cantidad de
agentes no deseados que pueden ingresar al
sistema de producción, reduciendo la
calidad y seguridad del insecticida viral
producido.
• Sin embargo, leste método puede proveer
cepas con nuevas propiedades en relación a
las que se dispone en el laboratorio
 Métodos de producción in vivo
• 2°. Utilización de una colonia de
insectos que se cría en laboratorio. De
esta colonia se sacan larvas que serán
inoculadas con virus. Este sistema
requiere contar con suficiente cantidad
de larvas, siendo importante contar con
una metodología confiable de
producción de larvas en cantidades
comerciales
El procedimiento para producción in vivo es
muy simple :
• Infección de larvas de una especie
susceptible
• Crecimiento de las larvas infectadas por
un tiempo que permita el desarrollo de la
infección y se replique el virus.
• Cosecha de larvas y extracción del virus
Los problemas típicos encontrados en la
producción incluyen:
• La reducción de la calidad de la producción
por sobrexposición el insecto
• Contaminación del sistema por otros
patógenos competidores que reducen el
rendimiento así como disminuyen la calidad
del producto.
• Falla para mantener un suministro de
insectos saludables
Factores que influyen en la producción:

• Calidad pobre de insectos

• Inóculo impuro
• Dosis inadecuada
• Crianza pobre
• Cosecha inadecuada
• Sanidad deficiente
 Producción in vitro
• El cultivo celular tiene como objetivo reproducir las condiciones
existentes in vivo que permitan el crecimiento de células in vitro.
• En la actualidad pueden cultivarse en el laboratorio células
procedentes de una amplia gama de tejidos y organismos
diferentes
• Recientemente se ha incrementado el establecimiento de líneas
celulares de insectos, ya que existe un amplio interés en los
sistemas de crecimiento, multiplicación y expresión del
baculovirus
• La principal razón para utilizar líneas celulares es que suelen ser
más sencillas de manejar que las células primarias, crecen
continuamente y puede obtenerse un mayor número de células.
• También, son más fáciles de obtener y existe una información
relativamente abundante sobre ellas.
• Los cultivos de células primarios son generalmente más
complejos que las líneas celulares establecidas en relación con
sus requisitos de crecimiento
 FACTORES IMPORTANTES EN LA
PRODUCCION
• Identificación de plaga
• Inoculación
• Dosis
• Incubación
• Cosecha
• Almacenamiento
• Formulación
 Adultos de Spodoptera frugiperda

Spodoptera ochrea Spodoptera eridania

Estadío larval de Spodoptera spp.
 Cultivo de Maracuya
Plaga Dione juno juno
Selección del estadío larval
Lavado y secado de hojas
Inóculo viral
Hojas tratadas con virus
Infestación
Cosecha de larvas enfermas
Dieta artificial
Siembra de dieta artificial
Desarrollo larval en dieta artificial
Conservación de larvas enfermas
en congelación 2 – 4°C
 Purificación
Muestra viral antes (A) y después de purificar (B)
Liofilización
 VPN cepario de Control Biológico
• VPN Spodoptera eridania
• VPN Spodoptera frugiperda
• VPN Spodoptera ochrea
• VPN Dione juno miraculosa
• VPN Copitarsia decolora
• VPN Euprosterna eleasa
 Utilización de virus
entomopatógenos en campo
• Introducción y colonización en áreas donde el
patógeno no ocurre naturalmente, apuntando a la
regulación permanente de la plaga.
• Introducción de un agente exótico, dando por
resultado epizootias periódicas sin control
permanente de la plaga.
• Manipulación del habitat con aplicaciones
inoculativas para aumentar su incidencia natural y
su diseminación en la población de hospederos.
• Uso de virus como un insecticida, realizando
aplicaciones frecuentes de altas concentraciones
del patógeno para controlar rápidamente la plaga,
evitando que alcance el nivel de daño económico
en un determinado cultivo
 Factores relacionados a la
eficiencia de virus en campo
• Calidad del inóculo:
• Selección de aislamientos naturales
con alta virulencia al insecto blanco,
con base a la CL50 y TL50.
• Purificación inicial del virus obtenido
• Adecuado para producción masal
• Cantidad de inóculo:
• Concentración adecuada para
proporcionar eficiencia en el control.
Es recomendable que una
concentración seleccionada en
experimentos (parcelas pequeñas), sea
confirmada en áreas grandes, en forma
de proyectos piloto, en condiciones
normales de cultivo.
 Momento de aplicación:
• Dirigida contra la fase larval de su hospedero, estos
agentes tiene poco o ningún efecto contra adultos.
• La virulencia contra los estadíos larvales de los insectos
tiende a disminuir drásticamente con el aumento de edad
del hospedero.
• Monitoreo de poblaciones de adultos para insectos de
hábito críptico (subterráneo, brocas, minadoras, etc).
Estos son altamente susceptibles a virus en condiciones
de laboratorio, pero en campo son difíciles de controlar
debido a la menor probabilidad de que ingieran una dosis
letal del patógeno.
• Las aplicaciones deben ser dirigidas contra los estadíos
iniciales de la plaga, cuando todavía no penetran en la
planta.
 Substrato:
• La eficiencia del virus en campo puede ser
afectada significativamente por el substrato en
que son depositados, variando en función de la
planta hospedera y su arquitectura, del lugar de
depósito del patógeno y de las sustancias
antimicrobianas presentes en los vegetales.
• Plantas en que la disposición de hojas, inserción
de pedúnculos y distribución de ramas, propician
menor penetración de rayos solares, resultan de
mayor persistencia de actividad viral.
• Virus depositados en hojas periféricas de la planta
son menos protegidas contra la radiación solar,
perdiendo actividad en poco tiempo
 Radiación solar:
• Es el principal factor de desactivación de los virus
entomopatógenos en campo.
• Aplicación de virus en campo al atardecer, para
propiciar una alta actividad viral en la horas
siguientes a la aplicación y mayor probabilidad
para que la plaga ingiera una dosis letal del
patógeno. A pesar de la rápida desactivación del
virus por la radiación solar, una gran mortalidad
de larvas después de la aplicación puede
proporcionar altos niveles de reposición del
patógeno en el ambiente para mantener las
poblaciones de la plaga bajo el nivel de daño
económico
 Temperatura:
• Influencia en la eficiencia del virus en el
campo:
• Aumento del tiempo letal del virus en
condiciones de Tº medias normales
• Inhibición del proceso infeccioso en Tº
elevadas o bajas con un grado de influencia
variando con el sistema virus-hospedero-
planta involucrados.
 Aplicación
• Los baculovirus necesitan ser ingeridos por el
insecto para que se produzca infección.
• Por ello, es importante realizar una aplicación bien
distribuida y con buen cubrimiento del producto
para que el insecto logre ingerir una dosis letal
máxima.
• La efectividad de los virus aislados en el laboratorio
puede fallar en el campo si no se aplica en el lugar y
tiempo correctos.
• También es necesario conocer el comportamiento
del insecto, su distribución dentro del cultivo, el
estado de desarrollo y el área de follaje ingerida por
cada estadío, para que el uso de un patógeno viral
sea preciso y efectivo
 Desarrollo de resistencia
• No existen evidencias de desarrollo de
resistencia a virus utilizados como
insecticidas microbianos en campo.
• En laboratorio hay varios trabajos que
muestran el potencial de los insectos
de desarrollar resistencia a esos
agentes. Los lepidópteros desarrollan
resistencia en 6 a 8 generaciones,
cuando son sometidos a presión de
selección por virus
 Ventajas
• Tienen un estrecho rango de huéspedes.
• No presentan patogenicidad cruzada con insectos no
blanco.
• Algunos tienen la capacidad de persistir en el ambiente.
• Se pueden modificar genéticamente, especialmente para
incrementar su eficiencia.
• Se pueden producir localmente y su producción in vivo
requiere de baja inversión económica.
• Se pueden multiplicar in vitro.
• No generan respuesta inmunogénica (alergias) a las
personas que los manipulan para su aplicación.
• Se requieren dosis bajas de aplicación.
• Pueden ser aplicados usando técnicas convencionales y
no crean problemas asociados con residuos.
• Se pueden usar como vectores de expresión de proteínas.
 Desventajas
• Alta especificidad, especialmente en cultivos sujetos a la
ocurrencia de plagas claves simultáneas
• El aumento de la velocidad de muerte establecida en los
baculovirus recombinantes limita su estabilidad para
reciclarse en el ambiente.
• En este aspecto son mejores los baculovirus de tipo
silvestre.
• Existen limitaciones asociadas con la correcta utilización
del producto como la aplicación del virus cuando las
condiciones ambientales son inadecuadas (días muy
soleados, lluvia, etc) o la dispersión del producto sobre
los folíolos es dispareja.
 Estrategias de aplicación
• Aplicación masiva:
• La aplicación masiva consiste en adicionar grandes
cantidades del virus en donde la población de insectos
plaga puede causar daño económico.
• Este método, generalmente, se usa cuando se sabe que
el virus es incapaz de establecerse en el cultivo y que
con una sola aplicación el control generado es suficiente
para disminuir drásticamente la población del organismo
plaga.
• En cultivos donde las plagas presentan varias
generaciones al año, hay que realizar aplicaciones más
frecuentes
• Aplicación inoculativa:
• Es una estrategia de aplicación utilizada cuando
se espera que el control realizado por el virus sea
duradero.
• En esta técnica, el efecto del virus no es
permanente, sino que en un tiempo prudente
requiere reintroducción del virus.
• La introducción del virus dentro de la población
plaga debe hacerse por etapas, con la intención
de que el virus se vaya multiplicando y finalmente
pueda superar la población de insectos plaga,
ejerciendo un control efectivo
 VG cepario de Control Biológico

• VG P. operculella.
• VG Erinnys ello.
• VG Spodoptera eridania.
• VG Spodoptera frugiperda.
 VPN cepario de Control Biológico
• VPN Spodoptera eridania
• VPN Spodoptera frugiperda
• VPN Spodoptera ochrea
• VPN Dione juno miraculosa
• VPN Copitarsia decolora
• VPN Euprosterna eleasa