AGUAS

CUADERNO DE LABORATORIO
RECUENTO DE BACTERIAS EN AGUA.
INTRODUCCIÓN___________________________________________________________
El análisis microbiológico de aguas, establece un examen y estudio de gran valor y vital

importancia en la prevención de epidemias resultantes de la contaminación de aguas.
Con este tipo de análisis se determinará el número de bacterias presentes en el agua.
OBJETIVO________________________________________________________________
Determinar el número de bacterias existentes en el agua de muestra.
FUNDAMENTO____________________________________________________________
Para realizar el recuento total de gérmenes es necesario realizar una serie de diluciones de la
muestra de agua exactamente medidas y en condiciones de esterilidad. A partir de aquí, se
realizarán determinaciones específicas para detectar la presencia de gérmenes.
MATERIAL _______________________________________________________________
 Tubos de ensayo estériles.

 Placas de Petri.
 Medio de cultivo: tripteina soja.
 Caldo de peptona para la dilución previa del agua problema.
 Pipetas estériles.
 Puntas de Plástico ( metidas en autoclave a una temperatura de 100 ºC ),
 Muestra de agua a estudiar.
Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos

1
DESARROLLO DE LA TÉCNICA______________________________________________
El método empleado es de diluciones decimales seriadas con posterior siembra de inóculo de

cada dilución en placas de agar tripteína soja.
 Se recoge el agua potable a analizar en un recipiente esterilizado y conservar en el

frigorífico, un máximo de 6 horas antes del análisis.
 Elaboramos el caldo de peptona según las instrucciones del fabricante.
 Elaboramos el agar tripteina de soja según las instrucciones del fabricante.
 Esterilizamos el material necesario (pipetas, tubos, medio y caldo de cultivo).
 Dispensamos 9 ml de caldo de peptona en 5 tubos de ensayo.
 Agitamos la muestra de agua, invirtiéndola varias veces en su recipiente.
 Diluciones: Se realizará una primera dilución del agua al 1:10 añadiendo con pipeta
estéril 1 ml de la muestra de agua al tubo de ensayo con 9 ml de caldo de peptona, y
posterior agitación.
 Se hará una segunda dilución del agua al 1:100 añadiendo 1 ml de la dilución anterior
con una pipeta al segundo tubo que contiene 9 ml de caldo de peptona y se vuelve a
homogeneizar.
 Se realiza una tercera dilución del agua al 1:1000 utilizando la misma técnica que en los
dos apartados anteriores.
 Se procederá de igual modo para la 4ª y 5ª dilución.
 En nuestro caso utilizamos la misma pipeta para realizar la serie de diluciones, pero
sería deseable haber empleado una distinta y estéril para cada dilución.
 Inmediatamente después de dichas diluciones se procederá a la siembra de las mismas
en placa Petri.
 La siembra se realiza pipeteando 0.5 ml de cada dilución, en una placa Petri y vertiendo
sobre la muestra en agitación, el medio de cultivo de tripteina soja. (Este deberá estar lo
suficientemente “frío” para evitar la muerte de las bacterias del agua)
 Una vez sembradas las placas se incubarán en la estufa a 37 ºC durante 24 horas.
 Transcurrido este tiempo, se procede al recuento de las colonias observadas en las
placas.

2
LECTURA DE LOS RESULTADOS____________________________________________
Únicamente se observa crecimiento en las placas correspondientes a las diluciones 10 -1 y 10-2.
El número de colonias de la placa correspondiente a la dilución 10 -2 es de 19 UFC.
Así que hallamos el número total de microorganismos, a partir de la ecuación siguiente:
N = n x 1/i x 1/ d N = 19 x 1/0.5 x 1/10 -2 N = 950 UFC/ml
Donde:
N, número total de microorganismos viables.

n, número total de colonias crecidas en la placa.
i, inoculo utilizado ( en nuestro caso 0.5 ml).
D, dilución, que en nuestro caso correspondería a 10 -2.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS _____________________________________
Lo usual es que el agua de buena calidad, para consumo humano, tenga cuentas bajas: < 100
UFC por mililitro, por lo que el agua problema, no sería apto para el consumo humano.
LIMITACIONES DEL MÉTODO _______________________________________________
 Seleccionar las placas que contengan entre 25 y 250 colonias y descartar las otras.
 Si son varias las que entran en este intervalo, contar todas y seleccionar las del grado
de dilución por triplicado que represente menor margen de error en el recuento y como
resultado, tomar el promedio de las tres placas y referirlo al volumen real de muestra
sembrado para efectos del cálculo correspondiente.
 Si no hay ninguna placa con un recuento dentro del intervalo mencionado, se hará de
aquella que tenga el valor más próximo a cualquiera de los dos extremos. En estos
casos los resultados se tomarán como aproximados.
 Si el recuento no se hace en el mismo momento de sacarlas de la estufa, se pueden
conservar las placas dentro del refrigerador entre 5 y 10 °C, durante un período máximo
de 24 horas.

3
Anexo: Secuencia del recuento de microorganismos en agua.

4

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RECUENTO DE BACTERIAS EN AGUA.

El análisis microbiológico de aguas, establece un examen y estudio de gran valor y vital

Con este tipo de análisis se determinará el número de bacterias presentes en el agua.

Determinar el número de bacterias existentes en el agua de muestra.

 Tubos de ensayo estériles.

Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos

El método empleado es de diluciones decimales seriadas con posterior siembra de inóculo de

 Se recoge el agua potable a analizar en un recipiente esterilizado y conservar en el

Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos

LECTURA DE LOS RESULTADOS____________________________________________

Únicamente se observa crecimiento en las placas correspondientes a las diluciones 10 -1 y 10-2.

El número de colonias de la placa correspondiente a la dilución 10 -2 es de 19 UFC.

Así que hallamos el número total de microorganismos, a partir de la ecuación siguiente:

N = n x 1/i x 1/ d N = 19 x 1/0.5 x 1/10 -2 N = 950 UFC/ml

N, número total de microorganismos viables.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS _____________________________________

LIMITACIONES DEL MÉTODO _______________________________________________

Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos

Anexo: Secuencia del recuento de microorganismos en agua.

Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos

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