Practica Micro Nº1

PROBLEMAS DE DILUCIN 1) 1 ml de cultivo de bacterias se diluye con 9 ml de peptona.1/10 de ml de esta dilucin se diluye en 9.9 ml de peptona.
De esta dilucin 1/10 de ml se pone en una placa con 25 ml de medio. Luego de 24 h de incubacin se contaron 219 colonias. Cuntas clulas haba en el cultivo original? 1 ml 0,1ml 0,1ml 9 ml 10-1 10-3 10-3 = 219 x 1000 = 219000 Redondeo = 220000 Reporte = 22 x 104 UFC /ml o g 2) 5 g de yogurt se mezclan con 45 ml de agua de peptona. Se hacen dos diluciones sucesivas de 1/100.1/10 de ml se pone en placa de la ltima dilucin. Esto se hace en duplicado. Luego de incubar se obtienen los siguientes resultados: 75 UFC Y 73 UFC. Calcular el nmero de UFC / ml o g de yogurt. 5g 0,01ml 0,1 ml 219 colonias
10-1
10 -4
10-6
75UFC 10-6 =75000000 10-6 = 73000000 2
73 UFC 75000000 + 73000000 = 74000000
Reporte = 74 x 106 UFC / ml o g 3) la muestra consiste de 10 ml de una dilucin de 10-1 de jugo de repollo. La asignacin es hacer contaje total de placa aerbica, tal que cada placa es una inoculada con 0.1 ml. Se hacen en placa de siguientes diluciones: 10-2 ,10-3 , 10-4 y 10-5 . Has un diagrama del procedimiento indicado las cantidades de diluyentes e inoculo a utilizar.
9 ml
1ml 9 ml
1 ml 9 ml
1 ml 9 ml
1 ml
1 m10 ml
9 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml
10-2
10-3
10-4
10-5
4) Si se obtiene 120 caloras en la placa inoculada con 0,1 ml de la dilucin 10-2, cul ser el UFC/ml en el jugo de repollo sin diluir?
10-2
120 UFC
120 UFC X X = 120 x 10 0,1
0,1 ml 10 ml = 12000
1.- Por qu se cuentan entre 30 y 300 colonias en el mtodo de cuenta total estndar y que otro mtodo de cuantificacin en placa de microorganismos existe? MTODO DE EXTENDIDO EN PLACA Es el mtodo de eleccin para anaerobios facultativos y cultivo de microaerfilos MTODO DE VERTIDO EN PLACA. Esta tcnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias. RECUENTO POR DILUCIN: Con esta tcnica se logra una estimacin del nmero de bacterias en la poblacin, que pueden multiplicarse en un medio lquido. Cualquier medio puede emplearse, siempre que fomente el crecimiento de los microorganismos por estudiar.El recuento por dilucin es ms exacto si se inoculan varios tubos de medios de cultivos en porciones de 1 ml de cada dilucin. Varias porciones de las diluciones crticas, en estas circunstancias, contienen un microorganismos viable y otras no lo contienen. Se han calculado tablas para saber en un momento dado el nmero ms probable de bacterias en la muestra
CUENTA ESTNDAR EN PLACA: Se efectan cuentas de colonias despus de haber sembrado en la placa cantidades alcuotas de la muestra. La cuenta estndar en placa no se recomienda en el caso del agua porque la que contiene pocas bacterias patgenas obviamente es ms peligrosa que las que contiene muchas saprofitas. Sin embargo, lo cual el agua es de buena calidad tenga cuentas bajas, menos de 100 por mililitro. PRUEBAS PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE BACTERIAS COLIFORME: Varios medios selectivos diferenciales facilitan mucho el proceso para examinar muestras de agua en busca de microorganismos coliformes, el examen supone tres pasos sucesivos: a. Prueba de presuncin b. Prueba de confirmacin c. Prueba de consumacin. 2.- Qu significa el trmino de unidad formadora de colonia (UFC)? UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS.Es un valor que indica el grado de contaminacinmicrobiolgica de un ambiente. Expresa el nmero relativo de microorganismos de un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de agua. UFC es el nmero mnimo de clulas separables sobre la superficie, o dentro, de un medio de agarsemi-slido que da lugar al desarrollo de una colonia visible del orden de decenas de millones de clulas descendientes. Las UFC pueden ser pares, cadena o racimos, as como clulas individuales Unidad formadora de colonias. Una dilucin hecha con bacteria y agua peptonada se coloca en el plato de agar (Cuenta de plato agar para muestras alimenticias o Agar trypticase de soja para muestras clnicas) y expandida en el plato siguiendo este patrn.
Las "Unidades Formadoras de Colonias" (ufc) se miden en mililitro).
(UFC por
03Cules son algunos posibles errores que se podran cometer en el mtodo del nmero ms probable y que podra afectar su precisin?
Pruebas Bacteriolgicas de Contaminacin: Se presupone que el objetivo de los anlisis rutinarios son para determinar la existencia de microorganismos patgenos en el agua. Sin embargo, esto no es verdad, por las siguientes razones: 1. Los organismos patgenos llegan al agua en forma espordica y no sobreviven mucho tiempo, por lo tanto, pueden no estar en una muestra que se enve al laboratorio. 2. Si se encuentran en pequeas cantidades, pueden pasar desapercibidos a los procedimientos empleados. 3. Se necesitan 24 horas o ms para obtener resultados de los exmenes y si se encuentran microorganismos patgenos, muchas personas pueden haber tomado agua antes de que se conozcan los resultados, y as haberse expuestos a la infeccin. Puestos que los exmenes de laboratorio para encontrar microorganismos patgenos en el agua tienen las desventajas enumeradas, se han desarrollado tcnicas para detectarlas en las excretas, particularmente las del grupocoliforme. Este propsito ha probado ser satisfactorio en la prctica y tiene las siguientes ventajas: 1. Los microorganismos coliformes, sobre todo E. Coli, habitan constantemente en el intestino humano en grandes cantidades. 2. Estos microorganismos viven ms tiempo en el agua que los patgenos. 3. Obviamente, una persona sana en general, no elimina microorganismos patgenos, pero puede desarrollrsele una infeccin intestinal y esos microorganismos aparecern en las materias fecales. Las especies clsicas de este grupo son Escherichiacoli y Enterobacteraerogenes. La relacin de estos microorganismos con otros del grupo entrico Salmonella, Shigella, Proteus, Pseudomonas y alcaligenes, todos los cuales son bacilos gramnegativos no esporulados. Como estas especies tienen gran semejanza en su aspecto morfolgicos y caractersticas de cultivo, es necesario recurrir a pruebas bioqumicas para
diferenciarlas. Reacciones que tengan las siguientes cuatro caractersticas son muy importantes para lograr este propsito: 1. Capacidad para producir Indol. E. Coli lo produce, y Ent. Aerogenes no. 2. Cantidad de cido producida en un medio especial de caldo glucosado, adicionado del indicador rojo de metilo. Los dos microorganismos producen cido de la glucosa. Sin embargo, E. Coli produce pHms bajo, lo que hace que vire al rojo de metilo mientras que Ent. Aerogenes no cambia el color. 3. Capacidad para producir acetilmetilcarbinol en un medio de peptona glucosado. Este compuesto qumico se detecta por medio de la reaccin de Voges Proskauer. E. Coli no produce acetilmetilcarbinol mientras que Ent. Aerogenes s lo hace. 4. Utilizacin de citrato de sodio. Ent. Aerogenes es capaz de utilizar el citrato de sodio como su nica fuente de carbono, esto es, se desarrollar en un medio de cultivo qumicamente definido en el cual el citrato de sodio es el nico compuesto de carbono. E. Coli no se desarrolla en estas circunstancias. Por conveniencia, a estas pruebas se las ha designado en forma colectiva reacciones IMViC (I = Indol, M = rojo de metilo, Vi = reaccin Voges Proskauer y C = citrato). Es necesario cuidar los siguientes detalles cuando se sometan muestras de agua a anlisis bacteriolgicos: 1. 2. 3. 4. 5. La muestra se tomar en frasco estril. La muestra ha de ser representativa de la fuente original. Se evitar la contaminacin de la muestra durante y despus de obtenerla. La muestra se analizar lo mas pronto posible. Si no es posible examinar la muestra enseguida, deber guardarse en refrigeracin entre 0 y 10 C.Los procedimientos bacteriolgicos de rutina son:
a. Cuenta en placas para determinar el nmero de bacterias. b. Pruebas que revelen la presencia de bacterias coliformes Recuento por dilucin: Se basan estos mtodos en la presuncin de que las bacterias se hallan normalmente distribuidas en un medio lquido, esto es, en las muestras repetidas del mismo tamao de un mismo producto, debe esperarse contengan el mismo nmero de grmenes como promedio; naturalmente, algunas de las muestras pueden contener algunos grmenes ms o menos. La cifra media es el nmero ms probable (Most Probable Number o MPN). Esta tcnica se usa principalmente para la estimacin de bacilos coliformes, empleando caldo de MacConkey, pero puede utilizarse casi para toda clase de grmenes en muestras lquidas si puede observarse fcilmente el crecimiento, por ejemplo, si hay turbidez y produccin de cido. Ejemplos de ellos son las levaduras y hongos en jugos y bebidas de frutas, clostridios en emulsiones de alimentos, cadenas de esporos en suspensiones de harina.

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PROBLEMAS DE DILUCIN 1) 1 ml de cultivo de bacterias se diluye con 9 ml de peptona.1/10 de ml de esta dilucin se diluye en 9.9 ml de peptona.

75UFC 10-6 =75000000 10-6 = 73000000 2

73 UFC 75000000 + 73000000 = 74000000

120 UFC X X = 120 x 10 0,1

Las "Unidades Formadoras de Colonias" (ufc) se miden en mililitro).

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