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MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS RECUENTO DE LOS MICROORGANISMOS

AEROBIOS MESOFILOS

Research · June 2022

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2 authors:

Estiven Amazará-García Yeison Quintero-Lidueñez

Universidad Francisco de Paula Santander Universidad Francisco de Paula Santander
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 Laboratorio N° 8 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
RECUENTO DE LOS MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS

Amazará, E, (711042); Tarazona, G, (711046); Quintero, Y, (711052); Vacca, Y, (711073) & Vaca, D,
(711056), Programa Zootecnia, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Francisco de Paula Santander,
Vía Acolsure, sede Algodonal, Ocaña, Colombia, 2022

RESUMEN

Para empezar, preparamos la muestra pesando 10 g de leche de cabra, luego la agregamos en un frasco de
dilución con 90 ml de solución salina estéril o agua peptonada y agitamos para homogenizar la muestra.
Esta dilución correspondió a 10-1. Así, se tomaron 1 ml de la dilución 10-1 y se trasladaron a un tubo que
contenía 9.0 ml de agua peptonada y tomo el número 10-2. Dicha operación se repitió para preparar tantas
diluciones decimales como fuese necesario; 10-3 , 10-4 , hasta 10-5. A partir de las diluciones, depositamos
con una pipeta, 1 ml de cada dilución en las cajas de Petri, añadimos a cada caja de Petri unos 15 ml del
medio de cultivo previamente preparado y atemperado (45 a 47 ° C), mezclamos el medio sobre la mesa de
trabajo, haciendo movimientos circulares con la placa, a favor y en contra del sentido de las agujas del reloj,
evitando al mismo tiempo que el medio impregne la tapa. Dejamos solidificar el agar de las placas sobre
una superficie horizontal y cuando se ha solidificado perfectamente introdujimos en la incubadora, evitando
que se apilaran en exceso y que entraran en contacto con sus paredes; las incubamos a 35°C por 24 a 48
horas y, por último, después de transcurridas las 48 horas estudiamos una muestra del agar 10-5 mediante
la tinción de gram.
Palabras claves: Muestra, dilución, incubadora, agar
ABSTRACT
To begin, we prepared the sample by weighing 10 g of goat milk, then added it to a dilution bottle with 90
ml of sterile saline solution or pepton water and shaken to homogenize the sample. This dilution
corresponded to 10-1. Thus, 1 ml of the 10-1 dilution was taken and transferred to a tube containing 9.0 ml
of pepton water and took the number 10-2. This operation was repeated to prepare as many decimal dilutions
as necessary; 10-3, 10-4 , up to 10-5 . From the dilutions, we deposited with a pipette, 1 ml of each dilution
in the Petri dishes, we added to each Petri dish about 15 ml of the culture medium previously prepared and
tempered (45 to 47 ° C), we mixed the medium on the work table, making circular movements with the
plate, clockwise and counterclockwise, avoiding at the same time that the medium impregnates the lid. We
let the agar of the plates solidify on a horizontal surface and when it has solidified perfectly, we introduced
it into the incubator, avoiding excessive piling up and contact with its walls; we incubated them at 35°C for
24 to 48 hours and, finally, after 48 hours, we studied a sample of the 10-5 agar by gram staining.
Keywords: Sample, Dilution, Incubator, Agar
INTRODUCCIÓN METODOLOGIA
Los aerobios mesófilos son un grupo de Primero que todo se inició con el proceso de
microorganismos capaces de desarrollarse en Cuenta total estándar de microorganismos
presencia de oxígeno a una temperatura mesófilos aerobios
comprendida entre 20°C y 45°C con una óptima
entre 30oC y 40oC. El recuento de estos 1. Preparación de la muestra: Diluciones.
microorganismos, en condiciones establecidas, a) Dilución primaria: Pesar 10 g del alimento en
estima la microflora total sin especificar los tipos condiciones asépticas. Transferir a un vaso de
que se encuentran. Los alimentos son productos licuadora previamente lavado y desinfectado con
con poblaciones microbianas diversas, desde un alcohol, agregar 90 ml de solución salina estéril
escaso número en la mayoría de los preparados, a (0.9 % p/v) y licuar por un minuto. Por ende
cifras considerablemente significativas en procede a agitar vigorosamente para homogenizar
alimentos fermentados. En ocasiones pueden ser la muestra. Esta dilución corresponderá a 10-1.
conducir agentes microbianos patógenos o sus
toxinas, con riesgo para la salud del consumidor. b) Diluciones decimales: Se tomará 0.1 ml de la
El examen microbiológico de alimentos está dilución 10-1 y se transferirán a un tubo que
basado, principalmente, en tres aspectos contiene 9.0 ml de solución salina estéril (10-2).
importantes: El muestreo, la elección de técnica Esta operación se repetirá para preparar
analítica y la interpretación de los resultados diluciones como sea necesario (10-3, 10-4, 10-5).
analíticos. Por otro lado, recuento en placa es la
2. Inoculación por la técnica de extensión
técnica comúnmente utilizada cuando se requiere
superficial en placa
investigar el contenido de microorganismos
viables en un alimento. Esta iniciativa refleja la Inocular 0.1 ml de cada dilución en placas de agar
calidad sanitaria de los productos analizados de cuenta estándar, extendiendo
indicando, además de las condiciones higiénicas homogéneamente sobre la superficie con una
de la materia prima, la forma como fueron varilla de vidrio en ángulo previamente
manipulados durante su elaboración. Un recuento esterilizada, luego invertir las cajas e Incubar a
bajo de aerobios mesófilos no implica o no 35°C por 24 a 48 h.
asegura la ausencia de patógenos o toxinas, de la
misma manera un recuento elevado no significa 3. Interpretación de los resultados de la cuenta
presencia de flora patógena. Ahora bien, en los total estándar
alimentos obtenidos por fermentación, no son Completada la incubación seleccionar las placas
recomendables recuentos elevados. que contengan entre 30 y 300 colonias.
MATERIALES Contar todas las colonias desarrolladas en las
1 matraz Erlenmeyer de 500 ml, 5 Pipetas estéril placas seleccionadas. Posteriormente utilizar el
de 1ml, 1 Pipeta 10 ml, 4 Cajas Petri de vidrio o microscopio para resolver los casos en los que no
desechables (estériles), 1 Probeta 100 ml, 1 Vaso se pueden distinguir las colonias de las pequeñas
de precipitado 500 ml, 5 Tubos con tapa rosca, 1 partículas de alimento. Determinar las unidades
Agitador de vidrio, 1 Piceta con agua destilada, 1 formadoras de colonia (UFC) donde se realiza de
Balanza analítica, 1 Asa microbiológica, 1 acuerdo a la ecuación
Incubadora Portaobjetos y cubreobjetos, 1
Refrigerador Guantes Escobillones, fibra,
detergente y toallas de papel secante, 1Marcador
sharpie, Mechero Fisher, Microscopio óptico, 1
Cuenta-colonias, Cinta adhesiva protectora, Agar Seguidamente se procede a la Prueba presuntiva
Plate Count, Agua Peptonada Tamponada y para coliformes e interpretación de los resultados
Muestra de leche. del número más probable y consecutivamente la
prueba confirmativa de coliformes fecal
RESULTADOS Y DISCUSION Se considera pertinente aumentar el apoyo
técnico para la mejora de estos procesos, ya que
A la hora de hacer el conteo de las colonias, en el la producción artesanal de leche es un volumen
cuenta colonias este nos dio incontables con todos importante de la producción y el consumo del
los cultivos. país. Los resultados obtenidos son sólo una
Fig. 1 Conteo de colonias muestra de lo que ocurre en varias unidades de
producción de leche en el país.
La baja eficiencia higiénica constatada en las
instalaciones repercute de manera significativa en
la calidad higiénica de la leche; en este sentido los
ordeñadores no poseen ninguna capacitación en
cuanto a prácticas y hábitos higiénicos, es posible
que no se laven las manos en forma minuciosa;
además, en la rutina de ordeño también es posible
que no realicen el respectivo lavado y secado de
los pezones de los animales.
Fuente: Amazará E (2022) BIBLIOGRAFIAS
Para finalizar se tomo una pequeña muestra de • Arana, I; Orruño, M; & Barcina, I.
una colonia y a esta se le hizo tinción de Gram y Departamento Inmunología, Microbiología y
al llevar esta al microscopio y se observo Parasitología Universidad del País
bacterias Gram positivas con forma de bacilos. Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea.
Fig. 2 Tinción de Gram en el microscopio
• Madigan, M. T., Martinko, J. M., & Parker, J.
(Ed. 14). (2015). Biología de los
microorganismos: Brock. Madrid, España:
Pearson Educación.

• Norma Oficial Mexicana NOM-242-SSA1-

2009: Productos y servicios. Facultad de
química farmacéutica biológica manual de
microbiología de alimentos. Especificaciones
sanitarias y métodos de prueba
Fuente: Amazará E (2022) CONSULTA.
1 ¿Por qué se cuentan entre 30 y 300 colonias en
CONCLUSIONES el método de cuenta total estándar y que otro
método de cuantificación en placa de
El conteo microbiológico de colonias fue microorganismos existe?
imposible de hacer en todas las diluciones de
leche que se tenían, debido a que la presencia de Rta: Con el objetivo de disminuir el error de la
estas era muy numerosa. medida.
Es necesario que se mejoren las prácticas de Otros métodos de cuantificación son:
manejo y ordeño en los animales para así evitar la
contaminación de la leche y disminuir la Filtración por membrana: En este método el
presencia de patógenos en la misma. recuento se realiza por filtración de un volumen
de la muestra a través de un filtro de membrana
de tamaño adecuado para retener las bacterias
(0.22-0.45 µm). Una vez filtrada la muestra, el Rta: Término que debe utilizarse para reportarla
filtro se coloca sobre un medio de cultivo sólido cuenta de colonias en placa, las cuales pueden
y se incuba. El recuento del número de colonias surgir de una célula o de un cúmulo de células. Es
formadas sobre el filtro determina el número total la cantidad de células separables sobre la
de bacterias en la muestra filtrada. Es un método superficie o dentro de un medio de agar
útil cuando el número de bacterias presentes en la semisólido que da lugar al desarrollo de una
muestra es muy bajo. Se utiliza con frecuencia colonia visible del orden de decenas de millones
para determinar el número de bacterias en agua. de células descendientes.
Sembrado por vertido en placa: Consiste en
añadir medio de cultivo fundido y enfriado a 50ºC
3. ¿Por qué las pipetas deben de cambiarse entre
sobre placa de Petri que contiene una cantidad
cada dilución?
determinada de la muestra diluida. Se tapa la
placa y se rota para mezclar la muestra en el agar. Rta: Se debe cambiar la pipeta entre cada dilución
Cuando el agar solidifica se incuban las placas. para evitar arrastrar residuos de las diluciones
Las colonias se desarrollan tanto dentro del agar anteriores que contienen más células.
como en la superficie. Es un método
generalmente utilizado para el recuento de
microorganismos anaerobios facultativos. 4. ¿Cuáles son las características generales de los
Asa calibrada: La utilización de agujas o asas coliformes y cuál es su importancia como
calibradas permite tomar volúmenes pequeños, indicadores sanitarios?
que son inoculados en la superficie del agar Rta: Los coliformes se clasifican en Totales y
mediante la técnica de siembra masiva. Las Fecales. Los coliformes totales como
colonias son contadas y se multiplican por el características comunes destacan que:
factor de dilución del asa empleada. El uso más
frecuente de este método es en el urocultivo. Se • Poseen morfología bacilar.
determinan las UFC/g o ml de muestra • Pueden ser aerobias o anaerobias facultativas.
• No forman endosporas.
Diluciones seriadas: Se hacen diluciones de la
• Gram Negativas.
muestra (solución madre) y se depositan gotitas
de 10 ml en una placa Petri (gotitas de cultivo + • Fermentan la lactosa produciendo ácido y gas
agar). Se examina el crecimiento de las colonias en 24-38 hrs. A 36 °C
en las gotitas tras la incubación. Los coliformes Fecales comparten las mismas
Recuento directo de bacterias al microscopio: características que los totales, pero además:
Es una técnica para determinar el número total de • Crecen con lactosa y la fermentan a 44.5°C ±
organismos de una muestra. Se utilizan cámaras 2°C produciendo ácido y gas en las primeras
de recuento (cámara de Petroff-Hauser) y 48 hrs. De incubación.
visualización al microscopio. Es un método • Son coliformes termotolerantes .
rápido del número total de células de una muestra, • Incluye cepas de los géneros Klebsiella y
pero no distingue entre viables o no viables. Escherichia siendo esta última el más útil
indicador de calidad de alimentos.

2. Explique si las colonias observadas provienen Referencias

de grupos de bacterias o de una sola célula ¿Qué
• Perilla, M, Allejo, G, Popovic, T, Wells, J.
significa el término de Unidad Formadora de
2014. Manual de laboratorio para la
Colonia (UFC)?
identificación y prueba de susceptibilidad a
 los antimicrobianos de patógenos bacterianos
de importancia para la salud pública del
mundo en desarrollo. Organización Mundial
de la Salud.

• Norma Oficial Mexicana, Bienes y Servicios.

Método para la cuenta de microorganismos
coliformes totales en placa.

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