Determinacion Salmonella Vidas 24 Horas SPT

DETERMINACION DE SALMONELLA SPP PRT-105
SUBSECRETARIA DE SALUD PÚBLICA-

LABORATORIO DEPARTAMENTAL
AFNOR (BIO 12/32-10/11) VIDAS

VERSION 04
SALMONELLA SPT( 24 HORAS)
MÉTODO HORIZONTAL ISO 6579:2002
COR /2004 FECHA DE
2019-10-10
APROBACION
1. OBJETIVO
Establecer el procedimiento para la determinación de Salmonella spp en muestras de
alimentos en el laboratorio departamental de salud pública.
2. ALCANCE
El presente procedimiento aplica para el análisis y aislamiento de Salmonella en
muestras de los siguientes productos: cárnicos crudos, cocidos y madurados. Aves
crudas y cocidas, pescados y productos alimenticios marinos crudos y cocidos,
productos de frutas y a base de vegetales crudos, productos lácteos crudos,
congelados, secos, procesados. Productos de chocolate y panadería. Misceláneos
salsas, huevos y derivados, enriquecidos, precocidos, deshidratados, en el
Laboratorio Departamental de Salud Pública.
3. RESPONSABILIDAD Y AUTORIDAD
3.1. COORDINADOR TECNICO O DIRECTO TECNICO: Responder por las

operaciones técnicas y la provisión de los recursos necesarios para asegurar la
calidad requerida de las operaciones del laboratorio.
3.2. RESPONSABLE TÉCNICO: Coordinar y autorizar las actividades de

procesamiento de muestras, referencia, contra referencia, control de calidad,
capacitación e investigación en su área de desempeño, en apoyo a la vigilancia en
salud pública en el departamento del Atlántico.
3.3. ANALISTA: Realizar actividades de procesamiento de muestras, referencia,

contra referencia, control de calidad, capacitación e investigación en su área de
desempeño, en apoyo a la vigilancia en salud pública en el departamento del
Atlántico.
3.4. TECNICO: Apoyar las actividades de recepción, preparación de medios,

procesamiento y análisis de muestras en el Laboratorio Departamental de Salud
Pública.
3.5. AUXILIAR: Apoyar los procesos de laboratorio en el lavado, esterilización y

ordenamiento del material utilizado en las áreas del laboratorio de salud pública.
4. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
4.1 ATCC: American Type Culture Collection.

Es un material biológico de referencia certificado, la colección certificada que
suministra una determinada cepa, es un cultivo puro donde se han observado las
convenientes pruebas morfológicas, bioquímicas, y moleculares.
4.2 BACTERIAS: El termino bacteria se emplea para denominar a todos los

Organismos unicelulares sin núcleo diferenciado que constituyen el nivel de
organización procarionte.
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4.3 Salmonella: son bacilos gram negativos no esporulados, anaerobios

facultativos móviles, considerados como un microrganismo patógeno produciendo
infecciones en el hombre síntomas tales como: náuseas, dolor abdominal,
somnolencia, diarrea, fiebre y septicemia.
La puerta de entrada en humanos es la vía oral, a través del consumo de alimentos
contaminados con excretas y orina o por contaminación de los alimentos debido a
malas prácticas higiénicas de manipuladores, que son portadores asintomáticos, o
por contaminación cruzada de productos crudos a cocidos.
En la taxonomía actual, el género Salmonella se clasifica utilizando antígenos

somáticos (Ag O), antígenos flagelares (Ag H) y antígenos capsulares (Ag K), en dos
especies:
Salmonella entérica y Salmonella bongori

La especie Salmonella entérica comprende 6 subespecies:
Salmonella entérica subespecie entérica (I);
Salmonella entérica subespecie salamae (II);
Salmonella entérica subespecie arizonae (IIIa);
Salmonella entérica subespecie diarizonae (IIIb);
Salmonella entérica subespecie houtenae (IV);
Salmonella entérica subespecie indica (VI).
5. FUNDAMENTO DEL METODO DE ENSAYO
La técnica de detección de Salmonella por VIDAS es un inmunoensayo enzimático

Para la detección de receptores de Salmonella spp mediante el uso de ELFA: Método
de ensayo de fluorescencia ligada a enzimas en 24 horas.
El receptáculo (SPR) sirve como fase sólida, como dispositivo de pipeteo para
dispensar las muestras y hacer los lavados, el interior de la SPR está recubierta con
proteínas específicas para receptores de Salmonella, todos los reactivos para el
ensayo están listos para ser dispensados previamente en los pozos de reactivos que
se encuentran sellados, todos los pasos del ensayo son realizados automáticamente
por el equipo. El medio de reacción se cicla dentro y fuera del SPR (fase sólida)
varias veces.
Los receptores de Salmonella presentes se unirán al interior del SPR (fase solida) y
se eliminarán los componentes sin unir durante los pasos de lavado. Las proteínas
conjugadas a la fosfatasa alcalina se ciclan dentro y fuera del SPR uniéndose a
cualquier receptor de Salmonella, fijándose así a la pared del SPR, el paso de
lavado final elimina el conjugado no unido, y durante la etapa de detección final el
sustrato (4-metilumbeliferilo) se cicla dentro y fuera del SPR así La enzima
conjugada cataliza la hidrólisis del sustrato emitiendo una fluorescencia como
producto final (4-metilumbeliferona) el cual el instrumento lo lee a una longitud de
onda de 450 nm calculando el valor para cada muestra realizando una comparación

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con el valor interno de referencia, e interpretando el resultado positivo o negativo

para cada muestra.
6. LIMITACIONES Y/O INTERFERENCIA DEL METODO DE ENSAYO
No realizarle previo tratamiento a las muestras de derivados lácteos, chocolate,

café, que contengan grasa deben ser previamente tratadas según las indicaciones
escritas en el Instructivo Preparación y Homogenización de muestras INS -050.
Utilizar cartuchos o conos de kit de reactivos vencidos.
7. REQUISITOS PREVIOS
Se debe cumplir con todas las normas de bioseguridad y manipulación de muestras

durante los procedimientos, en lo referente al manejo y acondicionamiento de áreas,
equipos, materiales, elementos de protección personal; Ver “Manual de
bioseguridad” MAN-003.
8. RECEPCION E IDENTIFICACION DE LAS MUESTRAS.

Las muestras son identificadas en recepción, según el formato de Trazabilidad de
muestras de alimentos” LAB-052 por el personal del laboratorio encargado.
8.1 Seguridad personal

Tener en cuenta todas las precauciones del “MANUAL DE BIOSEGURIDAD MAN-003”.
8.2 Seguridad con los equipos

Cumplir con lo establecido en el procedimiento “MANEJO DE EQUIPOS E
INSTRUMENTOS PRT-003”.
8.3 Condiciones ambientales

Para la determinación de Salmonella spp, se requiere de las siguientes condiciones
ambientales: Temperatura de ambiente durante el proceso entre 18°C a 25 °C y
humedad Relativa entre 30% a 80%.
8.4 conservación de la muestra

Durante el transporte las muestras deben mantenerse a temperatura de
refrigeración, para productos que requieran cadena de frío, correspondiendo esta de
2 ºC a 8 ºC.
Los alimentos perecederos y refrigerados deben mantenerse en recipientes

adecuados que mantengan su temperatura hasta la llegada al laboratorio. La
conservación se puede hacer en una nevera isotérmica que contenga paquetes
congelados pilas o hielo seco.

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Si la muestra es perecedera y no es posible el procesamiento inmediato, guardar la

muestra en refrigeración a temperatura de 2°C a 8°C o en congelación entre -30°C
a -15°C en un término no mayor de 48 horas.
8.5 Disposición Final de las Muestras y/o remanentes:

Lo establecido para la retención de la muestra es:
Las muestras de alimentos preparados menú se descartarán una vez emitido su
resultado.
Muestras perecederas: se deben conservar hasta la vida útil del producto y luego se
colocan el centro de acopio para su recolección por la empresa destinada para tal
fin.
Muestras no perecederas: se conservar 3 meses a temperatura ambiente.
Etiquetas: se conservan durante 2 años, previa limpieza de las mismas.
Para las muestras que lleguen en cadena de custodia deben presentar toda su
documentación y se les aplicara el mismo tiempo establecido para la retención de
muestras analizadas.
9. EQUIPOS Y MATERIALES
9.1 Equipos
 Refrigerador de 2°C a 8°C

 Balanza con capacidad de 2.000 g y sensibilidad de 0.1g
 Dilumat
 Cabina de flujo laminar.
 Homogenizador tipo Stomacher.
 Incubadoras a 41,5 °C ±1ºC.
 Baño seco
 Agitador tipo Vortex
 Equipo VIDAS
 Equipo VITEK 2
 Pipetas automáticas o micro pipetas de 100-1.000 µl
 Pipeteador o ayudante de pipeteado.
9.2 Materiales
 Bolsas para pesar de plástico estériles

 Asas desechables
 Cajas de Petri desechables.
 Frascos estériles

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 Gradillas
 Instrumentos para preparar las muestras: Cuchillos, tenedores, pinzas, tijeras,
cucharas, espátulas, estériles
 Láminas portaobjetos
 Palillos estériles
 Puntas desechables estériles
 Tubos tapa rosca estériles
 Marcador
 Recipientes para descarte de material utilizado
 Toallas absorbentes
 Guantes
 Bolsas rojas y verdes
 Elementos de protección personal
 Alcohol antiséptico al 70%
 Alcohol antiséptico al 96%
 Soluciones desinfectantes
 Jabón líquido
10. MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS
 Agua de peptona tamponada

 Suplemento para Salmonella SPT
 Reactivo VIDAS Salmonella SPT 24 Horas
 Agar Xilosa lisina desoxicolato (agar XLD)
 Agar Hektoen
 Agar TSA-YE
10.1 Medios para identificación Bioquímica
 Prueba de Oxidasa
 Agar Hierro triple azúcar (TSI)
 Agar Lisina – Hierro descarboxilasa (LIA)
 Agar Urea.
 Kit comercial para identificación Bioquímica de bacterias entéricas.
10.2 Identificación Automatizada

Equipo vitek 2
10.3 Cepas de referencia:

Control positivo: Salmonella typhimurium ATCC 14028
Control negativo: E. Coli ATCC 25922
11. CONTROL DE CALIDAD ANALITICO

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Como parte del control interno, para la evaluación de los resultados se incluye en los
ensayos los siguientes controles, que se realizaran semanalmente.
Control de esterilidad se realizara a los medios y Caldos de cultivo incubando las cajas
de agar XLD, Hektoen, Agar nutritivo, Agua peptonada tamponada, TSI, Lisina y Urea
sin inocular e incubar a 41,5°C ± 1°C por 24 Horas.
Control positivo se realiza con una cepa Salmonella Tiphimurium ATCC 14028, se
inocula en el agua peptonada tamponada a la cual se le agrego 1 ml de suplemento
para salmonella, se incuba a 41,5°C ± 1°C por 24 Horas.
Control Negativo se realiza con una cepa E. coli ATCC 25922, se inocula en el agua
peptonada tamponada a la cual se le agrego 1 ml de suplemento para salmonella, se
incuba a 41,5°C ± 1°C por 24 Horas.
Los resultados de los controles deben ser anotados en el registro de control de técnica
LAB-057.
CONTROL EXTERNO: se realizará de manera anual a través de Interlaboratorios.
Criterios de aceptación o rechazo para los controles de técnica
La prueba de esterilidad de los medios utilizados, no debe presentar crecimiento de

ningún tipo.
Verificar el resultado de los controles positivos y negativos como una muestra en el

equipo Vidas, validar el resultado emitido por el equipo con la formula VRF del
estándar/ VRF de la muestra.
12. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO DE ENSAYO.
12.1 Preparación de la Muestra

Una vez retirada la muestra de su almacenamiento, procedemos a mezclar y
desinfectar con alcohol al 70%, el sitio por donde se vaya extraer la muestra, se
pesan 25 g o se miden 25 ml en una bolsa estéril con filtro previamente marcada, se
agrega 225 ml de agua peptonada tamponada más 1000µl de suplemento para
Salmonella el cual se reconstituye con 10 ml de alcohol al 70%, se homogeniza la
muestra en el equipo stomacher durante 2 a 3 minutos.
Alimentos con contenido graso mayor de un 20% agregar tween 80 al 1%,

productos ácidos neutralizar el PH con NaOH al 0.1N.
Derivados lácteos utilizar el diluyente previamente calentado por 15 minutos a 45°C,
las suspensiones iniciales deben dejarse reposar 15 minutos antes de hacer las
diluciones.

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Para otro tipo de alimentos como café, chocolate ver INS -052 preparación y
Homogenización de muestras
13. EJECUCION DE LA PRUEBA

Descripción del procedimiento alternativo para Salmonella spp AFNOR Bio (12/32-
10/11) para todos los productos de la alimentación humana, animal y productos de
muestras ambientales.
13.1 ENRIQUECIMIENTO
Pesar 25 g o medir 25 ml de la muestra a analizar y añadir 225 ml de agua peptonada
tamponada más 1.000 µl de suplemento para Salmonella SPT 24 horas, homogenizar
en stomacher de 2-3 minutos e Incubar a 41,5°C ± 1°C por 24 Horas.
Conservar las muestras de enriquecimiento en congelación en casos de resultados

positivos para la identificación.
Después de incubar por 24 horas a temperatura de 41,5 °C ±1°C transferir 250 µl

de la muestra en los cartuchos de reactivos VIDAS para Salmonella SPT 24 horas y
colocarlos en baño seco durante 10 minutos a una temperatura de 100°C a 120°C,
dejar enfriar por 10 minutos, seleccionar el test a analizar(Salmonella SPT) escanear
el código que trae la caja de reactivo para que identifique el lote a utilizar, identificar
las muestras con su código, hacer click en crear para que se seleccionen las celdas y
ubiquen las muestras en cada canal, proceder a introducir los cartuchos de controles
y calibradores si el equipo los pide. (Cada 14 días). Con sus respectivos conos,
revisar que los cartuchos y conos coincidan y que estén colocados correctamente,
lanzar la prueba, esperar que verifique y muestre el tiempo de proceso del test de
Salmonella SPT 24 horas; esperar que el equipo emita los resultados e imprimirlos.
Al finalizar el análisis retirar los conos y cartuchos de los canales, eliminarlos en las
canecas rojas con sus respectivas bolsas rojas, limpiar los canales y porta cartuchos
con alcohol al 70%, apagar el equipo VIDAS y el monitor en su respectivo orden.
Nunca apagar la CPU.
14. RESULTADOS E INTERPRETACION

Los resultados son analizados automáticamente por el software del equipo vidas.
Este sistema efectúa dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada
uno de los test; en la primera lectura tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la
cubeta de substrato antes de ponerse en contacto con el cono. La segunda lectura
se efectúa después del período de incubación del substrato con el cono, Los
resultados no válidos pueden aparecer cuando la lectura de ruido de fondo es
superior al umbral predeterminado, indicando una contaminación del substrato. El

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cálculo del VRF es el resultado de la diferencia de las dos lecturas, este valor es
interpretado por el sistema así:
Valor del test= VRF muestra/VRF estándar
Interpretación de los resultados
Valor del Test Interpretación

Menor a 0,23 Negativo
Mayor o igual 0,23 Positivo
15. ANALISIS DE DATOS Y EXPRESION DE LOS RESULTADOS
De acuerdo con los resultados arrojados por el equipo indicar si es positivo o

negativo para Salmonella en 25 g /ml.
En caso de resultados positivos se continuará la identificación con la

Metodología ISO 6579:2002 cor /2004
16. IDENTIFICACION DE SALMONELLA SPP MÉTODO HORIZONTAL ISO

6579:2002 COR /2004
Aislamiento de Salmonella para muestras positivas.

Los resultados positivos emitidos por el equipo Vidas se siembran en placa de medios
selectivos y diferenciales:
Se deben utilizar mínimo dos medios selectivos por cada caldo de enriquecimiento
para el aislamiento del microorganismo. El medio de cultivo recomendado es agar XLD
y el segundo medio puede ser escogido por el laboratorio en este caso es el Hektoen.
Del cultivo de enriquecimiento aislar por agotamiento dos cajas de agar XLD y Hektoen
usar la misma asada para sembrar las dos cajas, de modo que se obtengan colonias
bien aisladas. Incubar a 37°C±1°C por 24 ± 3 horas el agar XLD y el Agar Hektoen
37°C±1°C por 18 a 24 horas.
Después de la incubación observar la presencia de colonias típicas y atípicas de

Salmonella. Marcar la posición en el fondo de la placa.
Las colonias típicas de Salmonella crecen en agar XLD con el centro negro y una zona
ligeramente trasparentes de color rojizo debido al cambio de color del indicador.
Las colonias atípicas de Salmonella lactosa-positiva crecen en agar XLD amarillas con
o sin ennegrecimiento.

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Las Colonias típicas de Salmonella crecen en Agar Hektoen como colonias azul verdosa
con centro negro.
Las colonias atípicas de Salmonella Lactosa- positiva crecen en agar Hektoen como
colonias amarillas naranjas con o sin centro negro.
Segundo pase a XL Y Hektoen.

Seleccionar de 3 a 5 colonias y sembrar nuevamente en Agar XLD y Hektoen incubar a
37°C±1°C por 24 ± 3 horas el agar XLD y el Agar Hektoen 37°C±1°C por 18 a 24
horas.
Purificación
Se realiza una Siembra en Agar TSAYE de las colonias aisladas y se Incuban a 37 ±1
°C por 24 ±3 h.
Identificación de Salmonella
Después de la purificación realizar el screening y las pruebas bioquímicas.
Screening
Prueba de Oxidasa
Pruebas bioquímicas de tamizaje: Reacción en agar TSI
Reacción en agar LIA
Reacción en agar UREA
Prueba de la Oxidasa:
Utilizando una tirilla de Oxidasa, hacer un extendido, con palillos de madera estéril
de una colonia sospechosa, si se produce un cambio de color a azul o violeta indica
una prueba positiva, si no hay cambio de color indica una prueba de oxidasa
negativa.
La Salmonella presenta la prueba de oxidasa negativa, seguir con la identificación.
Reacción en Agar Hierro triple azúcar:

Inocular cada uno de los tubos de Agar TSI, sembrando por estrías la parte inclinada
y por picadura la columna del medio. Incubar a 35°C±2 por 24 a 48 horas.
Los cultivos Típicos de Salmonella producirán una reacción K/A con producción de
gas, y producción de H2S.
Los cultivos Atípicos de Salmonella producirán una reacción A/A con o sin producción
de gas, y con o sin producción de H2S.
Reacción en Agar LIA:

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Inocular cada uno de los tubos de Agar LIA, sembrando por doble picadura la
columna del medio y por estrías la superficie. Incubar a 35°C±2°C por 24 a 48
horas.
Los cultivos de Salmonella producirán una reacción K/K.
Reacción en Agar urea:

Inocular cada uno de los tubos de Agar urea, sembrando por estrías la parte
inclinada. Incubar a 35°C ±2°C por 24 a 48 horas.
Se observa una reacción positiva cuando el color del medio vira rosado-violeta.
Si se obtienen los resultados de las pruebas de tamizaje compatible con Salmonella
se procede a la identificación con Kit comerciales de pruebas bioquímicas.
Pruebas bioquímicas
Identificación de Salmonella mediante kit comerciales de pruebas bioquímicas
aprobados y validados internacionalmente. (API 20E o RAPID 20E)
Identificación de Salmonella por método automatizado Las colonias puras

serán identificadas por método automatizado a través del equipo VITEK 2 que
cumple con la ISO 7218 incluida en el BAM Validada por AOAC OMA, quien emite la
identificación de la especie de Salmonella a través de un sistema interno de más de
64 pruebas bioquímicas.
Identificación definitiva serotipificación de Salmonella
Las cepas aisladas e identificadas como Salmonella son enviadas en viales con
medios nutritivos siguiendo las normas internacionales de bioseguridad para el
transporte de material con riesgo biológico- al Laboratorio de Microbiología de
Alimentos del INVIMA, para que se les realice la correspondiente serotipificación.
17. ELIMINACION DE DESECHOS: Ver MANUAL DE BIOSEGURIDAD MAN 003
18. EMISION DEL INFORME DE RESULTADOS

Los resultados de las pruebas se deben registrar de acuerdo al “procedimiento de
recepción y entrega de resultados” LAB-052.
Los resultados de los ensayos son registrados en el formato “RESULTADOS DE

ENSAYO DE LABORATORIO LAB-008.
Los resultados se comparan contra la legislación vigente que aplique para el tipo de
muestra analizada.
19. DOCUMENTOS DE REFERENCIA/BIBLIOGRAFIA

AFNOR BIO 12/32-10/11
ISO 16140-octubre 2003 BIO 12/32-10/11.
ISO 7218 Incluida en el BAM validada por la AOAC OMA
ISO 6579:2002 Cor. 1:2004 (E) – Método horizontal para la detección de
Salmonella spp.

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ISO 6887-1 Microbiología de Alimentos y piensos animales-preparación de muestras

para análisis, suspensión inicial y suspensiones decimales para el examen
microbiológico
ISO 6887-4:2003 (E) Microbiología de Alimentos y Piensos animales-preparación de
Muestras para análisis, suspensión inicial y suspensiones decimales para el examen
microbiológico. Parte 4. Normas específicas para la preparación de productos leche
y productos lácteos, carne y productos cárnicos y pescado y productos de la pesca.
20. DOCUMENTOS Y REGISTROS ASOCIADOS
LAB -052 Trazabilidad de muestras de alimentos

MAN-003 Manual de bioseguridad
LAB-008 Resultado de ensayos de laboratorio
LAB-057 Registro Control de Técnica Analítica
LAB-051 Hoja de Trabajo
INS-050 Preparación y Hominización de muestras
21. REGISTRO DE REVISIONES Y APROBACIONES
FECHA CAMBIO VERSION

28-05-15 Versión inicial 01
15/02/18 Ajuste de temperatura 02
se revisó el
procedimiento y se
adiciono hoja de trabajo
2019/05/08 y registro de control de 03
técnica
2019/10/10 Revisión y cambios de 04

acuerdo a la norma ISO
vigente.
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Analista Responsable Técnico Coordinador Técnico

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AFNOR (BIO 12/32-10/11) VIDAS

3.1. COORDINADOR TECNICO O DIRECTO TECNICO: Responder por las

3.2. RESPONSABLE TÉCNICO: Coordinar y autorizar las actividades de

3.3. ANALISTA: Realizar actividades de procesamiento de muestras, referencia,

3.4. TECNICO: Apoyar las actividades de recepción, preparación de medios,

3.5. AUXILIAR: Apoyar los procesos de laboratorio en el lavado, esterilización y

4.1 ATCC: American Type Culture Collection.

4.2 BACTERIAS: El termino bacteria se emplea para denominar a todos los

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4.3 Salmonella: son bacilos gram negativos no esporulados, anaerobios

En la taxonomía actual, el género Salmonella se clasifica utilizando antígenos

Salmonella entérica y Salmonella bongori

5. FUNDAMENTO DEL METODO DE ENSAYO

La técnica de detección de Salmonella por VIDAS es un inmunoensayo enzimático

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con el valor interno de referencia, e interpretando el resultado positivo o negativo

6. LIMITACIONES Y/O INTERFERENCIA DEL METODO DE ENSAYO

No realizarle previo tratamiento a las muestras de derivados lácteos, chocolate,

Utilizar cartuchos o conos de kit de reactivos vencidos.

Se debe cumplir con todas las normas de bioseguridad y manipulación de muestras

8. RECEPCION E IDENTIFICACION DE LAS MUESTRAS.

8.1 Seguridad personal

8.2 Seguridad con los equipos

8.3 Condiciones ambientales

8.4 conservación de la muestra

Los alimentos perecederos y refrigerados deben mantenerse en recipientes

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Si la muestra es perecedera y no es posible el procesamiento inmediato, guardar la

8.5 Disposición Final de las Muestras y/o remanentes:

Muestras no perecederas: se conservar 3 meses a temperatura ambiente.

Etiquetas: se conservan durante 2 años, previa limpieza de las mismas.

 Refrigerador de 2°C a 8°C

 Bolsas para pesar de plástico estériles

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10. MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

 Agua de peptona tamponada

10.1 Medios para identificación Bioquímica

10.2 Identificación Automatizada

10.3 Cepas de referencia:

11. CONTROL DE CALIDAD ANALITICO

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CONTROL EXTERNO: se realizará de manera anual a través de Interlaboratorios.

Criterios de aceptación o rechazo para los controles de técnica

La prueba de esterilidad de los medios utilizados, no debe presentar crecimiento de

Verificar el resultado de los controles positivos y negativos como una muestra en el

12. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO DE ENSAYO.

12.1 Preparación de la Muestra

Alimentos con contenido graso mayor de un 20% agregar tween 80 al 1%,

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13. EJECUCION DE LA PRUEBA