UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN PRACTICA N 13

TEMA
: DETECCION

DE SALMONELLA

CURSO

: MICROBIOLOGIA GENERAL

DOCENTE

: AMELIA CASTRO GAMELA

ESTUDIANTE

: IRENIA PACCO FLORES

CDIGO

: 08-32026

AO

: TERCERO

TACNA PER 2010

DETECCIN DE SALMONELLA
INTRODUCCIN La salmonelosis es reconocida como una de los mayores enfermedades transmitidas por alimentos por este motivo es necesario minimizar el riesgo de transmisin al consumidor final. De esta forma, la disponibilidad de una herramienta diagnstica con alta reproducibilidad, sensibilidad y rapidez para la determinacin de la presencia o ausencia de patgenos de alimentos es de gran importancia en la industria alimentara as como en la vigilancia epidemiolgica a estas. Los mtodos tradicionales consumen de tres a cinco das para detectar e identificar cepas de Salmonella sp. a travs de pasos sucesivos en caldos de enriquecimiento, luego cultivos en medios selectivos y por ltimo el anlisis de las propiedades metablicas y/o serolgicas de las colonias sospechosas, por esta razn esta tcnica consume mucho tiempo de trabajo del bacterilogo. De otro lado, como este procedimiento toma demasiado tiempo algunos alimentos con una vida media corta pueden ser consumidos antes de que el resultado del anlisis este disponible. Adems, clulas como Salmonella sp, Campylobacter sp. Y Listeria monocytogenes frecuentemente, se encuentran estresadas por las condiciones desfavorables a las que se exponen (altas concentraciones de sal, valores de pH desfavorables, o repetidos procesos de congelacin y descongelacin) y por este motivo no pueden ser detectadas fcilmente en los medios de cultivo. Por todas estas razones se han comenzado a desarrollar nuevos mtodos alternativos para la identificacin de Salmonella sp. los mtodos alternos deben ser ms rpidos que los mtodos convencionales, obtener resultados comparables, ideales para el anlisis de rutina y ser aplicables a un rango amplio de muestras de alimentos simultneamente.

OBJETIVO

 Detectar la presencia de Salmonella en la muestra (alimentos). Conocer las tcnicas ms comunes en alimentos para le deteccin de estos microorganismos patgenos.

FUNDAMENTO TEORICO La salmonelosis es una enfermedad infecciosa del hombre y los animales causada por microorganismos de dos especies de Salmonella (Salmonella enterica y S. bongori). Aunque fundamentalmente son bacterias intestinales, las salmonelas estn muy distribuidas en el ambiente y se encuentran con frecuencia en vertidos de granjas, en las aguas residuales humanas y en cualquier material con contaminacin fecal. En el hombre, los organismos del gnero Salmonella son agentes etiolgicos de infecciones intestinales y sistmicas, por lo general, como contaminantes secundarios de los alimentos, de origen ambiental o como consecuencia de septicemias en animales de consumo. La salmonelosis humana es la enfermedad zoonsica ms frecuente e importante causada por estos organismos. Tales agentes se encuentran tambin en los alimentos y originando enfermedades infecciosas en los animales, particularmente en aves y en cerdos. En todos los pases existe salmonelosis, pero parece ser ms prevalente en reas de produccin animal intensiva, especialmente de cerdos, de terneros y de algunos tipos de aves criadas en confinamiento. Con frecuencia, los reptiles son portadores asintomticos de Salmonella. La enfermedad puede afectar a todas las especies de animales domsticos; los ms susceptibles son los animales jvenes, en estado de gestacin, o lactantes. La manifestacin ms comn de la enfermedad es la entrica, pero se puede observar un espectro muy amplio de sntomas clnicos que incluye septicemia aguda, aborto, artritis y enfermedad respiratoria. Muchos animales, en especial los cerdos y las aves, pueden estar infectados sin manifestar la enfermedad clnica. Tales animales pueden ser importantes en la difusin de la enfermedad entre explotaciones y como fuentes de contaminacin alimentaria y de infeccin humana. TAXONOMA El gnero Salmonella es de taxonoma difcil, modificada en estos ltimos aos por el aporte de estudios moleculares de homologa de ADN que han clarificado el panorama taxonmico de las enterobacterias.
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Para la bacteriologa clnica, Salmonella es un bacilo patgeno primario (como Shigella, Yersinia y ciertas cepas de E. coli), anaerobio facultativo, algunos mviles y no fermentan la lactosa. S. typhi es la nica serovariedad que no produce gas en la fermentacin de los azcares. Clsicamente se distinguan tres nicas especies patgenas primarias: S. typhy, S. cholerae-suis y S. enteritidis. A su vez, segn la serotipificacin de Kauffman y White, eran clasificadas en ms de 2000 serotipos con base en los antgenos flagelares H (proteicos) y antgenos somticos O (fraccin polisacrida del lipopolisacrido bacilar). S. typhi posee adems un antgeno de virulencia. MICROBIOLOGA Salmonella crece con facilidad en agar sangre formando colonias de 2 a 3 milmetros. En laboratorios de microbiologa clnica se asla con medios selectivos, Selenito, Hektoen, SS o XLD para inhibir el crecimiento de otras bacterias patgenas y de la flora intestinal saprfita. Tienen los siguientes antgenos:

Somtico O, del lipopolisacrido en la pared celular, termoestable y es la base de la clasificacin en subgrupos. Flagelar H, de la protena flagelina, termolbil, es la base de la clasificacin de especies. Envoltura Vi, termolbil, responsable de la virulencia de varias especies patognicas.

PATOGENIA Artculo principal: Salmonelosis Produce salmonelosis con un perodo de incubacin de entre 5 horas y 5 das, diarrea y dolor abdominal. A travs de las heces (excremento) del enfermo se elimina un gran nmero de esta bacteria y se observa fiebre entrica con un periodo de incubacin de 7 a 28 das, causante de dolor de cabeza, fiebre, dolor abdominal y diarrea, erupcin mculo-papulosa en pecho y espalda. Los enfermos presentan un perodo de convalecencia entre 1 y 8 semanas y las personas curadas eliminan Salmonella. Tambin puede ocasionar fiebres entricas o infeccin intestinal por intoxicacin con algunos alimentos.

SALMONELLA

CLASIFICACIN CIENTFICA Reino: Bacteria Filo: Proteobacteria Clase: Gammaproteobacteria Orden: Enterobacteriales Familia: Enterobacteriaceae Gnero: Salmonella

POSICIN SISTEMTICA Y PRINCIPALES CARACTERES: Las salmonellas son bacilos Gram negativos, aero -anaerobios facultativos, pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae de la que posee los principales caracteres. El tamao oscilado de 0,3 1 um, son mviles merced a la posesin de flagelos peritricos o inmviles, no forman endosporas. Posee un metab olismo oxidativo y fermentativo. Produce cido y, a menudo gas durante la fermentacin de D-glucosa o de otros hidratos de carbono Catalasa positivos (salvo rara excepciones), oxidas negativos.

Las salmonellas se multiplican bien en medios ordinarios. Las colonias al cabo de 18 a 24 horas de 2 a 3 mm de dimetro, salvo par algunos serotipos que producen siempre colonias enanas. ESTRUCTURA ANTIGNICA Antigenos Somticos (o antigenos o) Son los antigenos de la pared bacteriana, de naturaleza lipopolisacarida. Son termoestables y alcohol resistentes. Posee tres componentes: el lipido A y el polisacarido en el core o pared basal.

Antigenos de la cubierta (o antigenos capsulares o K) El nico de este tipo que antigeno V (de virulencia) presencia de este antigeno sueros anti O. La expresin se reconoce en las salmonellas en el que existe en S. Thipi paratyphi. La hace imposible de aglutinacin por los de este factor depende de la menos dos
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que deben existir en la bacteria para que dicha expresin tenga lugar. Al lado del antigeno existe tambin antigenos proteicos de superficie, los pili que son filamentosos (ms o menos numerosas) que rodean a la celula bacteriana. Antigeno flgelar (o antigeno H) Son antigenos constituidos por una parte proteica, la flagelina, cuya composicin en aminocidos es constante para un tipo antigenico determinado. Depende de dos genes de estructur que corresponde a la fase I y a la fase II. Temperatura La temperatura optima de crecimiento entre 53 a 37C, sin embargo las salmonellas pueden multiplicarse desde 5 a 45/47C, aunque a temperatura inferior a 10C el crecimiento sufre un retraso considerable. La pasteurizacion a 72C/15 se asegura su destruccin en la leche. Las temperaturas de refrigeracin permiten la supervivenc ia de las salmonellas en tanto que la congelacin provoca un descenso considerable del nmero de salmonellas, aunque nunca produce su completa desaparicin, soportan un pH emtre 4.5 a 9 con un ptimo de 6,5 a 7,5. Actividad de agua se desarrolla bien a vec es a VALORES DE 0,945 A 0,999. A valores muy bajos, correspondientes a productos deshidratados, sobreviven largo tiempo. En los alimentos pueden multiplicarse hasta valores igual a 0,93. OTROS FACTORES Son bastante sensibles a I NaCl. Las salmonellas son p oco sensibles a los nitritos y por lo tanto puede subsistir bastante tiempo en las salazones. La variacin del Oxido -reduccion no les afecta. No son buenas competidoras y frecuentemente son inhibidas por la flora lctica. Bases para el recuento, deteccin e identificacin de salmonellas Las salmonellas no se encuentran en general ms que en pequeos nmeros en los alimentos. Para poner en evidencia esta contaminacin paucimicrobiana, se utiliza tcnicas especficas.

TCNICAS DE DIAGNSTICO CULTIVO Existen muchos mtodos para aislar Salmonella que son de uso universal (8, 13, 16, 23, 34, 44). Ms adelante se describen algunos de los mtodos ms comunes. Todos los medios de cultivo preparados deben someterse a controles de calidad y permitir el crecimiento del microorganismo sospechoso a partir de un inculo pequeo. Debe cultivarse la cepa de referencia en paralelo con las muestras sospechosas para asegurarse de que las pruebas funcionan correctamente. a) MEDIOS DE PREENRIQUECIMIENTO El nmero de salmonelas es normalmente bajo en las heces de los animales asintomticos, en muestras ambientales, en la comida de los animales y en los alimentos, por lo que es necesario utilizar medios de preenriquecimiento para facilitar el aislamiento, tal como el agua de peptona tamponada o el caldo universal de preenriquecimiento. Esto puede permitir que las escasas salmonelas se multipliquen sin que mueran por los efectos txicos de los medios de enriquecimiento, o puede ayudar a la recuperacin de salmonelas que presentan daos subletales, como los debidos a la congelacin, el calentamiento, la exposicin a substancias microbicidas o por desecacin. El pre enriquecimeinto puede no ser el mejor mtodo para aislar cepas poco vigorosas de Salmonella de las heces, como el caso de las cepas adaptadas al hospedador, debido al sobre crecimiento de microorganismos competidores durante el pre enriquecimiento no selectivo. b) MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO Los medios de enriquecimiento son medios lquidos o semislidos que contienen substancias que permiten el crecimiento selectivo de las salmonelas a la vez que inhiben el crecimiento de otras bacterias. Algunos, sin embargo, son tambin relativamente txicos para algunos serotipos de Salmonella, por ejemplo, el
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selenito inhibe S. Cholerasuis, y el colorante verde brillante es txico para muchas cepas de S. Dublin. Tambin se han utilizado las temperaturas elevadas para aumentar la selectividad del medio de enriquecimiento. En algunos laboratorios se utiliza una temperatura de 43C, aunque con algunos medios puede resultar inhibidora; por ejemplo, los medios de tetrationato y de RappaportVassiliadis inhiben las cepas termosensibles, especialmente S. Dublin, y ahora se recomienda 41.5C para incubacin en caldo de Rappaport Vassiliadis. Tambin se puede emplear el enriquecimiento selectivo por movilidad para aumentar la sensibilidad del aislamiento de Salmonella y la utilizacin de medios de enriquecimiento semislidos, como el semislido modificado de Rappaport Vassiliadis o el medio semislido para diagnstico de Salmonella (DIASALM), que pueden proporcionar mayor sensibilidad (42). La composicin del medio, la temperatura y la duracin de la incubacin, y el volumen de las muestras utilizadas como inculo del medio, pueden servir para mejorar la tasa de aislamiento, y se debe tener siempre en cuenta a estas variables. Ejemplos de medios selectivos de enriquecimiento son el de tetrationato sdico, como en el caldo de MullerKauffman, los caldos con selenito F, con selenito cistena, con verde brillante, el de RappaportVassiliadis o el medio semislido de Rappaport Vassiliadis. Se pueden aadir a los medios selectivos substancias como la Ferrioxamina E para mejorar el aislamiento de Salmonella en muestras con limitacin de hierro o de nutrientes como los huevos, agua o suelo. c) MEDIOS SELECTIVOS EN PLACA

Estos son medios selectivos solidificados con agar que permiten un crecimiento diferencial en varios aspectos. Inhiben el crecimiento de bacterias distintas a Salmonella y suministran informacin sobre algunas de las principales caractersticas bioqumicas diferenciales normalmente la incapacidad de fermentar de la lactosa y la produccin de sulfuro de hidrgeno (H2S). Los resultados se obtienen despus de 24 y 48 horas de cultivo a 37C. En dichos medios las salmonelas forman colonias caractersticas que son distintas de las producidas por otras bacterias en la placa, con la posible excepcin de Proteus, Pseudomonas y Citrobacter. En ocasiones, se pueden aislar salmonelas fermentadoras de lactosa y la produccin de H2S puede ser variable. Se pueden detectar de modo ms eficaz tales cepas atpicas cuando se utilizan medios selectivos semislidos. A este respecto, el medio DIASALM es particularmente til ya que se puede realizar una confirmacin provisional por aglutinacin en porta utilizando antisueros polivalentes anti O, antiH o especficos, con lquido de la zona de crecimiento de la placa. Salmonella Abortusovis es un serotipo de

crecimiento lento, y es normal incubar las placas durante 72 horas y utilizar el medio no selectivo de agarsangre. DESCRIPCIN DE LOS AGARES Tetrationato de MULLER KAUFFMANN Es utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella a partir de diversos materiales, especialmente carnes, productos crnicos y otros alimentos. El caldo basal preparado, puede almacenarse durante largo tiempo, pues el tetrationato slo es sinteti zado cuando se aade Yodo antes del uso. Forma de actuacin A partir del tiosulfato, en el medio del cultivo se forma tetrationato al aadir yodo que inhibe el crecimiento de Coliformes y otras bacterias intestinales. Las Salmonellas y tambin Proteus y algunos otros germenes reducen el tetrationato y por lo tanto no son inhibidas. El carbonato clcico tampona el cido sulfurico en la reduccin del tetrationato. La bilis actua estimulando en crecimiento de Salmonella, pero inhibe ms o menos a los grmen es acompaantes. El verde Brillante inhibe sobre todo a los grmenes Gram. Positivos.

Composicin (g/litro: o o o o o o o o Extracto de carne 0.9 Peptona de carne 4.5 Extracto de levadura 1.8 Cloruro sdico 4.5 Carbonato de calcio 25.0 Tiosulfato sdico 40.7 Bilis de buey, desecada 4.75 Aditivos: yoduro potsico 5.0; Yodo 4.0; verde brillante 0.01.

Preparacin

Suspender 82 g/litro y en caso necesario calentar brevemente y enfriar rpidamente. Queda un sedimento de carbonato clcico. No esterilizar en autoclave. Antes de l uso aadir 20 ml/litro de solucin de yodo y yoduro potasico y 10 ml/litro de solucin 0,1% de verde brillante, distribuir en tubos repartiendo previamente de forma homognea el precipitado que eventualmente hubiera podido formarse. Una vez aadidas esta s sustancias no volver a valentar. pH = 7,6 0,2.

AGAR LISINA-HIERRO (LIA) Para demostracin simultanea de lisinadecarboxilasa (LD) y de la formacin de cido sulfuhidrico (H 2 S) para la identificacin de enterobacteriaceas, sobre todo de Samonella y Arizona.

FORMA DE ACTUACIN: La lisina puede se descarboxilada por microorganismos LD positivos que transforman en la amina Cadaverina. Esto produce un viraje a violeta de indicador de pH prpura de bromocresol. Es necesario que se produzca previamente la acidificacin del medio cultivo, por fermentacin de la glucosa. Por este motivo, este medio de cultivo slo puede utilizarse para la diferenciacin de cultivos que fermentan glucosa. Los microorganismos LD negativos, pero fermentadores de la glucosa producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo. La incubacin prolongada puede ocasionar una alcalinizacin en la zona de la superficie del medio de cultivo y en consecuencia se

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produce un viraje al violeta. La formacin de H 2 S produce una coloracin negra debido al sulfuro de hierro producido. COMPOSICIN Peptona de carne 5.0 Extracto de levadura 3.0 D (+) glucosa 1.0 L lisina monoclorhidrato 10.0 Tiosulfato sdico 0.04 Citrato de amonio y hierro (III) 0 .5 Prpura de bromocresol 0.02. Agar agar 12.5

PREPARACIN Disolver 32 g/litro, disolver en tubos Esterilizar en autoclave (15 min a 121 C) Dejar enfriar en posicin inclinada de forma que, al solidificarse, se produzca una columna de unos 3 cm de altu ra, y sobre ella, una superficie inclinada de, por lo menos, la misma longitud. pH: 6.7 0.1 El medio de cultivo preparado es claro y de color gris violeta.

EMPLEO E INTERPRETACIN Este medio nutritivo con el cultivo puro sometido a ensayo, tanto por estra sobre la superficie inclinada como, por picadura centra en la columna vertical subyacente. AGAR SS (SALMONELLA Y SHIGELLA) Llamado tambin agar para Salmonella y Shigella. Agar selectivo para el aislamiento de Salmonellas y Shigellas a partir de heces, alimentos y otros materiales objeto de investigacin. Es formulado para diferenciar fermentadores de la lactosa de los que no la fermentan, con inhibicin de organismos coliformes sin restringir el crecimiento de bacilos gram n egativos Shigella,
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Salmonella. Los pocos organismos que fermentan la lactosa que desarrollan se diferencian fcilmente. COMPOSICIN (g/litro) Peptona 10.0 Lactosa 10.0 Bilis de buey desecada 8.5 Citrato sdico 10.0 Tiosulfato sdico 8.5 Citrato de amonio y hierro (III) 1.0 Verde brillante 0.0003 Rojo neutro 0.025 Agar agar 12.0

PREPARACIN Disolver 60 g/litros y verter en placas NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE pH 7.0 0.1 Las placas con medio de cultivo son claras y parduzcas. FORMA DE ACTUAR El verde brillante, la bilis de buey y la elevada concentracin de Tiosulfato y de citrato inhiben considerablemente la flora acompaante. Con el Tiosulfato e iones de hierro se pone en manifiesto la formacin de sulfuro por el ennegrecimiento d e las correspondientes colonias. Las colonias de coliformes quedan sealadas por la demostracin de la degradacin de lactosa a cido lctico, a cargo del indicador de pH rojo neutro. EMPLEO E INTERPRETACIN

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Sembrar por estrias, la superficie del medio de cultivo con el material de muestra o con el procedente de un cultivo de enriquecimiento previo. Incubacin 18 -24 horas a 37C. Las colonias de grmenes lactosa negativa y las de grmenes lactosa positiva son rosadas hasta rojas. Las colonias de microorganismos formadores de H 2 S presentan un centro negro. AGAR BPLS: Llamado tambin agar Verde brillante Rojo de fenol lactosa sacarosa. Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Salmonella excepto S. typhi a partir de materiales patolgicos, heces, orina, alimentos, etc.

FORMA DE ACTUACIN El Agar BPLS acta segn el mismo princio que el Agar BPL. No obstante, su base nutritiva ms rica y abundante permite un mejor crecimiento de Salmonella. El crecimiento simultneo de grmenes acompaantes, tambin es ms intenso, se inhibe notablemente por el contenido ms elevado de Verde brillante. Puesto que las Salmonellas no pueden degradar ni la lactosa ni la sacaros, el contenido en sacarosa permite, al contrario que el agar BPL, el reconocimiento d e la flora acompaante lactosa positiva dbil o lactosa negativa pero sacarosa positiva.

COMPOSICIN (g/litro) Peptona de carne 5.0 Peptona de casena 5.0 Extracto de carne 5.0 Cloruro sdico 3.0 Hidrogenofosfato dipotsico 2.0 Lactosa 10.0 Sacarosa 10.0 Rojo de fenol 0.08 Verde Brillante 0.0125
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Agar agar 12.0

PREPARACIN Disolver 52 g/litros, esterilizar en autoclave por 15 minutos a 37 C, verter en placas. pH 6.9 0.1 Empleo e interpretacin Sembrar directamente con el material objeto de investigacin, o a partir de un cultivo de enriquecimiento. Deben utilizarse en paralelo medios de cultivo COLONIAS MICROORGANISMOS menos Lactosa y sacarosa inhibidores. Rojo rosados con negativas: salmonella y Incubacin: halo rojo. otros de 18 a 24 horas a 37C.

I.

EQUIPOS Y MATERIALES: Frasco con 225ml de caldo peptonado bufferado o caldo lactosado. Tubos con 10ml de caldo de enriquecimiento selenito-cistina Tubos con 10ml de caldo de enriquecimiento tetrationato seg. MUELLERKAUFFMANN. Placas con agar SS (SALMONELLA-SHIGELLA), o agar Bismuto-sulfito seg. KAUFFMANN) Tubos con agar hierro tres azcar (TSI)

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 Tubos de solucin salina (0.85%NaCl) Antisuero polivalente O (somtico) Pipetas de 10ml Portaobjetos para la prueba serolgica Asas y agujas de inoculacin Bao de agua caliente regulada 43 C + 0.1 o incubadora regulada a 35-37 C

II.

PROCEDIMIENTO:

Los mtodos para el aislamiento de Salmonella se consideran en los siguientes pasos: 1. ENRIQUECIMIENTO NO SELECTIVO:

(DIA LUNES)

Pesar 10 gr de muestra, sembrar en 225 ml de caldo de enriquecimiento caldo peptonado bufferado o alternativamente en 225ml de caldo lactosado. Incubar a 35-37C por 16-24 horas. Este paso es indispensable para alimentos desecados liofilizados. Agregar una cuantos gotas de Iodo a TETRATIONATO

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 pesar 10g de muestra de salmonella en una balanza analtica.

Incubar a 35-37C por 16-24 horas.

DIA MIERCOLES
Una vez incubadas los matraces con las muestras durante 48 horas se procedi a sembrar a cada placa, con ayuda de una asa de inoculacin

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 Se los lleva a la incubadora por 24 horas a 37C

DIA JUEVES

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RESULTADOS: SS BPLS

LACTOSA (-)

LACTOSA

Luego de 24 horas de incubacin a 37C se procedi a sacar los medios que estaban en los tubos y colocarlos con un asa de inoculacin en placas petri. LIA TSI

SS

SS

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DIA VIERNES
RESULTADOS: BPLS SS

LIA

LIA

TSI

TSI

2. ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO.Llevar 1 ml de cultivo anterior a 10ml de caldo ede enriquecimiento selenito y a 10ml de caldo de enriquecimiento, tetrationato seg. Mueller y Kauffmann. Incubar a 43C por 24 horas. O suspender directamente a 100ml de caldo tetrationato unos 10gr de la materia objeto de investigacin, incubar a 43C durante 18-24 horas a 37C durante 48 horas.

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3. AISLAMIENTO EN PLACAS DE AGAR SELECTIVO.A partir de los cultivos incubados realizar siembras por estras sobre agar BPL y sobre agar SS. Incubar a 35-37C el agar BPL durante 24 horas y el agar SS 1824C a 37 C Examinar las placas: En el agar BPL las colonias sospechosas de salmonella son incoloras, de un color intermedio entre el rosa y el fucsia o entre taslcidas y opacas y el medio que las rodea. PRUEBAS BIOQUIMICAS:

Elegir 2 o mas colonias sospechosas de cada placa. si se trabaja con agar BPL y agar bismuto sulfito, purificar en placas con agar Mac Conkey.sebrar en agar nutritivo inclinado. Incubar a 35 37C por 24 horas. Comprobar la pureza de los cultivos mediante la coloracin Gram. Realizar prueba TSI. Si se trabaja con el agar BPL y SS, realizar la prueba TSI y adems pruebas biquimicas. PRUEBA TSI: degradacin lactosa, sacarosa, glucosa, produccin de gas y H 2S; en el medio de cultivo en tubos de agar inclinado de hierro tres azucares, el cual se incuba por puntura y estra se incuba a 35 37C por 24 horas. Reacciones positivas: parte inclinada: reaccin alcalina (color rojo), lactosa y sacarosa negativa. Parte columnar: reaccin acida (color amarillo), glucosa positiva con o sin produccin de H2S.

OTRAS PRUEBAS VER TABLA: PRUEBA SEROLODICA: Tcnica para la reaccin con el antisuero polivalente o (somtica) en portaobjetos. a. Ensayar primero el antisuero con cultivo testigos a fin de comprobar su eficiencia.

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b. Usando un marcador de vidrio dividir la lamina portaobjetos en dos secciones de 1x2cm. c. Depositar una pequea cantidad de cultivo joven en agar nutritivo en la parte superior de cada una de las secciones marcadas. d. Depositar una gota de una solucin de cloruro de sodio al 0,8% estril en la parte inferos de cada seccin marcada. Con una aguja de inoculacin estril emulsificar el cultivo con la solucin salina en cada una de las secciones. e. Aadir una gota de antisuero Salmonella polivalente 0 a una de los cultivos emulsionadas y mezclar con una asa a aguja esteril. 1. Si se produce una aglutinacin en la mezcla cultivo solucin salina suero y no en la mezcla cultivo solucin salina se considerara como prueba positiva. 2. Se considera como una prueba negativa si no produce aglutinacin en la mezcla cultivo solucin salina. Estos cultivos debern probarse con antisuero polivalente H (flagela). 3. Se considerar no especfico sino se produce aglutinacin en ambos mezclas. En este caso ser necesario recurrir a las pruebas adicionales descritas por EDWARDS y EWING (1972) f. Imprimir al portaobjetos movimientos de balance adecuados durante 1 minuto hasta conseguir la mezcla completa. g. Observar la reaccin sobre un fondo oscuro.

III.

RESULTADOS:

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ENNEGRECIMIE NTO (SALMONELLA GALLINARUM)

AMARILLOROJO (SALMONELL A TYPHI)

CITROBACTER

AMARILLOROJO (SALMONELLA TYPHI )

AL FAECALIS

CONCLUSIONES:

Puesto que la Salmonella no puede degradar Lactosa ni Sacarosa, el contenido de la flora acompaante lactosa positiva debil o lactosa negativa pero sacarosa positiva. Las colonias del agar SS suelen ser incoloras trasparentes, aunque tambin pueden presentar color canela suave, ligeramente roscea o amarillenta. IV. BIBLIOGRAFA:
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 http://es.wikipedia.org/wiki/Salmonella http://www.tdr.cesca.es/TESIS_UAB/AVAILABLE/TDX-0611104152229/wjms1de1.pdf http://www.oie.int/esp/normes/mmanual/pdf_es/2.10.03_Salmonelosis.p df http://www.scribd.com/doc/6593194/Microbiologia-de-AlimentosPractica-n-07Deteccion-de-Salmonella

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