Revista QuímicaViva - Número 1, año 14, abril 2015 - [email protected].

ar

Biodegradación parcial de aceites residuales usados utilizando

Aspergillus niger, Rhizopus sp. y Saccharomyces cerevisiae

Márquez-Riquel María1, Navas-Yamarte Patricia1,2,Yegres Francisco2, Vivas-Espejo Carlos2

1
Universidad Nacional Experimental Politécnica de la Fuerza Armada (UNEFA-Falcón-Sede
Coro)
2
Universidad Nacional Experimental Francisco de Miranda (UNEFM-LIADSA-Coro, Falcón)
Venezuela

[email protected]

Recibido 02/02/2015 - Aceptado 11/03/2015

Resumen

Los aceites residuales usados son sustancias contaminantes que no se eliminan al ser
desechados por el desagüe, llegando a los ríos, lagos y mares formando una película
superficial que impide el intercambio de oxígeno, alterando el ecosistema marino con la
liberación de agentes contaminantes. El propósito de este trabajo fue determinar la capacidad
degradadora de los hongos Aspergillus niger (UNEFM-M2007-26), Rhizopus sp. (UNEFM-
M2008-16) y Saccharomyces cerevisiae (UNEFM16) sobre los aceites residuales usados. Se
prepararon tres concentraciones de aceite residuales usados (ARU) (vegetal y lubricante) 10,
20 y 30 % de cada tipo de ARU respectivamente. Se determinaron las propiedades físicas
antes y después del tratamiento, así como el crecimiento radial y biomásico de las especies
fúngicas en estudio, y se determinó también, la degradación parcial de los aceites residuales
usados por el método de consumo lipídico. Los resultados arrojaron que las tres cepas fúngicas
que presentaron mayor crecimiento fue en la concentración de ARU (vegetal y lubricante) al
10%. Se muestran cambios significativos en las propiedades físicas de los ARUL después del
biotratamiento, como disminución en la viscosidad por Rhizopus sp. 139,57 Cst (±0,82),
seguido por S. cerevisiae 140,43 Cst(±1,31) y A. niger 144,54 Cst (±1,23) con respecto al
control 156,81 (±0,97). La especie A. niger demostró mayor crecimiento radial y biomásico en 6
días de exposición con Czapek dox+10% ARU (vegetal y lubricante) aunado al mayor consumo
lipídico de 61,74% (±0,16) y 59,69% (±0,6) respectivamente.

Palabras Claves: biodegradación, aceites residuales usados, Aspergillus niger, Rhizopus sp.,
Saccharomyces cerevisiae.

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Partial biodegradation of waste oils using Aspergillus niger, Rhizopus sp.

and Saccharomyces cerevisiae

Abstract

The residual oils are contaminants that are not removed when discarded down the drain into
rivers, lakes and seas form a surface film that prevents oxygen exchange, altering the marine
ecosystem with the release of pollutants. The purpose of this study was to determine the
degrading ability of fungi Aspergillus niger (UNEFM - M2007-26), Rhizopus sp. (UNEFM -
M2008-16) and Saccharomyces cerevisiae (UNEFM-16) on used residual oils. Three
concentrations of residual oil (ARU) (plant and lubricant) 10, 20 and 30% of each type of ARU
were prepared respectively. Physical properties and biomass radial growth of fungal species
under study were determined before and after treatment, as well as, and it is also determined,
the partial degradation of the residual oils by the method of lipid consumption. The results
showed that the three fungal strains with the highest growth was in the concentration of ARU
(plant and lubricant) to 10%. Rhizopus sp. 139,57 Cst (±0,82), followed by S. cerevisiae 140,43
Cst (±1,31) and A. niger 144,54 Cst (±1,23)showed significant changes in the physical
properties of ARUL after biotreatment as decrease in viscosity from control 156,81 (± 0,97). The
species A. niger and biomass showed greater radial growth in 6 days of exposure to Czapek
dox+10 % ARU (plant and lubricant) coupled with high lipid consumption of 61,74 % (±0,16) and
59,69 % (±0,60) respectively.

Keywords: biodegradation, used waste oil, Aspergillus sniger, Rhizopus sp, Saccharomyces
cerevisiae. .

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Introducción

Los aceites usados, tanto los comestibles como automotrices por lo general son vertidos en la
red de alcantarillado, produciendo impacto sobre las aguas, afectando flora y fauna, tanto
marina como terrestre; hoy en día son considerados potencialmente peligrosos debido a su
persistencia y habilidad de esparcirse en grandes áreas de suelo y agua, formando una
película que no permite el intercambio de oxígeno, lo que produce rápidamente una
degradación de la calidad del ambiente, además existe el riesgo adicional de la liberación de
agentes contaminantes tóxicos presentes como es el caso de los hidrocarburos policíclicos
aromáticos, dioxinas, metales pesados, compuestos clorados, entre otros [1].

La normativa ambiental reporta como máximo 20 mg/L, de aceites naturales vertidos en ríos y
espacios naturales. También reporta que si el vertido a un sistema municipal y posterior
procesamiento, lo máximo sería 150 mg/L [1, 2]. La composición de la base orgánica está
formada de cientos de miles de compuestos orgánicos, siendo la gran mayoría compuestos
aromáticos polinucleares. Algunos de estos compuestos aromáticos polinucleares
(principalmente estructuras de 4, 5 y 6 anillos) son considerados cancerígenos como el
benzopireno, los aditivos de la base orgánica del aceite que pueden llegar a constituir hasta un
30 % en volumen del total de aceite virgen, típicamente contienen constituyentes inorgánicos
como azufre, nitrógeno, compuestos halogenados y trazas de metales [3].

A lo antes mencionado, hoy se plantea la necesidad de desarrollar alternativas para solucionar

de forma permanente y menos costosa el problema de los espacios contaminados [4]. Los
procesos biológicos son los más efectivos y menos costosos, aunque no los más rápidos en
solucionar el problema. La bioremediación utiliza la capacidad del sistema enzimático de los
organismos y microorganismos para degradar y transformar contaminantes, tanto de los
ecosistemas terrestres como acuáticos, presentando un potencial de mitigación de la
contaminación ambiental [4]. Venezuela no escapa a esta realidad global, es por ello que se
tiene como hipótesis que la implementación de tratamiento microbiano con cepas aerógenas de
fácil mantenimiento y recolección como el Aspergillus niger, Rhizopus sp y Saccharomyces
cerevisiae sean capaces de degradar los aceites residuales contaminantes del ambiente, por lo
cual se propone Determinar la capacidad degradadora de los hongos Aspergillus niger
(UNEFM-M2007-26), Rhizopus sp. (UNEFM-M2008-16) y Saccharomyces cerevisiae
(UNEFM16) sobre los aceites residuales usados (vegetal y lubricante).

Materiales y Métodos

Los microorganismos utilizados Aspergillus niger (UNEFM-M2007-26), Rhizopus sp.

(UNEFM-M2008-16) y Saccharomyces cerevisiae (UNEFM16) fueron suministrados por la
micoteca del Laboratorio de Investigación y Apoyo Docente Santa Ana (LIADSA-UNEFM) Coro-
Venezuela.
Toma de muestra de los aceites residuales usados vegetal (ARU.V) marca COPOSA obtenido
en un restaurant de comida rápida, y el aceite lubricante residual SHELL Rimula SAE50

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(ARU.L) obtenido en un centro de lubricación SHELL ubicados en la ciudad de Santa Ana de

Coro, Falcón – Venezuela.

Propiedades físico-químicas de ARU. Se determinó viscosidad (CSt) según la Norma

COVENIN [5], el punto de ebullición (°C) por Reyes M. y Márquez M.,[6], el perfil de ácidos
grasos (ARU.V) por cromatografía de gases Norma COVENIN [7] y para ARU.L se empleó la
determinación de hidrocarburos totales por el método normalizado para agua 5520B [8], antes
y después del biotratamiento.

Cinética de crecimiento radial. Las especies fúngicas en estudio fue inoculando por triplicado
cada cepa en placas de Petri en medio sólido Czapekdox+Sacarosa (control +) y Czapekdox-+
ARU (tratamientos) se incubaron a temperatura de 28-30 °C en estufa por 10 días midiéndose
el diámetro de las colonias diariamente con un vernier.

Cinética de crecimiento por densidad óptica.Las especies fúngicas se llevó a cabo

inoculando por triplicado cada cepa en matraces de 250 mL conteniendo hasta completar un
volumen de medio de 100mL de Czapekdox sin agar, se realizó la medición del índice de
transmitancia (s-1) cada 72 horas por 21 días, usando un colorímetro digital Cole Parmer
modelo 5965-50. Las concentraciones de los aceites (ARUV. y ARUL) fueron de 10, 20 y 30%
v/v respectivamente.

Valores cinéticos de crecimiento. Se determinaron los valores cinéticos mediante el uso de

ecuaciones matemáticas que se describen a continuación [9]:

• Velocidad especifica de crecimiento (µ): (3)

Donde; Xf= Biomasa final, Xi= Biomasa Inicial, Ti= tiempo Inicial; Tf= Tiempo Final.

• Productividad (Pr): (4)

Donde; µ= Velocidad especifica de crecimiento. x= Biomasa Final.

• Incremento de la Biomasa (I.B): (5)

Donde; Xf= Biomasa final; Xi= Biomasa Inicial.

Biodegradación se realizó por el método del consumo lipídico [8], el cual se llevó a cabo por
triplicado cada especie fúngica, pesando previamente el matraz con medio Czapekdox+ARU
(vegetal y lubricante) y por diferencia de peso inicial versus final (tratado) por 20 días a 28-
30°C. La biodegradación se determinó por el índice de degradación (I.D).

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Índice de Degradación (I.D): (6)

Donde: Xi= capa lipídica inicial; Xf= capa lipídica final

Resultados y Discusión

La tabla 1 muestra los valores referentes al punto de ebullición y viscosidad de los ARU vegetal
y lubricante sin tratar y después del biotratamiento, observándose disminución entre cada
especie fúngica y el control ARUV en las temperaturas de ebullición la especie A. niger es
menor con respecto a Rhizopus sp. y S. cerevisiae, en relación a la viscosidad los cambios no
fueron significativos entre las especies y el control. Mientras que, en el ARUL los cambios
observados tanto para el punto de ebullición como para la viscosidad de los hongos en estudio
fueron significativos frente al control, presentando la menor viscosidad en el tratado con
Rhizopus sp. con respecto a A. niger y S. cerevisiae.

Fuente: Laboratorio de análisis fisicoquímico del IUTAG, 2014. Se presenta el promedio y la

desviación estándar de n=3.

Hay autores como Lee et al. [10] y Franco et al. [11], que reportan las temperaturas de
ebullición de los ácidos grasos de origen vegetal puros como la trioleína (Oleico) en 415,95 °C
y 432,32 °C, mientras que para la trilinoleína (Linoleico) 414,1 °C, por lo tanto, el ARUV
utilizado presento una temperatura de ebullición menor esto pudo deberse a se presenta una
mezcla de ácidos grasos a diferencia de los reportados en la literatura pudiendo inferir que
estos valores están aceptables considerando que el aceite se ha descompuesto por el uso del
mismo.

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La figura 1 muestra el crecimiento radial de las especies A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae
en presencia del medio definido Czapekdox+ ARU 10%v/v para el tratamiento con ARUV la
especie A. niger a los 10 días fue la que mostró mayor halo de crecimiento radial 24,37 mm
(±2,51) y Rhizopus sp. de 15,40 mm (±0,56), y S. cerevisiae fue la que menos halo radial
presento. Sin embargo, el tratamiento con ARUL la especie que mayor radio presento fue
Rhizopus sp. 51,23mm (±3,56) seguida de A. niger con 28,77mm (±8,02) y S. cerevisiae con
8,37 mm (±0,74), demostrando que las especies que mejor toleran las fuentes de carbono
ARUV y ARUL son A. niger y Rhizopus sp. en el tiempo.

Figura 1. Crecimiento radial de las especies A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae en medio
mineral A)Czapekdox+ARUV 10%v/v, B)Czapekdox+ARUL10%v/v. Las barras de error
representan la media de n=3.

Seguidamente la figura 2 muestra el crecimiento biomásico frente a ARUV con 20 días de

exposición siendo las especies predominantes A. niger con 1,122 g (±0,109) de biomasa,
Rhizopus sp.0,646 g (±0,045) y finalmente S. cerevisiae con 0,437 g (±0,101). Mientras que el

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uso de ARUL la cepa A. niger produce 0,961g (±0,134) de biomasa seguida por Rhizopus sp.
0,435 g (±0,028) y finalmente la especie que presento menor biomasa S. cerevisiae con 0,292g
(±0,006), por lo que se puede inducir que la especie fúngica que mejor aprovecho las fuentes
de carbono y energía de los aceites usados vegetal y lubricante fueron A. niger y Rhizopus sp.

Figura 2. Crecimiento Biomásico de las cepas A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae en medio
mineral A)Czapekdox+ ARUV 10%v/v, B)Czapekdox+ARUL 10%v/v. Las barras de error
representan la media de n=3.

La tabla 2 muestra los resultados de la cinética de crecimiento en el medio definido

Czapekdox+ ARU vegetal y lubricante, siendo A. niger la especie fúngica con los valores más
altos en µ=0,17 (±0,02) y 0,243 (±0,007), Pr=0,200 (±0,021) y 0,235 (±0,005) y el %IB=95,23%
(±0,91) y 98,71%(±0,61) respectivamente, seguido por Rhizopus sp. y la especie con menor
valores de cinética de crecimiento fue S. cerevisiae con %IB de 88,24% (±1,76) en ARUL, por
lo que se confirma que el aprovechamiento de los aceites residuales usados como fuente de
carbono y energía por la especie A. niger y Rhizopus sp.

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Fuente: Laboratorio de Análisis Microbiológico LIADSA-UNEFM, 2014. Se presentan promedios

y desviación estándar de n=3.

La figura 3 muestra los resultados del perfil lipídico realizado a los ARUV sin tratar como
biotratados por los hongos A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae, donde no se observan
cambios significativos en la composición del aceite biotratado con respecto al control, por lo
general las grasas y aceites contienen más de diez tipos de ácidos grasos, los cuales tienen
entre 12 y 22 carbonos, presentando en mayor proporción los que poseen en sus cadenas
entre 16 y 18 carbonos [12, 13]. De lo antes mencionado, algunos de los ácidos grasos pueden
ser saturados, mono insaturados y poliinsaturados [12, 13]. Thompson [14], caracterizo al
aceite usado presentando la composición porcentual en peso de los ácidos grasos, indicando
los principales como palmítico (C16) 18,7%, oleico (C18:1) 40,5%, linoleico (C18:2) 28,0%. Por
lo cual, el ARUV control utilizado presenta características similares a los presentados por
Thompson [14].

Con respecto a lo antes mencionado, uno de los ácidos grasos que mostró cambios en la
composición fue el ácido linoleico2 presentando una disminución significativa en la composición
(38,23% ±0,93) frente al control sin tratamiento (42,11% ±1,10) por la especie S. cerevisiae lo
que infiere que esta levadura fue capaz de romper y/o transformar esta fracción en otro
compuesto que pudiese ser en acido palmítico (18,1% ±1,15) ya que presenta un aumento
significativo frente al control (13,77% ±0,75). Aunque las otras especies no hayan presentado
cambios significativos en la composición lipídica del aceite no quiere decir que estas no sean
capaces de transformarlo.

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Figura 3. Perfil de Ácidos grasos presentes en el ARUV sin tratar (control) y los biotratados por
las especies A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae. Las barras de error representan la media y
la desviación estándar de n=3.

En la figura 4 se muestran los resultados del consumo de la capa lipídica de ARUV y ARUL
tratada con las especies fúngicas A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae en 20 días de
tratamiento, las cepas A. niger y Rhizopus sp. fueron las que consumieron en mayor proporción
la capa lipídica del ARUV en 2,3811 g (±0,422) y 2,751 g (±0,112) respectivamente, mientras
que la capa del lubricante el consumo alcanzado fue igual por A. niger y S. cerevisiae en 3,059
g (±0,09) y 3,060 g (±0,12) respectivamente, mientras que Rhizopus sp. fue el que presento
menor consumo 4,198 g (±0,43), por lo que se infiere que la biodegradación parcial de los
aceites residuales usados fue lograda por las especies fúngicas en estudio.

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Figura 4. Perdida de la capa lipídica por las especies A. niger, Rhizopus sp. y S. cerevisiae
A)En medio Czapekdox+ARUV 10%v/v, B)En Czapekdox+ARUL 10%v/v. Las barras de error
representan la media y la desviación estándar de n=3.

En la tabla 3 se indican los resultados del índice de degradación de los aceites residuales
usados vegetal y lubricante en el periodo de tiempo de 21 días de la investigación alcanzando
el mayor porcentaje la cepa A. niger con 61,74% (±0,16) y 59,69% (±0,6) respectivamente,
mientras que S. cerevisiae logro el menor índice de degradación en ARUV y ARUL con 39,50%
(±0,23) y 54,22% (±0,14) respectivamente, asimismo, Rhizopus sp. presentó el menor registro
obteniendo 50,67% (±0,1) y 45,10% (±0,17) que A. niger en ARUV pero mayor que S.
cerevisiae en ARUL, por lo que se presume una degradación parcial de los aceites residuales
usados.

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Fuente: Laboratorio de Análisis Microbiológico LIADSA-UNEFM, 2014. Se presentan promedios

y desviación estándar de n=3.

Conclusiones

9 Se determinó que las tres especies fúngicas estudiadas crecen en presencia de aceites
residuales como única fuente de carbono, por lo cual las mismas cuentan con el sistema
enzimático requerido para la degradación y/o transformación de este tipo de sustancias. Siendo
la concentración óptima de los aceites residuales en el medio de cultivo Czapekdoxde 10% v/v
que garantiza el mayor crecimiento de las especies fúngicas Aspergillus niger, Rhizopus sp. y
Saccharomyces cerevisiae.
9 Se demostró que los aceites residuales presentan cambios significativos de sus
propiedades físicas fundamentales después del biotratamiento con las especies fúngicas
estudiadas. Mientras que, en la composición química del aceite vegetal residual no se observó
cambios significativos en el perfil de ácidos grasos después del biotratamiento, con la
excepción del ácido linolenico2 el cual presentó una ligera disminución significativa en
presencia de la especie fúngica Saccharomyces cerevisiae .
9 Se demostró que Aspergillus niger es la cepa fúngica con mayor potencial
biodegradador de aceites residuales, ya que el mismo obtuvo los valores más altos en
incremento de la biomasa y productividad tanto para el ARUV como para ARUL obteniéndose
un porcentaje de rendimiento en consumo del lípido de 61,74% (±0,16) y 59,69% (±0,6)
respectivamente.

Agradecimientos

Los autores agradecen al personal del IUTAG, CICBA-UNEFM por facilitar los espacios y
equipos para la realización de este trabajo.

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