Práctica 2
Práctica 2
Práctica 2
Integrantes:
Ignacio Barbosa Gámez
Susana Rangel Rodríguez
Karla Paola Caballero Montoya
Alejandro Alcaraz González
María del Carmen Martí Amezquita
José de Jesús Rodríguez Romero
Objetivo:
Determinar la actividad enzimática de la polifenoloxidasa extraída de una
manzana, utilizando como sustrato catecol a diferentes concentraciones;
empleando para la cuantificación de la actividad métodos
espectrofotométricos.
Introducción:
En Bioquímica, se llaman enzimas las sustancias de naturaleza proteíca que
catalizan reacciones químicas. En estas reacciones, las moléculas sobre las
que actúa la enzima en el comienzo del proceso son llamadas sustratos, y
estas los convierten en diferentes moléculas, llamados los productos.
Existen diversos métodos para medir la velocidad de una reacción
enzimática. La espectrofotometría que permite detectar cambios en la
absorbancia de luz por parte del sustrato o del producto (según la
concentración de estos) y la radiometría implica incorporación o liberación
de radiactividad para medir la cantidad de producto obtenido por tiempo.
Los ensayos espectrofotométricos son los más utilizados, ya que permiten
medir la velocidad de la reacción de forma continua. Por el contrario, los
ensayos radiométricos requieren retirar las muestras para medirlas, por lo
que son ensayos discontinuos.
Algunos factores que pueden modificar la actividad enzimática son el pH, la
temperatura y la concentración salina.
Metodología:
Diagrama de Flujo:
CALCULOS
AR CANTIDAD DE REACTIVO DERIVADA DE LOS CALULOS
PREPARACION DE LA SOLUCION
CONSERVACION DE LA MEZCLA A 6º C
CENTRIFUGACION
CUANTIFICACION EN EL ESPECTOFOTROMETRO
Práctica terminada
Cálculos y Resultados:
Preparación de la solución de catecol 0.02 M:
X= 2.202 gr de catecol/L
Solución de 50ml de Catecol 0.02M = 0.1101g
Calculando la actividad:
Actividad 1 1.42 2 4
Inversos:
Cálculo de Km y Vmáx:
Dado a que la línea de tendencia tiene una muy pequeña desviación, y los
puntos finales e iniciales concuerdan, podemos usar la ecuación de dicha
línea para determinar Km y Vmáx.
Discusión:
Observando el comportamiento de la curva en la grafica 1, pudimos deducir
que la concentración a la cual estaba el sustrato traería consigo una cinética
no ideal.
En la gráfica 2, observamos que la unidad de actividad con respecto a la
concentración mostraba una inconsistencia, ya que la concentración 0.02 M
mostró la misma actividad que la 0.06M, siendo esta una irregularidad
bastante extraña de acuerdo al procedimiento seguido, el cual fue tal como
había sido propuesto.
Sin embargo, al calcular la Km y la Vmáx, no se toma en cuenta el dato
donde inverso de la actividad de la enzima baja (gráfico #3), ya que a esa
concentración se encuentra fuera del rango recta de la cinética enzimática
que se necesita para obtener los datos de Km y Vmáx.
Cuestionario:
Evidencias:
Referencias:
Leonel Villarreal.- DETERMINACIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMATICA E
INACTIVACION DE PEROXIDASA [JUNIO, 2008]
Disponible en Web: http://www.buenastareas.com/ensayos/Determinacion-
De-Actividad-Enzimatica/610243.html
Fecha de Consulta: [Jueves, 14 de octubre 2010]