Universidad Autónoma de Yucatán

Facultad de Ingeniería Química

Microbiología en la Industria
Alimentaria

Informe

U1ADA2. Cultivo y cuantificación de

microorganismos.

Integrantes:
Rodríguez Quintal, Brenda Isabel
Puc Pool, Didier Aaron
Torres Cadena, Jimena
Pinto Franco, Patricia

Mérida, Yucatán, México a 29 de enero-7 de febrero de 2019

INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes y otros componentes que crean las
condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos, los alimentos contienen
gran cantidad de nutrientes convirtiéndose en un medio de cultivo en los cuales puede
existir presencia microbiana, algunos alimentos como los productos lácteos incluyen
microorganismos que son beneficiosos para la salud en diferentes cantidades (Pelayo,
2010).

La preparación del medio de cultivo se reduce a pesar una cantidad deseada y disolverla
en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Antes de su esterilización, los
medios se reparten en los recipientes adecuados (tubos, matraces, etc.) y se esterilizan en
la autoclave, una vez finalizada la esterilización los medios se dejan enfriar a temperatura
ambiente. Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de
ellas en un ambiente aséptico (Universidad de Granada España, 2018). Para conocer la
cantidad de estos en el material se realizan pruebas de recuento de las Unidades
Formadoras de Colonias por mililitro (UFC/mL), estas se hacen por esparcido de porciones
diluidas del material a inocular sobre la superficie del agar, después de la incubación se
cuentan las UFC, su número se multiplica por el factor de dilución y se obtiene el recuento
de bacterias funcionales presentes en el material original (Rodríguez et al, 2005).

OBJETIVOS GENERALES
● Familiarizar al alumno con el material, equipos y procedimientos generales para la
preparación de medios de cultivo e Identificar las características de diferentes
medios de cultivo según su función.
● Revisar los fundamentos del aislamiento de microorganismos y ensayar el
aislamiento de bacterias provenientes de productos lácteos fermentados, utilizando
recuento en placa.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Adquirir las habilidades y cuidados apropiados para la elaboración y siembra de
medios de cultivo.
● Identificar el cultivo apropiado para realizar la estimación de UFC en un determinado
producto.
● Distinguir la calidad de los diferentes productos lácteos elaborados por diversos
proveedores.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
El proceso experimental fue realizado con una muestra de Yogur Durazno de la marca “Lala”, adquirido en el Oxxo situado a las
afueras del CCEI.

➢ Primera sesión

Fue ajustado el pH
Se realizaron los con ayuda de un
Se realizaron las potenciómetro y HCl
cálculos y se paron Al medio LS se le Se esterilizaron los
disoluciones de los 0.4 N en cada medio
las cantidades medios de cultivo a
necesarias para
fue añadido 1 mL medios de cultivo según el fabricante. 121 °C por 15
de la solución con agua destilada
preparar 60 mL de A. N. = 7.3 minutos y se dejaron
TTZ. (con agar) en
los medios de incubar por 48 horas.
matraces de 125 mL. P. D. = 5.1
cultivo.
LS = 7.2

➢ Segunda sesión

Cada medio de Los medios sólidos

cultivo fue retirado Se dejaron fueron
del baño maría y solidificar los resguardados para
vertido en cajas medios cerca de ser utilizados en el
petri en cantidades 20 minutos. cultivo de la
iguales. siguiente sesión.
➢ Tercera sesión

● Aislamiento cualitativo

Fue tomada una Fue incubada

Fue colocada en
pequeña durante 48 horas
1 caja petri con
El área de cultivo cantidad de a 42°C para la
agar LS por la
fue esterilada. muestra de posterior
técnica de
yogurth con un observación de
estriado.
isopo. UFC.

● Análisis cuantitativo

Se tomaron 100
Se prepararon Se inocularon
μL de la primera Lo mismo Los volúmenes
diluciones de la todas las
dilución y se ocurrió con el fueron
muestra hasta diluciones y se
depositaron en medio LS pero distribuídos con
10-6 en tubos de incubaron las
cajas de medio con 50 μL. un asa digraskly.
ensayo. cajas por 48 hr.
MRS.
 ➢ Cuarta sesión

Los medios Se
cultivados observaron
fueron y analizaron
sacados de los
su resultados
incubación. obtenidos.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
A pesar de haber realizado la elaboración de los medios de cultivo de papa dextrosa y agar
nutritivo, éstos no fueron utilizados para el cultivo y el aislamiento de los lactobacilos de la
muestra ya que, tanto el agar nutritivo como la papa dextrosa no fueron los indicados para
esta ocasión. El agar nutritivo es un medio de cultivo no diferencial ni selectivo, este es un
medio rico para el cultivo de microorganismos en general, por lo que el aislamiento no
podría haberse efectuado (NEOGEN, sin fecha) Por otro lado, la papa dextrosa es un medio
selectivo que permite el crecimiento de hongos y levaduras, por lo tanto, no se habría podido
conseguir el crecimiento de las bacterias (lactobacilos) presentes en la muestra de yogurt
(ACUMEDIA, 2015).
Los medios que se utilizaron para el cultivo de la muestra de yogurt fueron los LS y MRS
que, a diferencia de los medios anteriores, los medios LS y MRS son agares selectivos para
el aislamiento y recuento de lactobacilos en alimentos y productos lácteos (Dickinson and
Company, 2003). Después del proceso elaborativo de medios y del cultivo de estos, no fue
posible obtener resultados positivos en el experimento pues no se encontraron UFCs en
ninguna de las cajas Petri cultivadas. Adicionado a lo anterior, se encontraron algunas
evidencias de contaminación por hongos en los medios de cultivo (véase ANEXO A. Fig.
1), por lo tanto, no fue posible el conteo de UFCs en la muestra de Yogur “Lala”. El resultado
negativo de UFCs en la muestra presenta una clara evidencia de la casi nula existencia de
lactobacilos en el producto láctico a pesar de su nombramiento en la etiqueta de información
nutrimental, sin embargo, siempre existe la probabilidad de que un factor externo (físico,
biológico o de manipulación) haya podido interferir con los resultados como lo es el tiempo
de cultivo, los microorganismos aproximadamente solo viven por 20 minutos para su
siembra, después de ese tiempo mueren.
En la Tabla 1 (véase ANEXO A. Tabla 1) se hace una relación de los resultados obtenidos
de diferentes muestras de yogurt provenientes de otras marcas. Se puede distinguir que el
crecimiento de microorganismos varía dependiendo la marca del producto, donde en
algunos casos se formaron múltiples colonias, en otros algunas cuantas y, en el caso del
yogurt durazno “LaLa”, no hubo ningún crecimiento. Es posible que se deba a la manera en
que estén procesados los productos o bien, que sea por voluntad de los productores que
así sea para mejorar sus precios y poder ser consumidos con mayor frecuencia.
En cuanto a los resultados cuantitativos, los de danone (Activia y Benegastro) fue imposible
contar las colonias formadas en las primeras diluciones debido a la gran cantidad de UFC
encontradas, sin embargo, en las diluciones a partir de 10-3 y 10-4 Activia y Benegastro
correspondientemente, se pudieron obtener valores concretos. En el caso del análisis del
yogur Activia Danone se observa que las UFC/mL descienden numéricamente conforme
aumenta el grado de dilución, que va de 10-1 a 10-6, hasta llegar a los 7 UFC/mL de yogur y
no presentar colonias en la dilución 10-7. El yogur Danone Benegastro obtuvo la mayor
cantidad de UFC/mL (Véase el ANEXO A, Fig. 2) donde se pudieron contabilizar a partir de
la dilución 10-4 en adelante, esto probablemente se deber a que el Benegastro es un
producto fermentado para ayudar a la acidez en el intestino a través de microorganismos
probióticos.
Los cálculos utilizados para obtener los resultados de la Tabla 1 consistieron en la
multiplicación de las colonias contabilizadas de la dilución 10-4 por los respectivos factores
de dilución, esta dilución resultó ser la más confiable ya que su contenido de UFC estaba
entre 30 y 300, lo que la hace ser más exacta en los resultados sin generar demasiada
incertidumbre. Los yogurts de la marca Danone fueron los únicos que presentaron UFC en
esta dilución y que por ello son los únicos a los que se les puede atribuir un valor razonable.
Es de importancia mencionar que existe la Norma Oficial Mexicana NOM-181-SCFI-2010
(Secretaría de Economía, 2010) que indica la cantidad mínima de UFC/g que debe tener
un yogurt para poner en la información nutrimental la denominación “cultivo vivo”, sin
embargo, al no conocer las densidades de las muestras analizadas, por el momento, es
imposible verificar que efectivamente se tiene un cumplimiento de esta.

CONCLUSIÓN
El cultivo de la muestra de yogurt durazno “LaLa” reflejó un resultado totalmente negativo
al experimento, no habiéndose encontrado ninguna UFC en alguna de las cajas Petri
cultivadas. Se atribuyen los resultados a una mala manipulación del material y a una
evidente minoría de cultivo microbiano dentro de la muestra, indicando una insuficiente
calidad nutricional en el producto del proveedor.
Las muestras de yogurt de otras marcas, por el contrario, obtuvieron mejores resultados
con las cantidades de 5.1 x 106 y 1.44 x 107 UFC/mL en los productos de Activia y Danone
Benegastro, respectivamente.
Las calidades de los productos lácteos con cultivos microbianos varían dependiendo de las
marcas y especificaciones de los proveedores, la elección de cada uno de ellos depende
de los consumidores y de sus preferencias por otras características como sabor, color, etc.
La calidad del producto no se define en su totalidad por el contenido de UFC, sin embargo,
existe la normatividad oficial que los productores deben cumplir para el aseguramiento
nutricional de las personas.
Anexo A

Fig. 1 Fig. 2

Fig. 1. Contaminación de medio Fig. 2. UFCs presentes en la dilución

de cultivo por hongo. 10-4 de la muestra de Danone
Benegastro.

Tabla 1. Resultados de otras muestras de diferentes marcas de yogurt.

Muestra Estriado 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6

Activia No hubo 100 µL - 100 µL - 100 µL - ✗
colonias Incontable Incontable 296 UFC 51 UFC 7 UFC
separadas
Yoplait Colonias 100 µL- ✗ ✗ ✗ ✗ ✗
separadas 11 UFC
Danone 1 Colonia 100 µL - 1 100 µL - 1 ✗ ✗ ✗ ✗
UFC UFC
Danone Colonias Incontable 100 µL - 100 µL - 100 µL-
Benegastro separadas Incontable Incontable 144 UFC 17 UFC 3 UFC
Lala ✗ ✗ ✗ ✗ ✗ ✗ ✗
REFERENCIAS

➢ ACUMEDIA. (2015). AGAR PAPA DEXTROSA-POTATO DEXTROSE AGAR (7149). Recuperado

de
www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/BacteriologicalAnalyticalmanual
BAM/default.htm.
➢ Dickinson and Company. (2003). BD LBS Agar (Lactobacillus Selection Agar) USO PREVISTO.
Recuperado de https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-
255011.pdf
➢ NEOGEN. (sin fecha). Agar nutritivo | Seguridad Alimentaria | Neogen. Recuperado el
Febrero 14, 2019 de https://foodsafety.neogen.com/sp/nutrient-agar
➢ Pelayo M. (2010). Microorganismos en alimentos, no todos son iguales | EROSKI
CONSUMER. Recuperado en febrero 10, 2019 de http://www.consumer.es/seguridad-
alimentaria/sociedad-y-consumo/2010/04/15/192394.php
➢ Rodríguez E.; Gamboa M.; Hernandez F. y J. García. (2005). Bacteriología general: principios
y prácticas de laboratorio. Editorial de la Universidad de Costa Rica.
➢ Secretaría de Economía. (2010). NORMA Oficial Mexicana NOM-181-SCFI-2010, Yogurt-
Denominación, especificaciones fisicoquímicas y microbiológicas, información comercial y
métodos de prueba. Recuperado el Febrero 14 2019, de
http://www.dof.gob.mx/normasOficiales/4209/seeco/seeco.htm
➢ Universidad de Granada España. (2018). PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE
CULTIVO. Retrieved from https://www.ugr.es/~cjl/medios de cultivo.pdf