ESTRUCTURA Y MORFOLOGÍA CELULAR DE HONGOS Y BACTERIAS

Lina Fernanda Hernández 1, Angie Daniela Alarcón Montaña 1, Ingrid Gisela Salcedo
Herrera 1, William Fernando Reyes Peña 1

RESUMEN mayoría de las bacterias presentan a

nivel microscópico morfologías de bacilos
Introducción. Las células tienen formas o cocos, e incluso macroscópicamente
muy distintas. En organismos también se observó dicha característica.
unicelulares encontramos desde la En el caso de los hongos se observaron
variable forma amiboidea de las amebas, pequeñas estructuras semicirculares
hasta la esférica, ovoide, cilíndrica, tratando de conformar micelios. En
filamentosa, espiralada, estrellada, cuanto a la levadura a nivel microscópico
discoidal, etc. de los protozoarios, se visualizaron ovoides con formación de
bacterias, algas y hongos, la cual permite pseudomicelio. Conclusión. Fue de vital
observar en los microorganismos la importancia tener en cuenta cada tipo de
movilidad, el color, el tamaño, la forma y microorganismo para su posterior
la agrupación en su forma natural viva y identificación según el tipo de método
sin alteraciones. Sin embargo, la requerido.
observación se dificulta debido al escaso
contraste, por la poca diferencia entre el PALABRAS CLAVE: Amiboide,
índice de refracción del medio y de los coloraciones, frotis, índice de refracción,
microorganismos. Objetivo. De modo preparación en fresco.
que el objetivo de la presente práctica
consistió en observar bacterias, hongos y INTRODUCCIÓN
levaduras con distintas técnicas, El trabajo en el laboratorio de
identificando diferentes características de microbiología implica situaciones que
los mismos. Materiales y métodos. Una
representan riesgos eventuales según
forma de preparación en fresco consistió el agente infeccioso y los procedimientos
en utilizar porta y cubreobjetos. Otra realizados, la bioseguridad hace
forma de aumentar el contraste y referencia a los principios, técnicas y
observar estructuras importantes fue la prácticas aplicadas con el fin de evitar la
utilización de coloraciones, como la exposición no intencional a patógenos y
tinción de Gram. En cuanto a la agentes infecciosos, o su liberación
morfología de los microorganismos, ésta accidental en el laboratorio que provocan
se pudo examinar siguiendo dos rutas:
flujos contaminantes, estimando así las
observando las preparaciones en fresco medidas de protección que se deben
(sin colorear, por ejemplo para observar seguir para mitigar los riesgos de
protozoos algas e incluso bacterias) y accidentalidad y garantizar la integridad
preparando extensiones delgadas del personal en el laboratorio además
llamadas frotis que se fijan y colorean. este lugar debe permanecer con una
Resultados. Se pudo apreciar que la
buena técnica aséptica, y trabajar
___________________
1
Universidad de La Salle. Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria.
siempre en condiciones de esterilidad, al fundamento radica en la diferencia
igual que todos los microorganismos estructural de la pared celular de ambos
deben ser manipulados con precaución. grupos(Balsdon, M. J(1999): Las
bacterias Gram positivas tienen una
(Ramos, M. D. L. A. A., & Chabela, M. D.
gruesa capa de peptidoglucano en su
L. P. (2004). pared que retiene el colorante tiñéndose
de color azul o violeta, mientras que las
El microscopio es indispensable en el
Gram negativos tienen una capa de
laboratorio de microbiología para el peptidoglucano más fina y una capa
estudio de la morfología y estructura de lipopolisacarídica externa que no retiene
los microorganismos, así como su el colorante violeta, pero al adicionar la
reacción a diferentes colorantes, lo cual fucsina éstas tienden a tomar coloración
junto con otros criterios, permitirá su rosada o fucsia.
identificación, por lo tanto, es importante Una colonia es una agrupación de
conocer su adecuado manejo (Valencia, bacterias formada a partir de la
H. (2004). Al realizar la observación en el reproducción de una Unidad Formadora
microscopio la preparación en fresco de Colonia (UFC) sobre un medio sólido;
permite visualizar en los aunque varía de tamaño, generalmente
es visible a simple vista siendo notorias
microorganismos algunas características
las siguientes características
tales como la movilidad, el color, él macroscópicas: tamaño en mm, color,
tamaño, la forma y la agrupación en su forma (puntiforme, circular, filamentosa,
estructura natural, la manera más común ameboide, alargada o fusiforme),
de preparación en fresco es en la que se elevación (plana, elevada, convexa,
utiliza un portaobjetos y un cubreobjetos. pulvinada y umbonada), borde o margen
(entero, ondulado, lobulado, filamentosa,
La morfología de las bacterias al enrollado, festoneado), superficie (lisa o
microscopio está determinada por la rugosa), aspecto (húmeda o seca),
rigidez de su pared celular. Básicamente, transmisión de la luz (traslucida, opaca,
transparente), consistencia (butirosa
se diferencian según su forma en cocos
blanda, dura o friable).
(esféricas u ovaladas), bacilos (cilíndrica
o de bastones; rectos o curvos) y
espirilos (espiral) (Prescott, Harley et.al METODOLOGÍA (Materiales y
(1999). Métodos)
Las células generalmente son tratadas
Antes de iniciar cualquier práctica de
para coagular el protoplasma antes de laboratorio se requiere llevar siempre
teñirlas, proceso llamado fijación. Para puesto los siguientes implementos,
bacterias, la fijación más común es la debido a que se está expuesto a
que se realiza por medio de calor, cualquier agente infeccioso:
aunque también puede fijarse con
sustancias químicas como formaldehído,  Bata blanca, de manga larga,
ácidos y alcoholes. gruesa y de abotonar.
 Gorro y guantes de nitrilo.
La tinción Gram tiene importancia en la  Gafas y tapabocas para
microbiología porque permite diferenciar protección de ojos nariz y boca.
dos grandes grupos de bacterias (Gram
 Marcador Sharpie y cinta de
positivos y Gram negativos) según se
enmascarar para marcar con
comporten ante esta tinción, el
cuidado, láminas, cajas de Petri o
 cualquier elemento necesario de Tinción Gram
observar. De acuerdo con todo el procedimiento
 Colores y cuaderno requeridos realizado con anterioridad y cuando ya la
para dibujar la observación muestra se encuentre perfectamente
macroscópica y microscópica de seca se hizo los siguientes pasos:
mohos y levaduras. En un comienzo se cubrió totalmente la
 Toallas de papel requeridas para muestra de frotis con unas pocas gotas
limpiar antes y después de la de colorante cristal violeta que se dejó
práctica. por aproximadamente un minuto y
pasado ese minuto se descartó en la
rejilla el exceso de colorante y fue
enjuagado con agua. Del mismo modo se
PROCEDIMIENTO agregó algunas gotas de reactivo lugol y
se dejó de igual modo por un minuto;
PARA BACTERIAS: posteriormente se descartó el exceso y
Principalmente se realizó una se enjuagó con agua. Igualmente se hizo
observación macroscópica de cada una una decoloración con la mezcla alcohol-
de las cepas bacterianas, según su acetona al 3% por 30 segundos y se lavó
forma (puntiforme, circular, filamentosa, inmediatamente con agua suavemente;
irregular, rizoide, huso o eje); además de por último se agregó el colorante fucsia y
su tipo de elevación (plana, elevada, se dejó por un minuto y se lavó con
convexa, pulvinada, acuminada/ agua, luego se dejó secar la muestra.
umbonada) y su borde (entero, ondulado, Ahora bien, se observó principalmente en
lobulado, crenada, filamentoso y un objetivo de 40X y luego en el objetivo
enrollada);así mismo se determinó de 100X en donde se requirió agregar
características óptimas, su consistencia, una gota de aceite de inmersión sobre la
textura y pigmentación o color. laminilla (lo que se pudo observar fue
Posteriormente se procedió hacer una dibujado en el cuaderno de laboratorio
observación microscópica de las con sus respectivo nombre y
bacterias por preparación de láminas por constituyentes celulares importantes).
frotis fijo: Para el procedimiento
mencionado, se requirió principalmente PARA HONGOS MICELIALES Y
de una lámina portaobjetos limpia, la cual LEVADURAS
se marcó con el nombre de la bacteria Se tomó una caja de Petri de hongos ya
dada a observar y se depositó una gota cultivados en la cual se hizo una
de agua destilada pequeña. Así mismo, observación macroscópica según su
se destapó una caja de Petri cerca al color, tamaño de colonia, apariencia;
mechero y con un asa bacteriológica además de identificar la colonia; de
esterilizada al fuego y enfriada con observar el reservo y su pigmento al
anterioridad se procedió a tomar un medio.
inóculo del cultivo el cual fue suspendido Ahora bien cuando ya se ha anotado y
en la gota de agua destilada. Para llevar dibujado las características, se realizó
a cabo lo anteriormente mencionado, se una observación microscópica; para esto
debió extender la gota de suspensión en se tomó un asa de punta especial para
un área no superior a dos centímetros hongos y se esterilizo en calor pasándola
cuadrados usando el asa. Finalmente se por el fuego del mechero hasta que la
debió fijar la preparación con calor al punta tomó un color anaranjado y se dejó
pasarla tres veces seguidas a través de enfriar. En ese momento se tomó una
la llama del mechero y se colorió según caja de Petri y se destapó cerca de un
protocolo para tinción Gram. mechero, en el cual se desprendió con
ayuda del asa una parte del cultivo del
hongo a observar y se colocó sobre un
portaobjetos que contenía ya una
pequeña gota de azul de lactofenol
colocada con anterioridad; se requirió
despegar el micelio del asa con ayuda de
otra asa esterilizada y por ultimó se
cubrió el preparado con un cubreobjetos
presionando suavemente sin dañar la
muestra. Finalmente con ayuda de un
microscopio, se observó el preparado
primero enfocándolo en un objetivo de
10X y por último en un objetivo de 40X. a
Para observar las levaduras con azul de )
lactofenol, se agregó una pequeña gota
de lactofenol en el centro de una lámina
que ya estaba debidamente marcada con
el nombre del cultivo en uno de sus
bordes. Posteriormente se destapó una
caja de Petri de la levadura cultivada
cerca al mechero y con ayuda de un asa
redonda se tomó una muestra del cultivo
de levadura y se colocó sobre la gota del
colorante; de igual forma se colocó una
laminilla para cubrir el preparado y se
procedió a observar en un objetivo de b)
10X y finalmente en un objetivo de 40X.

Todas las observaciones anteriores, Figura 1. Aspergillus flavus cultivado en

cabe aclarar que se realizaron con caja de Petri en medio de cultivo PDA. a)
cuidado y teniendo en cuenta las normas Dibujo de observación macroscópica de A.
de bioseguridad en un laboratorio de flavus y b) Colonia de A. flavus cultivada en
microbiología y los resultados fueron caja de Petri.
registrados realizando una ilustración en
el cuaderno de laboratorio.
Durante la observación microscópica del
RESULTADOS Aspergillus flavus con el objetivo 40x se
observaron numerosas y pequeñas
Aspergillus flavus estructuras semicirculares que
posiblemente pueden conformar micelios
En la observación macroscópica del A. “esclerocios” (Ver figura 2a). Se hace
Flavus se evidencia una colonia de color evidente microscópicamente que A.
verde oscuro con segmentos cafés Flavus estructuralmente está formado
amarillentos, esta colonia cuenta con un generalmente por hifas hialinas o
borde ondulado de coloración blanca y septadas, conidióforo hialino, vesícula
apariencia algodonosa (Ver figura 1a y ovoide-globosa, fialides uniseriadas o
1b). biseriadas, y conidias lisas, globosas y
subglobosas en cadena (Ver figura 2b).
 a) a)

b) b)

Figura 3. Rhodotorula Sp cultivada

en caja de Petri.a) ilustración
Figura 2.Vista microscópica de Aspergillus macroscópica de Rhodotorula sp.b)
flavus .a) Dibujo de observación
Colonia de Rhodotorula Sp
microscópica con el objetivo 40x y b)
Observación microscópica de A. Flavus cultivada.
(Samson (2000))
La Rhodotorula Sp observada en el
microscopio a un aumento de 40x permite
Rhodotorula Sp. La Rhodotorula Sp, es
visualizar levaduras redondas, ovoides
una levadura cuya colonia tiene por
con formación de pseudomicelio ilustrado
características macroscópicas coloración
en la (figura 4a y 4b).
rojo coral-naranja con aspecto liso,
mucosas y brillantes, como se observa en
la (figura 3a, 3b).
 a)
a)

b) b)

Figura 4. Vista microscopica de

Rhodotorula Sp, aumento 40x. a) Figura 5 (a,b). Colonia de Staphylococcus
Ilustración de la observación y b) observación aureus sobre medio sólido.
40 x de Rhodotorula Sp.
En la observación microscópica de
Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus después de
realizada la tinción se pudo identificar
La colonia de Staphylococcus aureus
que su morfología corresponde a la de
tiene forma puntiuniforme irregular, de
un coco formando agrupaciones
elevación plana con bordes netos,
semejantes e irregulares similares a
superficie lisa y brillante, con coloración
racimos de uvas, este microorganismo es
amarillenta debido a la producción de
Gram positivo debido a su tinción violeta,
pigmento carotenoide (s. aureus) (figura
como se muestra a continuación. (Ver
5a, 5b).
figura 6).
Las principales características de su
cultivo es que es poco exigente en sus
necesidades, crece bien en cualquier
medio ordinario, aunque lo hace mejor en
medios enriquecidos, estos
microorganismos son aerobios y
anaerobios facultativos, halófilos, la
temperatura optima de crecimiento es de
30-37°C .
a)
 Morfológicamente Corynebacterium sp
tiene forma de bacilo (Ver figura 8), no
espurulado e inmóvil, además de ser
Gram positivo por su coloración violeta.

b)

Figura 6 (a,b). Observación microscópica a

un aumento 100x de Staphylococcus aureus
luego de la preparación de la lámina por frotis
fijo y la respectiva tinción Gram.

Corynebacterium sp.

Macroscópicamente la bacteria
Corynebacterium sp tiene coloración
grisácea, marrón clara. Ésta colonia no
era de gran extensión. (Ver figura 7).

Figura 8. Observación microscópica

(aumento 100x) de Corynebacterium sp
luego de la preparación de la lámina por frotis
fijo y la respectiva tinción de Gram.

Generalidades

Aspergillus flavus:
Éste género de hongos está conformado
alrededor de 180 especies,
categorizados como filamentosos,
hialinos y ubicuos. Su reproducción es
asexual por conidias que se originan de
Figura 7. Vista macroscópica y dibujo de la
colonia de Corynebacterium sp. grupos de fiálides ubicadas en un
ensanchamiento terminal del conidióforo Rhodotorula sp. :
de la estructura del hongo. Tienen gran Ésta especie son levaduras
potencial biótico y son degradadores (Basidiomycotas pigmentadas)
activos del material orgánico, por lo tanto provenientes de la familia
son muy útiles en la ecología del planeta. Sporidiobolaceae. Contiene 37 especies,
Dentro de sus características cabe de las cuales sólo tres, han sido
resaltar que: reportados como causas de la infección
 Morfológicamente se clasifican en en los seres humanos. Producen
dos formas básicas: levaduras e colonias que son de color rosa a coral
hifas. pero también pueden ser de color
 Dentro de su hábitat natural se naranja a rojo, debido a la presencia de
encuentran el heno y el pigmentos carotenoides.
compostaje. En cuanto a su morfología, se describe
 También reciben el nombre de como suave, lisa y húmeda, y, a veces
hialohifomicetos, por el hecho de mucoide. Algunos crecen fácilmente en
encontrarse dentro de las hifas no la mayoría de los medios de
pigmentadas. comunicación, y se caracterizan por una
tasa de crecimiento rápido.
Este género rara vez causa Fisiológicamente, aparecen como células
enfermedades, sin embargo cuando lo redondas u ovaladas en ciernes en el
hace, se pueden presentar ciertos microscopio con ausencia de seudohifas.
factores de riesgo que crean oportunidad
de infección, como por ejemplo: Las especies de Rhodotorula son muy
penetración predilecta por sitios diversas y extendidas en la naturaleza,
húmedos, limpieza excesiva del cerumen como el aire, el suelo, el agua de mar,
de las orejas, introducción de materiales plantas, productos lácteos, y el medio
en el oído. Producen patologías como: ambiente del hogar. En los seres
Aspergilosis pulmonar invasiva, humanos, se han hallado a partir de
onicomicosis (enfermedad de las uñas), cultivos de la piel, uñas, sistema
otomicosis (enfermedad principalmente respiratorio, gastrointestinal y urinario.
del oído externo), sinusitis alérgica. Casi el 90% de los pacientes con
El asperigillus se caracteriza por infección por este tipo de especies tiene
presentar un alto riesgo de mortalidad en cáncer subyacente o inmunosupresión
personas inmunocomprometidas, es debido al uso de corticosteroides,
decir cuando su sistema inmune es débil. neutropenia, SIDA, o desnutrición.
Por lo mismo, es uno de los más temidos El factor de riesgo más común es la
en lugares como hospitales, debido a presencia de un catéter y la infección
que no hay un tratamiento eficaz para más común a la cual se encuentra
quien lo contrae, llevando generalmente, asociada la especie, es fungemia.
a la muerte. En el caso de Rhodotorula spp. Ésta es
Principalmente ataca las vías una levadura que coloniza humanos,
respiratorias, llegando a los alveolos, haciendo parte de microbiota normal de
luego a la sangre y finalmente mediante piel y mucosas y producir infecciones a
ésta a todos los órganos. partir de catéteres centrales. Rara vez
produce cuadros pulmonares, infección presencia de cuerpos extraños.
de vías urinarias, meningintis y Generalmente, cada especie tiende a
fungemias en inmunocomprometidos. Es ocupar una localización anatómica
común encontrarla a partir de específica en el huésped que coloniza.
aislamientos de lesiones de piel, sin Aquella especie como la S. aureus, tiene
embargo en la mayoría de los casos es gran importancia clínica dentro de las
considerada como contaminante. La que suelen colonizar al ser humano,
infección causada por especies de debido a que es la que más causa
Rhodotorula es mucho menos común infecciones, como por ejemplo:
que la infección causada por otras infecciones en la piel, neumonía,
especies de levaduras (Candida y intoxicación por alimentos, síndrome del
Cryptococcus). shock tóxico e intoxicación sanguínea.

Staphylococcus aureus: Las infecciones más comunes

Éste género de bacterias se encuentra provocadas por esta bacteria son las
formado por cocos Gram positivos, con relacionadas con la piel, como: foliculitis,
un diámetro de 0.5 a 1.5 μm, agrupados forúnculos, impétigo y celulitis, que se
como células únicas, en pares, tétradas, limitan a una pequeña área de la piel de
cadenas cortas o más comúnmente una persona. No obstante, también
formando racimos de uvas. Actualmente puede provocar infecciones mucho más
se tiene conocimiento acerca de 32 graves, lo cual sucede cuando las
especies, de las cuales 16 de ellas se bacterias ingresan en el torrente
localizan en los humanos, en donde sanguíneo debido a un corte en la piel.
algunas forman parte de la microbiota de Esto puede producir infecciones en otras
piel y mucosas en humanos, y otras se partes del cuerpo, como en los
encuentran sólo entre la flora de otros pulmones, los huesos, las articulaciones,
mamíferos y aves. el corazón, la sangre y el sistema
Fisiológicamente, son bacterias no nervioso central. Debido a que algunos
móviles, no esporuladas, no poseen tipos de staphylococcus son resistentes a
cápsula (aunque existen excepciones de antibióticos se puede dificultar el
cepas que desarrollan una cápsula de tratamiento para quien contrae este tipo
limo), son anaerobias facultativas. de bacteria.
En su gran mayoría los estafilococos
producen catalasa (enzima capaz de Corynebacterium sp. :
desdoblar el peróxido de hidrógeno en Son bacterias Gram positivas, catalasa
agua y oxígeno libre); ésta característica positiva, no esporuladas, que carecen de
permite diferenciar éste género de otros movilidad, morfológicamente pueden ser
como el Streptococcus y Enterococcus. apreciados como bacilos rectos o
ligeramente curvados cuyo tamaño oscila
De las especies mencionadas entre 2-6 micrómetros de longitud y 0,5
anteriormente presentes en seres micrómetros de diámetro, con una típica
humanos, algunas son patógenas forma de V (generalmente), aunque
cuando existe predisposición e también es posible encontrarlas de
inmunosupresión en el huésped o en formas elipsoidales. Fisiológicamente,
son aerobias o anaerobias facultativas, DISCUSIÓN DE RESULTADOS
quimioorganotrofos, el pleomorfismo en
su ciclo de vida se observa en formas OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA
bacilares de distintas longitudes y La observación macroscópica de hongos,
frecuentes engrosamientos en los levaduras y bacterias nos permitió
extremos. darnos una idea de la morfología de
Es catalogado como uno de los géneros cada uno de ellos; a simple vista se
más numerosos de actinobacterias con pudo determinar por ejemplo si el hongo
más de 50 especies, generalmente no a observar era de apariencia
causan enfermedades, pero hacen parte atenciopelada, algodonosa, polvorienta y
de la flora saprófita de la piel humana. cuál era el color que se podía identificar,
Habitan ampliamente en la naturaleza su tamaño entre otras cosas. En este
encontrándose en el suelo, el agua, caso Aspergillus flavus en la cual su
productos alimenticios y también en la descripción se encuentra representada
mucosa y piel del hombre y animales. en la figura 1a, 1b se puede respaldar
Dentro de las que tienen características con otra investigación realizada que
patógenas se encuentra la C. diphtheriae aclara que al ser los miembros de este
que produce la patogenia conocida como género aerobios y de crecimiento rápido,
difteria, que es una enfermedad aguda, su colonia tiende a ser inicialmente
contagiosa productora de una plana, blanca y que crece haciéndose
pseudomembrana compuesta por células algodonosa; así mismo a medida que
epiteliales muertas, leucocitos, glóbulos envejece va apareciendo la esporulación
rojos y fibrina que se forma alrededor de y el centro de la colonia se va tornando
las amígdalas y la faringe. Aunque es de color distinto según la especie, así
una enfermedad poco común, tiende a Aspergillus flavus toma un color verdoso
ocurrir en personas no vacunadas, en y su reverso es verde y de crema oscura
especial niños en edad escolar. (Guzmán,1977). En cuestión de la
levadura esta tiene una apariencia
Otras especies que no causan difteria, cremosa y se debe siempre mirar el tipo
producen enfermedades en especies de colonia, el reverso de la caja Petri y
animales específicas, y algunas de ellas su pigmentación al medio; en el caso de
son también patógenos humanos, de la Rhodotorula Sp observada en la figura
cuales algunas atacan hospedadores figura 3a, 3b siempre se caracterizará
saludables, mientras que otras atacan por ser colonias de color rojo-anaranjado
hospedadores inmunocomprometidos. o naranja, de aspecto cremoso o rugoso
Algunos de sus efectos incluyen (Sicilia, M. J. L., & Cuesta, F. S.) Por otra
linfadenitis granulomatosa, neumonitis, parte en el estudio de bacterias para su
faringitis, infecciones de la piel y caracterización macroscópica, en este
endocarditis. La endocarditis causada caso Staphylococcus aureus cuenta con
por las especies de Corynebacterium es características nombradas en la figura
frecuente en pacientes con dispositivos figura 5a, 5b demás estudios demuestran
intravasculares. que estas son en medios no selectivos,
S. aureus presenta colonias de 1 a 3 mm
de diámetro, lisas, levemente elevadas,
de bordes enteros, levemente convexas célula, quitándole el grado de
y generalmente pigmentadas con un patogenicidad; además de ser un
color que puede ir desde la crema al colorante ácido, que tiñe el citoplasma y
amarillo. La producción de pigmento se la quitina presente en las células
ve favorecida si se incuban los cultivos fúngicas (López-Jácome, L.E,
por 24 a 48 horas adicionales a Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C.
temperatura ambiente. Cuando crecen A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G.,
en agar sangre ovina se puede observar & Franco-Cendejas, R. (2014)) Gracias a
una zona de β-hemólisis alrededor de las esto permite una alta calidad de
colonias. S. epidermidis presenta observación, al haber una tinción entre
colonias generalmente de menor tamaño la pared y el citoplasma de las células lo
y estas no presentan pigmentación que se pudo ver en las (figuras 2 a y 2b)
(Seija, V. (2008)). y (figura 4a, 4b).

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA En el caso de las bacterias al hacer una

En el caso de observaciones tinción Gram se busca encontrar
microscópicas para caso de hongos características y propiedades
miceliales y levaduras, se debe observar determinantes de estos
si el micelio es hialino (azul) o microorganismos; se puede observar así
diamatiácelo (café); si es aceptado, su movilidad, color, tamaño y agrupación
septado, ancho o delgado y si en las como se identificó en las figuras 6 y 8 de
levaduras hay formación de Staphylococcus aureus y
peseudomicelio. Para tener una buena Corynebacterium sp. La utilización del
observación con el microscopio fue Gram está basado en las características
indispensable contar con el poder que de la pared celular, así como en el caso
tenga el objetivo, calidad, claridad, de esta bacteria al arrojar gram positivas,
nitidez y fineza detallada de la imagen, solo indica que poseen una pared celular
tener un buen uso del microscopio y gruesa constituida por peptidoglicano,
hacer con cuidado y mucha esterilidad el pero no cuentan con membrana celular
procedimiento. Además de que como se externa. La tinción Gram se hace con los
realizó en este procedimiento, se debe respectivos colorantes con un
hacer una observación de hongos determinado fin: Principalmente se
miceliales y levaduras con azul de coloca como colorante primario cristal
lactofenol debido a que aunque la tinción violeta, el cual tiene afinidad con el
de azul de lactofenol no es considerada peptidoglicano de la pared bacteriana.
una tinción diferencial, posee Posteriormente, se coloca lugol, el cual
características tintoriales que permiten sirve como mordiente e impide la salida
observar cada uno de los componentes del cristal violeta por la formación de un
fúngicos y apreciar fácilmente las complejo cristal violeta yodo que satura
estructuras para una adecuada los espacios del peptidoglicano de la
identificación. El fenol inactiva las pared bacteriana. En seguida, se coloca
enzimas líticas de la célula e impide que una mezcla de alcohol-acetona, la cual
ésta se rompa; de igual forma, destruye deshidrata la pared bacteriana y cierra
la flora acompañante e inactiva a la los poros de la misma, también destruye
la membrana externa de las bacterias teniendo en cuanta lo anterior y tomando
Las bacterias Gram positivas, al contener en cuenta los pasos adecuados para la
una gran cantidad de peptidoglicano, extracción de la muestra y su uso en la
retienen con mayor fuerza este complejo, toma de identificación.
mientras que las Gram negativas no lo
pueden retener por tener menos cantidad •Un adecuado uso de las herramientas y
de peptidoglicano. Por último, se coloca limpieza de las mismas es importante
safranina, la cual funciona como un dentro del laboratorio, pues de esto
colorante secundario o de contra tinción depende la seguridad tanto personal
y sirve para teñir las bacterias que no como del equipo de trabajo.
pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo (López-Jácome, L.E, •Tener en cuenta el tipo de
Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C. microorganismo (bacteria, hongo,
A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G., levadura) es importante para poder
& Franco-Cendejas, R. (2014)) Así se aplicar el método más eficiente para su
pudo hacer una observación exacta en el posterior observación, además del
objetivo de 100X y fue lo que se reconocimiento morfológico.
evidenció.
Cuestionario
CONCLUSIONES

A. Defina cada uno de los 3 grupos en

•Es importante hacer un uso adecuado
los que se dividen los colorantes.
de los materiales para la práctica de
1) Colorantes Sustantivos: Son
análisis de un microorganismo, pues de colorantes que pueden teñir
esto depende el éxito de la observación y directamente las fibras de
reconocimiento del microorganismo. algodón.
2) Colorantes Mordientes: El
•Tener un conocimiento previo de la mordiente es un producto que se
metodología y su uso, también aporta las adiciona a la fibra y es absorbido
condiciones necesarias para hacer una por ella, pudiendo
coloración apropiada dependiendo del consecutivamente atraer el
tipo de hongo o bacteria que se vaya a colorante. Este término se usa
trabajar. principalmente para los
colorantes que se adicionan
•El uso apropiado del microscopio usando óxidos metálicos como
proporciona la base para la correcta mordiente. Especialmente se
emplean como mordientes los
identificación de colonias, formas y
óxidos de aluminio y cromo por
tamaños de los organismos que se
formar precipitados insolubles.
están analizando. 3) Colorantes Directos: Se
absorbe directamente por las
•Hacer uso de los conocimientos dados fibras en soluciones acuosas. Hay
en las partes teóricas es necesario para colorantes ácidos y básicos de
una clasificación y distinción de los este tipo. Estos dos tipos de
microorganismos correctamente, colorantes se emplean
 especialmente en el teñido de
lanas y en poliamidas sintéticas. Tinción Simple: utiliza un solo colorante.

B. Para qué se usa una tinción simple Tinción de Gram: Utiliza varios
y una diferencial?, cuál de éstas es colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m,
más apropiada para la observación lavado con alcohol, Safranina 30 s)
de bacterias?
Tinción Ácido Resistente: Una vez
Tinción: Es el proceso por el cual las teñidos, conservan su color resistiendo al
moléculas de un colorante se adsorben a lavado con ácido mineral reducido. En
una superficie. El uso de colorantes esta tinción las bacterias ácido
permite cambiar el color de las células de resistentes conservan el colorante
los microorganismos y poder realizar la primario color rosa o rojo, los demás
observación en microscopio óptico. Dado microorganismos son decolorados por el
que las bacterias son casi incoloras, no ácido y toman el color azul.
presentan contraste con el medio en el
cual se encuentran suspendidas y no Tinción de Giensa: El colorante se
pueden observarse claramente sin algún aplica a un frotis de sangre y se utiliza
tratamiento previo. De acuerdo a la cuando se sospeche de la presencia de
reacción que ocurre, existen diferentes protozoos en la sangre para observar
tipos de tinción: materias núcleos de la células.
Tinción simple: El colorante utilizado
sirve solo para denotar la morfología Tinción de Esporas: Se usa verde de
celular. malaquita en contraste con safranina.
Tinción diferencial: El colorante
utilizado pone de manifiesto diferencias Tinción de Cápsula: Colorante
entre células bacterianas o entre partes nigrosuna, aquí se observan
de una misma célula. Estas técnicas microorganismos encapsulados
utilizan más de un colorante o bien creando resistencias.
ciertos reactivos complementarios para la
tinción. Tinción de Flagelos: Se usa mordiente,
el cual aumenta el tamaño
del microorganismo.

D. La coloración de Gram es una

tinción de qué tipo y por qué?

La tinción de Gram o coloración de

Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en la
bacteriología para la visualización de
bacterias, sobre todo en muestras
C. Qué otro tipo de tinciones existen? clínicas. Se utiliza tanto para poder
referirse a la morfología celular composición distinta a la interna)
bacteriana, como para poder realizar una por medio de lipoproteínas. Tiene una
primera aproximación a la diferenciación capa delgada de peptidoglicano unida a
bacteriana, considerándose bacterias una membrana exterior por lipoproteínas.
Gram positivas a las que se visualizan de La membrana exterior está hecha de
color morado, y bacterias Gram proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.
negativas a las que se visualizan de color Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se
rosa, rojo o grosella. tiñen diferencialmente debido a éstas
diferencias constitutivas de su pared.
La clave es el peptidoglicano, ya que es
E. La fucsina es el último colorante
el material que confiere su rigidez a la
que se adiciona en la coloración de
pared celular bacteriana, y las Gram
Gram, por qué?
Para poner de manifiesto las células positivas lo poseen en mayor proporción
Gram negativas se utiliza una coloración que las Gram negativas. La diferencia
que se observa en la resistencia a la
de contraste. Habitualmente es un
colorante de color rojo, como decoloración, se debe a que la
membrana externa de las Gram
la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células Gram negativas es soluble en solventes
orgánicos, como por ejemplo la mezcla
negativas son rojas, mientras que las
Gram positivas permanecen violetas. de alcohol/acetona. La capa
de peptidoglicano que posee es
demasiado delgada como para poder
retener el complejo de cristal violeta/yodo
F. Cuál es el fundamento en la
que se formó previamente, y por lo tanto
que se basa la coloración de
Gram? este complejo se escapa, perdiéndose la
Los fundamentos de la técnica se basan coloración azul-violácea. Pero por
en las diferencias entre las paredes el contrario, las Gram positivas, al poseer
celulares de las bacterias Gram una pared celular más resistente y con
positivas y Gram negativas. La pared mayor proporción de peptidoglicanos, no
celular de las bacterias Gram positivas son susceptibles a la acción del solvente
posee una gruesa capa de orgánico, al contrario, éste actúa
peptidoglucano, además de dos clases deshidratando los poros cerrándolos,
de ácidos teicóicos: Anclado en la cara lo que impide que pueda escaparse el
interna de la pared celular y unido a complejo cristal violeta/yodo, y
la membrana plasmática, se encuentra el manteniendo la coloración azul-violácea.
ácido lipoteicoico, y más hacia
la superficie, el ácido teicoico que está G. Indique la importancia ecológica o
anclado solamente en el peptidoglucano una característica específica de
(también conocido como mureína). Por el cada una de las cepas con las que
contrario, la capa de peptidoglucano de se trabajó: tanto de bacterias como
las Gram negativas es delgada, y se de hongos y levaduras.
encuentra unida a una segunda
membrana plasmática exterior (de
•Hongo Aspergillus flavus: Hongo que obtenida por dos procedimientos. Rev.
suele asociarse chil. infectol, 16(2), 100-4.
con aspergilosis pulmonar y se cree que
•López-Jácome, L. E., Hernández-Durán,
causa con frecuencia infecciones de
M., Colín-Castro, C. A., Ortega-Peña, S.,
córnea y nasoorbiatles, además de ser Cerón-González, G., & Franco-Cendejas,
alergénico. Aparece con frecuencia en R. (2014). Las tinciones básicas en el
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DEPARTAMENTO DE INGENIERIA http://kidshealth.org/es/teens/staph-
QUIMICA/ - UNIVERSIDAD esp.html#
TECNOLOGICA NACIONAL/- CATEDRA
DE BIOTECNOLOGIA/- Trabajo práctico