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Practica de bioquímica

Cristian David arce

1.115.071.820

Tutora practica

Francis Liliana valencia

Tutor

Manuel Emilio Gómez

Grupo

352001_5

Universidad nacional abierta y a distancia UNAD

Programa agronomía - CEAD Palmira

Mayo – 2017

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Practica 1

Actividad ureásica en muestras de origen biológico

Introducción
La ureasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amoníaco.
La reacción ocurre de la siguiente manera:

Su peso molecular: 480.kD, punto isoeléctrico: 5.0 y pH óptimo entre 6 y 7.

Algunas bacterias son capaces de emplear la urea como única fuente de nitrógeno. En tal
caso la bacteria ha de poseer un enzima, la ureasa, capaz de atacar la urea. Al
descomponerse se libera amoniaco que alcaliniza el medio.

El medio de cultivo posee un indicador de pH que vira a un color rosa intenso cuando dicho
pH se hace básico; de esta forma podemos detectar la producción de amoniaco y, en última
instancia, la presencia del enzima ureasa.

Objetivos
Determinar la actividad ureásica de compuestos orgánicos a través del método salting out.

Calcular y determinar la presencia de urea en harina.

Comprender la multifuncionalidad de las enzimas en los seres vivos.

Relacionar la práctica con la formación académica y profesional.

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Practica 1

Actividad ureásica en muestras de origen biológico

Objetivos

Producir la hidrólisis de la urea por medio de la enzima amidohidrolosa denominada ureasa.

Cuantificar la actividad ureásica (AU) en muestras de origen biológico, mediante la técnica
volumétrica de Berthelot
La ureasa es una enzima amidohidrolosa de peso molecular: 480.kD, punto isoeléctrico: 5.0
y pH óptimo entre 6 y 7, cataliza la hidrólisis de la urea produciendo gas carbónico,
hidróxido de amonio, según la reacción

H2N-CO-NH2 + 3H2O 2NH4OH + CO2

PH =7.0; T=37ºC

En presencia de una solución buffer de fosfatos con pH = 7.0 y a una temperatura de

incubación de 25°C, la ureasa presenta una constante de Michaelis de 10,5 mmol/L. Los
principales inhibidores de su actividad enzimática son los iones metálicos pesados tales
corno la plata (Ag+1) el mercurio (Hg+2) e igualmente el ácido hidroxámico y la tiourea

La ureasa, se encuentra en varios tejidos vegetales como en el haba de soya, lo cual implica
que pueda ser usada en análisis de alimentos para determinar urea, ya sea por el método de
Kjeldhal o por titulación del amonio liberado. De esta forma, al titular el hidróxido de
amonio producido por la hidrólisis, se puede calcular la cantidad de urea hidrolizada,
utilizando el método estequiométrico, puesto que se producen 2 moles de NH4OH por cada
mol de urea desdoblada. Por lo tanto, esta reacción puede utilizarse con éxito en la
determinación de urea en sangre, orina, suelos y otros materiales orgánicos.

Metodología

Lista de Materiales:

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 .

Tubos de ensayo con gradilla, pinzas para bureta, Erlenmeyer de 125mL , pipetas de 5 y
10mL, matraz aforado de 100mL , baño termostatado , Becker de 400mL ,bureta de 25mL ,
soporte universal.

Lista de Reactivos:

Ureasa al 0,1 % en buffer fosfato de pH = 7.0, Urea 0,25M, HgCl 2 al 1%, HCl 0,1N,
indicador de Tashiro.

Extracción y solubilizacion de ureasa en harina (método “salting out”)

Procedimiento:

Cuantificación de la Actividad Ureásica

Para el desarrollo de este procedimiento se tomaron 3 tubos de ensayo y se les incorporo los
siguientes ingredientes:

Mezcla de Reactivos

Reactivos (ml)/Tubos. B St 1
Urea 0.25M (7.5 gr de urea * 500ml de agua). 5.0 5.0 5.0
Buffer fosfato PH: 7 5.0 4.5 4.5
HgCl2 (Gotas) 4 - -
Ureasa 0.5% (0.3gr de ureasa* 25ml de agua). - 0.5 -
EHAU (ml) - - 0.5

Posteriormente se agitaron los tubos durante 10 segundos, dejándolos en baño maría a 37°C
durante 20 minutos y al final se le adicionan las gotas de HgCl2.

Reactivos (ml)/Tubos. B St 1
HgCl2 (Gotas) - 4 4

Titulación

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 .

Alistar el montaje de titulación: lavar, purgar, cargar y enrasar la bureta con HCl 0,1N

Pasar la solución del tubo blanco a un Erlenmeyer o Becker y adicionar 3 gotas de

indicador de color Tashiro, un color azul-verdoso, es prueba positiva para el ion Amonio
(NH4+)

Colocar el Erlenmeyer que contiene la solución blanca, debajo la bureta y adicionar

lentamente el HCl, hasta que aparezca y permanezca un color rosado-violáceo. Esto indica
que los equivalentes-gramo del hidróxido de amonio fueron neutralizados por los
equivalentes-gramo del ácido clorhídrico.

Registrar en su tabla de datos, los mL de HCl gastados en la titulación del blanco.

Repetir el procedimiento anterior, con el tubo Estándar y anotar los mL empleados de HCl.

Continuar el proceso con el tubo 1, que contienen el extracto de harina; registrar los mL
gastados de HCl en la tabla de datos.

Tabla de Datos

Tabla 1. Datos obtenidos para actividad ureásica de harinas.

Indicadores
Muestras/Tubos
Wm (g) Vf (mL) VHCl (mL)
Harina 1.0 8.0 12.5
Estándar 14.5
Blanco 13.5

Gráfica:

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 .

Nota: Para esta titulación se utilizaron 1.8 gramos de HCL y 500ml de agua destilada.

Cálculos

4.1 Actividad Ureásica en el tubo estándar

AU: (mL HCl St-mL HCl B) x0.1x1000 umol x Fd

2xt (min)
Fd: 10mL
5mL

Resultados Obtenidos:
AU: (14.5 mL HCl St – 13.5 mL HCl B) x0.1x1000 umol x 2 mL
2x t (0.25min)

Fd: 10mL: 2mL

5mL

R// 200 x 2mL

R// AU: 400

Nota: Por consejo del tutor se tomó como medida de tiempo 15 segundos, los cuales
pasados a minutos da como resultado 0.25min.

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 .

Actividad Ureásica de la Harina.

Formula:

AU: (mL HCl (1)-mL HCl B) x0.1x1000 umol x Fd

2x t (min)

Fd: 10mL x 10mL_ x 100g_

5mL Vs (mL) WHarina

Datos Obtenidos:

AU: (12.5mL HCl – 13.5mL HCl) x0.1x1000 umol x Fd:

2x (0.25min)

Fd: 10mL x 10mL_ x 100g:

5mL 8 1g

R// -200x250

R// - 50.000

Proceso:

Adición de 1g de harina más 10 Extraer el sobrenadante, se

Centrifugar 3500 rpm durante 5
ml de NaCl al 1%. Luego agitar descarta el precipitado (fibras,
minutos.
durante 5 minutos. grasas)

Por último el contenido final se

El contenido se pasa a través de
pasa a un tubo de ensayo y se
un filtro.
rotula.

Practica 2
Capacidad amortiguadora (β) y potencial amortiguador (p (β) de muestras biológicas

Marco teórico

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 .

Casi todos los procesos biológicos son dependientes del pH; un pequeño cambio en el pH
lleva a un gran cambio en la velocidad de un proceso. Lo anterior es cierto no solo para
aquellas reacciones en donde está involucrado directamente el ion H+, sino también para
aquellas en donde aparente no está involucrado.
Las enzimas, un tipo particular de proteínas que catalizan las reacciones que se llevan a
cabo en los seres vivos y muchas otras biomoleculas, contienen en su estructura grupos
con pKas característicos. Los grupos amino y carboxilo protonados de los aminoácidos así
como los grupos fosfato de los nucleótidos, por ejemplo, funcionan como ácidos débiles y,
por tanto, su estado iónico depende del pH de la solución que los contiene.
Las interacciones iónicas juegan, además, un papel fundamental en la estructura y
reconocimiento de las macromoléculas de los seres vivos. Las células y organismos
mantienen un pH específico y constante manteniendo sus biomoleculas en su estado iónico
óptimo que generalmente se encuentra alrededor de pH 7.0.
En los organismos multicelulares el pH de los fluidos extracelulares está también
fuertemente regulado. La constancia en el pH se logra gracias a los amortiguadores
biológicos que son mezclas de ácidos débiles y sus bases conjugadas.

Introducción

Las soluciones amortiguadoras varían poco al añadirles ácidos o bases fuertes que permiten
Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biológicas mediante técnicas
potencio métricas y de titulación volumétrica , en presencia de los indicadores

21
 .

adecuados por tanto se Realiza un análisis comparativo del potencial buffer ante de
muestras de origen biológico ,como: leche, sangre, orina , concentrado y forrajes.

Objetivos
General
Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biológicas mediante técnicas
potenciométricas y de titulación volumétrica , en presencia de los indicadores
adecuados.
Específico
Realiza un análisis comparativo del potencial bufferante de muestras de origen
biológico ,como: leche, sangre, orina , concentrado y forrajes.

Materiales y equipos
Erlenmeyer de 125mL , pipetas graduadas de 10mL , espátula metálica , agitador de
vidrio, probeta graduada de 100mL , bureta de 25mL , soporte universal , beaker
de 250mL , Potenciómetro, equipo de titulación, balanza digital, muestras
biológicas (concentrado ,orina , sangre y forraje.
Reactivos

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 .

NaOH 0,1N, HCl0, 1N, Fenolftaleína, rojo de metilo, agua destilada y solución buffer
fosfato
Método de titulación volumétrica
 se alisto 3 beaker ó Erlenmeyer pequeños.
 se adiciono al Erlenmeyer, 20mL de agua destilada, al dos, 20mL de solución
buffer y al tercero, 20 mL de leche.
 se colocó en cada frasco 2 gotas de fenolftaleína y se agito por 10 segundos
 se alisto el montaje de titulación y se cargó la bureta con solución de NaOH 0,1N
 se colocó el primer frasco bajo la bureta y se tituló la solución acuosa, adicionando
el NaOH hasta que apareció y permaneció un color rosado pálido y se registró
el volumen gastado en su tabla de datos.
 se repitió la titulación anterior con las demás soluciones, buffer y leche y se
registraron los

Volúmenes en tabla de datos.

Técnica potenciométricas
Se Alistaron 5 Erlenmeyer y se rotularon del 1 al 5
 Al primer frasco, se adiciona +/-5 gramos (Wm ) de concentrado pulverizado y 100
mL de agua destilada, se agito con varilla de vidrio por 5min se filtró y se midió
el pH de este filtrado, se registró como pH1. Posteriormente se agregó 5 mL de
HCl 0,1N se agito de nuevo por un minuto y se volvió a medir el pH2.
 En el segundo y tercer beakers se repitió el procedimiento con las muestras de
harina y forraje picado, respectivamente.
 En el cuarto vaso se colocó 20mL de orina junto con 20mL de agua destilada se
agito por 30 segundos y se registró el pH1 , luego se adiciono 5mL de NaOH 0,1N
se agito nuevamente por 1min y se evaluó el pH final (pH2)

Desarrollo del experimento

 Se adiciono al Erlenmeyer 20 ml de agua destilada, al segundo 20ml de solución
buffer y al tercero 20 ml de leche
 Se agregaron 2 gotas de fenolftaleína a cada frasco
 Se realizó el montaje de titulación con la bureta en solución de NaOH
 Se adiciono un frasco con agua destilada bajo la bureta y se adiciono NaOH hasta
que apareció el color rosado característico de la prueba

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 .

 Se repitió la titulación con las demás soluciones buffer y leche

 Se midieron 25ml de NaOH para agregar la solución en agua destilada , buffer
fosfato y leche
 Al agregar 3.6 ml Buffer fosfato la mezcla queda a un estado normal
 Al agregar 5.5 ml en leche cambio su estado normal
 Al agregar 5 ml en agua destilada queda su estado normal
 Seguidamente se midieron 5 g de concentrado pulverizado, se agregó al Erlenmeyer,
100 ml de agua destilada se agito por 5 minutos y se obtuvo un ph1 =5
 Se filtró y con una gota de reactivo para medir ph en 4ml de concentrado se obtuvo
el pH 2
 Se midieron 5 g de forraje se agregó 100 ml de agua destilada se filtró y en 5 ml de
forraje se obtuvo un pH 1=8 , seguidamente se agregó 100 ml de HCl , se agregó
reactivo para medir pH y se obtuvo un ph2 =10
 Se midieron 60 ml para medir pH de la harina obteniendo como resultado el
pH=1=6, seguidamente se agregó 5 ml de HCl obteniendo un ph2=1
 Finalmente se realizó el ensayo con 20ml de orina, 20 ml de agua destilada se agito
por 30 seg y se obtuvo un pH 1= 6 , por último se agregó NaOH se alguito
nuevamente por un minuto y se obtuvo un pH 2 =1

Cálculos
 Concentrado
Capacidad amortiguadora (B) con respeto a HCL
B=ml HCL*0.1n*100g *1000 meq p= -log B /B
B =5ml* 0.1N *100 g =2500=p=-log (2500)/2500)=0,0014
 Harina
5ml *0.1N + 100g *1000/ (6-1)*5g =2000 =p-log (2000)/2000=-0.00165
 Forraje
5ml *0.1N*100g*1000/(8-10)*5g=5000=p=-log(-5000)/-5000=-0.00074
 Orina
5ml*0.1N*100g*1000/(6-1)*2020ml=500=p=-log(500)/500=-0.0054
Valor de capacidad y potencial amortiguadora

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 .

 Concentrado
B (meqHCL /A PH)=2500
B (meqNaoH/APH)=3125
P(B)HCL=-0.0014
P(B) NaOH=-0.0011
 Harina
B (meq HCL /A PH)=2000
B (meq NaoH/APH)=-166.7
P (B) HCL=-0.00165
P (B) NaOH=-0.013
 Forraje
B (meqHCL /A PH)=-5000
B (meqNaoH/APH)=5000
P (B)HCL=-0.00074
P (B) NaOH=-0.0074
Orina
B(meqHCL /A PH)=500
B(meqNaoH/APH)=-500
P(B)HCL=-0.0054
P(B) NaoH=-0.0054
Capacidad amortiguadora con respeto a NaOH
Concentrado
-0,0011
Harina
-0,013
Forraje
-0,00074
Orina

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 .

-0,0054

Diagrama de flujo

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 .

Conclusiones
En química es frecuente que necesitemos mantener la concentración de una determinada
especie en los alrededores de un valor específico. Para lograr este propósito se utilizan las
soluciones conocidas como búfer, amortiguadoras, reguladoras o tampones.

21
 .

Podemos definir la capacidad amortiguadora de un tampón como la cantidad de ácido o

base fuerte que puede neutralizar sufriendo un desplazamiento de pH de una unidad
Resulta evidente que la eficacia amortiguadora está vinculada a dos factores: la
concentración absoluta del sistema la proporción relativa de las formas disociada y sin
disociar. Casi todos los procesos biológicos son dependientes del pH; un pequeño cambio
en el pH lleva a un gran cambio en la velocidad de un proceso. Lo anterior es cierto no solo
para aquellas reacciones en donde está involucrado directamente el ion H+, sino también
para aquellas en donde aparente no está involucrado.

Las enzimas, un tipo particular de proteínas que catalizan las reacciones que se llevan a
cabo en los seres vivos y muchas otras biomoléculas, contienen en su estructura grupos con
pKas característicos. Los grupos amino y carboxilo protonados de los aminoácidos así
como los grupos fosfato de los nucleótidos, por ejemplo, funcionan como ácidos débiles y,
por tanto, su estado iónico depende del pH de la solución que los contiene.

Las interacciones iónicas juegan, además, un papel fundamental en la estructura y

reconocimiento de las macromoléculas de los seres vivos.

Las células y organismos mantienen un pH específico y constante manteniendo sus

biomoléculas en su estado iónico óptimo que generalmente se encuentra alrededor de pH
7.0. En los organismos multicelulares el pH de los fluidos extracelulares está también
fuertemente regulado. La constancia en el pH se logra gracias a los amortiguadores
biológicos que son mezclas de ácidos débiles y sus bases conjugadas.

El pH de una solución amortiguadora depende de la naturaleza (pKa) del ácido débil que la
integra y de la proporción relativa entre la base y el ácido, pero no de las concentraciones
absolutas de estos componentes.

Practica 3
Actividad catalítica de la catalasa en muestras biológicas (acat)
Objetivos

General

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 .

Realizar en el laboratorio la practica 3 para determinar la actividad catalítica de la catalasa

por método permanganometrica.

Específicos

Cuantificar la actividad enzimática de la catalasa en muestras de origen vegetal y animal,

comprobando los productos de reacción.

Realizar el procedimiento de extracción en concentrados, sangre y orina.

Realizar el procedimiento de cuantificación en tubos de ensayo con los reactivos para

observar las reacciones bioquímicas enzimáticas (RBE).

Registrar los ml de permanganato gastados en el proceso de titulación permanganometrica.

Marco teórico

Las enzimas son proteínas globulares responsables de la mayor parte de la actividad

química de los organismos vivos. Actúan como catalizadores, que son sustancias que
aceleran las reacciones químicas sin ser destruidas o alteradas durante el proceso. Las
enzimas son extremadamente eficientes y se pueden utilizar una y otra vez repetidamente.
Una enzima puede catalizar miles de reacciones en cada segundo. Tanto los valores de pH
como de la temperatura a los que trabaja la enzima son extraordinariamente importantes. La

21
 .

mayoría de los organismos tienen un intervalo de temperatura preferente en el cual

sobreviven y sus enzimas funcionan mejor dentro de dicho intervalo de temperatura. Si el
ambiente donde se encuentra la enzima es demasiado ácido o demasiado básico, la enzima
puede desnaturalizarse de forma irreversible o transformarse de modo que su forma no le
permita más realizar su funcionamiento apropiado.

La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la

descomposición del peróxido de hidrogeno H2O2 en oxígeno y agua. El peróxido
hidrógeno H2O2 se produce durante la oxidación de las coenzimas FAD y FMN,
biomoleculas importantes en la oxidación de sustratos a partir del oxígeno molecular,
además es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y su función es
proteger contra microorganismos patógenos sobre todo anaerobios. Esta función la efectúa
esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno. En esta práctica, la
actividad de catalasa se determinará por el método permanganométrico, siendo éste una
sustancia altamente oxidante lo que significa también pérdida de electrones, entonces, si
hay pérdida hay transferencia, y ese medio en KMnO4 facilita que se lleve a cabo, en el
cual se titula el peróxido residual, es decir, el que no participó en la RBE, con una solución
de permanganato de potasio (KMnO4) de concentración conocida; las enzimas aceleran las
reacciones de los sustratos pero requieren de condiciones para cumplir su función. La
reacción bioquímica enzimática (RBE) que cataliza es la siguiente:

La catalasa sirve para romper el enlace de del H2O2 generando agua más oxígeno, cuando
tomas el blanco y le agregas el H2SO4, generas una ruptura de esa del H2O2 completa y
luego lo titulas con permanganato estas tratando de neutralizar el ácido sulfúrico de la
muestra que queda después de generar oxidación del H2O2, por eso se va más cantidad del
permanganato, cuando se utiliza un material como concentrado o sangre, la catalaza
presente en esos productos realiza oxidación del H2O2, de manera parcial, quedando un
remanente que debe oxidarse con H2SO4, si la catalasa es alta la cantidad de H2SO4 a

21
 .

emplear para oxidar el resto de H2O4 será más baja y la cantidad de permanganato en la
titulación será menor.
Procedimientos en la práctica

Extracción

1.1 Con muestra de concentrado:

Pesamos 2 gramos de concentrado.

Maceramos el concentrado en un mortero.

Se pasó la muestra de concentrado macerada a un tubo de centrifuga.

Por otro lado se cogió 10 ml de solución fría de buffer fosfato 0,05M, PH=6,8-7,0.

Después se le adiciono a la muestra y se agito por 3 minutos.

Posteriormente se pasó a centrifugar a 250 rpm, por 5 minutos pero primero se nivelo la
máquina de centrifuga, con agua.

Se sacó el sobrenadante y se pasó a una probeta el volumen medido de la muestra VS

(Volumen del solido)= 1.8 ml, se depositaron 5 ml al tubo de ensayo se tapó y se rotulo
ECCAT (Extracto de concentrado para catalasa).

Se volvió a introducir la muestra de concentrado pulverizada en la máquina de centrifuga,

en total se hicieron 4 centrifugadas de la muestra con variación de 2.6. 2.8 y 3.2 con un
total de tiempo de 20 minutos.
1.2 Con muestra de sangre

En un tubo de ensayo se colocaron 0.2 ml de sangre y 10 ml de buffer fosfato frio.

Después se agito vigorosamente hasta obtener mezcla completa, se tapó y se rotulo como
SSCAT (Solución sanguínea para catalasa).

Posteriormente se pasó la solución a un beaker con hielo.

1.3 Con muestra de orina

En un tubo de ensayo se mezclaron 4 ml de muestra de orina, con 6 mL de buffer fosfato
frio.

21
 .

Después se agito, tapo y rotulo como SOCAT (Solución de orina para catalasa), colocar en
baño de hielo.
2. Cuantificación

2.1 Mezcla Reactiva

Alistamos 7 tubos de ensayo y los rotularlos así: B, 1, 2, 3, colocamos en baño de hielo y

adicionamos los siguientes reactivos en el orden dado:

Tubos de ensayo
REACTIVOS B 1 2 3
(ML)
Peróxido 4 4 4 4
Buffer fosfato 5 4 4 4
Ácido sulfúrico 1 0 0 0
ECCAT 0 1 0 0
SSCAT 0 0 1 0
SOCAT 0 0 0 1
Agitamos vigorosamente los tubos por 30 segundos y luego se colocaron nuevamente en el
baño de hielo y se dejaron en reposo durante 5 min, para que se desarrollara la RBE.

Después de adicionarle los reactivos Agitamos los tubos, con cuidado por 15 segundos,
hasta mezclarlos completamente sacamos la solución del tubo blanco y la pasamos a un
Erlenmeyer o beaker.

21
 .

2.2 Practica de Titulación permanganometrica.

Alistamos el montaje de titulación, colocamos el Erlenmeyer debajo de la bureta y se
tituló adicionando lentamente el KMnO4, agitamos, hasta que apareció y permaneció un
color rosado o violeta pálido, por 30 segundos, en la solución reactiva, registramos los ml
de permanganato gastados en este proceso.

TUBOS TIEMPO

B 10 segundos
1 8 segundos

2 5 segundos
3 1 segundos

Tiempo en que se demoró el cambio de color al adicionar el KmnO4, en cada uno de los 4
tubos de ensayo:
Lista de materiales y reactivos

Material / Equipo Características

Montaje de titulación:
Soporte universal
Bureta Metálico
Pinzas 50mL
Erlenmeyer. Madera

Pipeta graduada
Probeta graduada 125mL
Beaker 10 mL
tubos de ensayo 100mL
Tubo de centrifuga 400mL

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 .

Con gradilla

Reactivo Fórmula Concentración

Peróxido de hidrogeno H2O2 0,05M

Ácido sulfúrico H2SO4 2N

Permanganato de KMnO4 0,01M
potasio (ECAT)
Extractos de catalasa 10mL
0.2 g
Búfer de fosfato frio
Concentrado
Sangre 0.2 mL
Orina 4mL

3. tabla de datos
Tabla 1:Datos para actividad catalítica de catalasa (ACAT)

Tubos ml de KMnO4 0,01N Vs (ml)

B Blanco 10 ml 3.2

1 Concentrado 8 ml 3.2

2 Sangre 3 ml 3.2

3 Orina 5 ml 3.2

Resultados: para sacar el valor definitivo del sobrenadante, tuvimos que centrifugar la
muestra de concentrado 4 veces, los valores fueron: 1.8, 2.6, y 2.8 hasta sacar el Vs (ml) de

21
 .

3.2 ml, el cual se utilizó para aplicarlo en la formula y hacer los cálculos para cada uno de
los tubos de ensayo utilizados.

Notamos que para el tubo B, se adicionó más ml de permanganato de potasio con respecto
al tubo 1, 2 y 3 para obtener el color violeta requerido, debido a que no notábamos el color
que aparentemente queríamos obtener, y además tomo más tiempo (10 segundos), en
cambiar de color. Por otra parte al tubo 1 se le adiciono 8 ml el tiempo que se gastó para
cambiar de color fue de 8 segundos, al tubo 2 se le adiciono KMnO4 3 ml, es decir se le
adiciono menos cantidad y al agitarlo se obtuvo el color requerido, con un tiempo de
cambio de 5 segundos y el tubo 3 se le adiciona 5 ml del reactivo y rápidamente se obtuvo
el color violeta; sólo se demora 1 segundo en cambiar de color pero unos segundos después
de agitar, el solvente torna a su color natural, desapareciendo por completo el color violeta.

Ml. Tiempo
TUBO
KMnO4 (Segundos)
B 10 10
1
8 8
(Concentrado)
2
3 5
(Sangre)
3
5 1
(Orina)

4. cálculos

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 .

Cálculos para el tubo 1

F= . . 1000 mol de H202

F= 3.125 X 2.5= 7.8 X 1000

F= 7812.5

Cálculos para el tubo 2

Cálculos para el tubo 3

39.062

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 .

Diagramas de flujo
Procedimiento de extracción en concentrado

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 .

Procedimiento de extracción de sangre

Procedimiento de extracción en orina

Procedimiento de titulación permanganometrica

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 .

Aplicaciones

Aplicaciones en la zootecnia: Preparados enzimáticos que contienen glucosa-oxidara junto

con catalasa se emplean como antioxidantes de productos líquidos y pastosos, como
mantequilla, mayonesa y grasa animal, eventualmente con adición de glucosa (0,5%). Aquí
debe evitarse que el lípido tenga exceso de acidez, la cual puede inactivar la catalasa.
Suelen aplicarse del preparado enzimático 20-25 mg/kg.

Aplicaciones en la agronomía
Para medir la salud del suelo se toma en cuenta la eficiencia de procesos como los ciclos de
nutrientes y los flujos de energía. En este contexto, uno de los indicadores que se ha
utilizado es la magnitud de la actividad de diferentes enzimas involucradas en los procesos
antes mencionados.

21
 .

En agricultura, la actividad enzimática y otros indicadores biológicos, como la biomasa

microbiana, se emplean como una medida de la fertilidad y del impacto de esta actividad en
los suelos

La catalasa se encuentra en todas las bacterias aeróbicas y en la mayor parte de los

organismos anaerobios facultativos; es una enzima de tipo intracelular, de ahí que, se ha
utilizado como índice de la biomasa edáfica y como un componente de diferentes índices de
fertilidad. Actúa principalmente a nivel intracelular, aunque permanece activo fuera de las
células microbianas asociado con la materia orgánica del suelo y/o adsorbida sobre
minerales arcillosos. Es posible que esos factores incidieran para que la práctica del lavado
de los suelos no provocara diferencias significativas en la actividad de la catalasa.

21
 .

Conclusiones

1. La velocidad de una reacción enzimática depende de varios factores, como es el PH.

Cada enzima tiene un rango de PH en el que su actividad enzimática es óptima, fuera de
este rango, la enzima por ser una proteína, empieza a desnaturalizarse por la desprotonación
o pronación de sus aminoácidos constituyentes

2. Otro factor fundamental es la velocidad a la que se realiza una reacción en la

concentración de enzimas y de sustrato. Esto se conoce teóricamente debido a que todas las
reacciones con la teoría de Michaelis - Menten, donde si la concentración de sustrato o de
enzimas es muy baja, la velocidad aumenta proporcionalmente al aumento de la
concentración.

3. Otra conclusión a la que se puede llegar en cuanto al tubo 3, que contenía orina, en el
momento de la titulación con KMnO4 es que al mezclarse con la orina cambiaba
ligeramente de color pero ésta volvía a su estado normal, es decir, no se mantenía al
agitarlo por menos de 15 segundos, por tanto podemos concluir que la razón más cercana a
éste acontecimiento es debido a que en la orina no hay actividad de catalasas. A parte de
que podemos darnos cuenta de que no hay presencia de sangre, bacterias, u otro tipo de
enfermedades en la orina de la persona que donó la muestra.

Recomendación

Dentro de las recomendaciones que se pueden dar, es que si queremos un aumento gradual
de la reacción enzimática se debe determinar la temperatura óptima, en éste caso para la
mayoría de las enzimas humanas puede haber un rango entre 35 y 40% °C, a partir de la
temperatura máxima indicada, éstas comienzan a desnaturalizarse por encima de los 40 °C.

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