Informe N 2

FISIOLOGÍA MICROBIANA UNMSM
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
Facultad de Ciencias Biológicas

E.A.P. Microbiología y Parasitología (10.3)
Práctica N°2: ESTUDIO DE METABOLISMO DE LAS PROTEÍNAS POR LOS

MICROORGANISMOS
Curso:
 Fisiología Microbiana
Alumna:
 Cárdenas Ortega Joel
Profesor:
 Roger Palomino
Horario:
 Miercoles y viernes de 2 a 4 pm.
Fecha de realizacion:
 Miercoles 07 de setiembre del 2018
Fecha de entrega:
 Miercoles 12 de setiembre del 2018
pág. 1
INTRODUCCIÒN
Los microorganismos para poder cumplir con su metabolismo, se valen de toda

sustancia que pueda estar en el nicho ecológico donde ellos habitan. Los
microrganismos tienen opción de utilizar diferentes tipos de compuestos. Desde el
punto de vista energético los compuestos más requeridos son carbohidratos y
lípidos; pero en algunos casos los microorganismos también suelen utilizar
proteínas.
La proteína no le es directamente útil a la célula microbiana, tiene que degradarla

con enzimas denominadas proteasas, que toman nombres específicos dependiendo
de la proteína que degrade.
Una vez que degrada a las proteínas en sus componentes moleculares,

aminoácidos, estos si le sirven como fuente energética, para producir CO2 y
energía.
pág. 2
RESUMEN
En la práctica se realizaron dos experiencias: la acción proteolítica sobre la gelatina:

formas de licuefacción e hidrolisis de caseína.
Para la acción proteolítica de la gelatina se sembró por puntura E. coli,

Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus subtilis en 1 tubo con
medio gelatina cada uno y luego se incubó a temperatura ambiente
Finalmente, para hidrólisis de caseína se sembró por estriado simple E. coli y

Bacillus subtilis en una placa con Agar-leche la cual fue dividida en dos partes
iguales, y rotulados correctamente con los nombres de las cepas utilizadas cada
una, seguidamente se incubó a 37°C
pág. 3
OBJETIVOS
 Diferenciar a los microorganismos según la producción o no producción de

ciertas enzimas como: proteasas, caseínasa, gelatinasa, etc.
 Evidenciar como ciertas especies de bacterianas producen enzimas

denominadas GELATINASA y CASEINASA, tanto para la licuefacción e
hidrolisis de proteínas.
 Evidenciar como es que los microorganismos acceden a las proteínas y a los

productos de la degradación de las proteínas para cumplir con su metabolismo.
pág. 4
MATERIALES
 Cultivo en caldo de:
- Escherichia coli
- Staphylococcus aureus
- Pseudomonas aeruginosa
- Bacillus subtilis
 4 tubos con gelatina, rotulados correspondientemente:
 1 placa con agar-leche:
pág. 5
PROCEDIMIENTOS
EXPERIENCIA Nº1
Acción proteolítica sobre la gelatina: formas de licuefacción:
1. Se sembró por puntura cada especie microbiana de E coli, Staphylococcus

aureus, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus subtilis en los medios de
gelatina en columna.
2. Luego se incubaron los 4 cultivos a temperatura ambiente.
EXPERIENCIA Nº2
Hidrólisis de la caseína:
1. Se dividió una placa petri con agar-leche en dos sectores.
pág. 6
2. Se inoculó E coli y Bacillus subtilis.
3. Luego se incubaron ambas placas a 37°C durante 24 hrs.
pág. 7
RESULTADOS
E. coli: solidificación
NEGATIVO (extremo
derecho)
S. aureus, P. aeruginosa y B.
subtilis: licuefacción de la
gelatina
POSITIVO (de izquierda a

derecha respectivamente)
E. coli: CASEINASA NEGATIVO

(lado izquierdo)
B. subtilis: presento un halo

CASEINASA POSITIVO (lado
derecho)
pág. 8
DISCUSION
Esta prueba se realizó con el fin de determinar la capacidad de algunos

microorganismos de producir exoenzimas gelatinasas.
Se utilizó el medio de cultivo Gelatina Nutritiva que está compuesto de peptona,

extracto de carne, gelatina y agua destilada. La gelatina es una proteína demasiado
grande para entrar en la célula bacteriana, por lo tanto la célula primero la cataboliza
en componentes más pequeños, aminoácidos.
Los tubo con S. aureus P. aeruginosa, y B. subtilis licuaron la gelatina, mientras que
el tubo con E. coli continuo con el medio solificado.
La caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco y opaco

característico, debido a que está presente en suspensión coloidal. Muchas bacterias
poseen caseasa, una exoenzima capaz de hidrolizar dicha proteína, esta produce
péptidos más pequeños y por lo tanto suspensiones más claras. A este fenómeno
se le denomina “peptonización” y es útil en la identificación de algunas especies
microbianas.
El área de la placa donde se inoculó E.coli resulto negativa en la producción de

caseínasa, mientras que B. subtilis resultó positiva a caseínasa.
ANEXO
Tabla 1. Resultados del metabolismo de enzimas de 4 especies bacterianas.
PRUEBAS Proteólisis de la Hidrolisis de la

M.O Gelatina caseína
E. coli - -
S. aureus +
P.aeruginosa +
B. subtilis + +
pág. 9
CONCLUSIONES
 Cada reacción metabólica está regulada no solo con respecto a otras

reacciones, sino también con respecto a la concentración de nutrientes en el
medio.
 Las proteínas funcionan como enzimas, para formar estructuras, pero

además los aminoácidos pueden utilizarse como fuente de energía o como
sustratos para otras rutas biosintéticas
 En el laboratorio es posible conocer las características metabólicas de los

microorganismos inoculándolos en diferentes medios de cultivo con sustratos
que pueden utilizar como fuente de energía, fuente de carbono y como
factores esenciales para su crecimiento.
pág. 10
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué es importante la capacidad de degradar proteínas que ostentan

algunos microorganismos?
La importancia de degradar las proteínas consiste en la conversión de moléculas

complejas en moléculas más simples para que estos puedan ser debidamente
aprovechados por los microorganismos.
La transformación de los nutrientes en compuestos útiles para la subsistencia

de un organismo se lleva a cabo por medio de las reacciones químicas que
realizan unas proteínas conocidas como enzimas
2. ¿Qué enzimas están implicadas en la degradación de la gelatina?
La prueba de licuefacción de gelatina se utiliza como medio de cultivo gelatina

nutritiva, en esta prueba se pretende determinar la capacidad de un microorganismo
de producir enzimas de tipo proteolíticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la
gelatina o muestran cambios característicos debido a los productos de degradación.
La gelatina como proteína derivada del colágeno animal es hidrolizada por la
gelatinasa en sus aminoácidos constituidos, con pérdida de sus características
gelificantes.
El medio de cultivo de gelatina contiene peptona y el extracto de carne que

proporcionan los nutrientes necesarios para el desarrollo de los microorganismos.
La gelatina es el sustrato para determinar la capacidad de un microorganismo de
producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas), que licúan la gelatina.
3. ¿Qué efecto tiene la degradación de la caseína sobre las características

organolépticas de la leche?
Al hablar sobre las características organolépticas de la leche nos referimos a un

análisis sensorial (color, olor, sabor, consistencia), estas características se pueden
observar al momento que se da hidrolisis de la caseína en el agar leche por B.
subtilis resultando positiva a caseínasa mostrando un halo alrededor de siembra,
esto producto de la ruptura de enlaces peptídicos, ruptura del enlace amidico y la
formación de un complejo enzima-sustrato
pág. 11
BIBLIOGRAFIA
 Jean F. MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica. Portada. Ed. Médica Panamericana, 2003 - 850
páginas.
 Ozawa, A. (1967). Relationship between Indole Production, Nitrite Production

and Carbohydrate Fermentation in Vibrio cholerae. Japanese journal of
microbiology, 11(1), 25-31.
 Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio. Front Cover.

Editorial Universidad de Costa Rica, 2005 - 475 pages
pág. 12

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Facultad de Ciencias Biológicas

Práctica N°2: ESTUDIO DE METABOLISMO DE LAS PROTEÍNAS POR LOS

 Cárdenas Ortega Joel

 Miercoles y viernes de 2 a 4 pm.

 Miercoles 07 de setiembre del 2018

 Miercoles 12 de setiembre del 2018

Los microorganismos para poder cumplir con su metabolismo, se valen de toda

La proteína no le es directamente útil a la célula microbiana, tiene que degradarla

Una vez que degrada a las proteínas en sus componentes moleculares,

En la práctica se realizaron dos experiencias: la acción proteolítica sobre la gelatina:

Para la acción proteolítica de la gelatina se sembró por puntura E. coli,

Finalmente, para hidrólisis de caseína se sembró por estriado simple E. coli y

 Diferenciar a los microorganismos según la producción o no producción de

 Evidenciar como ciertas especies de bacterianas producen enzimas

 Evidenciar como es que los microorganismos acceden a las proteínas y a los

 Cultivo en caldo de:

 4 tubos con gelatina, rotulados correspondientemente:

 1 placa con agar-leche:

Acción proteolítica sobre la gelatina: formas de licuefacción:

1. Se sembró por puntura cada especie microbiana de E coli, Staphylococcus

2. Luego se incubaron los 4 cultivos a temperatura ambiente.

1. Se dividió una placa petri con agar-leche en dos sectores.

2. Se inoculó E coli y Bacillus subtilis.

3. Luego se incubaron ambas placas a 37°C durante 24 hrs.

POSITIVO (de izquierda a

E. coli: CASEINASA NEGATIVO

B. subtilis: presento un halo

Esta prueba se realizó con el fin de determinar la capacidad de algunos

Se utilizó el medio de cultivo Gelatina Nutritiva que está compuesto de peptona,

La caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco y opaco

El área de la placa donde se inoculó E.coli resulto negativa en la producción de

PRUEBAS Proteólisis de la Hidrolisis de la

 Cada reacción metabólica está regulada no solo con respecto a otras

 Las proteínas funcionan como enzimas, para formar estructuras, pero

 En el laboratorio es posible conocer las características metabólicas de los

1. ¿Por qué es importante la capacidad de degradar proteínas que ostentan

La importancia de degradar las proteínas consiste en la conversión de moléculas

La transformación de los nutrientes en compuestos útiles para la subsistencia

2. ¿Qué enzimas están implicadas en la degradación de la gelatina?

La prueba de licuefacción de gelatina se utiliza como medio de cultivo gelatina

El medio de cultivo de gelatina contiene peptona y el extracto de carne que

3. ¿Qué efecto tiene la degradación de la caseína sobre las características

Al hablar sobre las características organolépticas de la leche nos referimos a un

 Ozawa, A. (1967). Relationship between Indole Production, Nitrite Production

 Bacteriología General: Principios Y Prácticas de Laboratorio. Front Cover.

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