Este documento presenta los protocolos para realizar pruebas bioquímicas para identificar bacterias, incluyendo pruebas de amilasa, caseinasa, gelatinasa, oxidasa, catalasa, DNA-asa, fermentación de lactosa y glucosa, producción de H2S. Describe los medios de cultivo, sustratos e indicadores utilizados en cada prueba así como los resultados esperados.
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Este documento presenta los protocolos para realizar pruebas bioquímicas para identificar bacterias, incluyendo pruebas de amilasa, caseinasa, gelatinasa, oxidasa, catalasa, DNA-asa, fermentación de lactosa y glucosa, producción de H2S. Describe los medios de cultivo, sustratos e indicadores utilizados en cada prueba así como los resultados esperados.
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Este documento presenta los protocolos para realizar pruebas bioquímicas para identificar bacterias, incluyendo pruebas de amilasa, caseinasa, gelatinasa, oxidasa, catalasa, DNA-asa, fermentación de lactosa y glucosa, producción de H2S. Describe los medios de cultivo, sustratos e indicadores utilizados en cada prueba así como los resultados esperados.
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SEM 2018-1 Microbiología experimental Grupo 2 18/Octubre/ 2017
Hernández Alcantar Ivan Equipo 4
Prueba Medio de Sustrato Indicadores y/o Control de resultados bioquímica cultivo reveladores + - Caldo: Ausencia de + Caldo: color azul en color en todo el medio; todo el medio. el medio permanece + Placas/tubos: medio incoloro o presenta un color púrpura-azul en el Yodo acuoso de leve tinte amarillo crecimiento (alrededor Amilasa Agar almidón Almidón Gram/Yodo acuoso debido al color del del mismo). de lugol reactivo de yodo. + Almidón no Placas/tubos: medio hidrolizado; la mayoría de color púrpura-azul aún presente. con un área incolora (zona de hidrólisis) alrededor del crecimiento.
Caseinasa Agar Leche Las proteasas son La caseína no es
Descremada. Caseína No requiere excretadas al medio hidrolizada y el color para la degradación de blanco permanece. proteínas, la caseína es la proteína de la leche que le confiere el color blanco, cuando la caseína es hidrolizada desaparece el color blanco alrededor del crecimiento microbiano. Licuefacción de la No hay licuefacción de Medio con gelatina. Partículas la gelatina. Mezcla de Gelatinasa gelatina de Gelatina Carbón activado libres de carbón carbón-gelatina intacta. Kohn sedimentan en el fondo No hay ninguna del tubo partícula libre de carbón en el medio. La colonia se vuelve de Sin cambios de color color rosa, luego en las colonias o un Reactivo de marrón (rojo oscuro) y color rosa pálido Medio de cultivo Kovacs, Reactivo por último negro debido al reactivo. Oxidasa enriquecido Compuesto de Gordon y purpúreo. Puede ocurrir un reducido Mcleod, Reactivos Colonias rosa: cambio de coloración al de Gaby y Hadley bacterias viables negro en el medio Colonias negras: circundante. Dentro de los 10-15 seg., bacterias no viables. Peróxido de Pruebas de catalasa Ausencia de burbujas; Medio de cultivo Compuesto hidrógeno, Buffer rutinarias: burbujeo ausencia de O2 Catalasa enriquecido oxidado fosfato M/15 (pH inmediato, observado 7.0), Tween 80 con facilidad; formación (10%). de O2. Medio ácido-DTA Ausencia de estándar: Zona de aclaramiento alrededor Agar DTA aclaramiento inmediato de las colonias, estándar (Puede alrededor de la colonia precipitado nebuloso DNA-asa agregarse ÁDN Ácido Clorhídrico bacteriana, adyacente alrededor de la colonia manitol) a la zona clara una y a lo largo del medio zona blanca, nublada debido a las sales (sales precipitadas en precipitadas en el el medio), hidrolizado medio, DNA no de DNA hidrolizado-. Tubo: Reacción ácida, Tubo: Desarrollo color amarillo solamente, ningún Fermentación de Agar con hierro Rojo de Fenol y Fondo del tubo: cambio de color. lactosa de Kligler Lactosa sales de Fe (2+) Reacción ácida, color Fondo del tubo: amarillo. Desarrollo solamente, SEM 2018-1 Microbiología experimental Grupo 2 18/Octubre/ 2017 Hernández Alcantar Ivan Equipo 4 ningún cambio de color.
Tubo: reacción alcalina, Tubo: Desarrollo
color rojo solamente, ningún Fermentación de Agar con hierro Rojo de fenol y Fondo del tubo: cambio de color. glucosa de Kligler Glucosa sales de Fe (2+) Reacción ácida, color Fondo del tubo: amarilla Desarrollo solamente, ningún cambio de color. Precipitado negro No hay producción de evidenciado por sulfuro ferroso (color Agar con hierro diseminación del color negro). Producción de 𝐻2 𝑆 de Kliger 𝐻2 𝑆 Tiosulfato de sodio. negro en todo el fondo, lo cual enmascara la acidez, un anillo negro cerca de la parte superior del fondo. Movilidad: crecimiento Ni fermentación ni que se difunde desde oxidación (lectura de la línea de punción. control del carbohidrato Produce ácidos por: no inoculado): TUBO ABIERTO (O): TUBO ABIERTO: Azul Respiración: o verde Medio basal OF Ligeramente amarillo TUBO CERRADO: de Hugh y Azul de bromotimol en superficie. Púrpura O/F Glucosa Leifson (OFBM), Glucosa (OFBM), púrpura de Fermentación: Amarillo Staph OF. bromocresol (Staph No produce ácidos: OF) Verde o azulado TUBO CERRADO (F) Respiración: Verde Fermentación: Amarillo No produce ácidos: Verde o azulado
Medio de citrato Medio citrato de Medio citrato de
de Simmons, Simmons: Crecimiento Simmons: Ausencia Medio con con un intenso colo de crecimiento y ningún Citrato sulfuro de citrato Citrato Azul de bromotimol azul en el pico de cambio en el colo de Christensen flauta. (verde). ó agar citrato de Medio de citrato de Medio de citrato de Christensen Christensen y forma Christensen y forma (modificado). modificada: Rosa-rojo modificada: Rosa-rojo en el pico de flauta. en el pico de flauta. Caldo con urea de Caldo con urea de Stuart: Color rosa-rojo Stuart: Sin cambios de Caldo con urea intenso en todo el color (amarillo-naranja) de Rustigan y caldo. Agar con urea de Ureasa Stuart, agar con Urea Rojo fenol Agar con urea de Christensen: Sin urea de Christensen: Color cambios de color (Color Christensen rosa-rojo (rojo-violeta) piel a amarillo pálido). intenso en el pico de flauta. El color puede penetrar en el interior del agar. Lisina Medio base Lisina Púrpura de Color púrpura turbio a Color amarillo brillante, Descarbo- Ornitina para Ornitina bromocresol, Rojo amarillo-púrpura claro (El xilación Arginina descarboxilasa Arginina cresol. apagado(producción de microorganismo solo de Moller cadaverina). fermentó la glucosa)
El cultivo es Color amarillo en la
SEM 2018-1 Microbiología experimental Grupo 2 18/Octubre/ 2017 Hernández Alcantar Ivan Equipo 4 suficientemente ácido superficie del medio. para permitir que el RM Medio de Clark Glucosa Rojo de metilo reactivo rojo de metilo y Lubs permanezca con un modificado color distintivo rojo brillante , estable, en la superficie del medio. Reactivo VP de Color rosado-rojo en la Color amarillo en la VP Medio de Clark Glucosa Barritt, reactivo VP superficie del medio superficie del medio y Lubs de Coblentz, (acetoína presente) (igual color que el modificado reactivo VP único reactivo).Puede de O’Meara formarse un color (modificado) cobrizo, pero es un resultado negativo. Controlar la Controlar la producción de gas: producción de gas: Burbujas de gas en el Ausencia de gas, tubo Durham, en la continuar con la fase I. superficie o en todo el Fase I: Falta de medio semisólido, una desarrollo de color, El única burbuja es nitrito no está presente, significativa. Si el MO continuar con la fase II es un no fermentador= para probar la Ácido acético, ácido prueba terminada. Si presencia de nitrato no Medio KNO3: sulfanílico (0.8%), es fermentador reducido. Caldo nitrato NO3 (-) alfa-Naftilamina, continuar con fase I. Fase II: Color rosa a Reducción de NO3 Agar nitrato reactivo de Nessler Fase I: Color rosa a rojo oscuro en 5-10 rojo oscuro en 1-2 min min, nitrato presente Fase II: Ausencia del (no reducido por el desarrollo de color, MO), el zinc redujo ausencia de nitrito nitrato a nitrito. (NO2-) en el medio. El microorganismo redujo nitrato a nitrito y después a productos no gaseosos. Probar la producción de NH3 por el agregado de reactivo de Nessler (muestra de color naranja oscuro). Cloruro férrico Color verde pálido a Sin cambios de color; Fenilalanina- Medio Fenilalanina (10%), sulfato de intenso en el pico de permanece amarillo desaminasa fenilalanina amonio férrico. flauta y en el líquido de debido al color del condensación reactivo FeCl3 En segundos, aparece No hay un anillo rojo (fuscia ningún desarrollo de Caldo triptófano brillante) en la interfase color en la capa de Indol o peptona, Triptófano Reactivo de Kovacs del medio con la alcohol o aparece un Medio de o reactivo de porción inferior de la anillo turbio; toma el caseína Ehrlich fase alcohólica, sobre color del reactivo de el medio Kovacs o de Ehrlich (amarillo) Medio para Móvil: Microorganismos Inmóvil: Crecimiento prueba de móviles que migran bacteriano acentuado a movilidad desde la línea de lo largo de la línea de Movilidad (semisólido): Triptófano siembra y difunden en siembra; el medio que fórmula de No requiere el medio, lo que la rodea permanece Edwards y produce turbidez. claro. Ewing. Pueden mostrar estrías de crecimiento velloso. En presencia de No se observa el tiosulfato en el medio o precipitado negro. la degradación de Medios de proteínas liberando cultivo que Tiosulfato Reactivo de Kovacs aminoácidos azufrados, Producción de H2S contienen o reactivo de algunos SEM 2018-1 Microbiología experimental Grupo 2 18/Octubre/ 2017 Hernández Alcantar Ivan Equipo 4 aminoácidos Ehrlich microorganismos azufrados. forman H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa. El gas incoloro H2S reacciona con el citrato de amonio férrico para producir un precipitado negro. Color amarillo entre los Incoloro después de 24 20 min y las 24 h. El hrs. microorganismo beta-galactosidasa Caldo ONPG ONPG o- Nitrofenol contiene enzimas fermentadoras de lactosa; se clasifica como un fermentador de lactosa