FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA EN

LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGICA

ASIGNATURA:

BIOQUÍMICA

INFORME:

PRÁCTICA I: ESPECTROFOTOMETRÍA - FACTOR Y CURVA DE CALIBRACIÓN

Docente:

Lima - Perú

2023-I
 PRÁCTICA N°1

1. MÉTODO: Procedimental Cuantitativo

2. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales:

● 1 bureta
● 2 vasos de precipitación de 250
mL ● Pipeta volumétrica de 10 mL

● Balanza

● 2 matraces Erlenmeyer de 250 mL

● Papel

indicador ● Tubos de ensayo

● Espectrofotómetro
 Reactivos:

● Sulfato de Cobre (II) (10mg/dL) +

● Nitrato de Cobalto (II) (5mg/dL)
● Permanganato de Potasio (1g/dL)

3.

ETAPAS DEL PROCEDIMIENTO

INICIO Procedimiento:
Reconocimiento de Colocarse los EPP para realizar la
Materiales y reactivos. practica, mandilon y guantes.

Empezaremos colocando en el
primer tubo el volumen de
REACTIVO con ayuda de una pipeta Enumerar los tubos de ensayo que
automatica, segun como nos indica se usaran para la practica, del 1 al 5
en la tabla. respectivamente.
Luego el segundo tubo y asi
sucesivamente.

Ahora cambiamos el tip a la Obtendremos un volumne final de 2

micropipeta y lo llevamos hasta la ml en cada tubo.
marca deseada. Corresponde
Observamos que cada tubo tiene
colocar al primer tubo el volumen
una concentracion de color que va
de AGUA DESTILADA, y asi
de menos a mas.
sucesivamente a todos los tubos
segun los datos de la tabla. Procedemos a llevar a lectura.
 Para las lecturas usaremos las
cubetas donde verteremos el
contenido de cada tubo. Prendemos el espectofotometro y lo
llevamos a la longitud de onda
Primero colocamos agua destilada, deseada en nanometros.
el cual usaremos como blanco para
llevar a 0.

TUBO 1 Apuntamos los datos

4 de las lecturas
Una vez blanqueado , procedemos a TUBO 2 TUBO 3 TUBO
obtenidas.
TUBO 5
realizar las lecturas del tubo 2 a
Sulfato de Cobre(II) (10mg/dL)
diferentes (μl)
longitudes 200 para
de onda 400 Realizamos
600 la lectura
1000 de los demas
2000
obtener la longitud maxima tubos a la longitud de onda que nos
deseada. dio la maxima lectura para el tubo
Agua destilada (μl) 1800 1600 1400 1000
2. ……

Volumen final (mL) 2 2 2 2 2

Concentración final (mg/dL)

Anotamos los datos obtenidaos y

realizamos los calculos.

Sulfato de Cobre (II) (10mg/dL)

4. Determinación de la longitud de máxima absorbancia.

Realizando la lectura en el tubo

2 a diferentes longitudes de onda,
podemos observar que la mayor
lectura para dicho tubo se da a 700nm
en el caso de SULFATO DE COBRE,
y 500nm para el caso de las muestras con NITRATO DE COBALTO y

PERMANGANATO DE POTASIO.

CURVA DE CALIBRACIÓN - SULFATO DE COBRE

1 0.902
0.9
0.8
ABSORVANCIA

0.7 0.594
0.6 0.536
0.486
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
LONGITUD DE ONDA

Serie 1

Determinación de las concentraciones finales.

Ahora realizaremos las lecturas de los demás tubos a la longitud de onda de máxima
absorbancia para cada reactivo.

ABSORBANCIAS: Lectura a 700 nm

 TUBO 1= 0.252
 TUBO 2= 0.552
 TUBO 3= 0.622
 TUBO 4= 1.065
 TUBO 5= 1.796

Concentración final:

 TUBO 1: CI x VI= CF x VF
10 mg/dl x 200ul = CF x 2ml
 CF= (10 x 0.2)/2 = 1mg/dl
 TUBO 2: 10 mg/dl x 400ul = CF x 2ml
CF= (10 x 0.4)/2 = 2mg/dl
 TUBO 3: 10 mg/dl x 600ul = CF x 2ml
CF= (10 x 0.6)/2 = 3mg/dl
 TUBO 4: 10 mg/dl x 1000ul = CF x 2ml
CF= (10 x 1)/2 = 5mg/dl
 TUBO 5: 10 mg/dl x 2000ul = CF x 2ml
CF= (10 x 2)/2 = 10mg/dl

CURVA DE CALIBRACIÓN - SULFATO DE

COBRE
2 TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5
1.796
1.8
Sulfato de
1.6Cobre(II) (10mg/dL) (μl) 200 400 600 1000 2000
ABSORBANCIA

1.4
Agua destilada
1.2 (μl) 1800 1600 14001.065 1000 ……
1
Volumen0.8final (mL) 0.552 2 0.622
2 2 2 2
0.6
0.4
Concentración final0.252
(mg/dL) 1mg/dL 2mg/dL 3mg/dL 5mg/dL 10mg/dL
0.2
0
1 mg/dl 2 mg/dl 3 mg/dl 5 mg/dl 10 mg/dl

CONCENTRACIÓ N FINAL
LONGITUD ONDA 700 nm

Serie 1

Nitrato de Cobalto (II) (5 mg/dL)

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

Nitrato de Cobalto (II) 400 800 1200 2000

(5mg/dL) (uL)

Agua destilada (uL) 1600 1200 800 ….

Volumen final (mL) 2 2 2 2

Concentración final (mg/dL)

Determinación de la longitud de máxima absorbancia.

Realizando la lectura del tubo 2 a diferentes longitudes de onda, podemos observar
que la mayor lectura para dicho tubo se da a 500nm en el caso NITRATO DE
COBALTO.

CURVA DE CALIBRACIÓN - NITRATO DE

COBALTO
0.423
0.4 0.325
0.319 0.323
ABSORVANCIA

0.3

0.2

0.1

0
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm

LONGITUD DE ONDA

Serie 1

Determinación de las concentraciones finales.

Ahora realizaremos las lecturas de los demás tubos a la longitud de onda de máxima
absorbancia para cada reactivo.

ABSORBANCIAS: Lectura a 500 nm

 TUBO 1= 0.006
 TUBO 2= 0.209
 TUBO 3= 0.420
 TUBO 4= 0.646

Concentración final:

 TUBO 1: CI x VI= CF x VF
5 mg/dl x 400ul = CF x 2ml
CF= (5 x 0.4)/2 = 1mg/dl

 TUBO 2: 5 mg/dl x 800ul = CF x 2ml

CF= (5 x 0.8)/2 = 2mg/dl
 TUBO 3: 5 mg/dl x 1200ul = CF x 2ml
CF= (5 x 1.2)/2 = 3mg/dl
 TUBO 4: 5 mg/dl x 2000ul = CF x 2ml
CF= (5 x 2)/2 = 5mg/dl

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

Nitrato de Cobalto (II) 400 800 1200 2000

(5mg/dL) (uL)
 Agua destilada (uL) 1600 1200 800 ….

Volumen final (mL) 2 2 2 2

Concentración final (mg/dL) 1 mg/dL 2 mg/dL 3 mg/dL 5 mg/dL

CURVA DE CALIBRACIÓN - NITRATO DE

COBALTO
0.7 0.646

0.6

0.5
0.42
ABSORBANCIA

0.4

0.3
0.209
0.2

0.1
0.006
0
1 mg/dl 2 mg/dl 3 mg/dl 5 mg/dl
CONCENTRACIÓ N FINAL
LONGITUD ONDA 500 nm

Serie 1
 Permanganato de Potasio (1g/dL)

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

Permanganato de Potasio (1g/dL) (uL) 10 20 30 40

Agua destilada (uL) 1990 1980 1970 1960

Volumen final (mL) 2 2 2 2

Concentración final (mg/dL)

Determinación de la longitud de máxima absorbancia.

Realizando la lectura del tubo 2 a diferentes longitudes de onda, podemos observar

que la mayor lectura para dicho tubo se da a 500nm en el caso PERMANGANATO DE
POTASIO.

CURVA DE CALIBRACIÓN - PERMANGANATO

DE POTASIO.

1.6 1.345
1.4
ABSORBANCIA

1.2
1 0.771 0.733
0.8 0.632
0.6
0.4
0.2
0
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm

LONGITUD DE ONDA

Serie 1

Determinación de las concentraciones finales.

Ahora realizaremos las lecturas de los demás tubos a la longitud de onda de máxima
absorbancia para cada reactivo.

ABSORBANCIAS: Lectura a 500 nm

 TUBO 1= 1.239
 TUBO 2= 1.345
 TUBO 3= 1.612
 TUBO 4= 2.149

Concentración final:

 TUBO 1: CI x VI= CF x VF
1 g/dL x 10ul = CF x 2ml
CF= (1 x 0.01)/2 = 0.005 g/dL
 TUBO 2: 1 g/dl x 20ul = CF x 2ml
 CF= (1 x 0.02)/2 = 0.01 g/dL
 TUBO 3: 1 g/dl x 30ul = CF x 2ml
CF= (1 x 0.03)/2 = 0.015 g/dL
 TUBO 4: 1 g/dl x 40ul = CF x 2ml
CF= (1 x 0.04)/2 = 0.02 g/dL

TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4

Permanganato de Potasio (1g/dL) (uL) 10 20 30 40

Agua destilada (uL) 1990 1980 1970 1960

Volumen final (mL) 2 2 2 2

Concentración final (mg/dL) 0.005 g/dL 0.01 g/dL 0.015 g/dL 0.02 g/dL

5. Resultados:
CURVA DE CALIBRACIÓN - PERMAN-
GANATO DE POTASIO.

2.5
2.149

2
1.612
ABSORBANCIA

1.5 1.345
1.239

0.5

0
0.05 g/dl 0.01 g/dl 0.015 g/dl 0.02 g/dl
CONCENTRACIÓ N FINAL
LONGITUD ONDA 500 nm

Serie 1
Los resultados de las concentraciones finales de cada reactivo nos indican que a
mayor concentración de la muestra es decir a mayor intensidad de color mayor será la
absorbancia, como nos muestra las lecturas realizadas en el espectrofotómetro. De
esta manera se cumple la ley de LAMBER Y BEER.
6. Discusión:
Al realizar la práctica debemos tener en cuenta que los tubos a utilizar deben estar
secos y limpios, ya que si están con restos de otras sustancias puede darnos como
resultados en la lectura valores no esperados.
También debemos tener en cuenta al momento de pipetear tanto la muestra como el
reactivo, considerar que sea correcta el manejo de la pipeta automática ya que
podemos absorber el volumen incorrecto y esto conllevara a obtener valores no
esperados como lo observamos en la primera curva con el reactivo de SULFATO DE
COBRE, los valores de la lectura de las absorbancias de las muestras no están dentro
de la recta esperada. Lo que nos indica probable error al momento del pipeteo de la
muestra.
Conocer el uso del equipo espectrofotómetro y prenderlo minutos antes de ser usado,
para evitar demoras en las lecturas.
Como podemos observar en las imágenes, debemos insertar de manera adecuada las
cubetas al espectrofotómetro para realizar las lecturas, ya que de colocarlos en sentido
inadecuado el equipo no podrá realizar la lectura del mismo.
Al realizar las lecturas de cada una de las muestras podemos observar que la lectura
del tubo 1 hasta el 5, va en aumento, a mayor concentración de color de la muestra
mayor absorbancia del mismo.
Apuntar los datos obtenidos de las lecturas según corresponde para luego realizar la
curva de calibración, ya que sin ellos no se podrá realizar los cálculos.
Colocaremos los datos obtenidos para realizar la curva de calibración y luego
realizaremos los demás cálculos de la práctica.
7. Conclusión:
Para las lecturas realizadas con los distintos reactivos usados en la práctica, se usaron
diferentes longitudes de onda y cada concentración nos dio un valor diferente,
identificando una lectura mayor de la muestra problema a una determinada longitud de
onda, lo que nos indica que determinada longitud de onda es la ideal para la lectura de
dicho analito, es decir es el laambda máximo.

CUESTIONARIO

DO a T% T% a DO
89.1% 0.823
75.8% 0.585
58.8% 0.414
47.3% 0.373
38.01% 0.522
28.9% 0.337
17.5% 0.263
11.8% 0.301
8.6% 0.199
4.4% 0.127
3.7% 0.060
2.2% 0.020