Laboratorio de Bioquimica Enzimas
Laboratorio de Bioquimica Enzimas
Laboratorio de Bioquimica Enzimas
INFORME N 6
PI-721 A
ALUMNOS:
ALMEIDA LEANDRO ALEJANDRO MIGUEL
CONTRERAS RAMOS JHERSON DENYS
RAMOS COLLAS DAVIS CRISTOFER
SARAVIA AVALOS JOSE ROEL
LIMA PER
INDICE
ENZIMAS Y SU ACCIN EN LOS ALIMENTOS......................................................... 2
OBJETIVOS ......................................................................................................................................... 2
INTRODUCCIN ............................................................................................................................... 2
MARCO TEORICO ............................................................................................................................ 2
METODOLOGIA ................................................................................................................................ 5
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA ......................................................................... 5
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ENZIMA CATALASA ................................ 5
ACTIVIDAD DE LA -AMILSA Y EFECTO DEL pH ...................................................... 5
OBSERVACIONES ............................................................................................................................ 6
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA ......................................................................... 6
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ENZIMA CATALASA ................................ 7
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA -AMILASA ........................................................................ 8
DIAGRAMA DE FLUJO .................................................................................................................... 9
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA ......................................................................... 9
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ENZIMA CATALASA ................................ 9
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA - AMILASA .................................................................... 10
CLCULOS ....................................................................................................................................... 10
DISCUSIN DE RESULTADOS .................................................................................................. 11
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA ...................................................................... 11
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ENZIMA CATALASA .................... 12
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA -AMILASA Y EFECTO DEL PH.............................. 12
CONCLUSIONES ............................................................................................................................ 13
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA ...................................................................... 13
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ENZIMA CATALASA .................... 13
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA -AMILASA Y EFECTO DEL PH.............................. 13
CUESTIONARIO ............................................................................................................................. 13
BIBLIOGRAFIA............................................................................................................................... 16
1
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
ENZIMAS Y SU ACCIN EN LOS ALIMENTOS
OBJETIVOS
Identificacin de la enzima catalasa en diferentes alimentos y observar el
efecto de la temperatura sobre la enzima.
Observar la actividad de la enzima -amilasa presente en la saliva y el efecto
del pH sobre la enzima.
INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas que llevan a cabo reacciones bioqumicas a muy altas
velocidades, estas no se consumen durante las reacciones y presentan un grado de
especificidad. Su nombre proviene del griego y significa en la levadura ya que en
siglo XIX se pensaba que las enzimas solo actuaban al interior de ellas. La
importancia de las enzimas radica en su poder cataltico mencionado anteriormente
que ayuda a que se cumplan funciones como la de regular todo tipo de funciones y
procesos bioqumicos, participar en la respiracin celular, degradan las
macromolculas en molculas ms sencillas, crear rutas metablicas y su ausencia
genera rechazo o alergias.
En el presente laboratorio se utilizaron enzimas de origen natural como las que
estn presentes en el hgado de animales, algunos vegetales y frutas (tomate,
zanahoria, manzana y pltano) y las que estn presentes en la saliva humana, se
observar su actividad as como los efectos que tiene la temperatura y el pH sobre
las enzimas.
MARCO TEORICO
Las enzimas son protenas globulares que son catalizadores biolgicos bajando la
Energa de Activacin de reacciones; es decir, aceleran las velocidades de reaccin
de la transformacin de sustratos que se adhieren al sitio activo de la enzima a sus
respectivos productos. El sitio activo de una enzima es muy importante debido a que
es el lugar donde se produce la reaccin y que adems es el lugar donde la enzima
es especfica en seleccionar a su sustrato. De las miles de enzimas conocidas, solo
algunas decenas se producen a escala industrial, para emplearse en la manufactura
como alimentos o como materia prima, mientras que el otro grupo de enzimas
cumplen su funcin dentro de los organismos que los producen cumpliendo las
funciones anteriormente mencionadas.
La clasificacin de las enzimas en grupos de enzimas corresponde a las reacciones
importantes en el metabolismo celular. Segn la Enzyme Comission son 6 los grupos
de enzimas las cuales son: oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas,
isomerasas y ligasas.
2
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
TIPO DE REACCIN
GRUPO ENZIMA SUSTRATO
CATALIZADA
Glucosa oxidasa D-glucosa y oxgeno
Catalizan reacciones de
OXIDORREDUCTASAS Perxido de
oxidoreduccin Catalasa
hidrgeno
Promueven la transferencia de Amilosacarasa Sacarosa
distintos grupos qumicos entre
TRANSFERASAS
una molcula donadora y otra Glucosiltransferasa Almidn
aceptora
Llevan a cabo la ruptura de Lipasa Acilglicridos
enlaces covalentes con la
HIDROLASAS
introduccin de una molcula de -amilasa Almidn
agua
Rompen enlaces para la Pectato liasa Pectatos
eliminacin de un determinado
LIASAS Pectinas
grupo qumico del sustrato y Pectina Liasa
esterificadas
forman dobles ligaduras
Catalizan el arreglo espacial de
Glucosa (xilosa)
ISOMERASAS grupos del sustrato sin modificar Glucosa (xilosa)
isomerasa
su composicin qumica
Promueve la unin covalente de
dos molculas acopladas con la
LIGASAS ruptura de un enlace pirofosfato Piruvato Carboxilasa Piruvato
proveniente de ATP, UTP o CTP,
como fuente de energa
Cuadro N1. Clasificacin internacional de las enzimas (Adaptado del libro Qumica de los
alimentos)
Las enzimas industriales son de origen animal, vegetal y microbiano, pero las ms
abundantes son las ltimas.
La catalasa, una enzima oxidorreductorasa, se encuentra principalmente en el
hgado bovino as como tambin en el tejido vegetal, su funcin es convertir el agua
oxigenada o perxido de hidrgeno en agua y oxgeno, se usa como antioxidante
permitiendo alargar la vida til de zumos ctricos, cerveza y vino.
La -amilasa, una enzima hidrolasa, encuentra principalmente en la saliva humana
pero tambin se encuentra en la malta de cebada, las funciones de la enzima son:
ayudar a romper la molcula de almidn en unidades ms cortas como glucosa y as
contribuir al proceso de la digestin de carbohidratos, tambin unirse a la
bacteria Streptococcus viridans localizada en la cavidad oral, logrando bloquear el
50% de la actividad de la enzima (a travs de romper molculas de almidn), por lo
que la glucosa obtenida se utiliza como fuente de alimento para la bacteria
convirtindola en cido lctico y finalmente la enzima se une a otro tipo de bacterias
para ayudar a la limpieza bacteriana de nuestra cavidad oral.
La regulacin en la liberacin de la -amilasa salival se lleva a cabo por el sistema
nervioso autnomo (que es el que controla los movimientos involuntarios como la
respiracin, frecuencia cardiaca, entre otras), el cual a su vez est dividido en
simptico y parasimptico.
3
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
Una manera en que se activa el sistema nervioso autnomo es a travs del estrs,
produciendo en los pacientes latidos rpidos del corazn, mareos, dolores,
nerviosismo, agitacin, irritabilidad, preocupacin, problemas de concentracin y
mal humor. Por ello, algunos investigadores proponen que es a travs de una
muestra de saliva como se puede detectar cambios en la cantidad de -amilasa
salival para medir el nivel de estrs. As como el estrs, la ansiedad tambin altera
el sistema nervioso autnomo, patologas que pueden ser detectadas a travs de los
cambios en la cantidad de -amilasa salival en los adolescentes.
4
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
Figura N1. Efecto de la temperatura sobre la catalasa (CAT), peroxidasa (POD) y
polifenoloxidasa (PFO) (extrado de
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-28042006000100009)
METODOLOGIA
La metodologa que se us en este laboratorio fue la medicin de variables
cualitativas a travs de la observacin, las pruebas realizadas fueron analizadas de
manera cualitativa en los siguientes pasos para cada prueba (la explicacin de los
pasos ser de manera breve debido a que se explican mejor en el diagrama de flujo):
5
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
A 2 tubos (1 y 2) no se les adicion nada ms, a otros 2 tubos (3 y 4) se les
adicion 1 mL de la amilasa preparada, a otros 2 tubos (5 y 6) se les adicion
1 mL de la amilasa preparada ms 0,2 mL de HCl 0,1N y finalmente los otros
2 ltimos tubos (7 y 8) se les adicion 1 mL de la amilasa preparada ms 0,2
mL de NaOH 0,1N.
Luego a los tubos impares se les hace la prueba de Fehling y a los pares la
prueba de lugol.
La metodologa que se usar para explicar las distintas observaciones ser la
bsqueda de informacin (bibliogrfica y virtual) para la explicacin de las
actividades de las enzimas y los efectos de la temperatura y pH.
OBSERVACIONES
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA
6
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ENZIMA CATALASA
EFECTO DE TEMPERATURA EN LA ENZIMA CATALASA
MUESTRA OBSERVACIONES TEMPERATURA () TIEMPO DE
REACCIN
(s)
extracto desprendimiento de 0 3
de burbujas, generando
hgado de una elevacin de
res h:8cm
generacin de 25 86
desprendimiento de
burbujas, el cual el O2
se eleva una altura de
h:7cm
se evidencia 35 2.55
desprendimiento de
oxgeno, se genera
una elevacin de
h:9cm
el desprendimiento 45 2.17
de oxgeno genera
una elevacin de
h:9cm
el desprendimiento 52 78
de oxgeno a esta
temperatura, genera
una elevacin del
mismo en h:4.2cm
7
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
se evidencia 37 50
desprendimiento de
oxgeno, se genera
una elevacin de
h:7.3cm
el desprendimiento 44 40
de oxgeno genera
una elevacin de
h:10.8cm
el desprendimiento 55 31
de oxgeno a esta
temperatura, genera
una elevacin del
mismo en h:7.5cm
8
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
TUBO 7 Se evidencia muy poco 1 TUBO 8 En este caso se observa 2
Sol. Almidn precipitado rojo ladrillo, Sol. Almidn mayor presencia de
+ el cual esto no implica que + almidn, debido a la
NaOH la prueba haya dado NaOH coloracin violeta clara,
+ positiva. + el cual se asemeja ms a
Sol. Amilasa Sol. Amilasa una prueba optima de
determinacin de
presencia de almidn
DIAGRAMA DE FLUJO
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA
Tomate+H2O2
Zanahoria+H2O2 Manzana+H2O2
Hgado de res+H2O2
Hgado de pollo+H2O2
Con zanahoria
-0.5 22 37 44 55
9
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA - AMILASA
Prueba de Lugol
1 2 3 4
CLCULOS
Para el clculo de las actividades relativas se compara la velocidad de subida de la
espuma del oxgeno liberado por cada tubo
10
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
EXTRACTO DE HGADO
100
60
40
20
0
0 10 20 30 40 50 60
Temperatura (C)
EXTRACTO DE ZANAHORIA
100
90
ACtividad relativa (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
-10 0 10 20 30 40 50 60
Temperatura (C)
DISCUSIN DE RESULTADOS
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA
Muestra Resultado
11
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
Hgado de Reaccin muy
pollo rpida(4)
Hgado de res Reaccin muy
rpida(4)
Tomate Muy poca reaccin(1)
Zanahoria Moderada(3)
Pltano Muy poca reaccin(1)
12
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
El reactivo de Fehling reconoce azucares reductores en especial
monosacridos y el reactivo de Lugol reconoce polisacridos en especial
almidn. La enzima -amilasa degrada los polisacridos en monosacridos
por lo cual si la prueba de Lugol da negativa quiere decir que la enzima ha
degradado al polisacrido; mientras que si la prueba de Fehling da positiva
quiere decir que la enzima degrado al polisacrido.
Vemos que el tubo de almidn con -amilasa da negativa a la prueba de
Lugol; pues, todos los polisacridos se han degradado en monosacrido lo
cual se demuestra en la prueba de Fehling, la cual da positiva.
En los tubos con almidn y -amilasa a PH cido y PH bsico vemos que parte
de la enzima se desnaturaliza y deja de tener su accin enzimtica es por eso,
que vemos que tiene tanto polisacridos como monosacridos.
CONCLUSIONES
ACTIVIDAD DE LA ENZIMA CATALASA
La actividad relativa de del tejido animal es ms rpida que la del tejido
vegetal.
La actividad del hgado de res es ms rpida que la del hgado de pollo.
CUESTIONARIO
Las enzimas tienen aplicaciones en diferentes reas, que van desde la preparacin
de alimentos y bebidas, hasta la sntesis de farmacuticos y otros compuestos
importantes en la industria qumica. Por ejemplo, cada vez que lavamos la ropa
utilizamos enzimas, ya que stas son uno de los ingredientes de los detergentes
granulados y lquidos que se venden actualmente en todo el mundo. El papel de estas
enzimas, como las amilasas, proteasas y lipasas, consiste en degradar carbohidratos
complejos, restos de protenas y restos de grasas, respectivamente. El efecto
deslavado de la mezclilla se consigue utilizando un tratamiento con la enzima
lactasa, que es capaz de desteir la tela debido a que cataliza la conversin de
molculas de colorante en otras molculas, que ya no tienen color.
Las enzimas lipolticas han cobrado gran atencin por su potencial aplicacin en
13
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
Biotecnologa. Muchas son las aplicaciones que se han encontrado para las lipasas,
en la industria del aceite, la produccin de farmacuticos, agroqumicos y
componentes aromticos. Algunos de los productos manufacturados con
importancia comercial a partir grasas y aceites producidos por lipasas con gran
rapidez y una alta especificidad bajo condiciones controladas son los cidos grasos
poliinsaturados y jabones.
Productos Lcteos
La aplicacin de enzimas en el procesamiento de leche est bien establecida, por el
uso del cuajo (quimosina) en la produccin de queso, que tal vez representa el
empleo ms antiguo de enzimas en alimentos. Otras enzimas que participan en la
produccin de quesos son las lipasas presentes en la leche, las cuales hidrolizan el
componente graso, proporcionando cambios caractersticos en el sabor. Para
algunos quesos se pueden aumentar las lipasas naturales, aadiendo enzima extra.
Por otro par te, tambin se recomienda agregar enzimas exgenas de tipo
proteoltico para acelerar el proceso de maduracin de algunos quesos.
Molineros y Panadera
El uso de enzimas en estas industrias se debe principalmente a la deficiencia en el
trigo y en la harina, de las enzimas naturalmente presentes. El contenido de a
amilasa de la harina depende de las condiciones de crecimiento y de cosecha. En
climas hmedos la tendencia ser a tener alta actividad de a amilasa debido a
germinacin de los granos, en tanto que en climas secos el nivel de a amilasa ser
bajo debido a escasa germinacin. Esto conlleva a grandes diferencias en el
contenido de amilasa de diferentes lotes de harina.
Procesamiento de Carne
Las enzimas importantes para ablandar carne son proteasas de orgen vegetal o de
microorganismos (Bacillus subtilis y Aspergillus oryzae). Las enzimas se inyectan
14
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa
antes del sacrificio al animal o se trata la carne con las enzimas antes de cocerla, con
lo que se logra un franco ablandamiento sin provocar una protelisis importante.
Industria Cervecera
La cebada se utiliza tradicionalmente para la fabricacin de bebidas alcohlicas
como la cerveza. En su produccin se deben considerar dos operaciones distintas:
la maltera y la cervecera. La preparacin de la malta se logra por germinacin de
la cebada, durante la cual se incrementa el contenido de a amilasa. Las enzimas a y
b amilasas naturalmente presentes en el grano actan sobre el almidn produciendo
dextrinas y maltosa, que sirven como sustratos para la fermentacin posterior. Las
proteasas degradan protenas formando aminocidos y pptidos. Hay muchas
enzimas disponibles comercialmente para el proceso cervecero, pero todas ellas
caen en tres categoras: proteasas, amilasas y glucanasas. La accin de estas enzimas
durante las primeras etapas consiste en mejorar la licuefaccin del almidn, regular
el contenido de azcar y nitrgeno, mejorar la extraccin, facilitar la filtracin y
controlar la turbidez. En la filtracin del mosto reduccin de las gomas y de la
viscosidad. En la ebullicin, control de la turbidez, eliminacin final del almidn. En
esta etapa se inactivan las enzimas. Durante la fermentacin y maduracin la adicin
de enzimas sirve para controlar la turbidez.
BIBLIOGRAFIA
16
Laboratorio de Bioqumica y Microbiologa