Prctica #2: Tincin de Hematoxilina-Eosina

HERMOSILLO, SONORA A 27 de Febrero de 2017

Laboratorio de Biologa Celular

M.C. EDGAR SANDOVAL PETRIS

EQUIPO:
Ana Elisa Lagarda
Egl Mungarro Gonzlez
Ivana Peralta Velzquez
Ivn Souffl Lampar
 INTRODUCCIN

Actualmente se utiliza un mtodo de tincin en el laboratorio utilizado

principalmente para los tejidos que queremos ver. Este mtodo es llamado
Tincin Hematoxilina-Eosina (HE) que es uno de los tejidos ms populares a la
hora de tincin en histologa; esto debido a que la aplicacin de la hematoxilina,
que esta es bsica, tie estructuras con pH acido de un color morado; y con la
implementacin de la eosina que tie componentes bsicos de un color rosa-
rojo que seran de un pH bsico.

En esta prctica haremos uso de este mtodo de tincin, utilizando una

serie de pasos ya determinados, llamndole a este mtodo mtodo estndar y
tambin compararemos un mtodo alternativo a este, siendo el mismo tipo de
tincin, solo que con los pasos en un orden diferente. Y procederemos a
comparar entre estos mtodos y determinando cual es, o cual puede ser mejor
y con mayor aprovechamiento.
 OBJETIVOS

Observar las caractersticas microscpicas que adquieren diferentes tipos de

clulas cuando se someten a la tincin Hematoxilina-Eosina

A.
 MATERIALES Y MTODOS

MATERIALES:

Laboratorio

I. Microscopio ptico
II. Pipetas transfer
III. Agua destilada
IV. Hematoxilina
V. Eosina
VI. Alcohol etlico 95%
VII. Alcohol etlico 80%
VIII. Carbonato de litio 1%
IX. Abatelenguas
X. Portaobjetos y cubreobjetos
XI. Laminillas de diferentes tejidos
XII. Alcohol-cido (cido clorhdrico al 1 % en alcohol etlico al 70%)

Estudiante

I. Muestra de sangre (colectada el da de la sesin)

II. Raspado de clulas epiteliales
III. Cebolla
IV. Guantes de ltex o nitrilo

PROCEDIMIENTO

a) Preparar un frotis de cada muestra.

b) Una vez secos los frotis, fijar con alcohol etlico al 95% durante 2
minutos; posteriormente lavar con agua destilada.
c) Teir con Hematoxilina de Harris por 4-8 minutos.
d) Lavar con agua corriente y aclarar enjuagando los frotis 3 a 4 veces en
alcohol-cido.
e) Enjuagar con agua y cubrir la preparacin en una solucin de Carbonato
de litio al 1% hasta que el frotis tenga una tonalidad azulada.
f) Se lava con agua corriente y se tie con solucin acuosa al 1% de
eosina durante 15 segundos a 2 minutos, segn la intensidad deseada.
g) Enjuagar rpidamente con alcohol al 80% y teir de 30 segundos a 3
minutos con eosina.
h) Enjuagar con agua destilada y dejar secar.
i) Observar al microscopio con todos los objetivos.
Mtodo alternativo

a) Sumergir las preparaciones en la solucin 1 (alcohol 70%) durante 30 s.

b) Sumergir las preparaciones en la solucin 2 (eosina) 15 s.
c) Sumergir las preparaciones en la solucin 3 (hematoxilina) 30 s.
d) Posteriormente se realiza un bao con agua destilada. Los portaobjetos
se dejan secar al aire libre para proceder a continuacin a su montaje.
 RESULTADOS

1.
Mtodo hematoxilina. Preparacin de frotis de clulas epiteliales:

El frotis de la muestra de
saliva secndose
La muestra en el portaobjetos ya
lista

Un par de clulas epiteliales Clulas epiteliales de otra

al 100x muestra; su tincin es similar a
la que realizamos
2. Mtodo alternativo. Preparacin de frotis de clulas epiteliales:

Esperando a que seque la En este mtodo, las clulas se

muestra observan ms detalladamente
(100x)

Comparacin con otra muestra

de clulas epteliales

3. Mtodo alternativo; preparacin de la muestra de sangre

 Preparando la muestra con el
mtodo elegido

Mientras se seca, preparamos

el microscopio

Clulas sanguneas se observan Comparacin de otra muestra

al 100x vista
4. Mtodo alternativo; preparacin de la muestra de cebolla

Cortamos un pedazo de Con el mtodo alternativo

cebolla se realiz la tincin

Se esper hasta que la Las "celdas" de la cebolla

muestra se secara por vistas a 40x
completo

Clulas de cebolla de una

muestra
 CUESTIONARIO

1. Mencione el fundamento de la tincin de Hematoxilina: Este compuesto

se extrae de Haematoxylum campechianum, una planta leguminosa
originaria de la pennsula de Yucatn, Mjico. Como curiosidad, el
nombre de esta planta significa madera que sangra. De la planta se
obtiene una sustancia que al oxidarse adquiere un color morado. Para
aumentar su capacidad colorante se combina con iones metlicos de
hierro o aluminio, consiguindose as la hematoxilina. La hematoxilina se
une intensamente a las cargas negativas (aniones), como los cidos. Es
por esto que se une fuertemente al ADN (cido desoxirribonucleico). La
tincin con hematoxilina tie de color azul los ncleos. (Contreras, 2015)
2. Mencione el fundamento de la tincin de Eosina: Las diferencias
prcticas en el uso de la eosina amarilla o azul son mnimas, siendo ms
utilizada la eosina Y. Ambos compuestos se obtienen de la interaccin
del bromo con la fluorescena. Las cargas negativas del compuesto
hacen que se una a compuestos con cargas positivas, es decir, bsicos,
como el citoplasma. Sin embargo, sta misma carga es la que impide
que penetre dentro de clulas vivas, puesto que la membrana celular las
expulsa. (Contreras, 2015)
3. Investigue los tipos de tinciones que existe y explique utilidad:
Tincin de Gram
Esta tincin es un procedimiento de gran utilidad empleado en los
laboratorios donde se manejan pruebas microbiolgicas. Es definida
como una tincin diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica
a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
bacterias Gram positivas. Es de gran utilidad, ya que a partir de
muestras clnicas directas provenientes de sitios estriles se puede
saber de manera rpida las caractersticas de la muestra y hacer una
diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una
infeccin.
Tincin de Wright
Es una tcnica que se emplea generalmente para la diferenciacin
de elementos celulares de la sangre y es clasificada como una
tincin policromtica, dado que puede teir compuestos cidos o
bsicos presentes en una clula.
 Tincin de Ziehl-Neelsen
Es la tcnica comnmente usada en el diagnstico rutinario de
tuberculosis. Es una tcnica rpida, fcil y de bajo costo, lo que
permite que se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clnico.
Esta tincin permite diferenciar a las bacterias en dos grupos:
aquellos que son capaces de resistir la decoloracin con alcohol-
cido y aquellos que no lo son.
Tincin negativa
Fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fin de
rodear y delinear las bacterias no teidas u otros materiales
biolgicos. Utilizamos diferentes mtodos de tincin negativa para
evaluar estructuras individuales, tan pequeas como las vesculas
sinpticas e incluso de gran tamao, como los microorganismos
unicelulares. Este mtodo es muy til, aunque est limitado por la
presencia de un fondo oscuro que no permitir la correcta
identificacin de forma ntida y detallada de los componentes de
dichas estructuras.
Tincin de azul algodn de lactofenol
La tincin de azul algodn de lactofenol no es considerada una
tincin diferencial, sin embargo, posee caractersticas tintoriales que
permiten observar cada uno de los componentes fngicos y apreciar
fcilmente las estructuras para una adecuada identificacin. El fenol
inactiva las enzimas lticas de la clula e impide que sta se rompa;
de igual forma, destruye la flora acompaante e inactiva a la clula,
quitndole el grado de patogenicidad; adems, acta como
mordiente cuando se usa en combinacin con colorantes. El cido
lctico preserva las estructuras fngicas al provocar un cambio de
gradiente osmtico con relacin al interior fngico, lo que genera una
pelcula protectora. El azul de algodn es un colorante cido, que tie
el citoplasma y la quitina presente en las clulas fngicas, mientras
que el glicerol mantiene hmeda la preparacin. (Lpez Jcome,
Hernndez Durn, Coln Castro, Ortega Pea, Cern Gonzlez, &
Franco Cendejas, 2014)

Investigue el tratamiento que se requiere cuando se realiza una

observacin de algn corte de tejido y se debe teir con HE: Una de las
 tinciones ms comnmente usada en histologa es la hematoxilina-
eosina sobre cortes de parafina. Como vemos se usa un colorante
bsico y otro cido para teir de diferente color a las estructuras cidas y
bsicas de la clula. Antes de proceder a la tincin, si partimos de cortes
de parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos previos sobre
las secciones como es el des parafinado, y la hidratacin puesto que
estos colorantes son hidrosolubles. Si partimos de cortes de criostato
esto no se lleva a cabo. (Tecnicas histologicas, 2017)
4. Mencione la importancia de las tinciones cuando se requiere analizar
morfologa celular: Las estructuras celulares presentan en general muy
poco contraste entre si y es necesario hacerlas resaltar selectivamente,
bien mediante la reaccin qumica con tinciones especficas que
destaquen la reaccin qumica con elementos celulares o aumenten
especficamente la densidad ptica de los mismos o bien mediante
ciertas tcnicas de sombreado que permitan apreciar los relieves de la
superficie que se observen. (Laboratorio Morfologa Celular, 2014).
 DISCUSIN

La tincin hematoxilina-eosina Imagen 1

corresponde a la mezcla de hematoxilina y
eosina. La tincin hematoxilina y eosina es uno
de los mtodos ms populares de tincin
utilizado en histologa y medicina diagnstica.

El mtodo supone la aplicacin de la

tincin de hematoxilina que, por ser catinica o
bsica, tie estructuras cidas en tonos azul y
prpura, como por ejemplo los ncleos celulares;
y el uso de eosina que tie componentes bsicos en tonos de color rosa,
gracias a su naturaleza anicnica o cida, como el citoplasma.
Imagen 2
En esta prctica usamos la tincin
en 4 muestras que consistan en clulas
epiteliales proveniente de un raspado
bucal (imagen 1), muestra de piel de
cebolla (imagen 2) y una muestra de
sangre (imagen 3).
Imagen 3
Muestra de clulas epiteliales:

En la muestra con el mtodo normal, no era fcil observar las clulas,

parecan que se haban lavado y que la tincin haba fallado, solo se poda
observar una clula descolorida que no se
poda distinguir las partes de la clula. En
la otra muestra el resultado fue ms
satisfactorio ya que la tincin funciona y se
poda diferenciar lo que se cree era el
ncleo de la clula ya que se notaba de un color diferente. Como sabemos la
hematoxilina tie las partes acidas de un color azul-purpura y la eosina tie los
componentes bsicos con componentes rosados .deducimos que por la
comparacin de una imagen de internet que uso hematoxilina-eosina para teir
igual clulas epiteliales se puede diferenciar las diferentes partes de la clula
,observando que el ncleo tiene un color purpura y que el resto de la clula
tiene un color rosado , en cambio, en nuestra muestra solo se nota un color
rosado en toda la clula y que
en el centro de ella un color ms
claro .el equipo pens que la
causa de ello fue que la eosina
fue mucha y que la hematoxilina
no pudo teir la clula por falta
de tiempo.

Muestra de cebolla: decimos usar el mtodo largo para teir la cebolla.

Aunque s simple vista se poda ver la muestra toda tia al momento de verla en
el microscopio se vea de manera acuosa, secciones de la cebolla no pareca
tea y algunas partes de la cebolla estaba sobrepuesta. En una parte de la
cebolla solo se podamos ver que lo que se cree que es el ncleo estaba
teido. En comparacin con una imagen del internet el resultado es totalmente
diferente se puede apreciar el ncleo de un color azul y el resto de la clula de
un color morado. Se cree que se ve as ya que el ncleo es un cido, pero
tambin en citoplasma hay acido ya que agarro un color morado investigando
se lleg a la conclusin que como la cebolla al romperse sus clulas unos
aminocidos del
grupos sulfuro
contactan con unos
enzimas especficos y
se produce sulfxido de tiopropanal, pero se cree es debido a que en contacto
con el agua se descompone dando propanal, cido sulfrico y cido sulfhdrico
(fig.11), lo que causa el lagrimeo.

Fig.5
 Muestra de sangre: para
hacer la muestra de sangre
decimos cambiar el mtodo y
hacerlo por el alternativo ya que
es ms fcil, rpido y cuando lo
hicimos con la saliva sali mejor
resultado que el mtodo normal.
(fig.5)

Como sabemos en la
sangre se encuentran dos tipos
de clulas los eritrocitos glbulos rojos y leucocitos glbulos blancos en esta
parte de la prctica se trataba de identificar cual clula es cual sabemos que
los eritrocitos son clulas con ncleo y los leucocitos no tienen ncleo con la
tincin pudimos observar cual es cual. (fig.13). En la imagen podemos
identificar los eritrocitos las cuales
son de manera redondita con
ncleo y los leucocitos redonditos,
pero de manera irregular.

No solo esas clulas se Fig.13

encuentran en la sangre tambin
se encuentran un tipo de clulas que se les dice que estn de paso por la
sangre para cumplir su funcin en otros tejidos (fig.14). Existen cinco diferentes
y diversos tipos de leucocitos, y varios de ellos son fagociticos. Estos tipos se
distinguen por sus caractersticas morfolgicas y funcionales.

Fig.14
 CONCLUSIONES

Poco a poco se nos ha presentado las herramientas fundamentales para

llevar a cabo uno de los momentos ms importantes a la hora de estudiar un
ser vivo a su nivel ms diminuto, es decir, para poder observar la unidad
esencial de todo organismo: la clula. As pues, para emprender el anlisis
celular con debida precisin (e ir a preparar el portaobjetos y cubreobjetos
despus) es necesario ir conociendo las tinciones, una serie de tcnicas que
nos ayudarn a distinguir a las clulas de su entorno bajo el lente de un
microscopio.

Durante esta prctica fue necesario nuestro criterio de elegir qu

mtodo para realizar la tincin en las muestras era la mejor, es decir, cul
convena ms al observar en el microscopio, ya sea por su coloracin y el
contraste que se quedaba impregnada en las clulas. Finalmente, la
experimentacin con ambos mtodos nos llev a decidir qu ventajas y
desventajas traa teir determinado frotis. Como era de esperarse, esto nos
ayudar en futuras investigaciones dentro de la Biologa celular, y conocer el
mayor nmero posible de tcnicas de tincin nos dar tambin un vasto
conocimiento en microscopia o en otras ramas de la Biologa.
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