Este documento proporciona instrucciones para realizar pruebas Widal y Weil-Felix usando antígenos de color para identificar anticuerpos contra salmonellas, rickettsias y brucelas en suero humano. Describe los procedimientos para realizar pruebas rápidas en lámina y de aglutinación en tubo, así como la interpretación de los resultados. Los antígenos vienen en un kit que incluye controles positivos y negativos, y deben almacenarse entre 2-8°C.
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Este documento proporciona instrucciones para realizar pruebas Widal y Weil-Felix usando antígenos de color para identificar anticuerpos contra salmonellas, rickettsias y brucelas en suero humano. Describe los procedimientos para realizar pruebas rápidas en lámina y de aglutinación en tubo, así como la interpretación de los resultados. Los antígenos vienen en un kit que incluye controles positivos y negativos, y deben almacenarse entre 2-8°C.
Este documento proporciona instrucciones para realizar pruebas Widal y Weil-Felix usando antígenos de color para identificar anticuerpos contra salmonellas, rickettsias y brucelas en suero humano. Describe los procedimientos para realizar pruebas rápidas en lámina y de aglutinación en tubo, así como la interpretación de los resultados. Los antígenos vienen en un kit que incluye controles positivos y negativos, y deben almacenarse entre 2-8°C.
Este documento proporciona instrucciones para realizar pruebas Widal y Weil-Felix usando antígenos de color para identificar anticuerpos contra salmonellas, rickettsias y brucelas en suero humano. Describe los procedimientos para realizar pruebas rápidas en lámina y de aglutinación en tubo, así como la interpretación de los resultados. Los antígenos vienen en un kit que incluye controles positivos y negativos, y deben almacenarse entre 2-8°C.
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ANTIGENOS FEBRILES COLOR
(Para pruebas Widal y Weil-Felix) USO: La suspensin de antgenos de color Plasmatec sirve para identificar y cuantificar anticuerpos especficos en el suero humano con ciertas salmonellas, Ricketsias y Brucillas patgenas ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso de diagnostico solamente nicamente para uso profesional. Advertencias para Salud y Seguridad: Todas las muestras de los pacientes y los reactivos deben ser tratados como potencialmente infecciosos y el usuario debe utilizar guantes protectores, careta y batas de laboratorio cuando la prueba este siendo realizada. Los elementos que no sean desechables deben ser esterilizados despus de su uso a travs de un mtodo apropiado. Los elementos desechables deben ser tratados como desechos altamente peligrosos y deben ser incinerados. Si alguno de estos materiales se derrama, estos deben ser absorbidos y destruidos como se ha explicado anteriormente. El sitio donde se vierte debe ser esterilizado con un desinfectante o con alcohol al 70%. Los reactivos de control contienen suero de conejo. El producto tambin contiene sales buffer. Incluyendo sodio azido y tiomersal como preservativos Ver la hoja de seguridad de material.No inhale o ingiera aerosoles Lave con abundante agua. Precauciones Analticas: No modifique el procedimiento de esta prueba. De ninguna manera diluya o modifique los reactivos. Permita que todos los reactivos y las muestras estn a temperatura ambiente (18 30 C) antes de usarlos No intercambie reactivos de diferentes lotes o tipos. COMPOSICION Presentacin Antgenos Febriles de Color Plasmatec FA/002 Salmonella tfico H 5 ml FA/004 Salmonella H paratfico A 5 ml FA/006 Salmonella H paratfico B 5 ml FA/008 Salmonella H paratfico C 5 ml FA/010 Salmonella tfico O 5ml FA/011 Salmonella tfico Vi 5ml FA/012 Salmonella O paratfico A 5 ml FA/014 Salmonella O paratfico B 5 ml FA/016 Salmonella O paratfico C 5 ml FA/018 Brucella abortus 5 ml FA/020 Brucella melitensis 5 ml FA/022 Proteus OX2 5 ml FA/024 Proteus OX19 5 ml FA/026 Proteus OXK 5 ml FA/030 Control Positivo 0.5 ml FA/032 Control Negativo 0.5 ml FA/040 Estuche de Antgenos Febriles 8x5 ml (FA/002-FA/016) FA/042 Estuche de Antgenos Febriles 8x5 ml (FA/002-FA/016) con control positivo (FA/030) y control negativo (FA/032) Inserto del Estuche ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL. Almacene entre 2 o C - 8 o C. Sensibles a la luz. No refrigere. Bajo estas condiciones las caractersticas y el funcionamiento del estuche se mantendrn por 36 meses desde la fecha de fabricacin. Ver fecha de expiracin en la etiqueta del estuche. Los reactivos deben ser desechados si estn contaminados o no muestran una actividad correcta con los controles Los reactivos en cada estuche han sido estandarizados para producir su propia reaccin y los reactivos no deben ser intercambiados con aquellos que correspondan a otros lotes. MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS Tubos Pequeos para pruebas Pipetas Laminas de reaccin con fondo blanco PREPARACION DE LA MUESTRA Utilice suero fresco obtenido por centrifugacin de los tejidos sanguneos. La muestra puede ser almacenada entre 2 o C - 8 o C por 48 horas antes de realizar la prueba. Para periodos ms largos de tiempo el suero debe ser congelado. El suero haematico, lipaemico o contaminado debe ser desechado. PROCEDIMIENTO Principio Los Antgenos Febriles Plasmatec son adecuados para ambas tcnicas, rpida en lmina y aglutinacin en tubo para determinar en suero humano estas aglutininas. La suspensin de antgenos de color Plasmatec son bacterias muertas unidas al color para la lectura de las pruebas de aglutinacin. Los antgenos de color azul son especficos para los antgenos somticos O mientras que los de color rojo son especficos para los antgenos flagelares H. TITULACION RAPIDA EN LMINA Usando pipeta, dispense 0.08 ml, 0.04ml, 0.02ml, 0.01ml y 0.005 ml de suero sin diluir en los crculos de reaccin. Mezcle el reactivo y agregue una gota de la suspensin del antgeno en cada alcuota de suero. Mezcle bien usando un palillo y rote la lmina. LEA DESPUS DE UN MINUTO. Aglutinacin en algn crculo indica resultados que deben ser probados en tubo. 0.08 ml = 1:20, 0.04 ml = 1:40, 0.02 ml = 1:80, 0.01 ml = 1:160, 0.005 ml = 1:320 La prueba rpida en lmina ofrece una aproximacin de los resultados esperados de la prueba en tubo. NOTA: Es necesario realizar todas las diluciones en la prueba en lmina para evitar el efecto PROZONA donde concentraciones elevadas de suero pueden dar resultados negativos pero nuevas diluciones pueden dar resultados positivos. PRUEBA DE AGLUTINACIN EN TUBO Marque 8 tubos plsticos pequeos. Usando una pipeta, dispense 1,9 ml de solucin salina en el primer tubo, y 1.0 ml en los siete restantes. Usando pipeta agregue 0.1 ml de suero del paciente sin diluir en el primer tubo. Mezcle. Usando pipeta, dispense 1 ml del primer tubo en el segundo tubo y mezcle. Contine este mtodo doblando las diluciones hasta el sptimo tubo. Descarte 1.0 ml del tubo sptimo. El octavo tubo contendr solamente solucin salina como control y no debe contener ningn suero. Mezcle el reactivo y agregue 1 gota del antigeno apropiado en cada tubo y mezcle bien. Incube como sigue: Antgenos O y Proteus: 50 C por 4 horas Antgenos H: 50C por 2 horas Antgenos Brucella: 37 C por 24 horas Es de vital importancia, que cuando los tubos son colocados en el bao de agua, el nivel debe estar aproximadamente 2/3 sobre el nivel del contenido del tubo. Esto mantendr la temperatura dentro del tubo y evitar resultados falsos. Examine los tubos despus del tiempo de incubacin y observe aglutinacin, el titulo debe ser tomado del ltimo tubo que muestre aglutinacin. INTERPRETACIN Se ha encontrado que algunos serotipos de salmonella poseen antgenos somticos del mismo tipo. Aglutinacin de alguno de los antgenos de salmonella con suero humano debe no obstante ser tomados como prueba de infeccin por un organismo particular, mejor dicho como una infeccin por un organismo de estructura antignica similar. Los tubos no deben ser ledos despus de los tiempos de incubacin recomendados para eliminar la posibilidad de resultados falsos. El ltimo tubo que muestre signos de aglutinacin debe ser tomado como el titulo de la prueba. Para resultados negativos, todos los tubos deben permanecer libres de aglutinacin alguna. Ttulos superiores a 1:80 son significativos y pueden reflejar infeccin reciente, pero pueden encontrarse ttulos bajos en algunos pacientes. PRESERVATIVOS Las suspensiones de antgeno contienen 0.1% de formaldehdo y 0.01 % mertiolate. Los sueros controles contienen 0.1 % de azida de sodio. DESARROLLO Y CARACTERISTICAS Las capacidades generalmente aceptadas de las funciones de la prueba Widal utilizando antgenos febriles es 70% especificidad y sensitividad. Las pruebas serolgicas en los diagnsticos de infecciones de salmonella tiene limitaciones importantes, los tejidos de una muestra son usualmente los preferidos. CONTROL DE CALIDAD INTERNO Los controles son provedos en el estuche y deben ser utilizados en intervalos regulares para confirmar que la prueba esta trabajando satisfactoriamente. REFERENCIAS: 1. Huddleson. I.F and Bell (1928) J infect. Dis. 42 242 2. Freter, R. (1980) Man of Cli. Imm. 2nd Ed. A.S.M. Washington DC 460-453 3. Weil. E and felix. A. Wein Klin, 29 974 (1916) 4. Cruikshank, R (1965) Med Mic 11th Ed 907 PFA.V3 9/4/03