Informe Microbiologia 3

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MTODOS DE AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
Vsquez Quintero Johana; 1425628, Rivas Mariana; 1630606, Arango Vsquez Felipe;
1526393
Microbiologa, Universidad del valle, CP 760026, Cali-Colombia
Octubre 29 del 2016
RESUMEN
Los medios de cultivos son preparados
para muchos propsitos los cuales
permiten tener un conocimiento ms
acertado y profundo acerca del estudio que
se quiera realizar, esto es gracias a los
sustratos y componentes que tienen estos
cultivos. En el siguiente informe se
aprendi a preparar medios de cultivo para
posteriormente
poder
aislar
microorganismo con las diferentes tcnicas
existentes: siembra en caldo de cultivo,
tcnica de siempre en tubo inclinado, en
caja Petri se sembr por agotamiento,
estras y por profundidad.
Palabras Claves: medios de
aislamiento, siembra, esterilizar.
cultivo,
INTRODUCCION
La esterilizacin por calor seco o hmedo
son los mtodos que se utilizan con mayor
frecuencia
en
el
Laboratorio
de
Microbiologa. El calor seco destruye a los
microorganismos por oxidacin, por
ejemplo, al exponerlos directamente a la
flama de un mechero o en horno a 150-
180C durante 2 horas. Estos mtodos se

aplican en la esterilizacin de asas de
inoculacin y para todo tipo de material de
vidrio y quirrgico. El equipo de uso comn
es la autoclave, que utiliza vapor de agua a
presin (15 lb/in2); con esta presin el
material alcanza una temperatura de 121
C y si se mantiene durante 15 minutos se
asegurar la inactivacin de endosporas,
que son las estructuras bacterianas ms
resistentes al calor. El procedimiento de
autoclave fue el realizado. [1]
Se preparan medios de cultivo con el
material necesario, de acuerdo a la
cantidad indicada por el fabricante, anterior
a ello se realiz el procedimiento de
autoclave. Se realizan mtodos de siembra
por incorporacin de una muestra, con
propsitos cuantitativos y cualitativos,
estas siembras se realizaron en placas por
los siguientes mtodos: por estras,
inclusin, extensin, y en tubos con agar
inclinado, con medio slido (agar en
columna) y en medio lquido (caldo
nutritivo). Los medios de cultivos contienen
distintos nutrientes como sangre, leche,
entre otros.
Para
que
las
bacterias
crezcan
adecuadamente en un medio de cultivo
artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presin de oxgeno,
adecuadas, as como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. [2] El aspecto de las
colonia como color, tamao y forma
permitir diferenciar el tipo de bacteria, ya
sean lisas, rugosas, y en algunas
ocasiones con olor caracterstico.
MATERIALES Y METODOS
A) Para la preparacin de los medios de
cultivo: se prepar el agar de acuerdo a los
clculos recomendados y se envas en un
Erlenmeyer, posterior a esto se llev a
esterilizar en autoclave a 15 libras de
presin y 121 C por 15 minutos.
B)
Mtodos
de
aislamiento
de
microorganismos: Posterior a los 15
minutos se sac el Erlenmeyer y se dej
enfriar hasta los 45 C dejndolo en bao
mara para evitar su solidificacin.
C) Simultneamente para la siembra en un
caldo nutritivo anteriormente preparado se
tom un asa y en un mechero se dej
calentar hasta el rojo vivo, esto con el
objetivo de esterilizarla, luego se tom un
poco de solucin de la bacteria
estafilococos con el asa y finalmente se
introdujo en el caldo revolviendo varias
veces para una mayor concentracin.
D) Cuando estuvo listo el agar, se tomaron
dos cajas Petri, se vierte la solucin hasta
cubrir lo suficiente la superficie de cada
una, se dej solidificar por unos minutos.
Se tom un tubo de ensayo, se vierte el
agar, y se deja en posicin inclinada hasta
que solidifique.
E) Al terminar la solidificacin de cada uno

de los agares se procede a los mtodos de
siembra.
F) En una de las cajas Petri con el agar ya
solidificado se procede a realizar la
siembra de la bacteria estafilococos por el
mtodo de Agotamiento. Consisti en
tomar el asa, esterilizarla, proceder a tomar
un poco de la solucin de la bacteria y
hacer un zigzag sobre todo el cultivo,
rotular y sellar para su posterior
observacin.
G) Con la segunda caja Petri con agar ya
solidificado se procede a realizar la
siembra por el mtodo de Estras con la
bacteria mixta (estafilococos, E. coli),
Consisti en tomar el asa, esterilizarla, con
esta tomar un poco de la bacteria a utilizar,
consiguiente a esto se hace un zigzag en
uno de los lados del cultivo, se esteriliza
nuevamente el asa para volver a tomar la
bacteria y realizar lneas perpendiculares a
las del zigzag, se repite este procedimiento
y finalmente en el espacio sobrante del
cultivo, con el asa ya esterilizada y con un
poco de la bacteria se realiza una especie
espiral o tambin llamado firma.
H) Para la siembra en el agar inclinado con
el asa esterilizada, se tom un poco de la
bacteria mixta y se realiz un zigzag sobre
este cultivo.
I) En la siembra en profundidad se tom
1mL de la bacteria mixta con una pipeta ya
estril, se verti en una caja Petri ya
estril, se tap nuevamente, realizado esto
se tom el agar restante an no
solidificado, se vierte en la caja Petri, con
este ya cerrado se movi en forma de
crculos para que la bacteria debajo del
agar se esparciera.
J) Se toman los cultivos ya rotulados y

sellados respectivamente para proceder a
incubar durante 24 a 48 horas a 37C para
su consiguiente observacin.
RESULTADOS
predispuestos se analizaron los siguientes

resultados.
Tabla 2. Resultados
experimento
primera
Observaciones
Por Estras
Para este cultivo

el objetivo es la
separacin de los
microorganismos,
esto sucede a
medida que se
hacen ms estras
en zigzag con el
asa, cada vez se
van depositando
en la superficie
del medio menos
microorganismos
los cuales quedan
separados
e
inmovilizados.
parte
Cultivo
Observaciones
Caldo Nutritivo
En esta muestra de
caldo nutritivo se
puede
ver
una
turbidez
la
cual
demuestra
la
presencia de las
colonias bacterianas
que crecieron.
Se
observa
el
crecimiento
de
colonias en la mayor
parte de la superficie
del agar donde se
hizo la siembra.
Por agotamiento
Agar Inclinado
Se logr apreciar
crecimiento
de
pequeas colonias
en la parte inclinada
del agar donde se
hizo la siembra,
aunque su visibilidad
no fue la mejor.
- En el proceso de siembra de la bacteria

en
los
medios
de
cultivos
parte
Cultivo
En el proceso de siembra de la bacteria

en los medios de cultivos predispuestos se
analizaron los siguientes resultados.
Tabla 1. Resultados
experimento.
segunda
En esta siembra
se
ven
aproximadamente
100 colonias entre
las grandes y las
pequeas.
Por Profundidad
DISCUSION DE RESULTADOS
La siembra en caldo nutritivo es un medio
de cultivo que podemos utilizar para
propsitos generales, como por ejemplo
para el desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales. En
nuestra carrera universitaria se puede
hacer en muchos procedimientos para el
anlisis de alimentos y aguas. Este medio
no selectivo, normalmente contiene
pluripeptona y extracto de carne que

constituyen la fuente de carbono y
nitrgeno necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano, lo cual hace que se
utilice adems, como pre-enriquecimiento
en la bsqueda de Salmonella spp, a partir
de alimentos, ya que permite recuperar
clulas daadas, diluir metabolitos txicos
y sustancias inhibitorias. [3]
Figura 1. Crecimiento en caldo nutritivo.

Cuando realizamos la siembra por
agotamiento logramos observar que se
puede conseguir una buena separacin de
las colonias y aislarlas fcilmente.
En la siembra por agar inclinado podemos
inferir que este mtodo brinda a las
bacterias una mayor superficie donde
pueden crecer dentro del tubo de ensayo.
Ms an, los medios de agar inclinado se
colocan en tubos que pueden ser tapados,
lo que minimiza la prdida de agua, esto es
importante debido al alto contenido de
humedad de los medios de agar,
recordemos que estos medios de agar
inclinado pueden usarse para cultivar e
identificar clulas bacterianas. Es difcil
intentar identificar bacterias desde una
muestra grande, ya que stas son
pequeas y pueden ser difciles de
encontrar, sin embargo cuando se colocan
sobre un agar inclinado, las clulas

bacterianas se dividirn rpidamente y en
varias horas habrn producido suficientes
clulas que pueden ser examinadas bajo el
microscopio, tambin esta forma de agar
es til para el mantenimiento de los
cultivos bacterianos, mejor que apilar
placas de Petri. Se pueden colocar
fcilmente muchos cultivos en tubos de
ensayo y luego ubicarlos en gradillas para
guardarlos en el refrigerador.
El mtodo por estra nos permite un
manejo de muestras contaminadas o
cultivos mixtos en los que se encuentran
diversos microorganismos, el primer paso
para proceder a su estudio es el
aislamiento lo cual se hizo en esta prctica
para
que
se
pueda
realizar
la
inmovilizacin de las clulas microbianas
en la superficie de los medios de cultivo
slidos. [4]
Fi
gura 2. Formas de siembras por estras.
En el cultivo por profundidad se realizan
una serie de diluciones seriadas a partir del
cultivo mixto
con esta tcnica
conseguimos adems de aislar colonias,
obtener un recuento del nmero de
bacterias que tenemos en el cultivo las
cuales fueron aproximadamente 100
colonias. Este mtodo de siembra es ms
fcil observar reacciones metablicas
bacterianas,
tales
como:
protelisis y fermentaciones.
liplisis,
Figura 4. Crecimiento de bacterias en

medio semislido.
Figura 3. Cultivo por profundidad.
Por ultimo logramos analizar
con la
prctica que al aadir una clula
bacteriana en un punto del medio de
cultivo, sta quedar inmovilizada en ese
punto y en l se reproducir por absorcin
de los nutrientes del medio. Las nuevas
clulas
generadas
permanecern
igualmente inmviles y tras sucesivas
generaciones
conformarn
lo
que
denominamos una "colonia" que no es ms
que muchas clulas derivadas de una sola
clula madre inicial, es decir, un clon de la
bacteria depositada al sembrar. Las
colonias trabajadas son visibles al ojo
humano
y
presenta
diferentes
caractersticas segn el microorganismo
que la genera. Esto nos permite distinguir
las diferentes poblaciones microbianas que
se encuentran en la muestra sembrada y
separarlas transfiriendo una colonia de
cada tipo a un nuevo medio de cultivo
estril, a estos cultivos los consideramos
"puros" por poseer un slo tipo de
microorganismo. [5]
CONCLUSIONES
- Aprendimos a sembrar por el mtodo de
estras el cual es muy favorable porque se
pueden trabajar con diferentes bacterias.
-Se logr aprender a realizar algunos de
los mtodos que existen para cultivar
bacterias y de esta manera observar sus
caractersticas tanto macroscpicas como
microscpicas e interpretacin de las
mismas, con lo que se observ
- Para cada bacteria existen caractersticas
nicas que diferencian de otras, una
correcta siembra puedo permitir una buena
identificacin de ella.
- Conseguimos por medio de la prctica
distinguir los conceptos de cultivo puro y
cultivo mixto.
-La temperatura siempre va a ser un factor
importante
en el desarrollo de los
microorganismos.
BIBLIOGRAFIA
1. Romero Cabello, R. Microbiologa y
Parasitologa
Humana:
Bases
etiolgicas de las enfermedades
infecciosas. Editorial Panamericana,
Mxico 2001. 2ed. Pp.257-429
2. http://www.uam.es/personal_pdi/cie
ncias/jolope/GUIONPRACTICAS05
06.do Visitado el 3 de noviembre del
2016.
3. KONEMAN, E., Allen, S., Klajn, D.
2006. Diagnostico Microbiolgico.
Sexta edicin. Editorial Mdica

Panamericana. Argentina.
4. http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaci
ones/MMBG/files/manual_microbiol
ogia_general.pdf Visitado el 1 de
noviembre del 2016.
5. MADIGANM.et al . 2009. Biologa
de los microorganismos. Brock.
Pearson-Prentice Hall Editorial.
12aedicin. Madrid.

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PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MTODOS DE AISLAMIENTO DE

180C durante 2 horas. Estos mtodos se

E) Al terminar la solidificacin de cada uno

J) Se toman los cultivos ya rotulados y

predispuestos se analizaron los siguientes

Para este cultivo

- En el proceso de siembra de la bacteria

En el proceso de siembra de la bacteria

pluripeptona y extracto de carne que

Figura 1. Crecimiento en caldo nutritivo.

sobre un agar inclinado, las clulas

Figura 4. Crecimiento de bacterias en

Sexta edicin. Editorial Mdica

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