CUESTIONARIO UNIDAD 4

CINETICA ENZIMATICA

1. DEFINA QUE ES INHIBICION ENZIMATICA

Molculas diferentes del sustrato pueden unirse al enzima reduciendo total o parcialmente su
actividad cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores
2. MENCIONE Y DESCRIBA CADA UNO DE LOS TIPOS DE INHIBICION ENZIMATICA
Dos tipos de inhibidores:
* Inhibidores reversibles: establece un equilibrio con la enzima libre, con el complejo enzimasubstrato, o con ambos.
- COMPETITIVOS: El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre, impidiendo la fijacin del
sustrato.
- NO COMPETITIVOS: El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o no el
sustrato. No impide la fijacin del sustrato a la enzima, pero s la accin cataltica.
- ACOMPETITIVOS: El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-sustrato una vez formado,
impidiendo la accin cataltica
* Inhibidores irreversibles: modifican qumicamente a la enzima mediante uniones covalentes.
3. CUALES SON LOS PRINCIPALES INCOVENIENTES EN EL PROCESOS DE INMOVILIZACION DE
ENZIMAS
1. La alteracin de la conformacin de la enzima respecto de su estado nativo.
2. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden existir distintas fracciones
de protenas inmovilizadas con un diferente nmero de uniones al soporte.
3. Siempre suele haber una prdida de actividad de la enzima durante la movilizacin.
4. El biocatalizador es ms caro que la enzima nativa.
1.- Generalmente, se disminuye la actividad enzimtica.
2.- Se aumentan los problemas difusionales.
3.- Se aumenta el costo del proceso.
4.- El intervalo de pH de trabajo puede ser distinto al del biocatalizador nativo.
4. DESCRIBA Y DEFINA LAS FUERZAS QUE ACTUAN EN UNA REACCION CATALITICA
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad
crece solo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en

una clula determina el tipo de metabolismo que tendr cada clula. A su vez, esta sntesis
depende de la regulacin de la expresin gnica.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de
activacin (G) de una reaccin, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de
reaccin. Las enzimas no alteran el balance energtico de las reacciones en que intervienen,
ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso
incluso millones de veces. Una reaccin que se produce bajo el control de una enzima, o de
un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho ms deprisa que la correspondiente
reaccin no catalizada.

5. DESCRIBA Y DEFINA LAS VARIABLES DE LA ECUACION DE MICHAELLIS-MENTEN

* Las concentraciones relativas de E y S: La concentracin de sustrato (S) es mucho mayor que la
concentracin de enzima (E), de manera que la proporcin de sustrato fijo a la enzima es siempre
relativamente pequea.
* La reaccin esta en equilibrio: [ES] no cambia durante el tiempo (la reaccin se asume en
equilibrio de flujos), es decir, la velocidad de formacin de (ES) es igual a la velocidad de su
transformacin en E + S y en E + P).
* Velocidad Inicial: Deben usarse velocidades iniciales (vo). Esto significa que la velocidad de la
reaccin debe determinarse tan pronto como el sustrato y la enzima son mezclados. En dicho
tiempo, la concentracin de productos es despreciable y, por lo tanto, la reaccin inversa de
productos a sustratos puede ser ignorada.
6. MENCIONE Y DESCRIBA LOS METODOS DE INMOVILIZACION DE ENZIMAS.
Los mtodos de inmovilizacin (5) se suelen clasificar en dos grandes categoras: 1)
Retencin fsica y 2) Unin qumica
7. DESCRIBA LAS VENTAJAS DE USAR ENZIMAS INMOVILIZADORAS EN UN PROCESO
QUIMICO
Como ventajas del empleo de enzimas inmovilizadas podemos destacar:
1. El aumento de la estabilidad de la enzima;
2. La posible reutilizacin del derivado, por lo que disminuyen los costes del proceso.
3. La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y control, adaptado a la
aplicacin de la enzima inmovilizada.
1.- Se produce un gran aumento de la estabilidad de la enzima o clula inmovilizada.
2.- Se aumenta de gran manera la productividad enzimtica por la capacidad de reutilizacin.
3.- Se aumenta la facilidad de recuperacin y purificacin de los productos.

4.- Se puede elegir entre una gran variedad de diseos ingenieriles

5.- Se aumenta la facilidad de operacin y control del proceso, al trabajar en condiciones ms
suaves.
8. DESCRIBA AMPLIAMENTE QUE ES UNA ENZIMA
LAS ENZIMAS son protenas (RNA) que catalizan reacciones qumicas en las clulas.
Cada enzima es altamente especfica para la reaccin que cataliza.
Esta especificidad est determinada por el centro activo de la enzima (en donde se hallan los
grupos qumicos responsables de la catlisis).
Muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, co-sustratos) para cumplir su funcin
cataltica.
Son Protenas de alto peso molecular (macromolculas, 104 a 106 g/mol, 102 a 104 aminocidos)
Su actividad depende de la integridad de su conformacin proteica.
Metales pueden formar parte de su centro activo, o de otra parte de la enzima (co-factor).
Los reactivos de las reacciones catalizadas por enzimas se denominan sustratos.
Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi
siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.
9. MENCIONE Y DESCRIBA LA CLASIFICACION DE ENZIMAS
1. Oxidorreductasas: Catalizan una amplia variedad de reacciones de xido-reduccin, empleando
coenzimas, tales como NAD+ y NADP+, como aceptor de hidrgeno. Este grupo incluye las enzimas
denominadas comnmente como deshidrogenasas, reductasas, oxidasas, oxigenasas, hidroxilasas
y catalasas.
2. Transferasas: Catalizan varios tipos de transferencia de grupos de una molcula a. otra
(transferencia de grupos amino, carboxilo, carbonilo, metilo, glicosilo, acilo, o fosforilo). Ej.:
aminotransferasas (transaminasas).
3. Hidrolasas: Catalizan reacciones que implican la ruptura hidroltica de enlaces qumicos, tales
como C=O, C-N, C-C. Sus nombres comunes se forman aadiendo el sufijo -asa al nombre de
substrato. Ejs.: lipasas, peptidasas, amilasa, maltasa, pectinoesterasa, fosfatasa, ureasa. Tambin
pertenecen a este grupo la pepsina, tripsina y quimotripsina.
4. Liasas: Tambin catalizan la ruptura de enlaces (C-C, C-S y algunos C-N, excluyendo enlaces
peptdicos), pero no por hidrlisis. Ejs.: decarboxilasas, citrato-liasa, deshidratasas y aldolasas.
5. Isomerasas: Transforman sus substratos de una forma isomrica en otra. Ejs.: Epimerasas,
racemasas y mutaras.

6. Ligaras: Catalizan la formacin de enlace entre C y O, S, N y otros tomos. Generalmente, la

energa requerida para la formacin de enlace deriva de la hidrlisis del ATP. Las sintetasas y
carboxilasas estn en este grupo.

10. MECIONE LAS PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Sitio activo.
Eficiencia cataltica.
Especificidad.
Cofactores
Regulacin
Localizacin en la clula.
11. QUE SIGNIFICADOS IMPORTANTES TIENE LA KM
KM es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad
mxima.
12. DESCRIBA EL EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE
LA REACCION ENZIMATICA
La velocidad de la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima
a cualquier concentracin de substrato. Ejemplo: si la concentracin de la enzima se
reduce a la mitad, la velocidad inicial de reaccin (Vo), al igual que la velocidad mxima
(Vmax) se reducen a la mitad.
13. DESCRIBA EL EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCION
ENZIMATICA
Al igual que sucede con la mayora de las reacciones qumicas, las reacciones enzimticas
incrementan su velocidad con la temperatura.
La velocidad de muchas reacciones enzimticas se duplica, aproximadamente por cada 10 C de
aumento de la temperatura.
El pico de la grfica al representar la actividad cataltica respecto a la temperatura se debe a que
las enzimas, al ser protenas, se desnaturalizan por accin del calor y se inactivan a partir de cierto
punto.
A partir de los 55-60 C la mayor parte de las enzimas se inactivan. Sin embargo, las enzimas de
bacterias termoflicas siguen siendo activas a temperaturas superiores a los 85 C.
14. DESCRIBA EL EFECTO DEL PH SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCION ENZIMATICA
La mayora de las enzimas tienen un pH caracterstico al cual su actividad es mxima; por encima o
por debajo de ese pH la actividad disminuye.
El pH ptimo de una enzima no es necesariamente idntico al pH de su entorno intracelular
normal, el cual puede hallarse a su vez en la pendiente ascendente o descendente de la curva. Por

eso la relacin pH-actividad de una enzima puede constituir un factor en el control intracelular de
su actividad.
15. MENCIONE Y DESCRIBA LOS METODOS DE INMOVILIZACION DE ENZIMAS
1. Retencin fsica.
1.a. Atrapamiento: es la retencin de la enzima en cavidades interiores de una matriz slida
porosa constituida por prepolmeros entrecruzables o polmeros de tipo poliacrilamida, colgeno,
carraginato o resinas de poliuretano. Una suspensin de la enzima a inmovilizar se la incluye en
una solucin del monmero. Se inicia la polimerizacin con cambio de temperatura o adicin de
reactivo qumico. El atrapamiento pueden ser en geles o en fibras, ms resistentes stas ltimas.
No hay alteracin estructural de la enzima pero hay que vigilar el proceso de polimerizacin.
1.b. Inclusin en membranas
1.b.a. Microencapsulacin: las enzimas estn rodeadas de membranas semipermeables que
permiten el paso de sustratos y productos. Las microcpsulas tiene dimetros de 1 a 100 m
permitiendo encapsular enzimas, otro tipo de biomolculas y clulas.
2.b.b. Reactores de membrana: se emplean membranas permeables al producto final, permeables
o no al sustrato y no permeables a la enzima. Mediante una bomba se establece un flujo lquido de
sustrato que atraviesa al reactor. La enzima se adsorbe previamente sobre la membrana.
2. Unin qumica.
2.a. Unin a soportes: son los ms utilizados y de los que se tiene mayor informacin. Se han
utilizado gran variedad de soportes. Estos deben cumplir ciertas normas para ser empleados:
aumentar la interaccin con el sustrato, disminuir la inhibicin por producto, cambiar el pH
aparente ptimo hasta el valor deseado, frenar el crecimiento microbiano y ser fcilmente
recuperable para su reutilizacin. Deber ser estable en solucin y rgido mecnicamente en
procesos de flujo continuo. Cuando la enzima inmovilizada se utilice en aplicaciones mdicas no
deber provocar reacciones inmunes o de coagulacin.
Los soportes pueden ser a) inorgnicos naturales (arcilla, bentonita, piedra pmez) o inorgnicos
manufacturados (xido de metales, vidrios de tamao de poro controlado, cermicas) y b)
orgnicos naturales (polisacridos o protenas fibrosas) o sintticos (poliolefinas, polmeros
acrlicos, poliamidas).
Las enzimas se pueden unir por adsorcin, unin inica, metlica o por unin covalente.
2.a.a. Adsorcin: la enzima se une por fuerzas de van der Waals, interacciones hidrofbicas y por
puentes de hidrgeno. Se deben controlar pH del medio, fuerza inica y dimetro del poro.
Tiene la ventaja de la preparacin sencilla, bajo costo, no cambia la especificidad enzimtica y los
derivados son estables con baja humedad. Desventajas: unin dbil al soporte (afectadas por
concentraciones elevadas de sustrato, cambios de pH y de fuerza inica) y poco estables
mecnicamente.

2.a.b. Unin inica: se utilizan intercambiadores orgnicos de iones (DEAE, CM, etc) e inorgnicos
(slice). Tiene las mismas desventajas que el mtodo anterior.
2.a.c. Quelacin o unin metlica: utiliza metales de transicin, normalmente titanio, como una
forma de activar la superficie del soporte. La enzima se acopla a este soporte.
2.a.d. Unin covalente: es el mtodo de inmovilizacin ms utilizado en la industria. El
procedimiento de inmovilizacin consiste en 1) la activacin de los grupos qumicos del soporte
2) los grupos activados de los soportes reaccionan con aminocidos de la enzima con la formacin
de enlaces peptdicos, de arilacin, de alquilacin, de formacin de enlace diazo, base de Schiff o
de intercambio tiol-disulfuro. Los aminocidos de las protenas ms empleados para la formacin
de enlaces con el soporte son Lys, CysSH, Tyr, Trp.
Ventajas: al tener su estructura terciaria estabilizada poseen mayor resistencia a la inactivacin.
Desventajas: se puede alterar el sitio activo. Se usan bloqueadores del sitio activo y luego se
procede a la inmovilizacin.
2.b. Reticulado: tambin denominado entrecruzamiento o cross-linking. Utiliza reactivos
bifuncionales (dialdehdos, diiminosteres, diisocianatos, sales de bis diazonio) que originan
uniones intermoleculares irreversibles entre las molculas de enzima, insolubles en agua pero que
no necesitan el uso de soportes adicionales. Son capaces de resistir condiciones extremas de pH y
temperatura. Enzimologa Inmovilizacin de enzimas 3
El co-reticulado es el entrecruzamiento de la enzima con protenas sin actividad enzimtica, ricas
en Lys (albmina bovina). Impide la prdida de actividad por efectos de difusin del sustrato.
Uno de los mtodos ms novedosos en entrecruzamiento consiste en la cristalizacion de enzimas y
su posterior reticulado con glutaraldehdo. La propia enzima acta como su soporte.
Estos cristales soportan altas temperaturas, pHs extremos y la accin de proteasas.
16. DEFINA: a) ISOENZIMAS b) HOLOENZIMAS c) APOENZIMAS d) GRUPO PROSTETICO e)
COFACTOR
a) Las isoenzimas o isozimas son enzimas que difieren en la secuencia de aminocidos, pero que
catalizan la misma reaccin qumica. Estas enzimas suelen mostrar diferentes parmetros cinticos
(i.e. diferentes valores de KM), o propiedades de regulacin diferentes. La existencia de las
isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las necesidades particulares de un
determinado tejido o etapa del desarrollo
b) Una holoenzima es una enzima que est formada por una protena (apoenzima) y un cofactor,
que puede ser un ion o una molcula orgnica compleja unida (grupo prosttico) o no
(una coenzima). En resumidas cuentas, es una enzima completa y activada catalticamente.
c) La apoenzima es la parte proteica de una holoenzima, es decir, una enzima que no puede llevar
a cabo su accin cataltica desprovista de los cofactores necesarios, ya sean iones metlicos
(Fe, Cu, Mg, etc.) u orgnicos, que a su vez puede ser una coenzima o un grupo prosttico,

dependiendo de la fuerza de sus enlaces con la apoenzima. La apoenzima, es por tanto,

catalticamente inactiva, hasta que se le une el cofactor adecuado.
d) Un grupo prosttico es el componente no aminoacdico que forma parte de la estructura de
las heteroprotenas o protenas conjugadas, estando unido covalentemente a la apoprotena. No
debe confundirse con el cofactor que se une a la apoenzima de las enzimas (ya sea una
holoprotena o heteroprotena) por enlace no covalente.
e) Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa molecular necesario
para la accin de una enzima. El cofactor se une a una estructura proteica,
denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-cofactor recibe el nombre de holoenzima.
Aquellos cofactores que estn covalentemente unidos a la apoenzima son denominados grupos
prostticos, ya sean orgnicos (coenzimas) o inorgnicos.
Los cofactores son bsicamente de dos tipos, iones metlicos y molculas orgnicas,
denominadas coenzimas.
17. DESCRIBA QUE ES INHIBICION
Disminucin o detencin de las funciones normales de una parte del organismo por mediosmental
es o qumicos: el faquir consigue la inhibicin de los centros nerviosos del dolor.
Dificultad o imposibilidad de una reaccin qumica, especialmente un catalizador, paratranscurrir a
su velocidad normal.