ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE

CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
CARRERA DE INGENIERA EN
BIOTECNOLOGA AMBIENTAL
INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
Prctica No 2
DATOS GENERALES
Estudiantes:

Cdigo:

Stalin Flores

2188

Rodrigo Guerrero

2172

Vanessa Navarrete

2160

Nivel: Quinto B
Fecha de realizacin: 21/10/2013
Fecha de entrega: 27/10/2013
1. TEMA: REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS

2. OBJETIVOS
2.1.Objetivo General:
2.1.1. Caracterizar cualitativamente los carbohidratos empleando diferentes
reacciones
2.2.Objetivos Especficos:
2.2.1.
2.2.2.
2.2.3.
2.2.4.

Identificar carbohidratos a travs de la reaccin general.

Caracterizar cualitativamente polisacridos.
Demostrar las propiedades reductoras de algunos carbohidratos.
Establecer las diferencias entre monosacridos y disacridos a travs de
reacciones redox.
2.2.5. Determinar la presencia de cetosas y aldosas mediante reacciones de
deshidratacin.
3. MARCO TERICO
3.1.REACCIONES DE COLORACIN
3.1.1. REACCIN DE MOLISCH
La reaccin de identificacin de azcares con el reactivo de
Molisch se fundamenta en que, todos los glcidos por accin del
cido sulfrico concentrado se deshidratan formando
compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas
dan hidroximetilfurfural). Estos furfurales reaccionan
positivamente con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de
( naftol) dando un producto coloreado. Es una reaccin
cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad de glcidos
en la solucin original. (1)
3.1.2. REACCIN DE SELIWANOFF
La reaccin de Seliwanoff se utiliza para distinguir entre
aldehdo y cetona (hidratos de carbono que contienen 6 tomos
de carbono). Una cetohexosa, formara un color rojo intenso
cuando se hace reaccionar con el reactivo de Seliwanoff. Una
aldohexosa, mostrar un color rosa claro que necesita ms
tiempo para desarrollar cuando se hace reaccionar con el
reactivo. Esta reaccin se da en presencia de un cido fuerte
produciendo derivados furfricos que reaccionan con un
difenol llamado resorcina. (4)
3.2. REACCIONES DE XIDO REDUCCIN
PRUEBAS PARA AZCARES REDUCTORES
3.2.1. REACCIN DE FEHLING
El catin cprico (Cu++) del reactivo de Fehling
reacciona con los glcidos reductores pasando a
xido cuproso, que es un precipitado de color rojo
ladrillo. Esta es una reaccin que resulta positiva
slo si el glcido es reductor. Los glcidos
reductores se manifiestan en medio alcalino, pero el
Cu++ en ese medio tiende a precipitar
espontneamente como xido cprico (que en esa
forma no reacciona), de manera que es necesaria la

presencia de tartrato doble de sodio y potasio en el reactivo para "secuestrar" al catin

Cu++, a fin de evitar la formacin del xido cprico, y permitir que reaccione con los
glcidos reductores. (3)
3.2.2. REACCIN DE BENEDICT
Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de
carbohidratos es la reaccin de Benedict. Esta reaccin es especfica
para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los
monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos
maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no
los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus
componentes cuando sta es formada.
Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el
Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en
forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. (1)
Resultados de la prueba de Benedict
Color ladrillo: Positivo (concentracin alta de azcar)
Color verde: Positivo (concentracin baja de azcar)
Color azul: Negativo.
3.2.3. PRUEBA DE BARFOED
La prueba de Barfoed sirve para distinguir monosacridos
reductores de disacridos reductores, basndose en la
velocidad de reaccin; en los monosacridos la formacin del
oxido cuproso es mas rpido que en los disacridos. La
reaccin consiste en utilizar acetato cprico y cido actico en
solucin cida con lo que los monosacridos son capaces de
reducir al cobre de manera ms rpida y en condiciones
menos drsticas.
Por supuesto que al tener la solucin un pH cido resulta
necesario controlar rigurosamente el tiempo de reaccin, pues
si ste se prolongara se producira la hidrlisis cida del enlace glucosdico con la
consiguiente liberacin del carbono anomrico y la aparicin de nuevos grupos
reductores que falsearan el resultado. (2)
3.2.4. PRUEBA DE YODO
La prueba del yodo es usada para determinar la presencia
o alteracin de almidn u otros polisacridos. Una
solucin de yodo - diyodo disuelto en una solucin acuosa
de yoduro de potasio, reacciona con almidn produciendo
un color prpura profundo.
Este resultado es producto de la formacin de cadenas de
poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo
presente en la solucin de un reactivo llamado Lugol. La
amilosa, el componente del almidn de cadena lineal,
forma hlices donde se juntan las molculas de yodo,
formando un color azul oscuro a negro. La amilopectina, el componente del almidn de
cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo. Al romperse o
hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro
desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una hidrlisis,
cuando ya no hay cambio de color constituyendo una evidencia experimental
ampliamente utilizada. (5)

4. MARCO PRCTICO
4.1.Materiales:

Reactivos:

Gradilla
Tubos de ensayo (10)
Vaso de precipitacin de 500ml
Reverbero
Pipeta de 10ml (3)
Pinza para tubos
Pera de succin

Reactivo de Molisch
Reactivo de Fehling
Reactivo de Benedict
Reactivo de Barfoed
Reactivo de Seliwanoff
Lugol
cido sulfrico concentrado
Agua destilada
Solucin de glucosa
Solucin de fructosa
Solucin de sacarosa
Solucin de almidn
Solucin de lactosa

4.2. Procedimiento

REACCIN
DEL
NAFTOL
(MOLISH)

A 2.5 mL de la
solucin
de
azcar en un
tubo de ensayo,
aadir 2 gotas
del reactivo de
MOLISH.
Dejar caer por
las paredes del
tubo 1 mL de
cido sulfrico
concentrado
(no
agitar),
formando una
capa de cido
bajo la de
azcar,
una
zona rojo
violeta aparece
en la unin de
los
dos
lquidos.

PRUEBA
DE
YODO
A
una
muestra
de
almidn, se
agrega
2
gotas de una
solucin de
(LUGOL).
En otro tubo
se prepara un
blanco
constituido de
2 mL de agua
destilada y 2
gotas
de
solucin de
yodo

yodurada. Se
compara los
colores.
(almidncolor negro
azulado).

PRUEBAS
DE
REDUCCIN
a) Prueba de
Fehling/Benedict
.- A un tubo con 2
mL. de solucin
de
Fehling/
Benedict,
se
adiciona 4 mL de
agua destilada y
se hierve.
A la solucin
caliente
se
adiciona de 5-10
gotas
de
la
solucin
de
azcar
y
se
calienta la mezcla
en bao maria.
Formacin de un
precipitado
de
color amarillo o
anaranjado rojoreaccin positiva.

PRUEBAS
DE
REDUCCI
N
b) Prueba de
Barfoed.- A 2
mL
de
la
solucin
de
Barfoed
se
aade 1 mL de
la solucin de
azcar, se hierve
por 1 min y se
deja en reposo.
La reduccin se
indica por la
formacin de un
precipitado rojo
de
xido
cuproso. Si el
precipitado no
aparece luego de
hervir por 1 min,
hervir de nuevo,
dejar en reposo
por 15 min. y
observar.

REACCIN
RESORCINOL
CIDO
CLORHDRICO
(SELIWANOFF)

A 2 mL. de
reactivo
de
Seliwanoff se
agrega
4
gotas de la
solucin de
azcar y se
calienta por
un minuto en
un
bao
hirviente.
Observe
la
aparicin de
un color rojo
intenso con o
sin separacin
de
un
precipitado
rojo pardo.

ESQUEMA GENERAL

5. GRFICOS

Foto 2. Equipo de trabajo Foto 3. Tubos de ensayo,

Foto 1. Reactivos y muestras en
(reverbero, pipetas, vasos de gradilla y pinzas utilizados en la
solucin.
precipitacin)
prctica.

6. REACCIONES

7. RESULTADOS:

PRUEBAS
SUSTANCIAS
Molisch

Yodo

Fehling
/Benedict

Barfoed

Seliwanoff

MUESTRA 1

+13min
(disacrido)

------------------

MUESTRA 2

+ 3min

+ 6min
(aldosa)

MUESTRA 3

+ 2 min

MUESTRA 4

(no
----------------carbohidrato)

MUESTRA 5

+(polisacrido) ------------------- ------------------- -------------------

MUESTRA 6

+ 1min
(cetosa)

------------------- ------------------- -------------------

- (azcar no
------------------- ------------------reductor)

+ = Reaccin positiva
- = Reaccin negativa
8. OBSERVACIONES

Foto 7. Sin
formacin de Foto 8. Formacin de
anillo morado rojizo M.5.
anillo
coloreado en (+).
M.4. (-). No es
un glcido.
REACCIN DEL ALFA-NAFTOL O DE MOLISH (da positiva con todos los glcidos, sean o no
reductores)

Foto
5.
Foto
4.
Formacin de
Formacin
de
anillo violeta
anillo casi violeta
en la M.2. (+).
en la M.1. (+).

Foto
6.
Formacin de
anillo morado
Muestra 3 (+).

Foto 12. M.2. y M.3.

Foto 10. Con
Foto 9. El lugol
monoy
da,
con
el
disacridos
almidn
presenta
un
(polisacrido)
color
rojo
color azul. (+)
caoba. (-)

Foto 11. El catin cprico

(Cu++) del reactivo de
Fehling reacciona con los
glcidos reductores pasando a
xido cuproso, que es un
precipitado de color rojo
ladrillo. M.3. (+)

reaccionan aprox. a los 3 y

2 min respectivamente,
tomando
el
color
carcteristico. Por ende son
monosacridos.
M.1. reacciona a los 13
min aprox. Por lo tanto es
un disacrido.

PRUEBA
REACCIN DE FEHLING
REACCIN DEL LUGOL (da
(da positiva con todos los
positiva con los polisacridos)
glcidos reductores)

DE
BARFOED
(distingue
monosacridos reductores
de disacridos reductores,
en base a la velocidad de
reaccin)

Foto 13.

M.3. tom una coloracion rojo

ladrillo al minuto de someterla a
Foto 14. Resultados de cada Foto 15. M.1. hasta la
bao Mara. Esta muestra es una
prueba realizada en M.3. prueba de Barfoed, la cual
cetosa.
dio una reaccin (-)
M.2. es una aldosa, y tarda aprox. 6 (Muestra 3).
min. en reaccionar.

REACCIN RESORCINOL
CIDO
CLORHDRICO
(SELIWANOFF) .- (da positiva
con cetosas y negativa con
aldosas)

9. CONCLUSIONES
9.1.Se identific carbohidratos mediante la reaccin de Molisch, que es la reaccin
universal para la identificacin de carbohidratos, de las seis muestras se
determin que 5 correspondan a carbohidratos presentando una coloracin rojo
violcea, en tanto que la muestra 4 resulto negativa a la reaccin de Molisch por
lo que se puede interpretar que esta muestra no contiene carbohidratos.
9.2.Se realiz la caracterizacin cualitativa de los polisacridos, mediante el test del
yodo, el almidn en particular est formado por amilosa y amilopectina, este
polisacrido se colorea de azul en presencia de yodo debido a la adsorcin o
fijacin de yodo en la superficie de la molcula de amilosa, solo la muestra 5
resulto positiva al presentar una coloracin azul, mientras que el resto de
muestras fueron negativas y no presentaron coloracin por lo que se determin
que solo la muestra 5 es un polisacrido(almidn), en tanto que las 4 muestras
restantes son disacridos o monosacridos.
9.3. Los carbohidratos poseen poder reductor, ya que los grupos cetona y aldehdo
tienen capacidad de oxidarse, pero esta capacidad solo se manifiesta cuando esos
grupos se encuentran libres como es el caso de los monosacridos y ciertos
disacridos, se demostr la presencia de este poder reductor en las muestras al
efectuar la prueba de Fehling o la de Benedict, dando un resultado positivo en la
muestra 1,2 y 3 , mientras que la muestra 6 fue negativa, estas pruebas se basan
en la capacidad de reducir las sales cpricas a xido cuproso, estos reactivos
tienen un color azul debido a la presencia del
(oxidado) y cambia de color y
se precipita al ser reducido por un azcar reductor( monosacrido o disacrido)
tornndose rojo ladrillo ya que ha cambiado a
(reducido).
9.4.Se estableci diferencias entre monosacridos y disacridos mediante la reaccin
de Barfoed en la cual se da la formacin de un precipitado de Cu2O, si el
precipitado se forma en un tiempo corto es un monosacarido reductor, si por el
contario el tiempo de formacin del precipitado sobrepasa los 7 minutos es un
disacrido reductor, esto se debe a que el acido actico que contiene el reactivo
de Barfoed no puede romper con la misma facilidad el enlace de un disacrido
que el de un monosacrido. La formacin del precipitado en la muestra 2 se dio
en 3 minutos, en la muestra 3 en 2 minutos, por lo tanto estas dos muestras
contienen monosacridos reductores, en tanto que en la muestra la formacin
tard ms de 7 minutos por lo que se trata de un disacrido reductor.
9.5.La presencia de aldosas y cetosas en las muestras se evidencio mediante la
prueba de Seliwanoff, que es una reaccin de deshidratacin, la muestra 2 y 3
dieron positivas a este test sin embargo la muestra 3 demor menos tiempo
(aproximadamente 1 minuto) y present un color rojo mas intenso al mezclarse
con el reactivo de seliwanoff esto debido a que las cetosas se deshidratan ms
rpido al unirse con el resorcinol.

10. RECOMENDACIONES

Lavar previamente los materiales, como tubos de ensayo y pipetas, para evitar
errores en la prctica debido a sustancias presentes con anterioridad en los
materiales.
Utilizar varias pipetas para evitar que se mezclen los reactivos durante la
prctica.
Tener precaucin al utilizar el cido clorhdrico ya que es un reactivo que puede
causar quemaduras serias.
Evitar pipetear con la boca ya que se pueden contaminar las muestras.
Utilizar un cronmetro al momento de tomar el tiempo para mayor exactitud.
Respetar los tiempos establecidos de exposicin al calor de las muestras con los
reactivos.
Seguir el mapa conceptual expuesto en la prctica para el desarrollo de las
muestras.
Utilizar guantes y mascarilla para el manejo de los reactivos, debido a que
algunos pueden resultar peligrosos.

11. CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento de la reaccin de identificacin de azcares con el
reactivo de Molisch?
La reaccin de identificacin de azcares con el reactivo de Molisch se
fundamenta en que todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado
se deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las
hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos furfurales reaccionan positivamente con
el reactivo de Molish (solucin alcohlica de ( naftol) dando un producto
coloreado. (1)
2. Indique cuales reacciones sirven para identificar azcares reductores y
explique su fundamento.
Las reacciones sirven para identificar azcares reductores son:
REACCIN DE FEHLING
La reaccin de Fehling se fundamenta en que el catin cprico (Cu++) del
reactivo reacciona con los glcidos reductores pasando a xido cuproso, que es
un precipitado de color rojo ladrillo. Esta es una reaccin que resulta positiva
slo si el glcido es reductor. Los glcidos reductores se manifiestan en medio
alcalino, pero el Cu++ en ese medio tiende a precipitar espontneamente como
xido cprico (que en esa forma no reacciona), de manera que es necesaria la
presencia de tartrato doble de sodio y potasio en el reactivo para "secuestrar" al
catin Cu++, a fin de evitar la formacin del xido cprico, y permitir que
reaccione con los glcidos reductores. (3)

REACCIN DE BENEDICT
La reaccin de Benedict se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el
(Cu++) en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en forma de
Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. (1)
Resultados de la prueba de Benedict
Color ladrillo: Positivo (concentracin alta de azcar)
Color verde: Positivo (concentracin baja de azcar)
Color azul: Negativo.
3. Indique cuales reacciones sirven para diferenciar entre monosacridos y
disacridos y explique su fundamento.
La reaccin que sirve para diferenciar entre monosacridos y disacridos es la
prueba de Barfoed, la misma que se basa en la velocidad de reaccin; en los
monosacridos la formacin del xido cuproso es ms rpido que en los
disacridos. La reaccin consiste en utilizar acetato cprico y cido actico en
solucin cida con lo que los monosacridos son capaces de reducir al cobre de
manera ms rpida y en condiciones menos drsticas. Por supuesto que al tener
la solucin un pH cido resulta necesario controlar rigurosamente el tiempo de
reaccin, pues si ste se prolongara se producira la hidrlisis cida del enlace
glucosdico con la consiguiente liberacin del carbono anomrico y la aparicin
de nuevos grupos reductores que falsearan el resultado. (2)
4. Cul es la reaccin que nos permite distinguir entre aldosas y cetosas y
explique su fundamento?
La reaccin que nos permite distinguir entre aldosas y cetosas es la de
Seliwanoff, esta reaccin se da en presencia de un cido fuerte producindose
derivados furfricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina. Una
cetohexosa, formara un color rojo intenso cuando se hace reaccionar con el
reactivo de Seliwanoff. Una aldohexosa, mostrar un color rosa claro
necesitando ms tiempo que la cetohexosa cuando se hace reaccionar con el
reactivo. (4)
5. Explique con que prueba podemos distinguir polisacridos.
La prueba con la que podemos distinguir
polisacridos es la del yodo.
La prueba del yodo es usada para determinar la
presencia o alteracin de almidn u otros
polisacridos. Una solucin de yodo - diyodo
disuelto en una solucin acuosa de yoduro de
potasio - reacciona con almidn produciendo un
color prpura profundo. Este resultado es producto de la formacin de cadenas
de poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo presente en la
solucin de un reactivo llamado Lugol. La amilosa, el componente del almidn
de cadena lineal, forma hlices donde se juntan las molculas de yodo, formando
un color azul oscuro a negro. La amilopectina, el componente del almidn de
cadena ramificada, forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo. Al

romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato,

el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar
el final de una hidrlisis, cuando ya no hay cambio de color constituyendo una
evidencia experimental ampliamente utilizada. (5)

12. BIBLIOGRAFA
1. Pierina Pilatti, Julio Amy, William Ramos Departamento de Ingeniera Qumica,
Qumica Fsica y Qumica Orgnica Universidad Nacional Autnoma de
Mxico. Identificacin de compuestos bioqumicos pruebas cualitativas
http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/2_Estructurade
CompuestosBioquimicos/9-1_ReaccionesIdentificacion.pdf
2. Isaac Tnez, Aurora Galvn, Pedro Montilla, Departamento de Bioqumica y
Biologa Molecular, Facultad de Medicina, Universidad de Crdoba.
Identificacin de glcidos
http://www.uco.es/dptos/bioquimica/pdfs/21%20DETERMINACI%C3%93N%
20GL%C3%9ACIDOS.pdf
3. Patricia Elisa Salinas Leal, Gerardo Rafael Cortez Torres, Guillermo Yael Oliver
Llanos Galvn, Reacciones de los carbohidratos
http://www.institutoanglomexicano.edu.mx/secundaria/Reacciones%20de%20lo
s%20Carbohidratos.pdf
4. Nieves Abril Daz, Jess V. Jorrn Novo y Jos A. Brcena Ruz. Reacciones
coloreadas para la determinacin cualitativa de azcares
http://www.uco.es/dpto/pdfs/20%20REACCIONES%20COLOREADAS%20D
E%20AZ%C3%9ACARES.pdf
5. Angulo Ugalde, Y. Bioqumica Manual de Laboratorio. Universidad de Costa
Rica. 1999