UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

Carrera de laboratorio clnico e histopatolgico

TCNICAS HISTOLGICAS

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS

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Tcnicas Histolgicas

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Introduccin
En este trabajo ates de explicar el procedimiento de tejidos vamos a dar una
pequea introduccin acerca de lo que es anatoma patolgica estos han
pasado de ser un pramo tecnolgico, cuya eficacia dependa principalmente
de la habilidad manual de los tcnicos de laboratorio, a un complejo mundo de
procedimientos de laboratorio los mismos que facilitan la preparacin de los
tejidos no solo para su estudio microscpico, sino tambin para su anlisis. El
estudio de los tejidos enfermos puede realizarse a partir de tres formas
distintas de material anatomopatologico. (1)
El microscopio es un instrumento ptico, permite ver objetos que por su
pequeo tamao escapan a la percepcin del ojo humano. Existen dos tipos
de microscopios pticos: microscopio simple, estereoscopio o lupa y
microscopio compuesto, los mismos que permiten la observacin de secciones
traslucidas y coloreadas de tejido. Sin embargo para que un tejido pueda ser
observado a un microscopio se requiere de dos condiciones previas
elementales: a) Que el tejido conserve su estructura una vez separado del
organismo de procedencia, y b) Y que pueda ser seleccionado en finas lminas
traslucidas ya que por lo comn los tejidos son opacos.
Denominamos proceso histolgico a una serie de mtodos y tcnicas utilizados
para poder estudiar las caractersticas morfolgicas y moleculares de los
tejidos. (2) Hay una serie caminos para poder estudiar los tejidos, es decir,
series de tcnicas las mismas que se utilizaran dependiendo de qu
caracterstica deseamos observar, los tejidos pueden ser observados por
medio de microscopios pticos y por medio de microscopios electrnicos. A
continuacin daremos a conocer cules son los pasos para obtener la
preparacin de un tejido:

1. Obtencin de la muestra
El proceso histolgico comienza con la obtencin del tejido en donde se
puede optar por dos opciones: la primera consta en coger una porcin
del tejido u rgano y procesarla y la segunda consta en extraer la

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muestra que nos interese. Son cuatro los orgenes del material que se
puede obtener, por orden de importancia, en un laboratorio de anatoma
patolgica:

Piezas obtenidas por biopsia o fragmentos de rganos extrados

en una intervencin quirrgica:

En ambos casos se debe realizar un diagnstico histolgico, cuyo

resultado determinara el tratamiento a emplear. Son importantes la
calidad en la preparacin y la rapidez con que se diagnostique.

Imagen # 1: Biopsia de pncreas

Piezas procedentes de autopsia

Se exige el estudio de los rganos de un cadver para establecer un
diagnstico mdico-legal (causa de la muerte) o para realizar una
investigacin anatomopatologica.
En ambos casos es importante la rapidez en el estudio, para
conseguir que los tejidos sufran las mnimas alteraciones postmorten posibles.

Imagen # 2: Autopsia de un ser humano

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Piezas procedentes de animales de experimentacin

Para

estudios

cientficos,

con

fines

de

investigacin.

Las

preparaciones se las deben realizar con gran cuidado.

Imagen # 3: Autopsia de un animal

Piezas extradas de vegetales

Solo se estudian tejidos vegetales, en casos muy especiales, solo
para investigacin biolgica.

Imagen # 4: Tejido vegetal

2. Fijacin
Como siguiente paso tenemos la fijacin este proceso se refiere al
tratamiento del tejido con sustancias qumicas, de esta manera se va a
mantener las clulas con las propiedades intactas lo ms parecida
posible a como se encontraba en la muestra viva. Esto se logra al
inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciaran la
autolisis y llevaran a la degeneracin post-mortem. La fijacin mantiene
estructuras al estimular la formacin de enlaces cruzados entre las

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protenas. (3) En cualquier caso las muestras son habitualmente fijadas

con una soluciones liquidas denominadas fijadores. Tambin podemos
fijar las molculas de los tejidos por congelacin rpida. Fijar un tejido es
como hacer una fotografa de dicho tejido, su estructura se mantendr
hasta su observacin. La fijacin por congelacin se emplea cuando la
fijacin qumica o los procesos histolgicos posteriores alteran las
caractersticas de la muestra que queremos estudiar, por ejemplo una
molcula sensible a dichos tratamientos.
En otro concepto tenemos que la fijacin tisular consiste en interrumpir
los procesos degradativos que aparecen tras la muerte celular, tratando
de conservar la arquitectura y composicin tisular lo ms prxima
posible a la normalidad.
Aunque existen una gran cantidad de lquidos fijadores simples y
diferentes mezclas de los mismos, el ms utilizado usualmente es el
formaldehido, gas incoloro, que se comercializa en solucin acuosa
saturada 37-40%. En anatoma patolgica se utiliza al 10% en solucin
de nueve volmenes de agua en un volumen de formalina. Esta solucin
debe ser tamponada a un pH de 7, que evita la formacin del pigmento
formolado, especialmente en las preparaciones en donde hay mucha
sangre.
El tejido seo despus de fijado, se descalcifica en soluciones
descalcificantes como cido frmico, cido clorhdrico, cido ntrico,
resinas de intercambio inico o en una pila electroltica.
Una vez fijadas, las muestras tisulares para estudio microscpico
pueden ser preparadas de una gran variedad de formas, aunque en su
mayor parte requieran inclusin en un medio slido. El principal agente
empleado para la inclusin es la parafina, aprovechando la propiedad
que posee de encontrarse en estado lquido a temperaturas en torno a
55- 60C y solidificara a temperatura ambiente.
La obtencin de secciones tisulares translucidas se realiza con el
micrtomo. La obtencin de cortes sobre tejido congelado se realiza
mediante el denominado criostato y la obtencin de sesiones para

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microscopa electrnica. Puesto que la mayora de colorantes utilizados

son solubles en parafina, los tejidos tras a ver sido cortados, deben ser
desparafinados en xileno y rehidratados.

Imagen # 5: Fijacin de cadver

Imagen # 6: Fijacin de cadver

Imagen # 7: Fijacin de cadver

3. Deshidratacin
En el tercer paso se le tiene a la deshidratacin la misma que se realiza
para eliminar el exceso de fijadores en la muestra de los tejidos, de esta
forma se podr hacer la inclusin sin la presencia de alguna interferencia
por parte del fijador. Existen medios de inclusin que son hidrfobos y
precisan de la eliminacin de agua en la muestra. Tenemos que hacer
una deshidratacin. Debido a que una gran parte del tejido est
constituido por agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas
de menor a mayor grado de agente deshidratante, por ejemplo alcohol
etlico, o acetona.
Se

inicia

con

alcohol

al

0.5%,

luego

con

una

solucin

de

10%,20%,80%,90%, 95% y alcanzando de manera paulatina el alcohol

al 100% para eliminar el agua. Esto se hace porque si se coloca el tejido
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en una solucin al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldra muy

rpida del tejido y se deformara.

Imagen # 8: Deshidratacin de tejido

Imagen # 9: Deshidratacin de tejido

Aclaramiento
En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. El ms
usado es el xilol (xileno) ya que como la muestra est deshidratada, el xilol
entrar hasta lo ms profundo del tejido. Tambin el tejido pierde color y
adquiere un tono acaramelado.

Infiltracin
En este paso la muestra se coloca en parafina lquida, cabe mencionar que se
debe usar parafina histolgica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido
est completamente lleno de xilol, ahora debido a smosis sale el xilol y entra
la parafina.
La deshidratacin, aclaramiento e infiltracin pueden ser realizadas
manualmente pero hoy en da se realizan de modo automtico en mquinas
especficas.

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Inclusin
Aqu se forman bloques de parafina dentro de los cuales estn las muestras a
estudiar. Tambin hay maquinas especializadas para la inclusin en parafina
de tejidos. Despus de su inclusin y posterior secado, estos se deben poner a
enfriar en un congelador para su posterior corte. Puede llevarse a cabo en
Parafina.

Microtoma
Se realizan cortes histolgicos muy delgados segn lo requerido o la costumbre
del laboratorio donde se realice la tcnica. Los cortes van desde 0,5 micras
hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al bao de flotacin y se pescan con
un portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tincin con que se
van a procesar. El ngulo de corte entre el cuchillo del microtomo y el bloque
ha de estar entre 10 y 15. Una vez realizado el corte se da un bao de agua
destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte histolgico debe tener
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un grosor aproximado de 3-5 micras para que sea fcilmente atravesado por la
luz del sol atraviesa los poros celulares.

Tincin
Los tejidos animales son en su gran mayora incoloros, excepto aquellos que
poseen algn tipo de pigmento como la sangre o la melanina de la epidermis.
Cuando se inventaron los primeros microscopios hubo que descubrir cmo teir
los tejidos para poder desentraar sus caractersticas morfolgicas. Se observ
que algunos pigmentos como el carmn o la eosina, disueltos en agua, se unan
a determinados componentes de las clulas.

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En este caso daremos 4 tipos de tinciones utilizadas en el laboratorio:

a) Tinciones generales. Aquellas que usan sustancias coloreadas que se
unen a componentes tisulares por afinidad qumica.
b) Histoqumica. Son aquellas tcnicas de tincin que implican la
modificacin

qumica

de

algunas

molculas

tisulares

para

posteriormente ponerlas de manifiesto con colorantes.

c) Lectinas. son dominios de protenas, como las selectinas, que son
capaces de reconocer glcidos que forman parte de polisacridos.
Tienen una gran especificidad y se usan para determinar el tipo de
glcido que aparece en las glucoprotenas de la membrana plasmtica o
de la matriz extracelular de los diferentes tejidos.
d) Hibridacin. Son tcnicas basadas en la unin complementaria de las
bases de cidos nucleicos (adenina con la timina, o con el uracilo, y de
la guanina con al citosina). Esto hace que dos cadenas complementarias
de cidos nucleicos se unan entre s de forma muy especfica, es decir,
hibriden.
Despus de la tincin se elimina el exceso de colorante y se hidrata una ves
mas de manera que pueda fijarse el tejido de manera permanente para un
montaje adecuado de la placa.
Colorantes usados
Colorantes Bsicos: aquellos que poseen una carga global positiva
(catinicos), por lo que reaccionan con los componentes aninicos de las
clulas y los tejidos. Ej.: Hematoxolina , fucsina bsica, etc.
Colorantes cidos: aquellos que poseen una carga global negativa
(aninicos) por lo que reaccionan con los componentes catinicos de las
clulas y los tejidos. Ej.: Eosina , fucsina cida, etc.
Colorantes neutros: su carga global es neutra por lo que conservan la
propiedad de colorear conjunta o separadamente diversas estructuras. Ej.:
tincin de Giemsa.

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Colorantes metacromticos: colorantes bsicos que reaccionan con algunas

estructuras tisulares que producen tonos de color totalmente distintos al que
se espera por el colorante empleado. Ej.: azul de metileno o de toluidina en
la sustancia fundamental del cartlago (azul al rojo o prpura).
Colorantes indiferentes: aquellos que no poseen carcter cido, bsico o
salino definido. Colorean mediante impregnacin.

Observacin
En la observacin el laboratorista determinara la patologa del tejido o a su
ves las estructuras para su diferente estudio

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Bibliografa:
1. Fernando Torrez Seco. Manual de tecnicas en Histologia y Anatomia
Patologica. Espaa : Hurope, Marzo 2012. 1.
2. F.J. Pardo. Anatomia Patologica. Puerto Rico : Harcucord, 2010 Febrero. 2.
3. Midan, Pardo. Compedio de Anatomia Patologica. espaa : Harcund brace,
1998. 3.
4 Ross, MH, Kaye, GI, Pawlina, W. (2005) Histologa. Texto y atlas en color
estafa BIOLOGIA CELULAR y molecular. Editorial Mdica Panamericana.
Madrid.
5 Cediel Fernando (2009) Manual de Histologia TEJIDOS FUNDAMENTALES
Universidad del Rosario. pag 45-60

Linkocografia:
-

http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/3-parafina.php

https://docs.google.com/document/d/1sjT7PPi_-MS8rjKGg8EE7Ep6qfBXFIAO2qHA7NkaTM/edit?hl=en&pli=1

http://es.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_histol%C3%B3gica

http://books.google.com.ec/books?id=ca2kuO4iwM0C&dq=procedimi
ento+manual+de+tejidos+histol%C3%B3gicos&hl=es&source=gbs_n
avlinks_s

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Registro de actividades grupo # 8

Tema: Procesamiento de tejidos
Unidad:
NOMBRE
Tania
Jerry
Cristian
Daniel

APELLIDO
Oleas
Rojano
Chicaiza
Herrera

RESPONSABILIDAD
Colaboradora
Coordinador
Colaborador
Colaborador

FIRMA

Desarrollo:
FECHA NOMBRE
20/09/14 Tania Oleas

20/09/14 Cristian
Chicaiza
20/09/14 Jerry Rojano

20/09/14 Daniel Herrera

ACTIVIDAD
FIRMA
introduccin,
obtencin de la
muestra, fijacin y
deshidratacin.
Aclaramiento,
infiltracin, inclusin
Recoleccin de
datos (Word)
Corte Tincin y
observacin

OBSERVACIONES
Me pareci muy
interesante
los
temas a realizar.
Interesante
Importante para el
estudio en la
catedra
Interesante los
temas

Resultado final:

INTEGRANTES

PARTICIPACIN
0 25

Tania Oleas
Jerry Rojano
Cristian Chicaiza
Daniel Herrera

Lab. Clnico

50

75

FIRMA

100

X
X
X
X

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