UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLS DE HIDALGO

FACULTAD DE ENFERMERA

MANUAL DE PRCTICAS Y ACTIVIDADES DE APOYO PARA EL APRENDIZAJE DE

MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
PRIMER SEMESTRE PROFESOR DE LABORATORIO: D.C. GEORGINA HERNNDEZ MATA

NOMBRE DEL ALUMNO (A):_____________________________________________________ SECCIN: __________ HORA: ____________ DIA: _______________

ELABORADO POR:
M.E.M. JAQUELINE PISANO BEZ D.C. GEORGINA HERNNDEZ MATA M.E.M MARA JAZMN VALENCIA GUZMN

CICLO ESCOLAR

2012 - 2013

NDICE Introduccin .......................................................................... 1 Objetivos............................................................................... 2 Criterios de Evaluacin......................................................... 3 Reglamento de Laboratorio.................................................. 3 Practica No. 1 Uso y manejo del Microscopio............................................. 5 Practica No. 2 Morfologa bacteriana............................................................ 9 Practica No. 3 Tincin de Gram.................................................................... 11 Practica No. 4 Esterilizacin y desinfeccin................................................. 13 Practica No. 5 Exudado Farngeo... .................................................. 15 Bibliografa............................................................................ 17

INTRODUCCIN Los principios pedaggicos para la Unidad de Aprendizaje de Microbiologa y Parasitologa son: autoformacin, apertura, flexibilidad, pertinencia, participacin, interdisciplinariedad, integralidad y articulacin teora-prctica, en consonancia con lo expresado y desarrollado en el proceso de transformacin del diseo curricular del nuevo plan de estudios de la Facultad de Enfermera de la Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo. Formar integralmente profesionales capaces de interactuar con otros profesionales y con la comunidad, que sean portadores de valores, conocimientos, actitudes, aptitudes y habilidades cientfico-tecnolgicas, investigativas y socio-humansticas, para su continuo crecimiento personal, as como para su proyeccin tanto social como profesional. Se busca el desarrollo de capacidades y competencias que ayuden para que l@s estudiantes de la Facultad de Enfermera puedan desempearse como profesionales en el ejercicio de su profesin para una exitosa competitividad tanto a nivel nacional como internacional, entre las que se encuentran las siguientes: o Fortaleza en ciencia bsica o Pensamiento lgico y sistmico o Interdisciplinariedad o Habilidad para relaciona la informacin terica con la prctica o Capacidad de trabajo en equipo o Capacidad de comunicarse o Valores ticos o Liderazgo o Capacidad de abstraccin o Capacidad de identificar y resolver problemas relacionados con su objeto de Estudio o Describir y analizar la morfologa colonial de los microorganismos para la identificacin adecuada de cada uno de ellos o Resolver problemas de identificacin y relacin de los microorganismos con el dao a la Salud que ocasionan o Proponer actividades que requieran conocimientos de su objeto de estudio para la aplicacin en su campo laboral La Unidad de Aprendizaje del Microbiologa y Parasitologa dentro del Nuevo Plan de Estudios de la Facultad de Enfermera corresponde al rea de formacin Bsica, dentro del rea del Conocimiento de las Ciencias de la Salud, su lnea curricular se encuentra dentro de las Ciencias Biolgicas y es una Unidad de Aprendizaje de corte Terico, Prctico, Obligatorio y Presencial. La finalidad de esta Unidad de Aprendizaje es dar a l@s estudiantes de la Facultad de Enfermera, una formacin integral dentro del campo de la salud, iniciando con el estudio de la Evolucin Histrica de la Microbiologa y Parasitologa y puedan conocer y establecer las relaciones que guarda el hombre y su medio con los factores que interactan en la trada ecolgica que permiten ubicar al hombre en el proceso Salud Enfermedad. La Trada Ecolgica se conforma por tres factores cuyo equilibrio mantiene la salud de un individuo y su descompensacin conduce a la enfermedad, tales factores son: EL AGENTE ETIOLGICO, EL HUSPED Y EL AMBIENTE. Este conocimiento permitir a l@s alumn@s conocer los fenmenos especficos de Salud Enfermedad y fundamentar alternativas de solucin para cualquier Socio Sistema.

El Manual de Prcticas y Actividades de Apoyo para el Aprendizaje de Microbiologa y Parasitologa de la Facultad de Enfermera de la UMSNH se presenta de forma sistemtica, de manera que las experiencias resulten interesantes y permitan motivar a l@s alumn@s para que interpreten de mejor manera lo trabajado tericamente dentro de las aulas, con la adecuada sincronizacin Teora Prctica. Para que los objetivos se logren en forma efectiva de requiere:

Antes de iniciar una sesin prctica, estudiar los aspectos relacionados de la Teora con la misma Prctica. Planear el desarrollo de los experimentos tomando en consideracin todo lo que se encuentre relacionado con los mismos como son: Sustancias y material a usar, as como incrementar la eficiencia en el trabajo ya sea individual o en equipo. Hacer las observaciones y anotaciones pertinentes durante la ejecucin de las prcticas. Cumplir con las indicaciones de la profesora de prcticas as como con el reglamento del laboratorio tanto del orden disciplinario como de seguridad.

OBJETIVOS Generales 1. Satisfacer la necesidad de presentar a l@s estudiantes instrucciones precisas y objetivas. 2. Introducir a l@s estudiantes en algunas tcnicas de laboratorio incrementando sus habilidades manuales, as como de observacin y anlisis de resultados obtenidos. 3. Comprobar experimentalmente lo aprendido tericamente, como parte de la retroalimentacin. 4. Contribuir a proporcionar enseanza, para registrar sus observaciones en forma adecuada, exacta, completa y metdica.

Especficos 1. Comprender la importancia del trabajo dentro del laboratorio para poder relacionar de una forma efectiva los aspectos tericos con los prcticos, de una forma ordenada y adecuada para evitar daos tanto en lo individual como en lo colectivo, mediante el conocimiento de las reglas y medidas de seguridad que se establecen para el desarrollo optimo de las actividades. 2. Describir la interdependencia que existe entre los Microorganismos y los Parsitos con el hombre y su medio ambiente, para que sea posible percibir e identificar los daos que pueden ocurrir si no se tienen las precauciones y cuidados adecuados dentro de su campo laboral.

3. Identificar los materiales de laboratorio que son usados comnmente en el laboratorio de Microbiologa y Parasitologa para que sean empleados adecuadamente. 4. Conocer con el uso del microscopio, la forma que tienen los microorganismos identificando las partes que componen una bacteria y su hbitat normal. 5. Aprender las tcnicas de tincin, cultivo e identificacin de los microorganismos y su relacin con la patogenia, diagnstico, tratamiento, prevencin y control de los mismos. 6. Diferenciar la flora bacteriana normal, de la flora patgena causante de diversas enfermedades del hombre.

7. Distinguir a los parsitos causantes de enfermedades en el hombre, su modo de transmisin, diagnstico, tratamiento, prevencin y control de los mismos.

8. Determinar cules son los hongos causantes de enfermedades en el hombre, su modo de

transmisin, diagnstico, tratamiento, prevencin y control de los mismos.

CRITERIOS DE EVALUACIN La evaluacin es uno de los componentes ms importantes del proceso enseanza -aprendizaje, no es posible realizar dicho proceso sin al menos conocer cmo evolucionan l@s alumn@s. Para l@s alumn@s la evaluacin debe ser como su informador, para poder corregir sus dificultades, por lo tanto la han de considerar en el sustento diario para avanzar hacia metas superiores y lograr alcanzar los objetivos. Lo que se busca en el laboratorio es desarrollar valores, habilidades, destrezas, aptitudes y capacidades los cuales deben ser evaluados bsicamente para: Conocer el rendimiento del alumno Diagnosticar sus habilidades y aptitudes para el trabajo practico y/o manual Motivar e incentivar el alumno Asignar calificaciones a los alumnos Los aspectos que se evaluarn son: Puntualidad y Asistencia Iniciativa Trabajo Individual Trabajo Colaborativo Organizacin para el trabajo colaborativo Aplicacin del Conocimiento Creatividad Informe de las Prcticas de laboratorio que obligatoriamente debe de contener en cada una de las sesiones la estructura indicada por la profesora, donde destaquen: Observaciones Dibujos Conclusiones Cuestionarios contestados Bibliografa consultada

REGLAMENTO DE LABORATORIO

La actividad dentro del laboratorio implica realizar actividades, las cuales pueden representar ciertos peligros al efectuarse, por lo que a continuacin se hacen algunas recomendaciones cuyo cumplimiento permite realizar el trabajo experimental con mayor seguridad. LA APLICACIN DEL REGLAMENTO ES ESTRICTA E IMPARCIAL

Asistir y entrar al laboratorio a la hora programada, solamente se darn 5 minutos de

tolerancia y una vez pasados se cerrar la puerta.

Entrar solamente con bata blanca limpia, de manga larga y abotonada y el manual de
prcticas.

Si se tiene el cabello largo recogerlo, las uas deben estar cortas y limpias, utilizar ropa
cmoda (pantaln largo) y zapatos cerrados de piso. Est prohibido el uso de celulares, quien no acate esta disposicin deber abandonar el laboratorio y tendr falta.

Se debe tener la higiene adecuada, principalmente de las manos tanto al inicio como al final
de la sesin de prcticas. Organizarse en grupos de trabajo y se debe conservar el mismo sitio durante todo el curso, no olvidar que trabajar en equipo no significa que todos los integrantes deban estar todo el tiempo juntos y dedicados a la misma actividad, sino que debe haber divisin racional y coordinada del trabajo. Poner atencin y seguir las instrucciones sobre el desarrollo de la prctica. Nunca pensar que se ha comprendido algo si no se est en condiciones de explicarlo con claridad a los dems, si hay dudas, PREGUNTAR sin temor.

Planear en forma eficiente el trabajo de laboratorio de acuerdo a las limitaciones de tiempo,

espacio y equipo disponible. Tener a la mano su manual para hacer todas las anotaciones y observaciones pertinentes. Conservar la mesa de trabajo limpia, seca y slo con el material requerido para la prctica.

Cada grupo de trabajo recibir el material necesario para su prctica, mismo que debern
entregar completo, limpio y en buen estado.

En caso de que se rompa o pierda algn material, el equipo tendr una semana para
reponerlo de lo contrario no se les evaluar hasta que lo repongan. Al terminar la prctica se debe limpiar perfectamente la mesa de trabajo y colocar los bancos en su lugar para dejar todo listo para el siguiente grupo. MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD Si por accidente se derraman los cultivos de microorganismos o alguna sustancia, se debe notificar inmediatamente a la(s) profesora(s). En caso de salpicadura de sustancias en la piel y/o ojos lavar inmediatamente con abundante agua del chorro de la llave, dar aviso inmediatamente a la(s) profesora(s), NO RESTREGARSE EL OJO.

Verificar que las instalaciones de gas y agua estn cerradas y en buenas condiciones, antes y despus de la prctica, as tambin verificar que las instalaciones elctricas estn funcionando adecuadamente. NO JUGAR CON DICHAS INSTALACIONES. Al calentar una solucin en un tubo de ensaye, nunca se debe dirigir la boca del tubo hacia alguna persona, ya que un calentamiento excesivo puede arrojar violentamente el lquido fuera del tubo. NO oler ni probar sustancias a menos que se indique lo contrario. NO SE DEBE Calentar solventes flamables (etanol) a la llama directa o cerca de esta. Llenar las pipetas succionando con la boca.

Introducir al laboratorio distractores (grabadoras porttiles, maquillaje, celulares, ipods

etc).

Introducir objetos a la boca, alimentos, chicles, lapices o materiales diversos.

Desperdiciar el agua. Utilizar sustancias que carezcan de etiquetas o estn mal rotuladas. Realizar experimentos o preparaciones que no se indiquen. ESTA PROHIBIDO Comer, beber, fumar, correr y jugar dentro del laboratorio. Tirar en las TARJAS O DRENAJES de las mesas de trabajo materiales slidos (algodn, papel, vidrio, etc.), para eso se encuentran los botes para basura. En el caso de lquidos, para desecharlos se abre un poco la llave del agua y se vierten en la tarja dejando correr el agua.

Prctica no. 1 USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPETENCIAS A DESARROLLAR

1.- Valorar la utilidad e importancia del uso del microscopio dentro del laboratorio de Microbiologa y Parasitologa 2.- Indicar e identificar las partes y manejo adecuado del microscopio

INTRODUCCIN: El microscopio compuesto consta de dos lentes principales. La imagen ampliada

producida por el sistema de la primera lente, es vista y nuevamente aumentada por el segundo

sistema. El microscopio es un aparato que sirve para observar lo que a simple vista es imposible ver. Consta de 3 partes fundamentales: I. SISTEMA MECNICO: Comprendido por las siguientes partes: 1. PIE O BASE: Unida rgidamente a la columna, est fabricada de un metal suficientemente pesado para darle estabilidad al microscopio. 2. COLUMNA O BRAZO: En la parte superior tiene el tubo y revlver del microscopio, en su parte media est la platina, la columna sirve para sujetar o tomar el aparato de esa parte para ser transportado. 3. PLATINA: Especie de plataforma que se puede deslizar hacia delante o atrs y a la derecha e izquierda. Con ayuda de un aditamento especial denominado carro o tornillo se pueden hacer estos movimientos. 4. TUBO: Situado en la parte superior del microscopio, sirve para soportar en l por la parte superior los oculares y por la parte inferior el revlver con los objetivos. 5. REVLVER: Tambor giratorio que tiene dispuestos en l los objetivos del microscopio. 6. PINZAS: Situadas sobre la platina, ayudan a sujetar las laminillas (portaobjetos) que se vayan a observar. 7. CREMALLERAS O TORNILLOS: Son de tres tipos: a) TORNILLO MACROMTRICO: Situado al lado derecho e izquierdo de la base del microscopio, permite bajar o elevar la platina del microscopio, en algunos microscopios este tornillo mueve el tubo. b) TORNILLO MICROMTRICO: Est situado donde el tornillo macromtrico y sirve para definir los detalles del enfoque inicial. c) TORNILLO DEL CONDENSADOR: Sirve para subir o bajar el condensador. II. SISTEMA PTICO: Compuesto por: 1. OBJETIVOS: Sistema de lentes que estn prximos al objeto que se observa. Son las partes ms importantes del microscopio y estn constituidas por una combinacin de lentes convergentes que proporcionan los aumentos parciales. Los objetivos pueden ser: A) OBJETIVO SECO: Entre estos y el objeto observado no se coloca ninguna sustancia. B) OBJETIVO DE INMERSIN: Para utilizarlos se necesita colocar una gota de aceite de inmersin entre la lente y la preparacin, debido a que el ndice de refraccin que tiene el aceite es mayor que el del aire. 2. OCULARES: Sistema de lentes que se sitan en la parte superior del tubo del microscopio y permiten observar la preparacin al acercar los ojos. III. SISTEMA DE ILUMINACIN: Se integra por: 1. CONDENSADOR: Sistema de lentes plano convexas situado entre la platina y el foco del microscopio, condensa la luz emitida por el foco, generalmente se encuentra montado de tal manera que se puede mover y ajustar a la altura requerida en la observacin. 2. DIAFRAGMA O IRIS: Situado en la parte baja del condensador, es una abertura formada por hojas mviles que se deslizan una sobre otra teniendo fijos uno de sus extremos o ngulos a un tambor, la abertura que se forma es regulable por medio de una palanca lateral. 3. FOCO o fuente de luz. MANEJO DEL MICROSCOPIO La preparacin u objeto a examinar debe colocarse en el centro del portaobjetos y debe ser lo suficientemente delgada para permitir el paso de la luz La generalidad de las preparaciones deben cubrirse con agua (una o dos gotas) sobre la cual a su vez se coloca el cubreobjetos, procurando que no se formen burbujas de aire. Se coloca en la platina procurando que la preparacin quede en el centro del orificio de la misma. La observacin inicial debe hacerse con el objetivo de menor aumento (10X)

Se baja la platina o el tubo (segn el tipo de microscopio) Se procede a iluminar el campo. Se sube lentamente la platina o tubo hasta encontrar la imagen deseada. Con el tornillo micromtrico se afina el enfoque. Obtenida una buena visin de la muestra se procede a ver toda la preparacin en busca del campo de mayor inters. Puede hacerse necesario un examen con mayor aumento, lo que se hace girando el revlver para colocar el objetivo requerido. CUIDADOS DEL MICROSCOPIO

Debe conservarse dentro de su estuche o cubierto con una funda de plstico para protegerlo del polvo. Si hay necesidad de transportarlo a otro lugar, se tiene que sujetar por el brazo con una mano y apoyar la base del microscopio sobre la otra mano. No debe arrastrarse sobre ninguna superficie. La limpieza de la parte mecnica debe hacerse utilizando una franela que no desprenda pelusa. El objetivo de 100X frecuentemente se mancha con aceite de inmersin por lo que hay que limpiarlo solamente con papel de seda, igual que los dems objetivos y oculares.

MATERIAL
Microscopio 1 Portaobjetos 1 Cubreobjetos

SUSTANCIAS - REACTIVOS
Gotero con agua Pedazo de papel con borde rasgado

DESARROLLO:
1.- Observar el microscopio e identificar cada una de sus partes, anotar los nombres. 2.- Colorear de rojo el sistema mecnico, de amarillo el sistema ptico y de azul e l sistema de iluminacin.

3.- Colocar un pedazo de papel en un portaobjetos, agregar una gota y colocar un cubreobjetos. 4.- Se mueve el revlver colocando el objetivo 10X en direccin a la platina. 5.- Poner la laminilla (portaobjetos) en la platina sujetndola con las pinzas, se enciende la luz y se centra el papel, buscando el campo adecuado. Observar, dibujar y anotar. 6.- Mover el revlver con mucho cuidado y observar con el objetivo 40X. 8.- Al finalizar la observacin se apaga el microscopio, se desconecta y se guarda con su cubierta.

Papel

10X

40X

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO
1. Qu es un microscopio? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 2. Qu otros instrumentos ayudan a observar partculas microscpicas? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 3. Qu caracterstica(s) deben tener las muestras para poder observarlas mejor? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 4. Qu precauciones se deben tener al acercar los objetivos con el movimiento de la platina o tubo a la muestra? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 5. Qu cuidados bsicos se deben tener con el microscopio? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________

BIBLIOGRAFA CONSULTADA:

Prctica no. 2 MORFOLOGA BACTERIANA COMPETENCIAS A DESARROLLAR

1.- Conocer los medios y mtodos usuales para cultivar microorganismos 2.- Diferenciar las colonias y morfologa bacterianas

INTRODUCCIN: Para que una bacteria pueda desarrollar, debe tomar del ambiente donde se
encuentre las sustancias necesarias para la sntesis celular y para la generacin de energa, a estas sustancias se les llama NUTRIENTES. Un medio de cultivo debe contener todos los nutrientes necesarios en cantidades adecuadas para los microorganismos. Muchas bacterias son incapaces de utilizar protenas como tales y deben proveerse de protenas degradadas (pptidos, proteosas, peptonas, aminocidos), extractos de carne o carne parcialmente digerida son los nutrientes bsicos de muchos medios, a algunos se les aaden carbohidratos y sales minerales. Los medios basales pueden ser enriquecidos o suplementados con sangre, vitaminas, etc. La presencia de microorganismos sembrados en un medio de Cultivo Nutritivo y adecuado, permite el desarrollo de tales microorganismos a una temperatura de 37C en un tiempo de 24 a 48 horas. Transcurrido ese tiempo se observa el desarrollo bacteriano y se pueden describir las colonias de acuerdo a su forma, elevacin y bordes y/o caractersticas de los microorganismos. Los cultivos puros son esenciales para estudiar caractersticas coloniales, propiedades bioqumicas, morfologa, reaccin a los colorantes, reacciones inmunolgicas y la susceptibilidad a los agentes antimicrobianos de una cepa en particular. Siempre debe tenerse en cuenta que en el medio ambiente se encuentran bacterias que pueden contaminar los medios de cultivo, si no se trabaja de la forma adecuada.

MATERIAL SUSTANCIAS REACTIVOS

1 Caja de Petri con Agar Nutritivo DESARROLLO: 1.- Tomar una caja de Petri con agar nutritivo, dejarla destapada durante 20 minutos en cualquier parte de la escuela, taparla y llevarla a incubacin. 2.- Incubar la caja a 37C durante 24 horas. 3.- Anotar las observaciones y hacer los dibujos correspondientes 4.- Guardar las cajas en incubacin para la siguiente prctica. Nota: Utilizar la siguiente tabla de morfologa colonial como gua para identificar las caractersticas de las colonias.

MORFOLOGA COLONIAL

OBSERVACIONES Y DIBUJOS Anotar forma, borde, elevacin, superficie, color y aspecto de las colonias presentes en el medio de cultivo.

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO
1. Qu es un medio de Cultivo? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 2. Qu caractersticas deben de tener los medios de cultivo para que se puedan desarrollar de manera ptima las bacterias? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 3. Qu es la contaminacin de un medio de cultivo? _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 4. Qu ocurre si se contamina un medio de cultivo? _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 5. Qu precauciones se deben tener cuando se realiza un cultivo bacteriolgico?

___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________

BIBLIOGRAFA CONSULTADA: Prctica no. 3 TINCIN DE GRAM COMPETENCIAS A DESARROLLAR INTRODUCCIN: Las clulas bacterianas son virtualmente incoloras en estado natural, por lo que
Pal Erlich, Roberto Koch y otros cientficos idearon los mtodos de fijacin y tincin de bacterias. Los mtodos de coloracin pueden ser: 1. Simples: Utilizan 1 colorante, consisten en colorear ya sea una preparacin en fresco de bacterias o un frotis seco y fijado con colorante bsico de anilina como el Azul de Metileno, Violeta de Genciana o Fuccina. 2. Diferenciales: Utilizan adems de un colorante primario, uno de contraste. Entre estos mtodos se encuentra la Tincin de Gram, que es el mtodo de coloracin ms importante, fue ideado por Hans Christian Gram en 1884, permite distinguir entre varias especies de bacterias que pueden presentar una morfologa similar. Cuando las bacterias retienen la combinacin Cristal Violeta Yodo se tien de morado y se dice que son Gram Positivas, las que no retiene este complejo toman color secundario que es el rojo de la safranina y se dice que son Gram Negativas. Las bacterias Gram positivas (+) fijan el colorante primario (cristal violeta) porque hay una disminucin en la permeabilidad de la pared celular causada por la deshidratacin producida por el alcohol, mientras que las bacterias Gram Negativas (-), dejan que el complejo salga por el aumento de la permeabilidad causada por la solubilidad de los lpidos de la pared celular al alcohol. 1.- Valorar la utilidad e importancia del uso del microscopio dentro del laboratorio de Microbiologa y Parasitologa 2.- Identificar e indicar las partes y manejo adecuado del microscopio

MATERIAL
1 Microscopio 1 Portaobjetos 1 Asa Bacteriolgica 1 Mechero de Bunsen Papel Absorbente 1 Puente para tincin

SUSTANCIAS - REACTIVOS
Colorantes para Tincin de Gram Cristal Violeta Lugol Alcohol - Cetona Safranina Agua en Pizeta Medios de cultivo

DESARROLLO:
1.- En un portaobjetos preparar 1 frotis de las colonias obtenidas del exudado farngeo. 2.- Se espera a que sequen las muestras, se fijan a la flama (pasndolo sobre la flama de 3 a 5 veces rpidamente). Se colocan los portaobjetos sobre el puente de tincin que est colocado sobre la tarja de la mesa. 3.- Se procede a teir el frotis de la siguiente manera: a) Poner CRISTAL VIOLETA sobre cada uno de los frotis cubriendo toda la muestra, dejarlo durante 1 minuto, tomar por un extremo el portaobjetos, para que caiga el lquido en la tarja, enjuagar con agua de la pizeta con cuidado sin tocar el frotis y hasta que ya no salga color violeta, escurrir el agua y volver a colocar sobre el puente de tincin. Despus:

b) Poner LUGOL, dejarlo 1 minuto y enjuagar y escurrir de la misma forma. Despus: c) Inclinar el portaobjetos y enjuagar con ALCOHOL CETONA hasta que ya no arrastre
color, inmediatamente enjuagar con agua, escurrirla y colocarlo sobre el puente de tincin. Por ltimo: d) Poner SAFRANINA durante 1 minuto, enjuagar y poner a secar inclinado sobre papel absorbente. 4.- Una vez seco, ponerles una gota de aceite de inmersin y observar al microscopio con el objetivo 100X, dibujar y anotar las observaciones.

_______________________________

__________________________________

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO
1. Qu es una tincin celular? ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________ 2. Por qu colorantes se podra sustituir el colorante primario? _____________________________________________________________________ 3. Cul es la funcin del lugol en la tincin de Gram? _____________________________________________________________________ 4. Qu otros colorantes se pueden utilizar en lugar de la Safranina? _____________________________________________________________________ 5. Qu importancia microbiolgica tiene la tincin de Gram?

6. ___________________________________________________________________________ _______________________________________________________________

BIBLIOGRAFA CONSULTADA:

Prctica no. 4 ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN COMPETENCIAS A DESARROLLAR

1.- comprobar el efecto antibacteriano de diversos agentes fsicos y qumicos usados con frecuencia.

INTRODUCCION: La microbiologa mdica se ha involucrado en el conocimiento preventivo de las

enfermedades infecciosas. Un componente importante de la prevencin de la infeccin es comprender y utilizar los principios de esterilizacin, desinfeccin y antisepsia. Existen agentes fsicos y qumicos que tienen la capacidad de inhibir el crecimiento bacteriano, actuando en partes especificas de los microorganismos.

MATERIAL
2 Hisopos estriles 1 Mechero de Bunsen Agentes: Calor Hmedo Ebullicin Derivados del Cloro Hipoclorito de Sodio (Cloro del hogar) Derivados del Amonio cuaternario Cloruro de Benzalconio (Benzal)

SUSTANCIAS - REACTIVOS
Suspensin bacteriana 1 ml (Escherichia coli) 1 caja con agar nutritivo Alcoholes Alcohol al 70% Halgenos Yodopovidona (Isodine) Agentes oxidantes Perxido de Hidrgeno (Agua oxigenada)

DESARROLLO:
1.- Cada equipo procesar solo el agente antimicrobiano que se le asigne. 2.- Dividir en 2 la caja de petri (por detrs de la caja), un lado se marca como testigo, y el otro como problema, en el lado marcado como testigo se siembra una muestra de la suspensin bacteriana con ayuda de un hisopo estril y despus se destruye el hisopo. 3.- Despus tomar 1ml del agente antimicrobiano que se les dio y aadir al tubo que tiene la suspensin bacteriana, mezclar y dejar actuar durante 20 minutos. (Nota: el equipo que va a realizar el proceso de ebullicin, con ayuda de unas pinzas para tubo de ensayo lo pone directo al fuego con cuidado hasta que ebulla, cuidando de inclinar el tubo y dirigir la boca del mismo hacia donde no haya ninguna persona y retirando constantemente el tubo para evitar derrames y despus dejar enfriar el lquido durante 15 minutos en un vaso con agua). 4.- Con otro hisopo estril, se toma la muestra y se siembra en la parte del medio de cultivo marcado como problema. 5.- Se incuban las cajas 24 horas a 37C 6.- Anotar las observaciones y hacer los dibujos correspondientes. 7.- Hacer un cuadro comparativo con los resultados obtenidos en cada uno de los equipos.

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO
1.- Anota las diferencias entre desinfectante y antisptico _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 2.- Qu es la esterilizacin? _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 3. Investigar el mecanismo de accin antimicrobiana de los agentes fsicos y qumicos utilizados en esta prctica _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 4. De los agentes utilizados Cules se podran considerar los mejores? _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________ 5. Investiga en el medio hospitalario cuales son los desinfectantes y antispticos mas empleados y en qu casos se utiliza cada uno. _____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

BIBLIOGRAFA CONSULTADA Practica no. 5 EXUDADO FARNGEO COMPETENCIAS A DESARROLLAR

1.- Distinguir las tcnicas de laboratorio empleadas para el aislamiento e identificacin de Streptococcus y Staphylococcus INTRODUCCIN: El cultivo del exudado farngeo es muy importante para el diagnostico de algunas enfermedades tales como, la inflamacin de las anginas de tipo estreptoccico, diftrico, estafiloccico y neumnico, el descubrimiento de focos de infeccin de algunas enfermedades como la escarlatina, fiebre reumtica, glomrulonefritis aguda y tambin la deteccin de portadores de microorganismos como el Streptococcus haemolyticus, Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus coagulasa positiva.
Streptococcus pyogenes: Cocos Gram positivos, agrupados en cadenas, catalasa negativo, anaerobio facultativo, hemolticos, crecen en medios de gelosa sangre formando colonias mucoides y/o con apariencia de Gotitas de Agua que miden de 1 a 2 mm de dimetro, presentan una lisis total del eritrocito del medio de cultivo alrededor de la colonia ( hemlisis) Factores de Patogenicidad: Produccin de estreptocinasa (fibrinolisina), estreptodornasa (desoxirribonucleasa estreptoccica), hialuronidasa (desdobla el cido hialurnico), constituyente importante de la sustancia intercelular del tejido conjuntivo. Son antignicas y especficas, producen una toxina eritrognica, hemolisinas, leucocidinas, estreptolisina O y estreptolisina S. Infecciones: Escarlatina, Erisipela (edema masivo indurado y mrgenes que avanzan rpidamente), Piodermitis (Infeccin purulenta de la piel), Fiebre Puerperal, Infecciones Supurativas, Infecciones de Senos Paranasales, Amigdalitis, Abscesos, Neumona, Otitis Media, Endocarditis, Fiebre Reumtica Aguda y Glomrulonefritis post-estreptoccica. Streptococcus pneumoniae: Cocos Gram positivos, dispuestos en cadenas, lanceoladas o en pares, catalasa negativa, anaerobios facultativos, hemolticos, crecen en gelosa sangre formando colonias pequeas de 1 a 2 mm de dimetro, redondas, de bordes completos, presentan hemlisis parcial de los eritrocitos del medio dando una coloracin verdosa alrededor de la colonia ( hemlisis) Factores de Patogenicidad: Formacin de cpsula compuesta por polisacridos antignicos, produccin de neuraminidasa y pneumolisina que es una toxina citoltica. Infecciones: Neumonas, Otitis Media, Sinusitis Purulenta, Peritonitis, Bacteriemia, etc. Staphylococcus aureus: Cocos Gram positivos agrupados en racimos, inmviles, no forman esporas, fermentan la glucosa y el manitol, hidrolizan la gelatina, catalasa positivos producen pigmentos amarillo intenso, son hemolticos, coagulan el plasma sanguneo, crecen en la mayora de los medios de cultivo, pero regularmente se les asla en Gelosa Sangre o en Agar 110 que es un medio selectivo. Se desarrolla en condiciones de aerobiosis o en microaerofilia. En Gelosa Sangre forma colonias lisas, redondas, elevadas, brillantes y cremosas. Factores de patogenicidad: Una enterotoxina, leucocidina, coagulasa, hemolisina, estafilocinasa, hialuronidasa, penicilinasa, ( lactamasa), proteinasa y lipasa. Infecciones: Abscesos purulentos en diferentes sitios del organismo tales como fornculos o barros de la piel, en las encas, en los huesos produce osteomielitis, etc.

MATERIAL 1 Hisopo estril

SUSTANCIAS - REACTIVOS 1 Medio Agar 110

1 Mechero de Bunsen 1 Asa Bacteriolgica

1 Medio de Gelosa Sangre

DESARROLLO:
1.- Tomar la muestra de la siguiente manera: Pedir al paciente que se siente y coloque su cabeza hacia atrs, se ilumina bien la cavidad orofarngea y con un abatelenguas se empuja la lengua hacia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. Con un hisopo de algodn se hace un raspado de las reas hipermicas o purulentas.

2.- Descargar un poco de muestra en medio de Gelosa Sangre y uno de Agar 110 (para estafilococos), estriar con el asa bacteriolgica para favorecer el crecimiento de colonias aisladas.

3.- Incubar a 37C durante 24 horas 4.- Anotar observaciones y hacer los dibujos correspondientes.

CONCLUSIONES:
_________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________

CUESTIONARIO
1.- Qu es un exudado farngeo? _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 2.- Para que se hace? _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 3. Qu ocurre si no se realiza bien la toma de la muestra para cultivo de exudado farngeo?_____________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 4. Es importante hacer las pruebas de identificacin?________ Por qu? _____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________ 5. Cules son las enfermedades ms comunes de la faringe? _____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

BIBLIOGRAFA CONSULTADA

BIBLIOGRAFA

B.D. Davis R. Dulbecco. Tratado de Microbiologa. Editorial Salvat, 1990 FLIX Burgos Gabriel, Sevilla Romero Lilia. Ecologa y Salud. Editorial Mc Graw Hill Interamericana JAWETZ Ernest, Melnick Joseph L. Manual de Microbiologa Medica. Editorial del Manual Moderno, 9 Edicin, Mxico 1981 KONEMAN Allen, Dowell, Janda, Sommers, Winn. Diagnstico Microbiolgico. Editorial Medica Panamericana, 3 Edicin, 1998 SMITH Conant Overman, Beard Willet Larsh. Microbiologa de Zinsser. Editorial Uteha, 3. Edicin, Mxico 1967. SUTTON David B.Fundamentos de Ecologa. Editorial Limusa, 1994 RYNDH Raphael, Mellor Spare. Mtodos de Laboratorio. Editorial Interamericana,2 Edicin ZAMAN Vigar. Atlas de Parasitologa Mdica. Editorial Medica Panamericana

Pginas de Internet http://www.gifmania.com/medicina/microscopio/ http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/esp_imagepages/9123.htm http://www.joseacortes.com/practicas/sangre.htm