Verde Brillante Agar.

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas,
alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el aislamiento de Shigella spp.
Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las
colonias sospechosas.

Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son
los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación
de azúcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

  Pluripeptona 10.0
  Extracto de levadura 3.0
  Cloruro de sodio 5.0 Suspender 58 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5
  Lactosa 10.0 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 2 o 3 minutos.
Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15
  Sacarosa 10.0 minutos. Secar la superficie del medio por unos minutos en la
  Rojo fenol 0.08 estufa.
  Verde brillante 0.0125
  Agar 20.0
pH final: 6.9 ± 0.2

Siembra
Sembrar en superficie por estriado a partir de una dilución del material a investigar o de un cultivo previo en un medio de enriquecimiento selectivo,
como Selenito caldo (B02-120-05) o Tetrationato caldo (B02-145-05).
Para el tratamiento de materia fecal se recomienda hacer cultivo primario en medios menos selectivos, como Salmonella Shigella agar (B02-138-05), o
Mac Conkey agar (B02-114-05).

Incubación
Incubar 24 horas a 35-37°C.

Resultados

Microorganismos Características de las colonias

Escherichia coli ATCC 25922 Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo
Salmonella typhi Crecimiento inhibido
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo
Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido

Características del medio

Medio preparado: verde.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 
x 100g :Código:  B02-124-05 x 500g :Código:  B02-124-06
Mac Conkey Agar.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias
que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y
la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción
en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

  Peptona 17.0
  Pluripeptona 3.0
  Lactosa 10.0 Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5
  Mezcla de sales biliares 1.5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir
  Cloruro de sodio 5.0 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C
  Agar 13.5 durante 15 minutos.
  Rojo neutro 0.03
  Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 ± 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.

Incubación
Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica

Resultados

Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

Características del medio

Medio preparado: rojo púrpura

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 
x 100g :Código:  B02-114-05 x 500g :Código:  B02-114-06
Thayer Martín Medio
Medio selectivo de Thayer-Martin para el aislamiento de neisserias patógenas.

Fundamento
Las dificultades que presenta la recuperación de N. gonorrhoeae y N. meningitidis de los materiales clínicos, se
deben a las exigencias nutricionales de estos microorganismos, y en los materiales de origen genital, oral o
anal, al desarrollo invasor de la abundante flora saprófita. El medio de Thayer-Martin permite el correcto
aislamiento y recuperación de las neisserias patógenas dentro de las 24 h, con una ausencia casi total de
contaminantes. El medio de cultivo se prepara a partir del Agar Base GC, con el agregado de hemoglobina, un
suplemento de enriquecimiento (Britalex) y una mezcla antimicrobiana (VCNT: Vancomicina, colistina, nistatina
y trimetoprima).

Composición

1. Agar Base GC:

Este medio de cultivo se emplea como medio basal para la preparación del medio Thayer Martin original o
modificado y agar chocolate con o sin enriquecimiento.

Fórmula (en gramos por litro)

  Pluripeptona 15.0

  Almidón soluble 1.0

  Fosfato dipotásico 4.0

  Fosfato monopotásico 1.0

  Cloruro de sodio 5.0

  Agar 15.0

  pH final: 7.2 ± 0.2

Presentación
x 100 g   Código: B02-157-05
x 500 g   Código: B02-157-06
3 frascos por 50 ml doble concentración, estéril y listo para usar

2. Hemoglobina:
Polvo preparado a partir de sangre vacuna. Este enriquecimiento también es adecuado para el cultivo de
Haemophilus Influenzae y estreptococos. Se recomienda preparar una solución acuosa al 2% para agregar el
agar base GC. Puede esterilizarse en autoclave, pero en tal caso no es adecuada para la observación de la
hemólisis bacteriana.

Presentación
x 100 g   Código: B01-003-05
x 500 g   Código: B01-003-06
3 frascos por 50 ml de solución estéril de hemoglobina al 2%

3. Britalex:
Suplemento estéril liofilizado usado para enriquecer los medios de cultivo, para el aislamiento de bacterias
nutricionalmente exigentes. Es particularmente recomendado para enriquecer el agar chocolate para el
aislamiento de N. gonorrhoeae, N. meningitidis y Haemophilus influenzae. Se lo utiliza a una concentración final
del 1% en el medio líquido o sólido. Se lo agrega asépticamente al medio esterilizado en el autoclave y enfriado
a 50°C.

  Vitamina B12 0.01

  L-Glutamina 10.0

  CIH Guanina 0.03

  Adenina 1.0

  Ac. p-aminobenzoico 0.013

  L-Cistina 1.1

  NAD (Coenzima I) 0.25

  Cocarboxilasa 0.1

  Nitrato férrico 0.02

  CIH Tiamina 0.003

  CIH Cisteína 25.9

  Glucosa 100.0

Presentación

3 frascos por 2 ml de britalex liofilizado B03-600-21

Disolver con 2,1 ml de solvente estéril. Conservar entre 2-10°C.

4. Mezcla antimicrobiana VCNT:

Se la utiliza en la preparación del medio T.M. como inhibidora de los organismos contaminantes. Cada ml de la
solución, agregado a 100 ml de medio de cultivo da una concentración final de:

  Vancomicina 3.0 µg/ml

  Colistina 7.5 µg/ml

  Nistatina 12.5 U/ml

  Trimetoprima 5.0 µg/ml

Presentación
3 frascos por 2 ml de vcnt en polvo. B03-605-21
Disolver con 2.1 ml de solvente estéril

Preparación
Medio Thayer Martin modificado listo para usar Fundir el contenido de un frasco de 50 ml de Agar Base GC
doble concentración y enfriarlo a 50°C. Reconstituir el Britalex y el VCNT con 2,1 ml de solvente cada uno.
Adicionar asépticamente la solución de hemoglobina, 1 ml de VCNT y 1 ml de BRITALEX a la base GC doble
concentración. Conservar el resto de VCNT y Britalex recién preparados en congelador (estable 15 días a
-20°C). Mezclar para homogeneizar. Distribuir unos 10 ml por placa y dejar solidificar. Las placas pueden
conservarse en heladera por 3 semanas, sin perder su potencia inhibidora.

Siembra
Sembrar inicialmente el material con hisopo o ansa sobre un tercio de la superficie de la placa, estriando el
resto de la superficie para obtener colonias aisladas.

Incubación
Incubar las placas a 35-36°C en recipientes con cierre hermético, en cámara húmeda y atmósfera de CO2,
durante 18 a 72 h. En la mayoría de los casos se obtiene un crecimiento precoz y abundante entre las 18 y las
24 h.

Identificación
Las colonias de gonococos y meningococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente opacas,
grisáceas, convexas, de 1-4 mm de diámetro. Luego de 48 h de incubación pueden transformarse en colonias
mucoides. Coloración de Gram: diplococos Gram negativos. Se sugiere proseguir con este esquema de
identificación.

C22°
Microorganismos T.M. T.M. A.N OXI GLU MAL
C
N. gonorrhoeae + + - - + + -

N. meningitidis + + - - + + +
Acinetobacter
- + + + - -* -
spp.
Neisseria spp. - + + + + V V

Moraxella spp - + V V + - -
Moraxella
(Branhamella) - + + + + - -
catarrhalis
T.M. medio Thayer Martin (CO2); A. Cho: Agar chocolate (CO2); A.N.: agar o caldo nutritivo; C22°C: desarrollo
a 22°C; OXI: oxidasa; GLU: fermentación de glucosa; MAL: fermentación de maltosa; + = reacción positiva; -
= reacción negativa; V = reacción variable. * La mayoría de las especies de Acinetobacter pueden usar glucosa
por la vía oxidativa.

Observaciones
No se recomienda el uso del medio selectivo T.M. para la siembra de LCR, ya que de estar presente, N.
gonorrhoeae y N. meningitidis u otras neisserias, será en cultivo puro. En tal caso, se recomienda agar
chocolate adicionado con Britalex.

Presentación de equipo Thayer-Martin

x 60 det     Código: B08-207-45

Salmonella Shigella Agar.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales
en los cuales se sospeche su presencia.

Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes
y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose
colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

  Pluripeptona 5.0
  Extracto de carne 5.0
  Lactosa 10.0
  Mezcla de sales biliares 8.5 Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5
  Citrato de sodio 8.5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullición
durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a
  Tiosulfato de sodio 8.5 45-50°C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del
  Citrato férrico 1.0 medio unos minutos en la estufa.
  Agar 13.5
  Verde brillante 0.00033
  Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 ± 0.2

Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).

Incubación
Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento

Características del medio

Medio preparado: rojo naranja.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Presentación 
x 100g :Código:  B02-138-05 X 500g :Código:  B02-138-06