FT Agar Sangre

Especialistas en medios de cultivo
Agar Sangre / Agar Gelosa Chocolate

USO
Agar Sangre es utilizado para el aislamiento, cultivo y actividad hemolítica de Estreptococos y otros
microorganismos fastidiosos.
Agar Gelosa Chocolate (GC), es un medio utilizado con varios suplementos para el aislamiento y cultivo de Neisseria
gonorrhoeae y otros microorganismos fastidiosos.
EXPLICACIÓN
Agar Sangre: Es un Agar Soya Tripticaseína (AST) que adicionado de sangre de carnero es un medio enriquecido,
que favorece las reacciones hemolíticas además de que proporciona factores de crecimiento, las peptonas proveen
la fuente de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos esenciales. El Cloruro de Sodio tiene la función del balance
osmótico y el Agar bacteriológico es incorporado como agente solidificante.
Agar GC: La Base de Agar GC es utilizada para preparar las placas de Agar Gelosa Chocolate suplementada con
hemoglobina al 1% que provee la hemina (Factor X) requerida para el crecimiento de Haemophilus y mejorar el
desarrollo de Neisseria, así como suplementos enriquecidos (disponibles comercialmente) que proveen
dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD), coenzimas, vitaminas, aminoácidos, dextrosa y otros factores
de crecimiento, todos ellos necesarios para el mejor desarrollo de Haemophilus y Neisseria.
En el medio la mezcla de peptonas proveen el nitrógeno, las vitaminas, el carbono y los aminoácidos esenciales
para el crecimiento. El almidón es agregado para absorber cualquier metabolito tóxico producido. Los fosfatos
actúan como sistema buffer. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar bacteriológico es adicionado
como agente solidificante.
FÓRMULA POR LITRO

Agar Sangre
Digerido Pancreático de Caseína 15.0 g Cloruro de Sodio 5.0 g

Peptona de Soya 5.0 g Agar Bacteriológico 15.0 g
Sangre de carnero desfibrinada 50.0 mL
pH 7.4 ± 0.2 a 25°C

Agar Gelosa Chocolate Especialistas en medios de cultivo
Mezcla de peptonas 15.0 g Fosfato dipotásico 4.0 g

Almidón de maíz 1.0 g Fosfato monopotásico 1.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g Agar bacteriológico 10.0 g
Hemoglobina 10.0 g Polienriquecimiento 10.0 mL
pH 7.2 ± 0.2 a 25°C
PREPARACIÓN
Método de preparación Agar Sangre
Suspender 40 gramos del medio en un litro de agua purificada. Mezclar y calentar con agitación suave hasta su
completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Dejar enfriar
a una temperatura entre 45-50 °C, adicionar asépticamente 50 mL de sangre de carnero desfibrinada estéril al
medio y vaciar en uno de los compartimentos de las placas dobles de Petri estériles.
Procedimiento
1. Sembrar las muestras de acuerdo a los procedimientos internos de laboratorio.
2. Incubar aeróbicamente o bajo condiciones de atmosfera parcial de CO 2, según los procedimientos
establecidos a 35± 2°C de 24 a 48 horas.
3. Los tipos de hemólisis que pueden presentarse son:
a. Alfa (α)-hemólisis: Es la reducción de hemoglobina a metahemoglobina en el medio que rodea a la
colonia; presentándose como una decoloración verdosa en el medio.
b. Beta (ß)-hemólisis: Es la lisis de los eritrocitos; presentándose como zonas claras alrededor de las
colonias.
c. Gama ()-hemólisis: Indica no hemólisis. No ocurre destrucción alguna de los eritrocitos y no hay
cambio en el medio.
d. Alfa prima (α’)-hemólisis: Se observa un pequeño halo de células intactas o parcialmente hemolisadas
adyacente a la colonia bacteriana, rodeada por una zona de hemólisis completa.
Método de preparación Agar Gelosa Chocolate
Suspender 7.2 gramos del medio en 100 mL de agua purificada para obtener una base de doble concentración,
mezclar y dejar reposar durante 5 minutos, calentar con agitación frecuente hasta completar la disolución del polvo
y hervir durante un minuto. Por otro lado, preparar 100 mL de una solución al 2% de hemoglobina seca para
obtener una solución uniforme. Esterilizar ambas soluciones en autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Enfriar las
soluciones a una temperatura de 45-50 °C, mezclar y agregar asépticamente 1º mL de polienriquecimiento.
Homogenizar y vaciar en uno de los compartimentos de las placas dobles de Petri estériles.
Procedimiento
Especialistas en medios de cultivo
1. Procesar las muestras de acuerdo a los procedimientos internos de laboratorio o normas aplicables.
2. Incubar en atmósfera aeróbica enriquecida con CO2 a 35 ± 2°C por 24 a 48 horas.
CARACTERÍSTICAS
El crecimiento, hemolisis y recuperación del Agar Sangre se describe en la siguiente tabla:
INOCULO % DE
MICROORGANISMOS ATCC CRECIMIENTO HEMOLISIS
cfu/mL RECUPERACIÓN
Streptococcus pyogenes 19615 Bueno Beta ≤ 100 ≥ 80%
Streptococcus pneumoniae 6305 Bueno Alfa ≤ 100 ≥ 80%
Staphylococcus aureus 25923 Bueno Beta ≤ 100 ≥ 80%
Escherichia coli 25922 Bueno - ≤ 100 ≥ 80%
El crecimiento característico colonial y recuperación del Agar Gelosa Chocolate se describe en la siguiente tabla:
CARACTERÍSTICAS DE LA INOCULO % DE
MICROORGANISMOS ATCC CRECIMIENTO COLONIA cfu/mL RECUPERACIÓN
Pequeñas, brillantes, el medio puede

Streptococcus pneumoniae 6305 Bueno ≤ 100 ≥80%
decolorarse a color verde.
Pequeñas, lisas, opacas, incoloras a
Neisseria gonorrhoeae 19424 Bueno ≤ 100 ≥80%
blanco grisáceo.
Neisseria meningitidis 13090 Bueno Medianas, opacas, gris azulado. ≤ 100 ≥80%
Pequeñas, húmedas color perla, con

Haemophilus influenzae 10211 Bueno ≤ 100 ≥80%
olor a “ratón”.
Streptococcus pyogenes 19615 Bueno Pequeñas, blancas a grises. ≤ 100 ≥80%
PRESENTACIÓN Y ALMACENAMIENTO
CAT. No PRESENTACIÓN ALMACENAMIENTO

7664 Medio preparado en Placa (Pqte/10 Placas con dos 2-8°C
divisiones)
BIBLIOGRAFÍA
1. Leavit., J.M. Naidorf and P. Shugaefsky. 1955. The undetected anaerobe in endodontic, a sensitive medium for detection of both Especialistas en medios de cultivo
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10. Spray, 1930. J. Lab. Clin. Med. 16:166.
11. Fortuna, 2008 Protocolo de Atención del paciente grave: Normas, procedimientos y guías de diagnóstico y tratamientos. Ed. Médica Panamericana. Págs.
482.

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FÓRMULA POR LITRO

Digerido Pancreático de Caseína 15.0 g Cloruro de Sodio 5.0 g

pH 7.4 ± 0.2 a 25°C

Mezcla de peptonas 15.0 g Fosfato dipotásico 4.0 g

pH 7.2 ± 0.2 a 25°C

Pequeñas, brillantes, el medio puede

Pequeñas, húmedas color perla, con

Streptococcus pyogenes 19615 Bueno Pequeñas, blancas a grises. ≤ 100 ≥80%

CAT. No PRESENTACIÓN ALMACENAMIENTO

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