UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

CATEDRA DE:
TCNICAS HISTOLGICAS

DOCENTE:
LIC. IVN PEAFIEL

GRUPO: N14
TERCER SEMESTRE

PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016

RIOBAMBA ECUADOR

[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES
GRUPO N-14

INTEGRANTES:

N1
2
3
4

APELLIDOS Y NOMBRES
Bonifaz Hidalgo Andrea Fernanda
Guaman Guaraca Wilmer Patricio
Ruiz Chasi Vanessa Michelle
Vela Padilla Jhonatan David

TEMA:

TIPOS DE DESCALCIFICADORES

N1

25%

50%

75%

PARTICIPACIN
100% Observacin
100% No hubo inconvenientes al
momento de hacer la
investigacin
100% No hubo inconvenientes al
momento de hacer la
investigacin
100% No hubo inconvenientes al
momento de hacer la
investigacin
100% No hubo inconvenientes al
momento de hacer la
investigacin

Cal. Docente

INTRODUCCIN
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HISTOPATOLOGICO

[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES
Se denomina decalcificacin a la completa eliminacin de las sales Calcio presentes en
los tejidos tras haber realizado su fijacin. ste procedimiento se realiza de forma
sistemtica sobre tejidos mineralizados (dientes y huesos= y espordicamente sobre
material anatomopatolgico con calcificaciones que puedan dificultar o impedir la
observacin al microscopio. Solo est desaconsejado decalcificar el tejido en las
enfermedades seas metablicas donde nos interesa valorar el equilibrio entre sntesis y
destruccin de matriz sea y su grado de calcificacin. En ste ltimo caso utilizaramos
un micrtomo motorizado especfico para tejidos duros.
Los tejidos que contienen elementos duros, como el tejido seo, no se pueden cortar. Se
deben eliminar las sales de carbono de calcio y el fosfato de calcio-flor de los huesos o
de los depsitos calcreos patolgicos.
Los tejidos se descalcifican con cido fuerte, de forma que el CO3H2 es eliminado de
sus sales y pasa a formar parte de una sal soluble.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

Conocer tipos de descalificadores que se utilizan en anatoma patolgica

para el ablandamiento de tejidos.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar las propiedades que deben tener un descalificador para el

procesamiento de tejidos.
Diferenciar las principales soluciones descalificadores y su composicin
para emplear realizar los cortes representativos.
Conocer el procedimiento para la descalcificacin de las piezas anatmica
que llega al laboratorio de anatoma patolgica.
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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES

MARCO TERICO
Decalcificacin qumica
Los principales agentes decalcificadotes estn formados por cidos fuertes o dbiles
empleados solos o en conjuncin a distintos lquidos fijadores.
Los principales reactivos que se utilizan son cidos inorgnicos fuertes como el cido
ntrico o el clorhdrico y dbiles como el cido sulfuroso y tambin cidos orgnicos
como el cido frmico el actico y el tricloroactico. Todas estas sustancias tiene la
ventaja de ser estables, baratas y de fcil disponibilidad.
Un lquido descalcificante ideal debe reunir una serie de cualidades. Estas cualidades
son las siguientes:
1. Debe producir una eliminacin completa de los depsitos clcicos.
2. No debe provocar efectos indeseables o artefactos sobre los tejidos tratados.
3. No interferir con los procedimientos de tincin que se emplean posteriormente.
El agente ms rpido y eficaz es el cido ntrico y se emplea en soluciones del 5 al
7.5%. El problema que tiene es que utilizado a concentracin elevada, por encima del
6% es que tiende a producir gran destruccin tisular que se atena en disolucin
alcohlica.
NORMAS

QUE

DEBEN

OBSERVARSE

DURANTE

EL

PROCESO

DE

DESCALSIFICACIN:
1. Para disminuir las alteraciones que se pueden producir los recalcificantes, la
fijacin debe haberse completado antes de iniciar el proceso.
2. La concentracin del descalcificante debe ser ptima, de manera que se alcance
el equilibrio entre la mayor rapidez de las disoluciones ms concentradas y el
menor efecto de alteracin tisular a consecuencia de las soluciones muy diluidas.
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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES
3. Se usara un volumen ptimo de lquido descalcificadora y ser renovado con
frecuencia.
4. Para acelerar el proceso, los bloques se suspendern en el centro del recipiente
de descalcificacin, pues en el fondo se acumula la mayor concentracin de
sales clcicas solubles.
5. La temperatura ser de 25C.
6. Para acelerar el proceso de descalcificacin qumica se realizaran lavados en
soluciones neutralizantes (agua corriente)
7. Es necesario un pre tratamiento de los cortes con solucin acuosa de carbonato
de litio al 1%, para asegurar la neutralizacin de los cidos empleados en la
descalcificacin.
RECOMENDACIONES PARA LA DESCALCIFICACIN
Cortar en pequeos fragmentos de mnimo grosor aunque la superficie sea
grande.
Se utiliza un cierra de mano de dientes muy fino.
Cambiar frecuentemente el descalcificador y detenerlo cuando sea completa la
presencia de Ca en solucin descalcificante.
El tipo de descalcificador se elige en funcin del volumen de la pieza y de la
cantidad de elementos que contiene; los huesos compactos y los corticales
precisan cidos fuertes (HCL, cido ntrico, cido sulfrico).

SOLUCIONES DESCALCIFICANTES

cido clorhdrico:

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No es tan rpido como el ntrico pero produce menor agresin tisular y no
precisa lavado post-decalcificacin.

Los cidos orgnicos:

Producen escasos artefactos titulares y apenas interfieren en los resultados finales de la

tincin pero actan muy lentamente y requieren la renovacin frecuente del lquido
descalcificante. Por eso estn indicados exclusivamente cuando la muestra es tejido
seo esponjoso y contiene solo pequeas espculas calcificadas.
En el proceso de decalcificacin hay que seguir unas normas que son:
1. Para disminuir en lo posible los efectos alterativos decalcificador, la fijacin debe
haberse completado antes de iniciar el proceso.
2. La concentracin del agente decalcificante debe ser ptima con un volumen de
lquido decalcificador mnimo de 1/20 que debe ser renovado con frecuencia.
3. Para acelerar el proceso los bloques deben ser suspendidos en el centro del recipiente
porque en el fondo se acumula mayor concentracin de sales clcicas.
4. La temperatura ideal para realizar la decalcificacin se encuentra en torno a los 25C.
Por encima de sta temperatura el proceso de decalcificacin se acelera pero tambin lo
hace el de descomposicin del tejido.
5. La agitacin suave ya sea manual o mecnica generalmente acelera el proceso.
6. A veces la adiccin de alguna resina de intercambio inico. Al medio de
decalcificacin acelera el proceso porque atrapa los iones de Calcio liberados por el
decalcificador qumico.
7. Despus de cualquier proceso de decalcificacin qumica donde se haya empleado
cido, el exceso de ste ltimo ha de ser eliminado mediante lavados en soluciones
neutralizantes, lo mejor el agua corriente. A veces para disminuir el edema en las fibras
colgenas, se da un lavado con una solucin de sulfato sdico al 5%.

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES
8. La coloracin de tejidos decalcificados puede ser interferida por un exceso residual
de los cidos empleados para eliminar las sales clcicas por este motivo a veces se
tratan los cortes con una solucin acuosa de carbonato de Litio al 1% para asegurar la
neutralizacin completa.
3. Soluciones descalcificantes ms usadas:

SOLUCIN ACUOSA DE ACIDO NITRICO:

Ac. Ntrico concentrado.5 mL

Agua destilada......95 mL
El caso de que la solucin sea alcohlica la proporcin de acido ntrico debe ser del
7.5%. El tiempo medio de decalcificacin para un bloque seo de 5mm de espesor es de
12 a 24 horas.
Ventajas:
1. provoca rpida decalcificacin
2. Causa baja retraccin tisular.
3. Mejor coloracin de los ncleos que la solucin de formol y ntrico
4. No es necesario neutralizar el agente decalcificante sino que puede pasar
directamente el tejido a etanol de 70 para iniciar la deshidratacin.
Inconvenientes:
1. La prolongacin excesiva del tiempo de decalcificacin suele anular la fijacin previa
y alterar progresivamente el tejido.

FORMULINA - CIDO NTRICO:

Formalina.10 mL
c. Ntrico concentrado10 mL
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Agua destilada...80 mL
Tiempo medio de calcificacin para un bloque de tejido seo de 5 mm de espesor es de
1 a 3 das.
Ventajas:
1. Es de accin relativamente rpida.
2. Provoca menos alteraciones titulares que la solucin acuosa de acido ntrico.
3. Por su facilidad de manejo es la solucin decalcificante ms utilizada para tcnicas
histolgicas de rutina.
Inconvenientes:
1. Dificulta la tincin nuclear
2. Antes de su procesamiento los tejidos requieren neutralizacin en sulfato sdico al
5% y un lavado posterior en agua corriente al menos durante 2 horas.

SOLUCIN ACUOSA DE CIDO FRMICO:

Acido frmico al 90%...................................................................................5-10 mL

Agua destilada.90-95 mL
Tiempo medio para un bloque seo de 5 mm de espesor es de 3 a 7 das.
Ventajas:
1. Fija y descalcifica simultneamente.
2. No dificulta demasiado la coloracin nuclear.
3. esta especialmente recomendado para decalcificar bien
Inconvenientes:
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1. Accin muy lenta.
2. Requiere neutralizacin previa a la inclusin en sulfato sdico al 5%
3. Lavado en agua posteriormente durante 18 horas.
Existen tambin soluciones fijadoras con poder decalcificante. Entre los ms utilizados
son los de los lquidos de Bouin, Bouin Hollander, y Zenker. Todo ellos poseen una
dbil capacidad decalcificadota por la cual se emplea casi exclusivamente como
decalcificantes de los cilindros bipsicos de medulas seas, estn constituidos sobre
todo por esponjosas y para eliminar pequeas calcificaciones distrficas.
Decalcificacin con quelantes qumicos
Los quelantes qumicos son sustancias capaces de combinarse con iones metlicos en
solucin o estabilizados en forma de sales o constituir nuevos compuestos generalmente
solubles en agua.
El quelante que se utiliza normalmente que es el cido etiln-dianinotetractico.
La sustraccin de iones clcicos que procura el EDTA se realiza de forma muy lenta
pero posee la ventaja de no inducir artefactos. Esta solucin se comercializa y se
prepara:
Sal disdica de EDTA.5.5 gr.
Formalina neutra al 10%................................................................................100.0 mL
El tiempo medio de decalcificacin para un bloque de 5mm de espesor de esponjosa
sea de 1 a 3 semanas y para un bloque de hueso cortical entre 6 y 8 semanas.
La decalcificacin qumica, puede acelerarse con el empleo de ultrasonidos. El mtodo
se fundamenta en someter el aumento una vez inmerso en la solucin decalcificacin a
la accin de ondas ultrasnicas en un bao lquido. De esta forma se induce una
vibracin molecular sobre el material calificado favorece la formacin de sales entre los
iones desprendidos y los cidos o querantes usados durante el proceso.

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Decalcificacin electroltica
Se basa en el empleo de una corriente elctrica para provocar la ionizacin de la
solucin salina o descalcificante en que se encuentra sumergido el tejido de esta manera
las sales insolubles de calcio presentes en el tejido son desplazadas hacia el electrodo
negativo y los radicales cidos hacia el polo electropositivo. Este proceso suele
realizarse entre 30 y 45C y para especmenes pequeos.
Se completa entre 45 y 60 minutos a pesar de las ventajas del procedimiento no se
utiliza de forma rutinario en la mayora de los laboratorios de anatoma patolgica.

Pruebas de control sobre el grado de decalcificacin tisular

El control exacto del tiempo ptimo de decalcificacin tisular es importante porque una
duracin mayor provoca maceracin y destruccin celular y un acortamiento provoca el
que no se puedan secciones microtmicas adecuadas. Por eso se precisan mecanismo de
control que permitan establecer el control en el que el proceso sea el completado.
Existen 3 tipos de mtodos:
1. Fsicos: que se basan en la experiencia del tcnico para detectar mediante el tacto el
grado de dureza y calcificacin tisular, Histolgicamente es muy subjetivo y puede
daar el tejido durante la manipulacin por lo cual no son aconsejables.
2. Radiolgicas: bastante sensibles pero requieren instrumento complejo y son costosos.
3. Qumicos: son normalmente de eleccin y se basan en la deteccin de iones clcicos
en el lquido de calcificante. Cuando en los sucesivos recambios de lquido dejan de
encontrarse iones clcicos se considera que el proceso ha finalizado.
La prueba ms utilizada es el Oxalato Clcico.
Decalcificacin de bloques titulares incluidos en parafina.

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Durante el proceso de corte de los bloques incluidos en parafina, aparecen a menudo
calcificaciones no detectadas.
En estos casos graves desperfectos en la cuchilla que pueden llegar a impedir que se
realicen las secciones necesarias. Este problema puede subsanarse sumergiendo el
bloque en lquido de PERENYI o en el cido frmico al 50%. Antes de realizar el corte
o bien empleando el mtodo de LENDRUM que consiste en exponer la superficie de
corte a la accin de una solucin de cido clorhdrico al 2% durante varias horas.
cido ntrico al 10%.....40 mL
Etanol absoluto.30 mL
cido crmico al 0.5% en agua destilada30 mL
Centrar inmediatamente antes de su uso, el tiempo medio de decalcificacin para un
bloque seo de 5 mm de espesor es de 2 a 6 das.
Ventajas:
Prepara adecuadamente la tincin nuclear.
Apenas provoca maceracin tisular.
No requiere neutralizacin previa a la intrusin tisular.
Inconvenientes:
1. Acta lentamente, por lo que no puede emplearse para trabajos de urgencia. (1)

CONCLUSIONES
Conocimos los diferentes tipos de descalificadores que se utilizan en el
laboratorio de anatoma patolgica para el procesamiento de tejidos.

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Cada uno de los descalificadores utilizados tienen sus propiedades con las
cuales ellos pueden realizar dicho proceso por lo cual deben tener
volmenes previamente indicados.
Reconocimos que para realizar la descalcificacin de una pieza anatmica
primero debe llegar bien fijada.
RECOMENDACIONES
Antes de aplicar la sustancia descalcificadora se debe conocer las
propiedades de la sustancia.
Se debe utilizar una cierra de mano de dientes finos
Tener en cuenta el tiempo en q se le deja en la solucin ya que esto puede
eliminar la fijacin previa.

BIBLIOGRAFA

SITIOS WEB
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1. http://html.rincondelvago.com/decalcificacion.html.

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