FLEX

Monoclonal Rabbit
Anti-Human
Cyclin D1
Clone EP12
Ready-to-Use
(Link)

English
Code IR083

Intended use For in vitro diagnostic use.

FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, Clone EP12, Ready-to-Use, (Link), is intended for use in
immunohistochemistry together with Autostainer Link instruments. Antibodies to Cyclin D1 are useful for the
identification of mantle cell lymphomas (1-3). The clinical interpretation of any staining or its absence should be
complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the
patient's clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist.

Synonyms for antigen PRAD-1, CCND1, Bcl-1 (1).

Summary Cyclin D1 is a 36 kDa protein encoded by the CCND1 (bcl-1) gene located on chromosome 11q13. Cyclin D1
and explanation associates with and activates cyclin-dependent kinases (CDKs) CDK4 and CDK6 (1,4,5). The protein functions
as a CDK-dependent regulator of the cell cycle by phosphorylating and inactivating the retinoblastoma protein,
thereby allowing for progression through the G1-S phase of the cell cycle (1,4,5). Cyclin D1 is also involved in cell
cycle or CDK-independent functions including associating with and regulation of a variety of transcription factors
and transcriptional coregulators. Cyclin D1 has also been shown to be involved in the regulation of cellular
metabolism, fat cell differentiation and cell migration (1,4,5). Cyclin D1 overexpression is associated with
tumorigenesis, and cyclin D1 amplification and/or overexpression have been demonstrated in a variety of human
tumors, including mantle cell lymphomas, breast carcinomas, head and neck squamous cell carcinomas and
esophageal cancers (1,6). Among lymphoid neoplasms a subset of chronic lymphocytic leukemia, small
lymphocytic lymphoma and multiple myeloma have been reported to express Cyclin D1. The following neoplasms
were reported to be negative for Cyclin D1: diffuse large B-cell lymphoma, extranodal marginal zone lymphoma
of MALT, follilcular lymphoma, marginal zone lymphoma, lymphoplasmacytic lymphoma (1T and 1B lineage),
extranodal NK/T-cell lymphoma, peripheral T-cell lymphoma, NOS, anaplastic large cell lymphoma, hodgkin
lymphoma (7, 8).

Refer to Dako’s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of
IHC procedures for: 1) Principle of Procedure, 2) Materials Required, Not Supplied, 3) Storage, 4) Specimen
Preparation, 5) Staining Procedure, 6) Quality Control, 7) Troubleshooting, 8) Interpretation of Staining,
9) General Limitations.

Reagent provided Ready-to-use monoclonal rabbit antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and
0.015 mol/L sodium azide.
Clone: EP12.

Immunogen Synthetic peptide corresponding to residues near the C-terminus of human cyclin D1.

Specificity In Western blotting of MCF7 cells lysates the antibody labels a major band of approximately 36 kD,
corresponding to the expected molecular weight of cyclin D1.

Precautions 1. For professional users.

2. This product contains sodium azide (NaN3), a chemical highly toxic in pure form. At product concentrations,
though not classified as hazardous, sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly
explosive build-ups of metal azides. Upon disposal, flush with large volumes of water to prevent metal azide
build-up in plumbing.
3. As with any product derived from biological sources, proper handling procedures should be used.
4. Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin.
5. Unused solution should be disposed of according to local, State and Federal regulations.

Storage Store at 2-8 °C. Do not use after expiration date s tamped on vial. If reagents are stored under any conditions
other than those specified, the conditions must be verified by the user. There are no obvious signs to indicate
instability of this product. Therefore, positive and negative controls should be run simultaneously with patient
specimens. If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures
and a problem with the antibody is suspected, contact Dako Technical Support.

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Specimen preparation The antibody can be used for labeling formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. Tissue specimens
including materials should be cut into sections of approximately 4 µm.
required but not Pre-treatment with heat-induced epitope retrieval (HIER) is required using Dako PT Link (Code PT100/PT101).
supplied For details, please refer to the PT Link User Guide. Optimal results are obtained by pretreating tissues using
EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Code K8000/K8004/K8023) for 20 minutes at 97°C
followed by 5 minutes in EnVision™ FLEX Wash Buffer (Code K8007).
Paraffin-embedded sections: Pre-treatment of formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections is recommended
using the 3-in-1 specimen preparation procedure for Dako PT Link. Follow the pre-treatment procedure outlined
in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Code K8000/K8004/K8023).
Note: After staining the sections must be dehydrated, cleared and mounted using permanent mounting medium.
The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining
procedure. For greater adherence of tissue sections to glass slides, the use of Dako Silanized Slides (Code
S3003) is recommended.

Staining procedure The recommended visualization system is EnVision FLEX, High pH, (Link) (Code K8000/K8023). The staining
including materials steps and incubation times are pre-programmed into the Autostainer Link software. The recommended reagent
required but not application volume is 1 x 200 µL or 2 x 150 µL per slide. Please refer to the proper Autostainer Link User Guide
supplied for detailed instructions on loading slides and reagents. If the protocols are not available on the used Autostainer
platform, please contact Dako Technical Services. An installer to update DakoLink software with protocol and
reagent information for Anti-Cyclin D1, Clone EP12 for Autostainer Link software can be found at
www.dako.com\Installer. All incubation steps should be performed at room temperature.
Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods, and should be determined by
each individual laboratory. If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity, incubation
times and the choice of EnVision FLEX Visualization System can be adjusted. A Dako Application
Specialist/Technical Service Specialist can be contacted for information on re-programming of the protocol. Verify
that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the
staining pattern described in “Performance characteristics”.
Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (Code K8008). Non-
aqueous, permanent mounting medium is recommended.
It is recommended that positive and negative controls be run simultaneously using the same protocol as the
patient specimens. The positive control tissue should include tonsil and the cells/structures should display
reaction patterns as described for this tissue in “Performance characteristics” in all positive specimens. The
recommended negative control reagent is FLEX Negative Control, Rabbit, (Link) (Code IR600).

Staining interpretation The cellular staining pattern is predominantly nuclear.

Performance Normal tissues: (9)

characteristics
Tissue Type (# tested) Positively Staining Tissue Elements
Adrenal (3) 1/3 Epithelial cells (<1%), nuclear
Bone marrow (3) 1/3 Myeloid cells (<1%), nuclear
Breast (2) 1/2 Ductal epithelial cells (<10%), nuclear
1/2 Ductal epithelial cells (<1%), nuclear
Cerebellum (3) 2/3 Astrocytes (<1%), nuclear
Cerebrum (3) 2/3 Rare positive cells (<1%), nuclear
Cervix (2) 1/2 Basal epithelial cells (10%), nuclear
1/2 Basal epithelial cells (40%), nuclear
Colon (3) 3/3 Epithelial cells (20-30%), nuclear, stromal cells (rare), nuclear
Esophagus (3) 3/3 Epithelial cells (20-30%), nuclear, stromal cells (rare), nuclear
Kidney (3) 1/3 Epithelial cells (<5%), nuclear
2/3 Epithelial cells (10-20%), nuclear
Liver (3) 1/3 Parenchymal epithelial cells (20%), nuclear
2/3 Parenchymal epithelial cells (<1%), nuclear
Lung (3) 1/3 Alveolar epithelial cells (30%)
2/3 Alveolar epithelial cells (10-20%)
Mesothelial cells (3) 0/3
Muscle, cardiac (3) 1/3 Cardiac muscle cells (<10%), nuclear, connective tissue and stromal cells
(<5%), nuclear
1/3 Connective tissue (<5%), nuclear
Muscle, skeletal (3) 0/3
Nerve, peripheral (3) 1/3 Mesenchymal epithelial cells (<1%), nuclear
1/3 Schwann cells (<5%), nuclear
Ovary (3) 2/3 Ovarian stromal cells (rare), nuclear
Pancreas (3) 3/3 Epithelial cells (25-30%), nuclear
Parathyroid (3) 1/3 Epithelial cells (<1%), nuclear
1/3 Epithelial cells (<5%), nuclear
1/3 Epithelial cells (30%), nuclear
Pituitary (3) 1/3 Epithelial cells, (<10%), nuclear
2/3 Epithelial cells, (40%), nuclear

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 Prostate (3) 1/3 Glandular epithelial cells and stromal cells (10%), nuclear
1/3 Glandular epithelial cells and stromal cells (<5%), nuclear
1/3 Glandular epithelial cells (<10%), stromal cells (<5%), nuclear
Salivary gland (3) 2/3 Glandular epithelial cells, (<5%), nuclear
1/3 Glandular epithelial cells, (10%), nuclear and cytoplasmic
Skin (3) 1/3 Squamous epithelial cells (30-40%), nuclear
1/3 Squamous epithelial cells (<5%), nuclear
Small intestine (3) 3/3 Crypt epithelial cells (40-50%), nuclear
Spleen (3) 1/3 Lymphocytes and littoral cells (10%), nuclear
2/3 Lymphocytes and littoral cells (5%), nuclear
Stomach (3) 2/3 Epithelial cells (<5%), nuclear
Testis (3) 3/3 Stromal cells (<1%), nuclear
Thymus (3) 3/3 Lymphoid cells (<1%), nuclear
Thyroid (3) 2/3 Follicular epithelial cells and stromal cells (<1%), nuclear
Tonsil (3) 3/3 Epithelial cells (30%), nuclear, lymphocytes (rare), nuclear
Uterus (3) 3/3 Endometrial epithelial cells and stromal cells(<5%) nuclear
Note: Positive staining of endothelial cells was observed in the majority of normal tissues tested.

Français
Réf. IR083
Utilisation prévue Pour utilisation diagnostique in vitro.
FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, Clone EP12, prêt à l’emploi (Link), est destiné à être utilisé en
immunohistochimie conjointement avec des instruments Autostainer Link. Les anticorps dirigés contre la
cycline D1 sont utiles pour l'identification des lymphomes du manteau (1-3). L'interprétation clinique de toute
coloration ou son absence doit être complétée par des études morphologiques en utilisant des contrôles
appropriés et doit être évaluée en fonction des antécédents cliniques du patient et d'autres tests diagnostiques
par un pathologiste qualifié.

Synonymes de PRAD-1, CCND1, Bcl-1 (1).

l'antigène

Résumé et explication La cycline D1 est une protéine de 36 kDa codée par le gène CCND1 (bcl-1) situé sur la bande chromosomique
11q13. La cycline D1 s'associe et active les kinases dépendantes des cyclines (Cyclin-Dependent Kinases, CDK)
CDK4 et CDK6 (1,4,5). La protéine fonctionne comme un régulateur du cycle cellulaire dépendant des CDK en
phosphorylant et en inactivant la protéine du rétinoblastome, permettant ainsi la progression à travers la phase
G1-S du cycle cellulaire (1,4,5). La cycline D1 est également impliquée dans le cycle cellulaire ou dans des
fonctions indépendantes des CDK, notamment l'association avec divers facteurs de transcription et co-
régulateurs transcriptionnels ainsi que la régulation desdits facteurs et co-régulateurs. Il a également été montré
que la cycline D1 est impliquée dans la régulation du métabolisme cellulaire, la différenciation des cellules
graisseuses et la migration cellulaire (1,4,5). La surexpression de la cycline D1 est associée à une tumorigenèse.
Une amplification et/ou une surexpression de la cycline D1 ont été mises en évidence dans diverses tumeurs
humaines, y compris les lymphomes du manteau, les carcinomes mammaires, les carcinomes spinocellulaires de
la tête et du cou et les cancers de l'œsophage (1,6). Parmi les néoplasmes lymphoïdes, il a été démontré qu’un
sous-ensemble comprenant la leucémie lymphocytique chronique, un petit lymphome lymphocytique et des
myélomes multiples expriment la cycline D1. Il a été aussi démontré que les néoplasmes suivants sont négatifs à
la cycline D1 : lymphome diffus à grandes cellules B, lymphome de la zone marginale extranodal du type MALT,
lymphome folliculaire, lymphome de la zone marginale, lymphome lymphoplasmocytique (lignées 1T et 1B),
lymphome à cellules NK/T extranodal, lymphome à cellules T périphérique, NOS, lymphome à grandes cellules
anaplasique, lymphome de Hodgkin (7, 8).
Se reporter aux « Instructions générales de coloration immunohistochimique » de Dako ou aux instructions du
système de détection relatives aux procédures IHC pour plus d'informations concernant les points suivants :
1) Principe de procédure, 2) Matériels requis mais non fournis, 3) Conservation, 4) Préparation des échantillons,
5) Procédure de coloration, 6) Contrôle qualité, 7) Dépannage, 8) Interprétation de la coloration, 9) Limites
générales.

Réactifs fournis Anticorps monoclonal de lapin prêt à l'emploi, fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une protéine
stabilisante et 0,015 mol/L d'azide de sodium.
Clone : EP12.

Immunogène Peptide de synthèse correspondant à des résidus à proximité de la partie C-terminale de la cycline D1 humaine.

Spécificité Par Western Blot de lysats de cellules MCF7, l'anticorps marque une bande principale d'environ 36 kDa
correspondant au poids moléculaire attendu de la cycline D1.

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Précautions 1. Pour utilisateurs professionnels.
2. Ce produit contient de l'azide de sodium (NaN3), un produit chimique hautement toxique sous sa forme
pure. Aux concentrations du produit, bien que non classé comme dangereux, l'azide de sodium peut réagir
avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d'azides métalliques hautement
explosifs. Lors de l'élimination, rincer abondamment à l'eau pour éviter toute accumulation d'azide
métallique dans les canalisations.
3. Comme avec tout produit d'origine biologique, des procédures de manipulation appropriées doivent être
respectées.
4. Porter un vêtement de protection approprié pour éviter le contact avec les yeux et la peau.
5. Les solutions non utilisées doivent être éliminées conformément aux réglementations locales et nationales.

Conservation Conserver entre 2 et 8 °C. Ne pas utiliser après la date de péremption imprimée sur le flacon. Si les réactifs sont
conservés dans des conditions autres que celles indiquées, celles-ci doivent être validées par l'utilisateur. Il n'y a
aucun signe évident indiquant l'instabilité de ce produit. Par conséquent, des contrôles positifs et négatifs doivent
être testés en même temps que les échantillons de patients. Si une coloration inattendue est observée, qui ne
peut être expliquée par des différences dans les procédures du laboratoire et si un problème lié à l'anticorps est
suspecté, contacter l'assistance technique de Dako.

Préparation des L'anticorps peut être utilisé pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fixés au formol. L'épaisseur
échantillons y compris des coupes d'échantillons de tissu doit être d'environ 4 µm.
le matériel requis mais Le prétraitement avec une restauration des épitopes par la chaleur (HIER) est nécessaire à l'aide du Dako PT Link
non fourni (Réf. PT100/PT101). Pour plus de détails, se reporter au Guide d'utilisation du PT Link. Des résultats optimaux sont
obtenus en prétraitant les tissus à l'aide de l'EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(Réf. K8000/K8004/K8023) pendant 20 minutes à 97 °C , suivies de 5 minutes dans de l'EnVision™ FLEX Wash Buffer
(Réf. K8007).
Coupes incluses en paraffine : Le prétraitement des coupes de tissus fixés au formol et inclus en paraffine est
recommandé à l'aide de la procédure 3 en 1 de préparation de l'échantillon pour Dako PT Link. Suivre la procédure de
prétraitement indiquée dans la notice de l'EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(Réf. K8000/K8004/K8023). Remarque : Après la coloration, les sections doivent être déshydratées, éclaircies et
montées à l'aide d'un milieu de montage permanent.
Les coupes de tissus ne doivent pas sécher lors du traitement ni lors de la procédure de coloration
immunohistochimique qui suit. Pour une meilleure adhérence des coupes de tissus sur les lames de verre, il est
recommandé d'utiliser des lames Dako Silanized Slides (Réf. S3003).

Procédure de Le système de visualisation recommandé est l'EnVision FLEX, High pH (Link) (Réf. K8000/K8023). Les étapes
coloration y compris le de coloration et les temps d'incubation sont préprogrammés dans le logiciel Autostainer Link. Le volume de
matériel requis mais réactif recommandé est le suivant : 1 x 200 µL ou 2 x 150 µL par lame. Se référer au Guide d'utilisation de
non fourni l'Autostainer Link correspondant pour plus de détails sur le chargement des lames et des réactifs. Si les
protocoles ne sont pas disponibles sur la plate-forme Autostainer utilisée, contacter le service technique de
Dako. Un assistant d'installation permettant de mettre à jour le logiciel DakoLink avec des informations de
réactifs et de protocole pour l'Anti-Cyclin D1, Clone EP12 pour le logiciel Autostainer Link est disponible à
l'adresse suivante : www.dako.com/Installer. Toutes les étapes d'incubation doivent être effectuées à
température ambiante.
Les conditions optimales peuvent varier en fonction du prélèvement et des méthodes de préparation. Elles
doivent être déterminées par chaque laboratoire individuellement. Si le pathologiste qui réalise l'évaluation
souhaite une intensité de coloration différente, les délais d'incubation et le choix du système
EnVision FLEX Visualization System peuvent être ajustés. Un spécialiste technicien Dako peut être contacté
pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole. Vérifier que l'exécution du protocole modifié
est toujours valide en s'assurant que le schéma de coloration est identique au schéma de coloration décrit dans
les « Caractéristiques de performance ».
Il est recommandé d'effectuer une contre-coloration dans de l'hématoxyline à l'aide d'EnVision FLEX Hematoxylin (Link)
(Réf. K8008). L'utilisation d'un milieu de montage permanent non aqueux est recommandée.
Il est recommandé de procéder à des contrôles positifs et négatifs en même temps et avec le même protocole
que les échantillons du patient. Le tissu de contrôle positif doit comprendre l'amygdale et les cellules/structures
doivent présenter des schémas de réaction semblables à ceux décrits pour ce tissu à la section
« Caractéristiques de performance » pour tous les échantillons positifs. Le réactif de contrôle négatif
recommandé est le FLEX Negative Control, Rabbit (Link) (Réf. IR600).

Interprétation de la Le schéma des coloration cellulaire est essentiellement nucléaire.

coloration

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Caractéristiques de Tissus sains : (9)
performance
Type de tissus Éléments tissulaires colorés positivement
(nombre testé)
Amygdale (3) 3/3 : cellules épithéliales (30 %), noyau, lymphocytes (rares), noyau
Cellules mésothéliales (3) 0/3
Cerveau (3) 2/3 : rares cellules positives (< 1 %), noyau
Cervelet (3) 2/3 : astrocytes (< 1 %), noyau
Col de l'utérus (2) 1/2 : cellules épithéliales basales (10 %), noyau
1/2 : cellules épithéliales basales (40 %), noyau
Côlon (3) 3/3 : cellules épithéliales (20-30 %), noyau, cellules stromales (rares), noyau
Estomac (3) 2/3 : cellules épithéliales (< 5 %), noyau
Foie (3) 1/3 : cellules épithéliales parenchymateuses (20 %), noyau
2/3 : cellules épithéliales parenchymateuses (< 1 %), noyau
Glande salivaire (3) 2/3 : cellules épithéliales glandulaires (< 5 %), noyau
1/3 : cellules épithéliales glandulaires (10 %), noyau et cytoplasme
Hypophyse (3) 1/3 : cellules épithéliales (< 10 %), noyau
2/3 : cellules épithéliales (40 %), noyau
Intestin grêle (3) 3/3 : cellules épithéliales de la crypte (40-50 %), noyau
Moelle osseuse (3) 1/3 : cellules myéloïdes (< 1 %), noyau
Muscle, cardiaque (3) 1/3 : cellules musculaires cardiaques (< 10 %), noyau, tissu conjonctif et cellules
stromales (< 5 %), noyau
1/3 : tissu conjonctif (< 5 %), noyau
0/3
Nerf périphérique (3) 1/3 : cellules épithéliales mésenchymateuses (< 1 %), noyau
1/3 : cellules de Schwann (< 5 %), noyau
Œsophage (3) 3/3 : cellules épithéliales (20-30 %), noyau, cellules stromales (rares), noyau
Ovaire (3) 2/3 : cellules stromales ovariennes (rares), noyau
Pancréas (3) 3/3 : cellules épithéliales (25-30 %), noyau
Parathyroïde (3) 1/3 : cellules épithéliales (< 1 %), noyau
1/3 : cellules épithéliales (< 5 %), noyau
1/3 : cellules épithéliales (30 %), noyau
Peau (3) 1/3 : cellules épithéliales squameuses (30-40 %), noyau
1/3 : cellules épithéliales squameuses (< 5 %), noyau
Poumon (3) 1/3 : cellules épithéliales alvéolaires (30 %)
2/3 : cellules épithéliales alvéolaires (10-20 %)
Prostate (3) 1/3 : cellules épithéliales glandulaires et cellules stromales (10 %), noyau
1/3 : cellules épithéliales glandulaires et cellules stromales (< 5 %), noyau
1/3 : cellules épithéliales glandulaires (< 10 %), cellules stromales (< 5 %),
noyau
Rate (3) 1/3 : lymphocytes et cellules littorales (10 %), noyau
2/3 : lymphocytes et cellules littorales (5 %), noyau
Rein (3) 1/3 : cellules épithéliales (< 5 %), noyau
2/3 : cellules épithéliales (10-20 %), noyau
Sein (2) 1/2 : cellules épithéliales canalaires (< 10 %), noyau
1/2 : cellules épithéliales canalaires (< 1 %), noyau
Surrénale (3) 1/3 : cellules épithéliales (< 1 %), noyau
Testicule (3) 3/3 : cellules stromales (< 1 %), noyau
Thymus (3) 3/3 : cellules lymphoïdes (< 1 %), noyau
Thyroïde (3) 2/3 : cellules épithéliales folliculaires et cellules stromales (< 1 %), noyau
Utérus (3) 3/3 : cellules épithéliales de l'endomètre et cellules stromales (< 5 %), noyau
Remarque : Une coloration positive des cellules endothéliales a été observée sur la majorité des tissus sains testés.

Deutsch
Code-Nr. IR083
Verwendungszweck Zur In-vitro-Diagnostik.
FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, Klon EP12, Ready-to-Use, (Link), ist zur Verwendung mit den
Geräten Autostainer Link in der Immunhistochemie bestimmt. Antikörper gegen Cyclin D1 dienen zur
Identifikation von Mantelzelllymphomen (1–3). Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden Färbung
sollte durch morphologische Untersuchungen mit geeigneten Kontrollen ergänzt und von einem qualifizierten
Pathologen unter Berücksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten
vorgenommen werden.

Synonyme für das PRAD-1, CCND1, Bcl-1 (1).

Antigen

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Zusammenfassung Cyclin D1 ist ein 36-kDa-Protein, das durch das Gen CCND1 (bcl-1) kodiert ist, welches auf Chromosom 11q13
und Erklärung liegt. Cyclin D1 verbindet sich mit den cyclinabhängigen Kinasen (CDKs) CDK4 und CDK6 und aktiviert diese
(1,4,5). Das Protein fungiert als CDK-abhängiger Regulator des Zellzyklus, indem es das Retinoblastom-Protein
phosphoryliert und deaktiviert und dadurch die Progression durch die G1-S-Phase des Zellzyklus ermöglicht
(1,4,5). Cyclin D1 ist auch an Zellzyklus- oder CDK-unabhängigen Prozessen beteiligt, unter anderem an der
Verbindung mit und Regulierung von verschiedenen Transkriptionsfaktoren und Transkriptionskoregulatoren. Es
hat sich gezeigt, dass Cyclin D1 auch an der Regulierung des Zellmetabolismus, der Fettzellendifferenzierung
und der Zellmigration beteiligt ist (1,4,5). Die Überexpression von Cyclin D1 wird mit der Tumorentstehung in
Verbindung gebracht, und Cyclin-D1-Amplifizierung und/oder -Überexpression wurde in verschiedenen
menschlichen Tumoren nachgewiesen, darunter Mantelzelllymphome, Brustkarzinome, Plattenzellkarzinome an
Kopf und Hals sowie Speiseröhrenkrebs (1,6). Unter den lymphoiden Neoplasmen wurde für eine Untergruppe
von chronischer lymphatischer Leukämie, kleinzelligem lymphozytischen Lymphom und multiplem Myelom eine
Expression von Cyclin D1 berichtet. Die folgenden Neoplasmen wurden als negativ für Cyclin D1 berichtet:
diffuses Groß-B-Zelllymphom, extranodales Marginalzonenlymphom von MALT, follikuläres Lymphom,
Marginalzonenlymphom , lymphoplasmazytisches Lymphom (1T- und 1B-Linie), extranodales NK/T-Zell-
Lymphom, peripheres T-Zelllymphom, NOS, anaplastisches Großzell-Lymphom, Hodgkin-Lymphom (7, 8).

Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen Färbung von Dako oder den
Anweisungen des Detektionssystems für IHC-Verfahren entnehmen: 1) Verfahrensprinzip, 2) Erforderliche, aber
nicht mitgelieferte Materialien, 3) Aufbewahrung, 4) Vorbereitung der Probe, 5) Färbeverfahren,
6) Qualitätskontrolle, 7) Fehlersuche und -behebung, 8) Auswertung der Färbung, 9) Allgemeine
Beschränkungen.

Geliefertes Reagenz Gebrauchsfertiger, monoklonaler Kaninchen-Antikörper in flüssiger Form in einem Puffer, der stabilisierendes
Protein und 0,015 mol/L Natriumazid enthält.
Klon: EP12.

Immunogen Synthetisches Peptid, das Rückständen nahe dem C-Terminus von humanem Cyclin D1 entspricht.

Spezifität Beim Western-Blot von MCF7-Zelllysaten markiert der Antikörper eine starke Bande bei ungefähr 36 kDa, was
mit dem erwarteten Molekulargewicht von Cyclin D1 übereinstimmt.

Vorsichtsmaßnahmen 1. Für Fachpersonal.

2. Dieses Produkt enthält Natriumazid (NaN3), eine in reiner Form äußerst giftige Chemikalie. Natriumazid
kann auch in als ungefährlich eingestuften Konzentrationen mit Blei- und Kupferrohren reagieren und
hochexplosive Metallazide bilden. Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachspülen, um
Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen.
3. Wie alle Produkte biologischen Ursprungs müssen auch diese entsprechend gehandhabt werden.
4. Geeignete Schutzkleidung tragen, um Augen- und Hautkontakt zu vermeiden.
5. Nicht verwendete Lösung ist entsprechend den einschlägigen gesetzlichen Regelungen von Bund, Ländern
und Gemeinden zu entsorgen.

Lagerung Bei 2–8 °C aufbewahren. Nach Ablauf des auf dem Flä schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden.
Werden die Reagenzien nicht entsprechend den angegebenen Bedingungen aufbewahrt, müssen die Bedingungen
vom Anwender geprüft werden. Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen für eine eventuelle Produktinstabilität.
Positiv- und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden. Falls es zu
einer unerwarteten Färbung kommt, die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erklären lässt und auf ein
Problem mit dem Antikörper hindeutet, ist der technische Kundendienst von Dako zu verständigen.

Vorbereitung der Probe Der Antikörper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten.
und erforderliche, aber Gewebeproben sollten in Schnitte von ca. 4 µm Stärke geschnitten werden.
nicht mitgelieferte Es ist eine Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung (HIER-Verfahren) mit dem Dako PT Link
Materialien (Code-Nr. PT100/PT101) erforderlich. Weitere Informationen hierzu siehe PT Link-Benutzerhandbuch. Optimale
Ergebnisse können erzielt werden durch 20-minütige Vorbehandlung der Gewebe bei 97 °C mit
EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Code-Nr. K8000/K8004/K8023), gefolgt von 5 Minuten
in EnVision™ FLEX Wash Buffer (Code-Nr. K8007).
Paraffineingebettete Schnitte: Die Vorbehandlung der formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit
dem 3-in-1-Probenvorbereitungsverfahren für Dako PT Link wird empfohlen. Vorbehandlung gemäß der
Beschreibung in der Packungsbeilage für EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(Code-Nr. K8000/K8004/K8023) durchführen. Hinweis: Nach dem Färben müssen die Schnitte dehydriert, geklärt
und mit permanentem Einbettmedium auf den Objektträger aufgebracht werden.
Die Gewebeschnitte dürfen während der Behandlung oder des anschließenden immunhistochemischen
Färbeverfahrens nicht austrocknen. Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjektträgern wird die
Verwendung von Dako Silanized Slides (Code-Nr. S3003) empfohlen.

Färbeverfahren und Als Visualisierungssystem wird EnVision FLEX, High pH, (Link) (Code-Nr. K8000/K8023) empfohlen. Die
erforderliche, aber Färbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Autostainer Link-Software vorprogrammiert. Das empfohlene
nicht mitgelieferte Reagenzvolumen beträgt 1 x 200 µL oder 2 x 150 µL pro Objektträger. Detaillierte Anweisungen zum Laden der
Materialien Objektträger und Reagenzien bitte dem Benutzerhandbuch zum Autostainer Link entnehmen. Wenn die
Protokolle auf der verwendeten Autostainer-Plattform nicht verfügbar sind, bitte den technischen Kundendienst

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 von Dako verständigen. Ein Installationsprogramm zur Aktualisierung der DakoLink-Software mit Protokoll- und
Reagenzinformationen für Anti-Cyclin D1, Klon EP12 für die Autostainer Link-Software steht unter
www.dako.com/Installer zum Download zur Verfügung. Alle Inkubationsschritte sollten bei Zimmertemperatur
durchgeführt werden.
Optimale Bedingungen können je nach Probe und Präparationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom
jeweiligen Labor selbst ermittelt werden. Falls der beurteilende Pathologe eine andere Färbungsintensität wünscht,
können die Inkubationszeiten und die Optionen für EnVision FLEX Visualization System angepasst werden. Ein
Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako kann Ihnen Informationen über die
Neuprogrammierung des Protokolls geben. Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden, indem
überprüft wird, ob das Färbemuster mit dem unter „Leistungsmerkmale“ beschriebenen Färbemuster identisch ist.
Die Gegenfärbung in Hämatoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (Code-Nr. K8008) ausgeführt
werden. Empfohlen wird ein nichtwässriges, permanentes Fixiermittel.
Es wird empfohlen, Positiv- und Negativkontrollen zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die
Patientenproben zu testen. Als positive Kontrolle sollte Mandelgewebe verwendet werden, und die Zellen/Strukturen
müssen in allen positiven Proben die für dieses Gewebe unter „Leistungsmerkmale“ beschriebenen Reaktionsmuster
aufweisen. Als Negativkontrolle wird FLEX Negative Control, Rabbit, (Link) (Code-Nr. IR600) empfohlen.

Auswertung der Das zelluläre Färbemuster ist überwiegend nukleär.

Färbung

Leistungsmerkmale Gesunde Gewebe: (9)

Gewebetyp (Anz. getestet) Gewebeelemente mit positiver Färbung

Brust (2) 1 von 2 duktalen Epithelzellen (<10 %), nukleär
1 von 2 duktalen Epithelzellen (<1 %), nukleär
Darm (3) 3 von 3 Epithelzellen (20–30 %), nukleär, Stromazellen (selten), nukleär
Dünndarm (3) 3 von 3 Kryptenepithelzellen (40–50 %), nukleär
Eierstock (3) 2 von 3 ovarielle Stromazellen (selten), nukleär
Haut (3) 1 von 3 Plattenepithelzellen (30–40 %), nukleär
1 von 3 Plattenepithelzellen (<5 %), nukleär
Herzmuskel (3) 1 von 3 Herzmuskelzellen (<10 %), nukleär, Bindegewebe und Stromazellen
(<5 %), nukleär
1 von 3 Bindegewebszellen (<5 %), nukleär
Hoden (3) 3 von 3 Stromazellen (<1 %), nukleär
Hypophyse (3) 1 von 3 Epithelzellen (<10 %), nukleär
2 von 3 Epithelzellen (40 %), nukleär
Knochenmark (3) 1 von 3 Myeloidzellen (<1 %), nukleär
Leber (3) 1 von 3 parenchymalen Epithelzellen (20 %), nukleär
2 von 3 parenchymalen Epithelzellen (<1 %), nukleär
Lunge (3) 1 von 3 alveolaren Epithelzellen (30 %)
2 von 3 alveolaren Epithelzellen (10–20 %)
Magen (3) 2 von 3 Epithelzellen (<5 %), nukleär
Mandel (3) 3 von 3 Epithelzellen (30 %), nukleär, Lymphozyten (selten), nukleär
Mesothelzellen (3) 0 von 3
Milz (3) 1 von 3 Lymphozyten und wandständigen Zellen (10 %), nukleär
2 von 3 Lymphozyten und wandständigen Zellen (5 %), nukleär
Nebennieren (3) 1 von 3 Epithelzellen (<1 %), nukleär
Nebenschilddrüse (3) 1 von 3 Epithelzellen (<1 %), nukleär
1 von 3 Epithelzellen (<5 %), nukleär
1 von 3 Epithelzellen (30 %), nukleär
Nerv, peripher (3) 1 von 3 mesenchymale Epithelzellen (<1 %), nukleär
1 von 3 Schwann-Zellen (<5 %), nukleär
Niere (3) 1 von 3 Epithelzellen (<5 %), nukleär
2 von 3 Epithelzellen (10–20 %), nukleär
Pankreas (3) 3 von 3 Epithelzellen (25–30 %), nukleär
Prostata (3) 1 von 3 Drüsenepithelzellen und Stromazellen (10 %), nukleär
1 von 3 Drüsenepithelzellen und Stromazellen (<5 %), nukleär
1 von 3 Drüsenepithelzellen (<10 %), Stromazellen (<5 %), nukleär
Schilddrüse (3) 2 von 3 Follikelepithelzellen und Stromazellen (<1 %), nukleär
Skelettmuskulatur (3) 0 von 3
Speicheldrüsen (3) 2 von 3 Drüsenepithelzellen (<5 %), nukleär
1 von 3 Drüsenepithelzellen (10 %), nukleär und zytoplasmatisch
Speiseröhre (3) 3 von 3 Epithelzellen (20–30 %), nukleär, Stromazellen (selten), nukleär
Thymus (3) 3 von 3 lymphoide Zellen (<1 %), nukleär
Uterus (3) 3 von 3 endometrialen Epithelzellen und Stromazellen (<5 %), nukleär
Zerebellum (3) 2 von 3 Astrozyten (<1 %), nukleär
Zerebrum (3) 2 von 3 selten positive Zellen (<1 %), nukleär
Zervix (2) 1 von 2 Basalepithelzellen (10 %), nukleär
1 von 2 Basalepithelzellen (40 %), nukleär
Hinweis: Eine positive Färbung von Endothelzellen wurde bei der Mehrheit der getesteten Proben von gesundem
Gewebe beobachtet.

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comparative study between a novel category of immunoreagents and the corresponding mouse monoclonal
antibodies. Am J Clin Pathol 2005;124:1-8.
9. M3642 (IHC003-D03559).

ENGLISH:
Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, Clone EP12 has been created by Epitomics Inc., using Epitomics’
proprietary rabbit monoclonal antibody technology covered under Patent No.’s 5,675,063 and 7,402,409.

FRANÇAIS :
Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, Clone EP12, a été créé par Epitomics Inc., en utilisant la technologie
exclusive d'anticorps monoclonal de lapin d'Epitomics couverte par les numéros de brevet suivants : 5,675,063 et
7,402,409.

DEUTSCH:
Monoclonal Rabbit Anti-Human Cyclin D1, Klon EP12 wurde von Epitomics Inc. unter Verwendung proprietärer
Technologie mit monoklonalen Kaninchen-Antikörpern entwickelt und ist durch die Patente Nr. 5,675,063 und
7,402,409 geschützt.

Edition 05/11

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