BIOQUIMICA - HARPER

Director editorial: Javier de León Fraga Editor Sponsor: Gabriel Romero Hernández Supervisor de edición: Manuel Bernal Pérez Corrección de estilo: Luis A. Leñero Leal Supervisor de producción: José Luis González Huerta NOTA La medicina es una ciencia en constante desarrollo. Conforme surjan nuevos conocimientos, se requerirán cambios de la terapéutica. El (los) autor(es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosificación medicamentosa sean precisos y acordes con lo establecido en la fecha de publicación. Sin embargo, ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina, ni los editores ni cualquier otra persona que haya participado en la preparación de la obra garantizan que la información contenida en ella sea precisa o completa, tampoco son responsables de errores u omisiones, ni de los resultados que con dicha información se obtengan. Convendría recurrir a otras fuentes de datos, por ejemplo, y de manera particular, habrá que consultar la hoja informativa que se adjunta con cada medicamento, para tener certeza de que la información de esta obra es precisa y no se han introducido cambios en la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administración. Esto es de particular importancia con respecto a fármacos nuevos o de uso no frecuente. También deberá consultarse a los laboratorios para recabar información sobre los valores normales. HARPER. BIOQUÍMICA ILUSTRADA Prohibida la reproducción total o parcial de esta obra, por cualquier medio, sin autorización escrita del editor. DERECHOS RESERVADOS © 2010, respecto a la primera edición en español, por McGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES, S.A. de C.V. A subsidiary of The McGraw-Hill Companies, Inc. Prolongación Paseo de la Reforma 1015, Torre A, Piso 17, Col. Desarrollo Santa Fe, Delegación Álvaro Obregón C.P. 01376, México, D.F. Miembro de la Cámara Nacional de la Industria Editorial Mexicana, Reg. Núm. 736 ISBN: 978-607-15-0304-6 Translated from the twenty-eight English edition of: Harperʼs Illustrated Biochemistry Copyright © 2009 by McGraw-Hill Companies, Inc. Previous editions copyright © 2006, 2003, The McGraw-Hill Companies, Inc.; 2000, 1996, 1993, 1990 by Appleton & Lange; copyright © 1988 by Lange Medical Publications. All Rights Reserved ISBN: 978-0-07-162591-3 1234567890 Impreso en China 00 Preliminares.indd 2 109876543210 Printed in China 30/11/09 12:32:23 Contenido Prefacio ix 1. Bioquímica y medicina Robert K. Murray, MD, PhD 1 2. Agua y pH Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 6 S E C C I Ó N I ESTRUCTURAS Y FUNCIONES DE PROTEÍNAS Y ENZIMAS 14 S E C C I Ó N II BIOENERGÉTICA Y EL METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y LÍPIDOS 92 11. Bioenergética: la función del ATP Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 92 3. Aminoácidos y péptidos 12. Oxidación biológica 4. Proteínas: determinación de la estructura 13. Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 14 primaria Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 21 5. Proteínas: órdenes de estructura superiores Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 31 6. Proteínas: mioglobina y hemoglobina Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 43 7. Enzimas: mecanismo de acción Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 51 8. Enzimas: cinética Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 62 9. Enzimas: regulación de actividades Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 75 10. Bioinformática y biología computacional Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 98 Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 103 14. Carbohidratos importantes desde el punto de vista fisiológico David A. Bender, PhD 113 15. Lípidos de importancia fisiológica Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 121 16. Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos David A. Bender, PhD 131 17. El ciclo del ácido cítrico: el catabolismo de la acetil-CoA David A. Bender, PhD 143 18. Glucólisis y la oxidación de piruvato David A. Bender, PhD 149 19. Metabolismo del glucógeno David A. Bender, PhD 157 Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD 84 vii 00 Preliminares.indd 7 27/11/09 12:19:48 viii CONTENIDO 20. Gluconeogénesis y el control de la glucosa en la sangre David A. Bender, PhD 165 21. La vía de pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de hexosas David A. Bender, PhD 174 22. Oxidación de ácidos grasos: cetogénesis Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 184 23. Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 193 24. Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 205 25. Transporte y almacenamiento de lípidos Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 212 26. Síntesis, transporte y excreción de colesterol Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc 224 S E C C I Ó N III METABOLISMO DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS 234 27. Biosíntesis de los aminoácidos no esenciales desde el punto de vista nutricional Victor W. Rodwell, PhD 234 28. Catabolismo de proteínas y de nitrógeno de aminoácidos Victor W. Rodwell, PhD 239 29. Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos Victor W. Rodwell, PhD 248 30. Conversión de aminoácidos en productos especializados Victor W. Rodwell, PhD 262 S E C C I Ó N IV ESTRUCTURA, FUNCIÓN Y REPLICACIÓN DE MACROMOLÉCULAS INFORMACIONALES 285 32. Nucleótidos Victor W. Rodwell, PhD 285 33. Metabolismo de nucleótidos, purina y pirimidina Victor W. Rodwell, PhD 292 34. Estructura y función del ácido nucleico P. Anthony Weil, PhD 302 35. Organización, replicación y reparación de DNA P. Anthony Weil, PhD 312 36. Síntesis, procesamiento y modificación del RNA P. Anthony Weil, PhD 335 37. Síntesis de proteínas y el código genético P. Anthony Weil, PhD 353 38. Regulación de la expresión génica P. Anthony Weil, PhD 369 39. Genética molecular, DNA recombinante y tecnología genómica P. Anthony Weil, PhD 388 S E C C I Ó N V BIOQUÍMICA DE LA COMUNICACIÓN EXTRACELULAR E INTRACELULAR 406 40. Membranas: estructura y función Robert K. Murray, MD, PhD y Daryl K. Granner, MD 406 41. La diversidad del sistema endocrino P. Anthony Weil, PhD 425 42. Acción hormonal y transducción de señal P. Anthony Weil, PhD 444 31. Porfirinas y pigmentos biliares Robert K. Murray, MD, PhD 271 00 Preliminares.indd 8 27/11/09 12:19:49 CONTENIDO S E C C I Ó N VI TEMAS ESPECIALES 50. Proteínas plasmáticas e inmunoglobulinas 459 43. Nutrición, digestión y absorción David A. Bender, PhD 459 Robert K. Murray, MD, PhD 566 51. Hemostasia y trombosis Peter L. Gross, MD, Robert K. Murray, MD, PhD y Margaret L. Rand, PhD 583 44. Micronutrientes: vitaminas y minerales 52. Eritrocitos y leucocitos 45. Radicales libres y nutrientes antioxidantes 53. Metabolismo de xenobióticos 46. Tráfico y distribución intracelulares de proteínas 54. Historias de caso bioquímicas David A. Bender, PhD David A. Bender, PhD ix 467 482 Robert K. Murray, MD, PhD 487 47. Glucoproteínas Robert K. Murray, MD, PhD 506 48. La matriz extracelular Robert K. Murray, MD, PhD y Frederick W. Keeley, PhD 527 Robert K. Murray, MD, PhD Robert K. Murray, MD, PhD 593 609 Robert K. Murray, MD, PhD y Peter L. Gross, MD 616 Apéndice I Apéndice II 647 648 Índice alfabético 651 49. Músculo y el citoesqueleto Robert K. Murray, MD, PhD 545 00 Preliminares.indd 9 27/11/09 12:19:49 c Bioquímica y medicina Robert K. Murray, MD, PhD INTRODUCCIÓN La bioquímica puede definirse como la ciencia de la base química de la vida (del griego bios, “vida”). La célula es la unidad estructural de los sistemas vivos. De este modo, también es factible describir a la bioquímica como la ciencia de los constituyentes químicos de las células vivas, y de las reacciones y los procesos que experimentan. Mediante esta definición, la bioquímica abarca grandes áreas de la biología celular, la biología molecular y la genética molecular. El objetivo de la bioquímica es describir y explicar, en términos moleculares, todos los procesos químicos de las células vivas El principal objetivo de la bioquímica es el entendimiento completo, en el nivel molecular, de todos los procesos químicos relacionados con las células vivas. Para lograr este objetivo, los bioquímicos han buscado aislar las numerosas moléculas que se encuentran en las células, determinar su estructura y analizar cómo funcionan. Se han usado muchas técnicas para estos propósitos; algunas de ellas se resumen en el cuadro 1-1. El conocimiento de la bioquímica es esencial para todas las ciencias de la vida La bioquímica de los ácidos nucleicos ocupa un lugar fundamental justo en el corazón de la genética; a su vez, el uso de métodos genéticos ha sido crucial para dilucidar muchas áreas de la bioquímica. La fisiología, el estudio de la función del cuerpo, se superpone con la bioquímica casi por completo. En la inmunología se emplean muchas técnicas bioquímicas y numerosos métodos inmunológicos han encontrado amplio uso por bioquímicos. La farmacología y la farmacia se fundamentan en un sólido conocimiento de la bioquímica y la fisiología, en particular, casi todos los fármacos son metabolizados mediante reacciones catalizadas por enzimas. Los venenos actúan sobre reacciones o procesos bioquímicos; éste es el tema de estudio de la toxicología. Los métodos bioquímicos cada vez reciben un uso más amplio en la investigación relacionada con los aspectos básicos de la patología (el estudio de la enfermedad), como la inflamación, la lesión celular y el cáncer. Muchos investigadores en microbiología, zoología y botánica emplean métodos bioquímicos de manera casi exclusiva. Estas relaciones no sorprenden, porque la vida, como se le conoce, depende de reacciones y procesos bioquímicos. De hecho, las antiguas barreras entre las ciencias a 1 P í t u l o de la vida están derrumbándose y la bioquímica está llegando a ser, cada vez de manera más frecuente, su lenguaje común. Una relación recíproca entre la bioquímica y la medicina ha estimulado avances mutuos Las dos preocupaciones más importantes para los investigadores en las ciencias de la salud —y en particular para los médicos— son tanto el entendimiento y el mantenimiento de la salud, como la comprensión y el tratamiento efectivo de las enfermedades. La bioquímica tiene enormes repercusiones sobre estas dos preocupaciones fundamentales de la medicina. De hecho, la interrelación de la bioquímica y la medicina es una amplia avenida que circula en dos sentidos. Los estudios bioquímicos han esclarecido muchos aspectos de la salud y la enfermedad, a la inversa, el estudio de diversos aspectos de la salud y la enfermedad ha abierto nuevas áreas en la bioquímica. En la figura 1-1 se muestran algunos ejemplos de esta avenida de dos direcciones. Por ejemplo, el conocimiento de la estructura y la función de las proteínas fue necesario para dilucidar la diferencia bioquímica única entre la hemoglobina normal y la de células falciformes. Por otra parte, el análisis de la hemoglobina de células falciformes ha contribuido de manera significativa al entendimiento de la estructura y la función tanto de la hemoglobina como de otras proteínas normales. Cabría citar ejemplos análogos de beneficio recíproco entre la bioquímica y la medicina para los otros incisos pareados que muestra la figura 1-1. Otro ejemplo es la investigación pionera de Archibald Garrod, médico que ejerció en Inglaterra a principios del siglo xx, quien estudió a pacientes con diversos trastornos hasta cierto punto raros (alcaptonuria, albinismo, cistinuria y pentosuria; los cuales se describen en capítulos posteriores), y estableció que estas enfermedades estaban determinadas por mecanismos genéticos. Garrod designó a estas enfermedades como errores innatos del metabolismo (metabolopatías); sus ideas proporcionaron un importante fundamento para el desarrollo de la genética bioquímica humana. Los esfuerzos más recientes por entender la base de la enfermedad genética conocida como hipercolesterolemia familiar, que origina aterosclerosis grave a una edad temprana, han llevado a alcanzar un progreso notorio del entendimiento de los receptores celulares y de los mecanismos de captación del colesterol por las células. Los estudios de oncogenes en células cancerosas han dirigido la atención hacia los mecanismos moleculares involucrados en el control del crecimiento celular normal. Tales ejemplos y muchos otros recalcan la manera en que el estudio de 1 01 Bender.indd 1 27/11/09 12:28:39 2 capítulo 1 Bioquímica y medicina la enfermedad llega a abrir áreas de la función celular para investigación bioquímica básica. La relación entre medicina y bioquímica tiene inferencias importantes para la primera. Mientras el tratamiento médico esté fundamentado con firmeza en el conocimiento de la bioquímica y otras ciencias básicas, la práctica de la medicina tendrá una base racional capaz de adaptarse para dar cabida al nuevo conocimiento. Esto contrasta con prácticas de salud no ortodoxas y con al menos algunas opciones de “medicina alternativa” que a menudo están fundamentadas en poco más que mitos e ilusiones y, por lo general, carecen de base intelectual alguna. CUaDRO 1-1 Principales métodos y preparaciones usados en laboratorios de bioquímica LOS PROCESOS BIOQUÍMICOS NORMALES SON LA BASE DE LA SALUD La Organización Mundial de la Salud (OMS) define a la salud como el estado de “bienestar físico, mental y social completo, y no tan sólo la ausencia de enfermedad”. Desde un punto de vista estrictamente bioquímico, cabe considerar a la salud como aquella situación en la cual las muchas miles de reacciones intracelulares y extracelulares que ocurren en el cuerpo están procediendo a índices acordes con la supervivencia máxima del organismo en el estado fisiológico. Sin embargo, se trata de un punto de vista en extremo reduccionista, debe quedar de manifiesto que el cuidado de la salud de los pacientes no sólo requiere un amplio conocimiento de los principios biológicos, sino también de principios psicológicos y sociales. Métodos para separar biomoléculas y purificarlas1 Fraccionamiento de sal (p. ej., precipitación de proteínas con sulfato de amonio) Cromatografía: en papel, de intercambio iónico, de afinidad, de capa delgada, de gas-líquido, de líquido a alta presión, de filtración en gel Electroforesis: en papel, de alto voltaje, en agarosa, en acetato de celulosa, en gel de almidón, en gel de poliacrilamida, en gel de dodecil sulfato de sodio (SDS)-poliacrilamida Ultracentrifugación Métodos para determinar estructuras de las biomoléculas Análisis elemental Espectroscopia con luz ultravioleta (UV), visible, infrarroja y con resonancia magnética nuclear (NMR) Uso de hidrólisis en ácido o alcalí para degradar la biomolécula en estudio hacia sus constituyentes básicos Uso de un conjunto de enzimas de especificidad conocida para degradar la biomolécula en estudio (p. ej., proteasas, nucleasas, glucosidasas) Espectrometría de masa Métodos de secuenciación específicos (p. ej., para proteínas y ácidos nucleicos) Cristalografía con rayos X Preparaciones para estudiar procesos bioquímicos Animal entero (incluye animales transgénicos y animales con genes noqueados) Órgano aislado perfundido Corte de tejido Células enteras Homogeneizado Organelos celulares aislados Subfraccionamiento de organelos Metabolitos y enzimas purificados Genes aislados (incluso reacción en cadena de polimerasa y mutagénesis dirigida hacia sitio) Casi todos estos métodos son idóneos para analizar los componentes presentes en homogeneizados de células y en otras preparaciones bioquímicas. El uso secuencial de varias técnicas por lo general permitirá la purificación de casi todas las biomoléculas. El lector encontrará detalles en libros sobre métodos de investigación bioquímica. 1 01 Bender.indd 2 La investigación bioquímica tiene repercusiones sobre la nutrición y la medicina preventiva Un prerrequisito importante para el mantenimiento de la salud es la ingestión óptima de diversas sustancias químicas en la dieta, entre las cuales destacan vitaminas, algunos aminoácidos, ciertos ácidos grasos, diversos minerales y agua. Dado que gran parte del tema de estudio tanto de la bioquímica como de la nutrición comprende diversos aspectos de estas sustancias químicas, hay una estrecha relación entre ambas ciencias. Más aún, se está haciendo hincapié en los intentos sistemáticos por mantener la salud y prevenir la enfermedad, esto es, en medicina preventiva, así que se observa un énfasis en los métodos nutricionales para —por ejemplo— tratar la prevención de aterosclerosis y cáncer. El entendimiento de la nutrición depende en gran medida del conocimiento sobre bioquímica. Casi todas las enfermedades (quizá todas) tienen una base bioquímica Los autores creen que casi todas las enfermedades, si no es que todas, son manifestaciones de anormalidades de moléculas, reacciones químicas o procesos bioquímicos. En el cuadro 1-2 se listan los principales factores que generan enfermedades en animales y seres humanos; todos afectan una o más reacciones químicas o moléculas cruciales en el cuerpo. Este libro presenta muchos ejemplos de las bases bioquímicas de las enfermedades; en casi todas ellas los estudios bioquímicos contribuyen tanto al diagnóstico como al tratamiento. El cuadro 1-3 resume algunos usos importantes de investigaciones bioquímicas y pruebas de laboratorio en relación con enfermedades. El capítulo 54 de este libro provee aún más ayuda para ilustrar la relación entre bioquímica y enfermedad al comentar con cierto detalle los aspectos bioquímicos de 16 casos médicos diferentes. Al final del capítulo 54 se esbozan de manera muy sucinta algunos de los principales desafíos que la medicina y las ciencias de la salud relacionadas encaran. Al abordar estos desafíos, los estudios bioquímicos ya están entrelazados, y seguirán estándolo, con estudios en varias otras disciplinas, como genética, inmunología, nutrición, patología y farmacología. 27/11/09 12:28:40 CHAPTER 1 3 Biochemistry & Medicine capítulo 1 3 Bioquímica y medicina Bioquímica Ácidos nucleicos Enfermedades genéticas Proteínas Lípidos Carbohidratos Depranocitosis Aterosclerosis Diabetes mellitus Medicina FIGURE Examples the two-way connecting biochemistry and y la FIgURA 1-11–1 Ejemplos de la of avenida en dos street direcciones que conecta la bioquímica medicine. Knowledge of molecules shown in the part of the del medicina. El conocimiento dethe las biochemical moléculas bioquímicas mostradas entop la parte superior diagram has clarifiedelour understanding diseases shown on the bottom diagrama ha esclarecido entendimiento deof lasthe enfermedades mostradas en la mitad inferior conversely, of the diseases belowabajo have han castaclarado light on many y, a lahalf—and inversa, los análisis deanalyses las enfermedades que shown se muestran muchas biochemistry. Note sickle cell anemia is aenfermedad genetic disease and that both áreasareas de laofbioquímica. Note quethat la drepanocitosis es una genética, y que tanto atherosclerosis and genetic components. la aterosclerosis como ladiabetes diabetesmellitus mellitushave tienen componentes genéticos. Repercusiones Human Genome Project Impact of the del Human Genome Project (HGP, Proyecto del Genoma Humano) (HGP) on Biochemistry, Biology, & sobre laMedicine bioquímica, biología y medicina A finales del decenio de 1990, HGPinlogró progresos en la Remarkable progress was el made the notorios late 1990s in sequencsecuenciación del genoma Esto culminó en julio dein2000, ing the human genomehumano. by the HGP. This culminated July cuando los dosofgrupos comprendidos en esteinesfuerzo (el 2000,líderes when de leaders the two groups involved this effort International Human Genome Consortium Consortium y Celera Ge(the International Human Sequencing Genome Sequencing nomics, compañía privada) aanunciaron que se había secuenciado and Celera Genomics, private company) announced that más de 90% genoma. A principios 2001 se publi caronversions versioover 90% del of the genome had beendesequenced. Draft nesofborrador de la secuencia. Salvo in algunos vacíos,With la secuencia de the sequence were published early 2001. the exceptodo el of genoma completó of en the 2003, 50 años después de la tion a few humano gaps, thesesequence entire human genome descripción de la naturaleza de years doble after hélicethe del description ácido desoxirribowas completed in 2003, 50 of the nucleico (DNA) por Watson y Crick. double-helical nature of DNA by Watson and Crick. Son enormes las inferencias HGPfor para la bioquímica,all toda The implications of thedel HGP biochemistry, of la biology, biología, and así como para la medicina y las health cienciassciences de la salud for medicine and related are relacionadas, sólo se mencionan algunos puntos.here. ahoraIt es tremendous,y aquí and only a few points are mentioned is posible aislar cualquier genany y, por lo and general, determinar su esnow possible to isolate gene usually determine its structure and function (eg, by sequencing and knockout experiments). Many previously unknown genes have been re- CUaDRO 1-2 Las principales causas 1 1–2 The Major Causes of Diseases1 deTABLE enfermedades 1. Agentes físicos: traumatismo mecánico, temperatura cambios 1. Physical agents: Mechanical trauma, extremes extrema, of temperature, repentinos de la presión atmosférica, radiación, descarga eléctrica. sudden changes in atmospheric pressure, radiation, electric shock. 2. 2. Agentes químicos, incluso fármacos: ciertos compuestos tóxicos, fárChemical agents, including drugs: Certain toxic compounds, macos terapéuticos, therapeutic drugs,etcétera. etc. 3. Agentes biológicos: virus, bacterias, hongos, formas superiores de pa3. Biologic agents: Viruses, bacteria, fungi, higher forms of parasites. rásitos. 4. Oxygen lack: Loss of blood supply, depletion of the oxygen-carrying 4. Falta de oxígeno: pérdidapoisoning del aporte sanguíneo, capacity of the blood, of the oxidativedisminución enzymes. de la capacidad transportadora de oxígeno de la sangre, envenenamiento 5. disorders: Congenital, molecular. deGenetic las enzimas oxidativas. 6. Immunologic reactions: Anaphylaxis, autoimmune disease. 5. Trastornos genéticos: congénitos, moleculares. 7. Nutritional imbalances:anafilaxia, Deficiencies, excesses.autoinmunitaria. 6. Reacciones inmunitarias: enfermedad 8. Endocrine imbalances: Hormonal deficiencies, 7. Desequilibrios nutricionales: deficiencias, excesos.excesses. 1 Note: All of the causes listed act by influencing the various biochemical 8.mechanisms Desequilibrios endocrinos: deficiencias o excesos hormonales. in the cell or in the body. 1 (Adapted, with permission, Robbins SL, sobre Cotram Kumar mecanismos V: The Pathologic Basis Nota: todas las causas listadasfrom actúan al influir losRS, diversos of Disease,en 3rdlaed. Saunders, Copyright © 1984 Elsevier Inc. with permission bioquímicos célula o en el1984. cuerpo. from Elsevier.) (Adaptado, con autorización, de Robbins SL, Cotram RS, Kumar V: The Pathologic Basis of Disease, 3a. ed. Saunders, 1984. Copyright © 1984 Elsevier Inc. con autorización de Elsevier.) Murray_CH01_PTR.indd 3 01 Bender.indd 3 tructura y función (p. ej.,have mediante experimentos de secuenciación vealed; their products already been established, or are yunder de gen noqueado). Muchos genes anteson desconocidos han sido study. New light has been thrown human evolution, revelados; sus productos ya se han establecido o están bajogreatly estudio. and procedures for tracking disease genes have been Se han aclarado nuevos aspectos la evolución ser humano refined. Reference to the humandegenome will bedel made in vari- y se refinado para rastrear genes vinculados oushan sections of los thisprocedimientos text. con enfermedad. En diversas este librointerest hay referencias Figure 1–2 shows areassecciones of greatdecurrent that al genoma humano. have developed either directly as a result of the progress made EnHGP, la figura muestran áreason deby gran actual que se in the or 1-2 havesebeen spurred it. interés As an outgrowth han desarrollado de manera como resultado del progreso of the HGP, many so-calleddirecta -omics fields have sprung up, logrado en comprehensive el HGP o cuyo avance hathe vistostructures estimulado porfuncel misinvolving studiesseof and mo. del with HGP,which han surgido de losDefinillamados tionsComo of theresultado molecules each ismuchos concerned. tions of the fields listed below are given in the Glossary of this CUaDRO 1-3 algunos usos de investigaciones bioquímicas de laboratorio en relación Some Uses of Biochemical Investigations TABLE 1–3y pruebas con enfermedades and Laboratory Tests in Relation to Diseases Uso Use Ejemplo Example 1. Revelar las causas 1. To reveal the fundamental y los mecanismos causes and mechanisms fundamentales de of diseases enfermedades Demostración de la naturaleza de los Demonstration of the nature the defectos genéticos en la of fibrosis genetic defects in cystic fibrosis. quística. 2. To suggest rational 2. Sugerir tratamientos treatments of diseases racionales de based on item 1con above enfermedades base en el inciso 1 3. To assist in the diagnosis A Una diet dieta low incon phenylalanine for de bajo contenido treatment of phenylketonuria. fenilalanina para el tratamiento of specific 3. Ayudar en diseases el diagnóstico de enfermedades específicas de fenilcetonuria. Use of the plasma levels of troponin I or Tde inlas theconcentraciones diagnosis of myocardial Uso plasmáticas infarction. de troponina I o T en el diagnóstico de infarto de miocardio. 4. To act ascomo screening tests 4. Actuar pruebas for the early diagnosis de detección para el of certain diseases diagnóstico temprano de ciertas enfermedades Use ofde measurement Uso medición deoflablood tiroxina o de la thyroxine thyroid-stimulating hormonaorestimulante de la tiroides hormone in the (TSH) en(TSH) la sangre enneonatal el diagnóstico diagnosis neonatalofdecongenital hipotiroidismo hypothyroidism. congénito. 5. To assistainvigilar monitoring 5. Ayudar el the progress (ie,es,recovery, progreso (esto worsening, remission, recuperación, or relapse) of certain empeoramiento, remisión diseases o recaída) de ciertas enfermedades 6. To assist in assessing the Use ofde thelaplasma alanine Uso enzimaenzyme plasmática alanina aminotransferase aminotransferasa(ALT) (ALT)inen la monitoring the progreso progress de of hepatitis vigilancia del infectious hepatitis. infecciosa. response of diseases to therapyen la evaluación 6. Ayudar de la respuesta de enfermedades a la terapia Use of measurement of blood carcinoembryonic antigen (CEA) Uso de la medición del antígeno incarcinoembrionario certain patients who(CEA) haveen been la treated for cancer of the colon. sangre en ciertos pacientes que han recibido tratamiento para cáncer de colon. 3/26/2009 8:51:41 PM 27/11/09 12:28:43 4 CHAPTER 1 4 capítulo 1 Biochemistry & Medicine Bioquímica y medicina Transcriptómica Proteómica Glucómica Nutrigenómica Metabolómica Farmacogenómica Lipidómica Bioinformática HGP (genómica) Biotecnología Bioingeniería Biofísica Bioética Biología de células madre Terapia génica Diagnóstico molecular Biología de sistemas Biología sintética The Human Genome Project (HGP) has influenced many disciplines FIGURE 1–2 FIgURA 1-2 El Human Genome Project (HGP) ha influido sobre muchas disciplinas y and areas of research. áreas de investigación. chapter. products of genes (RNA molecules and de proteins) campos de The -ómica, que comprenden estudios integrales las esare being studied using the technics of transcriptomics and tructuras y funciones de las moléculas que cada uno estudia. El gloproteomics. One spectacular example of the speed of progsario de este capítulo proporciona las definiciones de los campos ress in transcriptomics is the explosion knowledge listados a continuación. Los productos de genesof(moléculas de about ácido small RNA molecules as regulators of gene activity. ribonucleico [RNA] y proteínas) están bajo estudio con el usoOther de las -omicsdefields include glycomics, lipidomics, metabolomics, técnicas transcriptómica y proteómica. Un notorio ejemplo nutrigenomics, and pharmacogenomics. To pace with de la rapidez del progreso en transcriptómica es keep la explosión de the amountrelacionado of information being generated, conocimiento con moléculas de RNA bioinformatics pequeñas como has received attention. Other related fields which the reguladoras de lamuch actividad de genes. Otros campos de to -ómica comimpetus from the HGP has carried over are biotechnology, prenden glucómica, lipidómica, metabolómica, nutrigenómica y bioengineering,Para biophysics, andal bioethics. Stem cell biolfarmacogenómica. mantenerse día con la cantidad de inforogy is at the center of much current research. Gene therapy mación que se está generando, la bioinformática ha recibido mucha has yetOtros to deliver therelacionados promise that contains, it seems atención. campos a losit cuales se habut transmitido probable that will occur sooner or later. Many new molecular el ímpetu del HGP son biotecnología, bioingeniería, biofísica y diagnostic tests have developed in areas as genetic, mibioética. La biología de células madre ocupasuch un lugar prepondecrobiologic, and immunologic testing and diagnosis. Systems rante en gran parte de la investigación actual. La promesa que la biology is also Synthetic biology is perhaps the terapia génica llevaburgeoning. implícita aún no se cumple, pero parece promost intriguing of all. This has the potential for creating living bable que eso ocurrirá tarde o temprano. Se han creado muchas organisms (eg, initially small bacteria) material pruebas diagnósticas moleculares nuevas enfrom áreasgenetic como pruebas y in vitro. These could perhaps be designed to carry out diagnóstico genéticos, microbiológicos e inmunológicos. Laspecific biolo(eg, to mop up está petroleum spills). As in the case ofquizá stem gíatasks de sistemas también en ciernes. La biología sintética cells, this area will attract much attention from bioethicists es la más interesante de todas, cuenta con el potencial de crear orgaand others. Many of un theinicio abovebacterias topics are referred atopartir later de in nismos vivos (p. ej., en pequeñas) this text. material genético in vitro, el cual quizá podría ser diseñado para the above have(p. made the present timedeapetróleo). very exllevar a All cabooftareas específicas ej., limpiar derrames citing one for studying or to be directly involved in biology Como en el caso de las células madre, esta área atraerá mucha atenand medicine. The outcomes of research in the various ción por parte de expertos en bioética y otros. Más adelante enareas este mentioned above will impactdetremendously on the future of libro se hace referencia a muchos los temas anteriores. biology, the health sciences. Todo lomedicine anterior and ha hecho que la época actual sea muy interesante para estudiar o participar de manera directa en biología y medicina. Los resultados de la investigación en las diversas áreas antes mencionadas tendrán grandes repercusiones en el futuro de la SUMMARY biología, la medicina y las ciencias de la salud. Biochemistry is the science concerned with studying the various molecules that occur in living cells and organisms and with their chemical reactions. Because life depends on RESUMEN biochemical reactions, biochemistry has become the basic of es alllabiologic sciences. ■ La language bioquímica ciencia que se encarga del estudio de las diversas moléculas que se encuentran en células y organismos vivos, así como sus reacciones químicas. Dado que la vida depende de reacciones n Murray_CH01_PTR.indd 4 01 Bender.indd 4 n ■ n ■ n ■ n n ■ n ■ Biochemistrylaisbioquímica concernedsewith the entire en spectrum of life bioquímicas, ha convertido el lenguaje básico de forms, from relatively simple viruses and bacteria to complex todas las ciencias biológicas. human beings. La bioquímica se encarga del estudio de toda la gama de formas de Biochemistry and medicineque arepudieran intimately related. Health vida, desde virus y bacterias considerarse simples hasta depends on a harmonious seres humanos complejos. balance of biochemical reactions occurring in the body, and disease reflects abnormalities La bioquímica y la medicina están íntimamente relacionadas. La in biomolecules, biochemical reactions, or biochemical salud depende de un equilibrio armonioso de reacciones bioquímicas processes. que están ocurriendo en el cuerpo, en tanto que la enfermedad refleja Advances in biochemical knowledge havebioquímicas illuminatedomany anormalidades en biomoléculas, reacciones procesos areas of medicine. Conversely, the study of diseases has often bioquímicos. revealed previously unsuspected aspects of biochemistry. Los avances en el conocimiento de la bioquímica han esclarecido Biochemical approaches are often fundamental in illuminating muchas áreas de la medicina. A la inversa, el estudio de las the causes of diseases and in designing appropriate therapies. enfermedades a menudo ha revelado aspectos previamente no The judicious of various biochemical tests is anser sospechados deuse la bioquímica. Los métodoslaboratory bioquímicos suelen integral component of diagnosis and monitoring of treatment. fundamentales para esclarecer las causas de enfermedades y diseñar A soundapropiadas. knowledge of biochemistry and of other related basic terapias disciplines is essential forpruebas the rational practicedeoflaboratorio medicine and El uso juicioso de diversas bioquímicas es un related health sciences. componente integral del diagnóstico y de la vigilancia del tratamiento. Results of the HGP andde oflaresearch in related areasdisciplinas will have Un conocimiento sólido bioquímica y de otras a profound influence on the future of biology, medicine and y básicas conexas es esencial para la práctica racional de la medicina other health de ciencias desciences. la salud relacionadas. Los resultados del HGP y de investigación en áreas afines tendrán una profunda influencia sobre el futuro de la biología, la medicina y otras ciencias de la salud. REFERENCES ■ Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE: Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Elsevier Inc, 2006. Encyclopedia of Life Sciences. John Wiley, 2001. (Contains some REFERENCIaS 3000 comprehensive articles on various aspects of the life sciences. Accessible at www.els.net via libraries with a Burtis CA, Ashwood ER, online Bruns DE: Tietz Textbook of Clinical Chemistry subscription.) and Molecular Diagnostics, 4th ed. Elsevier Inc, 2006. Fruton JS: Proteins, Enzymes,John Genes: The2001. Interplay of Chemistry Encyclopedia of Life Sciences. Wiley, (Contiene unos 3 000 and Biology. University Press, 1999. (Provides the historical artículos sobreYale diversos aspectos de las ciencias de la vida. Está background much of today’s biochemical disponible enfor línea en www.els.net mediante unaresearch.) suscripción en Garrod AE: Inborn errors of metabolism. (Croonian Lectures.) bibliotecas.) Lancet 1908;2:1,Enzymes, 73, 142, 214. Fruton JS: Proteins, Genes: The Interplay of Chemistry and Guttmacher AE,University Collins FS: Genomic medicine—A primer. N de Biology. Yale Press, 1999. (Provee el contexto histórico Engl J Med 2002;347:1512. (This article was the first of a series gran parte de la investigación actual sobre bioquímica.) of 11AE: monthly in the New England Journal of Garrod Inbornarticles errors ofpublished metabolism. (Croonian Lectures.) Lancet Medicine73, describing 1908;2:1, 142, 214.various aspects of genomic medicine.) Guttmacher AE, Collins FS: Genomic medicine—A primer. N Engl J Med 2002;347:1512. (Fue el primero de una serie de 11 artículos publicados 3/26/2009 8:51:42 PM 27/11/09 12:28:47 capítulo 1 mensualmente en el New England Journal of Medicine, describiendo diversos aspectos de la medicina genómica.) Guttmacher AE, Collins FS: Realizing the promise of genomics in biomedical research. JAMA 2005;294(11):1399. Kornberg A: Basic research: The lifeline of medicine. FASEB J 1992;6:3143. Kornberg A: Centenary of the birth of modern biochemistry. FASEB J 1997;11:1209. Manolio TA, Collins FS: Genes, environment, health, and disease: Facing up to complexity. Hum Hered 2007;63:63. McKusick VA: Mendelian Inheritance in Man. Catalogs of Human Genes and Genetic Disorders, 12th ed. Johns Hopkins University Press, 1998. [Abreviado como MIM] Online Mendelian Inheritance in Man (OMIM): Center for Medical Genetics, Johns Hopkins University and National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, 1997. http:// www.ncbi.nlm.nih.gov/omim/ (Los números asignados a las entradas en el OMIM serán citados en algunos capítulos de este libro. Mediante consultar esta amplia presentación de enfermedades y otras entradas relacionadas sobre proteínas específicas, enzimas y demás, el lector incrementará en gran medida su conocimiento y comprensión de varios temas vinculados con este texto y que son considerados aquí. La versión en línea es actualizada casi a diario.) Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, rev. ed. Oxford University Press, 2000. Scriver CR et al (editors): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. McGraw-Hill, 2001. (Este texto está ahora disponible en línea y actualizado como The Online Metabolic & Molecular Bases of Inherited Disease en www.ommbid.com. Se requiere una suscripción, pero el acceso está disponible en bibliotecas de universidades y hospitales, entre otras opciones.) Scherer S: A Short Guide to the Human Genome. CSHL Press, 2008. GLOSaRIO Bioética: área de la ética que se encarga de la aplicación de principios morales y éticos a la biología y medicina. Biofísica: aplicación de física y sus técnicas a la biología y medicina. Bioinformática: disciplina que se encarga de reunir, almacenar y analizar datos biológicos, en especial secuencias de DNA y proteína (véase capítulo 10). Bioingeniería: aplicación de ingeniería a biología y medicina. Biología de células madre: una célula madre es una célula indiferenciada que tiene el potencial de renovarse por sí misma y de diferenciarse hacia cualquiera de las células adultas que se encuentran en el organismo. La biología de células madre se encarga del estudio de las 01 Bender.indd 5 Bioquímica y medicina 5 propiedades biológicas de las células madre y sus usos en diversas enfermedades. Biología de sistemas: campo de la ciencia en el cual se estudian sistemas biológicos completos como enteros integrados (en contraposición con el método reduccionista de, por ejemplo, la bioquímica clásica). Biología sintética: campo que combina técnicas biomoleculares con métodos de ingeniería para construir nuevas funciones y sistemas biológicos. Biotecnología: campo en el cual se combinan métodos bioquímicos, de ingeniería y otros, para crear productos biológicos para uso en medicina y en la industria. Diagnóstico molecular: uso de métodos moleculares (p. ej., sondas de DNA) para ayudar en el diagnóstico de diversas enfermedades bioquímicas, genéticas, inmunitarias, microbianas y otros padecimientos médicos. Farmacogenómica: uso de información y tecnologías genómicas para optimizar el descubrimiento y desarrollo de blancos terapéuticos y de fármacos (véase capítulo 54). Genómica: el genoma es el grupo completo de genes de un organismo (p. ej., el genoma humano), y genómica es el estudio a fondo de las estructuras y funciones de genomas (véase capítulo 10 y otros). Glucómica: el glucoma es la totalidad de carbohidratos simples y complejos en un organismo. La glucómica es el estudio sistemático de las estructuras y funciones de glucomas (p. ej., el glucoma humano; véase capítulo 47). lipidómica: el lipidoma es la totalidad de lípidos que se encuentran en un organismo. La lipidómica es el estudio a fondo de las estructuras y funciones de todos los miembros del lipidoma, así como de sus interacciones, tanto en salud como en enfermedad. Metabolómica: el metaboloma es la totalidad de metabolitos (moléculas pequeñas comprendidas en el metabolismo) que se encuentran en un organismo. La metabolómica es el estudio a fondo de sus estructuras, funciones y cambios en diversos estados metabólicos. Nutrigenómica: estudio sistemático de los efectos de los nutrientes sobre la expresión genética y de los efectos de variaciones genéticas sobre el manejo de nutrientes. proteómica: el proteoma es la totalidad de proteínas de un organismo. La proteómica es el estudio sistemático de las estructuras y funciones de proteomas, incluso variaciones en la salud y la enfermedad (véase capítulo 4). terapia génica: se aplica al uso de genes sometidos a procesos de ingeniería genética para tratar diversas enfermedades (véase capítulo 39). transcriptómica: el transcriptoma es el grupo completo de transcriptos de RNA producidos por el genoma a un periodo fijo en el tiempo. La transcriptómica es el estudio integral de la expresión génica a nivel del RNA (véase capítulo 36 y otros). 27/11/09 12:28:48 c Agua y pH Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA El agua es el componente químico predominante de los organismos vivos. Sus singulares propiedades físicas, que incluyen la capacidad para disolver una amplia gama de moléculas orgánicas e inorgánicas, se derivan de su estructura bipolar y de su excepcional capacidad para formar enlaces de hidrógeno. La manera en que el agua interactúa con una biomolécula disuelta influye sobre la estructura de cada una. El agua, un excelente nucleófilo, es un reactivo o un producto en muchas reacciones metabólicas. El agua tiene una propensión leve a disociarse hacia iones hidroxilo y protones. La acidez de soluciones acuosas por lo general se reporta usando la escala de pH logarítmica. El bicarbonato y otros amortiguadores en circunstancias normales mantienen el pH del líquido extracelular entre 7.35 y 7.45. Las alteraciones sospechadas del equilibrio acidobásico se verifican al medir el pH de la sangre arterial y el contenido de CO2 de la sangre venosa. Algunas causas de acidosis (pH sanguíneo < 7.35) son cetosis diabética y acidosis láctica. La alcalosis (pH > 7.45) puede presentarse después de vómitos de contenido gástrico ácido. La regulación del equilibrio del agua depende de mecanismos hipotalámicos que controlan la sed, de la hormona antidiurética (ADH), de la retención o excreción de agua por los riñones, y de la pérdida por evaporación. La diabetes insípida nefrogénica, que comprende la incapacidad para concentrar orina o para hacer ajustes a cambios sutiles de la osmolaridad del líquido extracelular, se produce por falta de capacidad de respuesta de los osmorreceptores de los túbulos renales a la ADH. EL AGUA ES UN SOLVENTE BIOLÓGICO IDEAL Las moléculas de agua forman dipolos Una molécula de agua es un tetraedro irregular, un tanto asimétrico, con oxígeno en su centro (fig. 2-1). Los dos hidrógenos y los electrones no compartidos de los dos orbitales sp3-hibridados restantes ocupan los ángulos del tetraedro. El ángulo de 105 grados entre los hidrógenos difiere un poco del ángulo tetraédrico ideal, de 109.5 grados. El amoniaco también es tetraédrico, con un ángulo de 107 grados entre sus hidrógenos. El agua es un dipolo, una molécula con carga eléctrica distribuida de manera asimétrica en toda su estructura. El átomo de oxígeno fuertemente electronegativo empuja los electrones en dirección contraria a los núcleos de hidrógeno, lo A 2 P í t u l o que los deja con una carga positiva parcial, mientras que sus dos pares de electrones no compartidos constituyen una región de carga negativa local. El agua, un fuerte dipolo, tiene una constante dieléctrica alta. Como se describe de manera cuantitativa mediante la ley de Coulomb, la fuerza de la interacción F entre partículas que tienen carga opuesta es inversamente proporcional a la constante dieléctrica ε del medio circundante. La constante dieléctrica para un vacío es la unidad; para el hexano es 1.9; para el etanol, 24.3, y para el agua, 78.5. Por ende, el agua disminuye mucho la fuerza de atracción entre especies cargadas y polares en comparación con ambientes libres de agua que tienen constantes dieléctricas más bajas. Su fuerte dipolo y constante dieléctrica alta permiten al agua disolver grandes cantidades de compuestos cargados, como las sales. Las moléculas de agua forman enlaces de hidrógeno Un núcleo de hidrógeno parcialmente desprotegido, unido de manera covalente a un átomo de oxígeno o de nitrógeno que extrae electrones, puede interactuar con un par de electrones no compartidos sobre otro átomo de oxígeno o nitrógeno para formar un enlace de hidrógeno. Dado que las moléculas de agua tienen estas dos características, la formación de enlaces de hidrógeno favorece la autoasociación de moléculas de agua hacia disposiciones ordenadas (fig. 2-2). La formación de enlaces de hidrógeno ejerce una profunda influencia sobre las propiedades físicas del agua, lo que explica su viscosidad, tensión superficial y punto de ebullición excepcionalmente altos. En promedio, cada molécula en agua líquida se asocia por medio de enlaces de hidrógeno con otras 3.5. Estos enlaces son hasta cierto punto débiles y transitorios, con una vida media de un microsegundo o menos. La ruptura de un enlace de hidrógeno en agua líquida sólo requiere alrededor de 4.5 kcal/mol, menos de 5% de la energía necesaria para romper un enlace O—H covalente. La formación de enlaces de hidrógeno permite al agua disolver muchas biomoléculas orgánicas que contienen grupos funcionales que pueden participar en la formación de enlaces de hidrógeno. Los átomos de oxígeno de aldehídos, cetonas y amidas, por ejemplo, proporcionan pares de electrones solitarios que tienen la capacidad de servir como aceptores de hidrógeno. Los alcoholes y las aminas pueden servir como aceptores de hidrógeno y como donadores de átomos de hidrógeno desprotegidos para formación de enlaces de hidrógeno (fig. 2-3). 6 02 Bender.indd 6 27/11/09 12:39:57 77 CHAPTER 2 Water & pH CHAPTER 2 Water & pH capítulo 2 Agua y pH CHAPTER 2 Water & pH enlace Type Type Bond O—O O—O Type O—O 2e 2e 2e H 2e 105˚ 105˚ H H 105˚ FIGURA2–1 2-1 The La molécula de agua tiene tetraédrica. FIGURE geometry. Hgeometría FIGURE 2–1 The water water molecule molecule has has tetrahedral tetrahedral geometry. FIGURE 2–1 The water molecule has tetrahedral geometry. H H H H H H O O H H H H O O O H H H O H H H O O H H H O O O H O H O H O O H H H H H O H O H H H H O H H H O H O H H H H O Left: of H water Izquierda: asociación dedipolar dos moléculas de agua by Left: Association Association of two two dipolar water molecules molecules by FIGURE FIGURA2–2 2-2 FIGURE 2–2 aa hydrogen bond line). Right: Hydrogen-bonded cluster dipolares mediante un enlace hidrógeno (línea punteada). hydrogen bond (dotted (dotted line).de Right: Hydrogen-bonded cluster of of FIGURE 2–2 Left:Note Association of two dipolar water molecules by four water molecules. that water can serve simultaneously both Derecha: agrupación de cuatro moléculas de agua con enlaces de four water molecules. Note that water can serve simultaneously both aashydrogen bond (dotted as line).hydrogen Right: Hydrogen-bonded cluster of donor acceptor. hidrógeno. Note que and el agua servir de manera simultánea como as aa hydrogen hydrogen donor and as aapuede hydrogen acceptor. four water molecules. Note that water can serve simultaneously both donador y como aceptor de hidrógeno. as a hydrogen donor and as a hydrogen acceptor. H H CH3 CH3 CH2 CH2 O O H H O O CH3 CH2 O H O CH3 CH3 CH2 CH2 O O H H CH3 CH2 O H H H H O O H CH2 O CH2 R R C C R R II R C O O H H O H N N 7 CuaDro Energías defor enlace para átomos TABLE 2–1 TABLE 2–12-1Bond Bond Energies Energies for Atoms Atoms of of Biologic Biologic de importancia biológica Significance Significance TABLE 2–1 Bond Energies for Atoms of Biologic Tipo de Energía Tipo de Energía Bond Energy Bond Energy Significance Bond Energy Bond Energy 2e 2e H H 7 H H H CH R IIII 2 R CH3 CH3 CH3 R IIIII R III N R III FIGURE polar RI FIGURE 2–3 2–3 Additional Additional polar groups groups Rparticipate participate in in hydrogen hydrogen bonding. Shown are hydrogen bonds formed between alcohol and bonding. Shown are hydrogen bonds formed between alcohol and FIGURA 2-3two Los grupospolar polares adicionales participan la FIGURE 2–3 Additional groups participate in hydrogen water, between molecules of ethanol, and between the en peptide water, between two molecules of ethanol, and between the peptide formación de enlaces de hidrógeno. Seformed muestran los enlaces deand bonding. oxygen Shown are hydrogen bonds between alcohol carbonyl and the nitrogen hydrogen of carbonyl oxygen and entre the peptide peptide nitrogen hydrogen of an an adjacent adjacent hidrógeno formados alcohol y agua, entre dos moléculas de water, between two molecules of ethanol, and between the peptide amino acid. amino acid. etanol, y entre el oxígeno del carbonilo peptídico y el of hidrógeno carbonyl oxygen and the peptide nitrogen hydrogen an adjacent del nitrógeno amino acid. peptídico de un aminoácido adyacente. INTERACTION INTERACTION WITH WITH WATER WATER INFLUENCES THE STRUCTURE LA INTERACCIÓN CON AGUA INFLUENCES THE STRUCTURE INTERACTION WITH WATER OF BIOMOLECULES INFLUYE SOBRE ESTRUCTURA OF BIOMOLECULES INFLUENCES THELA STRUCTURE DE BIOMOLÉCULAS OF LAS BIOMOLECULES Covalent Covalent & & Noncovalent Noncovalent Bonds Bonds Stabilize Biologic Molecules Stabilize Biologic Molecules Los enlaces covalentes y no covalentes Covalent & Noncovalent Bonds The covalent bond is the strongest force estabilizan moléculas biológicas The covalent Biologic bond is the strongest force that that holds holds molecules molecules Stabilize Molecules together (Table 2–1). Noncovalent forces, while of lesser magtogether (Table 2–1). while ofjuntas lesser El enlace covalente esislaNoncovalent mayor fuerzaforces, que mantiene a maglas moThe covalent bond the strongest force that holds molecules nitude, make significant contributions to the structure, stabilnitude, make significant contributions to the structure, stabilléculas (cuadro 2-1). LasNoncovalent fuerzas no covalentes, aunque son de menor together (Table 2–1). forces, while of lesser magity, and functional competence of in living ity, andmake functional competence of macromolecules macromolecules in stabilliving magnitud, hacen contribuciones importantes astructure, la estructura, estanitude, significant contributions to the cells. These forces, can either attractive repulsive, cells. These forces, which which can be bede either attractive or oren repulsive, bilidad y functional competencia funcional macromoléculas lasliving células ity, and competence of macromolecules in involve interactions both within the biomolecule and between involve interactions bothpueden within the biomolecule between vivas. Estas fuerzas,which que ser de attractive atracción and oorde repulsión, cells. These forces, can be either repulsive, it and the water that forms the principal component of the surit and the water that forms the principal component of the sur-encomprenden interacciones tanto dentro de la biomolécula como involve interactions both within the biomolecule and between rounding environment. rounding environment. tre la misma y el that agua,forms que esthe el principal principal componente delthe ambiente it and the water component of surcircundante. rounding environment. (kcal/mol) (kcal/mol) (kcal/mol) Energy 34 34 (kcal/mol) 34 enlace Type Type Bond O==O O==O Type O==O (kcal/mol) (kcal/mol) (kcal/mol) Energy 96 96 (kcal/mol) 96 S—S S—S O—O S—S C—N C—N S—S C—N S—H S—H C—N S—H C—C C—C S—H C—C C—O C—O C—C C—O N—H N—H C—O N—H 51 51 34 51 70 70 51 70 81 81 70 81 82 82 81 82 84 84 82 84 94 94 84 94 C—H C—H O==O C—H C==S C==S C—H C==S O—H O—H C==S O—H C==C C==C O—H C==C C==N C==N C==C C==N C==O C==O C==N C==O 108 108 99 108 110 110 108 110 147 147 110 147 147 147 147 164 164 147 164 N—H 94 C==O 164 99 96 99 99 Las biomoléculas sePosition pliegan para Biomolecules Fold Polar Biomolecules Fold to to Position Polar & & colocar a grupos polares y cargados Charged Groups on Their Surfaces Charged Groups on Their Surfaces Biomolecules Fold to Position Polar & sobre sus superficies Most biomolecules are is, Most biomolecules are amphipathic; amphipathic; that is, they they possess possess regions regions Charged Groups on Theirthat Surfaces rich in charged polar functional groups as well as with Casi todas lasor son anfipáticas; esto es, poseen regiorich inbiomolecules charged orbiomoléculas polar functional groups asthey well as regions regions with Most are amphipathic; that is, possess regions hydrophobic character. Proteins tend to fold with the R-groups of nes con altocharacter. contenidoProteins de grupos funcionales cargados o polares, así hydrophobic tend to fold with the R-groups of rich in charged orhydrophobic polar functional groups as well as regions with amino with chains in the interior. comoacids regiones con carácter side hidrofóbico. Las proteínasAmino tienden a amino acids with hydrophobic side chains in the interior. Amino hydrophobic character. Proteins tend to side fold with the(eg, R-groups of acids with charged or acid plegarse con los grupos de aminoácidos con cadenas laterales hiacids with charged or polar polarR amino amino acid sideinchains chains (eg, arginine, arginine, amino acids with hydrophobic side chains the interior. Amino glutamate, generally are present on the condrofóbicasserine) en el interior. Los aminoácidos con surface cadenasin laterales glutamate, serine) generally are present on the surface in con- de acids withwater. charged or polarpattern aminoprevails acid sideinchains (eg, arginine, tact with A similar a phospholipid aminoácidos cargadas o pattern polares prevails (p. ej., arginina, glutamato, biserina) tact with water. A similar in a phospholipid biglutamate, serine) generally aregroups present on the surfaceserine in conlayer, the charged head or por where lo general están presentes sobreof la phosphatidyl superficie en serine contacto layer, where the charged head groups of phosphatidyl or con tact with water. A similar pattern prevails in a phospholipid biphosphatidyl ethanolamine contact water while their hydrophoagua. Un modelo similar contact prevalece en una bicapa de fosfolípidos, phosphatidyl ethanolamine water while their hydropholayer, where the charged head groups of phosphatidyl serine or bic fatty side cluster together, excluding water. donde los grupos con cabeza cargada de fosfatidil serina o This fosfatidil bic fatty acyl acyl side chains chains cluster together, excluding water. This phosphatidyl ethanolamine contact water while their hydrophopattern maximizes the opportunities for formation etanolamina tienen con agua, mientras que of susenercadenas pattern thecontacto opportunities for the the formation of enerbic fattymaximizes acyl side chains cluster together, excluding water. This getically favorable charge–dipole, dipole–dipole, and hydrogen lateralesfavorable de ácidocharge–dipole, graso (acilo) hidrofóbicas se agrupan juntas y exgetically dipole–dipole, and hydrogen pattern maximizes thebetween opportunities for theon formation of enerbonding interactions polar groups biomolecule cluyen el agua. Este modelo las oportunidades para la forbonding interactions betweenmaximiza polar groups on the theand biomolecule getically favorable charge–dipole, dipole–dipole, hydrogen and water. also minimizes energetically unfavorable contacts mación deIt interacciones de carga-dipolo, dipolo-dipolo, y formación and water. It also minimizes energetically unfavorable contacts bonding interactions between polar groups on the biomolecule between water hydrophobic groups. de enlaces deand hidrógeno, favorables desde el punto de vista energébetween water and hydrophobic groups. and water. It also minimizes energetically unfavorable contacts tico entre grupos polares sobre la biomolécula y el agua. También between water and hydrophobic groups. minimiza contactosInteractions desfavorables desde el punto de vista energético Hydrophobic Hydrophobic Interactions entre el agua y grupos hidrofóbicos. Hydrophobic refers Hydrophobic interaction interaction refers to to the the tendency tendency of of nonpolar nonpolar Hydrophobic Interactions compounds to self-associate in an aqueous environment. This compounds to self-associate in an aqueous environment. This Hydrophobic interaction refers tobythe tendency of nonpolar self-association is driven neither mutual attraction nor by Interacciones hidrofóbicas self-association is driven neither by mutual attraction nor by compounds to self-associate in anreferred aqueoustoenvironment. This what are sometimes incorrectly as “hydrophobic what are sometimes incorrectly referred to as “hydrophobic El término “interacción hidrofóbica” (o hidrófoba) alude la tenself-association is driven minimizes neither by energetically mutual attraction nora by bonds. ”” Self-association unfavorable bonds. Self-association minimizes unfavorable dencia de compuestos no polares a energetically autoasociarse en un ambiente what are sometimes incorrectly referred to as “hydrophobic interactions between nonpolar groups and interactions nonpolar and water. water. acuoso. Talbetween autoasociación nogroups está impulsada por unfavorable atracción mutua bonds. ” Self-association minimizes energetically While the hydrogens of nonpolar groups such as While the hydrogens of nonpolar groups as the thecomo ni por lo que a veces es denominado de water. manera such incorrecta interactions between nonpolar groups and methylene groups of hydrocarbons do not form hydrogen methylene groups of hydrocarbons do not form hydrogen “enlaces hidrofóbicos”. La of autoasociación minimiza interacciones While the hydrogens nonpolar groups such as the bonds, they do the structure of the water that surrounds bonds, theygroups do affect affect the structure of energético the water that desfavorables desdeofel punto de vista entresurrounds grupos no pomethylene hydrocarbons do not form hydrogen them. Water molecules adjacent to hydrophobic group them. molecules toofaathe hydrophobic group are are lares Water ythey agua. bonds, do affect theadjacent structure water thatofsurrounds restricted in the number of orientations (degrees freedom) restricted in the number of orientations (degrees of freedom) Dado que los hidrógenos de grupos no polares —como los gruthem. Water molecules adjacent to the a hydrophobic group are that permit them to in maximum number of that them to participate participate inno theforman maximum number of pospermit metileno denumber hidrocarburos— enlaces de hidrógeno, restricted in the of orientations (degrees of freedom) energetically favorable hydrogen bonds. Maximal formation energetically favorable hydrogen bonds. Maximal formation afectan la estructura del agua que los rodea. Las moléculas deofagua that permit them to participate inbe themaintained maximum number of multiple bonds can only by inof multiple hydrogen hydrogen can bonds. betienen maintained only in- al adyacentes afavorable un grupobonds hidrofóbico restricción enbycuanto energetically hydrogen Maximal formation creasing the order of the adjacent water molecules, with an accreasing the order of the adjacent water molecules, with an acnúmero orientaciones (grados que les permiten of multipledehydrogen bonds can de be libertad) maintained only by in- parcompanying decrease in entropy. companying decrease inmáximo entropy.dewater ticipar the en el número enlaces de hidrógeno favorables creasing order of the adjacent molecules, with an acIt from the second law of thermodynamics that It follows follows from the second law La of formación thermodynamics desde el punto de vista energético. máxima that de múlcompanying decrease in entropy. the optimal free energy of aa hydrocarbon–water mixture is thetiples optimal free hydrocarbon–water mixture is aa el enlaces deenergy hidrógeno sólolaw puede mantenerse al aumentar It follows from the of second of thermodynamics that function of both maximal enthalpy (from hydrogen bonding) function of las both maximal (from hydrogen de moléculas adyacentes, con mixture unabonding) disminución theorden optimal free energy ofdeenthalpy aagua hydrocarbon–water is a agregada la entropía. function ofde both maximal enthalpy (from hydrogen bonding) Murray_CH02_PTR.indd 7 Murray_CH02_PTR.indd 7 3/26/2009 8:51:08 PM 3/26/2009 8:51:08 PM Murray_CH02_PTR.indd 7 3/26/2009 8:51:08 PM 02 Bender.indd 7 27/11/09 12:40:02 8 capítulo 2 Agua y pH 8 CHAPTER 2 Water & pH 8 La segunda CHAPTER 2 la Water & pH ley de termodinámica establece que la energía libre óptima de una mezcla de hidrocarburo-agua está en función anddeminimum degrees freedom). Thus, tanto la entalpíaentropy máxima(maximum (por formación de of enlaces de hidrónonpolar molecules tend to form droplets infreedom). order to miniand minimum entropy (maximum degrees of Thus, geno) como de la entropía mínima (grados máximos de libertad). mize exposed surfacetend area reduce the ain number of miniwater molecules form droplets order gotitas to De nonpolar este modo, las moléculas notoand polares tienden formar a molecules affected. in reduce the aqueous environment of mize exposed and the number of water fin de minimizar elsurface área Similarly, de area superficie expuesta y reducir el número the living de cell the hydrophobic of biopolymers tend molecules affected. Similarly,Deinportions the aqueous environment of de moléculas agua afectadas. modo similar, en el ambiente to beliving theporciones structureportions of the molecule, or within the cellinside the of biopolymers tenda acuoso deburied la célula vivahydrophobic las hidrofóbicas de biopolímeros lipid minimizing contact to beabilayer, buried inside the structure of thewater. molecule, or withinoa tienden estar recluidas dentro de lawith estructura de la molécula lipiddebilayer, minimizing with water. dentro una bicapa lípida, locontact que minimiza el contacto con agua. carbonilo en amidas, ésteres, aldehídos y cetonas, y los átomos de fósforo de fosfoésteres. attack by cleav-de ElNucleophilic ataque nucleofílico porwater agua generally a menudoresults originainlathe ruptura ageenlaces ofNucleophilic the amide, esterque bonds that hold biopolymers attack byoor water generally results in thea los cleavlos amida, glycoside, glucósido éster mantienen juntos biotogether. process is termed hydrolysis. Conversely, when age of the This amide, glycoside, orelester bonds hold biopolymers polímeros. Este proceso recibe nombre dethat hidrólisis. A la inversa, monomer unitsprocess are joined together to form such as together. This is termed Conversely, when cuando unidades de monómeros sehydrolysis. unen parabiopolymers formar biopolímeros proteins orunits glycogen, watertogether iselaagua product, example,por during the monomer joined to biopolymers such as como proteínas oare glucógeno, esform unforproducto, ejemplo, formation of a peptide bond two amino acids: proteins glycogen, isbetween a product, forentre example, during the durante laor formación dewater un enlace peptídico dos aminoácidos: formation of a peptide bond between two amino acids: Electrostatic Interactions Electrostatic Interactions Interactions between charged groups help shape biomolecuInteracciones electrostáticas lar structure.between Electrostatic interactions oppositely charged groupsayudan helpbetween shape LasInteractions interacciones entre grupos cargados a dar biomolecuforma a la charged groups within or between biomolecules are termed lar structure. Electrostatic interactions between entre oppositely estructura biomolecular. Las interacciones electrostáticas grusalt Saltwithin bridges comparable in strength hydrogroups orare between termed poscharged quebridges. tienen carga opuesta dentro de biomolecules biomoléculas oareto entre las gen bonds but act over larger distances. They therefore often salt bridges. Salt bridges intienen strength to hydromismas se denominan puentesare decomparable sal, los cuales fuerza comfacilitate the charged molecules and to often progen bonds but act overof distances. therefore parable a la de losbinding enlaces delarger hidrógeno, pero They actúan enions distancias teins and nucleic acids. facilitate binding of charged molecules ions to promayores; porthe ende, a menudo facilitan el enlaceand de moléculas y teins and nucleic acids. iones cargados a proteínas y ácidos nucleicos. van der Waals Forces van der Waals van der Waals forcesForces arise from attractions between transient Fuerzas de van der Waals dipoles by arise the rapid electrons of all van der generated Waals forces from movement attractions of between transient Surgen por atoms. atracciones entre transitorios por el neutral Significantly weaker than hydrogen bonds dipoles generated by the dipolos rapid movement ofgenerados electrons ofbut all movimiento rápido de electrones de todos los átomos neutros. Las potentially extremely numerous, vanthan der Waals forcesbonds decrease neutral atoms. Significantly weaker hydrogen but fuerzas desixth van der Waals másvan débiles queatoms. losforces enlaces dethey hias the power of—mucho the distance separating Thus, potentially extremely numerous, der Waals decrease drógeno, pero potencialmente abundantes— disminuyen en términos actthe over verypower shortof distances, typically 2–4 Å.atoms. Thus, they as sixth the distance separating de la de la distanciatypically que separa a los actsexta overpotencia very short distances, 2–4 Å. átomos. De este modo, actúan en distancias muy cortas, por lo general de 2 a 4 Å. Multiple Forces Stabilize Biomolecules Multiple Forces The DNA double helix Stabilize illustrates theBiomolecules contribution of multiple Fuerzas biomoléculas forces tomúltiples the structure of biomolecules. While each individThe DNA double helix estabilizan illustrates the contribution of multiple ual DNA strand is held by covalent bonds, the two forces to the oftogether biomolecules. While each individLa doble hélice destructure DNA ilustra la contribución de múltiples fuerzas strands of strand the helix are held exclusively by noncovaDNA is held together by covalent bonds, the two a laual estructura de biomoléculas. Sitogether bien cada cadena de DNA indivilent interactions. These noncovalent interactions include hyof thejunta helix aremedio held together exclusively dualstrands se mantiene por de enlaces covalentes,by lasnoncovados hedrogen bonds between bases (Watson–Crick base These nucleotide noncovalent interactions hybraslent de lainteractions. hélice se mantienen unidas de manera exclusivainclude mediante pairing)bonds and van der Waals between the stacked drogen between nucleotide bases (Watson–Crick base interacciones no covalentes. Estasinteractions últimas comprenden enlaces de purine entre and bases. The helix presents the charged pairing) andpyrimidine van der Waals interactions between thede stacked hidrógeno bases de nucleótido (apareamiento de bases Watphosphate groups anddebases. polar sugars thethe backbone purine and pyrimidine The helix presents charged son-Crick) e interacciones van derribose Waals entre lasofbases de purina to water while burying the relatively hydrophobic phosphate groups and polar ribose los sugars of fosfato the nucleotide backbone y pirimidina apiladas. La hélice presenta grupos cargabases inside. The extended maximizes the distance water while burying the relatively nucleotide dosto y azúcares ribosa polares del backbone esqueleto ahydrophobic agua mientras que resbetween negatively charged phosphates, minimizing bases inside. extended backbone maximizes the unfavordistance guarda dentro lasThe bases nucleótido relativamente hidrofóbicas. El able electrostatic interactions. between negatively charged minimizing esqueleto extendido maximiza la phosphates, distancia entre fosfatos queunfavortienen able electrostatic carga negativa, lo queinteractions. minimiza interacciones electrostáticas desfavorables. WATER IS AN EXCELLENT NUCLEOPHILE WATER IS AN EXCELLENT NUCLEOPHILE involve the attack by lone pairs of ELMetabolic AGUA reactions ES UN often EXCELENTE NUCLEÓFILO electrons residing onoften electron-rich molecules termed Metabolic reactions involve the attack by lone nucleopairs of Laselectrons reacciones metabólicas a menudo eltermed ataque Nucleopor paphiles upon electron-poor atomscomprenden called electrophiles. residing on electron-rich molecules nucleores philes solitarios electrones que residen sobre moléculas en philes anddeelectrophiles doatoms not necessarily possess ricas aNucleoformal upon electron-poor called electrophiles. electrones llamadas nucleófilos átomos pocos electrones negative or electrophiles positive charge. Water, whosecon twopossess lone pairs of sp3 philes and dosobre not necessarily a formal llamados electrófilos. Los nucleófilos ywhose electrófilos no pairs necesariaelectrons bear a partial negative charge, is two an excellent nucleonegative or positive charge. Water, lone of sp3 mente poseen una negativa o positiva formal. El agua, cuyos phile. Other nucleophiles of biologic include the electrons bear acarga partial negative charge,importance is an excellent nucleo3 dosphile. pares solitarios dephosphates, electrones tienen importance una carga negativa paroxygen atomsnucleophiles of alcohols, and carboxylic acids; Other of sp biologic include the cial,oxygen es sulfur un excelente Otros dethe importancia the of thiols; the nitrogen ofnucleófilos amines; imidazole atoms of nucleófilo. phosphates, alcohols, andand carboxylic acids; biológica los átomos de nitrogen oxígeno de alcoholes y ácidos ringsulfur ofson histidine. Common electrophiles carbothe of thiols; the of fosfatos, amines;include and thethe imidazole carboxílicos; el azufre de tioles; elelectrophiles nitrógeno de aminas y eland anillo nyl carbons in amides, esters, aldehydes, and ketones the ring of histidine. Common include the carboimidazol de la histidina. electrófilos comunes los carbonos phosphorus atoms ofLos phosphoesters. nyl carbons in amides, esters, aldehydes, andson ketones and the phosphorus atoms of phosphoesters. Murray_CH02_PTR.indd 8 02 Bender.indd 8 Murray_CH02_PTR.indd 8 thermodynamically favored SiWhile bien lahydrolysis hidrólisisisesa una reacción favorecida desdereaction, el punto amide and phosphoester bondsamida of polypeptides and oligonuWhile hydrolysis islos a thermodynamically favored dethe vista termodinámico, enlaces y fosfoéster de reaction, polipépticleotides are in son the estables aqueous environment the cell. the andstable phosphoester bondsen ofelpolypeptides and oligonudos yamide oligonucleótidos ambienteof acuoso de This la céseemingly paradoxic behavior reflects the fact el that the cell. thermocleotides are stablealinparecer the aqueous environment of the Thisla lula. Esta conducta paradójica refleja hecho de que dynamics governing the a reaction deterseemingly paradoxic behavior reflects the fact thatdo the thermotermodinámica que rige elequilibrium equilibrio deofuna reacción nonot determina mine the rate at cual which it will proceed. the cell,catalíticos protein catalysts governing the equilibrium ofcélulas, a reaction do not deterladynamics velocidad a la procederá. En lasIn proteína calledthe enzymes accelerate ratede ofreacciones hydrolytic reactions when mine rate at which it will proceed. In the cell, hidrolíticas protein catalysts llamadas enzimas aceleran elthe índice cuanneeded. Proteases catalyze therate hydrolysis proteins their called enzymes accelerate the of hydrolytic reactions when do es necesario. Las proteasas catalizan la of hidrólisis deinto proteínas component amino acids, nucleases catalyze the hydrolysis needed. Proteases catalyze hydrolysis of proteins intonucleatheir hacia los aminoácidos que while lasthe componen, mientras que las of the phosphoester bonds inlosDNA andfosfoéster RNA. Careful control component amino acids, while nucleases catalyze theelhydrolysis sas catalizan la hidrólisis de enlaces en DNA yofel thethe activities of these enzymes is required to ensure that theyenziact of bonds in DNA and Careful of RNA. Sephosphoester requiere control cuidadoso de lasRNA. actividades decontrol estas onlypara on appropriate molecules at moléculas appropriate times. the activities of these enzymes is required to ensure that they act mas asegurar quetarget sólo actúen sobre blanco apropiaonly appropriate target molecules at appropriate times. das enon momentos apropiados. Many Metabolic Reactions Involve Muchas reacciones metabólicas Many Reactions Involve GroupMetabolic Transfer comprenden transferencia de grupo Group Transfer Many of the enzymic reactions responsible for synthesis and breakdown biomolecules involve of a chemical Muchas de the lasofreacciones enzimáticas dethe lastransfer cuales la sínteMany of enzymic reactions responsible fordepende synthesis and group G from donor D to an acceptor to form acceptor sis y desintegración de biomoléculas comprenden la transferencia breakdown of abiomolecules involve the A transfer ofan a chemical complex, A–G:G D degroup un grupo químico desde donadorA D aceptor A G from a donor to anunacceptor tohacia form un an acceptor para formar un complejo group complex, A–G: de aceptor-grupo, A-G: D−G + A  A −G + D D−G + A  A −G + D The hydrolysis and phosphorolysis of glycogen, for example, involve the transfer of glucosyl groups topor water to comorLahydrolysis hidrólisis y fosforólisis de glucógeno, ejemplo, The and phosphorolysis of glycogen, for or example, thophosphate. The equilibrium hydrolysis of prenden lathe transferencia gruposconstant glucosilo hacia agua o hacia orinvolve transfer ofdeglucosyl groups for to the water or to orcovalent La bonds strongly the formation of split products. tofosfato. constante defavors equilibrio para laforhidrólisis de enlaces thophosphate. The equilibrium constant the hydrolysis of Conversely, in many the significativa group transfer responcovalentes favorece decases manera la reactions formación de procovalent bonds strongly favors the formation of split products. sible for biosynthesis of involve the ther-de ductos de the división. A lacases inversa, en muchos casos las reacciones Conversely, in many themacromolecules group transfer reactions responmodynamically unfavored of covalent bonds. Entransferencia grupo de las cuales depende la involve biosíntesis masible for the de biosynthesis offormation macromolecules thede therzymes surmount this barrier by coupling these group transfer cromoléculas comprenden la formation formación de covalent enlaces covalentes no modynamically unfavored of bonds. Enreactions to other, favored so that the overall change favorecida desde el this punto de reactions vista Las enzimas suzymes surmount barrier by termodinámico. coupling these group transfer in free energy favors biopolymer Given the nucleoperan dicha al acoplar estas synthesis. reacciones de overall transferencia reactions tobarrera other, favored reactions so that the changede philic of water and its synthesis. high concentration cells, grupo a character otras reacciones favorecidas, de modo que el cambio general in free energy favors biopolymer Given the in nucleowhy are biopolymers such as proteins and DNADado relatively stadephilic energía libre favorece la síntesis biopolímero. elincarácter character of water and itsdehigh concentration cells, why are biopolymers such as proteins and DNA relatively sta- 3/26/2009 8:51:08 PM 27/11/09 12:40:07 3/26/2009 8:51:08 PM capítulo 2 02 Bender.indd nucleofílico del agua y su alta concentración en las células, ¿por qué los biopolímeros como las proteínas y el DNA son relativamente estables?, además, ¿de qué modo la síntesis de biopolímeros puede ocurrir en un ambiente acuoso?ofLas propiedadesoccur de lasin enzimas son ble? And how can synthesis biopolymers an aquefundamentales para ambas preguntas. En ausencia de catálisis enzious environment? Central to both questions are the properties ble? And how can synthesis of biopolymers occur in an aquemática, inclusoInlas favorecidas desde elreactions punto de ofous enzymes. thereacciones absence catalysis, even environment? Centralofmuy toenzymic both questions are the properties ble? And how can synthesis of biopolymers occur in an aqueble? And how can synthesis of biopolymers occur in an aquevista termodinámico no necesariamente tienen lugar con rapidez. El ble? And how can synthesis of biopolymers occur in an aquethat are highlyInfavored thermodynamically do noteven necessarily of enzymes. the absence of enzymic catalysis, reactions ous environment? Central to both questions are the properties ous environment? Central to both questions are the properties control preciso y diferencial de la actividad enzimática, así como ous environment? Central to both questions are the properties take rapidly.favored Precisethermodynamically and differential control enzymeel thatplace are highly do notofnecessarily of enzymes. In the absence of enzymic catalysis, even reactions of enzymes. In the absence of enzymic catalysis, even secuestro de enzimas en organelos específicos, determinan en qué of enzymes. In the absence of enzymic catalysis, even reactions activity and the sequestration of enzymes in specific take place rapidly. Precise and differential controlorganelles ofreactions enzyme that are highly favored thermodynamically do not necessarily ble? And how can synthesis of biopolymers occur in an aquethat are highly favored thermodynamically do not necessarily condiciones fisiológicas un biopolímero dado se sintetizará o degrathat are highly favored thermodynamically do not necessarily determine under physiologic conditions given biopolyactivity and the what sequestration of enzymes in aspecific organelles take place rapidly. Precise and differential control of enzyme ous environment? Central to both questions are the properties take place rapidly. Precise and differential control of enzyme dará. Los biopolímeros recién sintetizados no se hidrolizan de intake place rapidly. Precise and differential control of enzyme mer will be synthesized degraded.conditions Newly synthesized biodetermine under what or physiologic a given biopolyactivity and the sequestration of enzymes in specific organelles of enzymes. In the absence of enzymic catalysis, even reactions activity and the sequestration of enzymes in specific organelles mediato, lo cual en parte se debe a que los sitios activos de enzimas activity and the sequestration of enzymes in specific organelles polymers immediately hydrolyzed, in part because the mer willare benot synthesized or degraded. Newly synthesized biodetermine under what physiologic conditions aacual given biopolythat sites are highly favored thermodynamically do not necessarily determine under what physiologic conditions given biopolybiosintéticas secuestran sustratos enhydrolyzed, unconditions ambiente del es factible determine under what physiologic asubstrates given biopolyactive of biosynthetic enzymes sequester in anthe polymers are not immediately in part because mer synthesized or degraded. Newly synthesized biotake place rapidly. Precise and differential control of enzyme mer will besynthesized ordegraded. degraded. Newly synthesized excluir alwill agua. mer will bebe or Newly synthesized bioenvironment from which water can be sequester excluded. active sites ofsynthesized biosynthetic enzymes substrates inbioan polymers are not immediately hydrolyzed, in part because the activity and the sequestration ofhydrolyzed, enzymes inin specific organelles polymers not immediately part because the polymers areare not immediately hydrolyzed, in part because the environment from which water can be excluded. active sites of biosynthetic enzymes sequester determine what physiologic conditions asubstrates given biopolyactive sites of biosynthetic enzymes sequester substrates in an active sites ofunder biosynthetic enzymes sequester substrates inin anan Water Molecules Exhibit a Slight but Las moléculas de agua muestran una environment from which water can be excluded. mer will befrom synthesized or degraded. Newly synthesized bioenvironment from which water can excluded. environment which water can bebe excluded. Water a Slight but Important Tendency tohydrolyzed, Dissociate tendencia peroExhibit importante a part disociarse polymersMolecules areleve not immediately in because the Important Tendency to Dissociate active sites of biosynthetic enzymes sequester substrates in an ability of water to ionize, while slight, is of central imporLaThe capacidad del agua para ionizarse, si bien es leve, tiene WaterMolecules MoleculesExhibit ExhibitaaSlight Slightbut butimportanWater environment from which water canelbe excluded. tance for life. Since water can act both as an acid and as a base, cia fundamental para la vida. Dado que agua tiene la capacidad de The ability of water to ionize, while slight, is of central imporImportantTendency TendencytotoDissociate Dissociate Important itstance ionization may bey water represented asboth an proton actuar como ácido como can una act base, su intermolecular ionización puede reprefor un life. Since as an acid and as a base, The ability of water to ionize, while slight, of central imporThe ability of water to ionize, is of central imporThe ability of water ionize, while is+)is of central importransfer that forms ato hydronium ionslight, O and a hydroxide sentarse como una transferencia dewhile protón intermolecular que forits ionization may be represented as(H anSlight intermolecular proton Water Molecules Exhibit aslight, but 3 tance for life. Since water can act both as an acid and as aa base, tance for life. Since water can act both as an acid and as base, – + – + tance for hidronio life. Since water can act both as an acid and as a base, ion (OH ): ma un ion (H O ) y un ion hidroxilo (OH ): O ) and a hydroxide transfer that forms a hydronium ion (H 3 3 Important Tendency toasas Dissociate ionization may represented intermolecular proton its ionization may be represented as an intermolecular proton itsits ionization bebe represented anan intermolecular proton ion (OH–): may − + + +) of H O + H O  H O + OH +Ois transfer that forms a hydronium ion (H O and a hydroxide The ability of water to ionize, while slight, central impor2 2 3 ) and a hydroxide transfer that forms a hydronium ion (H transfer that forms a hydronium ion (H O3 ) and a hydroxide + 3 3 − – Hwater OH – –): ion (OH tance for life. Since actHassociated both an with acid as a base, 2 O + Hcan 2O  3O +as ion (OH ion (OH ): ): The transferred proton is auna cluster of El protón transferido enactually realidad se relaciona conand agrupaits ionization may be represented as proton + −− ++an intermolecular − + water molecules. exist in solution not only as H O ,of ción de moléculas deProtons agua. Los protones existen en solución no sólo The transferred proton is actually associated with a cluster H O + H O  H O + OH +2H O+ OH + OH + 3 H2H O2a2O +hydronium H O22O  H3H O33ion transfer that forms (H O ) and a hydroxide + + + + ++ 3tipo but also as,–multimers such asexist H O and H O . The proton is como H3Omolecules. sino también como multímeros H O y H O water Protons in solution not only as H O 5 2 7 33 . , 5 2 7 3 The transferred proton is actually with The transferred proton is actually associated with a cluster cluster of ion (OH ):elroutinely + + + a a The transferred proton issuch actually with cluster ofof nevertheless asassociated H , even though it is in Sin embargo, protón serepresented representa de manera sistemática como but also as multimers as H5associated O and H O . The proton is 2 7 3 + +O+,, water molecules. Protons exist in solution not only as H O water molecules. Protons exist in solution not only as H + + − + water molecules. Protons exist inhidratado. not only as Hit3Ois 33 ,in highly hydrated. Hfact ,nevertheless aun cuando de hecho routinely as H , even though H2Oestá +represented H2muy O Hsolution O + OH + +3 + and but also as multimers such HO55O H O+ ++.. The proton but also as multimers such as O and H The proton is but also as multimers such asas H H O proton is is 2and 77O.33The Since hydronium and hydroxide recomDado que los iones hidronio e 5H hidroxilo se recombinan de mafact highly hydrated. 2 2ions continuously ++ 7 3 + nevertheless routinely represented as H , even though it is in The transferred proton is actually associated with a cluster of nevertheless routinely represented as H , even though it is in nevertheless routinely represented asagua, Hions , even though itrecomis in bine toSince form hydronium water molecules, an individual hydrogen or oxygen nera continua para formar moléculas de escontinuously imposible declarar and hydroxide fact highly hydrated. water molecules. Protons exist solution not only aswater H3Oo+, fact highly hydrated. fact hydrated. cannot stated be present as an ion or as part of a que unhighly hidrógeno uto oxígeno individual está presente como un ion bine tobe form water molecules, an in individual hydrogen or oxygen + + Since and ions continuously recombutSince also ashydronium multimers such asdeion; Has O2ions and H O . The proton Since hydronium hydroxide ions continuously hydronium and hydroxide 5 an 7instante 3 part molecule. At one instant itpresent ishydroxide an instant later it is part of is formando parte de una agua. En un es un ion, cannot be stated tomolécula beand ioncontinuously or as ofrecomarecomwater + hydrogen or oxygen bine to form water molecules, an individual nevertheless routinely represented as H , even though it is bine to form water molecules, an individual hydrogen or oxygen bine form water molecules, ananindividual hydrogen a water molecule. or molecules arelater therefore not pero altosiguiente forma parte de molécula de agua; deor modo quein molecule. At oneIndividual instant it ions isuna ion; an instant it oxygen is part of cannot be stated to be present as an ion or as part of a water fact highly hydrated. cannot be stated to be present as an ion or as part of a water bemolecule. stated to Individual be present asindividuales. an or as of de ainstant water considered. We iones refer instead to ions the probability that at therefore any nocannot se consideran o moléculas Enpart lugar eso, not se a water or ion molecules are oneinstant instant itis an ion; an instant later itis part of Since hydronium and hydroxide ions continuously recommolecule. At instant it is is an ion; an instant later it is part molecule. AtAt one itpresent anto ion; an instant itof part inmolecule. time a hydrogen will be as anen ion or aslater part ais water hace referencia a one la refer probabilidad de que cualquier instante enofelof considered. We instead the probability that at any instant a water molecule. Individual ions or molecules are therefore not bine to form water molecules, an individual hydrogen or oxygen a water molecule. Individual ions or molecules are therefore not 22 amolecule. water ions orcomo molecules are therefore not 1 Individual g estará ofwill water contains × o10or molecules, the tiempo unmolecule. hidrógeno presente como parte una in time aSince hydrogen be present as3.46 anion ion as part ofde a water considered. We refer instead to the probability that at any cannotdebeof stated be as anstatistically. ion or as of a22instant water considered. We refer instead the probability that at any instant 22part considered. We refer instead to the probability at any instant ionization water bepresent To that molécula agua. Dado que 1described g to de agua contiene 3.46 ×state 10 momolecule. Since 1 to gcan of water contains 3.46 ×that 10 molecules, the time aa hydrogen present as ion or part aapart water molecule. At instant itpuede isdescribed anexists ion; instant later of in time hydrogen will be present as an ion or as part of water inin time hydrogen will bebe present as anan ion asas part ofitof ais water the probability that awill hydrogen as anorion is 0.01 means léculas, laaionización del agua describirse de manera estadísionization of one water can be statistically. To state that 22 22 molecules, 22 are molecule. Since 1 g of water contains 3.46 × 10 the a water molecule. Individual ions or molecules therefore not molecule. Since 1 g of water contains 3.46 × 10 molecules, the molecule. gprobabilidad of water contains 3.46 × an 10 molecules, the that atprobability anySince given moment in time, hydrogen atom has 1 chance tica. Declarar que 1la deaque unas hidrógeno como the that a hydrogen exists ion isexista 0.01 means ionization of water can be described statistically. To state that considered. We refer instead to the that any instant ionization ofwater water can be described statistically. To state ionization of0.01 can be described statistically. Toat state that 100es being an ion and 99 chances out of 100 of being part unin ion significa que, en cualquier momento dado enthat el that atofde any given moment in time, aprobability hydrogen atom has 1 chance the probability that a hydrogen exists as an ion is 0.01 means in time a hydrogen will be present as an ion or as part of a water the probability that a hydrogen exists as an ion is 0.01 means thein that aThe hydrogen exists asprobabilidad anofion is 0.01 means of a probability water molecule. actual probability atom tiempo, unofátomo de una en 100 de 100 being anhidrógeno ion and 99tiene chances out ofa hydrogen 100 of being part 22 that at any given in time, aa hydrogen atom has 11 chance molecule. Since 1moment g of water contains 3.46 ×atom molecules, that at any given moment in time, hydrogen atom has chance that at any given time, aprobability hydrogen has 1 chance in pure water existing as ainhydrogen ion is approximately 1.8 ×the ser un pero 99moment probabilidades en 100 de formar parte de una of aion water molecule. The actual of10 a hydrogen atom in 100 of being an ion and 99 chances out of 100 of being part ionization of water can be described statistically. To state that in 100 of being an ion and 99 chances out of 100 of being part –9 inin 100 ofdeprobability being chances out ofapproximately 100 of being part 10 . pure The ofand its partdeofion a water molecule thus molécula agua.an La ion probabilidad real que un átomo de hidrógewater existing as being a99hydrogen is 1.8 × a–9a probability water molecule. actual probability of aa hydrogen atom the thatThe aThe exists an isalrededor 0.01 means of molecule. The probability of atom a water molecule. actual probability aion hydrogen is of almost unity. Stated another way, for every hydrogen ionatom and noof en agua pura exista como un ion hidrógeno es dehydrogen de 10 .water The probability ofhydrogen itsactual being part ofasaof water molecule thus in pure water existing aain hydrogen ion is approximately that at any given moment time, a ion hydrogen atom has 1de chance in pure water existing as hydrogen ion is approximately 1.8 9 1.8 –9water in existing aslaas aprobabilidad hydrogen isevery approximately 1.8 × ×× hydroxide ion in pure water, there are 1.8 billion or 1.8 × 10 wa. De este modo, de que forme parte una 1.8 × 10 ispure almost unity. Stated another way, for hydrogen ion and –9 –9 –9 .. The probability of its being part of awater water molecule in of being 99 chances ofions 100 of part The probability of its being part of a de water molecule thus 10 9thus 10 . 100 The probability ofcasi itsand being part of1.8 aout molecule thus ter10 molecules. ions and hydroxide molécula de agua esan deion la unidad. Dicho otra manera, por hydroxide ionHydrogen in pure water, there are billion ornevertheless 1.8being × 10 wais almost unity. Stated another way, for every hydrogen ion and of a water molecule. The actual probability of a hydrogen atom is almost unity. Stated another way, for every hydrogen ion and is ter almost unity. Stated another way, every hydrogen contribute significantly toion the properties ofagua water. cada ion hidrógeno y cada hidroxilo en pura, hayion 1.8and mil molecules. Hydrogen ions andfor hydroxide ions nevertheless 99 9 1.8 hydroxide ion in water, there 1.8 billion 1.8 × wain pure water existing astoathe hydrogen ion is approximately × hydroxide ion in pure water, there are 1.8 billion or 1.8 × 10 10 wa9pure hydroxide ion pure water, there areare 1.8 billion oror 1.8 ×iones 10 waFor of water, millones odissociation 1.8 ×in10 moléculas de agua. Sin embargo, los hicontribute significantly properties of water. –9 ter molecules. Hydrogen ions and hydroxide ions nevertheless 10 . The probability of its being part of a water molecule thus ter molecules. Hydrogen ions and hydroxide ions nevertheless ter molecules. Hydrogen and hydroxide ions nevertheless drógeno y losdissociation iones hidroxilo contribuyen de manera importante a For ofions water, + properties contribute significantly to the of water. is almostsignificantly unity. Statedtoanother way, every hydrogen ion and contribute significantly to the of water. Hproperties properties OH− for  of the water. lascontribute propiedades del agua. 9 Kwater, = For dissociation of water, hydroxide ion in pure are−1.8 For dissociation of water, there  billion or 1.8 × 10 waHH+ OOH For of water, Para ladissociation disociación del agua, [ ] 2 = and hydroxide ions nevertheless ter molecules. HydrogenK ions ++[H O ] −− − 2OH  of water. Hmolar H+H properties OH where the brackets represent (strictly contribute significantly to the OHconcentrations  K = K = K = speaking, molar activities) and H K[HH is the dissociation constant. where brackets represent molar concentrations (strictly Forthe dissociation of water, O ] O [ 2O22] Since 1 molemolar (mol)activities) of water weighs g, 1dissociation liter (L) (1000 g) of speaking, and K is18the constant. + molar − concentrations where the brackets represent donde los representan molares (estrictawhere the brackets represent molar (strictly concentraciones mol. OH18 concentrations where the brackets concentrations (strictly Hmolar water contains 1000 ÷represent = 55.56 Pure thus(1000 is(strictly 55.56 Since 1corchetes mole (mol) of18 water weighs g, 1water liter (L) g) of K and =and speaking, molar activities) is dissociation constant. mente hablando, y the Kdissociation es la in constante deisdisospeaking, molar activities) and K is the dissociation constant. speaking, molar activities) KaK ishydrogen the constant. molar. Since theactividades probability pure water will water contains 1000 ÷ 18molares) =that 55.56 mol. Pure water thus 55.56 H O [ 2 ]18 Since mole (mol) of water weighs 1liter (L) (1000 of Since 1aSince mole (mol) of water weighs 18 g, 1 liter liter (L) (1000 g) of Since 1 1mole (mol) of water g,g, 1molar (1000 g)g) of exist as hydrogen ion is 1.8weighs × 10–9 ,hydrogen the concentration molar. the probability that a18 in(L) pure water will water contains 1000 ÷18 18 =55.56 55.56 mol. Pure water thus is 55.56 where the brackets represent molar concentrations (strictly water contains 1000 ÷ 18 = 55.56 mol. Pure water thus is 55.56 –9 Pure water contains 1000 ÷ = mol. water thus is 55.56 exist as a hydrogen ion is 1.8 × 10 , the molar concentration molar. Since the probability that aaishydrogen pure water will speaking, molar activities) and the dissociation constant. molar. Since the probability that hydrogen in pure water will molar. Since the probability that aKhydrogen inin pure water will –9 –9 –918 ,, the molar concentration exist ahydrogen ion is ×× Since 1a mole (mol)ion of water weighs g,molar 1molar literconcentration (L) (1000 g) of exist as a hydrogen hydrogen ion is 1.8 10 the concentration exist asas is 1.81.8 × 1010 , the water contains 1000 ÷ 18 = 55.56 mol. Pure water thus is 55.56 molar. Since the probability that a hydrogen in pure water will 9 exist as a hydrogen ion is 1.8 × 10–9, the molar concentration Agua y pH 9 ciación. Puesto que un mol de aguaCHAPTER pesa 182g, Water 1 litro& pH (L) (1 000 g) 9 de agua contiene 1 000 ÷ 18 = 55.56 mol. Así,2el Water agua&pura CHAPTER pH es 55.56 9 molar. Dado que la probabilidad de que un hidrógeno en agua pura –9 CHAPTER Water & pH 99 CHAPTER 2Water Water & pH como hidrógeno esCHAPTER de 1.8 ×is la concentración 2 210 & pH – ofexista H+ ions (orun of ion OH ions) in pure water the ,product of the9 + – molar iones (o–9,de – iones OH ) en agua pura es el producto de probability, 1.8 ×of10OH times the concentration of water, of H+de ions (orH ions) in molar pure water is the product of the –9 la probabilidad, 1.8 × –7 concentración molar de agua, –910 , veces la 55.56 mol/L. The result is 1.0 × 10 mol/L. probability, 1.8 × 10 , times the molar concentration of water, ++ – –7water is 2 the Water & pH + – – ions) of ions (or of OH in pure product the of Hions ions (or of OH ions) in product of the9 mol/L. ElofThe resultado es 1.0 × 10CHAPTER mol/L. –7water of55.56 HH OH ions) pure water is is thethe product ofof the We can(or now calculate for pure water: 55.56 mol/L. result isKin 1.0 ×pure 10 mol/L. –9 –9, times the molar concentration of water, –9 probability, 1.8 × 10 probability, 10,calcular , times molar of water, Ahora es 1.8 posible valor deconcentration Kconcentration para el aguaofpura: probability, 1.8 ×× 10calculate times the molar water, We can now Kelthe for pure water: –7 + − −7 mol/L. –7 –7 55.56 mol/L. The result is H  is × × mol/L. 10 −7  55.56 mol/L. The result is 1.0 × 10 OH 55.56 mol/L. The result 1.01.0 1010 mol/L. + Know =of OH −= −7water: −7 can calculate pure of We HWe ions (or infor pure water We can now calculate K pure water: [HH–+ ions) O]OH for [10  ]10is the product of the can now calculate KK for pure water: 55.56 –9 2 K = = probability, 1.8 × 10 ++,Htimes the molar concentration of water, − 14 − 16 7 7 − − − O−] − = 1.810 55.56 7   −7mol/L 7 [−10 +H [× −× 2OH H 10 = 0.H 018 10 –7 OH 10]−7   OH  ×10 mol/L. 10 10 55.56 mol/L. The result is 1.0     −14 = K KK= == = == 1.8 55.56 = calculate × 10 0.018 ×water: 10 −]16 mol/L Wemolar can now [ 55.56 H2O O] K for The concentration of pure water, [55.56 ]55.56 mol/L, is too [H[H 2O2] −14 −16 great La toThe be significantly affected dissociation. Itmol/L, therefore −14−14 by −16−16 molar concentration of water, 55.56 is is too = × = 0 . 018 10 1 . 8 × 10 = × = 0 . 018 10 1 . 8 × 10 mol/L 755.56 7mol/L, +× 10 del −mol/L concentración es demasiado = 0.018 .810 × −10 Hmolar  OH − = 1agua,  10mol/L   considered to be essentially constant. This constant may great to be significantly affected by dissociation. It therefore is K =concentration =of la grandeThe como para que la disociación afecte55.56 de manera significatimolar water, mol/L, is too The molar concentration ofwater, water, 55.56 mol/L, istoo too The molar concentration of 55.56 mol/L, isK H 2O 55.56 [ ] [ ] therefore be incorporated into the dissociation constant to considered to be essentially constant. This constant may va, de modo que se considera que, en esencia, es constante. Así, esta great significantly affected by dissociation. It therefore is great to be affected by dissociation. It therefore is −14 −16 ion great toto be significantly affected Itproduct therefore provide a be useful new constant Kby termed therefore besignificantly incorporated the constant Kispara to = 0.018 × 10into 1dissociation. .8dissociation × 10the mol/L w= constante constante puede incorporarse en la de disociación Kfor considered to be essentially constant. This constant may considered to be essentially constant. This constant may considered to be essentially constant. This constant may water. Thearelationship KKwwand KKis the shown below: provide useful new between constant termed product for proporcionar una nueva y útil constante (W, ion deconstant water, “agua”) w 55.56 therefore be incorporated into the dissociation to The concentration of water, mol/L, too therefore be incorporated into the dissociation constant K to therefore bemolar incorporated into the dissociation constant KisK to water. The relationship between K and K is shown below: + −del agua. w La relación entre Kw y K se llamada elabe provide useful new termed the ion product for Hiónico constant OH  K K great to significantly affected by dissociation. It therefore is provide a producto useful new constant Ktermed termed the ion product for provide a useful new constant the ion product for w K =be essentially 1constant. .K 8w ×and 10 −16Kmol/L muestra a continuación: + −= w water. The relationship between is shown below:    considered to This constant may H OH water. The relationship between K and K is shown below: water. The relationship between K and K is shown below: w  H O  w w K = [ 2 ] into =the 1.8dissociation × 10 −16 mol/L constant K to therefore be incorporated ++[H O ] −− + + − 2     OOH K w = (KH)H = H  OH−  −16 [HH2OH ]OH provide a useful new termed ion product for  =K −−16−16the mol/L ×× 10 +1..8 mol/L = (K)constant 10 KKKKw= == 8w1 ×8OH 10 mol/L Hbetween O == 1=H.K −16 2O and ]] mol/L H water. The relationship is shown below: = (1.8[H×[2[H 10 .56Kmol/L 22]O ) O )w(55 ( ) ( ( of K are moles ) ) per liter and those of Note that the dimensions + = (K1KH 10 (−55−−.56 +H 2OH  mol/L ) ] =−=mol/L O−=14 H+OH OH 22]O Hmol/L K wKKww= =1(=K.00 )[H.)8×+[2HHO×10 OH−(14   ) 2 −16 −16 = 1.8 × 10 mol/L) K == = .8 ××10 − 16−16mol/L 10 (mol/L mol/L ×O .×8[H 10 mol/L 55 56 mol/L = =1.1811.00 10 mol/L .56..56 mol/L (55()55 ) 2 ] −16 −14 2 K = 11(.K.200 ××210 (mol/L )  perthe 00 10 mol/L OH O H moles [H10 ] =(name 1=.00 mol/L =liter KwNote are moles per .)×As its product )suggests, that the dimensions of K are literion and those of w 2 2 −its 16 name of KwKisw numerically equal to the product the molar concentraare moles per liter . As suggests, the ion product = (1.8 × 10 mol/L 55.56 mol/L ) yand )(mol Note las dimensiones K son por litro las de Kof Note that the dimensions K are moles per liter those of Note that the dimensions of K are moles per liter and those of +que – w son Note that the dimensions ofof Kde are moles per liter and those tions of H and OH : K is numerically equal to the product of the molar concentra2 2 22 w2 22 2 −14 200 por L . Como su nombre lo sugiere, el producto iónico K es K are moles per liter . As its name suggests, the ion product K are moles per liter . As its name suggests, the ion product w + – 1 . 10 mol/L = × ( ) Kmol are moles per liter . As its name suggests, the ion product w w of H and OH : wtions + product −al producto desde el punto de vista numérico de las concentraK is numerically equal to the of the molar concentraKis is numerically equal to the product of the molar concentra    K = H OH Kigual numerically equal to the product of the molar concentraw w    w w – ++ − + ciones molares de H–+: ––y:: OH := KH+are tions and OH Note that the dimensions moles tions of Hand and OH  OH  per liter and those of K w of tions ofof HH OH  2 –7 2 2 –14 2 are moles per liter . As its name suggests, the ion below product AtK25°C, K = (10 ) , or 10 (mol/L) . At temperatures w w ++ − +H − −2 10 ,OH =the –14 –7 2K K Kthan =–14 H OH w product OH  .at = H w K isKnumerically equal to of the molar concentra25°C, is somewhat less and temperatures above Atw 25°C, K = (10 ) , or 10 (mol/L) At temperatures below   w  w w – –14 –14 tions of His+somewhat and OH : 25°C it is greater than 10 . Within the stated limi25°C, Kwsomewhat less than 10 , and at temperatures above –7 2 –14 2 2 –7 –14–14 2 10 2 ))2,–7 2–142.. At At 25°C, K (mol/L) below At 25°C, K=wweffect =w(10 (10 , or or (mol/L) At temperatures below –14 2por A of 25°C, K=(10 =–7)of (10 )10 , 10 o–1410 (mol/L) ;temperatures atemperatures temperaturas At 25°C, Kis , or (mol/L) . At below tations the temperature, K equals 10 (mol/L) forde25°C it greater than 10 . Within the stated limiwsomewhat +–14–14 − –14 –14w 25°C, K is somewhat less than 10 , and at temperatures above 25°C, K is somewhat less than 10 , and at temperatures above     K = H OH –14 2 bajo de 25°C, K es un poco menor de 10 , en tanto que a tempe25°C, K is somewhat less than 10 , and at temperatures above w w solutions w the w   K equalsor10bases. alltations aqueous solutions, of acids We use effect ofeven temperature, (mol/L) for w of w –14 –14 –14–14.. Within 25°C it is somewhat greater than 10 the stated limi25°C it is somewhat greater than 10 Within the stated limiraturas superiores a 25°C es un poco mayor de 10 . Dentro de las 25°C it is somewhat greater than 10 . Within the stated limiKwalltoaqueous calculatesolutions, the pH of acidic and basic solutions. even solutions of acids or bases. We use –14 22 –7of 2 temperature, –14 2equals 10 –14–14 (mol/L) 2below tations of the effect K for At 25°C, K = (10 ) , or 10 (mol/L) . At temperatures tations of the effect of temperature, K equals 10 (mol/L) for limitaciones declaradas del efecto de la temperatura, K es igual a tations of the effect of temperature, K equals 10 (mol/L) for w w w Kw to calculate the pH of acidic and solutions. w w basic –14aqueous 2solutions, all even solutions of acids bases. We use 25°C, Kw issolutions, somewhat less than 10–14,ofand at temperatures above all aqueous solutions, even solutions of acids or bases. We use 10 (mol/L) para todas lassolutions soluciones acuosas, incluso soluciones all aqueous even acids oror bases. We use –14 pH IS THE NEGATIVE LOG OF THE K to calculate the pH of acidic and basic solutions. 25°C it iso somewhat greater than 10 .elWithin the stated limiK to calculate the pH of acidic and basic solutions. de ácidos bases. SepH usa calcular pH de soluciones ácidas K to calculate the ofK acidic basic solutions. w w para and w w pH IS THE NEGATIVE LOG OF of temperature, Kw equalsTHE 10–14 (mol/L)2 for HYDROGEN ION CONCENTRATION y tations básicas.of the effect all aqueous solutions, even solutions acidsTHE or bases. We use HYDROGEN ION CONCENTRATION pH ISTHE THE NEGATIVE LOGof OF pH IS NEGATIVE LOG OF THEwho defined The pH was introduced in 1909 Sörensen, Kwterm to calculate the pH of acidic andbybasic solutions. HYDROGEN ION CONCENTRATION pH as term the negative log of the hydrogen ionSörensen, concentration: The pHEL wasION introduced in 1909 by who defined HYDROGEN CONCENTRATION EL pH ES LOGARITMO pH as the negative log of the hydrogen ion concentration: The term pH was introduced in 1909 Sörensen, who defined The term pH was introduced in 1909 by Sörensen, who defined NEGATIVO DE LA LOG by pH ISpH THE NEGATIVE OF THE pH =CONCENTRACIÓN − H+by The term was introduced inlog 1909 Sörensen, who defined + ion concentration: pH as the negative log of the hydrogen pH as the negative log of the hydrogen ion concentration:   pH = − log H pH as the negative log of the hydrogen ion concentration: DE ION HIDRÓGENO HYDROGEN CONCENTRATION   for many biochemThis definition, whileION not rigorous, suffices ++  Sörensen, ical purposes. calculate the pH asuffices solution: pH == −− definition, while not rigorous, for many biochempH log H of  by pH = −en log H+H ElThis término pH fue introducido 1909 por quien lo definió The term pHTo was introduced inlog 1909 who defined  Sörensen, ical purposes. To calculate the pH of a solution: + como el logaritmo negativo de la concentración de ion hidrógeno: pH as the negative log of the hydrogen ion concentration: 1. Calculate the hydrogen ion concentration [H ]. This definition, while not rigorous, suffices many biochemThis definition, while not rigorous, suffices for many biochemThis definition, while not rigorous, suffices forfor many biochem2.purposes. the base 10the logarithm [H+]. 1.Calculate Calculate the hydrogen ionof concentration [H+]. ical calculate pH aaof solution: ical purposes. To calculate the pH of solution: +solution: ical purposes. ToTo calculate the pH of a Hfound  of [H pH = −logarithm log 3. 2.pHCalculate is the negative of 10 the value in +step the base ]. 2. ++ + ]. Calculate the hydrogen ion concentration 1. Calculate the hydrogen ion concentration [H 1.1. Calculate the hydrogen ion concentration [H[H ].2.]. 3. pH is the negative of the value found in step Esta definición, siwhile bien nowater es10rigurosa, esof suficiente para muchos + many This definition, not rigorous, suffices for biochemFor example, for pure at 25°C, + +]. Calculate the base logarithm 2. Calculate the base logarithm [H 2.2. Calculate the base 1010 logarithm ofof [H[H ]. ]. propósitos bioquímicos; a fin de calcular el pH de una solución: ical purposes. To calculate the pH of a solution: For example, for pureof water at 25°C, pH the the found 3. pH is the negative negative of the value value found in in step step 2. 2. 3.3. pH is is the pH = − negative log H+  of = −the logvalue 10 −7 =found − ( −7in 7.0 2.++ ) =step 1.1.SeCalculate calcula la the concentración de ion hidrógeno [H ].]. hydrogen ion concentration [H −7 For example, for at pure For example, for pure water at 25°C, pH = −for log H+ water =water − log 1025°C, = −+( −7)+ = 7.0 For example, pure at10 25°C, 2. Se calcula el logaritmo base de [H ]. 2. Calculate the base 10 logarithm of [H ]. This value is also known as the power (English), puissant + del valor que −7 ElpH pH ellog en the elpuissant paso ises the negative value found −7 −7 se  =of −−negativo log −−the log 10 −encuentra 77=)in= pH = log H+ = = log 10 −−(7−− =step (French), or potennz (German) of the exponent, hence use 2. This3.3.value as the power (English), known pHpH =is= −also H+H − log 10 = == − 7 .077..00 2. −−14 14    + 2 22 − ( ) of(French), the term “p. or”potennz (German) ofatthe exponent, hence the use For example, pure water 25°C, This value is alsofor known the power (English), puissant This value isalso knownasas asthe thepower power(English), (English),puissant puissant This value of the termis “p. ”alsoknown −7 exponent, (French), potennz (German) of the the use (French), or potennz (German) of the exponent, hence the use (French), oror potennz (German) the exponent, use H+  = −of pH = − log log 10 = − ( −7) hence = hence 7.0 the the term of the term “p. ofof the term “p.“p. ” ”” This value is also known as the power (English), puissant (French), or potennz (German) of the exponent, hence the use 27/11/09 of the term “p.” 12:40:25 drogen ion and or 1.8 × 109 wans nevertheless r. pH = − log H+  This definition, while not rigorous, suffices for many biochemical purposes. To calculate the pH of a solution: 10 1. Calculate the hydrogen ion concentration [H+]. 2. Calculate the base 10 logarithm of [H+]. capítulo 2 Agua y pH 3. pH is the negative of the value found in step 2. traciones de ion hidrógeno que difieren por órdenes de magnitud de otra, esto es, 0.00032 M (pH 3.5) y 0.000000000025 M (pH 10.6). +  =&−pH pH = − log2HWater log 10 −7 = − ( −7) = 7.0 10 CHAPTER Ejemplo 3: ¿Cuáles son los valores de pH para KOH de a) 2.0 × –2 10 mol/L y de b) 2.0 × 10–6 mol/L? El OH– surge a partir de dos 10 CHAPTER 2 Water & pH Este valor también se como la potencia (power [inglés], puisThis value is also known as the power (English), puissant 10 CHAPTER 2 conoce Water & pH + 10 [francés], CHAPTER 2 Water & pH sant o potennz [alemán]) del exponent, exponente,hence de ahí uso + fuentes: KOH y agua. Dado– que el pH está determinado por el [H ] (French), or potennz (German) of the theeluse 10 CHAPTER 2 Water & pH Low pH values correspond to high concentrations of H two(ysources, KOH and water. is determined by the total el pOH por el [OH ] total),Since ambaspH fuentes deben considerar10“p”. CHAPTER deof the term “p.” 2 Water & pH + – –must be and high pH values correspond tohigh lowconcentrations concentrations of of H H++. two total [Hprimer ] (and pOH by the total [OH ]), both sources se. En el caso, a), la contribución del agua al [OH ] total sources, KOH and water. Since pH is determined by the es Low pH values correspond to Los valores de pHcorrespond bajos corresponden a concentraciones altas + Low pH are values to high concentrations of two sources, KOH and water. Since pH is determined by the +H+ + – contribution Acids proton donors to and bases are proton acceptors. considered. In the first case (a), the ofmust water insignificante; es imposible decir lo mismo para el segundo caso, b): and pH values correspond low concentrations of H . total [H ] (and pOH by the total [OH ]), both sources be to +high two sources, KOH and water. Since pH is determined by the Low values correspond to high concentrations of H deand H high , y los valores de pH altos corresponden a concentraciones + + + – – pH values correspond to low concentrations of H . total [H ] (and pOH by the total [OH ]), both sources must be two sources, KOH and water. Since pH is determined by the Low values correspond to high concentrations of H + + – Strong acids (eg, HCl, H SO ) completely dissociate into anthe total [OH ] is negligible. The same cannot be said for the + Acids are proton donors and bases are proton acceptors. considered. In the first case (a), the contribution of water to + and high pH values correspond to low concentrations of H . total [H ] (and pOH by the total [OH ]), both sources must be 2 4 Low correspond to highare concentrations of +H bajas de H pH .arevalues two sources, KOH and water. Since pH is determined by the –contribution Acids proton donors and proton acceptors. considered. In the first case (a), the of to and high pH values correspond to bases lowacidic concentrations of Han. total [H++][OH (and pOH by the ]),cannot both sources must be Concentración ions and cations even solutions (low second case + pH). the –contribution Strong acids (eg, HCl, H2in SOstrongly ) completely dissociate into total is negligible. The[OH same be(mol/L) said for the Acids are proton donors and bases are proton acceptors. considered. In––](b): the first casetotal (a), the of water water to and high pH values correspond to low concentrations of H . total [H ] (and pOH by the total [OH ]), both sources must be Los ácidos son donadores de y las bases son acepto4 protones Strong acids (eg, HCl, H SO ) completely dissociate into anthe total [OH ] is negligible. The same cannot be said for the Acids are proton donors and bases are proton acceptors. considered. In the first case (a), the contribution of water to – Weak acids dissociate only in acidic solutions. Simi2strongly 4)partially ions and cations even in acidic solutions (low pH). second case (b): Strong acids (eg, HCl, H SO completely dissociate into anthe total [OH ] is negligible. The same cannot be said for the are proton donors bases aresolutions proton (a)contribution of water (b) to res deAcids protones. Loseven ácidos ej., HCl, H2SO4)acceptors. se disocian considered. In 2fuertes 4and(p. – the first case (a), the ions and cations in strongly acidic (low pH). second case (b): Strong acids (eg, HCl, H SO ) completely dissociate into anthe total [OH ] is negligible. The same cannot be said for the larly, strong bases KOH, NaOH)—but not (low weak bases the – 4 Weak acids dissociate only partially in acidic solutions. Simiions and cations even in acidic solutions pH). second case (b): Concentration Strong acids (eg, HCl,(eg, Hy22strongly SO ) completely dissociate into ancannot be(mol/L) said for -6the 3/26/2009 8:51:10 PMtotal [OH ] is negligible. The same por completo hacia aniones cationes, incluso en soluciones fuerte4 Weak acids dissociate only partially in acidic solutions. Simiions and cations even inKOH, strongly acidic solutions (low pH). second casede(b): Molaridad KOH 2.0 × 10-2 2.0 × 10 (eg, Ca[OH] )—are completely dissociated at high pH. Many larly, strong bases (eg, NaOH)—but not weak bases Weak acids dissociate only partially in acidic solutions. Simi2 Concentration (mol/L) ions and cations even in strongly acidic solutions (low pH). second case (b): mente acídicas (pH bajo). Por su parte, los ácidos débiles se diso(a) (b) larly, strong bases (eg, KOH, NaOH)—but not weak bases Weak acids dissociate only partially in acidic solutions. SimiConcentration (mol/L) biochemicals are (eg, weak acids. Exceptions phosphory(eg, Ca[OH] )—are completely dissociated atinclude high pH. larly, strong bases KOH, NaOH)—but not weak bases [OH-] de KOH 2.0 × 10-2 2.0 × 10-6 Concentration (mol/L) Weak acids dissociate only partially inDeacidic solutions. Simician sólo en parte en soluciones acídicas. modo similar, lasMany bases 2 (eg, Ca[OH] )—are completely dissociated at high pH. Many (a) (b) larly, strong bases (eg, KOH, NaOH)—but not weak bases lated intermediates, whose phosphoryl group contains two Concentration (mol/L)2.0 × 10–6 biochemicals are weak acids. Exceptions phosphory(eg, Ca[OH] )—are completely dissociated at high pH. Many Molarity of KOH 2.0 × 10–2 larly, strong (eg, KOH, NaOH)—but not weak bases fuertes (p. ej.,22bases KOH, NaOH) —no así las include bases débiles (p. ej., (a) (b)× 10-7 Concentration (mol/L) [OH-] de agua 1.0 × 10-7 1.0 biochemicals are weak acids. Exceptions include phosphory(a) (b) –6 (eg,dissociable Ca[OH] )—are completely dissociated at high pH. Many protons, the first of which is strongly acidic. –2 2 are lated intermediates, whose phosphoryl group contains two biochemicals weak acids. Exceptions include phosphoryMolarity 2.0 × 10 2.0 × 10 – of KOH –2 (eg, Ca[OH] )—are completely dissociated at high pH. Many Ca[OH] )— están por completo disociadas a pH alto. Muchas sus(a) (b) [OH ] from KOH 2.0 × 10 2.0 × 10-6–6 2 2 are weak –2 lated intermediates, whose phosphoryl group contains two -2 biochemicals acids. Exceptions include phosphoryof ]KOH 2.0 (a) × 10 10 2.02.1 × 10 The following examples illustrate how to calculate the pH Molarity Total [OH 2.00001 × –6 10 –6 dissociable protons, the first of which is strongly acidic. lated intermediates, whose phosphoryl group contains two Molarity of KOH 2.0 × 10×–2 2.0 (b) × 10 biochemicals are weak acids. Exceptions include phosphorytancias bioquímicas son ácidos débiles. Las excepciones son los in– –2 –6 [OH[OH ] from KOH 2.01.0 × 10 2.01.0 × 10 – dissociable protons, the first of which is strongly acidic. lated intermediates, whose phosphoryl group contains two ] of from water ×–2 10–7 ×–6 10–7 of acidic and basic solutions. Molarity KOH 2.0 × 10 2.0 × 10 – –2 –6 The following examples illustrate how to calculate the pH dissociable protons, the first of which is strongly acidic. [OH KOH 2.0 × × 10 10–2 2.0 × 10 –6 latedThe intermediates, whose phosphoryl group contains two termediarios fosforilados, cuyo illustrate grupo fosforilo contiene dos proto–] from –2 –6 Molarity ofvez KOHque se ha llegado a 2.0 2.0 × 10 [OH ] from KOH 2.0 × 10 2.0 × 10 following examples how to calculate the pH dissociable protons, the first of which is strongly acidic. – –7 –7 Una una decisión acerca de la importan1: examples What is the pH of ais solution whose hydrogen [OHTotal water 1.0 × 10–2× 10–2 1.02.1 × 10 – of acidic and basic solutions. TheExample following illustrate to calculate the pH –] from [OH ] 2.00001 ×–610–6 dissociable protons, the first of which strongly acidic. nes disociables, el primero de los cuales eshow fuertemente acídico. [OH ]] from KOH 2.0 × 10–7 2.0 10 –4 [OH water 1.0 × 1.0el× ×pH 10–7 –2 –6como se of acidic and basic solutions. The following examples illustrate how to whose calculate the pH –7 –7 cia –––de la –contribución por el agua, factible calcular [OH ] from from KOH 2.0es × 10 10 2.0 × 10 concentration is 3.2 × 10 mol/L? [OH ] from water 1.0 × 10 1.0 × 10 Example 1: What is the pH of a solution hydrogen of ion acidic and basic solutions. –2 –6 The following examples illustrate howcalcular to whose calculate the pH Los ejemplos que siguen ilustran cómo el pH de soluTotal– [OH ] 2.00001 × –7 10 2.1 × 10–7 Example 1: What is the pH of a solution hydrogen [OH ] from 1.0 × 10 1.0 × 10 of acidic and basic solutions. –4 – water –2 –6 mencionó. Total 2.00001 × 10 2.1 × 10 – [OH–] –7 –7 ion concentration is 3.2 × 10 mol/L? Example 1: What is the pH of a solution whose hydrogen –2 [OH ] [OH from] water 1.0 × 10 1.0 of acidic andy basic solutions. ciones ácidas básicas. + Total 2.00001 × 10 the significance 2.1 × × 10 10–6 of the –4 Once a– ejemplos decision has been reached about Hof a solution whose hydrogen ion concentration is 3.2 × 10 pH = − log Example 1: What is the pH –4 mol/L? Los anteriores suponen que la base fuerte KOH está ion Ejemplo concentration is es 3.2is 10pH Total [OH–] 2.00001 × 10–2 2.1 × 10–6 Example What of asolución solutioncuya whose hydrogen 1: 1: ¿Cuál el×the pH demol/L? concentración –2 –6 –4 +una contribution by water, pH may be calculated as 2.1 above. Total [OH ] 2.00001 × 10 × 10 Once a decision has been reached about the significance of the mol/L? ion concentrationpH is 3.2 10 −4 por completo disociada en solución y que, entonces, la concentra  = −=×log H –4–4mol/L? −10 3 .2 × 10 ) log +(mol/L? is 3.2 deion ionconcentration hidrógeno espH de 3.2 ×× 10 Once aaThe decision has been reached the –examples above assume that the the strong base of contribution by water, pH may calculated as Once decision has been reached about the significance of the is fue igual a labe delabout KOH mássignificance la above. presente alKOH princición de iones OH pH = =− − log log H H++  −4 −4 − 3 2 10 = log . × ( ) contribution by water, pH may be calculated as above. Once a decision has been reached about the significance of the H+(3 .2) −−4log (10 ) = − log pH = − log completely dissociated in solution and that the concentration The above examples assume that the strong base KOH is de contribution by water, pH may be calculated as above. pio en el agua. Esta suposición es válida para soluciones diluidas − = log OnceThe a decision has been assume reached that about the significance of the pH = − log 3H..2 2× 10 −−44 )) −4 =− log ((3 × 10 –above examples the strong base KOH is contribution by water, pH may be calculated as above. of OH ions was thus equal to that of the KOH plus that pres3 2 10 = − log . − log ( ) completely dissociated in solution and that the concentration The above examples assume that the strong base KOH isque ( bases o ácidos fuertes, no así para bases o ácidos débiles. Dado ) = −0 . 5 + 4 . 0 − log = contribution by water, pH may be calculated as above. 4 ((333...222)××−10 −4 ) 10 − = − log log −4 ) ( completely dissociated in solution and that the concentration ( The above examples assume that the strong base KOH is – − 10 = log ent initially in the water. This assumption is valid for dilute ) 3 2 10 = − log . − log of OH ions was thus equal to that of the KOH plus that pres( ) completely dissociated in solution and that the concentration los electrólitos débiles sólo se disocian un poco en solución, es nece( ) = .3.5 = −0 5 + 4.0 The −4 – above examples assume that the strong base KOH is of OH ions was thus equal to that of the KOH plus that pres3 2 10 = − log . − log ( ) completely dissociated in solution and that the concentration – ( ) solutions of strong bases acids but not for weak bases = −0 ..5 ent initially inconstante the water. This assumption is valid for dilute of OH ionsla was thus equal toorthat of the KOH plus that pres- or sario usar desolution disociación para calcular la concentra− log −0 5+ +(34 4.2..0 0) − log (10 −4 ) completely dissociated in and that the concentration = 3.5 – ent initially in the water. This assumption is valid for dilute ions thus equal toacids that of the KOH plus that presOH Example 2: What + was – or acids. Since weak electrolytes dissociate only slightly in solu−0is.5the + 4pH .0 of a solution whose hydroxide of – [H = 3.5 solutions of strong bases but not for weak bases or ent initially in the water. This assumption is valid for dilute ción de ] (o de [OH ]) producida por una molaridad dada de un OH ions was thusbases equalortoacids that of the KOH plus that pres= −0 .5×+10 4.0–4 mol/L? We first define a quan- of = 3.5 solutions of strong but not for weak bases ent initially in the water. This assumption is valid for dilute ion concentration is 4.0 + forslightly – or tion, we must use the dissociation constant to calculate the Example 2: What= is3.5 the pH of a solution whose hydroxide acids. Since weak electrolytes dissociate only in solusolutions of strong bases or acids but not weak bases or ácido (o base) débil antes de calcular el [H ] total (o el [OH ] total) ent initially in theelectrolytes water. Thisdissociate assumption is valid forindilute – Example 2: the pH aa solution whose hydroxide + – but not = is –4 of Since only solusolutions ofelweak strong bases or [OH acids forslightly weak bases or pOH that isisequal to10−log [OH ]We andfirst that may be derived acids. concentration of [H ] (or ]) produced by a given molariontity concentration 4.0 × mol/L? define a quanExample 2: What What is3.5 the pH of solution whose hydroxide tion, we must use the dissociation constant to calculate the acids. Since weak electrolytes dissociate only slightly in soluy después pH. –4 solutions of strong bases or acids but not fortoweak basesthe or ion concentration is 4.0 × 10 We first define aaderived quan+ Example 2: is the of a–]solution whose hydroxide –4 mol/L? tion, use the dissociation constant calculate acids. Since weak electrolytes onlybyslightly solu+ (or – before the definition of K−log : pH ity we of amust weak acid base) calculating totalin [H ] (or tity pOH that is What equal to [OH and may be ionfrom concentration is es 4.0 × 10 mol/L? Wethat first define quanconcentration of [H ] (or [OHdissociate ]) produced molarw tion, we must use the dissociation constant toa given calculate the Example 2: What is the pH of a solution whose hydroxide Ejemplo 2: ¿Cuál el pH de una cuya concentración –solución acids. Since weak electrolytes dissociate only slightly in solu–4 + – tity pOH that equal be – of ion concentration is 4.0 ×:−log 10–4–4 [OH mol/L? Wethat firstmay define quan–] and concentration [Hthe [OH by atotal given tion, must use dissociation constant calculate + the +] (or –]) pH. ])of and subsequently from the definition Kto pOH that is is to −log [OH ] and may be aaderived derived itytotal ofwe a [OH weak (or base) before calculating [Hmolar] (or ] (or [OH ]) produced produced byto given molarion 4.0 10 mol/L? Wethat first quandetity ionconcentration hidroxilo esequal deisof 4.0 × define una can- concentration w×10 +mol/L? −14 sedefine tion, we must acid use[H the constant toaácidos calculate –− Primero + the + dissociation – Los grupos funcionales que son from the definition of K :    10 K = H OH = tity pOH that is equal to −log [OH ] and that may be derived ity of a weak acid (or base) before calculating total [H concentration of [H ] (or [OH ]) produced by a given molar– +] (or w w:    –  – from the definition of K + – total [OH ]) and subsequently pH. ity of a weak acid (or base) before calculating total [H ] (or tity pOH is igual equalato [OH andpuede that may be derived tidad poH that que es –log [OH ] y ]que derivarse a partir concentration w −log of subsequently [H ] (or [OHpH. ]) produced by a given molar– + from the definitionKofw K total [OH and débiles gran importancia fisiológica = w:H++  OH−−  = 10 −−14 ity of a weak acid (or base) before calculating total [H ] (or –])tienen + total [OH ]) and subsequently pH. 14 the definition defrom la definición de KwK:ofw K ityFunctional of a weak acid Groups (or base) before calculating total [H ] (or : +  OH−  = 10 −14 Therefore That Are Weak Acids – total [OH ]) and subsequently pH. Kw = = wH H+  OH−  = 10 −14 Muchas bioquímicaspH. poseen grupos funcionales que son – total [OHsustancias ]) andGroups subsequently K w = H+  OH−  = 10 −14 Therefore Functional Thatcarboxilo, Are Weak Acids Have Great Physiologic Significance +H   OH  −= 10 −14 ácidos o bases débiles. Los grupos los grupos amino y los K = logw H  + log Therefore Functional Groups That Are Weak Acids  OH   = log10 Therefore Functional Groups That Are Weak Acids Have Great Physiologic Significance Many biochemicals possess functional groups that are ésteres de fosfato, cuya segunda disociación cae dentro del weak rango + − −14 Therefore Functional Groups That Are Weak Acids log H+  + log OH−  = log10 −14 Have Great Physiologic Significance Por ende Have Great Physiologic Significance Therefore Functional Groups That Are Weak Acids acidsbiochemicals or bases. Carboxyl groups, amino groups, andare phosphate H+  + log OH−  = log10 −14 fisiológico, están presentes en proteínas y ácidos nucleicos, en casi log or Many possess functional groups that weak log H+  + log OH−  = log10 −14 Have Great Physiologic Significance Many biochemicals possess functional groups that are weak esters, whose second dissociation falls within the physiologic todas las coenzimas y en casi todos los metabolitos intermediarios.     Have Great Physiologic Significance 10 log H + log OH = log acids or bases. Carboxyl groups, amino groups, and phosphate Many biochemicals possess functional groups that are weak or +  −  = log10 −14 log H  + log acids or bases. Carboxyl groups, amino groups, and phosphate pH +OH pOH Many possess functional groupsacids, that are or  = 14 range, are present in proteins and nucleic mostweak De este modo, el conocimiento de la disociación dephysiologic ácidos ycoenbases esters, whose second dissociation falls within acids orbiochemicals bases. Carboxyl groups, amino groups, and phosphate or Many biochemicals possess functional groupsthe that are weak oor esters, whose second dissociation falls within the physiologic acids or bases. Carboxyl groups, amino groups, and phosphate zymes, and most intermediary metabolites. Knowledge of the pH + pOH = 14 débiles es básico para entender la influencia del pH intracelular sorange, are present in proteins and nucleic acids, most coenesters, whose second dissociation falls within the physiologic acids orare bases. Carboxyl groups,and amino groups, andmost phosphate or To solve the problem by this= approach: pH 14 range, present in proteins nucleic acids, coenesters, whose second dissociation falls within thebasic physiologic dissociation of weak acids and bases thus is to underpH + + pOH pOH = 14 bre la es tructura y la actividad biológica. Las separaciones basadas zymes, and most intermediary metabolites. Knowledge of the range, are present in proteins and nucleic acids, most coenesters, whose second dissociation falls within the physiologic pHby + pOH =−414 To solve the problem this approach: zymes, and most metabolites. Knowledge of the range, are present in acids proteins acids, most coenthe of intracellular pH on structure and bioenstanding carga, laintermediary electroforesis ybases lanucleic cromatografía detointercambio dissociation of influence weak andand thus is basic underzymes, andcomo most intermediary metabolites. Knowledge of the +4mediante pOH = 14este método: OH− pH range, are present in proteins and nucleic acids, most coenTo solve the problem by this approach: = . 0 × 10 Para resolver el problema To solve the problem by this approach: dissociation of weak acids and bases thus is basic to underzymes, and most intermediary metabolites. Knowledge of the de logic activity. Charge-based separations such asdeelectrophoresis iónico, tam bién se entienden mejor en términos la conducta standing the influence of intracellular pH on structure and biodissociation of weak acids and bases thus is basic to under− −4 zymes, and most intermediary metabolites. Knowledge ofbiothe To solve theOH problem this  = 4=.by 0−×log 10 −4approach: standing influence of intracellular on OH−  −pOH dissociation of weakchromatography acids and basespH thus isstructure basic toand underandactivity. ionthe exchange also are understood To solve theOH problem this approach: disociación de grupos funcionales. logic Charge-based separations such asbest electrophoresis standing the influence of intracellular pH on structure and bio- in 4 ..by 0 × 10 −4 dissociation of weak acids and bases thus is basic to underOH−  = = 4 0 × 10 − +electrophoresis logic activity. Charge-based separations such as standing thethe influence of intracellular pH onbest structure and bio− −4  OH pOH terms of dissociation behavior functional groups. )understood recibe la denomiLa exchange especie protonada (p. ej., HAalso oof R—NH and ion chromatography are in logic activity. Charge-based separations such as 3 electrophoresis OH =− .0 × 10 −4 ) 4=.log 0−×log 10 standing the influence of intracellular pH onbest structure and bio− = −(44− OH pOH = − log − + OH  and ion exchange chromatography also are understood in = 4 . 0 × 10 logic activity. Charge-based separations such as electrophoresis  pOH = − log OH−  −4 We term the protonated species (eg, HA or R—NH nación de ácido, en tanto que la especie no protonada (p. ej., terms of the dissociation behavior of functional groups. and ion exchange chromatography also are best understood inA3– )o −4 − log .0( 4×.010 logic activity. Charge-based separations such as electrophoresis ( ) 4OH 10 = − log − o g pOH = = − log −4lo – ) ( ) terms of the dissociation behavior of functional groups. and ion exchange chromatography also are best understood in + −  −4 ) the acid the unprotonated species Agroups. orpuede R—NH )) its ..0 R—NH ) esand suthe base conjugada. De modo similar, hacerse We term protonated species (eg, HA or R—NH terms of dissociation behavior of functional 2the pOH = = − log and ion exchange chromatography also are(eg, best understood =− − log log ((4 4OH 0× ×10 10 −4 ) −4 32in +– –species We term the protonated (eg, HA or R—NH = − 4 ..0 og (10 −4 ) terms of the dissociation behavior of functional groups. –su +) or .0lo =log −0.((60 +)×−410 conjugate base. Similarly, we may refer to a base (eg, A referencia a una base (p. ej., A o R—NH ) y ácido conjugado 3its = − log 4 0 the acid and the unprotonated species A or R—NH ) We term the protonated species (eg, HA or R—NH ) 2 ) −4 10 −4 terms of the dissociation behavior of functional = lo o – groups.+ 2 3+ =− − log log (((4 4..0 0)×−10 + the acid and the unprotonated species A or R—NH ))– 3its = og g )((10 −4 )) ) WeHA term the protonated species (eg, HA or R—NH – R—NH ) and its conjugate acid (eg, HA or ). Repre(p.R—NH ej., o R—NH ). Los ácidos débiles representativos (colum2 .4 +4.04).0− lo .360 =− −=0log + conjugate base. Similarly, we may refer to a base (eg, A or the acid and the unprotonated species (eg, A or R—NH its 3 2 3 We term theSimilarly, protonated species (eg, HA or R—NH 2– 3 ) = log 4.04).0− lo og (10 −4 ) – base ( 0 60 . =− − + conjugate base. we may refer to a (eg, A or the acid and the unprotonated species (eg, A or R—NH ) its + – weak acids their conjugate (center), nasentative izquierda), susconjugate bases (left), conjugadas (al centro) ybase valores (coog (10 ) 2 or R—NH ) and its acid (eg, HA or ).de Repreconjugate base. Similarly, we may refer to R—NH a–bases (eg, ApK aand 4.60(+4.04).0− lo = 3−.0log Now: the acid ) its 2 and the unprotonated species (eg, A or R—NH 3+ 2 – or R—NH )) weak and its conjugate acid (eg, HA or R—NH −.04.60 + 4.0 3 = conjugate base. Similarly, we may refer to a base (eg, A +). ReprepK values (right) include the following: lumna derecha) incluyen los siguientes: 2 3 – sentative acids (left), their conjugate bases (center), and R—NH and its conjugate acid (eg, HA or R—NH ). Repre3 4 . = a 2 = −0.60 + 4.0 conjugate base.acids Similarly, we may refer to a base Aand or 3(eg, Now: + sentative (left), their conjugate (center), Ahora: R—NH ) weak and itsacids conjugate acid (eg, HA orbases R—NH ). ReprepH= =3.14 4 − pOH = 14 − 3.4 Now: 2 weak 3+ pK values (right) include following: sentative (left),the their conjugate bases (center), and R—NH ) and its conjugate acid (eg, HA or R—NH ). Reprea Now: = 3.4 − 2 weak 3 pK values (right) include sentative acids (left),the their conjugate bases (center), Ra  CH COOH R following: CH pK a = and 4−5 = 10 .6 pH = 14 − pOH = 14 − 3.4 2 2  COO pK values (right) include following: Now: sentative weak acids (left),the their conjugate bases (center), and a pH = 14 − pOH = 14 − 3 . 4 Now: − + pK values (right) include the following: pH = 10 14.6− pOH = 14 − 3.4 R   COOH R  CH  COO p K = 4 − 5− 10 a CH R  CH  NH R  CH  NH p K = 9 a a 2 2 (right) 2 2 3 include the following: values −2 a CH  COOH The examples illustrate R  R  CH COO p K 4 − 5 pH =above 14.6− pOH = 14 −how 3.4 the logarithmic pH pK − 10 a = 2  COOH 2 − + R  CH R  CH  COO p K = 4 − = 10 . 6 pH = 14ilustran − pOH de = 14 − 3.4 la escala de pH loa R CH223  NH2 − pK p HCO = −610 .54 H2CH CO22 3 NH3 + a K=a 9 Los anteriores qué scale facilitates reporting and comparing ionpH con- RRR   CH  COOH R  CH  COO p K = 4 − 5 = 10.6 Theejemplos examples above illustrate howmodo the hydrogen logarithmic  CH R  CH pK a = 9 − 10 2  NH3 + 2  NH2 − a 2 − 2 − 2 NH − COOH R R  CH Kp = 94=.4−710 COO p = 10de .6 The examples above illustrate the logarithmic pH a K= 2  NH 3+ 2 2 HCO pK H2 CO garítmica facilita lareporting emisión reporte la comparación concenH2CH PO HPO .52 centrations that differ orders ofyhow magnitude fromde one anotha a 6 3 4 3− 4 scale facilitates and comparing hydrogen ion conThe examples aboveby illustrate how the logarithmic pH R  CH  NH R  CH p K aa = =6 9.4− 10 HCO pK H − 2  NH2 2 CO 3− 2  NH3 + 3− 2 scale facilitates and comparing hydrogen ion conHCO H COCH R R  CH p 9..24− 10 examples above illustrate how the logarithmic pH er,The ie, 0.00032 M (pH and Mone (pH 10.6). 3 3 − 2  NH2 3 H22 PO HPO pK K aa = = 76 centrations that reporting differ by3.5) orders of0.000000000025 magnitude from anothscale facilitates reporting and comparing hydrogen ion con4− 2 4− 2 The examples above illustrate how the logarithmic pH HCO p K = 6 4 H CO H PO HPO p K = 7 ...2 –2con2 − − 2 a 3 3 centrations that differ by orders of magnitude from one anothscale facilitates reporting and comparing hydrogen ion a = 7 4 We443 express the relative strengths of weak acids in Example 3: What are the0.000000000025 pHmagnitude values of (a) ×ion 10 mol/L H22PO HPO pKand 24 HCO 6bases CO er, ie, facilitates 0.00032 Mreporting (pH 3.5) and M2.0 (pH 10.6). centrations that differ by orders of from one anotha 43 − 2 scale and comparing hydrogen con− –6 0.000000000025 – –210.6). H PO HPO p K = 7 . 2 er, ie, 0.00032 M (pH 3.5) and M (pH centrations that differ by orders of magnitude from one anothof their dissociation Shown below are the exa bases 2 terms 4− 4constants. −2 KOH and of (b) 2.0 × 10 mol/L KOH? The OH arises from We express the relative strengths of weak acids and in Example 3: What are the pH values of (a) 2.0 × 10 mol/L er, ie, 0.00032 M (pH 3.5) and 0.000000000025 M (pH 10.6). H2PO 4 HPO 4 pK a = 7.2 centrations that differ by orders ofvalues magnitude from one –2anothWe the relative of and in 3: are the pH (a) 2.0 10 mol/L er, ie,Example 0.00032 MWhat (pH×3.5) and 0.000000000025 M–× terms of their constants. Shownacids below arebases the exWe express express thedissociation relative strengths strengths of weak weak acids and bases in KOH and of (b) 2.0 10–6 mol/L KOH?of arises from Example 3: What are the pH values ofThe (a)OH 2.0 ×(pH 10–210.6). mol/L er, ie, 0.00032 M (pH 3.5) –6and 0.000000000025 M– (pH–210.6). terms of their dissociation constants. Shown below are the exKOH and of (b) 2.0 × 10 mol/L KOH? The OH arises from We express the relative strengths of weak acids and bases in mol/L Example 3: What are the pH values of (a) 2.0 × 10 –6 – terms of their dissociation constants. Shown below are the ex–2 from KOHExample and of (b) 2.0 × 10 mol/L KOH? The OH arises We express the relative strengths of weak acids and bases in 3: What are the pH values of (a) 2.0 –× 10 mol/L terms of their dissociation constants. Shown below are the exKOH and of (b) 2.0 × 10–6 mol/L KOH? The OH arises from –6 – terms of their dissociation constants. Shown below are the ex- 27/11/09 KOH 02 Bender.indd 10 and of (b) 2.0 × 10 mol/L KOH? The OH arises from ations (strictly ation constant. (L) (1000 g) of er thus is 55.56 pure water will r concentration Forejemplo, example, foragua purepura water at 25°C, Por para a 25°C, 12:40:56 11 11 11 11 11 11 11 11 11 Las fuerzas relativas de ácidos y bases débiles se expresan en pKa para un ácido puede determinarse al añadir 0.5 equivalente de be representa) for two The pK for an acid may determined by adding 0.5 equivapressions for the dissociation constant (K The an be by equivapressions for the dissociation dissociation constantA(K (K aa) ) for two representarepresentaThe pK pK for an acid acid may may be determined determined by adding adding 0.5 equivafor two pressions the constant función de susfor constantes de disociación. continuación se muesálcali poraaa for equivalente de ácido. El pH resultante será 0.5 igual al pKa +a + . tive weak acids, R—COOH and R—NH lent of alkali per equivalent of acid. The resulting pH will equal ) two representaThe pK for an acid may be determined by adding 0.5 equivapressions for the dissociation constant (K +for tive weak acids, R—COOH and R—NH . lent of alkali per equivalent of acid. The resulting pH will equal 3 ) for two representaThe pK for an acid may be determined by adding 0.5 equivapressions for the dissociation constant (K a)3 for a for tive acids, R—COOH . lent of alkali per equivalent of acid. The resulting pH will equal and R—NH tran las weak expresiones para la constante de disociación (K ) para dos del ácido. two representaThe pK an acid may be determined by adding 0.5 equivapressions for the dissociation constant (K a a a ) for two representaThe pK for an acid may be determined by adding 0.5 equivapressions for the dissociation constant (K aa for representaThe pK acid may be determined by adding 0.5 equivapressions for theR—COOH dissociationand constant (K+++aaa.)3 for two the pK the tive weak acids, R—NH lent alkali per equivalent a a of the ofan the acid. tive weak acids, R—COOH and R—NH ...−− + H++ 3+. lent of alkali equivalent of acid. The resulting pH will equal theof pK the acid. acid. ácidos débiles representativos, R—COOH y333++R—NH aa of per tive weak acids, R—COOH and R—NH lent ofpK alkali per equivalent of of acid. acid. The The resulting resulting pH pH will will equal equal tive weak weak acids, R—COOH and R—NH lent of alkali per equivalent of acid. The resulting pH will equal R  COOH  R  COO − + H+ tive acids, R—COOH and R—NH . lent of alkali per equivalent of acid. The resulting pH will equal R  COOH  R  COO 3 R  COOH  R  COO +H the pK of the acid. 3 the pK of the acid. a of the acid. − + the pK − + − + a the pK of the acid. R  COOH  R  COO H − the pK R  +++ aaa of the acid.de Henderson-Hasselbalch COO R R COO + −  −−−H R  COO H+ La ecuación R  COOH COOH   R  COO +++ H H The Henderson–Hasselbalch Equation CHAPTER 22 Water CHAPTER Water & & pH pH CHAPTER 2 2Water & capítulo Agua ypH pH CHAPTER 2 Water & pH CHAPTER 2 Water & pH CHAPTER 22 Water & pH CHAPTER Water & pH CHAPTER 2 Water & pH R   R  COOH COOH  R  COO H+ +H H COO R R COO K = − + K − + K aaa = =R  H ]  COO − + R  COOH R  COO H − + [ R  COOH COOH R  COO H − R [COO COO H+ ] R K = R  H K = K = K aaaaΝΗ =  3[+++R  COOH ]] 22 +++ HHH+++ RK ΝΗ  R ΝΗ = R  COOH R  R ΝΗ R  COOH COOH R aΝΗ 33[[R R ΝΗ R  COOH ] 2+ ++  + +  R ΝΗ ++ R ΝΗ H  33 + 22 R ΝΗ H + [ ] R ΝΗ  R ΝΗ + H  +++ 2 R ΝΗ +  2 R ΝΗ ΝΗ R ΝΗ ΝΗ ++ H H H+ +H [R ΝΗ 2 R  R 2 ]22  K a333 = = K ++ + K aa [=R H ΝΗ +  R ΝΗ R ΝΗ ΝΗ 22 ] ++ R [ ] H 3 R ΝΗ H +  R ΝΗ H 3 2 R ΝΗ [ ]   K =   2 R ΝΗ H  2 ++ 3  K = K = K aaaa = = R  ΝΗ K R ΝΗ 33 + + a R ΝΗ R  R ΝΗ 3+   ΝΗ Since the numeric values of K for weak acids are negative ex33 weak   Since the numeric values of K for acids a Since the numeric values of Ka for weak acids are are negative negative exex- a ponential numbers, we express Kweak as pK , where Since the numeric values of K for acids are negative ponential numbers, we express K aa as aa,, where Since the numeric values of K for weak acids are negative exponential numbers, wenuméricos express asKpK pK where Dado los valores de para ácidos débilesexson Since the numeric values of K for weak are negative exa acids Since theque numeric values of Kaaaa for forKweak weak acids are negative negative exa a Since the numeric values of K acids are exponential numbers, we express K as pK , where a ponential numbers, we express K pK aaa as aa, where números exponenciales negativos, K se expresa como pK , donde a ponential numbers, numbers, we we express express K−aa as as pK where pK K =K logpK K a aa,, where ponential p pK aa = =− −a log log K Ka a a p pK Ka = =− − log log K Ka a p K − log K + a = pK Kto = a− −as log K aaais Note pH = K Note that that pK pKaa is is related relatedp toaaa K K aslog pH is to to [H [H++]. ]. The The stronger stronger the the Note that pK is related to K a as pHais to [H ]. The stronger the a a + Note que pK se relaciona con K como el pH se relaciona con acid, the lower is its pK value. a a + Note that pK is related to K as pH is to [H ]. The stronger the acid, the lower is its pK value. + a Note that pK is related to K as pH is to [H ]. The stronger the a a + acid, the lower is its pK value. Note that pK pKaa más is related related toesaaK Kelaa as as pH más is to to bajo [H+]. + Note that pK is related to K as pH is to [H stronger [H ]. Mientras fuerte ácido, elof pKthe . Note that is to pH is [H ].esThe The stronger the pK is to express the relative strengths both acids aand acid, the its pK value. aa is aa pKlower is used used to express the relative strengths ofvalor bothde acids and aa is acid, the lower is its pK aa value. pK used to express the relative strengths of both acids and acid, the lower is its pK value. a aa value. El pK se usa para expresar las fuerzas relativas tanto de ácidos acid, the lower is its pK bases. For any weak acid, its conjugate is a strong base. Similarly, a pK is used express strengths of both acids and a the bases. For anyto weak acid, itsrelative conjugate is aa strong strong base. Similarly, pK is used to express the relative strengths of both acids and aa For bases. any acid, its conjugate is base. Similarly, pK is used to express the relative strengths of both acids and pK is used used toweak express the relative strengths of relative both acids and a is como deconjugate bases. Para cualquier ácido su conjugado esSimilarly, una base pK to the relative strengths of both acids and the of aaaexpress strong base is aaa débil, weak acid. The strengths bases. For weak acid, its conjugate is a strong base. aa any the conjugate of strong base is weak acid. The relative strengths bases. For any weak acid, its conjugate is a strong base. Similarly, the conjugate of strong base is weak acid. The relative strengths bases. For any weak acid, its conjugate is a strong base. Similarly, bases. For any weak acid, its conjugate is a strong base. Similarly, fuerte; de modo similar, el conjugado de una base fuerte es un ácido bases. For any weak acid, its conjugate is a strong base. Similarly, of bases are expressed in terms of the pK of their conjugate acids. the aaa strong base is aaa weak The relative strengths ofconjugate bases are areof expressed in terms of the theacid. pKaa of of their conjugate acids. the conjugate of strong base is weak acid. The relative strengths bases expressed in terms of pK their conjugate acids. the conjugate of strong base is weak acid. The relative strengths theof conjugate of acompounds strong base iscontaining a weak weak acid. The relative strengths a The débil. Las fuerzas relativas de bases se expresan en términos del the conjugate of a strong base is a acid. relative strengths For polyprotic more than one dissociable of their conjugate acids. of bases are expressed in terms of the pK For polyprotic compounds containing more than one dissociable of bases are expressed in terms of the pK of their conjugate acids. a For polyprotic compounds containing more than one dissociable of their conjugate acids. of bases are expressed in terms of the pK ofaproton, bases are expressed insubscript terms ofcompuestos the pKaaa of of their their conjugate acids. de sus ácidos conjugados. Para polipróticos que conpK conjugate acids. of bases are expressed in terms of the pK a numerical is assigned to each dissociation in For polyprotic compounds containing more than one dissociable a proton, numerical subscript is assigned assigned to each dissociation in For polyprotic compounds containing more than one dissociable aa numerical subscript is each dissociation in For polyprotic compounds containing more than one dissociable Forproton, polyprotic compounds containing more to than one dissociable tienen más de un protón disociable, se asigna un número subíndice For polyprotic compounds containing more than one dissociable order of relative acidity. For a dissociation of the type proton, a numerical subscript is assigned to each dissociation in order of relative acidity. For a dissociation of the type proton, a numerical subscript is assigned to each dissociation in order of relative acidity. For a dissociation of the type proton, numerical subscript is assigned to each dissociation in proton, numerical subscript is assigned assigned to each each dissociation in a proton, cada disociación en orden dea acidez relativa. Para una disociación aaarelative numerical subscript is to dissociation in order of acidity. For of the type order of relative acidity. For aaa++dissociation dissociation of the type + order of relative acidity. For dissociation of the + type R  NH → R  NH + H order of relative acidity. For dissociation of the type + + del tipoof relative acidity. R  NHa33dissociation → R  NH2 of + Hthe type order For R NH 3 → R  NH2 2 + H The The Henderson–Hasselbalch Henderson–Hasselbalch Equation Equation describe el the comportamiento de The Henderson–Hasselbalch Equation The Henderson–Hasselbalch Equation Describes Behavior Describes the Behavior The Henderson–Hasselbalch Equation Describes the Behavior ácidos débiles y&amortiguadores Describes the of Weak Acids Buffers Describes the Behavior Behavior of Weak Acids & Buffers La ecuación de Henderson-Hasselbalch seisdeduce a continuación. The Henderson–Hasselbalch equation ofThe Weak Acids & & Buffers Buffers Henderson–Hasselbalch equation derived below. The Henderson–Hasselbalch equation is is derived derived below. below. of Weak Acids Un ácido débil, HA, se ioniza como sigue: A weak acid, HA, ionizes as follows: The Henderson–Hasselbalch equation is derived below. A as The Henderson–Hasselbalch equation is derived below. A weak weak acid, acid, HA, HA, ionizes ionizes as follows: follows: The Henderson–Hasselbalch equation is derived below. The Henderson–Hasselbalch Henderson–Hasselbalch equation is derived derived below. below. The equation is A weak acid, HA, ionizes as follows: + − A weak acid, HA, ionizes as follows: + + A− − A weak acid, HA, ionizes as follows: HA  H + A weak acid, HA, ionizes as follows: HA   H + +A A A weak acid, HA, ionizes as follows: HA H HA  H++ + A −− + − HA  H A + + − HA  H + A + − LaThe constante de equilibrio esta esis The equilibrium constant forH this dissociation HApara  + disociación A for dissociation HA  + A The equilibrium equilibrium constant constant forHthis this dissociation is is The equilibrium constant for this dissociation is + − The equilibrium constant for this dissociation is + − The equilibrium constant for this dissociation is     H A +dissociation − The equilibrium equilibrium constant constant for for this is H  A  The is K =this H dissociation  A  + − K + − =H K aaa = A + −  HA  H A H A H H++  [[[HA A −− ]]] HA = K A = K a     a = K = [HA K aa = ] K HA a da LaCross-multiplication multiplicación cruzada gives HA ]] Cross-multiplication gives [[HA Cross-multiplication gives Cross-multiplication gives Cross-multiplication gives + − Cross-multiplication gives H Cross-multiplication gives gives =K H++  A A −−  = K a [HA HA ] Cross-multiplication H A    = K aa [HA ] + − H =K H+++  A A −−−  = K a [HA HA ] = H A + =– K A −  = K aa [[HA HA ]] H[A both sides by SeDivide dividen ambos lados entre −−−]: Divide both sides by ]:  ]:K aa HA Divide both sides byH[A [A ]:A [A − − Divide both sides by [A −]: Divide both sides by [A ]: Divide both sides by [A ]: [HA Divide both both sides sides by by [A [A−−]: ]: + HA ] Divide H+  = K [HA ] = K[HA = aaa  ] − K =K [[HA A] −−  A HA A K HA ]  K a K aa  A − − K K aa A −−−      A A  log SeTake tomathe el logaritmo ambos lados: Take the log of of both bothdesides: sides: Take the log of both sides: H H H+  + + H + = = H = H++  = = H  Take the log of both sides: + + Take the log of both sides: + + Take the log of both sides: R  NH →R  NH + H + + HA ]  Take the the log log of of both both sides: sides:++ R  NH R  NH + H 3 2  [HA + → + Take 3 2 R  NH → R  NH + H + + R  NH → R  NH + H 3 2 the pK is the pH at which the concentration of the acid H+  = log = log  K K a [HA− ]  3 → R 2concentration R  NH NH + H the pK is the pH at which the of the acid log a 3 2 the pKaa +is the pH at which the concentration of the acid a log H H  = log log K[HA   a  A]] −−   +  [[HA + equals A HA R—NH that of the base R—NH . + the pK is pH at which the concentration of the acid HA H  = A]    R—NH equals that of the base R—NH log log +  K aa HA 33+ the 22.. the pK the pH at which the concentration of the acid log H log aa is R—NH equals that of the base R—NH + = K  the pK is the pH at which the concentration of the acid − log H log + +   the pK is the pH at which the concentration of the acid 3 the 2 log H H  = = log log  K K aa A ael − +is elR—NH pKapK esFrom pH al cual la del ácido R—NH es acid igual the pH atofconcentración which the concentration of+++]]3the   [HA ] log − the above equations that relate K to [H and to the equals that the base R—NH . − a A aa + From the above equations that relate K to [H and to the   +  A a R—NH equals that of the base R—NH . − 33+ 22. + equals From the above equations that relate Kaa to [H ] and to the A log R—NH that of the base R—NH  K + HA ]   [HA A R—NH equals that of the base R—NH .  = log 3base 2and + a R—NH la concentrations de la R—NH . equals that of the base R—NH .  = log K + log a 3 2 of undissociated acid its conjugate base, 2 equations +] From the above that relate K to [H and to the aa + log 3 2and = log K concentrations of undissociated acid its conjugate base, + HA From the above equations that relate K to [H ] and to the [ aa to + concentrations of equations undissociated acid and its conjugate base,  HA A]] −−−  From the above equations that relate K [H ] and to the [ +  HA From the above that relate K to [H ] and to the a to [H ] and A HA A]  AFrom partirthe de las ecuaciones anteriores que la Katobase, con above equations that relate Krelacionan theel = log K log [HA when log log aa + concentrations of undissociated acid and conjugate = K + aaits when − log log concentrations of undissociated acid and its conjugate base, = log log K K aa + + log log A − concentrations of undissociated undissociated acidnoand and its conjugate conjugate base,  +when − = concentrations of undissociated acid and its conjugate base, A − a  [H ] y con las concentraciones de ácido disociado y su base conconcentrations of acid its base,  A −  A  when Multiply through by –1: –1: − A SeMultiply multiplica todo por when − through by –1: R  = R  COO = R  COOH when −  Multiply through by –1: [ ]  COO R  COOH  when jugadas, when cuando R  COO  = [R  COOH] − Multiply through by –1: − Multiply through by –1: R   COO = R  COOH − Multiply through by –1: [[[HA [RRR  ] = R  COO COOH HA Multiply through through by by –1: –1: ++  R  COO =  COOH HA ]]] Multiply R  COO COO −−  = = [[R  COOH COOH]] − log H = − log K − log + R or when    − log H = − log K − log a − or when     a − log H = − log K log or when [[HA ]] −−−  a A ++  HA HA A  H  = A − log − log K − log + or when HA + − = − K − [ a + log H log log or when + − = − K −  NH NH = R R  NH NH  or when [[RRR  − log log H H+  = =− − log log K K aaa − − log log A −−−− ]  oor cuando or when − when = R   NH222 ]] =  NH333 +  a A pK for −log [H++]+andA−log  K , respectively; − + Substitute pH and + A−log SeSubstitute sustituye el pHand y elpK pKaa afor para –log[H ] y–log +] and  KK  pH −log respectively; NH NH + a, aarespectivamen[[RRRR  ]] ==== RRRR   NH  NH 2 3 Substitute pH and pK for −log [H[H ] and −log K ,, respectively; +  2 3  NH  NH + a a then  NH  NH 2 3 + [ ]  then   R  NH22 = R  NH33  then: + then Substitute pH and pK for −log [H ] and −log K , respectively; te; entonces: then: + for −log −log [H [H++]]] and and −log −log K Kaa,,, respectively; respectively; Substitute and pK then: pH Substitute pH and and pK pKaaaa for for −log [H and −log K respectively; aa, respectively; then + Substitute pH for −log [H ] and −log K then then: a a then K then: entonces then K aa = = H H++  HA then: [ ] then HA K = H then: a ++  then: log [HA− ] pH = = pK K − log pH H  K + pH = p pK aaa − − log K = aa = + [[HA H  K = H + HA   A]] −−  K = H a HA A Thus, when the associated (protonated) and dissociated (conK aa (protonated) = H  HA Thus, and A]  [HA log pH = p K Thus, when when the the associated associated (protonated) and dissociated dissociated (con(conaa −  log K − pH = p − log A pH = =p pK K aa − − log −  − jugate base) species are present at equal concentrations, the pH Thus, when the associated (protonated) and dissociated (conA − jugate base) species are present at equal concentrations, the a  Thus, when the associated (protonated) and dissociated (conA Inversion of the last term removes the minus sign and and jugate species present equal concentrations, the Dewhen estebase) modo, cuandoare las(protonated) especies at asociada (protonada) y(condisoThus, when the associated (protonated) and dissociated (conA −  the LaInversion inversiónof delthe último término elimina el signo de menos y da last term removes minus sign A Thus, when the associated (protonated) and[H dissociated (con+ Inversion of the last term removes Thus, the associated and dissociated +  the minus sign and ] is numerically prevailing hydrogen ion concentration jugate base) species are present at equal concentrations, the +] is numerically prevailing hydrogen ion concentration [H jugate base) species are present at equal concentrations, the gives the Henderson–Hasselbalch equation: prevailing hydrogen ion concentration [H ] is numerically ciada (base conjugada) están presentes a iguales concentraciones, la jugate base) species are present at equal concentrations, the Inversion of the last term removes the minus sign and la ecuación de Henderson-Hasselbalch: gives the Henderson–Hasselbalch equation: jugate base) species are present at equal concentrations, the Inversion of the last term removes the minus sign and gives the Henderson–Hasselbalch equation: + jugate base) species are present at equal concentrations, the Inversion of the last term removes the minus sign and equal dissociation constant, K the of Inversion of the the last last term term removes removes the minus minus sign sign and and prevailing hydrogen ion concentration is equal to the constant, K If the logarithms of both Inversion of the prevailing hydrogen ion concentration [H ises numerically numerically equal to to the the dissociation constant, Kaaa... If If [H the++++]]]]logarithms logarithms of both both concentración dedissociation ion hidrógeno [H+] prevaleciente igual desde el gives is numerically prevailing hydrogen ion concentration [H the Henderson–Hasselbalch equation: − prevailing hydrogen ion concentration concentration [H is numerically gives the Henderson–Hasselbalch equation: −  prevailing hydrogen ion [H ] is numerically gives the Henderson–Hasselbalch equation: A − sides of the above equation are taken and both sides are multigives the Henderson–Hasselbalch equation:   A equal to the dissociation constant, K . If the logarithms of both   sides of the above equation are taken and both sides are multigives the Henderson–Hasselbalch equation:   A equal to the dissociation constant, K . If the logarithms of both   a Ifand sides of thedissociation above equation are taken both sides multipunto de vista numérico a la constante Ka.are Si both se toequal to the dissociation constant, K the logarithms logarithms of both −  pH equal to the constant, K If disociación, the logarithms of both pH = =p pK K aa + + log log equal toby the–1, dissociation constant, Kaaaa...de If the of −  A  ] pH = p K plied the expressions would be as follows: − sides of the above equation are taken and sides are multia + log A plied by –1, the expressions would be as follows: −HA [ sides of the above equation are taken and both sides are multiA plied by –1, thede expressions would be asboth follows: HA man los logaritmos ambos lados de la ecuación anterior y se mulsides of the above equation are taken and both sides are multi  ]  A sides of the above equation are taken and both sides are multipH = p K aa + log  A[−HA sides of the above equation are taken and both sides are multiK pH = p + log  plied by –1, the expressions would be as follows: pH = =p pK K aa + + log log [HA plied by –1, the expressions would be as follows: +como ] pH tiplican por –1, las expresiones quedan sigue: plied by –1, the expressions would be as follows: HA + a   [ plied by –1, the expressions would be as follows: HA Ka = = Hbe plied by –1, the expressions would HA ]] K [ HA K aa = H H+ as follows: The Henderson–Hasselbalch equation has great predicThe Henderson–Hasselbalch equation has gran greatvalor predic+ La ecuación de Henderson-Hasselbalch tiene preThe Henderson–Hasselbalch equation has great predic+ =H log H++  K + K = H aa K= + log − log −   + K = H + tive value in protonic equilibria. For example,     log a − K = − H The Henderson–Hasselbalch equation has great predicK aa K= =aa =H H−log H  tive value in protonic equilibria. For example, − log The Henderson–Hasselbalch equation has great predicK dictivo en equilibrios protónicos. Por ejemplo, tive value in protonic equilibria. For example, The Henderson–Hasselbalch Henderson–Hasselbalch equation equation has has great great−predicpredica    ++   The Henderson–Hasselbalch equation has great predicThe −] When an acid is half-neutralized, log − log K = − + tive value in protonic equilibria. For example, −  log log K = − H 1.Cuando When anmitad acid is exactly half-neutralized, [Aneutralizada, = [HA]. [HA]. + H tive value in protonic equilibria. For example, + 1.1. la deexactly un ácido está exactamente[A log log K = − H 1. When an acid is exactly half-neutralized, [A ]] = = [HA]. + tive value in protonic equilibria. For example, +] log K log K aaaa = = as − log H Since −log −log K Ka is is−−−−defined defined as pK , and −log [H ] defines pH,   tive value in protonic equilibria. For example, +   Since pK , and −log [H defines pH, log − H − value in protonic equilibria. For example, a Since −log Kaa is defined as pKaaa, and Under these conditions,  −log [H ] defines pH, tive − −1. When an acid is exactly half-neutralized, [A ] = [HA]. Under these conditions, − 1. When an acid is exactly half-neutralized, [A ] = [HA]. ] = [HA]. En estas condiciones, [A − Under these conditions, + 1. When an acid is exactly half-neutralized, [A the equation may be rewritten as, and 1. When When an an acid acid is is exactly exactly half-neutralized, half-neutralized, [A [A−]]] = = [HA]. + + Since −log K is defined as pK −log [H the equation may be rewritten as +] defines 1. = [HA]. [HA]. Dado que –log se define como –log [H define alpH, pH, Under Since −log K is defined as pK and defines pH, the equation may rewritten [H Under these conditions, a y −log Since −log KaaaaKis isa be defined as pKasaaaa,,,pK and −log [H++]]]] defines defines pH, these conditions, − Since −log K defined as pK and −log [H pH, − Under these conditions,  A Under these conditions, − the equation may be rewritten as a a   1 A  Under these conditions, equation may be rewritten as  lathe ecuación puede reescribirse como  1 p K = pH A the equation may be rewritten as  pK Kas = pH pH the equation equation may may be be rewritten rewritten as −−  = pH aaa = p the pH = =p pK K aa + + log log =p pK K aa + + log log 1 = =p pK K aa + +0 0 A  ] = pH = p K p K = p K −HA a + log a + log a + 0 A 1 − 1 [ A p K = pH HA 1 − 1     A p K = pH a HA 1 [ ] pH = p K + log = p K + log = p K + 0   1 A aa is ie, the pK of an acid group is the pH at which the protonated p K = pH   pH = p K + log = p K log = p K + a a a 1 p K = pH + 0 ie, the pK of an acid group the pH at which the protonated   a pH = =p pK K aaa + + log log [HA ] = = pK aaa + log 1 = =p pK K aaa + +0 pK aa is= the pH pH at which the protonated ie, the pKaa of an acid group pH = p K + log + log log = p K + pH HA 1 aat half-neutralization, a a. 0 [[laHA ]] = ppKKde Therefore, pH pK HA and unprotonated species are present at equal concentrations. ie, the pK of an acid group is the pH at which the protonated HAmitad 1= Therefore, at half-neutralization, pH = pK and unprotonated species are present at equal concentrations. aa.. 1 Therefore, at half-neutralization, pH = pK esto es, el pK de un grupo ácido es el pH al cual las especies protoPor ende, cuando un ácido está neutralizada, ie, the pK an acid group is the pH at which the protonated aa of and unprotonated species are present at equal concentrations. a a ie, the the pK pKaa of of an an acid acid group group is is the the pH pH at at which which the the protonated protonated ie, Therefore, at half-neutralization, pH = pK . and unprotonated species are present at equal concentrations. a Therefore, at half-neutralization, pH = pK and unprotonated species are present at equal concentrations. a.. nada y no protonada están presentes a concentraciones iguales. El . pH = pK Therefore, at half-neutralization, pH = pK and unprotonated species are present at equal concentrations. a a Therefore, and unprotonated unprotonated species species are are present present at at equal equal concentrations. concentrations. Therefore, at at half-neutralization, half-neutralization, pH pH = = pK pKaaa.. and Murray_CH02_PTR.indd 11 Murray_CH02_PTR.indd Murray_CH02_PTR.indd 11 11 Murray_CH02_PTR.indd 11 Murray_CH02_PTR.indd 11 Murray_CH02_PTR.indd 11 Murray_CH02_PTR.indd 11 11 Murray_CH02_PTR.indd 02 Bender.indd 11 3/26/2009 8:51:16 PM 3/26/2009 3/26/2009 8:51:16 8:51:16 PM PM 3/26/2009 8:51:16 8:51:16 PM PM 3/26/2009 3/26/2009 8:51:16 PM 3/26/2009 8:51:16 PM 3/26/2009 8:51:1612:42:45 PM 27/11/09 12 12 CHAPTER 2 Water & pH capítulo 2 Agua y pH 12 2.2.Cuando CHAPTER 2 Water &− pH − When the ratio [A ]/[HA] = 100:1, la proporción [A ]/[HA] = 100:1, al inicio, uno=de cuatro de pH;base) se calcula el cambio de pH weak acid,enpK 5.0, and valores its conjugate is initially at one a 0.1 meq the de KOH a 1 meq cada soofproducido four pH cuando values. se Weañaden will calculate pH shift thatderesults lución: when 0.1 meq of KOH is added to 1 meq of each solution: weak acid, pKa = 5.0, and its conjugate base) is initially at one of four pH values. We will calculate the pH shift that results pH 5.00 to 15.37 5.37 5.60 5.86 when 0.1Inicial meq of KOH is5.00 added meq of each solution: Initial pH 5.60 5.86 A −    − ]/[HA] = 100:1, 2. When the pHratio = pK[A a + log [HA ] pH = pK a + log 100 A − / 1 = pK a + 2 pH = pK a + log − −[HA ] When the ratio [A ]/[HA] = 1:10, 3.3.Cuando la proporción [A ]/[HA] = 1:10, pH = pK a + log 100 / 1 = pK a + 2 pH = pK a + log 1/ 1 0 = pK a + ( −1) −− equation evaluated at ratios ofde[A[A ]/[HA] SiIflathe ecuación se is evalúa a proporciones ]/[HA]ranging que vapH = p K + log 1 / 1 0 = p K + − 1 ( )arepHplotted, 3 −3 ay se a from 10 10 to310 the calculated pHvalores values the rían desde hastaand 10−3 grafican los de calculados, graph describes titration curve for para a weak acid elresulting gráfico resultante describethe la curva de titulación un ácido If the equation is evaluated at ratios of [A−]/[HA] ranging (Figure 2–4). débil (fig. 2-4). 3 from 10 to 10−3 and the calculated pH values are plotted, the resulting graph describes the titration curve for a weak acid Las soluciones de ácidos (Figure 2–4). of Weak Solutions Acids débiles & Their Salts yBuffer sus sales amortiguan Changes in pH cambios del pH Las soluciones de ácidos débiles sus conjugados Solutions of weak acidso bases orAcids bases and their conjugates exhibit Solutions ofcapacidad Weak &yTheir Saltsdelmuestran amortiguación, la para resistir a un cambio pH desbuffering, the ability to resist a change in pH following addition Buffer Changes in pH pués de la adición de un ácido o una base fuerte. Dado que muchas of strong acid or base. Since many metabolic reactions are ac- 0.8 0.8 1.0 0.6 1.0 0.6 0.8 0.4 0.8 0.4 0.6 0.2 0.6 0.2 0.4 0 0.4 0 0.2 FIGURE 2–4 2 3 4 5 6 7 8 Carga netaCarga neta meq de álcali meqañadidos de álcalipor añadidos meq depor ácido meq de ácido Solutions ofbyweak acids or their conjugates exhibit reacciones metabólicas se acompañan liberación o captación de companied the release or bases uptakeand ofdeprotons, most intracellubuffering, the ability to resist a change in pH following addition protones, casi todas las reacciones intracelulares están amortigualar reactions are buffered. Oxidative metabolism produces CO2, of acid or Sinceacid, many metabolic reactions are acdas. Elanhydride metabolismo oxidativo produce COif anhídrido ácido 2, el thestrong of base. carbonic which not buffereddel would companied by the release or uptake of protons, most intracellucarbónico, que de no amortiguarse produciría acidosis grave. produce severe acidosis. Maintenance of a constant pH involvesEl , lar reactions are Oxidative metabolism produces CO mantenimiento debuffered. un pH bicarbonate, constante comprende amortiguación mebuffering by phosphate, and proteins, which accept 2 the anhydride of carbonic acid, which if not buffered would diante fosfato, bicarbonato y proteínas, que aceptan o liberan protoor release protons to resist a change in pH. For experiments usproduce severe acidosis. Maintenance of aexperimentos constant pH involves nes resistir a unorcambio del constant pH. En dondebyse ingpara tissue extracts enzymes, pH is maintained buffering by phosphate, bicarbonate, and proteins, which accept usan extractos de tejido o enzimas, el pH constante se mantiene por the addition of buffers such as MES ([2-N-morpholino]ethaneor release protons to resist a change in pH. For experiments usmedio de la adición de amortiguadores como MES (ácido [2-Nsulfonic acid, pKa 6.1), inorganic orthophosphate (pKa2 7.2), ing tissue(N-hydroxyethylpiperazine-Nʹ-2-ethanesulfonic extracts or enzymes, constant pH isinorgánico maintained bya2 morfolino] etanosulfónico, pKa 6.1), ortofosfato (pK HEPES acid, the addition of buffers such as MES ([2-N-morpholino]ethane7.2), HEPES (ácido N-hidroxietilpiperazina-Nʹ-2-etanosulfónico, pKa 6.8), or Tris (tris[hydroxymethyl] aminomethane, pKa 8.3). sulfonic pKrelative 6.1), inorganic orthophosphate (pKa2El 7.2), pK o acid, Tris (tris[hidroximetil] aminometano, pKamajor 8.3). valor a 6.8) The value of pK to the desired pH is the detera a (N-hydroxyethylpiperazine-Nʹ-2-ethanesulfonic acid, deHEPES pK respecto al pH deseado es el principal determinante de cuál a minant of which buffer is selected. pKa 6.8), or Tris (tris[hydroxymethyl] aminomethane, pK 8.3). amortiguador se selecciona. Buffering can be observed by using a pH meter while a The value pKaacid relative to the desired pHmedidor is the deterLa amortiguación se al usar2–4). un de pHcalcumientitrating a of weak or observa base (Figure We canmajor also minant of which buffer is selected. tras se titula un ácido o una base débil (fig. 2-4). También es factible late the pH shift that accompanies addition of acid or base to Buffering can be observed by using a adición pH meter while calcular la desviación de acompaña la de ácido a buffered solution. InpH theque example, the abuffered solution (ao titrating weak acid or base (Figure 2–4). We also amorticalcubase a una asolución amortiguada. En el ejemplo, la can solución late the shift thatpK accompanies addition of acidseor base to guada (unpH ácido débil, conjugada) encuentra, a = 5.0, y su base a buffered solution. In the example, the buffered solution (a 1.0 0.2 pH 0 0 Titration 2 3 curve 4 for 5 an6acid7of the 8 type HA. The heavy dot in the center of the curve indicates pH the pKa 5.0. FIGURE2-4 2–4 Curvas Titration for an acid the type HA. HA. The heavy FIGURA de curve titulación para unofácido del tipo in the centerenofelthe curve pKael 5.0. Eldot punto grueso, centro deindicates la curva,the indica pKa de 5.0. Murray_CH02_PTR.indd 12 02 Bender.indd 12 Murray_CH02_PTR.indd 12 0.50 0.50 0.70 0.70 0.80 0.80 0.88 0.88 [HA]inicial Initial pH [HA] initial 0.50 5.00 0.50 0.30 5.37 0.30 0.20 5.60 0.20 0.12 5.86 0.12 ]/[HA])inicial ([A]]/[HA]) [A ([A initial 1.00 0.50 1.00 2.33 0.70 2.33 4.00 0.80 4.00 7.33 0.88 7.33 –– – initial 3. When the ratio [A−]/[HA] = 1:10, 1.0 – ]inicial [A[A–]initial La adición demeq 0.1 meq de KoH produce 0.30 0.20 Addition of 0.50 0.1 of KOH produces [HA]initial ]final ([A [A[A–]]/[HA]) initial final [HA]final [HA] final 0.60 1.00 0.60 0.80 2.33 0.80 0.12 0.90 4.00 0.90 0.98 7.33 0.98 0.20produces 0.10 Addition of 0.40 0.10.40 meq of KOH 0.20 0.10 0.02 0.02 –– –– ]/[HA])final [A([A ]]/[HA]) ([A final final 1.50 0.60 1.50 4.00 0.80 4.00 9.00 0.90 9.00 – ]/[HA])final log[HA] ([A–]/[HA]) log ([A final final 0.18 0.40 0.18 0.60 0.20 0.60 0.95 0.10 0.95 1.69 0.02 1.69 pH – final ]/[HA]) ([A Final pH final 5.18 1.50 5.18 5.60 4.00 5.60 5.95 9.00 5.95 6.69 49.0 6.69 ∆pH – ]/[HA])final log ([A ∆pH 0.18 0.18 0.60 0.60 0.60 0.95 0.95 0.95 1.69 1.69 5.18 5.60 5.95 6.69 – Final pH 49.0 0.98 49.0 ∆pH 0.60 de OH of 1.69 Note cambio de meq añadido depende Notice thatque the el change in0.18 pHpH perpor milliequivalent OH− added del pH inicial. La solución se resiste a cambios del pH con mayor depends on the initial pH. The solution resists changes in pH eficacia a valores de pH cercanos al pK . Una solución de un most effectively at pH values close to the pKa. A solution ofácido a a Notice that the change in pH per milliequivalent of eficaz OH− added débil y su base conjugada amortigua de manera más en the el ranweak acid and its conjugate base buffers most effectively in depends initial go range de pHon dethe pK ± 1.0 unidades de pH. resists changes in pH pH pK ± a1.0 pHpH. unit.The solution a mostFigure effectively at pH values close to the pKaon .en Aone solution of a del La figura 2-4 también ilustra carga neta una molécula 2–4 also illustrates thelanet charge molecule weak acid and its conjugate base buffers most effectively in the no ácido como una función del pH. Una carga fraccionaria de –0.5 of the acid as a function of pH. A fractional charge of –0.5 does pH range pK ± 1.0 pH unit. significa que una molécula individual porta una carga fraccionaria not mean thata an individual molecule bears a fractional charge Figure also illustrates thede charge on onehas molecule sinothat quethe la2–4 probabilidad dethat 0.5 que una molécula dada tenga but probability ises0.5 anet given molecule a unit of the acid as a function of pH. A fractional charge of –0.5 does una carga negativa de unidad en cualquier momento dado en el negative charge at any given moment in time. Consideration not mean that an individual molecule bears a fractional charge tiem po. La consideración de la carga neta sobre macromoléculas of the net charge on macromolecules as a function of pH probut that the probability is 0.5 that a given molecule has a unit como una función del pH proporciona la such base para de sevides the basis for separatory techniques as iontécnicas exchange negative charge at any given moment in time. Consideration paración, como la cromatografía de intercambio de ion y la elecchromatography and electrophoresis. oftroforesis. the net charge on macromolecules as a function of pH provides the basis for separatory techniques such as ion exchange chromatography andDepends electrophoresis. Acid Strength on − 0.95 La fuerza del ácido depende Molecular Structure de la estructura molecular Many of biologic interest possess Acidacids Strength Depends on more than one dissociMuchos ácidos interés biológico poseen más de un grupo que se ating group. Thedepresence of adjacent negative charge hinders Molecular Structure disocia. La presencia de carga obstaculiza la libethe release of a proton from negativa a nearbyadyacente group, raising its pK . a Many of protón biologic interest possess more than one dissoci- su ración de un grupofor cercano, lo que aumenta This isacids apparent from desde the pKun values the three dissociating a ating group. The de presence adjacent negative charge hinders pKa. Esto queda manifiesto a citric partir acid de los(Table valores de pK groups of phosphoric acid of and 2–2). The ef- los a para the of proton from a nearby group, raising its pK . tresrelease queacharge se pueden disociar de ácido fosfórico y ácido cítrico fect ofgrupos adjacent decreases with distance. The second pK a a This is apparent the pK values for thegroups three dissociating (cuadro 2-2). El from efecto de latwo carga adyacente disminuye con laitsdisfor succinic acid, which has methylene between a groups phosphoric acid and citric acid (Table Thegrupos eftancia. of Elgroups, segundoispK el ácido succínico, que tiene dos carboxyl 5.6, whereas the second pKa2–2). for glutaric a para fect ofwhich adjacent decreases with es distance. metileno entre sus carboxilo, de group, 5.6, The mientras acid, hascharge onegrupos additional methylene is second 5.4. quepKela sefor succinic acid,elwhich two methylene groups gundo pKa para ácido has glutárico, que tiene un grupobetween metilenoitsadicarboxyl cional, esgroups, de 5.4. is 5.6, whereas the second pKa for glutaric acid, which has Depend one additional group, is 5.4. pK Values onmethylene the Properties a of the Medium Los valores de pKa dependen The pK of a functional group is alsoProperties profoundly influenced a pK Values Depend on dea las propiedades delthe medio by the surrounding medium. The medium may either raise or of the El pK deMedium un funcional athe lower pK grupo depending on también whetherestá theprofundamente undissociated influido acid a The of a circundante. functional group is also profoundly por pK el medio El medio puede aumentar influenced o disminuir el a by surroundingdemedium. medium may raise or es pKthe si el ácidoThe no disociado o su either base conjugada a dependiendo lower the pK depending the dieléctrica undissociated la especie cargada. El efectoondewhether la constante sobreacid el pKa a 3/26/2009 8:51:17 PM 27/11/09 12:43:07 3/26/2009 8:51:17 PM capítulo 2 CuaDro 2-2 Fuerzas relativas de ácidos seleccionados de importancia biológica1 Agua y pH 13 los interiores de proteínas, están muy afectados por su ambiente local, lo que incluye la presencia o ausencia de agua. Ácidos monopróticos Fórmico pK 3.75 Láctico pK 3.86 Acético pK 4.76 Ion amonio pK 9.25 Succínico Glutárico pK1 6.37 pK2 10.25 pK1 4.21 pK2 5.64 pK1 4.34 pK2 5.41 Cítrico pK1 2.15 pK2 6.82 pK3 12.38 pK1 3.08 pK2 4.74 pK3 5.40 Nota: los valores tabulados son los valores de pKa (–log de la constante de disociación) de ácidos monopróticos, dipróticos y tripróticos seleccionados. 1 se observa al añadir etanol a agua. El pKa de un ácido carboxílico aumenta, mientras que la de una amina disminuye, porque el etanol aminora la capacidad del agua para disolver una especie cargada. De este modo, los valores de pKa de grupos que se están disociando en 02 Bender.indd 13 ■ ■ ■ ■ Ácidos tripróticos Fosfórico ■ ■ Ácidos dipróticos Carbónico rESuMEN ■ El agua forma agrupaciones de enlaces de hidrógeno consigo misma y con otros donadores o aceptores de protones. Los enlaces de hidrógeno explican la tensión superficial, viscosidad, estado líquido a temperatura ambiente y el poder solvente del agua. Los compuestos que contienen O, N o S pueden servir como donadores o aceptores de enlaces de hidrógeno. Las macromoléculas intercambian enlaces de hidrógeno de superficie interna por enlaces de hidrógeno con agua. Las fuerzas entrópicas dictan que las macromoléculas exponen regiones polares a una interfaz acuosa y resguardan regiones no polares. Los puentes de sal, las interacciones hidrofóbicas y las fuerzas de van der Waals participan en el mantenimiento de la estructura molecular. El pH es el logaritmo negativo de [H+]. Un pH bajo caracteriza a una solución ácida, mientras que un pH alto denota una solución básica. La fuerza de ácidos débiles se expresa mediante el pKa, el logaritmo negativo de la constante de disociación de ácido. Los ácidos fuertes tienen valores de pKa bajos, en tanto que los débiles muestran valores de pKa altos. Los amortiguadores resisten a un cambio del pH cuando se producen o consumen protones. La capacidad amortiguadora máxima ocurre ± 1 unidad de pH a uno u otro lado del pKa. Los amortiguadores fisiológicos son bicarbonato, ortofosfato y proteínas. rEFErENCIaS Reese KM: Whence came the symbol pH. Chem & Eng News 2004;82:64. Segel IM: Biochemical Calculations. Wiley, 1968. Stillinger FH: Water revisited. Science 1980;209:451. Suresh SJ, Naik VM: Hydrogen bond thermodynamic properties of water from dielectric constant data. J Chem Phys 2000;113:9727. Wiggins PM: Role of water in some biological processes. Microbiol Rev 1990;54:432. 27/11/09 12:43:09 Sección i eStructuraS y funcioneS de proteínaS y enzimaS c Aminoácidos y péptidos Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Además de proporcionar las unidades monómero a partir de las cuales se sintetizan las cadenas polipeptídicas largas de proteínas, los l-α-aminoácidos y sus derivados participan en funciones celulares tan diversas como la transmisión nerviosa y la biosíntesis de porfirinas, purinas, pirimidinas y urea. Los polímeros cortos de aminoácidos llamados péptidos desempeñan funciones importantes en el sistema neuroendocrino como hormonas, factores liberadores de hormona, neuromoduladores o neurotransmisores. Si bien las proteínas sólo contienen l-α-aminoácidos, los microorganismos elaboran péptidos que contienen tanto d- como l-α-aminoácidos. Varios de estos péptidos tienen valor terapéutico, entre ellos los antibióticos bacitracina y gramicidina A, así como el antitumoral bleomicina. Otros péptidos microbianos son tóxicos. Los péptidos cianobacterianos microcistina y nodularina son mortales en grandes dosis, mientras que en cantidades pequeñas promueven la formación de tumores hepáticos. Los seres humanos y otros animales superiores carecen de la capacidad para sintetizar 10 de los 20 l-αaminoácidos comunes en cantidades apropiadas para apoyar el crecimiento de lactantes o mantener la salud en adultos. En consecuencia, la dieta humana debe contener cantidades adecuadas de estos aminoácidos esenciales desde el punto de vista nutricional. PROPIEDADES DE LOS AMINOÁCIDOS El código genético especifica 20 l-α-aminoácidos De los más de 300 aminoácidos que existen de manera natural, 20 constituyen las unidades monómero de proteínas. Si bien un código genético de tres letras no redundante podría tener cabida para más de 20 aminoácidos, su redundancia limita los codones disponibles a los 20 l-α-aminoácidos listados en el cuadro 3-1, mismos A 3 P í t u l o que se clasifican de acuerdo con la polaridad de sus grupos R. Pueden usarse abreviaturas tanto de una como de tres letras para cada aminoácido a fin de representar los aminoácidos en péptidos y proteínas (cuadro 3-1). Algunas proteínas contienen aminoácidos adicionales que surgen por modificación de un aminoácido ya presente en un péptido. Los ejemplos incluyen conversión de peptidil prolina y lisina en 4-hidroxiprolina y 5-hidroxilisina; la conversión de peptidil glutamato en γ-carboxiglutamato, y la metilación, formilación, acetilación, prenilación y fosforilación de ciertos residuos aminoacilo. Dichas modificaciones extienden la diversidad biológica de las proteínas al alterar su solubilidad, estabilidad e interacción con otras proteínas. Selenocisteína, ¿el vigesimoprimer l-α-aminoácido? La selenocisteína es un l-α-aminoácido que se encuentra en un puñado de proteínas, entre ellas ciertas peroxidasas y reductasas, donde participa en la catálisis de reacciones de transferencia de electrón. Como su nombre lo indica, un átomo de selenio remplaza el azufre de su análogo estructural, la cisteína. El pK3 de la selenocisteína, 5.2, es tres unidades menor que la de la cisteína. Dado que la selenocisteína se inserta en polipéptidos durante la traducción, por lo general es conocida como el “vigesimoprimer aminoácido”. Sin embargo, al contrario de los otros aminoácidos codificados mediante mecanismos genéticos, la selenocisteína no es especificada por un codón de tres letras simple (cap. 27). En las proteínas sólo existen l-α-aminoácidos Con la única excepción de la glicina, el carbono α de aminoácidos es quiral. Si bien algunos aminoácidos de proteínas son dextrorrotatorios y otros levorrotatorios, todos comparten la configuración 14 03 Bender.indd 14 27/11/09 12:49:49 15 15 15 15 cHAPteR 33 Amino Acids & Peptides cHAPteR Acids & Peptides cHAPteR Amino Acids & Peptides cHAPteR 33 Amino Amino Acids cHAPteR Amino Acids & & yPeptides Peptides cHAPteR Acids & Peptides capítulo33 3 Amino Aminoácidos péptidos CuadRO presentes en proteínas TABLE3-1 3–1l-α-aminoácidos l-α-Amino Acids Present in Proteins TABLE 3–1 TABLE TABLE 3–1 3–1 l -α-Amino Acids Present in Proteins l l-α-Amino l -α-Amino Acids Acids Present Present in in Proteins Proteins Nombre Name Name Name Name Name ConWith cadenas laterales With Aliphatic Sidealifáticas Chains Aliphatic Side Chains With With Aliphatic Aliphatic Side Side Chains Chains With Aliphatic Side Chains Glycine Glicina Glycine Glycine Glycine Glycine Símbolo Symbol Symbol Symbol Symbol Symbol Alanine Alanine Alanina Alanine Alanine Alanine Ala [A] AlaAla [A][A] Ala Ala [A] [A] Ala [A] Valine Valine Valina Valine Valine Valine Val [V] ValVal [V][V] Val [V] Val Val [V] [V] Leucine Leucine Leucine Leucina Leucine Leucine Leu [L] Leu Leu [L] Leu [L][L] Leu Leu [L] [L] Isoleucine Isoleucine Isoleucine Isoleucina Isoleucine Isoleucine Fórmula estructural Structural Formula Structural Formula Structural Structural Formula Formula Structural Formula [G] GliGly [G][G] Gly Gly Gly [G] [G] Gly [G] CH33 CH CH CH CH33333 CH Ile [I] Ile [I] IleIle [I] [I] Ile [I] Ile [I] CH22 CH CH CH2222 CH 2 OH OH OH OH OH OH Thr Thr [T] [T] Thr Thr [T] Tre [T][T] Thr [T] CH33 CH CH CH CH33333 CH CH CH33 CH Tyrosine Tyr Tyrosine Tyr [Y] [Y] Tyrosine Tyrosine Tyr [Y] Tirosina TirTyr [Y][Y] Tyrosine Tyr [Y] With Side Side Chains Chains Containing Containing Sulfur Sulfur Atoms Atoms ConWith cadenas que contienen átomos With Side Chains Sulfur Atoms With Sidelaterales Chains Containing Containing Sulfur Atomsde azufre With Side Chains Containing Sulfur Atoms Cysteine Cys [C] Cysteine Cisteína CisCys [C][C] Cysteine Cys [C] Cysteine Cys [C] Cysteine Cys [C] Glutamic acid acid Glutamic Glutamic acid Glutamic acid Ácido glutámico Glutamic acid Glu [E] [E] Glu Glu Glu [E] Glu [E][E] Glu [E] Glutamine Glutamine Glutamine Glutamine Glutamine Glutamina Gln [Q] [Q] Gln Gln [Q] Gln [Q] Gln Gln [Q][Q] CH CH CH CH CH COO CH + NH33+++ NH + NH NH NH33333+ NH CH CH CH CH CH CH + + NH NH333+++ NH NH 3 3 NH33 pK3 pK pK 3 pK pK33333 pK 3 R RGrupo Group R Group R R Group Group R Group 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 9.9 9.9 9.9 9.9 9.9 9.9 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 9.7 9.7 9.7 9.7 9.7 9.7 2.3 2.3 2.3 2.3 2.3 9.7 9.7 9.7 9.7 9.7 9.7 2.3 2.3 2.3 2.3 2.3 9.8 9.8 9.8 9.8 9.8 9.8 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 about about 13 13 about 13 about 13 alrededor about 13 de 13 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 about about 13 13 about 13 about 13 alrededor about 13 de 13 1.9 1.9 1.9 1.9 1.9 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 8.3 8.3 8.3 8.3 8.3 8.3 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 9.9 9.9 9.9 9.9 9.9 9.9 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 8.8 8.8 8.8 8.8 8.8 8.8 2.1 2.1 2.1 2.1 2.1 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 — — — COO — COO — COO — COO COO COO— — — — CH COO CH COO— — CH — CH COO COO— CH COO + + NH33++ NH NH 3 + NH NH3333 NH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH CH + CH CH CH CH CH OH NH33+++ OH NH + OH NH 3 OH NH 3+ + OH NH 3 + OH NH 3 OH NH OH below. NH3333+ OH NH See See below. — — COO— COO — — COO COO — COO— — COO — COO COO COO— CH 2 CH 2 CH CH CH22222 CH SH SH SH SH SH SH — — — COO — COO — COO — COO COO— COO See below. See CH22 CH CH22 CH CH CH CH CH22222 CH CH22222 CH CH S CH CH33 S S CH CH333 S S CH 3 S CH 3 With Side Side Chains Chains Containing Containing Acidic Acidic Groups Groups or or Their Their Amides Amides With With Side Chains Acidic Groups or Amides ConWith cadenas que contienen grupos acídicos o sus amidas Sidelaterales Chains Containing Containing Acidic Groups or Their Their Amides With Side Chains Containing Acidic Groups or Their Amides Aspartic acid acid Asp [D] [D] Aspartic Asp Aspartic acid Asp Ácido aspártico Asp [D][D] Aspartic acid Asp [D] Aspartic acid Asp [D] Asn [N] Asn Asn [N] [N] Asn [N][N] Asn Asn [N] — — COO— — COO — COO — COO COO— pK2 pK pK 2 pK pK22222 pK 2 ++ α-NH +3 α-NH + α-NH + 3+ α-NH α-NH33333++ α-NH 3 9.8 9.8 9.8 9.8 9.8 9.8 See below. Véase más adelante See See below. below. Met [M] [M] Met Met [M] Met [M] Met [M] Met [M] Asparagine Asparagine Asparagine Asparagina Asparagine Asparagine — — CH COO COO— — CH — CH COO — CH CH COO COO— CH COO + + NH33++ NH NH333++ NH NH 3 NH 3 C H H C H33333C C H C H H 3C 3 CH22 CH CH CH CH CH CH CH22222 CH CH CH CH H33C C H H333C C H H C H33C CH33 CH CH33 CH CH 3 CH 3 3 CH 2 CH 2 CH CH CH22222 CH CH CH CH CH CH CH CH33 CH CH333 CH CH33 3 Methionine Methionine Methionine Metionina Methionine Methionine — — — COO — COO— — COO — COO COO H 3C C H 3 C H H C H33333C C H — — — CH COO CH CH CH COO — — CH CH COO — CH CH COO CH CH COO— CH CH COO + + H C NH 3 + H C NH 3 3 + H333C C 3+ NH H NH H C NH33333+ H 3C NH 3 With With Side Side Chains Chains Containing Containing Hydroxylic Hydroxylic (OH) (OH) Groups Groups Side Chains Hydroxylic Groups With Sidelaterales Chains Containing Containing Hydroxylic (OH) Groups (OH) ConWith cadenas que contienen grupos(OH) hidroxílicos With Side Chains Containing Hydroxylic (OH) Groups Serine Ser Serine Ser [S] [S] Serine Ser Serine [S] Serina SerSer [S][S] Serine Ser [S] Threonine Threonine Threonine Threonine Treonina Threonine CH CH CH CH CH + NH NH333++++ NH NH333 NH 3 H H H H H pK1 pK pK 1 pK pK11111 pK 1 α-COOH α-COOH α-COOH α-COOH α-COOH α-COOH 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 CH CH CH CH CH CH + + NH + 3+ NH 3 + NH 3 + NH 3 NH 3 NH33 — — CH COO COO— — — CH — CH COO CH CH COO COO— CH COO + + NH33++ NH NH333++ NH NH NH33 CH22 CH CH CH CH22222 CH — — CH COO COO— — CH — CH COO — CH CH COO COO— CH COO + + NH + 3 + NH 3 + NH333+ NH NH NH 3 3 C C C C C O O O O O CH CH2222 CH CH CH222 CH CH CH CH CH + + NH NH333+++ NH NH333 NH 3 — — — OOC —OOC — OOC —OOC — CH22 CH CH222 CH CH 2 CH 2 CH22 CH CH222 CH CH CH22 — — CH COO COO— — CH CH COO COO— — CH — CH COO CH COO + + NH + 3 + NH 3 + NH333+ NH NH NH 3 3 C C C C C C O O O O O O CH22 CH CH CH CH22222 CH CH22 CH CH CH CH2222 CH — — — CH COO CH COO — — CH COO — CH CH COO COO— CH COO + + NH33++ NH + NH NH NH33333+ NH — — — OOC —OOC — OOC —OOC — OOC OOC H N H2222N N H H N H222N OOC OOC N H22N H N H H N H22222N N H 2 — — COO — COO— — — COO COO COO— 3.9 3.9 3.9 3.9 3.9 3.9 4.1 4.1 4.1 4.1 4.1 4.1 (continued )) (continued (continued ))) (continued (continúa) (continued Murray_CH03_PTR.indd 15 15 Murray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 15 15 Murray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 15 15 Murray_CH03_PTR.indd 03 Bender.indd 15 3/26/2009 8:27:38 8:27:38 PM PM 3/26/2009 3/26/2009 8:27:38 8:27:38 PM PM 3/26/2009 3/26/2009 8:27:38 3/26/2009 8:27:38 PM PM 27/11/09 12:50:19 16 16 16 16 16 16 16 16 Section i Structures & Functions of Proteins & Enzymes Section i Structures & & Functions of of Proteins & & Enzymes Section Section iii Structures Structures & & Functions Functions of of Proteins Proteins & & Enzymes Enzymes Section Structures Functions Proteins Enzymes Sección i Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Section i Structures & Functions of Proteins & Enzymes Section Section ii Structures Structures & & Functions Functions of of Proteins Proteins & & Enzymes Enzymes TABLE 3–1 l-α-Amino Acids Present in Proteins (continued) TABLE 3–1 lll-α-Amino -α-Amino Acids Acids Present Present in Proteins Proteins (continued) (continued) Name 3–1 Symbolin Structural Formula TABLE TABLE 3–1 l -α-Amino Acids Present in Proteins (continued) Nombre Símbolo Fórmula estructural Name Symbol Structural Formula TABLE 3–1 l -α-Amino Acids Present in Proteins (continued) Name Symbol Structural Formula TABLE 3–1 l-α-Amino Present in Proteins (continued) With Side Chains Containing Acids Basic Groups Name Symbol Structural Name Symbol Structural Formula Formula CuadRO presentes enProteins proteínas (continuación) TABLE3-1 3–1l-α-aminoácidos l-α-Amino Acids Present in (continued) Symbol With Side Sidelaterales Chains Containing Containing Basic Groups Name Symbol ConName cadenas que contienen grupos básicos With Chains Basic Groups Name Symbol Arginine Arg [R] With With Side Side Chains Chains Containing Containing Basic Basic Groups Groups With Side Chains Containing Basic Groups With Side Chains Containing Basic Groups Arginine Arg [R] Arginina Arg [R] With Side Chains Containing Basic Groups Arginine Arg [R] Arginine Arg Arginine Arg [R] [R] Arginine Arg Arginine Arg [R] [R] Arginine Arg [R] Lysine Lysine Lysine Lisina Lysine Lysine Lysine Lysine Lysine Histidine Histidine Histidine Histidine Histidina Histidine Histidine Histidine Histidine Containing Aromatic Rings nzymes Containing Aromatic Rings Rings Containing Aromatic Histidine Rings Containing Aromatic Rings QueContaining contienen Aromatic anillos aromáticos Containing Aromatic Rings Histidine Aromatic Containing Histidine Containing Aromatic Rings Rings Histidine Phenylalanine Histidine Histidina Histidine Histidine Phenylalanine Proteins (continued) Histidine Phenylalanine Phenylalanine Phenylalanine Fenilalanina Phenylalanine StructuralPhenylalanine Formula pK1 Phenylalanine H N C + Tyrosine Tyrosine Tyrosine CH2 Tyrosine CH2 CH COO— Tyrosine Tyrosine Tirosina Tyrosine + Tyrosine CH2 Tryptophan Tryptophan Tryptophan Tryptophan Tryptophan Tryptophan Triptófano CH2 Tryptophan CH2 CH COO— Tryptophan CH2 NH2 NH2 CH2 α-COOH 1.8 NH3 2.2 Lys [K] Lys [K] LisLys [K][K] Lys [K] Lys [K] Lys [K] Lys Lys [K] [K] His [H] His [H] [H] His [H] HisHis [H][H] His His [H] His His [H] [H] His [H] His [H] His [H] Phe [F] His [H] HisHis [H][H] His [H] His Phe [F] His [H] [H] Phe [F] Phe [F] Phe Fen [F][F] Phe [F] Phe pK2 Phe [F] [F] + Tyrα-NH [Y] 3 Tyr [Y] [Y] Tyr 9.0 Tyr Tyr [Y] [Y] [Y] TirTyr [Y] Tyr [Y] [Y] Tyr Trp [W] Trp [W] Trp Trp [W] [W] Trp [W] Trp [W] 9.2 Trp [W] Trp [W] Trp [W] H H H H H H H H Structural Structural Formula Formula Structural Formula N CH2 N CH CH N C NH222+ N N CH CH22+ CH N 2+ C NH N CH C N CH2+ NH2NH C NH C NH222++ C NH NH C NH22++ NH C 22 NH 2 NH NH 2 CH CH 2 2 2 NH2 NH 2 NH CH 2 CH2 + 2 CH CH2 NH CH CH2223+ CH CH22 CH CH2 2+ NH CH 3 2 + NH CH32+ CH CH22 NH NH33+ + NH 3 NH3+ NH 3 HN HN HN HN HN HN HN HN pK3 Imino Acid CH2 Acid CH COO— Imino Imino Acid Proline Imino Acid Acid N Imino NH3+ Imino ProlineAcid Imino Acid Iminoácido Proline Imino Acid Proline Proline Proline Proline Proline Prolina HN 1.8 9.3 Pro [P] Pro [P] [P] Pro Pro Pro [P] [P] Pro [P] Pro [P] Pro Pro [P][P] HO 2.2 CH2 CH 2 CH CH CH222 CH 2 CH CH22 N N N N N N N N HO 12.5 HO HO HO HO HO HO HO 10.8 6.0 9.2 all share the absolute configuration ry and some levorotatory, all share the absolute absolute configuration of l-glyceraldehyde and thus are l-α-amino acids. Severall-αfree ry and anddesome some levorotatory, all son share the configuration absoluta l-gliceraldehído y, así, l-α-aminoácidos. Varios ry levorotatory, all share the absolute configuration 2.2are 9.1 10.1 of l-glyceraldehyde and thus l-α-amino acids. Several free ry and some levorotatory, all share the absolute configuration l-α-amino acids fulfill important roles in metabolic processes. of l-glyceraldehyde and thus thus are l-α-amino acids. Several free ry andCH some levorotatory, allimportantes share the absolute absolute configuration — aminoácidos libres desempeñan funciones en procesos of and are l-α-amino acids. Several free ry and some levorotatory, all share the configuration CHl-glyceraldehyde COO 2 l-α-amino acids fulfill important roles inand metabolic processes. of l-glyceraldehyde and thus are l-α-amino acids. Several free Examples include ornithine, citrulline, argininosuccinate l-α-amino acids fulfill important roles in metabolic processes. of l-glyceraldehyde and thus are l-α-amino acids. Several free metabólicos. Algunos ejemplos incluyen ornitina, citrulina y arginil-α-amino acids fulfill important roles in metabolic processes. of l-glyceraldehyde and thus citrulline, are l-α-amino acids. Several free NH3+ include Examples ornithine, and argininosuccinate l-α-amino acids roles in metabolic processes. that participate infulfill ureaimportant synthesis; tyrosine inargininosuccinate formation ofenthyExamples include ornithine, citrulline, and l-α-amino acids fulfill important roles in metabolic processes. nosuccinato, que participan en la síntesis de la urea; la tirosina la Examples include ornithine, citrulline, and argininosuccinate l-α-amino acidsinfulfill important roles in metabolic processes. that participate urea synthesis; tyrosine inargininosuccinate formation of thythyExamples include ornithine, citrulline, and roidparticipate hormones; and glutamate in neurotransmitter biosynthethat in urea synthesis; tyrosine in formation of Examples include ornithine, citrulline, and argininosuccinate 2.4 9.4 formación de hormonas tiroideas, y el glutamato en la biosíntesis de — that participate in urea synthesis; tyrosine in formation of thyExamples ornithine, citrulline, and argininosuccinate CH2 participate CH include COOacids roid hormones; and glutamate in neurotransmitter biosynthethat in urea synthesis; tyrosine in formation of sis. d-Amino that occur in naturally include free d-serine roid hormones; and glutamate neurotransmitter biosynthethat participate in urea synthesis; tyrosine inde formation of thythyneurotransmisor. Los d-aminoácidos existen manera natural roid hormones; and glutamate inque neurotransmitter biosynthethat participate in urea synthesis; tyrosine in formation of thy+ sis. d-Amino acids that occur naturally include free d-serine roid hormones; and glutamate in neurotransmitter biosyntheand d-aspartate in brain tissue, d-alanine and d-glutamate NH 3 sis. d-Amino acids that occur naturally include free d-serine roid hormones; and glutamate in neurotransmitter biosynthela d-serina y el d-aspartato libres en el tejido cerebral, la d-in N incluyen sis. d-Amino acids that occur naturally include free d-serine roid hormones; and glutamate ind-alanine neurotransmitter biosyntheand d-aspartate in brain tissue, and d-glutamate in sis. d-Amino acids that occur naturally include free d-serine the cell walls of gram-positive bacteria, and d-amino acids andd-Amino d-aspartate in brain brain tissue, d-alanine and d-glutamate in sis. d-Amino acids that occur naturally include free d-serine d-serine y el d-glutamato en las paredes celulares de bacterias gram-in and d-aspartate in tissue, d-alanine and d-glutamate sis. acids that occur naturally include free H alanina the cell walls of gram-positive bacteria, and d-amino acids and d-aspartate in brain tissue, d-alanine and d-glutamate in certain peptides and antibiotics produced by bacteria, fungi, the cell cell walls of gram-positive gram-positive bacteria, and d-amino acids and d-aspartate in brain brain tissue, d-alanine and d-glutamate in positivas, y walls d-aminoácidos entissue, ciertosbacteria, péptidosand y and antibióticos produ-in the of d-amino acids and d-aspartate in d-alanine d-glutamate certain peptides and antibiotics produced byd-amino bacteria, fungi, the cell walls of gram-positive bacteria, and acids in reptiles, and other nonmammalian species. certain peptides and antibiotics produced by bacteria, fungi, the cell walls of gram-positive bacteria, and d-amino acids in cidos por bacterias, hongos, reptiles y otras especies no mamíferas. certain peptides and antibiotics produced by bacteria, fungi, the cell walls of gram-positive bacteria, and d-amino acids in reptiles, and other other nonmammalian species. certain peptides and antibiotics produced by bacteria, fungi, reptiles, and nonmammalian species. certain peptides and antibiotics produced by bacteria, fungi, reptiles, and other nonmammalian species. 2.0 10.6 certain peptides and antibiotics produced by bacteria, fungi, reptiles, reptiles, and and other other nonmammalian nonmammalian species. species. + reptiles, and other nonmammalian species. N Amino COO— Acids May Have Positive, Negative, Los aminoácidos pueden tener carga Amino Acids May Have Have Positive, Positive, Negative, Negative, Amino Acids May or Zero Net Charge neta positiva, negativa o de cero Negative, Amino Acids May Have Positive, Amino Acids May Have Positive, Negative, or Zeroand Net Charge Amino Acids May Have Negative, or Zero Net Charge Charged uncharged forms the —COOH and Acids HaveofdePositive, Positive, or Zero Net La Amino forma cargada y Charge laMay no cargada losionizable grupos Negative, ácidos débiles + or Zero Net Charge Charged and uncharged forms of the ionizable —COOH and —NH weak acid groups exist in solution in protonic equior Zero Net Charge + Charged and uncharged forms of the ionizable —COOH and 3 y and or Zero Net —COOH —NH ionizables existen solución —COOH en equilibrio 3 Charge Charged uncharged forms of theenionizable and + H2 —NH acid groups existof inthe solution in protonic equi+ weak Charged and forms ionizable —COOH and librium: —NH acid exist solution in Charged and uncharged uncharged forms ofin the ionizable —COOHequiand protónico: —NH333+++ weak weak acid groups groups existof inthe solution in protonic protonic equiCharged and uncharged forms ionizable —COOH and 3+ weak acid groups exist in solution in protonic equilibrium: —NH − + librium: —NH33+ weak weak Racid acid groupsexist exist inCOO solution in protonic protonic equiequilibrium:  COOH R  + H —NH groups in solution in 3 librium: librium: librium: R  NH3+  R  NH2 + H+ e configuration ds. Several free bolic processes. gininosuccinate While both R—COOH and R—NH3+ are weak acids, R— rmation of thy+ 16 stronger acid than R—NH . At physiologic pH COOH is a far 3 itter biosynthe-Murray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 16 (pH 7.4), carboxyl groups exist almost entirely as R—COO– 16 de free d-serineMurray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 16 16 Murray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 16 and amino groups predominantly as R—NH3+. Figure 3–1 il16 d-glutamate inMurray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 16 lustrates the effect of pH on the charged state of aspartic acid. 03 in Bender.indd 16 amino acids COO— — COO— COO — COO COO— — COO COO— — COO COO— — COO— COO — COO COO— — COO — COO COO—— COO — COO— COO — COO— COO — COO — COO COO— 2 — — CH CH CH COO 3 + COO CHCH 2 2 CH COO CH COO — — 2 NH 2 CH + CH CH CH CH COO — — 2 2 CH COO + 3+COO CHCH NH CH COO — — 2 2NH 3 CH + CH CH COO — CH + +COO 2 2NH 3CH CH NH COO 3CH + 33+ + COO— CH22NH NH 3 + 3+ NH NH NH 3 NHNH 3+ 3+ — NH 3+ COO 3CH CH2 NH 3 NH 3 — CH CH + COO— 2 CH CH — NH 2 CH22 CH CH3 COO COO— CH COO — + CH CH 2 NH + COO— CH CH NH CH22 NH CH33++ COO COO— — 3 + 3 CH2 NH CH + COO NH 3 NH 3+ — NH 3 CH CH COO — + 2 CH CH — CH222 NH CH3 COO COO— CH CH COO + COO— CH CH — 2 NH + CH CH — 3+ COO CH22 NH CH COO + NH333+ NH + NH 3 NH NH3+ R Group See above. See above. CH2 CH COO— — CH2 CH COO NH3+some ry and levorotatory, NH3+ 2 CH2 CH CH2 CH CH+ CH NH3 CH CH222 CH CH+ CH CH 2 + NH CH2 NH CH CH CH3++ 2 NH NH333+ + NH NH33+ NH 3 CH2 CH CH CH2 CH CH NH3+ CH CH+ CH222 CH CH CH 2 + NH CH CH CH33++ CH22 NH NH 3+ CH2 NH CH 3 NH 3 NH3++ CH2 NH CH3+ CH CH 2 CH22 NH CH3 CH CH + CH CH 2 NH + CH CH NH CH22 NH CH3+ NH333++ NH 3+ NH NH33+ See above. See above. See above. See above. See above. See above. Véase más adelante See above. CHabove. CH COO— — 2 See above. See See above. CH2 CH COO See above. — See above. CHabove. CH+ COO COO— See 2 CH CH See above. — — NH NH3+ + NH3 CH2 CH2 CH CH CH222 CH CH22 CH pK1 pK11 pK pK α-COOH pK pK111 pK α-COOH pK11 α-COOH α-COOH pK 1.8 1 α-COOH α-COOH α-COOH α-COOH 1.8 1.8 α-COOH 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 N N N H N N N H N H N H H H H H pK2 pK2 2 + pK pK α-NH pK pK222 3 pK α-NH pK22 3+++3+ α-NH α-NH pK 9.0 2 3+ α-NH α-NH 3+ 3 α-NH 3+ α-NH 9.0 9.0 α-NH 9.0 33+ 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 9.3 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 9.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 2.2 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 9.1 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 9.4 9.4 9.4 9.4 9.4 9.4 9.4 9.4 9.4 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 10.6 pK3 pK pK 3 3 pK R Group pK pK333 pK 3 RGrupo Group pK3 R R Group pK 3 R Group R12.5 Group R Group R12.5 Group 12.5 12.5 R Group 12.5 12.5 12.5 12.5 12.5 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 10.8 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 10.1 3 + N + H2 + N + + N +2 N H N + H N + 22 H H N 2 N H 2 H H2 — COO — COO — COO — COO— COO — COO — COO COO— 2 R  COOH  R  COO − + H+ − − ++ R  COOH R R  COO H++++son ácidos débiles, − Si bien tanto el R—COOH el R—NH R COOH  COO R NH3+como NH2 + H3 +H − + R  COOH  R  COO + H − + +H+ − ++  COOH más fuerte COO R  NH3++++   RR   NH H R—COOH es un RRRácido mucho R—NH3+. A pH fi−que  COOH COO + 2 + R NH R NH  COOH COO + +++H H+ 3 2 + H R  NH  R  NH + H + 3 2 3+  R 2 existen siológico (pH de 7.4), losNH grupos carboxilo casi acids, por compleR  H 3+and While both R—COOH R—NH R— R  NH R  NH NH2 ++ + are H++ weak – R  NH33  R  NH223++ H + toWhile comoboth R—COO y los acid grupos amino de manera predominante R—COOH andthan R—NH weak acids, R— R— + are COOH is a far stronger R—NH . At physiologic pH 3+ are While both R—COOH and R—NH weak acids, 3 + 3+ While both R—COOH and R—NH are acids, R—– +delweak + como R—NH . La figura 3-1 ilustra el efecto pH sobre el estado 3 3+ are 3 R—COOH COOH is a far stronger acid than R—NH physiologic pH +. At While both and R—NH weak acids, R— (pH 7.4), carboxyl groups exist almost entirely as R—COO 3+. At COOHboth is aa far farR—COOH stronger acid acid than R—NH physiologic pH 3+ are While and R—NH weak acids, R— 3+. At COOH is stronger than R—NH physiologic pH 3 are While both R—COOH and R—NH weak R— + as acids, cargado de aspártico. 33+ 3 entirely (pH 7.4), carboxyl groups exist almost R—COO COOH is aaácido far stronger acid than R—NH +. At physiologic and amino groups predominantly as R—NH . Figure 3–1pH il-–––– (pH 7.4), carboxyl groups exist almost entirely as R—COO 3+. At COOH is far stronger acid than R—NH pH 3 physiologic (pH 7.4), carboxyl groups exist almost entirely as R—COO 3 . At+physiologic COOH is a far stronger acid than R—NH pH Las moléculas que contienen un igual número de grupos ioni3 and amino groups predominantly as R—NH R—NH 3–1 il-––– +. Figure (pH 7.4), carboxyl groups almost entirely as R—COO lustrates the effect of pH onexist the charged state3of aspartic acid. and amino groups predominantly as 3–1 il+. Figure (pH 7.4), carboxyl groups exist almost entirely as R—COO 3+ and amino groups predominantly as R—NH . Figure 3–1 il(pH 7.4), carboxyl groups exist almost entirely as R—COO + zables de carga opuesta y que, por ende, no portan carga neta, re3 3of lustrates thegroups effect of pH on the theancharged charged state aspartic acid. and amino predominantly as R—NH 3–1 il+. Figure Molecules that contain equal number of ionizable lustrates the effect of pH on state of aspartic acid. 3of and amino groups predominantly as R—NH 3–1 il+. Figure lustrates the effect of pH on the charged state aspartic acid. 3 . los and amino groups predominantly as R—NH Figure 3–1 ilciben el nombre de zwitteriones. De este modo, aminoácidos 3 Molecules that contain an equal number of net ionizable lustrates effect of pH the charged state of acid. groups ofthe opposite charge and that therefore no charge Molecules that contain an equal number of ionizable lustrates the effect of pH on on the charged statebear of aspartic aspartic acid. Molecules that contain an equal number of ionizable lustrates effect of pH on the charged state of aspartic acid. en sangre ythe casi todos los tejidos deben representarse como en a, a groups of opposite charge and that therefore bear no net charge Molecules that contain an equal number of ionizable are termed zwitterions. Amino acids in blood and most tisgroups of opposite charge and that therefore bear no net charge Molecules that contain an equal number of ionizable groups of opposite charge and that therefore bear no net charge Molecules that contain an equal number of ionizable continuación. are termed zwitterions. Amino acids inbelow. blood and most tisgroups of and therefore bear no charge suestermed thus should becharge represented as in A, are zwitterions. Amino acids in blood and most tisgroups of opposite opposite charge and that that therefore bear and no net net charge are termed zwitterions. Amino acids in blood most tisgroups of opposite charge and that therefore bear no net charge sues thus should be represented as in A, below. are termed zwitterions. Amino acids in blood and most tissuestermed thus should should be NH represented in A, A, below. are termed zwitterions. acids inbelow. blood and most tis+ Amino as sues thus be represented in NH are zwitterions. Amino as acids in 3 2 blood and most tissues thus should be represented as in A, below. + sues thus should be represented as in A, below. NH NH + sues thus should be represented as in A, 2below. 3 R R R R R R R R NH NH33+++ NH 3 NH 3+ NH NH33+ O O– O–– O – O O–– O O–– O O AO O O A O A AO O A A puede existir A A R NH NH22 NH 2 NH 2 NH NH22 O OH OH OH OH OH R R OH R R O OH BO OH R O R O R B O B O BO B B solución acuosa, B B La estructura B no en porque a cualquier pH lo bastante bajo como para protonar el grupo carboxilo, 3/26/2009 8:27:40 PM 3/26/2009 3/26/2009 3/26/2009 3/26/2009 3/26/2009 3/26/2009 3/26/2009 8:27:40 PM 8:27:40 PM 8:27:40 PM PM 8:27:40 8:27:40 PM 8:27:40 PM 8:27:40 PM 27/11/09 12:50:49 cHAPteR cHAPteR 33 Amino Amino Acids Acids & & Peptides Peptides cHAPteR 3 Amino Acids & Peptides 17 17 17 capítulo 3 Aminoácidos y péptidos cHAPteR 3 Amino Acids & Peptides 17 + O H O – – H H H+ – – O OH O OH + + + O O O O O OH O OH H H H O– OH OH O– pK1 = 2.09 pK2 = 3.86 pK3 = 9.82 pK1 = 2.09 pK2 = 3.86 pK3 = 9.82 + + + + O O O O NH NH NH NH (α-COOH) (— NH (β-COOH) H+ H+ H+3+)) NH22 NH33+ pK3 = 9.82 NH33+ pK1 = 2.09 NH33+ pK2 = 3.86 (α-COOH) (— NH (β-COOH) – – 3 + + + OH NH2O – – – NH3O NH3OH (α-COOH) (— NH3+) (β-COOH) –O NH3 –O –O HO HO O O O – – – HO O pK1 = 2.09 O pK2 = 3.86 O pK = 9.82 3 NH2 NH3+ NH + NH + (α-COOH) (— NH3+) (β-COOH) B C A D B 3 C A 3 D – Alrededor de pH 3; – Alrededor de pH 6–8; – En álcali fuerte En ácido fuerte B C A ácido fuerte D álcali fuerte HOEn OAlrededor OAlrededor OEn de pH 3; de pH 6–8; (porfuerte debajo de pH 1); carga =0 carga = –1 (porfuerte arriba de pH 11); En ácido Alrededor deneta pH 3; Alrededor deneta pH 6–8; En álcali (por debajo de pH 1); carga neta =0 carga neta = –1 (por arriba de pH 11); carga neta +1 cargade neta =11); –2 (por debajo pH= carga neta = 0 carga neta = –1 (por arriba pH = carga de neta =1); +1 carga neta –2 B C carga netaA= +1 carga netaD= –2 En ácido fuerte Alrededor de pH 3; Alrededor de pH 6–8; En álcali fuerte FIGURE of FIGURE 3–1 Protonic equilibria equilibria of aspartic aspartic acid. (por debajo de 3–1 pH 1); Protonic carga neta = 0 acid. carga neta = –1 (por arriba de pH 11); FIGURE 3–1 Protonic equilibria of aspartic acid. FIguRA 3-1 protónicos del ácido aspártico. carga neta = +1Equilibrios carga neta = –2 17 O O O O O H++ O O O O O O O H++ O O O O O O O O O O negative Structure B exist in solution because at negative charges charges and and thus thus is is electrically electrically neutral. neutral. The The isoelecisoelecStructureFIGURE B cannot cannot3–1 existProtonic in aqueous aqueous solution because at any any equilibria ofbecause aspartic acid. negative charges and thus ispI, electrically neutral. The isoelecStructure B cannot exist in aqueous solution at any tric pH, also called the is the pH midway between pH low enough to protonate the carboxyl group, the amino tric pH, also called the pI, is the pH midway between pK pKaa valvalpH low enough to protonate the carboxyl group, the amino también estaría protonado el grupo amino. Degroup, modothe similar, a cual- tric pK ambos lados lasisespecies Para un pH, called thedepI, the pHisoeléctricas. midway between pKaminoácido val- acid pH low enough to protonate the carboxyl amino a aalso ues on group a ues on either either side side of of the the isoelectric isoelectric species. species. For For an an amino amino acid group would would also also be be protonated. protonated. Similarly, Similarly, at at any any pH pH suffisuffiand thustiene is electrically neutral. The isoelecStructure Balso cannot existalto in como aqueous because atgrupo any uesnegative quier pH suficientemente parasolution que at predomine como la charges alanina dos gruposFor queanseamino disocian, on either side ofque thesólo isoelectric species. acidno hay group would be protonated. Similarly, any pH un suffisuch ciently such as as alanine alanine that that has has only only two two dissociating dissociating groups, groups, there there is is ciently high high for for an an uncharged uncharged amino amino group group to to predominate, predominate, tric pH, also called the pI, is the pH midway between pK – presente pHa carboxyl low to protonate the carboxyl group, the amino amino noenough cargado, un grupo carboxilo estará como ambigüedad. El primer pK (R—COOH) es 2.35, y el such as alanine that has only two dissociating groups, there isvalciently high for an uncharged amino group to predominate, a a (R—COOH) is 2.35 and the no ambiguity. The first pK sec–. The uncharged asegundo group will be present as R—COO no ambiguity. The first pK (R—COOH) is 2.35 and the seca carboxyl group will be present as R—COO . The uncharged – + a – +the on either ofde isoelectric species. Forand an (pI) amino acid group would also protonated. Similarly, at any pH suffi-donoues . Sin embargo, la representación B no cargada a menudo (R—NH ) The esside 9.69; este modo, elisoelectric pH isoeléctrico la alaniambiguity. first (R—COOH) is 2.35 the de seca R—COO carboxyl group will be present as R—COO . The uncharged + pK ond representation 3 ) ond pK pK3aa (R—NH (R—NH ) is isa9.69. 9.69. The The isoelectric pH pH (pI) (pI) of of alanine alanine representation B B is, is, however, however, often often used used for for reactions reactions that that do +that3 has only two dissociating groups, there is such as alanine high for an uncharged amino group to predominate, seciently usa para reacciones que no comprenden equilibrios protónicos. na es ond pK (R—NH ) is 9.69. The isoelectric pH (pI) of alanine representation B is, however, often used for reactions that do thus not a is 3 thus is not involve involve protonic protonic equilibria. equilibria. noisambiguity. The first pKa (R—COOH) is 2.35 and the seccarboxyl group will be present as R—COO–. The uncharged thus nota involve protonic equilibria. ond pKa (R—NH3+) ispK9.69. The isoelectric pH (pI) of alanine representation B is, however, often used for reactions that do pK 11 + +p pK K 22 = 2.35 2.35 + + 9.69 9.69 = 6.02 pK Values Express the Strengths Los valores de pK expresan las pI = a thus is Values Express the Strengths p K + p K 2.35 + 9.69 notpK involve protonic equilibria. pI = = = 6.02 a 1 2 a 2 2 pK Values Express thedébiles Strengths pI = 2= 2 = 6.02 aof Acids potencias ácidos of Weak Weakde Acids 2 2 ofLasWeak Acids pK 1 + pK 2 2.35 + 9.69 The acid strengths strengths of ácidos weakthe acids arese expressed ascomo their su pKpK For potencias ácidas deof débiles expresanas For polyfunctional acids, pI also midway between a. Para polifuncionales, el pH a la mitad entre a.. For acid weak acids are expressed their pK pKThe Values Express Strengths pI = 6.02 For ácidos polyfunctional acids, =el pIpIis istambién also the the=espH pH midway between a strengths of weak acids are expressed as their pK . Fora The acid For los polyfunctional acids, pI islados alsoof the pH midway between multiple dissociable protons, the each Paramolecules moléculaswith con múltiples protones disociables, el pKpK cada 2 2 aa for the pK values on either side the isoionic species. For a para valores de pK en ambos de las especies isoiónicas. Así, por molecules with multiple dissociable protons, the pK for each the pKaa valuesa on either side of the isoionic species. For exexofacidic Weak Acids a molecules with dissociable protons, the pK for each on either side of the isoionic species. For exgroup is designated by replacing the subscript “a”por with grupo acídico esmultiple designado al remplazar la letra “a” subíndice un athe pK values a ample, the for aspartic acid el pIpI ácido aspártico a acidic group is designated by replacing the subscript “a” with a ejemplo, ample, the pIpara for el aspartic acid is is es The acid(cuadro strengths ofEl weak acids are expressed as their . aFortheample, acidic group is(Table designated by replacing the “a” with acids, the pI for aspartic acidpIisis also the pH midway between number 3–1). The group of número 3-1). grupo imidazol desubscript la histidina ypK el and agrupo number (Table 3–1). The imidazole imidazole group of histidine histidine and the For polyfunctional molecules multiple dissociable protons, theresonancia pKhybrids forthe each number (Table 3–1). The group histidine and side of the isoionic species. For exguanidino group of imidazole arginine exist as of resonance with the pKa values on either guanidino dewith la arginina existen como híbridos de con a p 2.09 guanidino group of arginine exist as resonance hybrids with pK K 11 + +p pK K 22 2.09 + + 3.96 3.96 pI = = = acidic group is designated by replacing the subscript “a” with a guanidino group of arginine exist as resonance hybrids with ample, the pI for aspartic acid is p K + p K 2.09 + 3.96 pI 1= = = 3.02 3.02 positive charge distributed between both nitrogens nitrogens (histidine) carga positiva distribuida entre ambos nitrógenos (histidina) o en2 positive charge distributed between both (histidine) 2 2 pI = = = 3.02 2 2 number (Table 3–1). The imidazole group of histidine and the positive charge distributed between both nitrogens (histidine) or nitrogens (arginine) (Figure 3–2). The tre los tresthree nitrógenos (arginina) (fig. 3-2). La carga uncharge ami2 2 or all all three nitrogens (arginine) (Figure 3–2).neta Thedenet net charge guanidino group of(arginine) arginine exist as resonance hybrids with pK 1 + pK 2 2.09 + 3.96 ornoácido allon three nitrogens (Figure 3–2). The net charge amino algebraic sum of the positively and sumaacid—the algebraica de todos los positiva on an an—la amino acid—the algebraic sumgrupos of all all con the carga positively and Para For pI lalysine, lisina,pI el=is pIcalculated se calcula =afrom: partir de: = 3.02 For lysine, pI is calculated from: charge distributed between both nitrogens (histidine) onypositive an amino acid—the algebraic sum of all the positively and negatively chargeddepende groupsdepresent—depends present—depends upon the pKaFor lysine, pI is calculated2 from: negativa presentes— los valores de pKa upon de sus the grupos 2 negatively charged groups pK a or values all three nitrogens (Figurethe 3–2). Thelathe net charge negatively charged present—depends upon the pKsobre groups and pH surroundfuncionales delfunctional pHgroups del(arginine) medio circundante. carga a values of ofyits its functional groups and on on theAlterar pH of of the surroundp K + pK 22 + p pK K 33 oning an algebraic sum the positively and values of amino its functional groups and on the pH the surroundthe on amino acids their aminoácidos y acid—the susAltering derivados variar el of pHallof facilita separación from: K 2= pI = + pK 3 ing medium. medium. Altering thealcharge charge on amino acidslaand and their dede- For lysine, pI is calculatedppI 2 negatively charged groups present—depends upon thede-pKa pI = ing medium. Altering the charge on amino (cap. acids and their 2 rivatives by the the separation física de aminoácidos, péptidos proteínas 4). rivatives by varying varying the pH pHy facilitates facilitates the physical physical separation 2 values of its functional groups and on the pH of the surroundrivatives by varying the pH facilitates the physical separation of amino amino acids, acids, peptides, peptides, and and proteins proteins (see (see Chapter Chapter 4). 4). K 2 + pKa3 todos los ácidos polipróticos of Consideraciones similares =sepaplican Similar ing medium. Altering the on (see amino acids and of amino acids, peptides, andcharge proteins Chapter 4). their deSimilar considerations considerationspI apply apply to to all all polyprotic polyprotic acids acids (eg, (eg, propro2polyprotic (p. ej., proteínas), alofapply margen de grupos en disociación considerations todel all número acidsgroups (eg, proteins), regardless the number of dissociating arivatives su pH un aminoácido byisoeléctrico varying the pH (pI), facilitates the physical separation Similar teins), regardless of the number of dissociating groups present. present. At Its Isoelectric pH (pI), an Amino Acid presentes. En of el the laboratorio el conocimiento del pI guía la teins), regardless numberclínico, of dissociating groups present. At Itsacids, Isoelectric pHproteins (pI), an Acid In ofIts amino peptides, and (seeAmino Chapter 4). no porta carga neta In the the clinical clinical laboratory, laboratory, knowledge knowledge of of the the pI pI guides guides selection selection At Isoelectric pH (pI), an Amino Acid selección de condiciones para separaciones electroforéticas; Similar considerations apply to all polyprotic acids (eg, pro-por Bears No Net Charge In the clinical laboratory, knowledge of the pI guides selection of conditions for electrophoretic separations. For example, Bears Noson Net Charge of conditions for electrophoretic separations. For example, Los zwitteriones un ejemplo de una especie isoeléctrica, la forBears No Net Charge ejemplo, la electroforesis a pH de 7.0 separará dos moléculas con teins), regardless of the number of dissociating groups present. of conditions for electrophoretic separations. For example, electrophoresis are example of an isoelectric species—the electrophoresis at at pH pH 7.0 7.0 will will separate separate two two molecules molecules with with pI pI Zwitterions are one one example ofan an Amino isoelectric species—the AtZwitterions pH un (pI), Acid ma deIts unaIsoelectric molécula que tiene número igual despecies—the cargas positivas electrophoresis valores de pI de 6.0 y 8.0, porque a pH de 7.0 la molécula con un pI In the clinical laboratory, knowledge of the pI guides selection at pH 7.0 will separate two molecules with pI Zwitterions are one example of an isoelectric form aa molecule that has equal number of and values of of 6.0 6.0 and and 8.0, 8.0, because because at at pH pH 7.0 7.0 the the molecule molecule with with aa pI pI form of ofNo molecule thatdesde has an an equal de number of positive positive and devalues y negativas y, así, es neutral el punto vista eléctrico. El pH Bears Net Charge 6.0 tendrá una carga positiva neta, en tanto que aquella con un of ofconditions for electrophoretic separations. For example, values of6.06.0 and 8.0, because at pH 7.0 the molecule with a pI form of a molecule that has an equal number of positive and of 6.0 will will have have aa net net positive positive charge, charge, and and that that with with aa pI pI of of 8.0, 8.0, isoeléctrico, llamado pI, es pHisoelectric a la mitad entre valores de of 6.0 pIa will de 8.0 posee carga negativa neta. Aplican electrophoresis atuna pH 7.0Similar will separate two molecules with pI Zwitterionstambién are one example ofelan species—the have a net positive charge, and that with a consideraciones pI ofto 8.0, net negative charge. considerations apply underR R a net negative charge. Similar considerations apply to underR R similares al charge. entendimiento de cromatográficas sobre values of 6.0 and 8.0,Similar because atseparaciones pH 7.0 the molecule with a pI form of a molecule negative considerations apply to underR that has an equal R number of positive and a net standing standing chromatographic chromatographic separations separations on on ionic ionic supports supports such such apoyos iónicos, como dietilaminoetil (DEAE) celulosa (cap. 4). of 6.0 will have a net positive charge, and that with a pI of 8.0, N H N H standing chromatographic separations on ionic supports such as N H N H as diethylaminoethyl diethylaminoethyl (DEAE) (DEAE) cellulose cellulose (see (see Chapter Chapter 4). 4). N H N H a net negative charge. Similar considerations apply as diethylaminoethyl (DEAE) cellulose (see Chapter 4).to underR R N N N N standing chromatographic separations on ionic supports such N H N H H H valores de(DEAE) pKWith con ambiente N H N H a varían pK Values the asLos diethylaminoethyl cellulose (see el Chapter 4). pK Values Vary Vary With the Environment Environment H H a a pK Values Vary With the Environment El ambiente de un grupo disociable group afecta affects a su pKits los valores N N a; así, a The environment of a dissociable pK R R R The environment of a dissociable group affects its pKaa.. The The pK pKaa R R R de pK de los grupos R de aminoácidos libres en solución acuosa The environment of a dissociable group affects its pK . The pK a H H values of the R groups of free amino acids in aqueous R R R aaqueous asoluvalues of the R groups of free amino acids in soluNH NH NH pK Values Vary the Environment NH NH NH (cuadro 3-1) proporcionan una guía aproximada los valovalues the R sólo groups ofWith free amino acids in aqueouspara soluaof (Table tion tion (Table 3–1) 3–1) thus thus provide provide only only an an approximate approximate guide guide to to the the NH NH NH los mismos aminoácidos cuando están res devalues pK The environment of a dissociable group affects its pKain .presentes The tion (Table 3–1) thus provide only anacids approximate guide to thepKa en a deof R C R C R C C NH NH22 C NH NH22 C NH NH22 pK the same amino when present proteins. pK a values of the same amino acids when present in proteins. – C NH2 C NH2 C NH2 a of the proteínas. polar favorece forma (R—COO – or groups of free amino incargada aqueous solupKvalues values of Un theRambiente same amino acids whenlaacids present in proteins. favors – a A NHNH NHNH NHNH NH22 NH22 NH22 A polar polar environment environment favors the the charged charged form form (R—COO (R—COO or + –to the o oR—NH R—NH ), y uno no polar, la forma no cargada (R—COOH tion (Table 3–1) thus provide only an approximate guide NH2 NH2 NH2 A polar environment favors the charged form (R—COO or 3+ ), and a nonpolar environment favors the uncharged + R—NH ), and a nonpolar environment favors the uncharged 3 C NH2 C NH2 C NH2 + R—NH ).3 De este modo, un ambiente no polar el pKa de pK values ofathe same amino acids when present in proteins. R—NH nonpolar environment favors theaumenta uncharged 2and FIGURE form or a 3 ),(R—COOH FIGURENH3–2 3–2 Resonance Resonance hybrids hybrids of of the the protonated protonated forms forms of of the the form (R—COOH or R—NH R—NH22). ). A A nonpolar nonpolar environment environment– thus thus grupo carboxilo (convirtiéndolo en un ácido más débil) pero NHof Aun polar environment favors the charged form (R—COO ordisFIGURE 3–2 hybrids forms of the form (R—COOH or R—NH ). A nonpolar environment thus 2Resonance 2 the protonated NH 2 R groups of histidine and arginine. of a carboxyl group (making it a weaker acid) raises the pK 2 group (making it a weaker acid) but R groups of histidine and arginine. raises the pK of a carboxyl but a +la de un minuye grupo amino (lo que hace quethe sea uncharged un ácido más R groups of histidine and arginine. R—NH ), anda a nonpolar environment favors raises the pK 3 a of a carboxyl group (making it a weaker acid) but fuerte). La presencia grupos adyacentes puede thus reforzar FIGURE 3-2 3–2 Híbridos Resonance hybrids of the protonated forms of the form (R—COOH or de R—NH ). cargados A nonpolar environment FIguRA de resonancia de las formas protonadas de 2 R groups histidine and arginine. o contrarrestar solventes, maneraitque el pKa acid) de unbut grupo los grupos of R de la histidina y arginina. raises the pKa of efectos a carboxyl groupde (making a weaker Murray_CH03_PTR.indd 17 Murray_CH03_PTR.indd 17 Murray_CH03_PTR.indd 17 Murray_CH03_PTR.indd 17 03 Bender.indd 17 3/26/2009 8:27:42 PM 3/26/2009 8:27:42 PM 3/26/2009 8:27:42 PM 3/26/2009 8:27:42 PM 27/11/09 12:51:08 18 18 Section i Sección i Structures & Functions of Proteins & Enzymes Estructuras y funciones de proteínas y enzimas TABLE 3–2 Typical Range of pKa Values for Ionizable Groups in Proteins CuadRO 3-2 Rango típico de valores de pKa para grupos ionizables en proteínas Dissociating Group pKa Range Grupo en disociación α-Carboxyl Rango de pKa 3.5–4.0 Carboxilo Non-ααCOOH of Asp or Glu 3.54.0–4.8 a 4.0 COOH no α deof Asp Imidazole Hiso Glu 4.06.5–7.4 a 4.8 Imidazol SH ofde CysHis 6.58.5–9.0 a 7.4 SH de OHCis of Tyr 8.59.5–10.5 a 9.0 OH de Tir α-Amino 9.58.0–9.0 a 10.5 α-Amino ε-Amino of Lys 8.09.8–10.4 a 9.0 є-Amino de Lis of Arg Guanidinium 9.8~12.0 a 10.4 Guanidinio de Arg ~12.0 lowers that of an amino group (making it a stronger acid). The funcional dependerá de su charged localización dentro de reinforce una proteína presence of adjacent groups can or dada. counLasteract variaciones de pK pueden abarcar unidades de pH enteras a The pK of a functional group thus solvent effects. will a (cuadro 3-2). Los its valores de pK de los Variations listados porin a queadivergen depend upon location within given protein. hasta de pH son pH frecuentes en los 3–2). sitios activos de pKtres canunidades encompass whole units (Table pKa values a enzimas. Un ejemplo extremo, un ácido aspártico sepultado de tiothat diverge from those listed by as much as 3 pH units are rredoxina, tiene un active pKa desites másofdeenzymes. 9 (¡una desviación deexample, más de 6a common at the An extreme unidades de pH!). buried aspartic acid of thioredoxin, has a pK above 9—a shift of more than 6 pH units! a La solubilidad de aminoácidos refleja su carácter The Solubility ofiónico Amino Acids Reflects LosTheir grupos funcionales cargados Ionic Characterde aminoácidos aseguran que son solvatados con facilidad por groups —y, así,of son solubles en— solventes The charged functional amino acids ensure that pothey laresarecomo el agua y el etanol, pero son insolubles en solventes no readily solvated by—and thus soluble in—polar solvents polares, como benceno, hexano o éter. such as water and ethanol but insoluble in nonpolar solvents Los as aminoácidos no absorben luz visible y, así, son incoloros. such benzene, hexane, or ether. Sin embargo, la tirosina, fenilalanina y en especial el triptófano, abAmino acids do not absorb visible light and thus are colorsorben luz ultravioleta de longitud de onda alta (250 a 290 nm). less. However, tyrosine, phenylalanine, and especially tryptoDado queabsorb absorbehigh-wavelength luz ultravioleta con una eficiencia unas 10 veces phan (250–290 nm) ultraviolet light. mayor que la fenilalanina o la tirosina, el triptófano hace la principal Because it absorbs ultraviolet light about ten times more efcontribución a la capacidad de casi todas lasorproteínas para absorber ficiently than either phenylalanine tyrosine, tryptophan luz makes en la región de 280 nm. the major contribution to the ability of most proteins to absorb light in the region of 280 nm. LOS gRuPOS α-R DETERMINAN THE α-R GROUPS DETERMINE THE LAS PROPIEDADES DE PROPERTIES OF AMINO ACIDS AMINOÁCIDOS Since theelsmallest amino acid, can be accommodated Dado queglycine, la glicina, aminoácido de menor tamaño, puede adapin places inaccessible to other amino acids, it often se occurs tarse en lugares inaccesibles a otros aminoácidos, a menudo enwhere peptides bend sharply. The hydrophobic R groups cuentra donde los péptidos muestran flexión aguda. Los grupos Rof alanine, valine, leucine, and leucina isoleucine and theyaromatic hidrofóbicos de la alanina, valina, e isoleucina, los gruposR groups of phenylalanine, tyrosine, and tryptophan typically R aromáticos de la fenilalanina, tirosina y triptófano, típicamente ocse cur primarily in theprimaria interioren of el cytosolic Thecitosólicharged encuentran de manera interior proteins. de proteínas groups anddeacidic amino básicos acids stabilize specific cas.RLos gruposofRbasic cargados aminoácidos y acídicos estaprotein conformations via ionic interactions, or salt bridges. bilizan conformaciones proteínicas específicas por medio de interThese iónicas interactions also function “charge relay” systems duracciones o puentes salinos. inEstas interacciones también funcionan en sistemas de “relevo de carga” durante catálisis enzimática y transporte de electrones en mitocondrias que están efectuando respiración. La histidina desempeña funciones singulares en la Murray_CH03_PTR.indd 18 03 Bender.indd 18 ing enzymatic catalysis and electron transport in respiring mitochondria. Histidine plays uniqueimidazol roles inpermite enzymatic catálisis enzimática. El pKa de su protón que cafuntalysis. The pK of its imidazole proton permits it to function a cione a pH neutral como un catalizador básico o ácido. El grupo at neutral pH asdeeither a base an acid catalyst. The primary alcohol primario la serina y elor grupo tioalcohol primario (—SH) alcohol group of serine and the primary thioalcohol (—SH) de la cisteína son excelentes nucleófilos y pueden funcionar como group of cysteine are excellent nucleophiles andel can function tales durante la catálisis enzimática. Sin embargo, grupo alcohol as such during enzymatic However, the secondary secundario de la treonina, pesecatalysis. a ser un buen nucleófilo, no cumple alcohol group of threonine, while a good nucleophile, con una función análoga en la catálisis. Los grupos —OH de ladoes serinottirosina fulfill an analogous role in catalysis.enThe —OH groups na, y treonina también participan la regulación de la of acserine,detyrosine, participate regulation tividad enzimasand cuyathreonine actividad also catalítica dependeindel estado de of the activity of enzymes whose catalytic activity depends on fosforilación de estos residuos. the phosphorylation state of these residues. LOS gRuPOS FuNCIONALES FUNCTIONAL GROUPS DICTATE DICTAN LAS REACCIONES QuÍMICAS THE CHEMICAL REACTIONS OF DE LOS AMINOÁCIDOS AMINO ACIDS Cada grupo funcional de un aminoácido muestra todas sus reaccioEach functional group of an amino acid exhibits all of its nes químicas características. Para grupos de ácido carboxílico, tales characteristic chemical reactions. For carboxylic acid groups, reacciones incluyen la formación de ésteres, amidas y anhídridos these reactions include the formation of esters, amides, and ácidos; en el caso de los grupos amino, comprende acilación, amidaacid anhydrides; for amino groups, acylation, amidation, and ción y esterificación; en tanto que para grupos —OH y —SH, conesterification; and for —OH and —SH groups, oxidation and lleva oxidación y esterificación. La reacción de mayor importancia esterification. The most important reaction of amino acids is de los aminoácidos es la formación de un enlace péptido (sombreathe formation of a peptide bond (shaded). do en la siguiente figura). + H3N H N O N H O O– O SH Alanil Cisteinil Valina La secuencia de aminoácidos Amino Acid Sequence Determines determina la estructura primaria Primary Structure ElThe número y el orden de todos aminoácidos en unin polinumber and order of alllosofresiduos the amino acid residues a péptido constituyen su estructura primaria. Los aminoácidos prepolypeptide constitute its primary structure. Amino acids sentes en péptidos reciben nombre de residuos aminoacilo obpresent in peptides are elcalled aminoacyl residues and yare tienen su denominación mediante remplazar los sufijos -ato o -ina named by replacing the -ate or -ine suffixes of free amino acids dewith aminoácidos libresaspartyl, por -il (p. ej., alanil, aspartil, La no-yl (eg, alanyl, tyrosyl). Peptides aretirosil). then named menclatura de los péptidos está en función de los derivados del reas derivatives of the carboxyl terminal aminoacyl residue. siduo aminoacilo carboxilo terminal; por ejemplo, Lis-Leu-Tir-Gln For example, Lys-Leu-Tyr-Gln is called lysyl-leucyl-tyrosylseglutamine. llama lisil-leucil-tirosil-glutamina. Así, la terminación The -ine ending on glutamine indicates -ina thatenitsla glutamina indica que su grupo carboxilo α no participa en la formaα-carboxyl group is not involved in peptide bond formation. ción del enlace peptídico. Peptide Structures Are Easy to Draw Las estructuras peptídicas Prefixes like tri- or octadenote peptides with three or eight residues, respectively. By convention, peptides are written son fáciles de dibujar with the residue thatubears the free α-amino group left. Los prefijos como triocta- denotan péptidos con tresatuthe ocho reTo draw a peptide, use a zigzag to represent the main chain siduos, respectivamente. Por convención, los péptidos se escriben or backbone. Add the el main chain atoms, which occur in the con el residuo que porta grupo amino α libre a la izquierda. Para repeating order: α-nitrogen, α-carbon, carbonyl carbon. dibujar un péptido, se usa un zigzag para representar la cadenaNow prinadd oa esqueleto. hydrogen Se atom to each α-carbon and to each cipal añaden los principales átomos de lapeptide cadena, mismos que se presentan en el orden de repetición: nitrógeno α, carbono α, carbono carbonilo. Ahora se adiciona un átomo de hidrógeno a cada carbono α, y a cada nitrógeno péptido, y un oxígeno 3/26/2009 8:27:42 PM 27/11/09 12:51:12 19 19 19 19 cHAPteR 3 Amino Acids & Peptides 19 tiva porper cadapeptide enlace peptídico formado. Sin embargo, los péptidos charge bond Peptides nevertheless are charge per peptide bond formed. formed. Peptides nevertheless are charge per peptide bond formed. Peptides nevertheless are están cargados a pH fisiológico debido a sus grupos carboxilo y amicharged at physiologic pH owing to their carboxyl and amicharged at physiologic pH owing to their carboxyl and amicharged at physiologic pH owing to their carboxyl and amino terminales y, donde están presentes, sus grupos R acídicos o charge per peptide bond formed. Peptides nevertheless are no terminal groups and, where present, their acidic or basic no terminal groups and, where present, their acidic or basicbáno terminal groups and, present, their basic sicos. Alatigual que aminoácidos, carga netaacidic sobre un péptido charged physiologic pHwhere owingthe tolanet their carboxyl amiR As for amino acids, charge on aaor peptide R groups. groups. As forpara amino acids, the net charge onand peptide Rdepende groups. As for amino acids, the net charge on a peptide de sus grupos del pH de su ambiente y de los valores de pK no terminal groups and, where present, their acidic or basic depends on the pH of its environment and on the pK values ofof a depends on the pH of its environment and on the pKa a values on the pH of its environment and on the pK values of en disociación. Rdepends groups. As for amino acids, the net charge on a peptide its dissociating groups. a its dissociating groups. its dissociating groups. depends on the pH of its environment and on the pKa values of its dissociating groups. cHAPteR 3 Amino Acids & Peptides cHAPteR 3 Amino Acids & Peptides cHAPteR 3 Amino Acids & Peptides capítulo 3 Aminoácidos y péptidos alnitrogen, carbono Por último, se carbonyl añaden loscarbon. grupos R apropiados and to Finally, add nitrogen,carbonilo. andan anoxygen oxygen tothe the carbonyl carbon. Finally, add nitrogen, and an oxygen to the carbonyl carbon. Finally, (sombreados en la siguiente figura) a cada átomo de carbono α. the appropriate R groups (shaded) to each α-carbon atom. the appropriate R groups (shaded) to each α-carbon atom.add the appropriate groupsto (shaded) to eachcarbon. α-carbon atom.add nitrogen, and anRoxygen the carbonyl Finally, CC (shaded) CCα NNeachCα-carbon the appropriate R Ngroups to atom. N C α CCα C NN Cα CC N CCα C α α Cα C N Cα C N Cα C O HC Cα O NHH3C C H 3C HH α O HC H – ++ N COO CC 3 CC HH3NN COO– HN 3 – +H N C O C N H C H C C C 3N C C COO C N 3 HH H 2– CH H N C C +H NHH C CH H 2 CH COO C 3 CH2 2 H C OO N H H CH2 – C CH N C C OH 2 – O OOC OH H H H – OOC CH OH2 CH2 OOC O – OH OOC N N Three-letter linked straight Las abreviaturasabbreviations de tres letras enlazadas líneas lines rectas repreThree-letter abbreviations linkedby bypor straight linesreprerepreThree-letter abbreviations linked by straight lines represent an unambiguous primary structure. Lines are omitted sentan una estructura primaria no ambigua. Las líneas se omiten sent an unambiguous primary structure. Lines are omittedfor for sent an unambiguous arelines omitted for Three-letter linked by Lines straight represingle-letter abbreviations. para abreviaturas deabbreviations una primary sola letra.structure. single-letter abbreviations. single-letter abbreviations. sent an unambiguous primary structure. Lines are omitted for Glu Glu--Ala Ala--LiLiss --Gli Gli --TiTirr--Ala Ala single-letter abbreviations. Glu EE - Ala AA - LiKsK - Gli GG - Ti YYr - Ala AA Glu s - Gli E - Ala A - LiK G - TiYr - Ala A E A K G Y A Some Contain Unusual SomePeptides Peptides Contain Unusual algunos péptidos contienen Some Peptides Contain Unusual Amino Acids Amino Acids aminoácidos comunes Some Peptides Contain Unusualcontain only the Amino Acidspoco In In mammals, mammals, peptide peptide hormones hormones typically typically contain only the Amino Acids En mamíferos, las hormonas peptídicas en formacontain típica sólo contieIn mammals, hormones typically only the α-amino acids ofof proteins linked bonds. α-amino acidspeptide proteins linked by by standard standard peptide peptide bonds. terest. Formation of peptides from amino acids is therefore ElThe enlace peptídico está no cargadoone a cualquier pH deone interés fisioterest. Formation ofnet peptides amino acids is therefore peptide bond uncharged at any pH of physiologic inaccompanied by loss positive and negative accompanied by aais net loss ofoffrom one positive and one negative lógico; por ende, la formación de péptidos a partir de aminoácidos accompanied by aofnet loss of from one positive and one negative terest. Formation peptides amino acids is therefore está acompañadabydeapérdida de una carga positiva negaaccompanied net lossneta of one positive and oney una negative OO O CC O C NN CH CH2 2 N CH2 C HH CH CH2 2 N CH2 H CH2 + HH CC NH NH3 3+ H CH2 + H C NH – 3 COO COO– + H C NH COO– 3 SH SH SH CH CH2 SH 2 CH2 CH CH CH2 CH C C CH C OO C O O HH H NN H N N Murray_CH03_PTR.indd Murray_CH03_PTR.indd 19 19 Murray_CH03_PTR.indd 19 Murray_CH03_PTR.indd 19 03 Bender.indd 19 O CC O– C C + + NN + N +HH NH There isisno of rotation about the bonddelthat conThere thus no freedom about that conHthe bond De estethus modo, nofreedom hay libertad de rotación alrededor enlace que H of rotation There thus is no freedom of rotation about the bond that connects the carbonyl carbon and the nitrogen of a peptide bond. nects the carbon and nitrogen peptidepeptídico. bond. conecta el carbonyl carbono carbonilo y elthe nitrógeno deofuna enlace nects the carbonyl carbon the nitrogen abond peptide bond. There thus is nothe freedom of rotation about that conConsequently, C, and ofofthe aof bond are Consequently, the O, C,N Nand and Hatoms atoms apeptide peptide bond are En consecuencia, losO, átomos de O,HC, N y H de un enlace peptídico son Consequently, the O, C, N and H atoms of a peptide bond are nects the carbonyl carbon and the nitrogen of a peptide bond. coplanar. The imposed semi-rigidity of the peptide bond has coplanar. The imposed semi-rigidity the peptide bond coplanares. La semirrigidez impuesta delofenlace peptídico tienehas concoplanar. imposed semi-rigidity of of the in has Consequently, the O, C, para N for and H peptide bond are important consequences manner which peptides importantThe consequences for theatoms manner which peptides secuencias importantes la the manera en laain cual los péptidos y las important consequences for the manner in which peptides coplanar. The imposed semi-rigidity of the peptide bond has and proteins fold to generate higher orders of structure. Encirand proteins fold topara generate higher orders structure. Encirproteínas se pliegan generar órdenes de of estructura superiores. and proteins fold to generate higher orders in of structure. Encirimportant consequences for the which peptides cling arrows (Figure indicate free rotation about cling brown arrows (Figure 3–4) indicate free rotation about En la brown figura 3-4, las flechas de3–4) colormanner café (marrón) alrededor de los cling brown arrows (Figure 3–4) indicate free rotation about and proteins fold to generate higher orders of structure. Encirthe remaining bonds of the polypeptide backbone. thelaces remaining of the polypeptide backbone. en restantesbonds del esqueleto polipeptídico indican rotación libre. the remaining bonds(Figure of the polypeptide cling brown arrows 3–4) indicatebackbone. free rotation about the remaining bonds of the polypeptide backbone. Noncovalent Forces Constrain Noncovalent Forces Constrain Las fuerzas no covalentes restringen Noncovalent Forces Constrain Peptide Conformations Peptide Conformations las conformaciones de péptidos Noncovalent Forces Constrain Peptide Folding ofofaaConformations peptide probably occurs with Folding peptide probably occurscoincident coincident withits itsbiobioEl plegado de un péptido probablemente ocurre de manera coinciPeptide Conformations Folding of a peptide probably occurs coincident with its biosynthesis (see Chapter 37). The physiologically active conforsynthesis (see Chapter 37). The physiologically active confor- dente con su biosíntesis (cap. 37). La conformación activa desde el synthesis Chapter 37). The physiologically conforFolding of(see a peptide probably occurs coincidentactive with its biosynthesis (see Chapter 37). The physiologically active conforOO O R′ R′ R′ O 121° 121° 121° 121° CC C 117° R′ 122° 122° 122°120° 120° HH H H CC C 117° 110° 122° 120° NN C 120° C110° 117° 120°120° 120° 120° 110° N 120° 117° 120° 110° N 120° 120° HH H H HH H OO O H CC C 747n mnm nm N0.147 0. C OO O O O NN 0N .01. 41 14 0.36 0.36nm nm 0.36 nm 7 nm C HH H H 0. . CC 01.31232n 0. 13 mnm C 2 nmm nm 53 3 n 0. CC 0.1.1C 5 m 13 NN 2 0 3n nm 5 C 0.1 m N 3 15 0. R′′ R′′ R′′ R′′ n N HH H H FIGURE a fully FIGURE3–4 3–4 Dimensions Dimensionsofof fullyextended extendedpolypeptide polypeptidechain. chain. 0.36anm FIguRA 3-4 Dimensiones de una cadena polipeptídica extendida The ofofDimensions the bond are coplanar. Free can FIGURE 3–4 a fully polypeptide chain. Thefour fouratoms atoms thepeptide peptideof bond areextended coplanar. Freerotation rotation can occur about the that connect the α-carbon with the por completo. Los cuatro átomos delare enlace peptídico son coplanares. The four atoms ofbonds the peptide bond coplanar. Free can FIGURE 3–4 Dimensions of a fully extended polypeptide chain. occur about the bonds that connect the α-carbon withrotation theα-nitrogen α-nitrogen CH CH2 2 CH2 – COO COO– CH2 – COO COO– FIGURE Glutathione (γ-glutamyl-cysteinyl-glycine). – FIGURE3–3 3–3COO Glutathione (γ-glutamyl-cysteinyl-glycine).Note Note the non-α peptide bond that links FIGURE 3–3 Glutathione (γ-glutamyl-cysteinyl-glycine). Note the non-α peptide bond that linksGlu Gluto toCys. Cys. the non-α 3-3 peptide bond that links Glu to Cys. FIguRA (γ-glutamil-cisteinil-glicina). Note elNote enlace FIGURE 3–3 Glutatión Glutathione (γ-glutamyl-cysteinyl-glycine). peptídico α que une Glu a Cis. the non-αnopeptide bond that links Glu to Cys. O CC O C NN N C HH NH 0.1 nm 0.1 0.1 nm 0.1 nm nm 0.1 nm Peptides PeptidesAre ArePolyelectrolytes Polyelectrolytes Peptides Are Polyelectrolytes The peptide bond is atatany Thepéptidos peptide bond isuncharged uncharged anypH pHofofphysiologic physiologicininLos son polielectrólitos Peptides Are The peptide bond Polyelectrolytes is uncharged at any pH of physiologic interest. Formation of peptides from amino acids is therefore α-carboxyl and α-nitrogen atoms, bondbond in fact exhibits carácter depeptides doble enlace parcial: Although are written as if this a single linked the partial character: partialdouble-bond double-bond character: partial double-bond character: α-carboxyl and α-nitrogen atoms, this bond in fact exhibits OO OO– – partial double-bond character: – 0.123 nm 0.123 nm nm nm 0.1230.123 nm 0.123 nen los aminoácidos α de proteínas enlazados porcontain enlaces peptídicos α-amino acidspeptide of proteins linked by standard peptide bonds. In mammals, hormones typically only the Other peptides may, however, contain nonprotein amino acids, Other peptides may, however, contain nonprotein amino acids, estándar. Sin embargo, otros péptidos pueden contener aminoáciOther peptides may, however, contain nonprotein amino acids, α-amino acids of proteins linked by standard peptide bonds. derivatives of the protein amino acids, or amino acids linked derivatives of the protein amino acids, or amino acids linked dos no peptides proteínicos, derivados de los aminoácidos proteínicos, derivatives of the protein amino acids, or the amino acids linked Other may, however, contain nonprotein amino acids,o by peptide bond. For terminal byan anatypical atypical peptide bond. Forexample, example, theamino amino terminal aminoácidos ligados por un enlace peptídico atípico. Por ejemplo, el by an atypical peptide bond. Forparticipates example, the derivatives of the protein amino acids, or amino acidsterminal linked glutamate of which ininamino protein folding glutamate ofglutathione, glutathione, which participates protein folding glutamato amino terminal del glutatión, que participa en el plegado glutamate glutathione, protein by aninin atypical peptide bond. For participates example, theinamino and the ofofwhich xenobiotics (Chapter 53), isisfolding linked and theofmetabolism metabolism xenobiotics (Chapter 53),terminal linked deglutamate proteína yofen ela metabolismo debond xenobióticos (cap. 53), está ligaand in the metabolism of xenobiotics (Chapter 53), is glutathione, which participates in protein folding to cysteine by non-α peptide (Figure 3–3). The amino to cysteine by a non-α peptide bond (Figure 3–3). The linked amino do a la cisteína mediante un enlace peptídico no α (fig. 3-3). El glutoterminal cysteine by a non-α peptide bond (Figure 3–3). amino and in theglutamate metabolism of xenobiotics (Chapter 53),The is linked terminal ofof thyrotropin-releasing hormone (TRH) glutamate thyrotropin-releasing hormone (TRH) tamato amino terminal de la hormona liberadora de tirotropina terminal glutamate of peptide thyrotropin-releasing hormone (TRH) to by apyroglutamic non-α bond 3–3). The amino is cyclized to acid, and the group ofofthe iscysteine cyclized topyroglutamic acid, and(Figure thecarboxyl carboxyl group the (TRH) forma unpyroglutamic cicloprolyl hacia ácido piroglutámico y el grupo carboxiiscarboxyl cyclized to acid, and the carboxyl group of the terminal glutamate of thyrotropin-releasing hormone (TRH) carboxyl terminal residue is amidated. The nonprotein terminal prolyl residue is amidated. The nonprotein loisamino del residuo carboxilo terminal está amidado. Los aminocarboxyl terminal prolyl residue isornithine amidated. The nonprotein cyclized toprolilo pyroglutamic acid, and the carboxyl group of acids d-phenylalanine and are present ininthe the amino acids d-phenylalanine and ornithine are present the ácidos no proteínicos d-fenilalanina y ornitina están presentes en amino acids d-phenylalanine and ornithine are present in carboxyl terminal prolyl residue is amidated. The nonprotein cyclic peptide antibiotics tyrocidin and gramicidin S, while the cyclic peptide antibiotics tyrocidin and gramicidin S, while the los antibióticos peptídicos cíclicos tirocidina y gramicidina S, miencyclic peptide antibiotics tyrocidin and gramicidin S,ininwhile the amino acids d-phenylalanine and ornithine are present in skin the heptapeptide opioids and the heptapeptide opioidsdermorphin dermorphin anddeltophorin deltophorin the skin tras que losAmerican opioides heptapeptídicos dermorfina y deltoforina en la heptapeptide opioids dermorphin and deltophorin in the skin cyclic peptide antibiotics tyrocidin and gramicidin S, while the of South tree frogs contain d-tyrosine and d-alanine. of South American tree frogs contain d-tyrosine and d-alanine. piel de ranas arborícolas (plataneras) sudamericanas contienen dof South American frogs contain andind-alanine. heptapeptide opioidstree dermorphin andd-tyrosine deltophorin the skin tirosina y d-alanina. of South American tree frogs contain d-tyrosine and d-alanine. El enlace peptídico tiene carácter The Peptide Bond Partial DoubleThe Peptide BondHas Has Partial DoubleThe Peptide Bond Has Partial DoubleBond Character de doble enlace parcial Bond Character The Peptide Bond Has Partial DoubleBond Character Aunque lospeptides péptidosare se written escriben como un enlace enlazara Although bond linked the Although peptides are writtenas asififaasisingle single bondúnico linked the Bond Character Although peptides are written as if a single bond linked the los átomos carboxilo α y nitrógeno α; este enlace de hecho muestra α-carboxyl and α-nitrogen atoms, this bond in fact exhibits α-carboxyl and α-nitrogen atoms, this bond in fact exhibits Puede ocurrir rotación libre alrededor de los enlaces que and with the α-carbonyl carbon (brown arrows). The extended occur about that connect the α-carbon with theconectan α-nitrogen The atoms ofbonds the peptide bond are coplanar. Free rotation can andfour with thethe α-carbonyl carbon (brown arrows). The extended el carbono α con el nitrógeno α y con el carbono carbonilo α (flechas polypeptide chain is thus a semirigid structure with two-thirds ofof and with the α-carbonyl carbon (brown arrows). The extended occur about the bonds that connect the α-carbon with the α-nitrogen polypeptide chain is thus a semirigid structure with two-thirds de café). Debackbone este modo, la(brown cadena polipeptídica extendida the atoms ofofα-carbonyl the held ininaafixed planar relationship one polypeptide chain is thus a semirigid structure with two-thirds ofes and with the carbon arrows). The extended thecolor atoms the backbone held fixed planar relationship one to The α-carbon isisone una estructura semirrígida con partes deatoms los átomos the atoms of thedistance backbone helddos inadjacent aterceras fixed planar relationship polypeptide chain is thusbetween abetween semirigid structure with two-thirds of del toanother. another. The distance adjacent α-carbon atoms esqueleto enbetween una relación planar fija unoangles, con otro. 0.36 nm Å). The distances and bond which to another. The adjacent α-carbon atoms is the atoms ofsostenidos the backbone held in a fixed planar relationship one 0.36 nm(3.6 (3.6 Å).distance Theinteratomic interatomic distances and bond angles, which La distancia entre átomos de carbono α adyacentes es de 0.36 nm are not equivalent, are also shown. (Redrawn and reproduced, 0.36 nm (3.6 Å). The interatomic distances and bond angles, which to another. The distance between adjacent α-carbon atoms is are not equivalent, are also shown. (Redrawn and reproduced, (3.6 Å). También se muestran las distancias interatómicas ystructure los ángulos with permission, from Pauling L,L, Corey LP, Branson HR: The are not equivalent, are also shown. (Redrawn and reproduced, 0.36 nm (3.6 Å). The interatomic distances bond angles, which with permission, from Pauling Corey LP,and Branson HR: The structure of Two hydrogen-bonded helical configurations the de enlace, que no sonalso equivalentes. (Redibujado y HR: reproducido, with permission, from Pauling L, Corey LP, Branson Theofof structure are not equivalent, are shown. (Redrawn and reproduced, ofproteins: proteins: Two hydrogen-bonded helical configurations the con autorización, de Pauling L, Corey LP, Branson HR: The structure polypeptide chain. Proc Natl Acad Sci U S A 1951;37:205.) of proteins: Two hydrogen-bonded helical configurations of the with permission, fromProc Pauling L, Corey HR: The structure polypeptide chain. Natl Acad Sci LP, U SBranson A 1951;37:205.) ofproteins: proteins:Two Two hydrogen-bonded helical configurations the polypeptide chain. Proc Natl Acad Sci USA 1951;37:205.)ofofthe of hydrogen-bonded helical configurations polypeptidechain. chain.Proc ProcNatl NatlAcad AcadSci SciUUSA 1951;37:205.) polypeptide S A 1951;37:205.) 3/26/2009 3/26/2009 8:27:44 8:27:44PM PM 3/26/2009 8:27:44 PM 3/26/2009 8:27:44 PM 27/11/09 12:51:27 20 Sección i Estructuras y funciones de proteínas y enzimas punto de vista fisiológico refleja las contribuciones colectivas de la secuencia de aminoácidos, el obstáculo estérico y las interacciones no covalentes (p. ej., formación de enlaces de hidrógeno, interacciones hidrofóbicas) entre residuos. Las conformaciones frecuentes comprenden hélices α y hojas plegadas β (cap. 5). ■ ■ ■ ANÁLISIS DEL CONTENIDO DE AMINOÁCIDOS DE MATERIALES BIOLÓgICOS A fin de determinar la identidad y cantidad de cada aminoácido en una muestra de material biológico, primero es necesario hidrolizar los enlaces peptídicos que vinculan entre sí a los aminoácidos, mediante tratamiento con HCl caliente. La mezcla de aminoácidos libres resultante a continuación se trata con 6-amino-N-hidroxisuccinimidil carbamato, que reacciona con sus grupos amino α para formar derivados fluorescentes que se separan e identifican usando cromatografía líquida de alta presión (cap. 4). La ninhidrina, también ampliamente usada para detectar aminoácidos, forma un producto de color púrpura con aminoácidos α, y un aducto de color amarillo con los grupos imina de prolina e hidroxiprolina. RESuMEN ■ ■ Tanto los d-aminoácidos como los no-α-aminoácidos existen en la naturaleza, pero sólo los l-α-aminoácidos están presentes en las proteínas. Todos los aminoácidos poseen al menos dos grupos funcionales débilmente acídicos, R—NH3+ y R—COOH. Muchos también poseen grupos funcionales débilmente acídicos adicionales, como —OH, —SH, guanidino o porciones imidazol. 03 Bender.indd 20 ■ ■ Los valores de pKa de todos los grupos funcionales de un aminoácido dictan su carga neta a un pH dado. El pI es el pH al cual un aminoácido no porta carga neta y así no se mueve en un campo eléctrico de corriente directa. De las reacciones bioquímicas de aminoácidos, la más importante es la formación de enlaces peptídicos. Los grupos R de aminoácidos determinan sus funciones bioquímicas singulares. Con base en las propiedades de sus grupos R, los aminoácidos se clasifican como básicos, acídicos, aromáticos, alifáticos o que contienen azufre. Los péptidos reciben su nombre por el número de residuos aminoácidos presentes y como derivados del residuo carboxilo terminal. La estructura primaria de un péptido es su secuencia de aminoácidos, empezando a partir del residuo amino terminal. El carácter de doble enlace parcial del enlace que une el carbono carbonilo y el nitrógeno de un péptido hace coplanares a los cuatro átomos del enlace peptídico y restringe el número de conformaciones peptídicas posibles. REFERENCIaS Doolittle RF: Reconstructing history with amino acid sequences. Protein Sci 1992;1:191. Gladyschev VN, Hatfield DL: Selenocysteine-containing proteins in mammals. J Biomed Sci 1999;6:151. Kreil G: d-Amino acids in animal peptides. Annu Rev Biochem 1997;66:337. Nokihara K, Gerhardt J: Development of an improved automated gas-chromatographic chiral analysis system: application to nonnatural amino acids and natural protein hydrolysates. Chirality 2001;13:431. Sanger F: Sequences, sequences, and sequences. Annu Rev Biochem 1988;57:1. Stadtman TC: Selenocysteine. Annu Rev Biochem 1996;65:83. Wilson NA et al: Aspartic acid 26 in reduced Escherichia coli thioredoxin has a pKa greater than 9. Biochemistry 1995;34:8931. 27/11/09 12:51:29 c a Proteínas: determinación de la estructura primaria Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Las proteínas son macromoléculas complejas desde los puntos de vista físico y funcional, que desempeñan múltiples funciones de im­ portancia crucial. Una red de proteína interna, el citoesqueleto (cap. 49), mantiene la forma y la integridad física celulares. Filamentos de actina y miosina forman la maquinaria contráctil del músculo (cap. 49). La hemoglobina transporta oxígeno (cap. 6), mientras que los anticuerpos circulantes descubren invasores extraños (cap. 50). Las enzimas catalizan reacciones que generan energía, sintetizan bio­ moléculas y las degradan, replican genes y los transcriben, procesan mRNA (ácido ribonucleico mensajero), entre otras funciones (cap. 7). Los receptores permiten a las células detectar hormonas y otros indicios ambientales, así como mostrar respuesta a los mismos (caps. 41 y 42). Las proteínas están sujetas a cambios físicos y funcionales que reflejan el ciclo de vida de los organismos en los cuales residen. Una proteína típica nace en el momento de la traducción (cap. 37), madura a través de eventos de procesamiento postraduccional, como proteólisis parcial (caps. 9 y 37), alterna entre estados de trabajo y de reposo por medio de la intervención de factores reguladores (cap. 9), envejece por oxidación, desamidación, etc. (cap. 52), y muere cuan­ do se degrada hacia los aminoácidos que la componen (cap. 29). Un objetivo importante de la medicina molecular es la identificación de proteínas y los eventos en su ciclo de vida cuya presencia, ausencia o deficiencia se relaciona con estados fisiológicos o enfermedades específicos (fig. 4­1). La secuencia primaria de una proteína propor­ ciona tanto una huella digital molecular para su identificación, como información que puede usarse para identificar y clonar el gen o los genes que la codifican. LAS PROTEÍNAS Y LOS PÉPTIDOS DEBEN PURIFICARSE ANTES DE ANÁLISIS La proteína muy purificada es esencial para el examen detallado de sus propiedades físicas y funcionales. Las células contienen miles de proteínas distintas, cada una en cantidades ampliamente varia­ bles. De este modo, el aislamiento de una proteína específica en can­ tidades suficientes para análisis, plantea un formidable desafío que puede requerir el uso sucesivo de múltiples técnicas de purificación. En los métodos clásicos se aprovechan las diferencias de la solubili­ dad relativa de proteínas individuales en función del pH (precipitación isoeléctrica), polaridad (precipitación con etanol o acetona) o con­ centración de sal (separación mediante adición de sulfato de amo­ nio). Las separaciones cromatográficas dividen las moléculas entre 4 P í t u l o dos fases, una móvil y la otra estacionaria. Para la separación de aminoácidos o azúcares, la fase estacionaria, o matriz, puede ser una hoja de papel filtro (cromatografía en papel) o una capa delgada de celulosa, sílice o alúmina (cromatografía en capa delgada [TLC]). Cromatografía en columna En la cromatografía en columna de proteínas se emplean como la fase estacionaria pequeñas cuentas esféricas de celulosa modifica­ da, acrilamida o sílice, cuya superficie típicamente es cubierta con grupos funcionales químicos. Las cuentas están contenidas en un recipiente cilíndrico, o columna, hecho de vidrio, plástico o metal. Estas matrices de fase estacionaria interactúan con las proteínas con base en su carga, hidrofobicidad y propiedades de unión a ligando. Se aplica una mezcla de proteína a la columna y la fase móvil líqui­ da se filtra a través de ella. Pequeñas porciones de la fase móvil o de elución se recolectan a medida que salen (fig. 4­2). Cromatografía de partición Las separaciones cromatográficas en columna dependen de la afini­ dad relativa de diferentes proteínas por una fase estacionaria dada y por la fase móvil. En la cromatografía de partición, la asociación entre cada proteína y la matriz es débil y transitoria. Las proteínas que interactúan de manera más fuerte con la fase estacionaria se retienen más tiempo. El lapso durante el cual una proteína está aso­ ciada con la fase estacionaria va en función de la composición de las fases tanto estacionaria como móvil. De este modo, la separación óp­ tima entre la proteína de interés y otras proteínas es alcanzada me­ diante manipulación cuidadosa de la composición de las dos fases. Cromatografía de exclusión de tamaño En la cromatografía de exclusión de tamaño —o filtración en gel— se separan las proteínas con base en su radio de Stokes, el radio de la esfera que ocupan a medida que entran en solución. El radio de Stokes es una función de la masa y la forma moleculares. Una pro­ teína alargada que cae ocupa un mayor volumen que una proteína esférica de la misma masa. En la cromatografía de exclusión de ta­ maño se emplean cuentas porosas (fig. 4­3). Los poros son análogos a irregularidades en una ribera de río. A medida que los objetos se mueven torrente abajo, los que entran en una irregularidad se re­ trasan hasta que regresan a la corriente principal. De modo similar, las proteínas con radios de Stokes demasiado grandes como para entrar en los poros (proteínas excluidas) permanecen en la fase móvil 21 04 Bender.indd 21 27/11/09 12:56:46 22 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 2 Plegado AAAAA 3' 5' mRNA Val Gln Fen Asp Met Trp Ribosoma 1 Síntesis Gli Pro Lis lle Val Gln Fen Asp Met 3 Procesamiento SH SH S S 2H 2e Met-Asp-Fen-Gln-Val 4 Modificación covalente (p. ej., acilación de ácido graso) Fen His Glu Ala Asn Tre Cis Ub Ub Ub Ub 10 Degradación S S S 8 "Envejecimiento" Productos Sustratos (p. ej., oxidación, desamidación, desnaturalización) 7 Catálisis 5 Translocación 9 Ubiquitinación 6 Activación S S S S S S S Membrana FIgURA 4-1 Representación esquemática del ciclo de vida de una proteína hipotética. 1) El ciclo de vida empieza con la síntesis en un ribosoma de una cadena polipeptídica, cuya estructura primaria está dictada por un mRNA. 2) A medida que procede la síntesis, el polipéptido empieza a plegarse hacia su conformación natural (azul). 3) El plegado puede acompañarse por eventos de procesamiento, como división proteolítica de una secuencia líder N-terminal (Met-Asp-Fen-Gln-Val) o la formación de enlaces disulfuro (S—S). 4) La modificación covalente subsiguiente puede, por ejemplo, fijar una molécula de ácido graso (amarillo) para 5) translocación de la proteína modificada hacia una membrana. 6) La unión de un efector alostérico (rojo) puede desencadenar la adopción de una conformación activa desde el punto de vista catalítico. 7) Con el tiempo, las proteínas quedan dañadas por ataque por sustancias químicas, desamidación o desnaturalización, y 8) pueden “marcarse” mediante la fijación covalente de varias moléculas de ubiquitina (Ub). 9) La proteína ubiquitinada después se degrada hacia los aminoácidos que la componen, que quedan disponibles para la síntesis de nuevas proteínas. que está fluyendo y salen antes que las que pueden entrar en los poros (proteínas incluidas). Así, las proteínas surgen a partir de una columna de filtración en gel en orden descendente de sus radios de Stokes. Cromatografía de absorción En este caso, la mezcla de proteína es aplicada a una columna bajo condiciones donde la proteína de interés se asocia con la fase esta­ cionaria de manera tan estrecha que su coeficiente de partición es, en esencia, la unidad. Las moléculas que no se adhieren son objeto de elución primero y se desechan. Las proteínas después se libe­ ran de manera secuencial al romper las fuerzas que estabilizan el complejo de proteína­fase estacionaria, más a menudo al usar un gradiente de concentración creciente de sal. La composición de la fase móvil se altera de manera gradual, de modo que las moléculas son liberadas de manera selectiva en orden descendente de su afini­ dad por la fase estacionaria. Cromatografía de intercambio iónico Aquí, las proteínas interactúan con la fase estacionaria mediante in­ teracciones entre una carga y otra. Las proteínas que tienen una car­ ga positiva neta a un pH dado se adhieren a cuentas que tienen gru­ pos funcionales con carga negativa, como carboxilatos o sulfatos (intercambiadores de cationes). De modo similar, las proteínas con 04 Bender.indd 22 una carga negativa neta se adhieren a cuentas que tienen grupos funcionales con carga positiva, por lo general aminas terciarias o cuaternarias (intercambiadores de aniones). Las proteínas, que son polianiones, compiten contra iones monovalentes por unión al soporte —de ahí el término “intercambio iónico”—. Por ejemplo, las proteínas se unen a la dietilaminoetil (DEAE) celulosa al rem­ plazar los contra­iones (por lo general, Cl– o CH3COO–) que neutra­ lizan la amina protonada. Las proteínas unidas se desplazan de mane­ ra selectiva mediante aumento gradual de la concentración de iones monovalentes en la fase móvil. Las proteínas muestran elución en orden inverso de la fuerza de sus interacciones con la fase es­ tacionaria. Puesto que la carga neta sobre una proteína está determinada por el pH (cap. 3), es factible lograr la elución secuencial de proteí­ nas mediante cambiar el pH de la fase móvil. De manera alternativa, una proteína puede quedar sujeta a rondas consecutivas de croma­ tografía de intercambio iónico, cada una a un pH diferente, de modo que las proteínas que muestran coelución a un pH presentan elución a distintas concentraciones de sal a otro pH. Cromatografía de interacción hidrofóbica Separa a proteínas con base en su tendencia a asociarse con una matriz de fase estacionaria cubierta con grupos hidrofóbicos (p. ej., fenil u octil sefarosa [Sepharose]). Las proteínas con superficies hi­ drofóbicas expuestas se adhieren a la matriz por medio de interac­ 27/11/09 12:56:48 CHAPTER 4 Capítulo 4 Proteins: Determination of Primary Structure Proteínas: determinación de la estructura primaria 23 23 P 1 M 2 C R1 R2 F FIgURA deaun aparato de chromatography cromatografía líquida típico.R1 R1and y R2: FIGURE4-2 4–2 Componentes Components of typical liquid apparatus. R2: reservorios líquidophase de faseliquid. móvil.P:P:Programable sistema de bombeo que contiene dos Reservoirsdel of mobile pumpingprogramable system containing two pumps, bombas, y 2,aymixing una cámara de mezcla, El sistema puede parafrom que bombee 1 and 2,1and chamber, M. TheM. system can be set toajustarse pump liquid only one líquido desde sólo to unswitch reservorio, para que cambie reservorios en algún punto predeterminado a fin de reservoir, reservoirs at some predetermined point to generate a step gradient, or to generar un gradiente o in para mezclar líquidos desde dostoreservorios en mix liquids from the empinado, to reservoirs proportions that vary overlos time create a continuous proporciones que varían el tiempo para containing crear un gradiente continuo. C: Fraction columnacollector de vidrio, gradient. C: Glass, metal,con or plastic column stationary phase. F: metal o plásticoportions, que contiene fase estacionaria. F: recolector de fracción recolectar for collecting calledlafractions, of the eluant liquid in separate testpara tubes. porciones, llamadas fracciones, del líquido de elución en tubos de ensayo separados. surfaces adhere to the matrix via hydrophobic interactions that hidrofóbicas are enhanced mobile phase mediante of high ionic strength. ciones queby sona incrementadas una fase móvil Nonadherent proteins are first washed away. The polarity of de fuerza iónica alta. Las proteínas no adherentes primero se elimi­ the mobile phase is then decreased by gradually lowering the nan mediante lavado. A continuación se disminuye la polaridad de salt concentration. interaction between protein and la fase móvil al reducirIfdethe manera gradual la concentración de stasal. tionary phase is particularly strong, ethanol or glycerol may be Si la interacción entre proteína y fase estacionaria es en particular added to the mobile phase to decrease its polarity and further fuerte, puede añadirse etanol o glicerol a la fase móvil para dismi­ weaken hydrophobic interactions. nuir su polaridad y debilitar más las interacciones hidrofóbicas. Cromatografía de afinidad Affinity Chromatography LaAffinity cromatografía de afinidad exploits explota lathe altahigh selectividad deof casi to­ chromatography selectivity most dasproteins las proteínas porligands. sus ligandos. Las enzimas pueden purificarse for their Enzymes may be purified by affinity mediante cromatografía afinidad usando sustratos, productos, chromatography usingde immobilized substrates, products, coencoenzimas inhibidoresIn inmovilizados. En teoría,that sólointeract se adhieren zymes, oro inhibitors. theory, only proteins with lasthe proteínas que interactúan con elBound ligandoproteins inmovilizado. A eluted conti­ immobilized ligand adhere. are then nuación eluciónwith de las proteínas unidas mediante compe­ either se byefectúa competition soluble ligand or, less selectively, by tencia con ligando soluble o, de manera menos al alterar disrupting protein-ligand interactions usingselectiva, urea, guanidine lashydrochloride, interacciones entre proteína ligando usando clorhidrato mildly acidicypH, or high salturea, concentrations. de Stationary guanidina, phase pH levemente o altas concentraciones de sal. matricesacídico available commercially contain li+ Lasgands matrices estacionaria disponibles en el the comercio contie­ suchdeasfase NAD or ATP analogs. Among most powernen como NAD+ oaffinity análogos de trifosfato adenosina fulligandos and widely applicable matrices are thosedeused for the (ATP). Entre lasofmatrices afinidadrecombinant más potentesproteins. y ampliamente purification suitablyde modified These aplicables las quethat se usan la purificación de proteínas include figuran a Ni2+ matrix bindspara proteins with an attached polyrecombinantes modificadas de manera idónea, las cuales incluyen una matriz de Ni2+ que se une a proteínas con una “marca” de poli­ Murray_CH04_PTR.indd 23 04 Bender.indd 23 histidine “tag,” and a glutathione matrix that binds a recombinant protein to glutathione histidina fija, linked así como una matriz S-transferase. de glutatión que se une a una proteína recombinante enlazada a glutatión S­transferasa. Peptides Are Purified by Reversed-Phase Los péptidos seChromatography purifican mediante High-Pressure cromatografía altaused presión decolumn fase reversa The stationary phase de matrices in classic chroma- Las matrices fase estacionaria usadas en la cromatografía de co­ tography are de spongy materials whose compressibility limits flow lumna clásica son materiales esponjosos cuya compresibilidad of the mobile phase. High-pressure liquid chromatographyli­ mita el flujo de la incompressible fase móvil. En la cromatografía de alta (HPLC) employs silica or alumina líquida microbeads presión (HPLC) se emplean microcuentas de sílice o alúmina as the stationary phase and pressures of up to a few thousandin­ compresibles como lamatrices fase estacionaria, y presiones de hasta psi. Incompressible permit both high flow ratesalgunos and miles de libras por pulgada cuadrada (psi). Las matrices incompre­ enhanced resolution. HPLC can resolve complex mixtures of sibles tantowhose índicesproperties de flujo altos comoonly resolución lipidspermiten or peptides differ slightly.aumen­ Retada. La HPLC HPLC puede resolver complejasstationary de lípidos phase o pépti­ versed-phase exploitsmezclas a hydrophobic dos cuyas propiedades difieren sólo un poco. En la HPLC de fase of aliphatic polymers 3–18 carbon atoms in length. Peptide reversa se explota una fase estacionaria hidrofóbica de polímeros mixtures are eluted using a gradient of a water-miscible oralifáticos de 3 such a 18 átomos de carbono de longitud. Se efectúa elu­ ganic solvent as acetonitrile or methanol. ción de las mezclas de péptido usando un gradiente de un solvente orgánico miscible en agua, como acetonitrilo o metanol. Protein Purity Is Assessed by Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) La pureza de las proteínas se evalúa mediante The most widely used method for determining the purity of a proelectroforesis en gel de poliacrilamida tein is SDS-PAGE—polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) (PAGE) El método más ampliamente usado para determinar la pureza de una proteína es la SDS­PAGE, electroforesis en gel de poliacrilamida 3/26/2009 8:50:29 PM 27/11/09 12:56:49 24 24 24 SECTION I Structures & Functions of Proteins & Enzymes SECTION I Structures & Functions of Proteins & Enzymes SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas A A B B C C FIgURA 4-3 Size-exclusion Cromatografíachromatography. de exclusión de tamaño. A: una de moléculas grandes FIGURE 4–3 A: A mixture ofmezcla large molecules (brown) and (café) FIGURE 4–3 Size-exclusion chromatography. A:filtration Acolumna mixture of and ysmall pequeñas (rojo)(red) se aplica en la parte superior una delarge filtración deentering gel.(brown) B: althe momento molecules are applied to the top of ade gel column. B:molecules Upon small molecules (red) are applied to the top of a gel filtration column. B: Upon entering the de entrarthe a lasmall columna, las moléculas pequeñas entran a poros enmatrix la matriz de from fase estacionaria (gris) column, molecules enter pores in the stationary phase (gray) which the large column, small molecules pores in the phase matrix (gray) from which the de la cualthe seare excluyen lasC: moléculas grandes. C: stationary a(blue) medida que la fase móvil (azul) fluye porexcluded la large molecules excluded. Asenter the mobile phase flows down the column, the large, moleculeslas are excluded. C: Asthe theexcluidas, mobile phase flows down themientras column, the large, excluded columna, moléculas grandes, fluyen(blue) dentro de la misma, quefrom las pequeñas, molecules flow with it, while small molecules, which are temporarily sheltered the flow molecules flow it,dewhile the small molecules, which are temporarily the flowcada que están protegidas forma temporal del flujo cuando están dentro desheltered los poros,from se quedan when inside thewith pores, lag farther and farther behind. when inside vez más atrás.the pores, lag farther and farther behind. in the presence of the anionic detergent sodium dodecyl sulfate (PAGE) presencia aniónicosodium duodecil sulfatosulfate de so­ in theen presence of del thedetergente anionic detergent dodecyl (SDS). Electrophoresis separates charged biomolecules based dio(SDS). (SDS).Electrophoresis La electroforesisseparates separa biomoléculas cargadas conbased base charged biomolecules on the rates at which they migrate in an applied electrical field. en on los the índices a at loswhich cualesthey migran en unin campo eléctrico aplicado; en rates migrate an applied electrical field. For SDS-PAGE, acrylamide is polymerized and cross-linked cuanto a la SDS­PAGE, la acrilamida se polimeriza y secross-linked entrecruza For SDS-PAGE, acrylamide is polymerized and to form a porous matrix. SDS denatures and binds to proteins para una matriz porosa. Ladenatures SDS se desnaturaliza se une a to aformar form matrix. SDS and binds toy proteins at ratioaofporous one molecule of SDS per two peptide bonds. When proteínas a una proporción de una molécula de SDS bonds. por cada dos at a ratio of one molecule of SDS per two peptide When used in conjunction with 2-mercaptoethanol or dithiothreitol enlaces peptídicos. Cuando es utilizada en forma conjunta con used in conjunction with 2-mercaptoethanol or dithiothreitol to reduce and break disulfide bonds (Figure 4–4), SDS-PAGE 2­mercaptoetanol o ditiotreitol para reducir enlaces y to reduce the andcomponent break disulfide bonds (Figure 4–4), disulfuro SDS-PAGE separates polypeptides of multimeric proteins. romperlos (fig. 4­4), la SDS­PAGE separa los polipéptidosproteins. compo­ separates the component polypeptides of multimeric The large number of anionic SDS molecules, each bearing nentes de proteínas multiméricas. ElSDS granmolecules, número de each moléculas de large of anionicthe bearing aThe charge ofnumber −1, overwhelms charge contributions of the SDS aniónicas, una de las cuales porta unacontributions carga de –1, abruma aamino chargeacid of cada −1, overwhelms the charge of the functional groups endogenous to the polypeplasamino contribuciones de carga de los grupos funcionales aminoácidos acid the functional groups endogenous to the polypeptides. Since charge-to-mass ratio of each SDS-polypeptide endógenos a losthe polipéptidos. Dado ratio que laofproporción entre carga y tides. Since charge-to-mass each SDS-polypeptide complex is approximately equal, the physical resistance each masa de cadaiscomplejo de SDS­polipéptido es más oresistance menos igual, la complex approximately equal,through the physical peptide encounters as it moves the acrylamide each maresistencia física que cada péptido encuentra a medida que se mueve peptide encounters as it moves through the acrylamide matrix determines the rate of migration. Since large complexes portrix la matriz de acrilamida determina el índice de migración. Dado determines the rate of migration. Since large complexes encounter greater resistance, polypeptides separate based on queencounter los complejos grandes encuentran mayor resistencia, los poli­ greater resistance, separate based on their relative molecular masspolypeptides (Mr). Individual polypeptides péptidos se separan con basemass en su(Mmasa molecular relativa (M , their relative molecular ). Individual polypeptides trapped in the acrylamide gel are rvisualized by staining withr también conocida como peso molecular). Es factible visualizar poli­ trapped in the acrylamide gel are visualized by staining with dyes such as Coomassie blue (Figure 4–5). péptidos individuales atrapados en el gel4–5). de acrilamida mediante dyes such as Coomassie blue (Figure teñirlos con colorantes como azul de Coomassie (fig. 4­5). Isoelectric Focusing (IEF) Isoelectric Focusing (IEF) Ionic buffers called ampholytes and an applied electric field Ionic buffers called ampholytes an applied electric field Enfoque (IEF)andwithin are used toisoeléctrico generate a pH gradient a polyacrylamide are used to generate aiónicos pH gradient a polyacrylamide Se matrix. usan amortiguadores llamados anfolitos y un campo Applied proteins migrate untilwithin they reach the region of matrix. Applied proteins migrate until they reach thepoint region of eléc trico aplicado para un gradiente de pH dentro de(pI), una the matrix where thegenerar pH matches their isoelectric the matrix where the pH matches their isoelectric point (pI), matriz de poliacrilamida. Las proteínas aplicadas migran hasta the pH at which a molecule’s net charge is zero. IEF is usedque in the pH which nettwo-dimensional charge is zero. IEF issuused in llegan a la at región deaSDS-PAGE lamolecule’s matriz donde el pH coincide con punto conjunction with for electrophoconjunction with SDS-PAGE for two-dimensional electrophoisoeléctrico (pI),separates el pH al cual la carga neta de una molécula es cero. resis, which polypeptides based on pI in one dimenresis, which polypeptides based pI inTwo-dimenone dimenEl sion IEF se usabased deseparates manera con SDS­PAGE para la electrofo­ and on Mrconjunta in the second (Figureon4–6). sion and based onque Mr in the second (Figure 4–6). Two-dimenresis bidimensional, separa polipéptidos con base en el pI en sional electrophoresis is particularly well suited for separating sional electrophoresis is particularly well suited for separating una dimensión y conofbase en la M en la segunda (fig. 4­6). La elec­ the components complex mixtures of proteins. r the components of complex mixtures ofseparar proteins. troforesis bidimensional resulta idónea para los componen­ tes de mezclas de proteínas complejas. Murray_CH04_PTR.indd 24 Murray_CH04_PTR.indd 24 04 Bender.indd 24 NH NH O O H H HN HN HN HN S S S S O O NH NH HN HN NH NH SH SH C2H5 C2H5 OH OH O O HCOOH HCOOH O O H H O O H H SO − 2 SO2− O O O O HS HS HN HN H H O O O O NH NH FIGURE 4–4 Oxidative cleavage of adjacent polypeptide chains FIgURA 4-4 Oxidative La división oxidativa de cadenas polipeptídicas FIGURE 4–4 cleavage ofin adjacent chains linked by disulfide bonds (highlighted blue) bypolypeptide performic acid adyacentes unidascleavage por medio enlaces disulfuro (resaltados en linkedorbyreductive disulfide bonds (highlighted in blue) by performic acid (left) byde β-mercaptoethanol (right) forms azul) al efectuar división en ácido (izquierda) o reductiva mediante (left) or reductive cleavage by β-mercaptoethanol (right) forms two peptides that contain cysteic acid residues or cysteinyl residues, β-mercaptoetanol (derecha) forma dosresidues péptidos contienen two peptides that contain cysteic acid orque cysteinyl residues, respectively. residuos ácido cisteico o residuos cisteinilo, respectivamente. respectively. SANgER WAS FUE EL PRIMERO SANGER THE FIRST TO SANGER WAS THE FIRST TO EN DETERMINAR LA SECUENCIA DETERMINE THE SEQUENCE OF DETERMINE THE SEQUENCE OF DE UN POLIPÉPTIDO A POLYPEPTIDE A POLYPEPTIDE La insulina madura constaof de the la cadena A de 21 y la the cade­ Mature insulin consists 21-residue A residuos chain and Mature insulin consists of the 21-residue A chain and the na B de 30 residuos unidas mediante enlaces disulfuro. Frederick 30-residue B chain linked by disulfide bonds. Frederick Sanger 30-residue B chain linkeddisulfuro by disulfide bonds. Frederick SangerA y Sanger redujo los enlaces (fig. 4­4), separó las cadenas B, y dividió cada cadena hacia péptidos de menor tamaño usando 3/26/2009 8:50:29 PM 3/26/2009 8:50:29 PM 27/11/09 12:56:52 CHAPTER 4 Proteins: Determination of Primary Structure CHAPTER 4 Proteins: Determination of Primary Structure Capítulo 4 Proteínas: determinación de la estructura primaria 25 25 25 trobenzene (Sanger’s reagent), which derivatizes the exposed amino terminal. Después fue determinado el contenido de amino­ trobenzene (Sanger’s reagent), which derivatizes the exposed α-amino groups of the amino-terminal The amino ácidos de cada péptido e identificado el residues. aminoácido amino termi­ α-amino groups of the amino-terminal residues. The amino acid each peptide wastambién then determined and the nal.content El grupoofє­amino de la lisina reacciona con el reactivo acid content of each peptide was then determined and the amino-terminal acid identified. Theterminal ε-aminoreacciona group ofcon 2 de Sanger, pero amino dado que una lisina amino amino-terminal amino acid identified. The ε-amino group of lysine also reacts with es Sanger’s reagent, but since an en aminomol de dicho reactivo, fácil distinguirla de una lisina el interior lysine also reacts with Sanger’s reagent, but since an aminoterminal lysine reacts with 2desde mol dipéptidos of Sanger’s yreagent, it is en readde un péptido. Al trabajar tripéptidos adelan­ terminal lysine reacts with 2 mol of Sanger’s reagent, it is readilytedistinguished a lysine in the interiormayor, of a peptide. por fragmentosfrom de tamaño progresivamente Sanger logró ily distinguished from a lysine in the interior of a peptide. Working fromla diand tri-peptides uplathrough reconstruir secuencia completa de insulina,progressively logro por el cual Working from di- and tri-peptides up through progressively larger fragments, Sanger able to reconstruct the complete recibió un premio Nobelwas en 1958. larger fragments, Sanger was able to reconstruct the complete sequence of insulin, an accomplishment for which he received sequence of insulin, an accomplishment for which he received a Nobel Prize in 1958. a Nobel Prize in 1958. FIGURE 4–5 observe successive purification FIgURA 4-5 Use UsoofdeSDS-PAGE SDS-PAGEtopara observar la purificación FIGURE 4–5 Use of SDS-PAGE to observe successive purification of a recombinant protein.recombinante. The gel was stained Coomassie blue. sucesiva de una proteína El gelwith se coloreó con azul of a recombinant protein. The gel was stained with Coomassie blue. Shown are protein standardsestándares (lane S) of de theproteína indicated(carril Mr , inS)kDa, de Coomassie. Se muestran del crude Mr Shown are protein standards (lane S) of the indicated Mr , in kDa, crude cell extracten(E), cytosol (C), celular high-speed liquid (H), and the indicado, kDa, extracto brutosupernatant (E), citosol (C), líquido cell extract (E), cytosol (C), high-speed supernatant liquid (H), and the DEAE-Sepharose fraction (D). The recombinant protein a mass sobrenadante a alta velocidad (H [por high-speed]), y lahas fracción deof DEAE-Sepharose fraction (D). The recombinant protein has a mass of about 45 kDa. (D). La proteína recombinante tiene una masa DEAE-sefarosa about 45 kDa. de alrededor de 45 kDa. pH = 3 pH = 3 IEF IEF pH = 10 pH = 10 SDS SDS PAGE PAGE FIGURE 4–6 Two-dimensional IEF-SDS-PAGE. The gel was stained FIGURE 4–6 IEF-SDS-PAGE. The gelsewas FIgURA 4-6 Two-dimensional IEF-SDS-PAGE bidimensionales. El gel tiñóstained with Coomassie blue. A crude bacterial extract was first subjected to withazul Coomassie blue. A crude bacterial extract was firstfue subjected to con de Coomassie. Un extracto bacteriano bruto sometido isoelectric focusing (IEF) in a pH 3–10 gradient. The IEF gel was then isoelectric focusingisoeléctrico (IEF) in a pH(IEF) 3–10en gradient. The IEFdegel primero a enfoque un gradiente pHwas de then 3 a 10. placed horizontally on the top of an SDS gel, and the proteins then placed horizontally oncon theIEF topfue of an SDS gel,enand the horizontal proteins then A continuación el gel colocado forma en la further resolved by SDS-PAGE. Notice the greatly improved resolution furthersuperior resolveddebyunSDS-PAGE. Notice the greatly improved parte gel de SDS, y después las proteínas seresolution resolvieron of distinct polypeptides relative to ordinary SDS-PAGE gel (Figure 4–5). of distinct polypeptides relative SDS-PAGE gel (Figure más mediante SDS-PAGE. Nótesetolaordinary resolución muy mejorada de 4–5). distintos polipéptidos en comparación con gel de SDS-PAGE ordinario reduced (fig. the 4-5). disulfide bonds (Figure 4–4), separated the A and reduced the disulfide bonds (Figure 4–4), separated the A and B chains, and cleaved each chain into smaller peptides using B chains, and cleaved each chain into smaller peptides using trypsin, chymotrypsin, and pepsin. The resulting peptides trypsin, quimotripsina chymotrypsin, and pepsin. The resulting peptides tripsina, Los péptidos were then isolated andy pepsina. treated with acid to resultantes hydrolyze después pepwere then isolated and treated with acid to hydrolyze pepfueron aislados y tratados con ácido para hidrolizar tide bonds and generate peptides with as few as enlaces two or peptídi­ three tide bonds and generate peptides with as few as two or three cos y generar péptidos con was apenas dos with o tres1-fluoro-2,4-diniaminoácidos. Cada amino acids. Each peptide reacted amino acids. peptide was reacted with 1-fluoro-2,4-dinipéptido se hizoEach reaccionar con 1­fluoro­2,4­dinitrobenceno (reactivo de Sanger), que deriva los grupos α­amino expuestos de los residuos Murray_CH04_PTR.indd 25 Murray_CH04_PTR.indd 25 04 Bender.indd 25 LA REACCIÓN DE EDMAN PERMITE SECUENCIAR PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS THE THE EDMAN EDMAN REACTION REACTION ENABLES ENABLES Pehr Edman introdujo el fenilisotiocianato (reactivo de Edman) para PEPTIDES & PROTEINS TO BE PEPTIDES & PROTEINS TOamino BE terminal de un pépti­ marcar de manera selectiva el residuo SEQUENCED SEQUENCED do. En contraste con el reactivo de Sanger, el derivado feniltiohidan­ toína (PTH) introduced se puede eliminar bajo condiciones (Edman’s leves para generar Pehr Edman phenylisothiocyanate rePehr Edman introduced phenylisothiocyanate (Edman’s reun nuevo residuo amino terminal (fig. 4­7). Porresidue ende, es agent) to selectively label the amino-terminal ofposible a pep- usar agent) to selectively label the amino-terminal residue of a peprondas sucesivastodeSanger’s derivación con reactivo de Edman para secuen­ tide. In contrast reagent, the phenylthiohydantoin tide. In contrast to Sanger’s reagent, the phenylthiohydantoin ciar muchos residuos de removed una muestra única de péptido. Si bien (PTH) derivative can be under mild conditions to es (PTH) derivative can be removed under mild conditions to fácil determinar los primeros 20residue a 30 residuos un péptido generate a new amino-terminal (Figurede 4–7). Succes- me­ generate a new amino-terminal residue (Figure 4–7). Succesdiante el método de Edman,with casi Edman’s todos los reagent polipéptidos contienen sive rounds of derivatization can theresive rounds of derivatization with Edman’s reagent can therevarios cientos aminoácidos. consecuencia, casisample todos losofpoli­ fore be used to de sequence many En residues of a single fore be used to sequence many residues of a single sample of péptidos primero deben dividir haciaofpéptidos de menor tamaño peptide. While the se first 20–30 residues a peptide can readpeptide. While the first 20–30 residues of a peptide can readde secuenciación Edman. En ocasiones, la división tam­ ilyantes be determined by thede Edman method, most polypeptides ily be determined by the Edman method, most polypeptides bién es several necesariahundred para sortear modificaciones postraduccionales contain amino acids. Consequently, most que contain several hundred amino acids. Consequently, most “bloquean” el grupo de una que no prior reaccione polypeptides must firstα­amino be cleaved intoproteína smaller opeptides polypeptides must first be cleaved into smaller peptides prior el reactivo de Edman. to con Edman sequencing. Cleavage also may be necessary to cirto Edman sequencing. Cleavage also may be necessary to cirA menudo es necesariomodifications generar variosthat péptidos usando más de cumvent posttranslational render a procumvent posttranslational modifications that render a proun método división. Esto refleja tanto inconsistencia en el espa­ tein’s α-aminodegroup “blocked, ” or unreactive with the Edman tein’s α-amino group “blocked,” or unreactive with the Edman ciamiento de sitios de división susceptibles desde el punto de vista reagent. reagent. químico o enzimático, como necesidad de grupos de péptidos It usually is necessary tolagenerate several peptides using cu­ It usually is necessary to generate several peptides using yas secuencias se superponen, de modo que es posible inferir la se­ more than one method of cleavage. This reflects both inconsismore than one method of cleavage. This reflects both inconsiscuencia delspacing polipéptido a partir del cual se derivan.susceptible Después de la tency in the of chemically or enzymatically tency in the spacing of chemically or enzymatically susceptible división, losand péptidos resultantes sepeptides purificanwhose por medio de HPLC cleavage sites the need for sets of sequences cleavage sites and the need for sets of peptides whose sequences de fasesoreversa y seinfer secuencian. overlap one can the sequence of the polypeptide from overlap so one can infer the sequence of the polypeptide from which they derive. Following cleavage, the resulting peptides which they derive. Following cleavage, the resulting peptides are purified by reversed-phase HPLC and sequenced. are purified by reversed-phase HPLC and sequenced. LA BIOLOgÍA MOLECULAR REVOLUCIONÓ LA DETERMINACIÓN MOLECULAR BIOLOGY DE LA ESTRUCTURA MOLECULAR BIOLOGYPRIMARIA REVOLUTIONIZED THE REVOLUTIONIZED THE El conocimiento de secuencias de DNA permite deducir las estruc­ DETERMINATION OF DETERMINATION OF PRIMARY PRIMARY turas primarias de polipéptidos. La secuenciación de DNA requiere STRUCTURE sólo cantidades diminutas del mismo y con facilidad proporciona la STRUCTURE secuencia de de nucleótidos. Paradeduction clonar y secuenciar el DNA Knowledge of cientos DNA sequences permits of the priKnowledge of para DNAuna sequences permits deduction ofcontar the prique codifica proteína particular, es esencial con al­ mary structures of polypeptides. DNA sequencing requires mary structures of polypeptides. DNA sequencing requires gún medio de identificar la clona correcta, como es el caso del cono­ only minute amounts of DNA and can readily yield the seonly minute amounts of DNA and can readily yield the secimiento sobre una porción de su secuencia de nucleótido. De quence of hundreds of nucleotides. To clone and sequence este quence of hundreds nucleotides. ToLaclone and sequence surgido unofmétodo híbrido. secuenciación de Edman themodo, DNAhathat encodes a particular protein, some means of these DNA that encodes a particular protein, some means of usa para proporcionar una secuencia de aminoácidos parcial. identifying the correct clone—eg, knowledge of a portion of Así, identifying the correct clone—eg, knowledge of a portion of es sequence—is factible utilizaressential. preparadores oligonucleótido modela­ itsentonces, nucleotide A hybrid approach thus itsdos nucleotide sequence—is essential. A hybrid approach thus sobre estaEdman secuencia parcial para identificar clonas ao para ampli­ has emerged. sequencing is used to provide partial hasficar emerged. Edman sequencing is used toenprovide a partial el gen apropiado mediante la reacción cadena de polimerasa amino acid sequence. Oligonucleotide primers modeled on amino Oligonucleotide primers modeled on (PCR)acid (cap.sequence. 39). Una vez que se obtiene una clona de DNA auténtica es posible determinar su secuencia de oligonucleótido, así como 3/26/2009 8:50:31 PM 3/26/2009 8:50:31 PM 27/11/09 12:56:54 26 26 SECTION I Structures & Functions of Proteins & Enzymes SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas S N + O N H C H N NH2 R posttranslational modifications suchDE as MASAS proteolytic processLA ESPECTROMETRÍA ing, methylation, glycosylation, phosphorylation, hydroxylaDETECTA MODIFICACIONES tion of proline and lysine, and disulfide bond formation that COVALENTES accompany maturation. While Edman sequencing can detect theApresence posttranslational events, technical limita-la es­ causa de of sumost sensibilidad, rapidez y versatilidad superiores, tions often prevent identification of a specific modification. pectrometría de masas (MS) ha remplazado a la técnica de Edman como el método principal para determinar las secuencias de pépti­ dos y proteínas. De modo similar, la modificación postraduccional MASS SPECTROMETRY Fenilisotiocianato (reactivo de Edman) de proteínas mediante la adición oDETECTS deleción de porciones carbo­ y un péptido COVALENT MODIFICATIONS hidrato, o de grupos fosforilo, hidroxilo y otros grupos, añade o sus­ trae incrementos de masas específicos y fácilmente identificados On(cuadro account of De its superior sensitivity, speed, and versatility, 4­1). este modo, la espectrometría de masas, que dis­ mass spectrometry (MS) has replaced the Edman technique tingue moléculas con base tan sólo en su masa, logra detectar los ascambios the principal for determining of pepfísicosmethod comparativamente sutilesthe ensequences proteínas que ocurren S tides and proteins. Similarly, the posttranslational modificadurante el ciclo de vida de una célula o de un organismo. En un es­ tion of proteins the simple, addition deletionúnico, of carbohydrate NH N pectrómetro de by masas de or cuadripolo una muestra en H moieties, phosphoryl, hydroxyl, or other groups adds or sub- pro­ un vacío se vaporiza en condiciones en las cuales puede ocurrir O tracts specific and readily identified increments of mass (TaH tonación, lo que imparte carga positiva. A continuación, un campo N bleeléctrico 4–1). Mass spectrometry, which discriminates molecules impulsa los cationes a través de un campo magnético, que R N based solely aon their mass, thus can detect the comparatively O H los desvía un ángulo recto a su dirección de vuelo original y los R′ subtle physical changes in (fig. proteins that occur la during the life enfoca sobre un detector 4­8). Se registra fuerza magnética Un ácido feniltiohidantoico cycle of a cell organism. simple, single quadrapole, necesaria paraordesviar la vía In de acada especie iónica en el detector, mass spectrometer a sample in a vacuum is vaporized under + medida como la corriente aplicada al electroimán. Para iones de carga H , nitroH2O conditions where protonation can occur, imparting positive metano neta idéntica, esta fuerza es proporcional a su masa. En un espectró­ charge. electrical then thecampo cations through a metroAn de masas por field tiempo de propels vuelo, un eléctrico aplicado O magnetic field, which deflects them at a right angle to their S de manera breve acelera los iones hacia un detector que registra el NH2 original direction ofllega flight and them onto a detecmomento en el cual cada ion.focuses Para moléculas de carga idéntica, N NH N + tor (Figure 4–8). The magnetic force required to deflect the H la velocidad a la cual se aceleran —y, por ende, el tiempo requerido R path of each ionic species onto the detector, measured as the para llegar al detector— será inversamente proporcional a su masa. R O currentLos applied to the electromagnet, is recorded.por Forlo ions of son espectrómetros de masas convencionales general Una feniltiohidantoína y un péptido identical net charge, this force is proportionate to their mass. utilizados para determinar la masa de moléculas de 4 000 Da o me­ más corto por un residuo Innos, a time-of-flight mass spectrometer,deamasas brieflypor applied mientras que los espectrómetros tiempoelecde vuelo tric field accelerates the ions towards a detector that records FIgURA 4-7 La reacción de Edman. El fenilisotiocianato deriva el FIGURE 4–7 The Edman reaction. Phenylisothiocyanate son idóneos para determinar las masas grandes de proteínas. En un theinicio, time elat análisis which each ion arrives. For molecules identical residuo amino de un péptido un ácido derivatizes the terminal amino-terminal residuecomo of a peptide as a de péptidos y proteínas medianteofespectrometría charge, the fue velocity to whichdebido they are accelerated—and hence feniltiohidantoico. El tratamiento con with ácidoacid en un no phenylthiohydantoic acid. Treatment in asolvente nonhydroxylic de masas obstaculizado a varias dificultades para volati­ thelizar time required to reach the detector—will be inversely prohidroxílico liberaauna feniltiohidantoína, which que después se identifica por solvent releases phenylthiohydantoin, is subsequently moléculas orgánicas grandes. Si bien las moléculas orgánicas su movilidad cromatográfica y un péptido residuo one más residue corto. identified by its chromatographic mobility,con andun a peptide portionate their vaporizarse mass. pequeñasto podían con facilidad mediante calentamiento A continuación se repite el proceso. shorter. The process is then repeated. Conventional mass generally are used to en un vacío (fig. 4­9), las spectrometers proteínas, los oligonucleótidos, etc., queda­ determine the masses of molecules of 4000 Da or less, whereas ban destruidos bajo estas condiciones. Los dos métodos de uso más frecuente para dispersar péptidos, proteínas y otras biomoléculas usar el código genéticocan para inferir la estructura primaria grandes hacia la fase de vapor para análisis con espectrometría de this partial sequence then be used to identify clonesdel or poli­ to TABLE 4–1 Mass Increases Resulting from Common péptido amplify codificado. the appropriate gene by the polymerase chain reacPosttranslational Modifications método aumenta la rapidez y la eficacia del clone análisis tion El (PCR) (seehíbrido Chapter 39). Once an authentic DNA Mass Increase (Da) de la estructura primaria, así como el rango debe proteínas que es Modification is obtained, its oligonucleotide sequence can determined CuADRo 4-1 Incrementos de masas originados posible También como la presencia and thesecuenciar. genetic code used toevita inferobstáculos, the primary structure of thede Phosphorylation 80comunes por modificaciones postraduccionales un grupo polypeptide. bloqueador amino terminal o la falta de un péptido de su­ encoded Modificación Incremento 16 de masa (Da) perposición clave.approach Sólo algunos segmentos de estructura primaria Hydroxylation The hybrid enhances the speed and efficiency deben determinarse mediante de Edman. of primary structure analysisanálisis and the range of proteins that Fosforilación Methylation 14 80 DNA revela el orden en el cual can La be secuenciación sequenced. It de also circumvents obstacles suchseasañaden the Hidroxilación Acetylation 42 16 aminoácidos a laamino-terminal cadena polipeptídica naciente, a medida que se presence of an blocking group or the lack of sin­ a tetiza en el ribosoma. Sin aembargo, no proporciona key overlap peptide. Only few segments of primaryinformación structure Metilación Myristylation 210 14 acerca modificaciones postraduccionales, must bededetermined by Edman analysis. como procesamiento Acetilación Palmitoylation 238 42 proteolítico, metilación,reveals glucosilación, fosforilación, hidroxilación DNA sequencing the order in which amino acids de y formación de enlaces disulfuro acompañan areprolina added ytolisina, the nascent polypeptide chain as it isque synthesized Miristilación Glycosylation 162 210 aonla the maduración. queitlaprovides secuenciación de Edman about permite ribosome.Mientras However, no information Palmitoilación 238 detectar la presencia de casi todos los eventos postraduccionales, las limitaciones técnicas a menudo impiden identificar una modifica­ Glucosilación 162 ción específica. Murray_CH04_PTR.indd 26 04 Bender.indd 26 R′ O 3/26/2009 8:50:31 PM 27/11/09 12:56:56 CHAPTER 4 Capítulo 4 Sonda para muestra 27 Proteins: Determination of Primary Structure Proteínas: determinación de la estructura primaria 27 Placas aceleradoras Tubo de vuelo Muestra Cámara Electroimán Fuente de energía variable Detector Bomba de vacío Salida del detector Voltaje FIGURE components of a simple mass spectrometer. A mixture ofUna molecules, by a red FIgURA4–8 4-8 Basic Componentes básicos de un espectrómetro de masas simple. mezcla represented de moléculas, circle, green triangle, and blue vaporized an ionized state indethe sample These molecules representada por un círculo dediamond, color rojo,isun triánguloinverde y un rombo color azul,chamber. se vaporiza en un estado are then accelerated the flight tube by an electrical potential applied accelerator grid (yellow).un An ionizado en la cámaradown de muestra. Estas moléculas después se aceleran por to el tubo de vuelo mediante adjustableeléctrico electromagnet applies a magnetic field (amarillo). that deflects flight of the individual ions theymagnético strike the potencial aplicado a la rejilla aceleradora Unthe electroimán ajustable aplica ununtil campo detector. The the ion, thehasta higher thegolpean magnetic field required to focus it onto detector. que desvía el greater vuelo dethe losmass ionesofindividuales que el detector. Mientras mayor es lathe masa del ion, más alto es el campo magnético requerido para enfocarlo sobre el detector. time-of-flight mass spectrometers are suited for determining the masses por of proteins. The analysis of peptides and masas sonlarge ionización electroaerosol y desorción y ionización proteins by mass spectometry initially was hindered by difmediante láser asistidas con matriz (MalDI). En la ionización ficulties in volatilizing large organic molecules. While por electroaerosol las moléculas bajo análisis son disueltas en small un sol­ organic molecules could be vaporized by heating in a vente volátil e introducidas en readily la cámara de muestra en un chorro vacuum (Figure oligonucleotides, dediminuto a través 4–9), de unproteins, capilar (fig. 4­9). A medidaetc., que were las gotitas stroyed two most commonly emde líquidounder salen these hacia conditions. la cámara deThe muestra, el solvente se dispersa ployed methods formacromolécula dispersing peptides, proteins, andgaseosa. other con rapidez y deja la suspendida en la fase large biomolecules intopara the ionizar vapor phase for mass La sonda cargada sirve la muestra. La spectrometionización de ric analysis are electrospray ionization matrix-assisted electroaerosol a menudo sirve para analizarand péptidos y proteínas a laser desorption andelución ionization, electrospray medida que pasan por desde or unaMALDI. HPLC uIn otra columna de ionization, theEnmolecules analyzed are dissolved in a cromatografía. la MALDI,tola be muestra se mezcla con una matriz volatileque solvent andun introduced the sample in ade líquida contiene colorante into que absorbe luz, ychamber una fuente minute stream throughdea capillary (Figure As theusando dropletun protones. En la cámara muestra, la mezcla4–9). se excita of liquid the sample chamber, the solvent rapláser, lo queemerges hace queinto la matriz circundante se disperse hacia la fase idly disperses leaving suspended in the de vapor con tanta rapidezthe quemacromolecule se evita el calentamiento de péptidos o proteínas embebidos (fig. 4­9). Los péptidos dentro del espectrómetro de masas pueden frag­ mentarse hacia unidades de menor tamaño mediante colisiones con Murray_CH04_PTR.indd 27 04 Bender.indd 27 gaseous phase. The charged probe serves to ionize the sample. Electrospray ionization frequently used toinducida analyzepor peptides átomos de helio o argón is neutros (disociación colisión), and proteins as an HPLC or other Dado chromay determinar las they masaselute de losfrom fragmentos individuales. que los tography column. In MALDI, is mixed with aentre liq- un enlaces peptídicos son mucho the mássample lábiles que los enlaces uid matrixy containing a light-absorbing dye anddiferirán a sourceentre of sí carbono otro, los fragmentos más abundantes protons. In theequivalentes sample chamber, mixture is excitedPuesto usingque por unidades a unothe o dos aminoácidos. a —con laser, las causing the surrounding matrix to disperse the y excepciones de 1) leucina e isoleucina, y 2) into glutamina vapor phase so rapidly as to de avoid heating embedded peptides lisina— la masa molecular cada aminoácido es singular, la se­ orcuencia proteins del(Figure péptido4–9). puede reconstruirse a partir de las masas de sus Peptides inside the mass spectrometer can be broken down fragmentos. into smaller units by collisions with neutral helium or argon atoms (collision-induced dissociation), and the masses of the individual fragments determined. Espectrometría de masasSince peptide bonds are much more labile than carbon-carbon bonds, the most abunen tándem dant fragments will differ from one another by units equivalent tose one or two amino acids. the exceptions Aquí emplea el equivalente deSince—with dos espectrómetros de masasof enla­ zados en serie, y ahora permite analizar mezclas de péptidos com­ plejas, sin purificación previa. El primer espectrómetro separa pép­ tidos individuales con base en sus diferencias de masa. Al ajustar la 3/26/2009 8:50:32 PM 27/11/09 12:56:58 28 28 SECTION I SECCIÓN I Structures & Functions of Proteins & Enzymes Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Calor Ionización con electroaerosol MALDI Láser FIGURE 4–9 commonde methods for FIgURA 4-9 Three Tres métodos uso frecuente vaporizing molecules in the chamber of a de para vaporizar moléculas en sample la cámara de muestra mass spectrometer. un espectrómetro de masas. (1) leucine and isoleucine and (2) glutamine and lysine—the fuerza del campo del primer imán, un péptido único puede dirigirse molecular mass of each amino acid is unique, the sequence hacia el segundo espectrómetro de masas, donde se generan frag­ of the peptide can be reconstructed from the masses of its mentos y se determinan sus masas. fragments. La espectrometría de masas en tándem Tandem Mass Spectrometry permite detectar anormalidades Complex peptide mixtures can now be analyzed, without prior metabólicas purification, by tandem mass spectrometry, which employs the equivalentde of masas two mass spectrometers linkedpara in series. The La espectrometría en tándem puede usarse efectuar first en spectrometer separates individualdepeptides based para upon pruebas muestras de sangre provenientes recién nacidos theirladifferences By adjustingde theaminoácidos, field strength of the detectar presencia yinlasmass. concentraciones ácidos first magnet, a single peptide can be directed the second grasos y otros metabolitos. Las anormalidades de lasinto concentracio­ mass spectrometer, where fragments are generated and their nes de metabolitos pueden servir como indicadores diagnósticos paramasses diversosdetermined. trastornos genéticos, como fenilcetonuria, encefalopa­ tía con acidemia etilmalónica y acidemia glutárica tipo 1. Alimentación desde el sistema de cromatografía tion in 1995 of the complete genome sequence of Haemophitro o cinco residuos de longitud puede bastar para identificar el ORF lus influenzae, the genomes of hundreds of organisms have correcto. been deciphered. Where genome sequence is known, the task Los algoritmos de búsqueda computarizados ayudan a la iden­ of determining a protein’s DNA-derived primary sequence is tificación del gen que codifica para una proteína dada; por ejemplo, materially simplified. In essence, the second half of the hyen el establecimiento de perfil de masa de péptido se reintroduce un brid approach has already been completed. All that remains is digerido de péptido en el espectrómetro de masas, y se determinan to acquire sufficient information to permit the open reading los tamaños de los péptidos. A continuación se usa una computado­ frame (ORF) that encodes the protein to be retrieved from an ra para encontrar un ORF cuyo producto proteínico predicho, si se Internet-accessible genome database and identified. In some dividiera hacia péptidos mediante el método de división selecciona­ cases, a segment of amino acid sequence only four or five resido, produciría un grupo de péptidos cuyas masas coinciden con las dues in length may be sufficient to identify the correct ORF. observadas mediante MS. Computerized search algorithms assist the identification of the gene encoding a given protein. In peptide mass profiling, for example, a peptide digest is introduced into the mass PROTEÓMICA Y EL PROTEOMA spectrometer and the sizes of the peptides are determined. A is then to find an ORF whose predicted proElcomputer objetivo de used la proteómica tein product would, if broken down into peptides by the cleavesageidentificar la totalidad proteínas method selected, produce a setde of peptides whose masses elaboradas por una célula en match those observed by MS. Tandem Mass Spectrometry Can Detect Abnormalities LAMetabolic gENÓMICA PERMITE IDENTIFICAR Tandem mass spectrometry bePEQUEÑAS used to screen blood sam- diversas condiciones PROTEÍNAS A PARTIRcan DE ples from newborns for the presence and concentrations of Si bien se conoce la secuencia del genoma humano, el cuadro propor­ CANTIDADES DE DATOS PROTEOMICS & THE PROTEOME amino acids, fatty acids, and other metabolites. Abnormali- cionado por la genómica sola es tanto estático como incompleto. La DEties SECUENCIA in metabolite levels can serve as diagnostic indicators for a proteómica se dirige a identificar la totalidad de proteínas elabora­ The Goal of Proteomics Is to Identify the variety disorders, such as phenylketonuria, das por una célula en condiciones diversas. A medida que los genes La genómica,oflagenetic aplicación de secuenciación de oligonucleótidoethylau­ Entire Complement of Proteins Elaborated malonicyencephalopathy, and glutaric acidemia type 1. para se activan y desactivan, se sintetizan proteínas en tipos de células tomatizada, recuperación y análisis de datos computarizados by a Cell particulares en Under momentosDiverse específicosConditions del crecimiento o la diferen­ secuenciar el complemento genético completo de un organismo, ha revolucionado el análisis de estructura primaria. Desde la determi­ GENOMICS ENABLES PROTEINS TO BE nación en 1995 de la secuencia de genoma completa de Haemophilus influenzae, se han descifrado los genomas de cientos de organismos. IDENTIFIED FROM SMALL AMOUNTS Cuando se conoce la secuencia del genoma, la tarea de determinar OF SEQUENCE DATA la secuencia primaria derivada de DNA de una proteína se simpli­ Primary analysis beenlarevolutionized genomfica de manerastructure considerable. En has esencia, segunda mitadbydel mé­ the application of automated oligonucleotide sequencing todoics, híbrido ya se ha completado. Todo lo que queda es obtener and computerized datapermitir retrieval analysis to sequence suficiente información para queand el marco de lectura abiertaan organism’s entire complement. Sinceathe determina(ORF) que codifica paragenetic la proteína sea recuperada partir de una base de datos de genoma accesible en Internet, y sea identificada. En algunos casos, un segmento de secuencia de aminoácidos de sólo cua­ Murray_CH04_PTR.indd 28 04 Bender.indd 28 ciación, en respuesta a estímulos Lasthe células While así thecomo sequence of the human genomeexternos. is known, picmusculares expresan proteínasalone no expresadas por células neurales, y ture provided by genomics is both static and incomplete. el Proteomics tipo de subunidades tetrámero de hemoglobina pasa aims to presente identify en theelentire complement of proteins por cambios antes después deldiverse parto. Muchas proteínas pasan por elaborated by aycell under conditions. As genes are modificaciones postraduccionales durante la maduración hacia cell for­ switched on and off, proteins are synthesized in particular mas competentes punto de vista funcional, o como types at specificdesde timesel of growth or differentiation andun in me­ rediosponse de regular sus propiedades. Por ende, el conocimiento del exge­ to external stimuli. Muscle cells express proteins not noma humano sólo cells, representa el type inicioof de la tareapresent de describir pressed by neural and the subunits in the organismos vivos en detalle molecular, así como entender la diná­ hemoglobin tetramer undergo change pre- and postpartum. mica de procesos como crecimiento, envejecimiento y enfermedad. Dado que el cuerpo humano contiene miles de tipos de células, cada 3/26/2009 8:50:32 PM 27/11/09 12:57:00 Capítulo 4 Proteínas: determinación de la estructura primaria 29 una de las cuales contiene miles de proteínas, el proteoma —el con­ junto de todas las proteínas expresadas por una célula individual en un momento particular— representa un blanco en movimiento de formidables dimensiones. mediante conservación de aminoácidos particulares en posiciones clave. De este modo, la información acerca de las propiedades y la función fisiológica de una proteína recién descubierta puede inferir­ se al comparar su estructura primaria con la de proteínas conocidas. La electroforesis bidimensional y las micromatrices multigénicas se usan para estudiar la expresión de proteína RESuMEN Un objetivo de la proteómica es la identificación de proteínas cuyas magnitudes de expresión se correlacionan con eventos importantes desde el punto de vista médico. Se cree que las proteínas cuya apari­ ción o desaparición se relaciona con un estado fisiológico específico o con una enfermedad determinada proporcionarán información acerca de las causas y los mecanismos primarios. La determina­ ción de los proteomas característicos de cada tipo de célula requiere eficiencia máxima en el aislamiento y la identificación de proteínas individuales. En el método contemporáneo se utiliza automatiza­ ción robótica para acelerar la preparación de muestras, y geles bidi­ mensionales grandes para resolver proteínas celulares. A continua­ ción se extraen polipéptidos individuales y se analizan mediante secuenciación de Edman o espectroscopia de masas. Si bien sólo es posible resolver alrededor de 1 000 proteínas en un gel único, la elec­ troforesis bidimensional plantea una importante ventaja por cuanto examina las proteínas en sí. En un método alternativo, llamado Mul­ tidimensional Protein Identification Technology (MudPIT), se em­ plean rondas sucesivas de cromatografía para resolver los péptidos producidos a partir de la digestión de una muestra biológica comple­ ja hacia varias fracciones más simples que se pueden analizar por separado mediante MS. Las micromatrices multigénicas, a veces lla­ madas microchips de DNA, en las cuales se detecta la expresión de los mRNA que codifican para proteínas, ofrecen un método com­ plementario para la proteómica. Si bien los cambios de la expresión del mRNA que codifica para una proteína no necesariamente refle­ jan cambios comparables de la concentración de la proteína corres­ pondiente, las micromatrices multigénicas son más sensibles que los geles bidimensionales, en particular respecto a proteínas poco abundantes y, así, permiten examinar un rango más amplio de pro­ ductos de gen. La bioinformática ayuda a la identificación de funciones de las proteínas Se desconocen las funciones de una gran proporción de las proteí­ nas codificadas por el genoma humano. Aún está en sus inicios la creación de micromatrices proteínicas para practicar pruebas de ma­ nera directa respecto a las funciones potenciales de proteínas a una escala masiva. Sin embargo, avances recientes en bioinformática per­ miten a los investigadores comparar secuencias de aminoácidos para descubrir indicios respecto a propiedades potenciales, funciones fi­ siológicas y mecanismos de acción de proteínas. Los algoritmos ex­ plotan la tendencia de la naturaleza a emplear variaciones de un tema estructural para efectuar funciones similares en varias proteí­ nas [p. ej., el pliegue de unión del nucleótido de Rossmann para unir NAD(P)H, secuencias de blanco nuclear, y manos EF para unir Ca2+]. Estos dominios por lo general se detectan en la estructura primaria 04 Bender.indd 29 ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ Los polímeros de aminoácidos largos o polipéptidos constituyen la unidad estructural básica de las proteínas, y la estructura de una proteína proporciona información acerca de cómo desempeña sus funciones. Las proteínas pasan por alteraciones postraduccionales durante su lapso de vida, que influyen sobre su función y determinan su destino. El método de Edman ha quedado remplazado en su mayor parte por la espectrometría de masa, recurso sensible y versátil para determinar estructura primaria, para identificar modificaciones postraduccionales y detectar anormalidades metabólicas. La clonación del DNA y la biología molecular, junto con la química de proteínas, proporcionan un método híbrido que aumenta mucho la rapidez y la eficiencia para determinar las estructuras primarias de proteínas. La genómica —el análisis de toda la secuencia de oligonucleótidos del material genético completo de un organismo— ha proporcionado más mejoras. Los algoritmos por computadora facilitan la identificación de los ORF que codifican para una proteína dada, al usar secuencias parciales y establecimiento de perfil de masa peptídica para investigar bases de datos de secuencia. Los científicos ahora están tratando de determinar la secuencia primaria y el papel funcional de cada proteína expresada en una célula viva, conocida como su proteoma. Un objetivo importante es la identificación de proteínas y sus modificaciones postraduccionales cuya aparición o desaparición se correlaciona con fenómenos fisiológicos, envejecimiento o enfermedades específicas. REFERENCIAS Arnaud CH: Mass spec tackles proteins. Chem Eng News 2006;84:17. Austin CP: The impact of the completed human genome sequence on the development of novel therapeutics for human disease. Annu Rev Med 2004;55:1. Cutler P: Protein arrays: the current state­of­the­art. Proteomics 2003;3:3. Deutscher MP (editor): Guide to Protein Purification. Methods Enzymol 1990;182. (Volumen completo.) Elofsson A, von Heijne G: Membrane protein structure: predictions versus reality. Annu Rev Biochem 2007;76:125. Geveart K, Vandekerckhove J: Protein identification methods in proteomics. Electrophoresis 2000;21:1145. Gwynne P, Heebner G: Mass spectrometry in drug discovery and development: from physics to pharma. Science 2006;313:1315. 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Para que un polipépti­ do recién sintetizado madure hacia una proteína que sea funcional desde el punto de vista biológico, capaz de catalizar una reacción metabólica, impulsar el movimiento celular, o formar las varillas y los cables macromoleculares que proporcionan integridad estructural a pelo, huesos, tendones y dientes, debe plegarse hacia una disposi­ ción tridimensional específica, conocida como conformación. Ade­ más, durante la maduración, las modificaciones postraduccionales pueden añadir nuevos grupos químicos o eliminar segmentos pep­ tídicos transitoriamente necesarios. Las deficiencias genéticas o nu­ tricionales que obstaculizan la maduración de proteínas son nocivas para la salud. Algunos ejemplos de las primeras comprenden en­ fermedad de Creutzfeldt­Jakob, encefalopatía espongiforme ovina, enfermedad de Alzheimer y encefalopatía espongiforme bovina (“en­ fermedad de las vacas locas”). El escorbuto representa una deficien­ cia nutricional que altera la maduración de proteínas. CONFORMACIÓN EN CONTRASTE CON CONFIGURACIÓN A menudo, los términos “configuración” y “conformación” son con­ fundidos entre sí. Configuración alude a la relación geométrica en­ tre un grupo dado de átomos, por ejemplo, los que distinguen entre l­aminoácidos y d­aminoácidos. La interconversión de alternativas configuracionales requiere el rompimiento de enlaces covalentes. Por otra parte, conformación se refiere a la relación espacial de cada átomo en una molécula. La interconversión entre conformadores ocurre sin rotura de enlace covalente, con retención de la configura­ ción y, de manera típica, por medio de rotación alrededor de enlaces únicos. EN UN INICIO LAS PROTEÍNAS FUERON CLASIFICADAS POR SUS CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS En su primer enfoque, los científicos abordaron las relaciones entre estructura y función en proteínas mediante separarlas en clases con base en propiedades como solubilidad, forma o la presencia de gru­ pos no proteínicos. Así, por ejemplo, las proteínas que pueden ser extraídas de las células usando soluciones acuosas a pH fisiológico y fuerza iónica son clasificadas como solubles. La extracción de pro- a 5 P í t u l o teínas de membrana integrales requiere disolución de la membra­ na con detergentes. Las proteínas globulares son moléculas com­ pactas, de forma más o menos esférica, con proporciones axiales (la proporción entre sus dimensiones más corta y más larga) de no más de 3. Casi todas las enzimas son proteínas globulares. En con­ traste, muchas proteínas estructurales adoptan conformaciones muy extendidas, tales proteínas fibrosas poseen proporciones axia­ les de 10 o más. Las lipoproteínas y glucoproteínas contienen lípidos y carbo­ hidrato unido de manera covalente, respectivamente. La mioglobi­ na, la hemoglobina, los citocromos y muchas otras metaloproteínas contienen iones metálicos estrechamente asociados. Si bien han sur­ gido métodos de clasificación más precisos con base en la similitud, u homología, en la secuencia y la estructura tridimensional de ami­ noácidos, aún se usan muchos términos de clasificación antiguos. LAS PROTEÍNAS SE CONSTRUYEN USANDO PRINCIPIOS MODULARES Las proteínas desempeñan complejas funciones físicas y catalíticas al colocar grupos químicos específicos en una disposición tridimen­ sional precisa. El andamio polipeptídico que contiene estos grupos debe adoptar una conformación tanto eficiente desde el punto de vista funcional como fuerte en el aspecto físico. A primera vista, la biosíntesis de polipéptidos comprendidos en decenas de miles de átomos individuales parecería en extremo desafiante. Cuando se con­ sidera que un polipéptido típico puede adoptar ≥ 1050 conforma­ ciones distintas, el plegado hacia la conformación apropiada para su función biológica parecería ser aún más difícil. En la síntesis de los esqueletos polipeptídicos de proteínas se emplea un pequeño grupo de bloques de construcción comunes o módulos, los aminoácidos, unidos por una conexión común, el enlace peptídico (caps. 3 y 4). Una vía modular por pasos simplifica el plegado y el procesamiento de polipéptidos recién sintetizados hacia proteínas maduras. LOS CUATRO ÓRDENES DE LA ESTRUCTURA DE PROTEÍNAS La naturaleza modular de la síntesis y el plegado de proteína están incorporados en el concepto de órdenes de estructura de proteína: estructura primaria, la secuencia de los aminoácidos en una cade­ na polipeptídica; estructura secundaria, el plegado de segmentos de polipéptido cortos (3 a 30 residuos) y contiguos, hacia unidades 31 05 Bender.indd 31 27/11/09 13:17:41 32 32 SECTION I SECCIÓN I Structures & Functions of Proteins & Enzymes Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 32 SECTION I Structures & Functions of Proteins & Enzymes ordenadas de manera geométrica; estructura montaje chain; secondary structure, the foldingterciaria, of short el(3to 30de unidades unidades into funcionales de residue),estructurales contiguous secundarias segments ofhacia polypeptide geometrichain; secondary the folding of assembly short (3- que to sec30mayor tamaño como elstructure, polipéptido maduro ythe los dominios lo cally ordered units; tertiary structure, of residue),structural segments ofcuaternaria, polypeptide geometricomponen y, contiguous por último, estructura elinto número y los ondary units into larger functional units such as the cally ordered units; and tertiary the assembly of dis­ sectipos de unidades polipeptídicas destructure, proteínas domains; oligoméricas su mature polypeptide its component andy quaterondary structural units into larger functional units such as posición espacial. the number and types of polypeptide unitsthe nary structure, of mature polypeptide and their its component domains; and quateroligomeric proteins and spatial arrangement. nary structure, the number and types of polypeptide units of oligomeric proteinsSECUNDARIA and their spatial arrangement. ESTRUCTURA SECONDARY STRUCTURE Los enlaces peptídicos restringen posibles Peptide BondsSTRUCTURE Restrict Possible SECONDARY conformaciones secundarias Secondary Conformations La rotación libre sólo es posible alrededor de dos de los tres enlaces Peptide Bondspolipeptídico: Restrict Possible covalentes del esqueleto el carbono α (Cα) el carbono Free rotation is possible about only two of the three covalent Secondary carbonilo (Co), el Conformations Cα al enlace de nitrógeno (fig. 3­4). (Cα) El carácter bonds of they polypeptide backbone: the α-carbon to the de doble enlace parcial delbond, enlace peptídico une Cobond alcovalent nitró­ Free rotation is possible about only twoque the el three carbonyl carbon (Co) and the Cα toofnitrogen (Figgeno α 3–4). requiere el carbono carbonilo, el oxígeno ythe el bonds of The theque polypeptide backbone: the α-carbon (Cα) to ure partial double-bond character of thecarbonilo peptide bond nitrógeno α permanezcan coplanares, lo que lathe rotación. án­ carbonyl carbon (Co)α-nitrogen bond, andrequires the Cαevita to nitrogen bondEl(Figthat links Co to the that carbonyl cargulobon, alrededor enlacedouble-bond deand Cα—N recibe elremain nombre de ángulo fi ure 3–4). Thedelpartial character of thecoplanar, peptide bond carbonyl oxygen, α-nitrogen thus (Ф),preventing mientras que aquel ubicado enlace de Co—Cα es that links Co to the The α-nitrogen requires that thebond carbonyl carrotation. anglealrededor about thedelCα—N is termed el ángulo psi(Ф) (ψ).angle, Para aminoácidos quethe noCo—Cα son glicina, casithe ninguna bon,phi carbonyl oxygen, andabout α-nitrogen remain coplanar, the and that bond psithus (ψ) combinación ángulos fi yother psi sethan permite a obstáculo esté­ preventing rotation. The angle about thedebido Cα—N bond is termed angle. Forde amino acids glycine, most combinations ricoof (fig. 5­1). Las conformaciones de the prolina sonofaún más restrin­ the phi (Ф)psi angle, andarethat about Co—Cα bond the psi (ψ) phi and angles disallowed because steric hindrance gidas debido aamino la ausencia deother rotación del enlace N—Cα. angle. For thanlibre most combinations (Figure 5–1). The acids conformations ofglycine, proline are even more reestructura secundaria ordenada surgen cuando ofLas phiregiones and angles are disallowed because steric hindrance stricted duepsi tode the absence of free rotation ofof the N—Cα bond. una(Figure serieRegions de5–1). residuos aminoacilo adoptan ángulosare fiarise yeven psiwhen similares. The conformations of structure proline morea sereof ordered secondary Losries segmentos (p. ej., asas)rotation de polipéptidos llegan a po­ stricted dueextendidos to the absence ofadopt free of theand N—Cα bond. of aminoacyl residues similar phi psi angles. seerExtended diversos ángulos de of esepolypeptide tipo. Los ángulos quearise definen los ados Regions of ordered secondary structure se-a segments (eg, loops) canwhen possess tipos más deresidues estructura secundaria, la hélice y laangles. hoja ries of frecuentes aminoacyl similar phi and variety of such angles. Theadopt angles that define theαpsi two most β, caen dentrotypes de los of cuadrantes inferior y(eg, superior de un Extended segments of polypeptide loops) can possess common secondary structure, the izquierdos α helix and thea gráfico de Ramachandran, (fig. 5­1). the quadrants variety offall such angles. The that define two most β sheet, within therespectivamente lowerangles and upper left-hand common types of secondary structure, the α5–1). helix and the of a Ramachandran plot, respectively (Figure β sheet, fall within the lower and upper left-hand quadrants Laofhélice α a Ramachandran plot, respectively (Figure 5–1). The Alpha Helixde una hélice α está torcido por una can­ El esqueleto polipeptídico tidad igual alrededor backbone de cada carbono con un dean aproxi­ The polypeptide of an αα helix is ángulo twistedfiby equal The Alpha Helix madamente –57° yeach un α-carbon ángulo psiwith de aalrededor Un giro amount about phi anglede of –47°. approximately completo de la hélice unofan promedio 3.6−47 residuos ami­A The polypeptide α helix isdetwisted by an equal −57 degrees and backbone acontiene psi angleof approximately degrees. noacilo y laabout distancia que sube contains por cada giro (su of pendiente) es de amount α-carbon with a phi angle approximately complete turn each of the helix an average of 3.6 amino0.54acyl nmdegrees (fig. 5­2).and Losa grupos R deofcada residuo en unaA −57 psi angle approximately −47(its degrees. residues, and the distance it rises peraminoacilo turn pitch) is hélice α nm miran hacia (fig.contains Lasan proteínas sólo contienen complete turn of afuera the helix of 3.6 amino0.54 (Figure 5–2). The R5­3). groups ofaverage each aminoacyl resil­aminoácidos, los cuales una hélice α diestra es con lais acyl in residues, and the distance it rises per turn (itsmucho pitch) due an α para helix face outward (Figure 5–3). Proteins contain másonly estable, y en acids, las 5–2). proteínas sólo hélices α diestras. los 0.54 nm (Figure R groups of each aminoacyl l-amino forThe which a hay right-handed α helix isEn byresifar diagramas esquemáticos deoutward proteínas se representa aare las present hélices αin duemore in an α helixand faceonly (Figure Proteins contain the stable, right-handed α5–3). helices como espirales o cilindros. only l-amino acids, diagrams for whichofa proteins right-handed α helix is by far proteins. Schematic represent α helices as Lamore estabilidad una hélice α provieneαsobre todo enlacesin the stable,de and only right-handed helices arede present coils or cylinders. (puentes) de stability hidrógeno el primarily oxígeno delfrom enlace peptí­as proteins. Schematic diagrams ofarises proteins represent α hydrogen helices The of formados an α helixentre dicobonds del grupo carbonilo y elthe átomo de hidrógeno del grupo amino coils orformed cylinders. between oxygen of the peptide bond car(quebonyl contiene nitrógeno) delαatom enlace peptídico del cuarto residuo enof The of an helix of arises primarily fromnitrogen hydrogen andstability the hydrogen the peptide bond dirección descendente por lathe cadena de of polipéptido (fig. 5­4).5–4). La bonds formed between oxygen thechain peptide bond carthe fourth residue down the polypeptide (Figure capacidad parathe formar elthe número de enlaces de hidrógeno, bonylability and hydrogen atommáximo of the peptide nitrogen of The to form maximum number of bond hydrogen bonds, complementada por deinteractions van der Waals elcore centro de the fourth residue down the polypeptide chain (Figure supplemented byinteracciones van der Waals in en the of5–4). this estatightly estructura estrechamente apretada,number brinda la impulsora The ability to form the maximum of fuerza hydrogen bonds, packed structure, provides the thermodynamic driving termodinámica formación una hélice Dado que of elbond ni­ supplemented by la van derofWaals the core this force for thepara formation an de α interactions helix. Sinceα.in the peptide trógeno delpacked enlace peptídico prolina carece detoun átomo deto hidró­ tightly structure, the thermodynamic driving nitrogen of proline lacksde aprovides hydrogen atom contribute a hygeno parafor contribuir a un enlace deαbe hidrógeno, la prolina sólo puede force the formation an helix. the peptide bond drogen bond, proline canofonly stablySince accommodated within adaptarse deof manera estable del primer giro de una hélice α. nitrogen proline lacks dentro a hydrogen atom to contribute to a hyCuando estábond, presente en otro la conformación drogen proline cansitio, only labeprolina stably altera accommodated within 90 90 ψ 0 ψ 0 – 90 – 90 – 90 0 90 φ – 90 0 90 FIGURA de Ramachandran los chain ángulos (Ф) y psi FIGURE 5-1 5–1 Gráfico Ramachandran plot φof thede main phifi(Ф) (ψ) depsi la cadena principal para unos 11000 000 residuos no glicina en ocho and (ψ) angles for approximately non-glycine residues in proteínas cuyas estructuras se resolvieron en alta resolución. Los puntos eight proteins whose structures were solved at high resolution. FIGURE 5–1 Ramachandran plot of the main chain phi (Ф) The representan combinaciones permisibles, mientras que los espacios dotspsi represent allowable combinations, and the spaces prohibited and (ψ) angles for approximately 1000 non-glycine residues in indican combinaciones prohibidas de(Reproduced, ángulos y psi. (Reproducido, combinations, of phi and psi angles. with permission, eight proteins whose structures were solved atfi high resolution. The con autorización, de JS:and Thetaxonomy anatomy taxonomy of from Richardson JS: Richardson The anatomy of protein structures. dots represent allowable combinations, and the and spaces prohibited protein structures. Adv Protein Chem 1981; © 34:167. © 1981. Adv Protein Chem 1981;34:167. Copyright 1981. Copyright Reprinted with combinations, of phi and psi angles. (Reproduced, with permission, Reimpreso con autorización de Elsevier.) permission from Elsevier.) from Richardson JS: The anatomy and taxonomy of protein structures. Adv Protein Chem 1981;34:167. Copyright © 1981. Reprinted with permission from Elsevier.) N C N C C C N C N C C N C N C C C C C C N C C C N pendiente de 0.54 nm C (3.6 residuos) C pendiente de 0.54 nm (3.6 residuos) C C N NC N C C C N N N N N C C N C C C N N C C NC C C C N C C C C N C C 0.15 nm 0.15 nm FIGURE 5–2 Orientation of the main chain atoms of a peptide about the axis of an α helix. FIGURE 5-2 5–2 Orientación Orientation de of the main chain atoms of aprincipal peptide de FIGURA los átomos de la cadena about the axis of an αdel helix. un péptido alrededor eje de una hélice α. Murray_CH05_PTR.indd 32 3/26/2009 8:49:36 PM Murray_CH05_PTR.indd 32 05 Bender.indd 32 3/26/2009 8:49:36 PM 27/11/09 13:17:46 CHAPTER 5 CHAPTER 5 R R R R R R R R R R R R R R R RR R R R R R R R R FIGURE 5–3 View down the axis of an α Rhelix. The side chains (R) FIGURA 5-3 una hélice αvan visto arriba. Las cadenas FIGURE 5–3 Eje View down the axis ofder andesde α helix. The of side chains Rhelix. are on the outside ofde the The Waals radii the atoms(R) laterales (R)than estánshown enofelthe exterior de hélice. radios der Waals are the outside helix. Thelathere van der Waals radii of van the atoms are on larger here; hence, is Los almost no de free space de los átomos son de mayor tamaño que el que se muestra aquí; por are larger than shown here; hence, there is almost no free space inside the helix. (Slightly modified and reproduced, with permission, FIGURE 5–3 View down the axis of an α helix. The side chains (R) ende, casi espacio dereproduced, la hélice. inside the helix. (Slightly modified with from Stryer L:hay Biochemistry, 3rddentro ed. and Freeman, 1995.(Ligeramente Copyright © 1995 are on theno outside of thelibre helix. The van der Waals radii of permission, the atoms modificado yL:reproducido, con autorización, de Stryer L: Biochemistry, from Stryer Biochemistry, 3rd ed. Freeman, 1995. Copyright © 1995 W.H. Freeman and Company.) are larger than shown here; hence, there is almost no free space 3rd ed. Freeman, 1995. Copyright © 1995 W.H. Freeman and Company.) W.H. Freeman and Company.) inside the helix. (Slightly modified and reproduced, with permission, fromfirst Stryer L: Biochemistry, ed. Freeman, Copyright © 1995 the turn of an α helix.3rd When present1995. elsewhere, proline disW.H.first Freeman and the of anCompany.) α helix. present elsewhere, proline disrupts theturn conformation of When the helix, producing a bend. Because derupts la hélice y produce una flexión. Debido a su pequeñez, la glicina the conformation of the helix, producing a bend. Because of its small size, glycine also often induces bends in α helices. aof menudo también induce flexiones en hélices α. in αproline itsfirst small size, glycine also oftenpresent induces bends helices.disthe turn of an α helix. When elsewhere, En muchas hélices α predominan grupos R hidrofóbicos rupts the conformation of the helix, producing a bend. Becauseen un del eje la hélice e hidrofílicos en el otro. Estas hélices of lado its small size,deglycine also N often induces bends in α helices. C C C C C C R C R R C N C R N N C C N C NN C R R R R Capítulo 5 Proteínas: órdenes de estructura superiores 33 CHAPTER 5 Proteins: Higher Orders of Structure 33 Many α helices have predominantly hydrophobic R groups anfipáticas están a la formación de interfases entre Many helices haveadaptadas hydrophobic R groups on one sideα of the bien axis ofpredominantly the helix and predominantly hydroregiones polares no polares como el interior hidrofóbico de una on oneones side of the of These the helix and predominantly hydrophilic on they axis other. amphipathic helices are well proteína su ambiente acuoso. Las agrupaciones hélices philic ones on the other. These amphipathic helices wellan­ Many helices have predominantly hydrophobic Rare groups adapted toyαthe formation of interfaces between polardeand nonfipáticas un canal, o poro, que permite que moléculas adapted topueden the formation of interfaces polar and nonon oneregions side ofsuch thecrear axis ofhydrophobic the helix andbetween predominantly hydropolar as the interior of a protein and polares específicas pasen a través de membranas hidro­ polar regions such the hydrophobic interior helices of acelulares protein and philic ones on the as other. These amphipathic are well its aqueous environment. Clusters of amphipathic helices can itsfóbicas. aqueous environment. of amphipathic can adapted to the formation ofClusters interfaces between polarhelices and noncreate a channel, or pore, that permits specific polar molecules create athrough channel, oraspore, that cell permits specific molecules polar such the hydrophobic interior polar of a protein and to passregions hydrophobic membranes. to pass through hydrophobic cell membranes. its aqueous environment. Clusters of amphipathic helices can La hoja β or pore, that permits specific polar molecules create a channel, la Beta segunda (de ahí su denominación “β”) estructura secundaria toEspass through hydrophobic cell membranes. The Sheet regular reconocible en las proteínas. Los residuos aminoácidos de The Beta Sheet The (hencese“beta”) recognizable regular secondary una second hoja β, cuando observan de canto, forman un modelo en zig­ The second (hence is “beta”) recognizable regular secondary structure in proteins the β sheet. The amino acid residues of zag o plisado en el cual los grupos R de residuos adyacentes apuntan The Beta Sheet in proteins is the β sheet. Theaamino acid residues of astructure β sheet, when viewed edge-on, form zigzag or pleated patdirecciones opuestas. A diferencia esqueleto compacto de la aen β sheet, when viewed edge-on, formdel a zigzag or pleated patThe second (hence “beta”) recognizable regular secondary tern in which the R groups of adjacent residues point in oppohélice α, el esqueleto peptídico de la hoja β está muy extendido; terndirections. in which the R groups adjacent point in oppostructure in proteins isthe thecompact βofsheet. Theresidues aminoofacid of sin site Unlike backbone the αresidues helix, the embargo, al igual que la hélice α, gran parte de la estabilidad de las directions. the backbone of or thepleated α helix, the asite β sheet, whenUnlike viewed edge-on, a zigzag peptide backbone of enlaces the β compact sheet isform highly extended. But likepatthe hojas β se deriva de de hidrógeno entre los oxígenos carbo­ peptide backbone themuch β sheet istheir highly extended. Butinlike the tern in which thederive Rofgroups of adjacent residues point oppoα helix, β sheets stability from y los hidrógenos amida deof peptídicos. Enαhydrogen contraste con αnilo helix, β sheets derive much ofenlaces their stability hydrogen site directions. Unlike the compact backbone offrom the helix, the bonds between the carbonyl oxygens and amide hydrogens of de la hélice α, estos enlaces se forman con segmentos adyacentes bonds between theofcarbonyl oxygens amide of peptide backbone the βinsheet is highly extended. But like the peptide bonds. contrast toand the α helix,hydrogens these bonds hoja β (fig. 5­5).However, peptide bonds. in contrast toβstability the α helix, these bonds α helix, β sheets derive much of their from hydrogen are formed withHowever, adjacent segments of sheet (Figure 5–5). are formed withthe adjacent segments of and β sheet (Figure 5–5). of bonds between carbonyl oxygens amide hydrogens peptide bonds. However, in contrast to the α helix, these bonds are formed with adjacent segments of β sheet (Figure 5–5). C C C N N R C R N C RN N C RC C R C C N R C C R R N R C N C R C CR C N O C N OCN R R C C R C C N C N O N C C C RC C N C N N C R C C R CN C N CN R C RR C C C N C C N N C C C R C C N C C N R R 33 33 N C R R C C Proteins: Higher Orders of Structure Proteins: Higher Orders of Structure FIGURE 5–4 Hydrogen bonds (dotted lines) formed between FIGURE 5–4stabilize Hydrogen bonds (dotted formed between H and O atoms a polypeptide in anlines) α-helical conformation. H and O atoms a polypeptide in an conformation. (Reprinted, withstabilize permission, from Haggis GHα-helical et al: Introduction to (Reprinted, with permission, from Haggis GH etof al:formed Introduction to Molecular Wiley, 1964, with permission Pearson Education FIGURA 5-4 Los enlaces de hidrógeno (líneas punteadas) FIGUREBiology. 5–4 Hydrogen bonds (dotted lines) between Molecular Biology. Wiley, 1964, with permission of Pearson Education Limited.) formados entre átomos H y O estabilizan polipéptido en una H and O atoms stabilizede a polypeptide in anun α-helical conformation. Limited.) with conformación helicoidal α. (Reimpreso, conGH autorización, de Haggis (Reprinted, permission, from Haggis et al: Introduction to GH etMolecular al.: Introduction Molecular Wiley, 1964, con autorización Biology.toWiley, 1964,Biology. with permission of Pearson Educationde Pearson Education Limited.) Limited.) FIGURA5–5 5-5Spacing Espaciamiento ángulos de los enlaces FIGURE and bondy angles ofde theenlace hydrogen bonds of FIGURE 5–5 Spacing bond angles of theindicate of de hidrógeno hojaspleated β and plegadas antiparalelas yhydrogen paralelas. Las flechas antiparallel andde parallel β sheets. Arrows thebonds direction antiparallel andHydrogen parallel βare sheets. Arrows indicate the direction la dirección depleated cada hebra. Los enlaces hidrógeno están ofindican each strand. bonds indicated by de dotted lines with of each strand. Hydrogen bonds are indicated by dotted lines with of indicados por líneas punteadas; los átomos de nitrógeno (donadores the participating α-nitrogen atoms (hydrogen donors) and FIGURE 5–5 Spacing and bond angles of the hydrogenαoxygen bonds the atoms (hydrogen oxygen departicipating hidrógeno) yα-nitrogen los átomos de βoxígeno (aceptores deand hidrógeno) atoms (hydrogen acceptors) shown in blue anddonors) red, respectively. antiparallel and parallel pleated sheets. Arrows indicate the direction atoms acceptors) shown in blue and respectively. se muestran en color azul y rojo, respectivamente. Backbone carbon atoms are shown black. For clarity inlines presentation, ofparticipantes each(hydrogen strand. Hydrogen bonds arein indicated byred, dotted withLos Backbone carbon atoms are shown in Fordonors) clarity in presentation, átomos de carbono delatoms esqueleto se black. muestran en color negro. Para R groups and hydrogen are omitted. Top: Antiparallel β sheet. the participating α-nitrogen atoms (hydrogen and oxygen R groups and hydrogen are omitted. Top: Antiparallel β sheet. favorecer la claridad enatoms la presentación, omitieron los grupos R y los Pairs of(hydrogen hydrogen bonds alternate between being close together atoms acceptors) shown in blueseand red, respectively. Pairs of hydrogen bonds alternate between being close átomos de hidrógeno. Arriba: hoja antiparalela; pares de enlaces and wide apart and are oriented approximately to the de Backbone carbon atoms are shown inβblack. For perpendicular clarity intogether presentation, and wideand apart and are oriented approximately perpendicular to the alternan entre estar muy juntos y muy separados, ybonds están polypeptide backbone. Bottom: Parallel β sheet. The hydrogen Rhidrógeno groups hydrogen atoms are omitted. Top: Antiparallel β sheet. polypeptide backbone. Bottom: Parallel β sheet. The hydrogen bonds orientados en dirección aproximadamente perpendicular al esqueleto are evenly spaced but slant in alternate directions. Pairs of hydrogen bonds alternate between being close together are evenly spaced but inβ alternate directions. polipeptídico. Abajo: hoja paralela, los enlaces de hidrógeno están and wide apart and areslant oriented approximately perpendicular to the espaciados backbone. de maneraBottom: uniforme,Parallel pero seβ inclinan enhydrogen direcciones polypeptide sheet. The bonds alternas. are evenly spaced but slant in alternate directions. Murray_CH05_PTR.indd 33 Murray_CH05_PTR.indd 33 3/26/2009 8:49:38 PM 3/26/2009 8:49:38 PM Murray_CH05_PTR.indd 33 05 Bender.indd 33 3/26/2009 8:49:38 PM 27/11/09 13:17:51 34 34 SECTION I Structures & Functions of Proteins & Enzymes SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas FIGURE 5–65-6 Examples of tertiary structureterciaria de FIGURA Ejemplos de estructura of proteins. Top: The enzyme triose phosphate proteínas. Arriba: la enzima triosa fosfato isomerasa isomerase complexed withcon theelsubstrate formando complejos análogo analog 2-phosphoglycerate (red). Note the elegant de sustrato 2-fosfoglicerato (rojo). Note and la symmetrical arrangement of alternating sheets disposición armoniosa y simétrica deβlas hojas β (light(azul blue) and yα hélices helices α(green), β sheets claro) (verde)with que the alternan; las hojas forming a β-barrel core surrounded by the helices. β forman un centro en barril β conjunto rodeado por (Adapted from Protein DatadeBank ID no. 1o5x.) las hélices. (Adaptado Protein Data Bank ID no. Bottom: Lysozyme complexed with the substrate 1o5x.) Abajo: complejo de lisozima con el análogo analog penta-N-acetyl chitopentaose (red). The de sustrato penta-N-acetil quitopentaosa (rojo). colorElofcolor the polypeptide is graded along de la cadenachain de polipéptidos está graduado the visible spectrum from purple to a lo largo del espectro visible(N-terminal) desde púrpura tan (C-terminal). Notice how the concave shape (N terminal) hacia marrón claro (C terminal). Note of the forms a binding pocket the forma dedomain qué modo la forma cóncava delfor dominio pentasaccharide, lack of βelsheet, and the high una bolsa de the unión para pentasacárido, la falta proportion and bends. (Adapted de hojaof β,loops y la alta proporción de asasfrom y flexiones. Protein Data Bank no. 1sfb.) (Adaptado de ID Protein Data Bank ID no. 1sfb.) Interacting β sheets can be arranged either to form a parallel β sheet, in which the adjacent segments of the polypepLas hojas β que interactúan pueden disponerse para formar tide chain proceed in the same direction amino to carboxyl, or una hoja β paralela, en la cual los segmentos adyacentes de la cade­ an antiparallel sheet, in which they proceed in opposite direcna polipeptídica proceden en la misma dirección amino hacia car­ tions (Figure 5–5). Either configuration permits the maximum bonilo, o una hoja antiparalela, en la cual proceden en direcciones number of hydrogen bonds between segments, or strands, of opuestas (fig. 5­5). Una u otra configuración permite el número the sheet. Most β sheets are not perfectly flat but tend to have a máximo de enlaces de hidrógeno entre segmentos, o hebras de la right-handed twist. Clusters of twisted strands of β sheet form hoja. Casi ninguna hoja β es perfectamente plana, sino que tiende a the core of many globular proteins (Figure 5–6). Schematic mostrar una torsión hacia la derecha. agrupaciones hebras diagrams represent β sheets as arrowsLas that point in thedeamino torcidas de hoja β forman el centro de muchas proteínas globulares to carboxyl terminal direction. (fig. 5­6). En diagramas esquemáticos se representa a las hojas β como flechas que apuntan en la dirección amino hacia carboxilo terminal. Murray_CH05_PTR.indd 34 05 Bender.indd 34 Loops & Bends Asas yhalfflexiones Roughly of the residues in a “typical” globular protein re- A grandes rasgos, la mitad de and los residuos en una turns, proteína globular side in α helices and β sheets half in loops, bends, “típica” en hélices α y hojas β,features. y la otraTurns mitadand en asas, giros, and otherreside extended conformational bends flexiones y otras características extendidas. refer to short segments of aminoconformacionales acids that join two units of“Gi­ ros y flexiones” aludesuch a segmentos de aminoácidos secondary structure, as two cortos adjacent strands of anque an-unen dos unidades de estructura secundaria, dos hebras adyacen­ tiparallel β sheet. A β turn involves fourcomo aminoacyl residues, de una antiparalela. Un giro β comprende intes which thehoja firstβresidue is hydrogen-bonded to the cuatro fourth,resi­ duos amiinnoacilo, los cuales turn el primer residuo enlazado resulting a tighten 180-degree (Figure 5–7).está Proline and con hidrógeno cuarto, lo que por resultado una vuelta de 180° ce­ glycine oftenalare present in βdaturns. rrada (fig. 5­7). La prolina y la glicina a menudo están presentes en giros β. 3/26/2009 8:49:40 PM 27/11/09 13:17:54 CHAPTER 5 Capítulo 5 COOH H H H H H O H Cα C O C Cα N Cα N CH3 CH2 C H N O CH2OH Cα H FIGURE5-7 5–7Un A βgiro turn that enlaza links two of anti-parallel FIGURA β que dossegments fragmentos de la hoja β β sheet. The dotted indicates the hydrogen bond between the first antiparalela. La línealine punteada indica el enlace de hidrógeno entre fourth aminoaminoácidos acids of the four-residue segment Ala-Gly-Asp-Ser. el and primero y cuarto del segmento de cuatro residuos Ala-Gli-Asp-Ser. Loops are regions that contain residues beyond the minimum number necessary to connect adjacent regions of Las asas son regionesIrregular que contienen residuos másloops allá delnevnú­ secondary structure. in conformation, mero mínimo necesario para conectar adyacentes es­ ertheless serve key biologic roles. regiones For many enzymes,dethe tructura secundaria; embargo, las asas, que conformación loops that bridge sin domains responsible fortienen binding substrates irregular, desempeñan funciones biológicas clave. Parainmuchas en­ often contain aminoacyl residues that participate catalysis. zimas, las asas que forman puentes entrethe dominios encargados de la Helix-loop-helix motifs provide oligonucleotide-bindunión de sustratos a menudo contienen aminoacilo and que ing portion of DNA-binding proteins residuos such as repressors participan en catálisis. motivos motifs de hélice-asa-hélice proporcio­ transcription factors.Los Structural such as the helix-loopnan la porción oligonucleótido de proteínas de unión helix motif de thatunión are aintermediate between secondary anda DNA comostructures represoresare y factores de transcripción. Los motivos es­ tertiary often termed supersecondary structructurales, como el motivo de hélice­asa­hélice interme­ tures. Since many loops and bends reside onque theson surface of dios entre estructuras terciarias, a menudo se readdeno­ proteins and are thussecundarias exposed toysolvent, they constitute minan estructuras Dado que and muchas asasofy ily accessible sites,supersecundarias. or epitopes, for recognition binding flexiones residen sobre la superficie de proteínas y, así, quedan ex­ antibodies. puestasWhile a solvente, sitios fácilmente accesibles, o epítoloopsconstituyen lack apparent structural regularity, they exist pos, reconocimiento y unión de anticuerpos. in apara specific conformation stabilized through hydrogen bondbien bridges, las asas carecen de regularidad estructuralwith manifiesta, ing,Si salt and hydrophobic interactions other existen en una conformación específica de portions of the protein. However, notestabilizada all portionspor of medio proteins formación de enlaces de hidrógeno, puentes interacciones are necessarily ordered. Proteins may salinos, containe “disordered” hidrofóbicas con otras porciones la proteína; sin embargo, no to­ regions, often at the extremedeamino or carboxyl terminal, das las porcionesby de high proteínas están necesariamente Las characterized conformational flexibility.ordenadas. In many inproteínas contener regiones a menudo en stances, pueden these disordered regions “desordenadas”, assume an ordered conforelmation extremoupon aminobinding o carboxilo caracterizadas una alta of aterminal, ligand. This structuralpor flexibility flexibilidad conformacional. Enasmuchos casos, estas regiones enables such regions to act ligand-controlled switchesdesor­ that denadas adoptanstructure una conformación ordenada en el momento de affect protein and function. unión de un ligando. Tal flexibilidad estructural permite que dichas regiones actúen como conmutadores controlados por ligando que Tertiary & Quaternary afectan la estructura y la función de Structure proteínas. The term “tertiary structure” refers to the entire three-dimensional conformation of a polypeptide. It indicates, in threeEstructuras terciaria y cuaternaria dimensional space, how secondary structural features—helices, Elsheets, términobends, “estructura se refiere a toda conformación turns,terciaria” and loops—assemble to laform domains tridimensional dedomains un polipéptido. Indica, en tridimensio­ and how these relate spatially to espacio one another. A donal, de qué las of características estructurales secundarias —hé­ main is amodo section protein structure sufficient to perform a lices, hojas, flexiones, y asas—task se montan formar particular chemicalgiros or physical such as para binding of adomi­ subnios, y cómo estosligand. últimos se relacionan desde el punto vista strate or other Most domains are modular in de nature, espacial entre sí. Un dominio es una sección de estructura proteíni­ ca suficiente para desempeñar una tarea química o física particular, Murray_CH05_PTR.indd 35 05 Bender.indd 35 35 Proteins: Higher Orders of Structure Proteínas: órdenes de estructura superiores 35 contiguous in both primary and three-dimensional como la unión de un sustratosequence u otro ligando. Casi todos los do­ space Simple proteins, particularly that minios(Figure son de 5–8). naturaleza modular, contiguos tanto those en secuencia interact substrate, such as triprimaria with comoaensingle espacio tridimensional (fig.lysozyme 5­8). Las or proteínas ose phosphate isomerase (Figure 5–6) and simples, en particular las que interactúan conthe unoxygen sustratostorúnico, age protein myoglobin (Chapter 6), often a single de como lisozima o triosa fosfato isomerasa (fig.consist 5­6), y of la proteína domain. By contrast, lactate dehydrogenase of almacenamiento de oxígeno mioglobina (cap. 6),isa comprised menudo constan two N-terminal NAD -binding domain andcom­ a de undomains, dominio an único. En contraste, la+lactato deshidrogenasa C-terminal-binding for thedesecond terminal, y prende dos dominios,domain un dominio unión substrate, a NAD+ Npyruvate (Figure 5–8).deLactate a family of oxiun dominio unión adehydrogenase C terminal paraiselone segundo sustrato, piru­ + doreductases share a common es N-terminal vato (fig. 5­8). which La lactato deshidrogenasa una familiaNAD(P) de oxidorre­ + binding knownun as dominio the Rossmann fold. By fusing the ductasasdomain que comparten de unión a NAD(P) N termi­ Rossmann fold module to a de variety of C-terminal domains, nal, conocido como el pliegue Rossmann. Al fusionar el módulo adellarge family of oxidoreductases have evolved that ha utilize pliegue de Rossmann a diversos dominios C terminal, evolu­ + NAD(P) /NAD(P)H forde the oxidation and reduction a wide +/ cionado una gran familia oxidorreductasas que utilizanofNAD(P) range of metabolites. Examples include de alcohol dehydrogeNAD(P)H para la oxidación y reducción una amplia gama de nase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, demetabolitos. Los ejemplos son alcohol deshidrogenasa,malate gliceraldehí­ hydrogenase, quinone oxidoreductase, 6-phosphogluconate do­3­fosfato deshidrogenasa, malato deshidrogenasa, quinona oxi­ dehydrogenase, D-glycerate dehydrogenase, formate dehydrodorreductasa, 6­fosfogluconato deshidrogenasa, D­glicerato des­ genase, and 3α, 20β-hydroxysteroid hidrogenasa, formato deshidrogenasadehydrogenase. y 3α, 20β­hidroxiesteroide Not all domains bind substrates. Hydrophobic memdeshidrogenasa. braneNo domains anchor proteins membranes or enablede them todos los dominios unentosustratos. Los dominios mem­ to span membranes. sequencesotarget proteins brana hidrofóbicos fijanLocalization proteínas a membranas les permiten abar­ to subcellular or extracellular locations such proteínas as the carspecific membranas. Las secuencias de localización dirigen nucleus, mitochondria, secretory vesicles, específicas, etc. Regulatory hacia ubicaciones subcelulares o extracelulares como el domains changesvesículas in protein function response tore­ núcleo, lastrigger mitocondrias, secretoras, etc.inLos dominios the binding of allostericcambios effectors covalentdemodifications guladores desencadenan de or la función proteína en res­ (Chapter Combining domain modules provides a covalen­ facile puesta a la9). unión de efectores alostéricos o modificaciones route for9). generating structural complexity tes (cap. Combinarproteins módulosofdegreat dominio proporciona una ruta and sophistication (Figure 5–9). fácilfunctional para generar proteínas de gran complejidad estructural y fun­ Proteins containing multiple domains also can be ascional (fig. 5­9). sembled through que the contienen association of multiple polypeptides, Las proteínas múltiples dominios también pue­ or Quaternary structure defines the polypeptide denprotomers. montarse por medio de la asociación de múltiples polipéptidos composition protein and, for an oligomeric protein, the o protómeros.ofLaaestructura cuaternaria define la composición poli­ spatial relationships between itsuna protomers subunits. las Mopeptídica de una proteína y, para proteína or oligomérica, rela­ nomeric proteinsentre consist of a singleopolypeptide Diciones espaciales sus protómeros subunidades.chain. Las proteínas meric proteinsconstan containde two polypeptide chains. Homodimers monoméricas una cadena polipeptídica única; las pro­ contain two copies of thedos same polypeptide chain,Los while in teínas diméricas contienen cadenas polipeptídicas. homodíameros heterodimer thedos polypeptides differ. Greek letters (α, β, γ, contienen copias de la misma cadena polipeptídica, etc.) are used to distinguish different of adifieren. heterooligomientras que en un heterodímero los subunits polipéptidos Se usan meric protein,(α, and the number of each subletras griegas β, subscripts γ y demás)indicate para distinguir diferentes subunida­ unit type. example, α4 designates en a homotetrameric pro- en des de una For proteína heterooligomérica, tanto que los números tein, and αindican β γ a protein with of three different subíndice el número de five cadasubunits tipo de subunidad. Por ejem­ 2 2 types. plo, α4 designa una proteína homotetramérica, y α2β2γ una proteína even small proteins contain many thousands of atcon Since cinco subunidades de tres tipos diferentes. oms, Dado depictions of protein structure that indicate the position que incluso las proteínas pequeñas contienen muchos of every arelasgenerally too complex to be readily intermiles de atom átomos, representaciones de la estructura de proteínas preted. Simplified schematic are used depict que indican la posición de cadadiagrams átomo porthus lo general sontodemasiado key features of apara protein’s tertiary con andfacilidad. quaternary structure. complejas como interpretarlas De este modo, se Ribbon diagrams (Figures 5–6 & 5–8) trace the conformausan diagramas esquemáticos simplificados para representar caracte­ tion of clave the de polypeptide backbone, cylinders and proteí­ arrísticas las estructuras terciariawith y cuaternaria de una rows indicating α helix sheet,larespectively. na. Los diagramasregions de cintaof(figs. 5­6 yand 5­8)β trazan conformación In even simpler representation, segments link de delan esqueleto polipeptídico; cilindros yline flechas indicanthat regiones the carbons path of the polypeptide backbone. unaαhélice α y indicate una hoja the β, respectivamente. En una representación These schematic diagrams often include the side of seaún más simple, segmentos de línea que enlazan loschains carbonos α in­ lected acids that specific structure-function dican amino la trayectoria del emphasize esqueleto polipeptídico. Estos diagramas relationships. esquemáticos a menudo incluyen las cadenas laterales de aminoáci­ dos seleccionados que recalcan relaciones específicas entre estructu­ ra y función. 3/26/2009 8:49:40 PM 27/11/09 13:17:56 36 SECTION I Structures & Functions of Proteins & Enzymes 36 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas FIGURE 5–8 FIGURA 5-8 Polypeptides Polipéptidos containing twodos domains. que contienen dominios. Top: Shown is the three Arriba: estructura tridimensional dimensional structure of de la lactato deshidrogenasa con los lactate dehydrogenase sustratos NADH (rojo) y with piruvato (azul) the substrates NADH (red) andlos unidos. No se muestran todos pyruvateen(blue) bound. Not de la enlaces el NADH. El color all bonds in NADH areestá shown. cadena polipeptídica graduado color del of the polypeptide aThe lo largo espectro visible desde chain(Nisterminal) graded along visible azul hastathe anaranjado spectrum from blue (N-terminal) (C terminal). Note cómo la porción N to orangedel (C-terminal). how terminal polipéptidoNote forma un the N-terminal portion the la dominio contiguo, que of abarca polypeptide formsde a contiguous porción izquierda la enzima, que domain, encompassing the se encarga de unir NADH. De modo left portion of the Cenzyme, similar, la porción terminal forma un responsible for binding NADH. dominio contiguo que une piruvato. Similarly, the portion (Adaptado deC-terminal Protein Data Bank ID forms a contiguous domain no. 3ldh.) Abajo: estructura responsible forde binding pyruvate. tridimensional la subunidad (Adaptedde from Protein Data Bank catalítica la proteína cinasa ID no. 3ldh.) Bottom: Shown isde dependiente de monofosfato the three dimensional structure adenosina cíclico (cAMP) (cap. 42) con of the catalytic the (rojo) los análogos desubunit sustratoofADP protein kinase ycAMP-dependent péptido (púrpura) unidos. El color (Chapter 42) with the substrate de la cadena polipeptídica está analogs ADP graduado a lo(red) largoand delpeptide espectro (purple)desde bound . The color of hasta visible azul (N terminal) the polypeptide chain is Las graded anaranjado (C terminal). proteínas along the visible spectrum cinasas transfieren el grupofrom fosfato (N-terminal) to proteína orange y péptido γblue de ATP a sustratos (C-terminal). (cap. 9). NoteProtein cómo lakinases porción N transfer the groupun terminal del γ-phosphate polipéptido forma of ATP to protein and peptide dominio contiguo rico en hojas β que substrates (Chapter 9). Note how une al difosfato de adenosina (ADP). themodo N-terminal portion of the De similar, la porción C terminal polypeptide formscontiguo a contiguous forma un dominio rico en domain rich in β sheet bindsel hélice α, que se encargathat de unir ADP. Similarly, the(Adaptado C-terminalde Protein sustrato péptido. portion forms a contiguous, α Data Bank ID no. 1jbp.) helix-rich domain responsible for binding the peptide substrate. (Adapted from Protein Data Bank ID no. 1jbp.) MÚLTIPLES FACTORES ESTABILIZAN MULTIPLE FACTORS STABILIZE LAS ESTRUCTURAS TERCIARIA TERTIARY & QUATERNARY STRUCTURE Y CUATERNARIA Higher orders of protein structure are stabilized primarily— Los superiores de lanoncovalent estructura de proteínas sePrincipal estabilizan and órdenes often exclusively—by interactions. de manera primordial —y a menudo de forma exclusiva— porhyme­ among these are hydrophobic interactions that drive most dio de interacciones no side covalentes. éstas, las principales son drophobic amino acid chains Entre into the interior of the prointeracciones hidrofóbicas que impulsan casi todas las cadenas late­ rales hidrofóbicas de aminoácidos hacia el interior de la proteína y Murray_CH05_PTR.indd 36 05 Bender.indd 36 las protegen contra el agua. Otros contribuidores importantes com­ tein, shielding them water.yOther significant contributors prenden enlaces defrom hidrógeno puentes salinos entre los carboxila­ include hydrogen bonds and salt bridges between the carboxytos de ácidos aspártico y glutámico, y las cadenas laterales con carga lates of aspartic and glutamic acid and the oppositely charged opuesta de residuos lisilo, arginilo e histidilo protonados. Si bien side of protonated lysyl,en argininyl, and histidyl sonchains individualmente débiles comparación con unresidues. enlace cova­ While relative en to conjunto a typicalestas covalent bond lente individually típico de 80 a weak 120 kcal/mol, muchas interac­ of ciones 80–120confieren kcal/mol,uncollectively these numerous interactions alto grado de estabilidad a la conformación confer a high degree of stability the biologically functional funcional desde el punto de vistato biológico de una proteína, del mis­ mo modo que en un cierre de velcro se aprovecha la fuerza acumu­ lativa de múltiples asas y ganchos de plástico. 3/26/2009 8:49:48 PM 27/11/09 13:17:58 CHAPTER 5 Capítulo 5 37 Proteins: Higher Orders of Structure Proteínas: órdenes de estructura superiores 37 Factor de transmisión forkhead Unión a DNA Pr-Pr NLS 6-fosfofructo-2-cinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa Reg Pr-Pr Catálisis Reg Catálisis Fenilalanina hidroxilasa Reg Catálisis Pr-Pr Receptor de EGF Reg (unión a EGF) 200 FIGURE 5–9 FIGURA 5-9 Transmembrana 400 600 Catálisis 800 Pr-Pr 1000 1200 Some multidomain proteins. rectangles therepresentan Algunas proteínas de múltiple dominio. Los represent rectángulos ResidueThe Number polypeptides of a forkhead transcription factor; 6-phosphofructo-2-kinase/ las secuenciassequences de polipéptidos de un factor de transcripción forkhead; 6-fosfofructo-2fructose-2,6-bisphosphatase, a bifunctional enzyme cuyas whoseactividades activities are controlled in a cinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa, enzima bifuncional están controladas reciprocal by por allosteric effectors and covalent modification (Chapter de manerafashion recíproca efectores alostéricos y modificación covalente (cap.20); 20); phenylalanine hydroxylase (Chapters & 29), whose es activity is stimulated by fenilalanina hidroxilasa (caps. 27 y 29),27 cuya actividad estimulada por fosforilación de phosphorylation of its yregulatory domain; andde the epidermal epidérmico growth factor (EGF) su dominio regulador, el receptor del factor crecimiento (EGF) (cap. 41), receptor transmembrana (Chapter 41), a transmembrane protein whose intracellular protein kinase por proteína cuyo dominio de proteína cinasa intracelular es regulado domainde is la regulated binding of the peptide to its extracellular medio unión devia la the hormona peptídica EGF a suhormone dominioEGF extracelular. Los dominios domain. Regulatory domains arelos colored green, catalyticdedomains darkyblue light reguladores tienen color verde, dominios catalíticos azul oscuro azuland claro, blue, protein-protein interaction light yorange, domains los dominios de interacción entredomains una proteína otra deDNA colorbinding anaranjado claro,dark los orange, nuclear localization medium and transmembrane domains dominios de unión a DNA desequences anaranjado oscuro,blue, las secuencias de localización nuclear yellow. kinase and bisphosphatase activities of 6-phosphofructo-2-kinase/fructose(NLS) deThe azul medio, y los dominios transmembrana de amarillo. Las actividades 2,6-bisphosphatase are de catalyzed by the N- and C-terminal proximate catalyticson domains, de cinasa y bisfosfatasa la 6-fosfofructo-2-cinasa/fructosa-2,6-bisfosfatasa respectively.por los dominios catalíticos cercanos N y C terminal, respectivamente. catalizadas Algunas proteínas contienen disulfuro covalentes (S—S) conformation of a protein, just asenlaces a Velcro fastener harnesses quecumulative enlazan losstrength grupos sulfhidrilo residuos cisteinilo. La forma­ the of multipledeplastic loops and hooks. ciónSome de enlaces disulfuro comprende los grupos proteins contain covalent oxidación disulfide de (S—S) bondscis­ teinilo y requiere oxígeno. Los enlaces disulfuro intra­ that linksulfhidrilo the sulfhydryl groups of cysteinyl residues. Formapolipeptídicos más la estabilidad de cysteinyl la conformación tion of disulfide aumentan bonds involves oxidation of the sulfplegada de un and péptido, mientras queIntrapolypeptide los enlaces disulfuro interpo­ hydryl groups requires oxygen. disulfide lipeptídicos la estructura de ciertas proteí­ bonds furtherestabilizan enhance the stability ofcuaternaria the folded conformation oligoméricas. ofnas a peptide, while interpolypeptide disulfide bonds stabilize the quaternary structure of certain oligomeric proteins. LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL THREE-DIMENSIONAL STRUCTURE SE DETERMINA MEDIANTE IS DETERMINED BYCON X-RAY CRISTALOGRAFÍA RAYOS X O POR CRYSTALLOGRAPHY OR BY CON NMR MEDIO DE ESPECTROSCOPIA NMR SPECTROSCOPY Cristalografía con rayos X X-Ray DespuésCrystallography de que en 1960 John Kendrew solucionó la estructura tri­ Following thede solution in 1960 by John Kendrew the threedimensional la mioglobina, la cristalografía conofrayos X reveló dimensional structure ofde myoglobin, crystallography re- y las estructuras de miles proteínas x-ray y muchos oligonucleótidos vealed structures of proteins and de of many olivirus. the En la solución of dethousands esta estructura por medio cristalografía gonucleotides andproteína viruses. For solutionprimero of its structure by x-rayque con rayos X, una se precipita en condiciones crystallography, proteiny is firstordenados. precipitated conditions forman cristalesagrandes bien Paraunder establecer condicio­ that large, en well-ordered To establish appropriate nes form apropiadas, estudios de crystals. cristalización se usan algunos microli­ tros de solución de proteína, y una matriz de variables (temperatura, pH, presencia de sales o solutos orgánicos como polietilén glicol) a Murray_CH05_PTR.indd 37 05 Bender.indd 37 fin de establecer condiciones para la formación de cristales. conditions, crystallization trialsóptimas use a few microliters of protein El primer es radiar cristales montados en capilares deofcuarzo solution and apaso matrix of variables (temperature, pH, presence rayos X solutes monocromáticos de longitudglycol) de onda saltscon or organic such as polyethylene to aproximada establish de 0.15 nm para confirmar que son proteína,Crystals no sal. Amounted continuación optimal conditions for crystal formation. in los cristales de proteína se pueden congelar nitrógeno líquido quartz capillaries are first irradiated with en monochromatic x- para subsiguiente de un0.15 grupo de alta raysrecolección of approximate wavelength nmde to datos confirm thatresolución. they modelos mediante rayos X que son difractados are Los protein, not formados salt. Protein crystalslosmay then be frozen in liq- por átomosfor ensubsequent su trayectoria se registran sobre una placa fotográfica uidlos nitrogen collection of a high-resolution data su equivalente en computadoras como circular de pun­ set.oThe patterns formed by the x-rays thatun aremodelo diffracted by the tos de intensidad variable. A continuación se analizan los datos atoms in their path are recorded on a photographic plate or its inhe­ rentes en estas manchas usandopattern un método matemático llamado computer equivalent as a circular of spots of varying una síntesis de Fourier, que funciones onda. Las intensity. The data inherent in suma these las spots are thendeanalyzed us-ampli­ de onda seapproach relacionan con laaintensidad de la mancha, ing tudes a mathematical termed Fourier synthesis, which pero dado que las ondas no están a continuación es to necesa­ summates wave functions. Thesecuenciadas, wave amplitudes are related determinar la relación entreare susnot fases. En el método tradicional spotrio intensity, but since the waves in phase, the relationla solución “problema de fase” se emplea desplazamiento shippara between their del phases must next be determined. The traisomorfo. Antestodesolution la radiación, un“phase átomo,problem” con una “firma” de rayos ditional approach of the employs X distintiva,displacement. se introduce enPrior un cristal en posiciones conocidas isomorphous to irradiation, an atom with en la estructura x-ray primaria de la proteína. En el desplazamiento a distinctive “signature” is introduced into a crystalisomorfo at de átomo pesado porprimary lo generalstructure se usa mercurio o uranio, que se une known positions in the of the protein. Heavy a residuos cisteína.displacement En un métodogenerally alternativo se utiliza la expresión atom isomorphous uses mercury or de proteínas codificadas en las uranium, whichrecombinantes bind to cysteine residues.por Anplásmido, alternative ap-cuales el selenio al azufre la metionina. Enrecombinant la expresión se usa proach uses remplaza the expression of de plasmid-encoded un huésped bacteriano auxotrófico parasulfur la biosíntesis de metionina proteins in which selenium replaces the of methionine. y un medio definido en el cual la selenometionina remplaza a la metionina. De manera alternativa, si la estructura desconocida es 3/26/2009 8:49:49 PM 27/11/09 13:18:00 38 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas similar a una que ya se ha resuelto, el remplazo molecular en un modelo existente proporciona una manera atractiva de secuenciar los datos sin el uso de átomos pesados. Por último, los resultados de la secuencia y las sumas de Fourier proporcionan un perfil de den­ sidad de electrones o mapa tridimensional de cómo los átomos se conectan o relacionan entre sí. Cristalografía con rayos X de Laue La capacidad de algunas enzimas cristalizadas para catalizar reac­ ciones químicas sugiere de manera firme que las estructuras deter­ minadas mediante cristalografía son, de hecho, representativas de las estructuras presentes en solución libre. Sin embargo, la crista­ lografía clásica proporciona un cuadro en esencia estático de una proteína que quizá sufra importantes cambios estructurales, como los que acompañan a la catálisis enzimática. En el método de Laue se utilizan difracción de rayos X policromáticos y muchos cristales. Se evita el proceso (que consume mucho tiempo) de rotar el cristal en el haz de rayos X, lo que permite el uso de tiempos de exposi­ ción en extremo breves. En la detección de los movimientos de re­ siduos o dominios de una enzima durante catálisis se usan cristales que contienen un análogo de sustrato inactivo o “enjaulado”. Un destello intenso de luz visible divide el precursor enjaulado para que libere sustrato libre e inicie catálisis de una manera controlada con precisión. Al usar este método, es factible reunir datos durante pe­ riodos tan breves como de algunos nanosegundos. Espectroscopia con resonancia magnética nuclear (NMR) Es un importante complemento para la cristalografía con rayos X y mide la absorbancia de energía electromagnética de radiofrecuencia por ciertos núcleos atómicos. Los isótopos “activos en NMR” de ele­ mentos importantes desde el punto de vista biológico comprenden 1 H, 13C, 15N y 31P. La frecuencia, o desviación química, a la cual un núcleo particular absorbe energía está en función tanto del grupo funcional dentro del cual reside, como de la proximidad de otros núcleos activos en la NMR. Alguna vez limitados a metabolitos y macromoléculas relativamente pequeñas, ≤ 30 kDa, en la actuali­ dad es posible analizar proteínas y complejos proteínicos de > 100 kDa mediante NMR. La espectroscopia con NMR bidimensional permite construir una representación tridimensional de una proteí­ na al determinar la proximidad de estos núcleos a otro. En la espec­ troscopia con NMR se analizan proteínas en una solución acuosa, lo cual no sólo obvia la necesidad de formar cristales (una ventaja par­ ticular cuando se trata con proteínas de membrana difíciles de cris­ talizar), sino que también hace posible la observación en tiempo real de los cambios de conformación que acompañan a la unión a ligando o catálisis. También ofrece la posibilidad de que algún día logre observarse la estructura y la dinámica de proteínas (y meta­ bolitos) dentro de células vivas. Modelado molecular Un adjunto cada vez más útil para la determinación empírica de la estructura tridimensional de proteínas es el uso de tecnología de computadora para modelado molecular. Cuando se conoce la es­ tructura tridimensional, es factible utilizar programas de dinámica 05 Bender.indd 38 molecular para simular la dinámica conformacional de una pro­ teína, y la manera en la cual factores como temperatura, pH, fuer­ za iónica o sustituciones de aminoácidos influyen sobre estos mo­ vimientos. Los programas de acoplamiento molecular simulan las interacciones que tienen lugar cuando una proteína se encuen­ tra con un sustrato, inhibidor u otro ligando. La investigación vir­ tual para moléculas que tienen probabilidades de interactuar con sitios clave sobre una proteína de interés biomédico se usa de ma­ nera extensa con el fin de facilitar el descubrimiento de nuevos fármacos. El modelado molecular también se emplea para inferir la estruc­ tura de proteínas para las cuales aún no se dispone de estructuras cristalográficas con rayos X o NMR. Los algoritmos de estructu­ ras secundarias sopesan la propensión de residuos específicos a que­ dar incorporados hacia hélices α u hojas β en proteínas ya estudia­ das para predecir la estructura secundaria de otros polipéptidos. En el modelado de homología, la estructura tridimensional conocida de una proteína se usa como una plantilla sobre la cual erigir un modelo de la estructura probable de una proteína relacionada. Los científicos están trabajando para idear programas de computadora que predecirán de manera fiable la conformación tridimensional de una proteína de manera directa a partir de su secuencia primaria, lo que permitirá determinar las estructuras de muchas de las proteínas desconocidas para las cuales en la actualidad se carece de plantillas. PLEGADO DE PROTEÍNA Las proteínas son moléculas dinámicas desde el punto de vista con­ formacional que pueden plegarse hacia su conformación competente desde el punto de vista funcional en un marco de tiempo de mili­ segundos, y a menudo pueden volver a plegarse si su conformación queda alterada o desnaturalizada. ¿De qué modo se logra este notorio proceso de plegado? El plegado hacia el estado natural no compren­ de una búsqueda desordenada de todas las estructuras posibles. Las proteínas desnaturalizadas no son sólo espirales al azar, los con­ tactos naturales son favorecidos y regiones de la estructura natural prevalecen incluso en el estado desnaturalizado. A continuación se comentan los factores que facilitan el plegado y la recuperación del mismo, así como los conceptos actuales y mecanismos propuestos basados en más de 40 años de experimentación en su mayor parte in vitro. La conformación natural de una proteína es favorecida desde el punto de vista termodinámico El número de combinaciones distintas de ángulos fi y psi que espe­ cifican conformaciones potenciales de incluso un polipéptido hasta cierto punto pequeño —15 kDa— es asombrosamente vasto. Las proteínas se guían a través de este vasto laberinto de posibilidades mediante la termodinámica. Dado que la conformación relevante desde el punto de vista biológico —o natural— de una proteína por lo general es la que resulta más favorecida desde el punto de vista energético, el conocimiento de la conformación natural está especi­ ficado en la secuencia primaria. No obstante, si se esperara que un polipéptido encontrara su conformación natural mediante explora­ ción al azar de todas las conformaciones posibles, el proceso reque­ 27/11/09 13:18:01 CHAPTER 5 Capítulo 5 riría miles de millones de años para completarse; queda claro que el Folding Is Modular plegado de proteína en células tiene lugar de una manera más orde­ Protein folding generally occurs via a stepwise process. In the nada y guiada. first stage, as the newly synthesized polypeptide emerges from the ribosome, short segments fold into secondary structural that provide local regions of organized structure. Folding Elunits plegado es modular is now reduced to the selection of an appropriate arrangement of El this plegado de proteínas por lo general ocurre mediante proceso relatively small number of secondary structuralun elements. porInpasos. En la primera etapa, a medida que el polipéptido recién the second stage, the hydrophobic regions segregate into the sintetizado surge a partir del ribosoma, segmentos cortos se pliegan interior of the protein away from solvent, forming a “molten hacia unidades estructurales secundarias que proporcionan regio­ globule, ” a partially folded polypeptide in which the modules of nessecondary locales de structure estructurarearrange organizada; el plegado ahora se reduce a la until the mature conformation selección de una disposición de este númerobut relativamen­ of the protein is attained. apropiada This process is orderly, not rigid. te Considerable pequeño de elementos estructurales secundarios. En la order segunda flexibility exists in the ways and in the in etapa, las regiones hidrofóbicas se segregan hacia el interior de In la which elements of secondary structure can be rearranged. proteína, lejos del solvente, lo que forma un “glóbulo fundido”, un general, each element of secondary or super-secondary strucpolipéptido parcialmente plegado by en directing el cual losthe módulos deprocess estruc­ ture facilitates proper folding folding tura secundaria se reordenan hasta que se logra la conformación toward the native conformation and away from unproductive madura de la proteína. Este proceso es ordenado, mas no protomers rígido; hay alternatives. For oligomeric proteins, individual considerable flexibilidad en las formas y el orden en el cual tend to fold before they associate with other subunits. los ele­ mentos de estructura secundaria pueden reordenarse. En general, cada elemento de estructura secundaria o supersecundaria facilita el plegado apropiado al dirigir elAssist proceso Folding de plegado hacia la confor­ Auxiliary Proteins mación natural y lo aleja de las alternativas productivas. el Under appropriate laboratory conditions,nomany proteinsEn will caso de proteínas oligoméricas, los protómeros individuales tienden spontaneously refold after being denatured (ie, unfolded) by a plegarse antes de acid que se con otras subunidades. treatment with orasocien base, chaotropic agents, or detergents. However, refolding under these conditions is slow—minutes to hours. Moreover, some proteins fail to spontaneously reProteínas al plegado fold in vitro,auxiliares often formingayudan insoluble aggregates, disordered Encomplexes condiciones de laboratorio apropiadas, muchas proteínas held vol­ of unfolded or partially folded polypeptides verán a plegarse de manera espontánea después de ser desnaturalitogether by hydrophobic interactions. Aggregates represent zadas (esto es, desdobladas) tratamiento conCells ácidoemploy o base, unproductive dead ends mediante in the folding process. agentes caotrópicos o detergentes. Sin embargo, la restitución del auxiliary proteins to speed the process of folding and to guide plegado en estas circunstancias es lenta —de minutos a horas. Más it toward a productive conclusion. aún, algunas proteínas no vuelven a plegarse de manera espontánea in vitro y a menudo forman agregados insolubles, complejos desor­ Chaperones denados de polipéptidos desdoblados o parcialmente plegados que se Chaperone sostienen juntos mediante interacciones hidrofóbicas. Loshalf agre­ proteins participate in the folding of over of gados representan callejones sin salida no productivos en el proceso mammalian proteins. The hsp70 (70-kDa heat shock protein) defamily plegado. células emplean auxiliaresofpara acelerar el ofLas chaperones binds proteínas short sequences hydrophobic proceso de plegado y guiarlo hacia una conclusión productiva. amino acids in newly synthesized polypeptides, shielding them from solvent. Chaperones prevent aggregation, thus providing an opportunity for the formation of appropriate secondChaperones ary structural elements and their subsequent coalescence into molten globule. Theparticipan hsp60 family chaperones, Lasa proteínas chaperón en el of plegado de más sometimes de la mitad chaperonins, differLainfamilia sequence and structure from decalled las proteínas de mamíferos. de chaperones hsp70 (pro­ hsp70 and its homologs. actsselater the foldingcortas process, teína de choque por calor deHsp60 70 kDa) unein a secuencias de often together with an hsp70 chaperone.recién The central cavity of aminoácidos hidrofóbicos en polipéptidos sintetizados, lo the chaperone provides a sheltered envique losdonut-shaped protege contrahsp60 solvente. Los chaperones evitan la agregación; in proporcionan which a polypeptide can fold until hydrophobic deronment este modo, una oportunidad paraall la formación de regions are buried in its interior, eliminating elementos estructurales secundarios apropiados aggregation. y su coalescencia subsiguiente hacia un glóbulo fundido. La familia de chaperones hsp60, a veces llamada chaperoninas, difiere en secuencia y estruc­ Protein Isomerase tura de hsp70 yDisulfide sus homólogos; así, hsp60 actúa más tarde en el pro­ Disulfide bonds between andcon within polypeptides ceso de plegado, a menudo junto un chaperón hsp70. stabilize La cavi­ tertiary quaternary structure. disulfide bond dad centraland del chaperón hsp60 en formaHowever, de rosquilla, proporciona nonspecific. oxidizing conditions, a given unformation ambiente is protegido en elUnder cual un polipéptido puede plegarse hasta que todas las regiones hidrofóbicas están sepultadas en su in­ terior, lo que elimina la agregación. Murray_CH05_PTR.indd 39 05 Bender.indd 39 H N O α1 Proteins: Higher Orders of Structure Proteínas: órdenes de estructura superiores H N N O α1 α1′ R1 39 39 O α1′ N R1 O FIGURE of the prolyl peptideN-α bond FIGURA5–10 5-10 Isomerization La isomerización delN-α enlace peptídico 1 prolilo 1 from cis toconfiguración a trans configuration to respecto the backbone of the desdea una cis hacia relative una trans del esqueleto polypeptide. del polipéptido. Proteína disulfuro isomerasa cysteine can form a disulfide bond with the—SH of any acLos enlaces disulfuro entre polipéptidos y dentro de losexchange, mismos es­ cessible cysteinyl residue. By catalyzing disulfide tabilizan las estructuras terciaria y cuaternaria; sin embargo, for­ the rupture of an S—S bond and its reformation with a la difmación de enlace disulfuro es inespecífica. En condiciones oxidan­ ferent partner cysteine, protein disulfide isomerase facilitates tes, cisteínaofdada puedebonds formarthat un stabilize enlace disulfuro connative el —SH the una formation disulfide a protein’s de cualquier residuo cisteinilo accesible. Al catalizar el intercam­ conformation. bio de disulfuro, la rotura de un enlace S—S y su reformación con una diferente cisteína compañera, la disulfuro isomerasa de proteí­ na, facilita la formación de enlaces disulfuro y estabiliza la confor­ Proline-cis, trans-Isomerase mación natural de una proteína. All X-Pro peptide bonds—where X represents any residue— are synthesized in the trans configuration. However, of the X-Pro bonds of mature proteins, approximately 6% are cis. The Prolina-cis, trans-isomerasa cis configuration is particularly common in β turns. IsomerTodos los enlaces peptídicos X­Pro —donde X representa cualquier ization from trans to cis is catalyzed by the enzyme proline-cis, residuo— se sintetizan en la configuración trans. Sin embargo, de trans-isomerase (Figure 5–10). los enlaces X­Pro de proteínas maduras, alrededor de 6% es cis. La configuración cis es en particular frecuente en giros β. La isomeriza­ ción desde trans hacia cis es catalizada por la enzima prolina­cis, Folding Is a Dynamic Process trans­isomerasa (fig. 5­10). Proteins are conformationally dynamic molecules that can fold and unfold hundreds or thousands of times in their lifetime. How do proteins, unfolded, refold and restore their El plegado es unonce proceso dinámico functional conformation? First, unfolding leads to the Las proteínas son moléculas dinámicas desde rarely el punto de vista con­ complete randomization of the polypeptide chain inside the o formacional, mismas que se pueden plegar y desdoblar cientos cell. Unfolded proteins retain number miles de veces durante su generally lapso de vida. ¿Dea qué modooflascontacts proteínas, and regions of secondary structure that facilitate refolduna vez desdobladas, se vuelven a plegar y restituyen the su conforma­ ing process. Second, chaperone proteins can “rescue” unfoldción funcional? En primer lugar, el desdoblamiento rara vez lleva a edaleatorización proteins that completa have become in la la de lathermodynamically cadena polipeptídicatrapped dentro de acélula. misfolded dead end by unfolding hydrophobic regions and Las proteínas desdobladas por lo general retienen varios con­ providing a second chance tosecundaria fold productively. Glutathione tactos y regiones de estructura que facilitan el proceso can reduce inappropriate disulfide bonds that may be formed de reaparición del plegado. En segundo lugar, las proteínas chape­ upon exposure to oxidizing agents such asque O2,han hydrogen perrón pueden “rescatar” proteínas desdobladas quedado atra­ oxide, or superoxide (Chapter 52). padas en el aspecto termodinámico en un callejón sin salida con plegado erróneo, al desdoblar regiones hidrofóbicas y proporcionar una segunda oportunidad para que se plieguen de manera produc­ PERTURBATION OF PROTEIN tiva. El glutatión puede reducir enlaces disulfuro inapropiados que quizá se formen al momento de la exposición CONFORMATION MAY HAVE a agentes oxidantes, como O2, peróxido de hidrógeno o superóxido (cap. 52). PATHOLOGIC CONSEQUENCES Prions PERTURBACIÓN DE LA CONFORMACIÓN The transmissible spongiform encephalopathies, or prion DE LA PROTEÍNA PUEDE TENER diseases, are fatal neurodegenerative diseases characterized CONSECUENCIAS PATOLÓGICAS by spongiform changes, astrocytic gliomas, and neuronal loss resulting from the deposition of insoluble protein aggregates They include Creutzfeldt–Jakob disease in Las encefalopatías espongiformes transmisibles, o enfermedades por prión, son enfermedades neurodegenerativas mortales caracteriza­ Priones in neural cells. 3/26/2009 8:49:49 PM 27/11/09 13:18:03 40 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas das por cambios espongiformes, gliomas astrocíticos y pérdida neu­ ronal originada por el depósito de agregados proteínicos insolubles en células neurales. Comprenden la enfermedad de Creutzfeldt– Jakob en seres humanos, encefalopatía espongiforme en ovejas y encefalopatía espongiforme en el ganado vacuno (enfermedad de las vacas locas). Una forma variante de la enfermedad de Creutz­ feldt­Jakob, la vCJD, misma que afecta a pacientes más jóvenes, se relaciona con trastornos psiquiátricos y conductuales de inicio tem­ prano. Las enfermedades por prión llegan a manifestarse como tras­ tornos infecciosos, genéticos o esporádicos. Dado que es imposible identificar un gen viral o bacteriano que codifica la proteína prión patológica, la fuente y el mecanismo de transmisión de la enferme­ dad por prión permanecieron sin determinarse durante mucho tiem­ po. Hoy es reconocido que las enfermedades por prión son trastor­ nos de conformación de proteína que se transmiten al alterar la conformación y, por ende, las propiedades físicas, de proteínas en­ dógenas para el huésped. La proteína relacionada con prión, PrP, de seres humanos, una glucoproteína codificada en el brazo corto del cromosoma 20, en circunstancias normales es monomérica y rica en hélice α. Las proteínas prión patológicas sirven como las plantillas para la transformación conformacional de la PrP normal, conocida como PrPc (celular), hacia PrPsc (scrapie); esta última es rica en ho­ jas β con muchas cadenas laterales aminoacilo hidrofóbicas expues­ tas a solvente. A medida que se forma cada nueva molécula de PrPsc, desencadena la producción de aún más variantes patológicas en una reacción en cadena conformacional. Dado que las moléculas de PrPsc se relacionan con fuerza entre sí por medio de sus regiones hidrofóbicas expuestas, las unidades de PrPsc que se están acumu­ lando muestran coalescencia y forman agregados resistentes a pro­ teasa insolubles. Puesto que un prión o una proteína relacionada con prión patológico pueden servir como la plantilla para la trans­ formación conformacional de muchas veces su número de molécu­ las de PrPc, las enfermedades por prión pueden transmitirse me­ diante la proteína sola sin afección del DNA o el RNA. bilizante de cadena alfa) (AHSP) se une a subunidades α de hemo­ globina libres en espera de incorporación hacia el multímero de hemoglobina. En ausencia de este chaperón, las subunidades de he­ moglobina α libres se agregan y el precipitado resultante tiene efec­ tos tóxicos sobre el eritrocito en desarrollo. Investigaciones en rato­ nes modificados desde el punto de vista genético sugieren una participación para la AHSP en la modulación de la gravedad de la talasemia β en seres humanos. Enfermedad de Alzheimer El colágeno es una proteína fibrosa La reaparición del plegado o el plegado erróneo de otra proteína endógena al tejido cerebral de seres humanos, el amiloide β, es una característica notoria de la enfermedad de Alzheimer. Si bien la cau­ sa principal de dicha enfermedad aún no se ha dilucidado, las placas seniles y los heces neurofibrilares característicos contienen agrega­ dos de la proteína amiloide β, polipéptido de 4.3 kDa producido por división proteolítica de una proteína de mayor tamaño conocida como proteína precursora amiloide. En pacientes con enfermedad de Alzheimer, las cifras de amiloide β aumentan, y esta proteína pasa por una transformación conformacional desde un estado rico en hé­ lice α soluble hacia un estado abundante en hoja β y propenso a la autoagregación. La apolipoproteína E ha quedado comprendida como un mediador potencial de esta transformación conformacional. El colágeno es la más abundante de las proteínas fibrosas y constitu­ ye más de 25% de la masa proteínica en el organismo humano; otras proteínas fibrosas importantes son la queratina y la miosina. Di­ chas proteínas fibrosas representan una fuente primaria de fuerza estructural para las células (esto es, el citoesqueleto) y los tejidos. La flexibilidad y la fuerza de la piel dependen de una red entrelazada de fibras de colágeno y queratina, mientras que los huesos y los dientes son apuntalados por una red subyacente de fibras de coláge­ no análogas a los filamentos de acero en el concreto reforzado. El colágeno también está presente en tejidos conjuntivos, como liga­ mentos y tendones. El alto grado de resistencia a la tracción, necesa­ rio para satisfacer estas funciones estructurales, requiere proteínas alargadas, las cuales se caracterizan por secuencias de aminoácidos repetitivas y una estructura secundaria regular. Talasemias β Las talasemias se producen por defectos genéticos que alteran la sín­ tesis de una de las subunidades polipeptídicas de la hemoglobina (cap. 6). En el transcurso del brote de síntesis de hemoglobina que ocurre durante el desarrollo de eritrocitos, un chaperón específico llamado proteína estabilizadora de hemoglobina α (o proteína esta­ 05 Bender.indd 40 EL COLÁGENO ILUSTRA LA FUNCIÓN DEL PROCESAMIENTO POSTRADUCCIONAL EN LA MADURACIÓN DE PROTEÍNA La maduración de proteína a menudo comprende la formación y la rotura de enlaces covalentes La maduración de proteínas hacia su estado estructural final a me­ nudo comprende la división o formación (o ambas) de enlaces cova­ lentes, un proceso de modificación postraduccional. Muchos po­ lipéptidos en un inicio se sintetizan como precursores de mayor tamaño llamados proproteínas. Los segmentos polipeptídicos “ex­ tra” en estas proteínas a menudo sirven como secuencias líder que dirigen un polipéptido hacia un organelo particular o facilitan su paso a través de una membrana. Otros segmentos aseguran que la actividad en potencia perjudicial de una proteína —como las pro­ teasas tripsina y quimotripsina— permanezca inhibida, en tanto es­ tas proteínas lleguen a su destino final. Sin embargo, una vez que se satisfacen esos requerimientos transitorios, las regiones peptídicas ahora superfluas se eliminan mediante proteólisis selectiva. Quizá tengan lugar otras modificaciones covalentes que añaden nuevas funcionalidades químicas a una proteína. La maduración del colá­ geno ilustra ambos procesos. El colágeno forma una triple hélice singular El tropocolágeno consta de tres fibras, cada una de las cuales contie­ ne alrededor de 1 000 aminoácidos, agrupadas en una conforma­ ción singular, la triple hélice de colágeno (fig. 5­11). Una fibra de colágeno madura forma una varilla alargada con una proporción 27/11/09 13:18:04 Capítulo 5 Secuencia –Gli – X – Y – Gli – X – Y – Gli – X – Y – de aminoácidos Estructura secundaria Triple hélice FIGURA 5-11 Estructuras primaria, secundaria y terciaria del colágeno. axial de alrededor de 200. Tres hebras polipeptídicas entrelazadas, que se tuercen hacia la izquierda, se envuelven entre sí en dirección hacia la derecha para formar la triple hélice de colágeno. La latera­ lidad opuesta de esta superhélice y sus polipéptidos componentes hacen que la triple hélice de colágeno sea muy resistente al desdo­ blamiento —el mismo principio usado en cables de acero de puentes colgantes—. Una triple hélice de colágeno tiene 3.3 residuos por giro y una elevación por cada residuo de cerca de dos veces la de una hélice α. Los grupos R de cada hebra polipeptídica de la triple hélice se aprietan de manera tan estrecha que, para que se ajusten, uno debe ser glicina, de modo que cada tercer residuo aminoácido en el colágeno es un residuo glicina. El escalonamiento de las tres hebras proporciona una colocación apropiada de las glicinas requisito en toda la hélice. El colágeno también tiene alto contenido de prolina e hidroxiprolina, lo que da un modelo Gli­X­Y repetitivo (fig. 5­11), en el cual la Y por lo general es prolina o hidroxiprolina. Las triples hélices de colágeno se estabilizan mediante enlaces de hidrógeno entre residuos en diferentes cadenas polipeptídicas, proceso auxiliado por los grupos hidroxilo de residuos hidroxipro­ lilo. Enlaces covalentes formados entre residuos lisilo modificados tanto dentro de cadenas polipeptídicas como entre las mismas, pro­ porcionan estabilidad adicional. El colágeno se sintetiza como un precursor de mayor tamaño El colágeno en un inicio se sintetiza como un polipéptido precursor de mayor tamaño, el procolágeno. Muchos residuos prolilo y lisi­ lo de procolágeno se hidroxilan mediante la propilo hidroxilasa y la lisilo hidroxilasa, enzimas que requieren ácido ascórbico (vitamina C; caps. 27 y 44). Los residuos hidroxiprolilo e hidroxilisilo propor­ cionan capacidad adicional de formación de enlaces de hidrógeno que estabiliza la proteína madura. Además, las glucosilo y galacto­ silo transferasas fijan residuos glucosilo o galactosilo a los grupos hidroxilo de residuos hidroxilisilo específicos. La porción central del polipéptido precursor se asocia entonces con otras moléculas y forma la triple hélice característica; dicho proceso va acompañado de la eliminación del amino terminal glo­ bular y de extensiones carboxilo terminales del polipéptido precur­ sor mediante proteólisis selectiva. La lisilo oxidasa, proteína que contiene cobre, que convierte grupos є­amino en aldehídos, modifi­ ca ciertos residuos lisilo. Los aldehídos pueden pasar por una con­ densación de aldol para formar un doble enlace C==C, o para for­ mar una base de Schiff (eneimina) con el grupo є­amino de un residuo lisilo no modificado, que después se reduce y forma un en­ lace C—N único. Estos enlaces covalentes unen los polipéptidos in­ dividuales y confieren a la fibra fuerza y rigidez excepcionales. 05 Bender.indd 41 Proteínas: órdenes de estructura superiores 41 Los trastornos nutricionales y genéticos pueden alterar la maduración del colágeno La compleja serie de eventos en la maduración del colágeno propor­ ciona un modelo que ilustra las consecuencias biológicas de la ma­ duración incompleta de polipéptidos. El defecto mejor conocido de la biosíntesis de colágeno es el escorbuto, un resultado de una de­ ficiencia en la dieta de vitamina C requerida por las prolilo y lisilo hidroxilasas. El déficit resultante del número de residuos hidroxi­ prolina e hidroxilisina socava la estabilidad conformacional de las fibras de colágeno, lo que lleva a encías sangrantes, hinchazón de articulaciones, cicatrización inadecuada de heridas y, por último, la muerte. El síndrome de Menkes, caracterizado por pelo rizado y re­ traso del crecimiento, refleja una deficiencia en la dieta del cobre requerido por la lisilo oxidasa, que cataliza un paso clave en la for­ mación de enlaces covalentes que fortalecen las fibras de colágeno. Los trastornos genéticos de la biosíntesis de colágeno compren­ den varias formas de osteogénesis imperfecta, la cual se distingue por la presencia de huesos frágiles. En el síndrome de Ehlers­Dan­ los, un grupo de trastornos del tejido conjuntivo que comprenden alteración de la integridad de las estructuras de apoyo, defectos en los genes que codifican para el α colágeno­1, procolágeno N­pepti­ dasa o lisilo hidroxilasa, dan por resultado articulaciones móviles y anormalidades de la piel (cap. 48). RESUMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ Las proteínas pueden clasificarse con base en su solubilidad, forma o función, o según la presencia de un grupo prostético, como hem. La estructura primaria codificada por gen de un polipéptido es la secuencia de sus aminoácidos. Su estructura secundaria se produce por plegado de polipéptidos hacia motivos con enlaces de hidrógeno, como la hélice α, la hoja plegada β, flexiones β y asas. Las combinaciones de estos motivos pueden formar motivos supersecundarios. La estructura terciaria alude a las relaciones entre dominios estructurales secundarios. La estructura cuaternaria de proteínas que tienen dos o más polipéptidos (proteínas oligoméricas) se refiere a las relaciones espaciales entre diversos tipos de polipéptidos. Las estructuras primarias se estabilizan por medio de enlaces peptídicos covalentes. Los órdenes de estructura superiores se estabilizan mediante fuerzas débiles —enlaces de hidrógeno múltiples, enlaces salinos (electrostáticos) y asociación de grupos R hidrofóbicos. El ángulo fi (Ф) de un polipéptido es el ángulo alrededor del enlace Cα—N; el ángulo psi (ψ) es el que hay alrededor del enlace Cα—Co. Casi todas las combinaciones de ángulos fi­psi son denegadas debido a obstaculización estérica. Los ángulos fi­psi que forman la hélice α y la hoja β caen dentro de los cuadrantes inferior y superior izquierdos de un gráfico de Ramachandran, respectivamente. Aún hay poca comprensión en cuanto al proceso del plegado de proteína. En términos generales, los segmentos cortos de polipéptidos recién sintetizados se pliegan hacia unidades estructurales secundarias. Las fuerzas que sepultan regiones hidrofóbicas desde el solvente después impulsan al polipéptido parcialmente plegado hacia un “glóbulo fundido”, en el cual los módulos de estructura secundaria se reordenan para dar la conformación natural de la proteína. Las proteínas que ayudan al plegado comprenden la proteína disulfuro isomerasa, prolina­cis, trans­isomerasa y los chaperones 27/11/09 13:18:05 42 ■ ■ ■ SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas que participan en el plegado de más de la mitad de las proteínas de mamífero. Los chaperones protegen contra solvente a los polipéptidos recién sintetizados, además de que proporcionan un ambiente para que elementos de la estructura secundaria surjan y muestren coalescencia para formar glóbulos fundidos. Las técnicas para el estudio de órdenes superiores de estructura de proteína comprenden cristalografía con rayos X, espectroscopia con NMR, ultracentrifugación analítica, filtración en gel y electroforesis en gel. El colágeno ilustra el estrecho enlace entre la estructura de proteínas y la función biológica. Las enfermedades de la maduración del colágeno comprenden el síndrome de Ehlers­Danlos y el escorbuto, la enfermedad por deficiencia de vitamina C. Los priones —partículas de proteína que carecen de ácido nucleico— causan encefalopatías espongiformes transmisibles y mortales, como la enfermedad de Creutzfeldt–Jakob o las encefalopatías espongiformes ovina y bovina. Las enfermedades por prión comprenden una estructura secundaria­terciaria alterada de una proteína natural, la PrPc. Cuando esta última interactúa con su isoforma patológica, PrPsc, su conformación se transforma desde una estructura predominantemente helicoidal α hacia la estructura con hoja β característica de la PrPsc. REFERENCIAS Branden C, Tooze J: Introduction to Protein Structure. Garland, 1991. Chiti F, Dobson CM: Protein misfolding, functional amyloid, and human disease. Annu Rev Biochem 2006;75:519. Collinge J: Prion diseases of humans and animals: their causes and molecular basis. Annu Rev Neurosci 2001;24:519. Foster MP et al: Solution NMR of large molecules and assemblies. Biochemistry 2007;46:331. Frydman J: Folding of newly translated proteins in vivo: the role of molecular chaperones. Annu Rev Biochem 2001; 70:603. Gothel SF, Marahiel MA: Peptidyl­prolyl cis-trans isomerases, a superfamily of ubiquitous folding catalysts. Cell Mol Life Sci 1999;55:423. 05 Bender.indd 42 Hajdu J et al: Analyzing protein functions in four dimensions. Nat Struct Biol 2000;7:1006. 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La mioglobina, una proteína monomérica del músculo esquelético, almacena oxígeno como una reserva contra la privación del mismo. La hemoglobina, una proteína tetramérica de los eritrocitos, transporta O2 hacia los tejidos, y favorece el transporte de CO2 y protones hacia los pulmones. El cianuro y el monóxido de carbono son letales porque alteran la función fisiológica de las proteínas hem citocromo oxidasa y hemoglobina, respectivamente. La estructura secundariaterciaria de las subunidades de hemoglobina semeja a la de la mioglobina. Sin embargo, la estructura tetramérica de la hemoglobina permite interacciones cooperativas fundamentales para su función. Por ejemplo, el 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) promueve la liberación eficiente de O2 al estabilizar la estructura cuaternaria de la desoxihemoglobina. La hemoglobina y la mioglobina ilustran tanto relaciones entre estructura y función de proteína, como la base molecular de enfermedades genéticas, como la drepanocitosis y las talasemias. LOS HIERROS HEM Y FERROSO CONFIEREN LA CAPACIDAD PARA ALMACENAR OXÍGENO Y TRANSPORTARLO La mioglobina y la hemoglobina contienen hem (hemo), un tetrapirrol cíclico que consta de cuatro moléculas de pirrol enlazadas por puentes de α-metileno. Esta red planar de dobles enlaces conjugados absorbe luz visible y da al hem un color rojo oscuro. Los sustitutos en las posiciones β son grupos metilo (M), vinilo (V) y propionato (Pr) dispuestos en el orden M, V, M, V, M, Pr, Pr, M (fig. 6-1). Un átomo de hierro ferroso (Fe2+) reside en el centro del tetrapirrol planar. Otras proteínas con grupos prostéticos tetrapirrol que contienen metal comprenden los citocromos (Fe y Cu) y la clorofila (Mg) (cap. 31). La oxidación y reducción de los átomos de Fe y Cu de citocromos son esenciales para su función biológica como transportadores de electrones. En contraste, la oxidación del Fe2+ de la mioglobina o de la hemoglobina hacia Fe3+ destruye su actividad biológica. La mioglobina es rica en hélice α El oxígeno almacenado en la mioglobina del músculo esquelético, es liberada durante disminución de la tensión de O2 (p. ej., ejerci- a 6 P í t u l o cio intenso) para que las mitocondrias del músculo lo utilicen en la síntesis aeróbica de ATP (cap. 13). La mioglobina, un polipéptido de 153 residuos aminoacilo (masa molecular relativa [Mr] de 17 000), se pliega hacia una forma compacta que mide 4.5 × 3.5 × 2.5 nm (fig. 6-2). Proporciones extraordinariamente altas, alrededor de 75%, de los residuos están presentes en ocho hélices α diestras de 7 a 20 residuos. Empezando en el amino terminal, éstas se denominan hélices A-H. Típico de las proteínas globulares, la superficie de la mioglobina es polar, mientras que —con dos excepciones— el interior sólo contiene residuos no polares, como Leu, Val, Fen y Met. Las excepciones son His E7 y His F8, los residuos séptimo y octavo en hélices E y F, que yacen cerca del hierro hem, donde funcionan en la unión de O2. Las histidinas F8 y E7 desempeñan funciones singulares en la unión de oxígeno El hem de la mioglobina yace en una hendidura entre las hélices E y F orientado por sus grupos polares propionato mirando hacia la superficie de la globina (fig. 6-2). El resto reside en el interior no polar. La quinta posición de coordinación del hierro está enlazada al átomo de nitrógeno de la histidina proximal, His F8. La histidina distal, His E7, se ubica en el lado opuesto del anillo hem a His F8. El hierro se mueve hacia el plano del hem cuando el oxígeno está unido El hierro de la mioglobina no oxigenada yace a 0.03 nm (0.3 Å) fuera del plano del anillo hem, hacia His F8; por ende, el hem “se pliega” un poco. Cuando el O2 ocupa la sexta posición de coordinación, el hierro se mueve hacia dentro de 0.01 nm (0.1 Å) del plano del anillo hem. De este modo, la oxigenación de la mioglobina se acompaña de movimiento del hierro, de His F8, y de residuos enlazados a este último. La apomioglobina proporciona un ambiente adverso para el hierro hem Cuando el O2 se une a la mioglobina, el enlace entre el primer átomo de oxígeno y el Fe2+ es perpendicular al plano del anillo hem. El enlace que une el primero y segundo átomos de oxígeno yace a un ángulo de 121° al plano del hem, lo que orienta al segundo oxígeno en dirección contraria a la histidina distal (fig. 6-3, izquierda). El 43 06 Bender.indd 43 27/11/09 13:33:25 44 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas N N E7 E7 N N N O 2+ N N Fe O O C Fe Fe N N N –O F8 O F8 N O O– FIGURA 6-1 Hem. Los anillos pirrol y los carbonos de puente de metileno son coplanares, y el átomo de hierro (Fe2+) reside casi en el mismo plano. La quinta y sexta posiciones de coordinación de Fe2+ están dirigidas perpendiculares —y directamente por arriba y por debajo de— al plano del anillo hem. Observe la naturaleza de los grupos sustituyentes metilo (azul), vinilo (verde) y propionato (naranja) en los carbonos β de los anillos pirrol, el átomo de hierro central (rojo) y la localización del lado polar del anillo hem (a alrededor de las 7 de la carátula del reloj) que mira hacia la superficie de la molécula de mioglobina. H A G C B E D FIGURA 6-2 Estructura tridimensional de la mioglobina. Se muestra un diagrama de listones que traza el esqueleto polipeptídico de la mioglobina. El color de la cadena polipeptídica está graduado a lo largo del espectro visible desde azul (N terminal) hasta marrón claro (C terminal). El grupo prostético hem se muestra en color rojo. Las regiones helicoidales α están designadas de la A a la H. Los residuos histidina distal (E7) y proximal (F8) están resaltados en azul y naranja, respectivamente. Note de qué modo los sustituyentes propionato polares (Pr) se proyectan hacia afuera del hem hacia el agua. (Adaptado de Protein Data Bank ID no. 1a6n.) hem aislado se une al monóxido de carbono (CO) con una fuerza 25 000 veces mayor que la que le une al oxígeno. Dado que el CO está presente en pequeñas cantidades en la atmósfera, y surge en células a partir del catabolismo del hem, ¿por qué el CO no desplaza por completo al O2 del hierro hem? La explicación aceptada es que las apoproteínas de la mioglobina y la hemoglobina crean un am- 06 Bender.indd 44 FIGURA 6-3 Ángulos para la unión de oxígeno y monóxido de carbono (CO) al hierro hem de la mioglobina. La histidina E7 distal obstaculiza el enlace de CO en el ángulo preferido (90o) al plano del anillo hem. biente adverso. Cuando el CO se une a hem aislado, los tres átomos (Fe, C y O) yacen en posición perpendicular al plano del hem. Sin embargo, en la mioglobina y la hemoglobina la histidina distal por impedimento estérico evita esta orientación de alta afinidad. La unión a un ángulo menos favorecido reduce la fuerza del enlace hem-CO a alrededor de 200 veces la del enlace hem-O2 (fig. 6-3, derecha) a cuyo nivel domina el gran exceso de O2 sobre el CO normalmente presente. Sin embargo, por lo general alrededor de 1% de la mioglobina está presente combinada con CO. LAS CURVAS DE DISOCIACIÓN DE OXÍGENO PARA LA MIOGLOBINA Y LA HEMOGLOBINA SON IDÓNEAS PARA SUS FUNCIONES FISIOLÓGICAS F Pr N ¿Por qué la mioglobina no es adecuada como una proteína de transporte de O2, pero es ideal para el almacenamiento de O2? La relación entre la concentración, o presión parcial, de O2 (Po2) y la cantidad de O2 unido se expresa como una isoterma de saturación de O2 (fig. 6-4). La curva de unión a oxígeno para la mioglobina es hiperbólica; por ende, la mioglobina carga O2 con facilidad a la Po2 del lecho capilar pulmonar (100 mm Hg). Sin embargo, dado que la mioglobina sólo libera una pequeña fracción de su O2 unido a los valores de Po2 que por lo general se encuentran en el músculo activo (20 mm Hg) o en otros tejidos (40 mm Hg), representa un vehículo ineficaz para el aporte de O2. Cuando el ejercicio extenuante disminuye la Po2 del tejido muscular a alrededor de 5 mm Hg, la mioglobina libera O2 para la síntesis mitocondrial de ATP, lo que permite que continúe la actividad muscular. LAS PROPIEDADES ALOSTÉRICAS DE LAS HEMOGLOBINAS DEPENDEN DE SUS ESTRUCTURAS CUATERNARIAS Las propiedades de hemoglobina individuales son consecuencia de su estructura cuaternaria, así como de sus estructuras secundaria y terciaria. La estructura cuaternaria de la hemoglobina confiere notorias propiedades adicionales, ausentes de la mioglobina monomérica, que la adaptan a sus funciones biológicas singulares. Las pro- 27/11/09 13:33:35 Capítulo 6 100 Porcentaje de saturación Mioglobina 80 Sangre oxigenada que abandona los pulmones 60 piedades alostéricas (del griego allos “otro”, steros “espacio”) de la hemoglobina proporcionan, además, un modelo para entender otras proteínas alostéricas (cap. 18). La hemoglobina es tetramérica Sangre reducida que regresa desde los tejidos 40 20 Hemoglobina 0 45 Proteínas: mioglobina y hemoglobina 20 40 60 80 100 120 140 Presión gaseosa de oxígeno (mm Hg) FIGURA 6-4 Curvas de unión a oxígeno de la hemoglobina y la mioglobina. La tensión arterial de oxígeno es de alrededor de 100 mm Hg; la tensión venosa mixta de oxígeno es de alrededor de 40 mm Hg; la tensión de oxígeno capilar (músculo activo) es de cerca de 20 mm Hg, y la tensión de oxígeno mínima requerida para la citocromo oxidasa es de cerca de 5 mm Hg. La asociación de cadenas hacia una estructura tetramérica (hemoglobina) da por resultado un aporte de oxígeno mucho mayor que el que sería posible con cadenas únicas. (Modificado, con autorización, de Scriver CR et al. [editors]: The Molecular and Metabolic Bases of Inherited Disease, 7th ed. McGraw-Hill, 1995.) Las hemoglobinas son tetrámeros compuestos de pares de dos diferentes subunidades polipeptídicas (fig. 6-5). Se usan letras griegas para designar cada subtipo de unidad. La composición de subunidad de las hemoglobinas principales son α2β2 (HbA; hemoglobina normal del adulto), α2γ2 (HbF; hemoglobina fetal), α2S2 (HbS; hemoglobina de células falciformes) y α2δ2 (HbA2; una hemoglobina menor del adulto). Las estructuras primarias de las cadenas β, γ y δ de la hemoglobina humana están muy conservadas. La mioglobina y las subunidades β de la hemoglobina comparten estructuras secundaria y terciaria casi idénticas A pesar de diferencias en la clase y el número de aminoácidos presentes, la mioglobina y el polipéptido β de la hemoglobina A tienen estructuras secundaria y terciaria casi idénticas. Las similitudes comprenden la localización del hem y las regiones helicoidales, y la FIGURA 6-5 Hemoglobina. Se muestra la estructura tridimensional de la desoxihemoglobina con una molécula de 2,3-bisfosfoglicerato (azul oscuro) unida. Las dos subunidades α están coloreadas en los tonos más oscuros de verde y azul, en tanto que las dos subunidades β en los tonos más claros de verde y azul, mientras que los grupos prostéticos hem en color rojo. (Adaptado de Protein Data Bank ID no. 1b86.) 06 Bender.indd 45 27/11/09 13:33:45 46 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas presencia de aminoácidos con propiedades similares en ubicaciones comparables. Aunque posee siete —en vez de ocho— regiones helicoidales, el polipéptido α de la hemoglobina también semeja de manera estrecha a la mioglobina. La oxigenación de la hemoglobina desencadena cambios de conformación en la apoproteína Las hemoglobinas unen cuatro moléculas de O2 por cada tetrámero, uno por cada hem. Una molécula de O2 se une a un tetrámero de hemoglobina con mayor facilidad si otras moléculas de O2 ya están unidas (fig. 6-4). Este fenómeno, llamado unión cooperativa, permite a la hemoglobina maximizar tanto la cantidad de O2 cargada a la Po2 de los pulmones, como la cantidad de O2 liberada a la Po2 de los tejidos periféricos. Las interacciones cooperativas, una propiedad exclusiva de proteínas multiméricas, tienen importancia crucial para la vida aeróbica. por completo a las subunidades γ características de la HbA del adulto (α2β2) sino hasta algunas semanas después del parto (fig. 6-6). La oxigenación de la hemoglobina se acompaña de grandes cambios de conformación La unión de la primera molécula de O2 a la desoxiHb desvía el hierro hem hacia el plano del anillo hem desde una posición alrededor de 0.04 nm más allá del mismo (fig. 6-7). Este movimiento se transmite a la histidina proximal (F8) y a los residuos fijos a ella lo que, a su vez, causa la rotura de puentes salinos entre los residuos carboxi- Histidina F8 Hélice F Síntesis de cadena de globina (% del total) Cadena γ (fetal) Plano de porfirina +O2 Hélice F N C HC CH N Fe O O FIGURA 6-7 El átomo de hierro se mueve hacia el plano del hem en el momento de la oxigenación. La histidina F8 y sus residuos asociados son llevados junto con el átomo de hierro. (Modificado y reproducido, con autorización, de Stryer L: Biochemistry, 4th ed. Freeman, 1995. Copyright © 1995 W. H. Freeman and Company.) β2 α1 β2 Cadena β (adulto) Eje 20 α2 Cadenas ∋ y ζ (embrionarias) α2 3 6 Nacimiento Gestación (meses) 3 β1 β1 15° Cadena δ 0 6 Edad (meses) FIGURA 6-6 Modelo de desarrollo de la estructura cuaternaria de las hemoglobinas fetal y de recién nacido. (Reproducido, con autorización, de Ganong WF: Review of Medical Physiology, 20th ed. McGraw-Hill, 2001.) 06 Bender.indd 46 Fe α1 30 10 N Repulsión estérica Cadena α 50 40 N CH HC La P50 expresa las afinidades relativas de diferentes hemoglobinas por el oxígeno La cantidad P50, una medida de la concentración de O2, es la presión parcial de O2 que satura 50% de una hemoglobina dada. Dependiendo del organismo, la P50 puede variar de manera significativa, pero en todos los casos excederá la Po2 de los tejidos periféricos. Por ejemplo, los valores de P50 para HbA y HbF son de 26 y 20 mm Hg, respectivamente. En la placenta, tal diferencia permite que la HbF extraiga oxígeno de la HbA en la sangre de la madre. Sin embargo, la HbF es subóptima posparto porque su alta afinidad por el O2 limita la cantidad de O2 suministrado a los tejidos. La composición de subunidad de tetrámeros de hemoglobina sufre cambios complejos durante el desarrollo. El feto humano en un inicio sintetiza un tetrámero ζ2ε2. Hacia el final del primer trimestre, las subunidades ζ y ε han quedado remplazadas por subunidades α y γ, lo que forma HbF (α2γ2), la hemoglobina de etapas avanzadas de la vida fetal. Si bien la síntesis de subunidades β empieza durante el tercer trimestre, dichas subunidades no remplazan C Forma T Forma R FIGURA 6-8 Durante la transición de la forma T a la forma R de la hemoglobina, el par de subunidades α2β2 (verde) rota por 15o respecto del par de subunidades α1β1 (amarillo). El eje de rotación es excéntrico y el par α2β2 también se desvía un poco hacia el eje. En la representación, el par α1β1 de color marrón claro se muestra fijo, mientras que el par α2β2 de subunidades verde se desvía y rota. 27/11/09 13:33:53 Capítulo 6 lo terminal de las cuatro subunidades. Como resultado, un par de subunidades α/β rota 15 grados respecto del otro, lo que compacta el tetrámero (fig. 6-8). Profundos cambios de las estructuras secundaria, terciaria y cuaternaria acompañan a la transición de alta afinidad inducida por O2 de la hemoglobina desde el estado t (tenso) de baja afinidad hacia el estado R (relajado) de alta afinidad. Estos cambios aumentan de manera importante la afinidad de los hemes no oxigenados restantes por el O2, puesto que los eventos de unión subsiguientes requieren la rotura de menos puentes salinos (fig. 6-9). Los términos T y R también se usan para hacer referencia a las conformaciones de afinidad baja y alta de enzimas alostéricas, respectivamente. Después de liberar O2 en los tejidos, la hemoglobina transporta CO2 y protones hacia los pulmones Además de transportar O2 desde los pulmones hacia los tejidos periféricos, la hemoglobina transporta CO2, el subproducto de la respiración, y protones, desde los tejidos periféricos hacia los pulmones. La hemoglobina porta CO2 al unirse al nitrógeno amino terminal de las cadenas polipeptídicas de la fracción apoproteica. O + CO2 + Hb NH3 2H+ + Hb H N C O Los carbamatos cambian la carga en terminales amino desde positiva hacia negativa, lo que favorece la formación de puentes salinos entre las cadenas α y β. Los carbamatos de hemoglobina explican alrededor de 15% del CO2 en la sangre venosa. Gran parte del CO2 restante se transporta Proteínas: mioglobina y hemoglobina 47 como bicarbonato, que se forma en los eritrocitos mediante la hidratación de CO2 hacia ácido carbónico (H2CO3), un proceso catalizado por la anhidrasa carbónica. Al pH de la sangre venosa, el H2CO3 se disocia hacia bicarbonato y un protón. ANHIDRASA CARBÓNICA (Espontánea) Ácido carbónico La desoxihemoglobina une un protón por cada dos moléculas de O2 liberadas, lo que contribuye de manera significativa a la capacidad amortiguadora de la sangre. El pH un poco más bajo de los tejidos periféricos, auxiliado por la carbamación, estabiliza el estado T y, así, aumenta el aporte de O2. En los pulmones, el proceso se revierte. A medida que el O2 se une a la desoxihemoglobina, se liberan protones y se combinan con bicarbonato para formar ácido carbónico. La deshidratación del H2CO3, catalizada por la anhidrasa carbónica, forma CO2, que se exhala. De este modo, la unión de oxígeno impulsa la exhalación de CO2 (fig. 6-10). Este acoplamiento recíproco de unión de protón y O2 se denomina el efecto Bohr, el cual depende de interacciones cooperativas entre los hemes del tetrámero de hemoglobina. La mioglobina, un monómero, no muestra efecto Bohr. Los protones surgen a partir de la rotura de puentes salinos cuando se une O2 Los protones de los cuales depende el efecto Bohr surgen a partir de la rotura de puentes salinos durante el enlace de O2 a la hemoglobina en estado T. La conversión hacia el estado R oxigenado rompe puentes salinos que comprenden el residuo His 146 de la cadena β. Estructura T α1 β1 α2 O2 O2 O2 β2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 O2 Estructura R FIGURA 6-9 Transición desde la estructura T hacia la estructura R. En este modelo, puentes salinos (líneas rojas) que unen las subunidades en la estructura T se rompen de manera progresiva a medida que se agrega oxígeno, incluso los puentes salinos que todavía no se han roto se debilitan de manera progresiva (líneas de color rojo onduladas). La transición desde T hacia R no tiene lugar después de que un número fijo de moléculas de oxígeno se ha unido, sino que se hace más probable a medida que cada oxígeno sucesivo se une. La transición entre ambas estructuras está influida por protones, dióxido de carbono, cloruro y BPG; mientras más alta es su concentración, más oxígeno debe unirse para desencadenar la transición. Las moléculas oxigenadas por completo en la estructura T y las moléculas por completo desoxigenadas en la estructura R no se muestran porque son inestables. (Modificado y redibujado, con autorización, de Perutz MF: Hemoglobin structure and respiratory transport. Sci Am [Dec] 1978; 239:92.) 06 Bender.indd 47 27/11/09 13:34:01 48 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Exhalado His H21 2CO2 + 2H2O Anhidrasa carbónica Lis EF6 2H2CO3 2HCO3– + 2H+ Hb • 4O2 Tejidos periféricos BPG α-NH 3+ Val NA1 Val NA1 Lis EF6 4O2 2H+ + 2HCO3– 4O2 Hb • 2H+ (amortiguador) His H21 2H2CO3 Anhidrasa carbónica Pulmones 2CO2 + 2H2O Generado por el ciclo de Krebs FIGURA 6-10 El efecto Bohr. El dióxido de carbono generado en tejidos periféricos se combina con agua para formar ácido carbónico, el cual se disocia hacia protones y iones de bicarbonato. La desoxihemoglobina actúa como un amortiguador al unir protones y llevarlos a los pulmones. En estos últimos, la captación de oxígeno por la hemoglobina libera protones que se combinan con el ion bicarbonato; ello forma ácido carbónico, que cuando se deshidrata mediante la anhidrasa carbónica se convierte en dióxido de carbono, que entonces se exhala. La disociación subsiguiente de protones desde His 146 impulsa la conversión de bicarbonato hacia ácido carbónico (fig. 6-10). En el momento de la liberación de O2, vuelven a formarse la estructura T y sus puentes salinos. Este cambio en la conformación aumenta pKa de los residuos His 146 de la cadena β, que une protones. Al facilitar que vuelvan a formarse puentes salinos, un aumento de la concentración de protón aumenta la liberación de O2 desde hemoglobina oxigenada (estado R). Por el contrario, un aumento de la Po2 promueve la liberación de protón. El 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) estabiliza la estructura T de la hemoglobina Una Po2 baja en los tejidos periféricos promueve la síntesis de 2,3BPG en eritrocitos a partir del intermediario glucolítico 1,3-BPG. El tetrámero de hemoglobina une una molécula de BPG en la cavidad central formada por sus cuatro subunidades (fig. 6-4). Sin embargo, el espacio entre las hélices H de las cadenas β que revisten 06 Bender.indd 48 FIGURA 6-11 Modo de unión del 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) a la desoxihemoglobina humana. El BPG interactúa con tres grupos que tienen carga positiva sobre cada cadena β. (Basado en Arnone A: X-ray diffraction study of binding of 2,3-diphosphoglycerate to human deoxyhemoglobin. Nature 1972;237:146. Copyright © 1972. Adaptado con autorización de Macmillan Publishers Ltd.) la cavidad es lo bastante amplio como para dar cabida a BPG sólo cuando la hemoglobina se encuentra en el estado T. El BPG forma puentes salinos con los grupos amino terminal de ambas cadenas β por medio de Val NA1 y con Lis EF6 y His H21 (fig. 6-11). Por ende, el BPG estabiliza hemoglobina desoxigenada (estado T) mediante formar puentes salinos adicionales que deben romperse antes de la conversión al estado R. El residuo H21 de la subunidad γ de la HbF es Ser más que His. Dado que Ser no puede formar un puente salino, el BPG se une de manera más débil a la HbF que a la HbA. La estabilización inferior proporcionada al estado T por el BPG explica la mayor afinidad de la HbF por el O2 que la de la HbA. Adaptación a grandes alturas Los cambios fisiológicos que acompañan a la exposición prolongada a grandes altitudes incluyen un aumento del número de eritrocitos y de sus concentraciones de hemoglobina y de BPG. El BPG alto disminuye la afinidad de la HbA por el O2 (aumenta la P50), lo que incrementa la liberación de O2 en los tejidos. SE HAN IDENTIFICADO MUCHAS MUTACIONES QUE AFECTAN LAS HEMOGLOBINAS HUMANAS Las mutaciones en los genes que codifican para las subunidades α o β de la hemoglobina tienen el potencial de afectar su función biológica. Sin embargo, casi todas las más de 900 mutaciones genéticas conocidas que afectan las hemoglobinas del ser humano son en extremo raras y benignas; además de que no suscitan anormalidades clínicas. Cuando una mutación compromete la función biológica, el estado recibe el nombre de hemoglobinopatía. Se estima que más de 7% de la población mundial es portadora de trastornos de la he- 27/11/09 13:34:12 Capítulo 6 moglobina. En el URL http://globin.cse.psu.edu/ (Globin Gene Server) se proporciona información acerca de hemoglobinas normales y mutantes, y enlaces para las mismas. A continuación se describen ejemplos seleccionados. Metahemoglobina y hemoglobina M En la metahemoglobinemia, el hierro hem es férrico en lugar de ferroso, así que la metahemoglobina no puede unirse a O2 ni transportarlo. En circunstancias normales, la enzima metahemoglobina reductasa reduce el Fe3+ de la metahemoglobina hacia Fe2+. La metahemoglobina puede aumentar por oxidación del Fe2+ a Fe3+ como un efecto secundario de agentes como sulfonamidas, por hemoglobina M hereditaria, o como consecuencia de actividad reducida de la enzima metahemoglobina reductasa. En la hemoglobina M, la histidina F8 (His F8) ha quedado remplazada por la tirosina. El hierro de la HbM forma un complejo iónico apretado con el anión fenolato de la tirosina que estabiliza la forma Fe3+. En las variantes M de hemoglobina de cadena α, el equilibrio de R-T favorece el estado T. La afinidad por el oxígeno está reducida y no hay efecto Bohr. Las variantes M de hemoglobina de cadena β muestran conmutación R-T y, por ende, hay efecto Bohr. Las mutaciones que favorecen el estado R (p. ej., hemoglobina Chesapeake) aumentan la afinidad por el O2, de modo que estas hemoglobinas no suministran O2 adecuado a los tejidos periféricos. La hipoxia hística resultante lleva a policitemia, una concentración aumentada de eritrocitos. Hemoglobina S En la HbS, el aminoácido no polar valina ha remplazado al residuo de superficie polar Glu6 de la subunidad β, lo que genera un “parche pegajoso” (sticky patch) hidrofóbico sobre la superficie de la subunidad β tanto de la oxiHbS como de la desoxiHbS. Tanto la HbA como la HbS contienen un “parche pegajoso” complementario sobre sus superficies, que sólo queda expuesto en el estado T desoxige- Oxi A β α α β Desoxi A Desoxi A Oxi S Proteínas: mioglobina y hemoglobina 49 nado. De este modo, a Po2 baja, la desoxiHbS puede polimerizarse para formar fibras insolubles largas. La unión de la desoxiHbA termina la polimerización de fibra, puesto que la HbA carece del segundo parche pegajoso necesario para unir otra molécula de Hb (fig. 6-12). Estas fibras helicoidales torcidas producen una deformación falciforme característica del eritrocito, lo que le hace vulnerable a lisis en los intersticios de los sinusoides esplénicos. También causan múltiples efectos clínicos secundarios. Una Po2 baja, como la que ocurre a grandes altitudes, exacerba la tendencia a polimerizarse. Los tratamientos que están surgiendo para drepanocitosis comprenden inducir la expresión de HbF para inhibir la polimerización de HbS, trasplante de células madre y, en el futuro, terapia génica. INFERENCIAS BIOMÉDICAS Mioglobinuria Después de lesión por aplastamiento masivo, la mioglobina liberada a partir de fibras musculares dañadas tiñe la orina de color rojo oscuro. Es posible detectar mioglobina en plasma después de un infarto de miocardio, pero la valoración de enzimas séricas (cap. 7) proporciona un índice más sensible de lesión miocárdica. Anemias Son reducciones del número de eritrocitos o de la hemoglobina en sangre y en ocasiones reflejan síntesis alterada de hemoglobina (p. ej., en la deficiencia de hierro; cap. 50) o producción alterada de eritrocitos (p. ej., en la deficiencia de ácido fólico o de vitamina B12; cap. 44). El diagnóstico de anemias empieza con la medición espectroscópica de la concentración sanguínea de hemoglobina. Talasemias Son defectos genéticos que se producen por la falta parcial o total de una o más cadenas α o β de la hemoglobina. Se han identificado más Desoxi S Desoxi S FIGURA 6-12 Representación del parche pegajoso (▲) sobre la hemoglobina S y su “receptor” (Δ) sobre la desoxihemoglobina A y la desoxihemoglobina S. Las superficies complementarias permiten que la desoxihemoglobina S se polimerice hacia una estructura fibrosa, pero la presencia de desoxihemoglobina A terminará la polimerización al no proporcionar parches pegajosos. (Modificado y reproducido, con autorización, de Stryer L: Biochemistry, 4th ed. Freeman, 1995. Copyright © 1995 W. H. Freeman and Company.) 06 Bender.indd 49 27/11/09 13:34:17 50 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas de 750 mutaciones diferentes, pero sólo tres son comunes. Es posible que ocurra afección de la cadena α (talasemia α) o la cadena β (talasemia β). Un número en superíndice indica si una subunidad falta por completo (α0 o β0) o si su síntesis está reducida (α+ o β+). Salvo por el trasplante de médula ósea, el tratamiento es sintomático. Ciertas hemoglobinas mutantes se observan con frecuencia en muchas poblaciones, y un sujeto puede heredar más de un tipo. De este modo, los trastornos de la hemoglobina presentan un modelo complejo de fenotipos clínicos. El uso de sondas de DNA para su diagnóstico se considera en el capítulo 39. ■■ ■■ ■■ Hemoglobina glucosilada (HbA1c) Cuando la glucosa sanguínea entra a los eritrocitos, produce glucosilación del grupo є-amino de residuos lisina y los amino terminales de la hemoglobina. La fracción de hemoglobina glucosilada, que por lo normal se ubica alrededor de 5%, es proporcional a la concentración de glucosa en la sangre. Dado que la vida media de un eritrocito es de unos 60 días, la concentración de HbA1c refleja la concentración media de glucosa en sangre durante las seis a ocho semanas precedentes, de modo que la medición de HbA1c proporciona valiosa información para el manejo de la diabetes mellitus. RESUMEN ■■ ■■ ■■ ■■ ■■ La mioglobina es monomérica; la hemoglobina es un tetrámero de dos tipos de subunidad (α2β2 en la HbA). Pese a tener estructuras primarias diferentes, la mioglobina y las subunidades de la hemoglobina tienen estructuras secundaria y terciaria casi idénticas. El hem, un tetrapirrol cíclico, un poco plegado, en esencia planar, tiene un Fe2+ central enlazado a los cuatro átomos de nitrógeno del hem, a la histidina F8 y, en la oxiMb y la oxiHb, también a O2. La curva de unión a O2 para la mioglobina es hiperbólica, pero para la hemoglobina es sigmoidea, una consecuencia de interacciones cooperativas en el tetrámero. La cooperatividad aumenta la capacidad de la hemoglobina tanto para cargar O2 a la Po2 de los pulmones, como para liberar O2 a la Po2 de los tejidos. Las afinidades relativas de diferentes hemoglobinas por el oxígeno se expresan como P50, la Po2 que las satura 50% con O2. Las hemoglobinas se saturan a las presiones parciales de su órgano respiratorio respectivo, p. ej., el pulmón o la placenta. En el momento de la oxigenación de la hemoglobina, el hierro, la histidina F8 y residuos enlazados se mueven hacia el anillo hem. Los cambios de la conformación que acompañan a la oxigenación 06 Bender.indd 50 ■■ comprenden rotura de enlaces salinos y aflojamiento de la estructura cuaternaria, lo que facilita la unión de O2 adicional. El 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) en la cavidad central de la desoxiHb forma puentes salinos con las subunidades β que estabilizan a la desoxiHb. En el momento de la oxigenación, la cavidad central se contrae, hay extrusión de BPG y la estructura cuaternaria cambia su conformación. La hemoglobina también funciona en el transporte de CO2 y de protones desde los tejidos hacia los pulmones. La liberación de O2 desde la oxiHb en los tejidos se acompaña de captación de protones debido a disminución de pKa de residuos histidina. En la hemoglobina de células falciformes (HbS), la Val remplaza a la Glu β6 de la HbA, lo que crea un “parche pegajoso” que tiene un complemento sobre la desoxiHb (no así sobre la oxiHb). La desoxiHbS se polimeriza a concentraciones de O2 bajas, lo que forma fibras que producen deformación falciforme de los eritrocitos. Las talasemias α y β son anemias que sobrevienen por producción reducida de subunidades α y β de la HbA, respectivamente. REFERENCIAS Bettati S et al: Allosteric mechanism of haemoglobin: Rupture of salt-bridges raises the oxygen affinity of the T-structure. J Mol Biol 1998;281:581. Frauenfelder H, McMahon BH, Fenimore PW: Myoglobin: The hydrogen atom of biology and a paradigm of complexity. Proc Natl Acad Sci USA 2003;100:8615. Hardison RC et al: Databases of human hemoglobin variants and other resources at the globin gene server. Hemoglobin 2001;25:183. Lukin JA, Ho C: The structure-function relationship of hemoglobin in solution at atomic resolution. 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Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Las enzimas son polímeros biológicos que catalizan las reacciones químicas que hacen posible la vida tal como la conocemos. La pre­ sencia y el mantenimiento de un conjunto completo y equilibrado de enzimas son esenciales para la desintegración de nutrientes a fin de que proporcionen energía y bloques de construcción quími­ cos; el montaje de esos bloques de construcción hacia proteínas, DNA, membranas, células y tejidos, y la utilización de energía para impulsar la motilidad celular, la función neural y la contracción muscular. Con la excepción de las moléculas de RNA catalíticas, o ribozimas, las enzimas son proteínas. La capacidad para valorar la actividad de enzimas específicas en la sangre, otros líquidos hísti­ cos, o extractos celulares, ayuda en el diagnóstico y el pronóstico de enfermedad. Las deficiencias de la cantidad o la actividad catalítica de enzimas clave pueden sobrevenir por defectos genéticos, déficit nutricionales o toxinas. Las enzimas defectuosas pueden producirse por mutaciones genéticas o infección por virus o bacterias patóge­ nos (p. ej., Vibrio cholerae). Los científicos médicos abordan des­ equilibrios de la actividad de enzimas al utilizar fármacos para inhi­ bir enzimas específicas, y están investigando la terapia génica como un medio para corregir déficit de la concentración de enzimas o la función de las mismas. Además de servir como los catalizadores para todos los proce­ sos metabólicos, su impresionante actividad catalítica, especificidad para sustrato y estereoespecificidad permiten a las enzimas desem­ peñar funciones clave en otros procesos relacionados con la salud y el bienestar de seres humanos. La estereoespecificidad absoluta de enzimas es en particular valiosa para uso como catalizadores solu­ bles o inmovilizados para reacciones específicas en la síntesis de un fármaco o antibiótico. Las enzimas proteolíticas aumentan la capa­ cidad de los detergentes para eliminar suciedad y colorantes. Las enzimas tienen importancia en la producción de productos alimen­ ticios o el aumento del valor nutriente de los mismos tanto para se­ res humanos como para animales. Por ejemplo, la proteasa quimo­ sina (renina) se utiliza en la producción de quesos, mientras que la lactasa es empleada para eliminar lactosa de la leche y beneficiar a quienes sufren intolerancia a la lactosa por deficiencia de esta enzi­ ma hidrolítica (cap. 43). LAS ENZIMAS SON CATALIZADORES EFICACES Y MUY ESPECÍFICOS Las enzimas que catalizan la conversión de uno o más compuestos (sustratos) hacia uno o más compuestos diferentes (productos) au­ a 7 P í t u l o mentan los índices de la reacción no catalizada correspondiente por factores de al menos 106. Al igual que todos los catalizadores, las enzimas no se consumen ni se alteran de manera permanente como consecuencia de su participación en una reacción. Además de ser muy eficientes, las enzimas también son catali­ zadores en extremo selectivos. Al contrario de casi todos los cata­ lizadores usados en química sintética, las enzimas son específicas tanto para el tipo de reacción catalizada como para un sustrato úni­ co o un pequeño conjunto de sustratos estrechamente relacionados. Las enzimas también son catalizadores estereoespecíficos y de ma­ nera típica catalizan reacciones de sólo un estereoisómero de un compuesto dado (p. ej., azúcares D, mas no L; aminoácidos de L pero no D). Dado que se unen a sustratos por medio de al menos “tres puntos de fijación”, las enzimas incluso pueden convertir sus­ tratos no quirales en productos quirales. En la figura 7­1 se ilustra por qué la reducción catalizada por enzima del sustrato no quiral piruvato produce L­lactato (en lugar de una mezcla racémica de D­ y L­lactato). La especificidad extrema de los catalíticos enzima con­ fiere a las células vivas la capacidad para conducir de manera simul­ tánea y controlar de modo independiente una amplia gama de procesos químicos. LAS ENZIMAS SE CLASIFICAN POR EL TIPO DE REACCIÓN Los nombres de uso frecuente para casi todas las enzimas describen el tipo de reacción catalizada, seguido por el sufijo -asa. Así, por ejemplo, las deshidrogenasas eliminan átomos de hidrógeno, las proteasas hidrolizan proteínas y las isomerasas catalizan reordena­ mientos de la configuración. Los modificadores pueden preceder o seguir al nombre para indicar el sustrato (xantina oxidasa), la fuente de la enzima (ribonucleasa pancreática), su regulación (lipasa sensible a hormona) o una característica de su mecanismo de acción (cisteína proteasa). Cuando es necesario, se añaden designaciones alfanuméricas para identificar múltiples formas de una enzima (p. ej., RNA polimerasa III; proteína cinasa Cβ). A fin de resolver estas dificultades, la International Union of Biochemists (IUB) creó un sistema de nomenclatura de enzimas sin ambigüedad en el cual cada enzima tiene un nombre y número de código singular que identifican el tipo de reacción catalizada y los sustratos comprendidos; así, las enzimas se agrupan en seis clases: 1. Oxidorreductasas (catalizan oxidaciones y reducciones). 2. Transferasas (catalizan la transferencia de porciones, como grupos glucosilo, metilo o fosforilo). 51 07 Bender.indd 51 27/11/09 13:38:12 52 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 3. Hidrolasas (catalizan la división hidrolítica de C—C, C—O, C—N y otros enlaces). 4. Liasas (catalizan la división de C—C, C—O, C—N y otros enlaces mediante eliminación de átomo, dejando dobles enlaces). 5. Isomerasas (catalizan cambios geométricos o estructurales dentro de una molécula). 6. Ligasas (catalizan la unión de dos moléculas acopladas a la hidrólisis de ATP). A pesar de la claridad del sistema de la IUB, los nombres son largos y hasta cierto punto engorrosos, de modo que en general se sigue haciendo referencia a las enzimas por su nombre tradicional, aunque a veces ambiguo. La designación de la IUB para la hexocina­ sa ilustra tanto la claridad de su sistema como sus complejidades: el nombre que la IUB da a la hexocinasa es ATP:D­hexosa 6­fosfo­ transferasa E.C.2.7.1.1; el cual identifica a la hexocinasa como un miembro de la clase 2 (transferasas), subclase 7 (transferencia de un grupo fosforilo), subclase 1 (el alcohol es el aceptor del fosforilo), y “hexosa­6” indica que el alcohol fosforilado está en el carbono seis de una hexosa. Sin embargo, se le sigue llamando hexocinasa. LOS GRUPOS PROSTÉTICOS, LOS COFACTORES Y LAS COENZIMAS TIENEN FUNCIONES IMPORTANTES EN LA CATÁLISIS Muchas enzimas contienen pequeñas moléculas no proteínicas y io­ nes metálicos que participan de manera directa en la unión de sustra­ to o catálisis. Denominados grupos prostéticos, cofactores y coenzimas, éstos extienden el repertorio de capacidades catalíticas más allá de las proporcionadas por el número limitado de grupos funcionales presentes en las cadenas laterales aminoacilo de péptidos. Los grupos prostéticos están estrechamente integrados en la estructura de una enzima Los grupos prostéticos se distinguen por su incorporación estrecha y estable hacia la estructura de una proteína mediante fuerzas cova­ lentes o no covalentes. Los ejemplos son fosfato de piridoxal, flavina 4 3 1 1 3 2 Sitio de la enzima 2 Sustrato FIGURA 7-1 Representación planar de la “fijación de tres puntos” de un sustrato al sitio activo de una enzima. Aunque los átomos 1 y 4 son idénticos, una vez que los átomos 2 y 3 se unen a sus sitios complementarios en la enzima, sólo el átomo 1 puede unirse. De este modo, una vez unidos a una enzima, átomos al parecer idénticos pueden ser distinguibles, lo que permite un cambio químico estereoespecífico. 07 Bender.indd 52 mononucleótido (FMN), flavina adenina dinucleótido (FAD), piro­ fosfato de tiamina, biotina y los iones metálicos de Co, Cu, Mg, Mn y Zn. Los metales son los grupos prostéticos más comunes. Cerca de un tercio de todas las enzimas que contienen iones metálicos unidos de manera estrecha se llama metaloenzimas. Los iones metáli­ cos que participan en reacciones redox por lo general forman com­ plejos con grupos prostéticos como el hem (cap. 6) o agrupaciones de hierro­azufre (cap. 12). Los metales también pueden facilitar la unión y orientación de sustratos, la formación de enlaces covalentes con intermediarios de reacción (CO2+ en la coenzima B12), o inte­ ractuar con sustratos para hacerlos más electrofílicos (con pocos electrones) o nucleofílicos (ricos en electrones). Los cofactores se asocian de manera reversible con enzimas o sustratos Los cofactores desempeñan funciones similares a las de grupos prostéticos, pero se unen de una manera transitoria y disociable a la enzima o a un sustrato como ATP. Por ende, al contrario de los gru­ pos prostéticos asociados de manera estable, para que ocurra catáli­ sis debe haber cofactores en el medio que rodea a la enzima. Los cofactores más comunes también son iones metálicos. Las enzimas que requieren un cofactor ion metálico se llaman enzimas activadas por metal para distinguirlas de las metaloenzimas para las cua­ les los iones metálicos sirven como grupos prostéticos. Las coenzimas sirven como transbordadores de sustrato Las coenzimas sirven como transbordadores —o agentes de trans­ ferencia de grupo— reciclables, que transportan muchos sustratos desde su punto de generación hacia su punto de utilización. La aso­ ciación con la coenzima también estabiliza sustratos como átomos de hidrógeno o iones hidrido que son inestables en el ambiente acuoso de la célula. Otras porciones químicas transportadas por coenzimas son grupos metilo (folatos), grupos acilo (coenzima A) y oligosacáridos (dolicol). Muchas coenzimas, cofactores y grupos prostéticos son derivados de vitamina B Las vitaminas B hidrosolubles proporcionan componentes impor­ tantes de muchas coenzimas. Varias coenzimas contienen, además, las porciones adenina, ribosa y fosforilo de monofosfato de adeno­ sina (AMP) o difosfato de adenosina (ADP) (fig. 7­2). La nicotina­ mida es un componente de las coenzimas redox nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) y nicotinamida adenina dinucleóti­ do fosfato (NADP), mientras que la riboflavina es un componen­ te de las coenzimas redox FMN y FAD. El ácido pantoténico es un componente de la coenzima A acarreadora de grupo acilo. Como su pirofosfato, la tiamina participa en la descarboxilación de cetoáci­ dos α, y las coenzimas ácido fólico y cobalamina funcionan en el metabolismo de un carbono. LA CATÁLISIS OCURRE EN EL SITIO ACTIVO Una importante información de principios del siglo xx acerca de la catálisis enzimática provino de la observación de que la presencia de 27/11/09 13:38:15 CapíTuLO 7 Enzimas: mecanismo de acción Arg 145 O NH NH2 OH + N O NH2 H O O P O– N H OH O P N O H HO H OR Estructura del NAD+ y NADP+. Para NAD+, R = H; para NADP+, R = PO32−. sustratos hace a las enzimas más resistentes a los efectos desnaturali­ zantes de las temperaturas altas. Dicha observación llevó a Emil Fis­ cher a proponer que las enzimas y sus sustratos interactúan para for­ mar un complejo de enzima­sustrato (ES) cuya estabilidad térmica fue mayor que la de la enzima en sí. Este conocimiento impactó de manera profunda sobre la comprensión tanto de la naturaleza quími­ ca como de la conducta cinética (cap. 8) de la catálisis enzimática. Fischer razonó que la especificidad en extremo alta con la cual las enzimas reconocen sus sustratos cuando forman un complejo ES era análoga a la manera en la cual una cerradura mecánica distingue la llave apropiada. Esta “cerradura” enzimática recibe el nombre de sitio activo. En casi todas las enzimas dicho sitio adopta la forma de una hendidura o bolsa sobre la superficie de la enzima (figs. 5­6 y 5­8) o, para algunas enzimas multiméricas, en la interfaz entre subunidades. Como su nombre lo indica, el sitio activo es mucho más que tan sólo un sitio de reconocimiento para sustratos que se unen. Proporciona un ambiente tridimensional que protege a los sustratos contra solvente y facilita la catálisis. También se une a cua­ lesquiera cofactores y grupos prostéticos que la catálisis pudiera re­ querir. Dentro del sitio activo, las moléculas de sustrato están ali­ neadas en estrecha proximidad y en orientación óptima a los grupos funcionales de residuos peptidilo aminoacilo, cofactores y grupos prostéticos que se encargan de catalizar su transformación química hacia productos (fig. 7­3). LAS ENZIMAS EMPLEAN MÚLTIPLES MECANISMOS PARA FACILITAR LA CATÁLISIS Las enzimas usan diversas combinaciones de cuatro mecanismos generales para lograr notorio aumento catalítico de los índices de reacciones químicas. 07 Bender.indd 53 His 196 N N O C O NH2 H O C 2+ His 69 N CH2 O– FIGURA 7-2 C Glu 72 N O H H O NH2 O C Zn N C O CH2 H HO 53 C O H Tir 248 CH2 NH2 N N H FIGURA 7-3 Representación bidimensional de un sustrato dipéptido, glisil-tirosina, unido dentro del sitio activo de la carboxipeptidasa A. Catálisis por proximidad Para que las moléculas reaccionen, deben acercarse hasta ubicarse dentro de la distancia formadora de enlace de otra. Mientras más alta sea su concentración, con mayor frecuencia se encontrarán una con otra y mayor será el índice de su reacción. Cuando una enzima se une a moléculas de sustrato en su sitio activo, crea una región de concentración local alta de sustrato. Este ambiente también orienta las moléculas de sustrato de manera espacial en una posición ideal para que interactúen, lo que origina aumentos del índice de al me­ nos mil veces. Catálisis acidobásica Los grupos funcionales ionizables de cadenas laterales aminoacilo y (cuando están presentes) de grupos prostéticos, contribuyen a la ca­ tálisis al interactuar como ácidos o bases. La catálisis acidobásica puede ser específica o general; por “específica” se alude a protones (H3O+) o iones OH–. En la catálisis específica para ácido o específica para base, el índice de reacción es sensible a cambios de la con­ centración de protones, pero independiente de las concentraciones de otros ácidos (donadores de protón) o bases (aceptores de protón) presentes en solución o en el sitio activo. Se dice que las reacciones cuyos índices muestran capacidad de respuesta a todos los ácidos o bases presentes, están sujetas a catálisis por ácido general o por base general. Catálisis por tensión Las enzimas que catalizan reacciones -líticas que comprenden la ro­ tura de un enlace covalente típicamente se unen a sus sustratos en una conformación muy desfavorable para el enlace que sufrirá la división. Tal conformación imita la del intermediario de estado de transición, especie transitoria que representa la transición o el pun­ to medio en la transformación de sustratos en productos. La tensión resultante estira o deforma el enlace al cual se dirige, esto lo debilita y lo hace más vulnerable a división. Linus Pauling, laureado con el premio Nobel, fue el primero en sugerir una función para la estabi­ 27/11/09 13:38:19 54 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas E CH2NH2 CHO Ala E CHO E Ala Pir E Pir CH2NH2 CHO CH2NH2 CG E E CG Glu E CHO Glu FIGURA 7-4 Mecanismo de ping-pong para transaminación. E—CHO y E—CH2NH2 representan los complejos de enzima-piridoxal fosfato y enzima-piridoxamina, respectivamente. (Ala, alanina; Pir, piruvato; CG, α-cetoglutarato; Glu, glutamato.) lización de estado de transición como un mecanismo general me­ diante el cual las enzimas aceleran los índices de reacciones quími­ cas. Los químicos a menudo aprovechan el conocimiento del estado de transición de una reacción catalizada por enzima para diseñar y crear inhibidores de enzima más eficaces, llamados análogos de estado de transición, como farmacóforos potenciales. Catálisis covalente El proceso de catálisis covalente comprende la formación de un en­ lace covalente entre la enzima y uno o más sustratos. La enzima mo­ dificada después se convierte en un reactivo. La catálisis covalente introduce una nueva vía de reacción cuya energía de activación es más baja —y, por ende, es más rápida— que la vía de reacción en solución homogénea. Sin embargo, la modificación química de la enzima es transitoria; en el momento en que se completa la reac­ ción, la enzima vuelve a su estado no modificado original. De este modo, su función permanece catalítica. La catálisis covalente se ob­ serva con particular frecuencia entre enzimas que catalizan reaccio­ nes de transferencia de grupo. Los residuos sobre la enzima que participa en la catálisis covalente por lo general son cisteína o serina y, en ocasiones, histidina. La catálisis covalente a menudo sigue un mecanismo de ping­pong: uno en donde el primer sustrato es uni­ do y su producto se libera antes de la unión del segundo sustrato (fig. 7­4). A B A B A B FIGURA 7-5 Representación bidimensional del modelo de adaptación inducida de Koshland del sitio activo de una liasa. La unión del sustrato A—B induce cambios conformacionales en la enzima que alinea residuos catalíticos que participan en la catálisis y tensa el enlace entre A y B, lo que facilita su división. 07 Bender.indd 54 LOS SUSTRATOS INDUCEN CAMBIOS CONFORMACIONALES EN ENZIMAS Si bien el “modelo de cerradura y llave” de Fischer permitió com­ prender la especificidad extrema de interacciones entre enzima y sustrato, la rigidez implícita del sitio activo de la enzima no explicó los cambios dinámicos que acompañan a la catálisis. Esta desventaja fue abordada por el modelo de adaptación inducida de Daniel Kos­ hland, que declara que cuando los sustratos se aproximan y se unen a una enzima, inducen un cambio conformacional, una modifica­ ción análoga a colocar una mano (sustrato) dentro de un guante (enzima) (fig. 7­5). Un corolario es que la enzima induce cambios recíprocos en sus sustratos y aprovecha la energía de unión para fa­ cilitar la transformación de sustratos en productos. El modelo de adaptación inducida se ha confirmado de manera amplia por medio de estudios biofísicos de movimiento de enzimas durante unión a sustrato. LA PROTEASA DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (VIH) ILUSTRA LA CATÁLISIS ACIDOBÁSICA Las enzimas de la familia de la proteasa aspártica, que incluye la enzima digestiva pepsina, las catepsinas lisosómicas y la proteasa producida por el VIH, comparten un mecanismo catalítico común. La catálisis comprende dos residuos aspartilo conservados, que ac­ túan como catalíticos acidobásicos. En la primera etapa de la reac­ ción, un aspartato que está funcionando como una base general (Asp X, fig. 7­6) extrae un protón de una molécula de agua, lo que la hace más nucleofílica. El nucleófilo resultante después ataca al car­ bono carbonilo electrofílico del enlace peptídico establecido como objetivo para hidrólisis, lo que forma un intermediario de estado de transición tetraédrico. A continuación, un segundo aspartato (Asp Y, fig. 7­6) facilita la descomposición de este intermediario te­ traédrico al donar un protón al grupo amino producido por la rotu­ ra del enlace peptídico. Los dos diferentes aspartatos de sitio activo pueden actuar de manera simultánea como una base general o como un ácido general porque su ambiente inmediato favorece la ioniza­ ción de uno, no así del otro. LA QUIMOTRIPSINA Y LA FRUCTOSA-2,6-BISFOSFATASA ILUSTRAN LA CATÁLISIS COVALENTE Quimotripsina Si bien la catálisis por proteasas aspárticas involucra el ataque hidro­ lítico directo de agua sobre un enlace peptídico, la catálisis por la 27/11/09 13:38:23 CapíTuLO 7 O R′ N .. C R H R1 .. .. H O 1 1 O H O O CH2 Asp Y Asp X C H R2 O Ser 195 His 57 R1 O O H N H O N C H N N .. H Ser 195 C Asp 102 R His 57 O OH H H O NH2 R1 O O C C CH2 CH2 Asp Y Asp X 3 O H O N R′ N H + C C Ser 195 Asp 102 His 57 O H O R 4 O H O N N H C Asp 102 H O O Ser 195 His 57 O C C CH2 CH2 Asp Y Asp X FIGURA 7-6 Mecanismo para catálisis mediante una aspártico proteasa como la proteasa de VIH. Las flechas curvas indican direcciones de movimiento de electrón.  Aspartato X actúa como una base para activar una molécula de agua al sustraer un protón.  La molécula de agua activada ataca el enlace peptídico, lo que forma un intermediario tetraédrico transitorio.  El aspartato Y actúa como un ácido para facilitar el rompimiento del intermediario tetraédrico y la liberación de los productos de división al donar un protón al grupo amino recién formado. El transbordo subsiguiente del protón sobre Asp X a Asp Y restituye la proteasa a su estado inicial. serina proteasa quimotripsina comprende la formación previa de un intermediario de enzima acilo covalente. Un residuo serilo muy reactivo, la serina 195, participa en una red de transmisión de carga con histidina 57 y aspartato 102. Muy separados en la estructura primaria, en el sitio activo estos residuos están dentro de la distancia formadora de enlace de otro. Alineados en el orden Asp 102­His 57­Ser 195, constituyen una “red de transmisión de carga” que fun­ ciona como un “transbordador de protón”. La unión de sustrato inicia desviaciones de protón que, en efec­ to, transfieren el protón hidroxilo de Ser 195 a Asp 102 (fig. 7­7). La nucleofilicidad aumentada del oxígeno serilo facilita su ataque sobre el carbono carbonilo del enlace peptídico del sustrato, lo que forma un intermediario de acilo­enzima covalente. El protón en Asp 102 a continuación se transborda a través de His 57 hacia el grupo amino que es liberado cuando el enlace peptídico se divide. La porción del R2 O HO 3 R2 O N O H R2 O O R′ O N N Asp 102 2 O N O 55 C CH2 2 H O H C C 07 Bender.indd 55 O H O Enzimas: mecanismo de acción O H 5 O O H N N O C H O R2 Ser 195 Asp 102 His 57 HOOC 6 O O H N N H R2 O Ser 195 Asp 102 His 57 FIGURA 7-7 Catálisis mediante quimotripsina.  El sistema de transmisión de carga elimina un protón de Ser 195, lo que la hace un nucleófilo más potente.  La Ser 195 activada ataca el enlace peptídico y forma un intermediario tetraédrico transitorio.  La liberación del péptido amino terminal se facilita por donación de un protón al grupo amino recién formado por His 57 del sistema de transmisión de carga, lo que da un intermediario acilo-Ser 195.  His 57 y Asp 102 colaboran para activar una molécula de agua, que ataca el acilo-Ser 195, lo que forma un segundo intermediario tetraédrico.  El sistema de transmisión de carga dona un protón a Ser 195, lo que facilita el rompimiento de intermediario tetraédrico para liberar el péptido carboxilo terminal . péptido original con un grupo amino libre después deja el sitio acti­ vo y es remplazada por una molécula de agua. La red de transmisión de carga ahora activa la molécula de agua al extraer un protón a través de His 57 hacia Asp 102. El ion hidroxilo resultante ataca el intermediario acilo­enzima y un transbordador de protón inverso 27/11/09 13:38:28 56 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas regresa un protón a Ser 195, lo que restituye su estado original. Si bien se modifica durante el proceso de catálisis, la quimotripsina surge sin cambios en el momento en que se completa la reacción. La tripsina y la elastasa emplean un mecanismo catalítico similar, pero los números de los residuos en sus transbordadores de protón Ser­ His­Asp difieren. Fructosa-2,6-bisfosfatasa Es una enzima reguladora de la gluconeogénesis (cap. 20) y cataliza la liberación hidrolítica del fosfato en el carbono 2 de la fructosa­ 2,6­bisfosfato. En la figura 7­8 se ilustran las funciones de siete resi­ duos de sitio activo. La catálisis comprende una “tríada catalítica” de un residuo Glu y dos residuos His, y un intermediario fosfohistidilo covalente. LOS RESIDUOS CATALÍTICOS ESTÁN MUY CONSERVADOS Los miembros de una familia de enzimas como las aspártico o seri­ na proteasas emplean un mecanismo similar para catalizar un tipo de reacción común, pero actúan sobre diferentes sustratos. Casi to­ das las familias de enzimas surgieron por medio de eventos de du­ plicación de gen que crean una segunda copia del gen que codifica para una enzima particular. Las proteínas codificadas por los dos genes después pueden evolucionar de manera independiente para reconocer distintos sustratos, lo que da por resultado, por ejemplo, quimotripsina, que desdobla enlaces peptídicos en el lado carboxilo terminal de aminoácidos hidrofóbicos grandes, y tripsina, que des­ dobla enlaces peptídicos en el lado carboxilo terminal de aminoáci­ dos básicos. Se dice que las proteínas que divergieron desde un an­ cestro común son homólogas entre sí. La ascendencia común de enzimas puede inferirse a partir de la presencia de aminoácidos es­ pecíficos en la misma posición en cada miembro de la familia. Se dice que estos residuos son residuos conservados. En el cuadro 7­1 se ilustra la conservación estructural primaria de dos componentes de la red de transmisión de carga para varias serina proteasas. Entre los residuos más conservados figuran los que participan de manera directa en la catálisis. LAS ISOZIMAS SON FORMAS DE ENZIMA DISTINTAS QUE CATALIZAN LA MISMA REACCIÓN Los organismos superiores a menudo elaboran varias versiones de una enzima dada distintas desde el punto de vista físico, cada una de las cuales cataliza la misma reacción. Al igual que los miem­ bros de otras familias de proteína, estos catalíticos de proteína o isozimas surgen por medio de duplicación de gen. Las isozimas pue­ den mostrar diferencias sutiles de propiedades como sensibilidad a factores reguladores particulares (cap. 9) o afinidad de sustrato (p. ej., hexocinasa y glucocinasa) que las adaptan a tejidos o circuns­ tancias específicos. Algunas isozimas también pueden aumentar la supervivencia al proporcionar una copia de “respaldo” de una enzi­ ma esencial. 07 Bender.indd 56 Lis 356 + 6– P + His 392 Arg 257 P + 2– Arg 307 – O + + H P + Glu 327 His 258 1 – His 392 Arg 257 Arg 307 O H+ + P His 258 Lis 356 + O Glu 327 + H – + + H P + His 392 Arg 257 E-P • H2O 2 E-P • Fru-6-P E • Fru-2,6-P2 H Arg 352 + 6– 2– Glu 327 Lis 356 Arg 352 His 258 Lis 356 Arg 352 + + Arg 307 Glu 327 3 – + His 392 Arg 257 Arg 352 Arg 307 Pi + + His 258 4 E • Pi FIGURA 7-8 Catálisis mediante fructosa-2,6-bisfosfatasa. 1) Lis 356 y Arg 257, 307 y 352 estabilizan la carga negativa cuádruple del sustrato mediante interacciones entre una carga y otra. Glu 327 estabiliza la carga positiva sobre His 392. 2) El nucleófilo His 392 ataca el grupo fosforilo C-2 y lo transfiere hacia His 258, lo que forma un intermediario fosforilo-enzima. La fructosa-6-fosfato abandona la enzima. 3) Ataque nucleofílico por una molécula de agua, posiblemente asistido por Glu 327 que actúa como una base, forma fosfato inorgánico. 4) Se libera ortofosfato inorgánico a partir de Arg 257 y Arg 307. (Reproducido, con autorización, de Pilkis SJ, et al.: 6-Phosphofructo-2kinase/fructose-2,6-bisphosphatase: A metabolic signaling enzyme. Annu Rev Biochem 1995;64:799. © 1995 by Annual Reviews, www. annualreviews.org. Reimpreso con autorización.) LA ACTIVIDAD CATALÍTICA DE ENZIMAS FACILITA SU DETECCIÓN Las cantidades relativamente pequeñas de enzimas presentes en cé­ lulas complican la determinación de su presencia y concentración; sin embargo, la amplificación conferida por su capacidad para transformar con rapidez miles de moléculas de un sustrato específi­ co en producto confiere a cada enzima la capacidad para revelar su presencia. Las valoraciones de la actividad catalítica de enzimas a menudo se usan en laboratorios de investigación y clínicos. En con­ diciones apropiadas (cap. 8), el índice de la reacción catalítica que se está monitoreando es proporcional a la cantidad de enzima presen­ te, lo cual permite inferir su concentración. Enzimología de molécula única La sensibilidad limitada de las valoraciones enzimáticas tradiciona­ les exige el uso de un grupo grande —o conjunto— de moléculas de enzima para producir cantidades de producto medibles. Los datos obtenidos de este modo reflejan la capacidad catalítica promedio de moléculas individuales. Avances recientes en nanotecnología han hecho posible observar —por lo general, mediante microscopia de 27/11/09 13:38:32 CapíTuLO 7 57 Enzimas: mecanismo de acción CUADRO 7-1 Secuencias de aminoácidos en la vecindad de los sitios catalíticos de varias proteasas bovinas EnzIma Tripsina Secuencia alrededor de la serina S D S C Q D G S G G P Secuencia alrededor de la histidina H V V C S G K V V S A A H C Y K S G Quimotripsina A S S C M G D S G G P L V C K K N V V T A A H G G V T T Quimotripsina B S S C M G D S G G P L V C Q K N V V T A A H C G V T T Trombina D A C E G D S G G P F V M K S P V L T A A H C L L Y P Nota: Las regiones mostradas son las que están a ambos lados de los residuos serilo (S) e histidilo (H) del sitio catalítico. fluorescencia— catálisis por enzima y molécula de sustrato indivi­ duales. En consecuencia, los científicos ahora tienen la posibilidad de medir el índice de eventos catalíticos únicos y, en ocasiones, los pasos individuales en la catálisis por medio de un proceso llamado enzimología de molécula única (fig. 7­9). El descubrimiento de fármacos requiere valoraciones enzimáticas idóneas para investigación de “alta capacidad de procesamiento” Las enzimas constituyen una de las clases primarias de biomoléculas dirigidas para la creación de fármacos y otros agentes terapéuticos; por ejemplo, muchos antibióticos inhiben enzimas que son singula­ res para microbios patógenos. El descubrimiento de nuevos fárma­ cos se facilita mucho cuando es posible valorar un gran número de farmacóforos potenciales de una manera rápida y automatizada, proceso denominado investigación de alta capacidad de procesamiento. En esta última se aprovechan avances recientes en robótica, óptica, procesamiento de datos y microfluídica para efectuar y ana­ lizar muchos miles de valoraciones simultáneas de la actividad de una enzima dada. En los dispositivos de investigación de alta capa­ cidad de procesamiento de uso más frecuente se emplean volúme­ nes de 10 a 100 μl en placas de plástico con 96, 384 o 1 536 pozos, y equipo por completo automatizado capaz de surtir sustratos, coen­ zimas, enzimas e inhibidores potenciales en una multiplicidad de combinaciones y concentraciones. La investigación de alta capaci­ dad de procesamiento es ideal para analizar los muchos produc­ tos de química combinacional, la síntesis simultánea de grandes bibliotecas de compuestos químicos que contienen todas las combi­ naciones posibles de un conjunto de precursores químicos. Las va­ loraciones enzimáticas que producen un producto cromogénico o fluorescente son ideales, puesto que los detectores ópticos se elabo­ ran con facilidad mediante procedimientos de ingeniería para per­ mitir el análisis rápido de múltiples muestras. En la actualidad, el equipo complejo requerido para números en verdad grandes de va­ loraciones sólo está disponible en casas farmacéuticas, laboratorios patrocinados por gobiernos, y universidades de investigación. Su principal uso es el análisis de compuestos inhibitorios con potencial final para uso como fármacos (cap. 8). Inmunoanálisis ligado a enzima Es factible explotar la sensibilidad de las valoraciones enzimáticas con el fin de detectar proteínas que carecen de actividad catalítica. En el análisis inmunosorbente ligado a enzima (ELISA) se usan anticuerpos enlazados de manera covalente a una “enzima repor­ tera” como la fosfatasa alcalina o la peroxidasa de rábano picante 07 Bender.indd 57 1 2 3 4 FIGURA 7-9 Observación directa de eventos de división de DNA único catalizados mediante una endonucleasa de restricción. Moléculas de DNA inmovilizadas a cuentas (amarillo claro) se colocan en un chorro de amortiguador que fluye (flechas negras), lo que hace que adopten una conformación extendida. La división en uno de los sitios de restricción (anaranjado) por una endonucleasa lleva a un acortamiento de la molécula de DNA, que puede observarse de manera directa en un microscopio porque las bases de nucleótido en el DNA son fluorescentes. Aunque la endonucleasa (rojo) no muestra fluorescencia y, por ende, es invisible, la manera progresiva en la cual se acorta la molécula de DNA (1 → 4) revela que la endonucleasa se une al extremo libre de la molécula de DNA y se mueve a lo largo de ella de un sitio a otro. cuyos productos se detectan con facilidad, por lo general mediante la absorbancia de luz o por medio de fluorescencia. El suero u otras muestras biológicas que serán analizadas son colocados en una pla­ ca de microtitulación de plástico, donde las proteínas se adhieren a la superficie de plástico y quedan inmovilizadas. A continuación, cualesquiera áreas absorbentes restantes del pozo se “bloquean” al añadir una proteína no antigénica, como albúmina de suero bovino. Entonces se añade una solución de anticuerpo enlazado de manera covalente a una enzima reportera. Los anticuerpos se adhieren al antígeno inmovilizado y quedan inmovilizados. Después se elimi­ nan mediante lavado las moléculas de anticuerpo libres excesivas. A continuación se determinan la presencia y cantidad de anticuerpo unido al añadir el sustrato para la enzima reportera. Las deshidrogenasas dependientes de NAD(P)+ son valoradas de manera espectrofotométrica Las propiedades fisicoquímicas de los reactivos en una reacción catalizada por enzima dictan las opciones para la valoración de la 27/11/09 13:38:35 58 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 1.0 Glucosa ATP, Mg 2+ Hexocinasa 0.8 Densidad óptica ADP, Mg 2+ Glucosa 6-fosfato 0.6 NADP+ Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa 0.4 NADH NADPH + H+ 6-Fosfogluconolactona 0.2 FIGURA 7-11 NAD+ 0 200 250 300 350 400 Longitud de onda (nm) FIGURA 7-10 Espectros de absorción de NAD+ y NADH. Las densidades son para una solución de 44 mg/L en una célula con una trayectoria de luz de 1 cm. El NADP+ y NADPH tienen espectros análogos a los del NAD+ y NADH, respectivamente. actividad enzimática. En las valoraciones espectrofotométricas se explota la capacidad de un sustrato o producto para absorber luz. Las coenzimas reducidas NADH y NADPH, escritas como NAD(P) H, absorben luz a una longitud de onda de 340 nm, no así sus for­ mas oxidadas NAD(P)+ (fig. 7­10). Por ende, cuando el NAD(P)+ se reduce, la absorbancia a 340 nm aumenta en proporción con —y a un índice determinado por— la cantidad de NAD(P)H producida. Por el contrario, para una deshidrogenasa que cataliza la oxidación de NAD(P)H, se observará un decremento de la absorbancia a 340 nm. En cada caso, el índice de cambio de la densidad óptica a 340 nm será proporcional a la cantidad de enzima presente. Muchas enzimas son valoradas mediante acoplamiento a una deshidrogenasa Suele ser más difícil de efectuar la valoración de enzimas cuyas reacciones no se acompañan de un cambio de la absorbancia o de la fluorescencia. En ocasiones es posible transformar el producto o el sustrato restante en un compuesto que se detecta con mayor fa­ cilidad. En otros casos, antes de la medición, el producto de la re­ acción quizá tenga que separarse del sustrato que no ha reacciona­ do. Una estrategia alternativa es crear un sustrato sintético cuyo producto absorbe luz o muestra fluorescencia. El p­nitrofenilo fos­ fato, por ejemplo, es un sustrato artificial para ciertas fosfatasas y para quimotripsina, que no absorbe luz visible; sin embargo, des­ pués de la hidrólisis, el anión p­nitrofenilato resultante absorbe luz a 419 nm. Otro método bastante común es emplear una valoración “aco­ plada” (fig. 7­11); por lo común una deshidrogenasa cuyo sustrato es el producto de la enzima de interés se añade en exceso catalítico. El índice de aparición o desaparición de NAD(P)H depende enton­ ces del índice de la reacción enzimática a la cual se ha acoplado la deshidrogenasa. 07 Bender.indd 58 Valoración enzimática acoplada para la actividad de hexocinasa. La producción de glucosa-6-fosfato mediante la hexocinasa está acoplada a la oxidación de este producto por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en presencia de enzima añadida y NADP+. Cuando hay un exceso de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, el índice de formación de NADPH, que puede medirse a 340 nm, está regido por el índice de formación de glucosa-6-fosfato por la hexocinasa. EL ANÁLISIS DE CIERTAS ENZIMAS AYUDA AL DIAGNÓSTICO El análisis de enzimas en el plasma sanguíneo ha desempeñado una función fundamental en el diagnóstico de varios procesos morbosos. Muchas enzimas son constituyentes funcionales de la sangre; entre algunos ejemplos están seudocolinesterasa, lipoproteína lipasa, así como componentes de la cascada de eventos en la coagulación de la sangre y la disolución de coágulo. Otras enzimas se liberan hacia el plasma después de muerte o lesión celular; si bien estas últimas no desempeñan una función fisiológica en el plasma, su aparición o sus concentraciones son de utilidad en el diagnóstico y el pronóstico de enfermedades y lesiones que afectan tejidos específicos. Después de lesión, la concentración plasmática de una enzima liberada puede aumentar en etapas tempranas o tardías, y declinar de manera rápida o con lentitud. Las proteínas del citoplasma tienden a apare­ cer con mayor rapidez que las de organelos subcelulares. La rapidez con la cual las enzimas y otras proteínas son eliminadas del plasma varía con su susceptibilidad a proteólisis y permeabilidad a través de los glomérulos renales. El análisis cuantitativo de la actividad de las enzimas o de otras proteínas liberadas —por lo general en plasma o suero, aunque tam­ bién en orina o en diversas células— proporciona información res­ pecto del diagnóstico, el pronóstico y la respuesta al tratamiento. En el análisis de la actividad enzimática de manera característica se em­ plean valoraciones cinéticas estándar de índices de reacción inicial. De manera alternativa, las radioinmunovaloraciones (RIA) propor­ cionan cuantificación de la cantidad absoluta de una enzima o de proteína no catalítica. El cuadro 7­2 lista varias enzimas valiosas en el diagnóstico clínico; sin embargo, estas enzimas no son absoluta­ mente específicas para la enfermedad indicada. Por ejemplo, las concentraciones sanguíneas elevadas en fosfatasa ácida prostática a menudo se relacionan con cáncer prostático, pero también con cier­ tos cánceres y enfermedades no cancerosas. En consecuencia, los datos de la valoración enzimática deben considerarse junto con otros factores recabados por medio de un examen clínico integral. Los factores por considerar en la interpretación de los datos sobre enzimas comprenden la edad del paciente, el sexo, los antecedentes 27/11/09 13:38:40 CapíTuLO 7 CUADRO 7-2 Principales enzimas séricas usadas en el diagnóstico clínico Enzima sérica Principal uso diagnóstico Aminotransferasas Aspartato aminotransferasa (AST o SGOT) Infarto de miocardio Alanina aminotransferasa (ALT o SGPT) Hepatitis viral Amilasa Pancreatitis aguda Ceruloplasmina Degeneración hepatolenticular (enfermedad de Wilson) Creatina cinasa Trastornos musculares e infarto de miocardio γ-Glutamil transferasa Diversas enfermedades hepáticas Isozima 5 de la lactato deshidrogenasa Enfermedades hepáticas Lipasa Pancreatitis aguda Fosfatasa ácida Carcinoma metastásico de la próstata Fosfatasa alcalina (isozimas) Diversos trastornos óseos, enfermedades hepáticas obstructivas Nota: Muchas de las enzimas anteriores no son específicas para la enfermedad listada. personales no patológicos y patológicos, el posible consumo de fár­ macos o drogas, así como la sensibilidad y la especificidad diagnós­ tica de la prueba enzimática. Las enzimas ayudan al diagnóstico de infarto de miocardio (MI) Una enzima útil para enzimología diagnóstica debe ser hasta cierto punto específica para el tejido u órgano bajo estudio, aparecer en el plasma u otro líquido en un momento útil para el diagnóstico (la “ventana diagnóstica”) y prestarse a la valoración automatizada. Las enzimas que se utilizan para confirmar un MI ilustran el concepto Enzimas: mecanismo de acción de una “ventana diagnóstica” y proporcionan una perspectiva histó­ rica sobre el uso de diferentes enzimas para este propósito. La detección de una enzima debe ser posible en el transcurso de algunas horas, luego de un MI para confirmar un diagnóstico preli­ minar y permitir el inicio de terapia apropiada. De este modo, las enzimas que sólo aparecen en el plasma 12 h o más después de le­ sión, tienen utilidad limitada. Las primeras enzimas usadas para diagnosticar MI fueron la aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT) y lactato deshidrogenasa (LDH). Sin em­ bargo, la AST y la ALT resultaron no ser las idóneas, puesto que apa­ recen en el plasma con relativa lentitud y no son específicas para el músculo cardiaco. Si bien la lactato deshidrogenasa también se libera con relativa lentitud hacia el plasma, ofreció la ventaja de especifici­ dad hística como una consecuencia de su estructura cuaternaria. La LDH es una enzima tetramérica que consta de dos tipos de monómeros: H (de heart [corazón]) y M (de músculo) que se com­ binan para dar cinco isozimas de LDH: HHHH (I1), HHHM (I2), HHMM (I3), HMMM (I4) y MMMM (I5). La expresión específica para tejido de los genes que codifican para H y M determina las proporciones relativas de cada subunidad en diferentes tejidos. La isozima I1 predomina en el tejido cardiaco y la isozima I5 en el híga­ do; de modo que la lesión hística libera un modelo característico de isozimas de LDH que es posible separar mediante electroforesis y detectar usando una valoración acoplada (fig. 7­12). En la actuali­ dad, la LDH ha quedado suplantada como un marcador para MI por otras proteínas que aparecen con mayor rapidez en el plasma. La creatina cinasa (CK) tiene tres isozimas: CK­MM (músculo estriado), CK­BB (cerebro) y CK­MB (corazón y músculo estriado). La CK­MB tiene una ventana diagnóstica útil; aparece en el trans­ curso de 4 a 6 h luego de un MI, alcanza un máximo a las 24 h, y regresa a la basal hacia las 48 a 72 h. Al igual que para la LDH, las isozimas de CK individuales son separables mediante electroforesis, lo que facilita la detección. Hoy, en casi todos los laboratorios clínicos para el diagnóstico de MI, la CK se ha complementado mediante la troponina. Sin embargo, dado que la CK­MB también se libera en el momento de lesión de músculo estriado, la valoración de las concentraciones + (Lactato) SH2 Lactato deshidrogenasa NAD+ S 59 – (Piruvato) Corazón A Normal B Hígado C NADH + H+ PMS reducido PMS oxidado NBT oxidado (incoloro) NBT reducido (azul formazán) 5 4 3 2 1 FIGURA 7-12 Modelos normal y patológico de isozimas de lactato deshidrogenasa (LDH) en el suero humano. Las isozimas de LDH en el suero se separaron mediante electroforesis y fueron visualizadas usando el orden de reacción acoplado que se muestra a la izquierda (NBT, nitroazul tetrazolio; PMS, metilsulfato de fenazina). A la derecha se muestra el electroferograma coloreado. El modelo A es suero de un paciente con un infarto de miocardio; B es suero normal, y C es suero de un paciente con enfermedad hepática. Los números arábigos denotan isozimas de LDH específicas. 07 Bender.indd 59 27/11/09 13:38:44 60 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas EL DNA RECOMBINANTE CONSTITUYE UN IMPORTANTE RECURSO PARA ESTUDIAR ENZIMAS plasmáticas de CK aún se usa para evaluar trastornos del músculo estriado, como distrofia muscular de Duchenne. La troponina es un complejo de tres proteínas comprendidas en la contracción muscular en los músculos estriado y cardiaco, no así en el músculo liso (cap. 49). La medición inmunológica de las concentraciones plasmáticas de troponinas cardiacas I y T propor­ ciona indicadores sensibles y específicos de daño del músculo car­ diaco. Las concentraciones de troponina aumentan 2 a 6 h después de un MI y permanecen elevadas durante 4 a 10 días. Además del MI, otro tipo de daño del músculo cardiaco también aumenta las concentraciones séricas de troponina. Así que las troponinas cardia­ cas sirven como un marcador de todo el daño del músculo cardiaco. La búsqueda de marcadores adicionales para enfermedad cardiaca —como albúmina modificada por isquemia y la evaluación simultá­ nea de un espectro de marcadores diagnósticos por medio de pro­ teómica— aún es un área activa de investigación clínica. También es factible emplear enzimas en el laboratorio clínico como herramientas para determinar la concentración de metabolitos críticos; por ejemplo, la glucosa oxidasa suele utilizarse para medir la concentración plasmática de glucosa. Cada vez con mayor frecuencia se emplean enzimas como recursos para el tratamiento de lesión y enfermedad. El activador del plasminógeno hístico (tPA) o la estrep­ tocinasa se usan en el tratamiento de MI agudo, mientras que la trip­ sina ha sido utilizada en el tratamiento de fibrosis quística (cap. 54). La tecnología de DNA recombinante ha surgido como un recurso importante en el estudio de las enzimas; a fin de examinar la estruc­ tura y función de enzimas es necesario contar con muestras muy purificadas de las mismas. El aislamiento de una enzima individual, en particular si está presente en una concentración baja, de entre las miles de proteínas existentes en una célula, en ocasiones es una tarea en extremo difícil. Si el gen que codifica para la enzima de interés ha sido clonado, por lo general es posible producir grandes cantidades de su proteína codificada en Escherichia coli o levadura. Sin embar­ go, no todas las proteínas animales pueden expresarse de forma ac­ tiva en células microbianas ni los microbios realizan ciertas tareas de procesamiento postraduccional. Debido a ello, un gen puede ex­ presarse en sistemas de células animales en cultivo empleando el vector de expresión baculovirus para transformar células de insecto cultivadas. El capítulo 39 presenta más detalles respecto a las técni­ cas de DNA recombinante. LAS ENZIMAS FACILITAN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES GENÉTICAS E INFECCIOSAS La tecnología de DNA recombinante también puede usarse para crear proteínas modificadas que se purifican con facilidad median­ te cromatografía de afinidad. El gen de interés se enlaza a una se­ cuencia de oligonucleótido que codifica una extensión carboxilo o En muchas técnicas diagnósticas se aprovechan la especificidad y eficiencia de las enzimas que actúan sobre oligonucleótidos como el DNA (cap. 39). Las enzimas conocidas como endonucleasas de restricción, por ejemplo, dividen DNA bicatenario en sitios especifica­ dos por una secuencia de cuatro, seis o más pares de bases llamados sitios de restricción. La división de una muestra de DNA con una enzima de restricción produce un grupo característico de fragmen­ tos de DNA de menor tamaño (cap. 39). Las desviaciones del mode­ lo de producto normal, llamadas polimorfismos de longitud de fragmento de restricción (RFLp), ocurren si una mutación hace a un sitio de restricción irreconocible para su endonucleasa de res­ tricción cognada o, de manera alternativa, genera un nuevo sitio de reconocimiento. Los RFLP en la actualidad se utilizan para facilitar la detección prenatal de diversos trastornos hereditarios, entre ellos rasgo de células falciformes, talasemia β, fenilcetonuria en lactantes y enfermedad de Huntington. En la reacción en cadena de polimerasa (pCR) se emplean una DNA polimerasa termoestable y preparadores oligonucleó­ tido apropiados para producir miles de copias de un segmento defi­ nido de DNA a partir de una cantidad diminuta de material inicial (cap. 39). La PCR permite a los científicos médicos, biológicos y forenses detectar y caracterizar DNA que en un inicio está presente a cifras demasiado bajas como para realizar una detección directa. Además de investigar mutaciones genéticas, la PCR puede usarse para detectar e identificar agentes patógenos y parásitos como Trypanosoma cruzi, el agente causal de la enfermedad de Chagas, y Neisseria meningitidis, el agente causal de la meningitis bacteriana, por medio de la amplificación selectiva de su DNA. 07 Bender.indd 60 Las proteínas de fusión recombinantes se purifican mediante cromatografía de afinidad GST Enzima T Plásmido que codifica para GST con sitio de trombina (T) Enzima que codifica para DNA clonado Se ligan juntos GST T Enzima Se efectúa transfección de células, se añade el agente inductor y después se rompen las células Se aplica a la columna de afinidad a glutatión (GSH) Cuenta de sefarosa GSH GST T Enzima Se efectúa elución con GSH, se trata con trombina GSH GST T Enzima FIGURA 7-13 Uso de proteínas de fusión glutatión S-transferasa (GST) para purificar proteínas recombinantes (GSH, glutatión). 27/11/09 13:38:47 CapíTuLO 7 amino terminal para la proteína codificada. La proteína modificada resultante, llamada proteína de fusión, contiene un dominio hecho a la medida para interactuar con un soporte de afinidad específico. Un método popular es fijar un oligonucleótido que codifica para seis residuos histidina consecutivos. La proteína “marca de His” (o “cola de His”) que se expresa se une a soportes cromatográficos que contienen un ion metálico divalente inmovilizado como Ni2+. De manera alternativa, el dominio de unión a sustrato de la glutatión S­transferasa (GST) puede servir como una “marca de GST”. La fi­ gura 7­13 ilustra la purificación de una proteína de fusión GST usando un soporte de afinidad que contiene glutatión unido. Las proteínas de fusión a menudo también codifican para un sitio de división para una proteasa muy específica como la trombina en la región que enlaza las dos porciones de la proteína; esto permite la eliminación del dominio de fusión añadido después de purifica­ ción de afinidad. La mutagénesis dirigida hacia sitio proporciona información mecanicista Una vez que se ha establecido la capacidad para expresar una proteí­ na a partir de su gen clonado, cabe la posibilidad de emplear mutagénesis dirigida hacia sitio para cambiar residuos aminoacilo espe­ cíficos al alterar sus codones. Usado en combinación con análisis cinéticos y cristalografía con rayos X, este método facilita la identi­ ficación de las funciones específicas de residuos aminoacilo dados en la unión a sustrato y la catálisis. Por ejemplo, la inferencia de que un residuo aminoacilo particular funciona como un ácido general puede probarse mediante remplazarlo con un residuo aminoacilo incapaz de donar un protón. RESUMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ 07 Bender.indd 61 Las enzimas son catalizadores muy eficaces y en extremo específicos. Los grupos prostéticos orgánicos e inorgánicos, los cofactores y las coenzimas desempeñan funciones importantes en la catálisis. Las coenzimas, muchas de las cuales son derivados de vitaminas B, sirven como “transbordadores”. Los mecanismos catalíticos empleados por enzimas comprenden la introducción de tensión, la aproximación de reactivos, la catálisis acidobásica y la catálisis covalente. Los residuos aminoacilo que participan en la catálisis están muy conservados entre todas las clases de una enzima dada. Los sustratos y las enzimas inducen cambios conformacionales mutuos en el otro, que facilitan el reconocimiento de sustrato y la catálisis. La actividad catalítica de enzimas revela su presencia, facilita su detección y proporciona la base para inmunovaloraciones ligadas a enzima. Muchas enzimas pueden valorarse en el aspecto espectrofotométrico al acoplarlas a una deshidrogenasa dependiente de NAD(P)+. La química combinacional genera bibliotecas extensas de activadores e inhibidores de enzima potenciales que pueden probarse mediante investigación de alta capacidad de procesamiento. ■ ■ ■ ■ ■ Enzimas: mecanismo de acción 61 La valoración de enzimas plasmáticas ayuda al diagnóstico y el pronóstico, por ejemplo, de infarto de miocardio. Las endonucleasas de restricción facilitan el diagnóstico de enfermedades genéticas al revelar polimorfismos de longitud de fragmento de restricción. La mutagénesis dirigida hacia sitio, que se usa para cambiar residuos que se sospecha son importantes en la catálisis o la unión a sustrato, proporciona información acerca de los mecanismos de acción de enzima. Las proteínas de fusión recombinantes, como His marcada o enzimas de fusión de GST, se purifican con facilidad por medio de cromatografía de afinidad. A continuación, proteasas específicas pueden eliminar “marcas” de afinidad y generar la enzima natural. 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El análisis cinético puede revelar el número y orden de los pasos individuales mediante los cuales las enzimas transforman sustratos en productos. Junto con la mutagénesis dirigida hacia sitio y otras técnicas que sondean la estructura de proteínas, los análisis cinéticos revelan detalles del mecanismo catalítico de una enzima dada. La participación de las enzimas en casi todos los procesos fisiológicos hace de ellas los mejores objetivos para fármacos que curan o aminoran la enfermedad en seres humanos. La cinética enzimática aplicada representa el principal recurso mediante el cual los científicos identifican y caracterizan agentes terapéuticos que inhiben de manera selectiva los índices de procesos catalizados por enzima específicos. De este modo, la cinética enzimática desempeña una función crucial en el descubrimiento de fármacos y en la farmacodinámica comparativa, así como en la dilucidación del modo de acción de los fármacos. LAS REACCIONES QUÍMICAS SE DESCRIBEN USANDO ECUACIONES BALANCEADAS Una ecuación química balanceada lista las especies químicas iniciales (sustratos) presentes y las nuevas especies químicas (productos) formadas para una reacción química particular, todas en sus proporciones o estequiometría correctas. Por ejemplo, en la ecuación balanceada (1) que aparece a continuación se describe la reacción de una molécula, cada una, de sustratos A y B, para formar una molécula, cada una, de productos P y Q. A+B P+Q (1) Las dobles flechas indican reversibilidad, propiedad intrínseca de todas las reacciones químicas. De este modo, para la reacción (1), si A y B pueden formar P y Q, estos últimos también pueden formar A 8 P í t u l o y B. Por ende, la designación de un reactivo particular como “sustrato” o “producto” es un poco arbitraria porque los productos para una reacción descrita en una dirección son los sustratos para la reacción inversa. Sin embargo, el término “producto” a menudo se usa para designar los reactivos cuya formación es favorecida desde el punto de vista termodinámico. Las reacciones para las cuales los factores termodinámicos favorecen de manera significativa la formación de los productos hacia los cuales apunta la flecha, a menudo se representan con una flecha única como si fueran “irreversibles”: A+B →P+Q (2) También se usan flechas unidireccionales para describir reacciones en células vivas en las cuales los productos de la reacción (2) son consumidos de inmediato por una reacción subsiguiente catalizada por enzima. Por ende, la eliminación rápida del producto P o Q impide de manera efectiva la reacción inversa, lo que hace a la ecuación (2) irreversible desde el punto de vista funcional en condiciones fisiológicas. LOS CAMBIOS DE LA ENERGÍA LIBRE DETERMINAN LA DIRECCIÓN Y EL ESTADO DE EQUILIBRIO DE REACCIONES QUÍMICAS El cambio de energía libre de Gibbs ΔG (también llamado la energía libre o energía de Gibbs) describe tanto la dirección en la cual tenderá a proceder una reacción química, como las concentraciones de reactivos y productos que estarán presentes en equilibrio. La ΔG para una reacción química es igual a la suma de las energías libres de la formación de los productos de la reacción ΔGP menos la suma de las energías libres de formación de los sustratos ΔGs. ΔG0 denota el cambio de energía libre que acompaña a la transición desde el estado estándar, concentraciones uno molar de sustratos y productos, hasta el equilibrio. Un término bioquímico más útil es ΔG0 ʹ, que define el ΔG0 a un estado estándar de 10–7 M protones, pH de 7.0 (cap. 11). Si la energía libre de formación de los productos es más baja que la de los sustratos, los signos de ΔG0 y ΔG0ʹ serán negativos, lo que indica que la reacción como está escrita se favorece en la dirección de izquierda a derecha. Esas reacciones se denominan espontáneas. El signo y la magnitud del cambio de energía libre determinan qué tan lejos procederá la reacción. En la ecuación (3) se ilustra la relación entre la constante de equilibrio Keq y ΔG0, 62 08 Bender.indd 62 27/11/09 13:51:19 capítulo 8 ∆G0 = −RT ln K eq (3) donde R es la constante gaseosa (1.98 cal/mol°K u 8.31 J/mol°K) y T es la temperatura absoluta en grados Kelvin. Keq es igual al producto de las concentraciones de los productos de la reacción, cada uno elevado a la potencia de su estequiometría, dividido por el producto de los sustratos, cada uno elevado a la potencia de su estequiometría. Para la reacción A + B P+Q K eq = [P][Q] [A ][B] (4) A E + O– K eq = P [P] [A ]2 (5) (6) ΔG0 puede calcularse a partir de la ecuación (3) si se conocen las concentraciones molares de sustratos y productos presentes en equilibrio. Si ΔG0 es un número negativo, Keq será mayor que la unidad, y la concentración de productos en equilibrio excederá la de los sustratos. Si ΔG0 es positiva, Keq será menor que la unidad, y se favorecerá la formación de sustratos. Note que, dado que ΔG0 está en función exclusivamente de los estados inicial y final de las especies que están reaccionando, sólo puede proporcionar información acerca de la dirección y el estado de equilibrio de la reacción. ΔG0 es independiente del mecanismo de la reacción y, por ende, no proporciona información acerca de índices de reacciones. En consecuencia —y como se explica más adelante—, aunque una reacción puede tener una ΔG0 o ΔG0′ negativa grande, puede, sin embargo, tener lugar a un índice insignificante. LOS ÍNDICES DE REACCIONES ESTÁN DETERMINADOS POR SU ENERGÍA DE ACTIVACIÓN Las reacciones proceden por estados de transición El concepto de estado de transición es fundamental para entender las bases química y termodinámica de la catálisis. En la ecuación (7) se describe una reacción de transferencia de grupo en la cual un grupo E que está entrando desplaza a un grupo L que está saliendo, en un inicio fijo a R. E+R−L E−R+L (7) El resultado neto de este proceso es transferir el grupo R desde L hacia E. A la mitad del desplazamiento, el enlace entre R y L se ha debilitado pero todavía no se ha roto por completo, y el nuevo enlace entre E y R hasta ahora está formado de manera incompleta. Dicho intermediario transitorio —en el cual no existe sustrato ni producto libre— se denomina el estado de transición, E···R···l. Las líneas punteadas representan los enlaces “parciales” que están pasando por formación y rotura. En la figura 8-1 se proporciona una 08 Bender.indd 63 63 B δ− O δ+ δ− -o P O HO δ− O– E O O P -o OH O E O P y para la reacción (5) A+A Enzimas: cinética –O o– OH P + Q FIGURA 8-1 Formación de un intermediario de estado de transición durante una reacción química simple, A + B → P + Q. Se muestran tres etapas de una reacción química en la cual un grupo fosforilo se transfiere desde el grupo L que sale hacia el grupo E que entra. Arriba: el grupo E de que entra (A) se acerca al otro reactivo, L-fosfato (B). Note cómo los tres átomos de oxígeno enlazados por las líneas triangulares y el átomo de fósforo del grupo fosforilo forman una pirámide. Centro: a medida que E se aproxima al L-fosfato, empieza a formarse el nuevo enlace entre E y el grupo fosfato (línea punteada) a medida que el que enlaza L al grupo fosfato se debilita. Estos enlaces parcialmente formados están indicados por líneas punteadas. Abajo: la formación del nuevo producto, E-fosfato (P), ahora está completa a medida que el grupo L (Q) que sale, egresa. Note cómo la forma del grupo fosforilo difiere entre el estado de transición y el sustrato o producto. Vea la manera en que el fósforo y tres átomos de oxígeno que ocupan los cuatro ángulos de una pirámide en el sustrato y el producto se hacen coplanares, como se recalca por el triángulo, en el estado de transición. ilustración más detallada del estado de transición intermedio formado durante la transferencia de un grupo fosforilo. Cabe considerar que la reacción (7) consta de dos “reacciones parciales”; la primera corresponde a la formación (F) y la segunda a la descomposición (D) subsiguiente del intermediario de estado de transición. Al igual que para todas las reacciones, los cambios característicos de la energía libre, ΔGF y ΔGD se relacionan con cada reacción parcial. E+R−L E L ∆GF (8) E�R�L E − R + L ∆GD (9) E − R + L ∆G = ∆GF + ∆GD (10) E+R−L R Para la reacción general (10), ΔG es la suma de ΔGF y ΔGD. Al igual que para cualquier ecuación de dos términos, es imposible inferir a partir de ΔG el signo o la magnitud de ΔGF o ΔGD. Muchas reacciones comprenden múltiples estados de transición, cada uno con un cambio relacionado de energía libre. Para estas reacciones, la ΔG general representa la suma de todos los cambios de energía libre relacionados con la formación y la descomposición de todos los estados de transición. por ende, a partir de la 27/11/09 13:51:29 64 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas ΔG general es imposible inferir el número o el tipo de estados de transición a través de los cuales procede la reacción. Dicho de otra manera, la termodinámica general no dice nada acerca de la cinética. Concentración de reactivo La ΔGF define la energía de activación Al margen del signo o la magnitud de ΔG, la ΔGF para la mayoría de reacciones químicas tiene un signo positivo, de modo que la formación de intermediarios de estado de transición requiere superar barreras de energía. Por esta razón, la ΔGF para llegar a un estado de transición a menudo se denomina la energía de activación, Eact. La facilidad —y por ende, la frecuencia— con la cual esta barrera se supera se relaciona de manera inversa con Eact. De este modo, los parámetros termodinámicos que determinan la rapidez con la cual procede una reacción, son los valores ΔGF para la formación de los estados de transición a través de los cuales procede la reacción. Para una reacción simple, donde £ significa “proporcional a”, (11) Índice ∝ e −Eact / RT ende, la frecuencia con la cual chocan. Esta combinación de choques más frecuentes y más energéticos y productivos, aumenta el índice de reacción. La energía de activación para la reacción que está procediendo en la dirección opuesta a la trazada es igual a –ΔGD. La frecuencia con la cual las moléculas chocan es directamente proporcional a sus concentraciones. Para dos moléculas diferentes, A y B, la frecuencia con la cual chocan se duplicará si se duplica la concentración de A o de B. Si las concentraciones tanto de A como de B se duplican, la probabilidad de choque aumentará cuatro veces. Para una reacción química que procede a una temperatura constante que comprende una molécula, cada una, de A y B, (12) A+B →P el número de moléculas que poseen energía cinética suficiente para superar la barrera de energía de activación será una constante. Por ende, el número de choques con suficiente energía para producir el producto P será directamente proporcional al número de choques entre A y B y, así, y a sus concentraciones molares, denotadas por corchetes. Índice ∝ [A ][B] MUCHOS FACTORES AFECTAN EL ÍNDICE DE REACCIÓN (13) De modo similar, para la reacción representada por La teoría cinética —también llamada la teoría de la coalición— de cinética química declara que para que dos moléculas reaccionen, deben: 1) aproximarse dentro de la distancia formadora de enlace de la otra, o “chocar”, y 2) poseer suficiente energía cinética para vencer la barrera de energía para alcanzar el estado de transición. Por ende, resulta que cualquier cosa que aumente la frecuencia o energía de colisión entre sustratos aumentará el índice de la reacción en la cual participan. (14) A + 2B → P que también puede escribirse como (15) A+B+B →P el índice de expresión correspondiente es Índice ∝ [A ][B][B] (16) Índice ∝ [A ][B] (17) o Temperatura Aumentar la temperatura incrementa la energía cinética de las moléculas. El número total de moléculas cuya energía cinética excede la barrera de energía Eact (barra vertical) para la formación de productos aumenta desde temperaturas bajas (A), pasando por intermedias (B) hasta altas (C) (fig. 8-2). El aumento de la energía cinética de moléculas también aumenta su rapidez de movimiento y, por 2 Para el caso general, cuando n moléculas de A reaccionan con m moléculas de B, (18) nA + mB → P el índice de expresión es Índice ∝ [A ] [B] n Barrera de energía ∞ Número de moléculas A B 0 Energía cinética Remplazar el signo de proporcionalidad con signos de igual al introducir una constante de índice k característica de la reacción en estudio da las ecuaciones (20) y (21), en las cuales los números 1 y –1 se refieren a las reacciones hacia adelante e inversa, respectivamente. C ∞ FIGURA 8-2 La barrera de energía para reacciones químicas. (Véase la exposición en el texto.) 08 Bender.indd 64 (19) m Índice1 = k1 [A ] [B] (20) Índice −1 = k −1 [P ] (21) n m 27/11/09 13:51:46 capítulo 8 La suma de las proporciones molares de los reactivos define el orden cinético de la reacción. Considere la reacción (5). El coeficiente estequiométrico para el reactivo único, A, es dos. Por ende, el índice de producción de P es proporcional al cuadrado de [A], y se dice que la reacción es de segundo orden respecto del reactivo A. En este caso, la reacción general también es de segundo orden. Por ende, k1 se denomina una constante de índice de segundo orden. En la reacción (12) se describe una reacción de segundo orden simple entre dos reactivos diferentes, A y B. El coeficiente estequiométrico para cada reactivo es uno. Por ende, mientras que el orden general de la reacción es dos, se dice que es de primer orden respecto de A, y de primer orden respecto de B. En el laboratorio, el orden cinético de una reacción respecto de un reactivo particular, al cual se hace referencia como el reactivo variable o sustrato, puede determinarse al mantener la concentración de los otros reactivos a una concentración constante, o fija, en un gran exceso sobre el reactivo variable. En estas condiciones de seudoprimer orden, la concentración del (o los) reactivo(s) fijo(s) permanece casi constante. De este modo, el índice de reacción dependerá de manera exclusiva de la concentración del reactivo variable, a veces también llamado el reactivo limitante. Los conceptos de orden de reacción y condiciones de seudoprimer orden no sólo se aplican a reacciones químicas simples, sino también a reacciones catalizadas por enzimas. Keq es una proporción de constantes de índice Si bien todas las reacciones químicas son hasta cierto grado reversibles, en condiciones de equilibrio las concentraciones generales de reactivos y productos permanecen constantes. Por ende, en equilibrio, el índice de conversión de sustratos en productos, es igual al índice al cual los productos se convierten en sustratos. Índice1 = Índice −1 (22) k1 [A ] [B] = k −1[P ] (23) Por ende, n m Enzimas: cinética 65 4. El valor numérico de la constante de equilibrio Keq puede calcularse a partir de las concentraciones de sustratos y productos en equilibrio o a partir de la proporción k1/k–1. LA CINÉTICA DE LA CATÁLISIS ENZIMÁTICA Las enzimas disminuyen la barrera de energía de activación para una reacción Todas las enzimas aceleran los índices de reacción al disminuir la ΔGF para la formación de estados de transición. Sin embargo, pueden diferir en la manera en que esto se logra. Cuando el mecanismo o la secuencia de pasos químicos en el sitio activo es, en esencia, equivalente al que ocurre para la misma reacción que está procediendo en ausencia de un catalizador, el ambiente del sitio activo disminuye la ΔGF al estabilizar los intermediarios de estado de transición. En otras palabras, la enzima puede imaginarse como unida al intermediario de estado de transición (fig. 8-1) de manera más estrecha que a sustratos o productos. La estabilización puede comprender: 1) grupos acidobásicos colocados de manera idónea para transferir protones hacia o desde el intermediario de estado de transición, 2) grupos cargados o iones metálicos colocados de manera idónea, que estabilizan cargas que se están formando, o 3) la imposición de tensión estérica sobre sustratos de modo que su forma se aproxima a la del estado de transición (cap. 7). La proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) (fig. 7-6) ilustra la catálisis por una enzima que disminuye la barrera de activación al estabilizar un intermediario de estado de transición. La catálisis por enzimas que procede por medio de un mecanismo de reacción singular típicamente ocurre cuando el intermediario del estado de transición forma un enlace covalente con la enzima (catálisis covalente). El mecanismo catalítico de la serina proteasa quimotripsina (fig. 7-7) ilustra la manera en la cual una enzima utiliza catálisis covalente para proporcionar una vía de reacción única. y k1 k −1 = [P] [A ]n [B]m (24) La proporción de k1 a k–1 se denomina la constante de equilibrio Keq. Es necesario tener en mente las propiedades importantes que siguen de un sistema en equilibrio: 1. La constante de equilibrio es una proporción de las constantes de índice de reacción (no los índices de reacción). 2. En equilibrio, los índices de reacción (no las constantes de índice) de las reacciones hacia adelante y hacia atrás son iguales. 3. El equilibrio es un estado dinámico. Aunque no hay cambio neto de la concentración de sustratos o productos, moléculas individuales de sustrato y producto continuamente se están interconvirtiendo. 08 Bender.indd 65 LAS ENZIMAS NO AFECTAN LA Keq Si bien las enzimas pueden pasar por modificaciones transitorias durante el proceso de catálisis, siempre salen sin cambios cuando se completa la reacción. por ende, la presencia de una enzima no tiene efecto sobre la ΔG0 para la reacción general, que está en función sólo de los estados inicial y final de los reactivos. En la ecuación 25 se muestra la relación entre la constante de equilibrio para una reacción y el cambio de energía libre estándar para esa reacción: ∆G0 = −RT ln K eq (25) Este principio quizá se ilustra con mayor facilidad al incluir la presencia de la enzima (Enz) en el cálculo de la constante de equilibrio para una reacción catalizada por enzima: A + B + Enz P + Q + Enz (26) 27/11/09 13:51:53 66 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Dado que la enzima a ambos lados de las dobles flechas está presente en igual cantidad y forma idéntica, la expresión para la constante de equilibrio K eq [P][Q][Enz ] = [A ][B][Enz ] X 100 SH+ (27) E– % reduce a una a idéntica a la que procede para la reacción en ausencia de la enzima: 0 K eq = [P][Q] [A ][B] (28) Por ende, las enzimas carecen de efecto sobre Keq. MÚLTIPLES FACTORES INFLUYEN SOBRE LOS ÍNDICES DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA Temperatura El aumento de la temperatura incrementa el índice de reacciones tanto no catalizadas como catalizadas por enzima al aumentar la energía y la frecuencia de choque de las moléculas que están reaccionando. Sin embargo, la energía calorífica también aumenta la energía cinética de la enzima hasta un punto que excede la barrera de energía para alterar las interacciones no covalentes que mantienen su estructura tridimensional. La cadena polipeptídica empieza entonces a desdoblarse, o desnaturalizarse, con una pérdida acompañante de la actividad catalítica. El rango de temperatura en el cual una enzima mantiene una conformación estable, competente desde el punto de vista catalítico, depende de —y, por lo general, excede de manera moderada— la temperatura normal de las células en las cuales reside. Las enzimas de seres humanos, por lo común, muestran estabilidad a temperaturas de hasta 40 a 55°C. En contraste, las enzimas de los microorganismos termofílicos que residen en manantiales calientes volcánicos u orificios hidrotérmicos submarinos, pueden ser estables hasta 100°C o incluso más. El Q10, o coeficiente de temperatura, es el factor por el cual el índice de un proceso biológico aumenta para un incremento de 10°C de temperatura. Para las temperaturas en las cuales las enzimas son estables, los índices de casi todos los procesos biológicos típicamente se duplican para un aumento de temperatura de 10°C (Q10 = 2). Los cambios de los índices de reacciones catalizadas por enzima que acompañan a un aumento o disminución de la temperatura corporal constituyen una característica de supervivencia prominente para formas de vida “de sangre fría” como lagartos o peces, cuya temperatura corporal está dictada por el ambiente externo. Sin embargo, para mamíferos y otros organismos homeotérmicos, los cambios de los índices de reacción de enzimas con la temperatura sólo asumen importancia fisiológica en circunstancias como fiebre o hipotermia. Concentración de ion hidrógeno El índice de casi todas las reacciones catalizadas por enzima muestra una dependencia importante de la concentración de ion hidró- 08 Bender.indd 66 Bajo Alto pH FIGURA 8-3 Efecto del pH sobre la actividad de enzima. Considere, por ejemplo, una enzima con carga negativa (E–) que se une a un sustrato que tiene carga positiva (SH+). Se muestra la proporción (%) de SH+ [\\\] y de E– [///]como una función del pH. Sólo en el área cuadriculada tanto la enzima como el sustrato portan una carga apropiada. geno. Casi todas las enzimas intracelulares muestran actividad óptima a valores de pH entre 5 y 9. La relación entre actividad y concentración de ion hidrógeno (fig. 8-3) refleja el equilibrio entre la desnaturalización de enzima a pH alto o bajo, y los efectos sobre el estado cargado de la enzima, los sustratos o ambos. Para enzimas cuyo mecanismo comprende catálisis acidobásica, los residuos comprendidos deben estar en el estado de protonación apropiado para que la reacción proceda. La unión y el reconocimiento de moléculas de sustrato con grupos disociables típicamente también comprenden la formación de puentes salinos con la enzima. Los grupos cargados más frecuentes son grupos carboxilato (negativos) y aminas protonadas (positivos). La ganancia o pérdida de grupos cargados cruciales afecta de manera adversa la unión a sustrato y, así, retrasará o suprimirá la catálisis. LAS VALORACIONES DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA POR LO GENERAL MIDEN LA VELOCIDAD INICIAL En casi todas las mediciones de los índices de reacciones catalizadas por enzima se emplean periodos hasta cierto punto breves, condiciones que se aproximan a las condiciones de velocidad inicial. En estas condiciones, sólo se acumulan trazas de producto, lo que hace insignificante al índice de la reacción inversa. De este modo, la velocidad inicial (vi) de la reacción es en esencia la del índice de reacción hacia adelante. En las valoraciones de actividad enzimática casi siempre se emplea un exceso molar grande (103 a 107) de sustrato sobre enzima. En estas condiciones, vi es proporcional a la concentración de enzima. Por ende, la medición de la velocidad inicial permite estimar la cantidad de enzima presente en una muestra biológica. LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO AFECTA EL ÍNDICE DE REACCIÓN En lo que sigue, las reacciones enzimáticas se tratan como si sólo tuvieran un sustrato único y un producto único. Para enzimas con 27/11/09 13:51:59 capítulo 8 múltiples sustratos, los principios que se comentan a continuación se aplican con igual validez. Más aún, al emplear condiciones de seudoprimer orden (véase antes), los científicos pueden estudiar la dependencia del índice de reacción en un reactivo individual por medio de la selección apropiada de sustratos fijos y variables. En otras palabras, en condiciones de seudoprimer orden, la conducta de una enzima con múltiples sustratos imitará a la de otra que cuenta con un solo sustrato. Sin embargo, en estas circunstancias, la constante de índice observada estará en función de la constante de índice de k1 para la reacción, así como la concentración del (o los) sustrato(s) fijo(s). Para una enzima típica, a medida que la concentración de sustrato aumenta, vi se incrementa hasta que alcanza un valor máximo Vmáx (fig. 8-4). Cuando los aumentos adicionales de la concentración de sustrato no aumentan más la vi, se dice que la enzima está “saturada” con sustrato. Note que la forma de la curva que relaciona la actividad con la concentración de sustrato (fig. 8-4) es hiperbólica. A cualquier constante dada, sólo las moléculas de sustrato que se combinan con la enzima como un complejo ES pueden transformarse en producto. En segundo lugar, la constante de equilibrio para la formación del complejo de enzima-sustrato no es infinitamente grande. Por ende, aun cuando el sustrato está presente en exceso (puntos A y B de la fig. 8-5), sólo una fracción de la enzima puede estar presente como un complejo ES. Por tanto, de los puntos A o B, aumentar o disminuir [S] aumentará o disminuirá el número de complejos ES con un cambio correspondiente de vi. En el punto C (fig. 8-5), en esencia toda la enzima está presente como el complejo ES. Dado que no queda enzima libre disponible para formar ES, Enzimas: cinética 67 los aumentos adicionales de [S] no pueden aumentar el índice de la reacción. En estas condiciones de saturación, la vi depende sólo de —y, de este modo, está limitada por— la rapidez con la cual el producto se disocia de la enzima de modo que logre combinarse con más sustrato. LAS ECUACIONES DE MICHAELISMENTEN Y DE HILL MODELAN LOS EFECTOS DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO La ecuación de Michaelis-Menten La ecuación de Michaelis-Menten (29) ilustra en términos matemáticos la relación entre la velocidad de reacción inicial vi y la concentración de sustrato [S], que se muestra de manera gráfica en la figura 8-4. vi = Vmáx [S] (29) K m + [S ] la constante Km de Michaelis es la concentración de sustrato a la cual vi es la mitad de la velocidad máxima (Vmáx/2) alcanzable a una concentración particular de enzima. De este modo, Km tiene las dimensiones de la concentración de sustrato. La dependencia de la velocidad de reacción inicial de [S] y Km puede ilustrarse al evaluar la ecuación de Michaelis-Menten en tres condiciones. 1. Cuando [S] es mucho menor que Km (punto A en las figs. 8-4 y 8-5), el término Km + [S] es en esencia igual a la Km. El remplazo de Km + [S] con Km reduce la ecuación (29) a máx máx vi = máx Vmáx [S] K m + [S ] vi ≈ Vmáx [S] Km  Vmáx  ≈  [S ]  Km  (30) donde ≈ significa “aproximadamente igual a”. Dado que tanto Vmáx como Km son constantes, su proporción es una constante. En otras palabras, cuando [S] está muy por debajo de Km, vi es proporcional a k[S]. Por ende, la velocidad de reacción inicial es directamente proporcional a [S]. FIGURA 8-4 Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad inicial de una reacción catalizada por enzima. =S =E A B C FIGURA 8-5 Representación de una enzima en presencia de una concentración de sustrato que está por debajo de Km (A), a una concentración igual a Km (B), y a una concentración bastante por arriba de Km (C). Los puntos A, B y C corresponden a esos puntos en la figura 8-4. 08 Bender.indd 67 27/11/09 13:52:06 68 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 2. Cuando [S] es mucho mayor que Km (punto C en las figs. 8-4 y 8-5), el término Km + [S] es en esencia igual a [S]. Remplazar Km + [S] por [S] reduce la ecuación (29) a vi = Vmáx [S] vi ≈ K m + [S ] Vmáx [S] [S ] ≈ Vmáx (31) De este modo, cuando [S] excede con mucho a Km, la velocidad de reacción es máxima (Vmáx) y no está afectada por aumentos adicionales de la concentración de sustrato. 3. Cuando [S] = Km (punto B en las figs. 8-4 y 8-5). vi = Vmáx [S] = K m + [S ] Vmáx [S] 2 [S ] = Vmáx 2 (32) La ecuación (32) declara que cuando [S] es igual a Km, la velocidad inicial es de la mitad del máximo. La ecuación (32) también revela que Km es —y puede determinarse la manera experimental a partir de— la concentración de sustrato a la cual la velocidad inicial es la mitad del máximo. Una forma lineal de la ecuación de Michaelis-Menten se usa para determinar Km y Vmáx La medición directa del valor numérico de Vmáx, y, por consiguiente, el cálculo de Km, a menudo requiere concentraciones altas poco prácticas de sustrato para alcanzar condiciones de saturación. Una forma lineal de la ecuación de Michaelis-Menten evita esta dificultad y permite extrapolar Vmáx y Km desde de datos de velocidad inicial obtenidos a concentraciones de sustrato menores que las que producen saturación. Se empieza con la ecuación (29), vi = Vmáx [S] K m + [S ] (29) vi = K m + [S ] Vmáx [S] (33) se factoriza 1 vi [S ] Vmáx [S] (34)  Km  1 1 =  +  Vmáx  Vmáx  [S] (35) = Km Vmáx [S] + y se simplifica 1 vi La ecuación (35) es la ecuación para una línea recta y = ax + b, donde y = 1/vi y x = 1/[S]. Un gráfico de 1/vi en el eje y, expresado como una función de 1/[S] en el eje x, da una línea recta cuya intersección en el eje y se define como 1/Vmáx y la pendiente se define como Km/Vmáx. Ese gráfico se conoce como gráfico del doble recíproco o de lineweaver-Burk (fig. 8-6). Establecer el término y de la ecuación (36) igual a cero y resolver para x, revela que la intersección x es –1/Km. 08 Bender.indd 68 0 = ax + b; por tanto, x = −b a = −1 Km (36) De este modo, Km se calcula con mayor facilidad a partir de la intersección x negativa. La mayor virtud del gráfico de Lineweaver-Burk reside en la facilidad con la cual puede usarse para determinar los mecanismos cinéticos de inhibidores de enzima (véase más adelante). Sin embargo, al usar un gráfico del doble recíproco para determinar constantes cinéticas, es importante evitar la introducción de sesgo por la agrupación de datos a valores bajos de 1/[S]. Para lograr esto, se prepara una solución de sustrato cuya dilución hacia una valoración producirá la concentración deseada máxima de sustrato. Ahora se utiliza el mismo volumen de soluciones preparadas al diluir la solución madre por factores de 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, etc. Los datos entonces caerán en el eje 1/[S] a intervalos de 1, 2, 3, 4, 5, etc. De manera alternativa, para minimizar la agrupación puede usarse un gráfico del recíproco único, como el de Eadie-Hofstee (vi contra vi/[S]) o de Hanes-Woolf ([S]/vi contra [S]). La constante catalítica, kcat se invierte 1 FIGURA 8-6 Gráfico del doble recíproco o de Lineweaver-Burk de 1/vi en contraposición con 1/[S] usado para evaluar la Km y Vmáx. Es factible usar varios parámetros para comparar la actividad relativa de diferentes enzimas o de diferentes preparaciones de la misma enzima. La actividad de preparaciones de enzima impuras por lo general se expresa como actividad específica (Vmáx dividida entre la concentración de proteína). Para una enzima homogénea es posible calcular su número de recambio (Vmáx dividida entre los mol de enzima presentes). Sin embargo, si se conoce el número de sitios activos presentes, la actividad catalítica de una enzima homogénea se expresa mejor como su constante catalítica, kcat (Vmáx dividida entre el número de sitios activos, St). kcat = Vmáx St (37) Dado que las unidades de concentración se anulan, las unidades de kcat son tiempo recíproco. Eficiencia catalítica, kcat/Km ¿Mediante qué medida se deben cuantificar y comparar la eficiencia de enzimas diferentes, sustratos diferentes para una enzima dada, y la eficiencia con la cual una enzima cataliza una reacción en las 27/11/09 13:52:20 capítulo 8 direcciones hacia adelante y hacia atrás? Si bien la capacidad máxima de una enzima dada para convertir sustrato en producto es importante, los beneficios de una kcat alta sólo pueden obtenerse si la Km es suficientemente baja. De este modo, la eficiencia catalítica de enzimas se expresa mejor en términos de la proporción de estas dos constantes cinéticas, kcat/Km. Para ciertas enzimas, una vez que el sustrato se une al sitio activo, se convierte en producto y se libera con tanta rapidez como para hacer a tales eventos efectivamente instantáneos. Para estos catalíticos tan eficientes, el paso limitante es la formación del complejo ES. Se dice que esas enzimas están limitadas por difusión, o que son perfectas desde el punto de vista catalítico, puesto que el índice de catálisis más rápido posible está determinado por el índice al cual las moléculas se mueven o difunden a través de la solución. Los ejemplos de enzimas para las cuales kcat/Km se aproxima al límite de difusión de 108–109 M–1s–1 incluyen la triosafosfato isomerasa, anhidrasa carbónica, acetilcolinesterasa y adenosina desaminasa. La naturaleza a menudo sortea las limitaciones sobre kcat/Km impuestas por la difusión al montar grupos de enzimas relacionadas para formar complejos de múltiples enzimas. Las relaciones geométricas de las enzimas en estos complejos son tales que no se permite que los sustratos y productos se difundan hacia la solución de volumen sino hasta que el último paso en la secuencia de pasos catalíticos esté completo. La ácido graso sintetasa extiende este concepto un paso más allá al fijar de manera covalente el sustrato a una cadena de biotina que rota un sitio activo a otro dentro del complejo hasta que se completa la síntesis de una molécula de ácido palmítico (cap. 23). La Km puede aproximar una constante de unión La afinidad de una enzima por su sustrato es la inversa de la constante de disociación Kd para la disociación del complejo de enzimasustrato ES. k 1   → ES E+S←  k −1 Kd = k −1 (38) Enzimas: cinética 69 y [S ] ≈ k1 k −1 = Kd (43) Por ende, 1/Km sólo aproxima 1/Kd en condiciones en las cuales la asociación y disociación del complejo ES son rápidas en comparación con la catálisis. Para las muchas reacciones catalizadas por enzima para las cuales k–1 + k2 no es aproximadamente igual a k–1, 1/Km subestimará 1/Kd. La ecuación de Hill describe la conducta de enzimas que muestran unión cooperativa de sustrato Si bien casi todas las enzimas despliegan la cinética de saturación simple descrita en la figura 8-4, y se describen de manera adecuada mediante la expresión de Michaelis-Menten, algunas se unen a sus sustratos de una manera cooperativa, análoga a la unión de oxígeno por la hemoglobina (cap. 6). La conducta cooperativa es una propiedad exclusiva de enzimas multiméricas que unen sustrato en múltiples sitios. Para enzimas que despliegan cooperación positiva en la unión de sustrato, la forma de la curva que relaciona los cambios en vi con los cambios en [S] es sigmoidea (fig. 8-7). Ni la expresión de Michaelis-Menten ni sus gráficos derivados pueden usarse para evaluar cinética cooperativa. Por ende, los enzimólogos emplean una representación gráfica de la ecuación de Hill que en su origen fue obtenida para describir la unión cooperativa de O2 por la hemoglobina. La ecuación (44) representa la ecuación de Hill dispuesta en una forma que predice una línea recta, donde k′ es una constante compleja. log v i Vmáx − v i = n log [S] − log k ′ (44) La ecuación (44) declara que cuando [S] es bajo en comparación con k′, la velocidad de reacción inicial aumenta como la enésima potencia de [S]. (39) k1 Dicho de otra manera, mientras menor es la tendencia a disociarse de la enzima y su sustrato, mayor es la afinidad de la enzima por su sustrato. Si bien la constante de Michaelis Km a menudo aproxima la constante de disociación Kd, esto de ningún modo siempre es así. Para una reacción catalizada por enzima típica, k 1 2   → ES k E+S← → E+P  k −1 (40) ∞ vi el valor de [S] que da vi = Vmáx/2 es [S ] = k −1 + k 2 k1 = Km (41) 0 Cuando k–1 >> k2, entonces k −1 + k 2 ≈ k −1 08 Bender.indd 69 (42) [S] ∞ FIGURA 8-7 Representación de una cinética de saturación de sustrato sigmoidea. 27/11/09 13:52:30 70 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Los inhibidores competitivos típicamente semejan sustratos vi 1 Pendiente = n Log 0 –1 –4 S50 –3 Log [S] FIGURA 8-8 Representación gráfica de una forma lineal de la ecuación de Hill usada para evaluar S50, la concentración de sustrato que produce la mitad de la velocidad máxima, y el grado de cooperación n. Un gráfico de log vi/(Vmáx − vi) contra log[S] da una línea recta (fig. 8-8), donde la pendiente de la línea n es el coeficiente de Hill, y un parámetro empírico cuyo valor está en función del número, la clase y la fuerza de las interacciones de los sitios de unión a sustrato múltiples sobre la enzima. Cuando n = 1, todos los sitios de unión se comportan de manera independiente, y se observa conducta cinética de Michaelis-Menten simple. Si n es de más de 1, se dice que la enzima muestra cooperación positiva. La unión de sustrato a un sitio aumenta entonces la afinidad de los sitios restantes para unión a sulfato adicional. Mientras mayor es el valor para n, más alto es el grado de cooperación, y más sigmoideo será el gráfico de vi contra [S]. Una perpendicular trazada desde el punto donde el término y log vi/(Vmáx − vi) es cero interseca el eje x en una concentración de sustrato llamada S50, la concentración de sustrato que da por resultado la mitad de la velocidad máxima. De este modo, S50 es análoga a la P50 para la unión de oxígeno a hemoglobina (cap. 6). EL ANÁLISIS CINÉTICO DISTINGUE ENTRE INHIBICIÓN COMPETITIVA Y NO COMPETITIVA Los inhibidores de las actividades catalíticas de enzimas proporcionan tanto agentes farmacológicos como recursos de investigación para estudiar el mecanismo de acción de las enzimas. La fuerza de la interacción entre un inhibidor y una enzima depende de las fuerzas importantes en la estructura de proteína y la unión de ligando (enlaces de hidrógeno, interacciones electrostáticas, interacciones hidrofóbicas y fuerzas de van der Waals; cap. 5). Los inhibidores pueden clasificarse con base en su sitio de acción en la enzima, en si producen modificación química de la enzima, o en los parámetros de cinética sobre los cuales influyen. Los compuestos que imitan el estado de transición de una reacción catalizada por enzima (análogos de estado de transición) o que aprovechan la maquinaria catalítica de una enzima (inhibidores basados en mecanismo) pueden ser inhibidores en particular potentes. Desde el punto de vista cinético, se distinguen dos clases de inhibidores con base en si el aumento de la concentración de sustrato supera o no la inhibición. 08 Bender.indd 70 Los efectos de los inhibidores competitivos pueden superarse al aumentar la concentración de sustrato. Con mayor frecuencia, la inhibición competitiva del inhibidor (I) se une a la porción de unión a sustrato del sitio activo, lo que bloquea el acceso por el sustrato. Por ende, las estructuras de casi todos los inhibidores competitivos clásicos tienden a asemejarse a las estructuras de un sustrato y, así, se llaman análogos de sustrato. La inhibición de la enzima succinato deshidrogenasa por el malonato ilustra la inhibición competitiva por un análogo de sustrato. La succinato deshidrogenasa cataliza la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada uno de los dos carbonos metileno del succinato (fig. 8-9). Tanto el succinato como su análogo estructural malonato (−OOC—CH2—COO−) pueden unirse al sitio activo de la succinato deshidrogenasa, lo que forma un complejo ES o uno EI, respectivamente. Sin embargo, dado que el malonato sólo contiene un átomo de metileno, no puede pasar por deshidrogenación. La formación y disociación del complejo EI es un proceso dinámico descrito por k 1   → E+I E−I ←  k (45) −1 para la cual la constante de equilibrio Ki es Ki = [E ][I] = [E − I] ki (46) k −i En efecto, un inhibidor competitivo actúa al disminuir el número de moléculas de enzima libres disponibles para unión a sustrato, esto es, para formar ES y, así, finalmente para formar producto, como se describe a continuación: Un inhibidor competitivo y sustrato ejercen efectos recíprocos sobre la concentración de los complejos EI y ES. Dado que la formación de complejos ES elimina la enzima libre disponible para combinarse con el inhibidor, el aumento de [S] disminuye la concentración del complejo EI y aumenta la velocidad de reacción. El grado al cual [S] debe aumentarse para superar por completo la inhibición depende de la concentración del inhibidor presente, su afinidad por la enzima, Ki, y la afinidad, Km, de la enzima por su sustrato. H H C COO– OOC C H – H Succinato FIGURA 8-9 H C COO– OOC C H –2H Succinato deshidrogenasa – Fumarato Reacción de succinato deshidrogenasa. 27/11/09 13:52:38 capítulo 8 Los gráficos del doble recíproco facilitan la evaluación de inhibidores Los gráficos del doble recíproco distinguen entre inhibidores competitivos y no competitivos, y simplifican la evaluación de constantes de inhibición. La vi se determina a varias concentraciones de sustrato tanto en presencia como en ausencia de inhibidor. Para la inhibición competitiva clásica, las líneas que conectan los puntos experimentales convergen en el eje y (fig. 8-10). Dado que la intersección y es igual a 1/Vmáx, este modelo indica que cuando 1/[S] se aproxima a 0, vi es independiente de la presencia de inhibidor. Sin embargo, note que la intersección en el eje x no varía con la concentración del inhibidor y que puesto que –1/K′m es de menor tamaño que 1/Km, K′m (la “Km aparente”), se hace más grande en presencia de concentraciones cada vez mayores del inhibidor. De este modo, un inhibidor competitivo no tiene efecto sobre Vmáx pero aumenta K′m, la Km aparente para el sustrato. Para la inhibición competitiva simple, la intersección en el eje x es x = −1  [I] 1 +  Km  Ki  (47) Una vez que Km se ha determinado en ausencia de inhibidor, Ki puede calcularse a partir de la ecuación (47). Los valores de Ki se usan para comparar diferentes inhibidores de la misma enzima. Mientras más bajo es el valor para Ki, más eficaz es el inhibidor. Por ejemplo, los fármacos estatina que actúan como inhibidores competitivos de la HMG-CoA reductasa (cap. 26) tienen valores de Ki de varios órdenes de magnitud más bajos que la Km para el sustrato HMG-CoA. Los inhibidores no competitivos simples disminuyen Vmáx pero no afectan Km En la inhibición no competitiva, la unión del inhibidor no afecta la unión de sustrato, por ende, es factible la formación de complejos tanto EI como EIS. Sin embargo, si bien el complejo inhibidor de enzima aún puede unirse a sustrato, su eficiencia para transformar sustrato en producto, reflejada por Vmáx, está disminuida. Los inhibidores no competitivos unen enzimas en sitios distintos del sitio de unión a sustrato y, por lo general, muestran poca o ninguna semejanza estructural con el sustrato. 1 K ′m No Gráfico de Dixon A veces se emplea como una alternativa para el gráfico de Lineweaver-Burk, para determinar constantes de inhibición. La velocidad inicial (vi) se mide a varias concentraciones de inhibidor, pero a una concentración fija de sustrato (S). Para un inhibidor competitivo o no competitivo simple, un gráfico de 1/vi contra la concentración del inhibidor [I] da una línea recta. El experimento se repite a diferentes concentraciones fijas de sustratos. El conjunto de líneas resultantes interseca a la izquierda del eje y. Para inhibición competitiva, una perpendicular trazada hacia el eje x negativo desde el punto de intersección de las líneas da –Ki (fig. 18-12, arriba). Para inhibición no competitiva la intersección del eje x negativo es –Ki (fig. 8-12, abajo). En las publicaciones farmacéuticas a menudo se emplean gráficos de Dixon para evaluar la potencia comparativa de inhibidores competitivos. IC50 Una alternativa menos rigurosa, pero de uso frecuente, para Ki como una medida de la potencia inhibidora es la concentración de inhibidor que produce inhibición de 50%, Ic50. Al contrario de la constante de disociación de equilibrio Ki, el valor numérico de IC50 varía en función de las circunstancias específicas de la concentración de sustratos, etc., bajo la cual se determina. Inhibidores estrechamente unidos Algunos inhibidores se unen a enzimas con afinidad tan alta, Ki ≤ 10–9 M, que la concentración de inhibidor requerida para medir Ki cae por debajo de la concentración de enzima típicamente presente dor máx + b hi In r bido hi o in N Vmáx Vmáx 1 [S] FIGURA 8-10 Gráfico de Lineweaver-Burk de inhibición competitiva. Note la completa distensión de inhibición a [S] alta (esto es, 1/[S] baja). or id bi inhi 1 0 08 Bender.indd 71 Para la inhibición no competitiva simple, E y EI poseen afinidad idéntica por el sustrato, y el complejo EIS genera producto a un índice insignificante (fig. 8-11). La inhibición no competitiva más compleja ocurre cuando la unión del inhibidor afecta la afinidad aparente de la enzima por el sustrato, lo que hace que las líneas se intersequen en el tercero o cuarto cuadrantes de un gráfico del doble recíproco (que no se muestra). Si bien ciertos inhibidores muestran características de una mezcla de inhibición competitiva y no competitiva, la evaluación de estos inhibidores va más allá del objetivo de este capítulo. bi do hi In + – – K1 m 71 r 1 vi Enzimas: cinética FIGURA 8-11 Gráfico de Lineweaver-Burk para inhibición no competitiva simple. 27/11/09 13:52:44 72 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 1 vi [S] –Ki [I] con un residuo esencial desde el punto de vista catalítico, y bloquea la función del mismo. La especificidad y la persistencia de inhibidores suicidas, que son tanto específicos para enzima como no reactivos fuera de los confines del sitio activo de la enzima, los hacen promisorios para la creación de fármacos específicos para enzima. El análisis cinético de inhibidores suicidas está más allá del objetivo de este capítulo. Ni el método de Lineweaver-Burk ni el de Dixon son aplicables porque los inhibidores suicidas violan una condición limítrofe clave común a ambos métodos, a saber, que la actividad de la enzima no disminuye en el transcurso de la valoración. 1 vi [S] –Ki [I] FIGURA 8-12 Aplicaciones de los gráficos de Dixon. Arriba: inhibición competitiva, estimación de Ki. Abajo: inhibición no competitiva, estimación de Ki. en una valoración. En estas circunstancias, una fracción importante del inhibidor total puede estar presente como un complejo EI. De ser así, esto viola la suposición, implícita en cinética de estado estable clásica, de que la concentración de inhibidor libre es independiente de la concentración de enzima. El análisis cinético de estos inhibidores muy unidos requiere ecuaciones cinéticas especializadas que incorporan la concentración de enzima para estimar Ki o IC50, y para distinguir entre inhibidores competitivos y no competitivos estrechamente unidos. Los inhibidores irreversibles “envenenan” enzimas En los ejemplos anteriores, los inhibidores forman un complejo disociable, dinámico, con la enzima; por ende, la enzima por completo activa puede recuperarse con tan sólo eliminar el inhibidor del medio circundante. Sin embargo, varios otros inhibidores actúan de manera irreversible al producir modificación química de la enzima. Estas modificaciones, por lo general, comprenden hacer o romper enlaces covalentes con residuos aminoacilo esenciales para la unión a sustrato, catálisis o mantenimiento de la conformación funcional de la enzima. Dado que estos cambios covalentes son hasta cierto punto estables, una enzima que ha sido “envenenada” por un inhibidor irreversible, como un átomo de metal pesado o un reactivo acilante, permanece inhibida incluso después de eliminar del medio circundante el inhibidor que resta. Inhibición basada en mecanismo Los inhibidores “basados en mecanismo” o “suicidas” son análogos de sustrato especializados que contienen un grupo químico que puede transformarse mediante la maquinaria catalítica de la enzima blanco. Después de la unión al sitio activo, la catálisis por la enzima genera un grupo muy reactivo que forma un enlace covalente 08 Bender.indd 72 CASI TODAS LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA COMPRENDEN DOS O MÁS SUSTRATOS Si bien muchas enzimas tienen un sustrato único, muchas otras tienen dos —y a veces más— sustratos y productos. Los principios fundamentales, antes comentados, si bien se ilustran para enzimas con un sustrato único, también aplican a enzimas con múltiples sustratos. Sin embargo, las expresiones matemáticas utilizadas para evaluar reacciones de múltiples sustratos son complejas. Aun cuando un análisis detallado del rango completo de reacciones de múltiples sustratos va más allá del objetivo de este capítulo, a continuación se consideran algunos aspectos comunes de conducta cinética para reacciones de dos sustratos y dos productos (llamadas reacciones “Bi-Bi”). Reacciones secuenciales o de desplazamiento único En reacciones secuenciales, ambos sustratos deben combinarse con la enzima para formar un complejo ternario antes de que pueda proceder la catálisis (fig. 8-13, arriba). Las reacciones secuenciales a veces reciben el nombre de reacciones de desplazamiento único porque el grupo que se está transfiriendo por lo general pasa de manera directa, en un solo paso, desde un sustrato hacia el otro. Las reacciones Bi-Bi secuenciales pueden distinguirse más con base en si los dos sustratos se agregan en un orden al azar o en uno forzoso. Para reacciones de orden al azar, el sustrato A o el B puede combinarse primero con la enzima para formar un complejo EA o uno EB (fig. 8-13, centro). En reacciones de orden forzoso, A debe combinarse primero con E antes de que B pueda combinarse con el complejo EA. Una explicación para un mecanismo de orden forzoso es que la adición de A induce un cambio conformacional en la enzima que alinea residuos que reconocen B y se unen al mismo. Reacciones de ping-pong El término “ping-pong” aplica a mecanismos en los cuales uno o más productos son liberados desde la enzima antes de que se hayan añadido todos los sustratos. Las reacciones de ping-pong comprenden catálisis covalente y una forma transitoria, modificada, de la enzima (fig. 7-4). Las reacciones Bi-Bi de ping-pong son reacciones de doble desplazamiento. El grupo que se transfiere primero es desplazado del sustrato A por la enzima para formar productos P y una forma modificada de la enzima (F). La transferencia de grupo subsiguiente desde F hacia el segundo sustrato B, que forma el pro- 27/11/09 13:52:47 capítulo 8 A B E P A EQ B P EA E Q 1 vi EQ EAB-EPQ E E EB B [S2] en aumento Q EAB-EPQ EA 73 Enzimas: cinética EP A A Q P P B Q 1 [S1] E EA-FP F FB-EQ E FIGURA 8-13 Representaciones de tres clases de mecanismos de reacción Bi-Bi. Las líneas horizontales representan la enzima. Las flechas indican la adición de sustratos y la salida de productos. Arriba: una reacción Bi-Bi ordenada, característica de muchas oxidorreductasas dependientes de NAD(P)H. Centro: una reacción Bi-Bi al azar, característica de muchas cinasas y algunas deshidrogenasas. Abajo: una reacción de ping-pong, característica de aminotransferasas y serina proteasas. ducto Q y regenera E, constituye el segundo desplazamiento (fig. 8-13, abajo). Casi todas las reacciones Bi-Bi se conforman a la cinética de Michaelis-Menten Casi todas las reacciones Bi-Bi se conforman a una forma un poco más compleja de cinética de Michaelis-Menten, en la cual Vmáx se refiere al índice de reacción que se alcanza cuando ambos sustratos están presentes a concentraciones que producen saturación. Cada sustrato tiene su propio valor Km característico, que corresponde a la concentración que da la mitad de la velocidad máxima cuando el segundo sustrato está presente a concentraciones que producen saturación. Al igual que para las reacciones de un solo sustrato, pueden usarse gráficos del doble recíproco para determinar Vmáx y Km. La vi se mide como una función de la concentración de un sustrato (el sustrato variable), mientras que la concentración del otro sustrato (el sustrato fijo) se mantiene constante. Si las líneas obtenidas para varias concentraciones de sustrato fijo se grafican en el mismo gráfico, es posible distinguir entre una enzima ping-pong, que da líneas paralelas, y un mecanismo secuencial, que da un modelo de líneas que se intersecan (fig. 8-14). Los estudios de inhibición del producto se usan para complementar análisis cinéticos y distinguir entre reacciones Bi-Bi ordenadas y al azar. Por ejemplo, en una reacción Bi-Bi ordenada al azar, cada producto será un inhibidor competitivo al margen de cuál sustrato es designado como el sustrato variable. Sin embargo, para un mecanismo secuencial (fig. 8-13, arriba), sólo el producto Q dará el modelo indicativo de inhibición competitiva cuando A es el sustrato variable, mientras que sólo el producto P producirá este modelo con B como el sustrato variable. Otras combinaciones de inhibidor del producto y sustrato variable producirán formas de inhibición no competitiva compleja. 08 Bender.indd 73 FIGURA 8-14 Gráfico de Lineweaver-Burk para una reacción de ping-pong de dos sustratos. Un aumento de la concentración de un sustrato (S1) mientras que de la del otro sustrato (S2) se mantiene constante, cambia las intersecciones x y y, no así la pendiente. EL CONOCIMIENTO DE LA CINÉTICA, EL MECANISMO Y LA INHIBICIÓN DE ENZIMAS, AYUDAN A LA CREACIÓN DE FÁRMACOS Muchos fármacos actúan como inhibidores de enzimas El objetivo de la farmacología es identificar agentes que pueden 1. Destruir o alterar el crecimiento, la invasividad o el desarrollo de agentes patógenos invasores 2. Estimular mecanismos de defensa endógenos 3. Suspender u obstaculizar procesos moleculares aberrantes desencadenados por estímulos genéticos, ambientales o biológicos, con trastorno mínimo de las funciones celulares normales del huésped. En virtud de sus diversas funciones fisiológicas y alto grado de selectividad de sustrato, las enzimas constituyen blancos naturales para la creación de fármacos que son tanto potentes como específicos. Los fármacos estatina, por ejemplo, disminuyen la producción de colesterol al inhibir la 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A reductasa (cap. 26), mientras que la emtricitabina y el tenofovir disoproxil fumarato bloquean la replicación del VIH al inhibir una inverso transcriptasa viral (cap. 34). La farmacoterapia de la hipertensión a menudo incluye la administración de un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina, lo que disminuye la concentración de angiotensina II, un vasoconstrictor (cap. 42). La cinética enzimática define condiciones de investigación apropiadas La cinética enzimática tiene un papel crucial en el descubrimiento de fármacos. El conocimiento de la conducta cinética de la enzima de interés se necesita, ante todo, para seleccionar condiciones 27/11/09 13:52:51 74 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas de valoración apropiadas que detectan con facilidad la presencia de un inhibidor. La concentración de sustrato, por ejemplo, debe ajustarse de modo que se genere suficiente producto para permitir la detección fácil de actividad de la enzima sin que sea tan alta que enmascare la presencia de un inhibidor. Además, la cinética enzimática proporciona el medio para cuantificar y comparar la potencia de diferentes inhibidores y definir su modo de acción. Los inhibidores no competitivos son, en particular, deseables, porque —en contraste con los competitivos— sus efectos nunca pueden superarse por completo mediante incrementos de la concentración de sustrato. Muchos fármacos se metabolizan in vivo La creación de fármacos a menudo comprende más que la evaluación cinética de la interacción de inhibidores con la enzima blanco. Enzimas presentes en el paciente o en el agente patógeno actúan sobre fármacos, dicho proceso se denomina metabolismo de fármaco. Por ejemplo, la penicilina y otros antibióticos β-lactámicos bloquean la síntesis de la pared celular en bacterias al envenenar de manera irreversible la enzima alanil alanina carboxipeptidasa-transpeptidasa. Sin embargo, muchas bacterias producen β-lactamasas que hidrolizan la función β-lactámica crucial en la penicilina y fármacos relacionados. Una estrategia para superar la resistencia al antibiótico resultante es administrar de manera simultánea un inhibidor de β-lactamasa y un antibiótico β-lactámico. También se requiere transformación metabólica para convertir un precursor farmacológico inactivo, o profármaco, en su forma biológicamente activa (cap. 53). El ácido 2′-desoxi-5-fluorouridílico, un potente inhibidor de la timidilato sintasa, un blanco común de la quimioterapia de cáncer, se produce a partir de 5-fluorouracilo por medio de una serie de transformaciones enzimáticas catalizadas por una fosforribosil transferasa y las enzimas de la vía de salvamento de desoxirribonucleósido (cap. 33). El diseño y la administración eficaces de profármacos requieren conocimiento de la cinética y de los mecanismos de las enzimas encargadas de transformarlos en sus formas biológicamente activas. RESUMEN ■ ■ ■ ■ El estudio de la cinética enzimática —los factores que afectan los índices de reacciones catalizadas por enzima— revela los pasos individuales mediante los que las enzimas transforman sustratos en productos. La ΔG, el cambio general de la energía libre para una reacción, es independiente del mecanismo de reacción, y no proporciona información respecto a los índices de reacciones. Las enzimas no afectan la Keq; esta última, una proporción de constantes de índice de reacción, se calcula a partir de las concentraciones de sustratos y productos en equilibrio, o a partir de la proporción k1/k–1. Las reacciones proceden por medio de estados de transición en los cuales ΔGF es la energía de activación. La temperatura, la 08 Bender.indd 74 ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ concentración de ion hidrógeno, la concentración de enzima, la concentración de sustrato y los inhibidores, afectan los índices de reacciones catalizadas por enzima. En la medición del índice de una reacción catalizada por enzima por lo general se emplean condiciones de índice iniciales, para las cuales la ausencia esencial de producto impide la reacción inversa. Las formas lineales de la ecuación de Michaelis-Menten simplifican la determinación de Km y Vmáx. Una forma lineal de la ecuación de Hill se usa para evaluar la cinética de unión a sustrato cooperativa mostrada por algunas enzimas multiméricas. La pendiente n, el coeficiente de Hill, refleja el número, la naturaleza y la fuerza de las interacciones de los sitios de unión a sustrato. Un valor de n de más de 1 indica cooperación positiva. Los efectos de inhibidores competitivos simples, que por lo general semejan sustratos, se superan al aumentar la concentración del sustrato. Los inhibidores no competitivos simples disminuyen la Vmáx pero no afectan la Km. Para inhibidores competitivos y no competitivos simples, la constante inhibitoria Ki es igual a la constante de disociación de equilibrio para el complejo de enzima-inhibidor relevante. Un término más simple y menos riguroso para evaluar la eficacia de un inhibidor es la IC50, la concentración del inhibidor que produce inhibición de 50% en las circunstancias particulares del experimento. Los sustratos pueden añadirse en un orden al azar (cualquier sustrato puede combinarse primero con la enzima) y en un orden forzoso (el sustrato A debe unirse antes que el sustrato B). En reacciones de ping-pong, uno o más productos se liberan a partir de la enzima antes de que se hayan añadido todos los sustratos. La cinética enzimática aplicada facilita la identificación y caracterización de fármacos que inhiben de manera selectiva enzimas específicas. De este modo, la cinética enzimática desempeña una función crucial en el descubrimiento de fármacos, en la farmacodinámica comparativa, y en la determinación del modo de acción de fármacos. REFERENCIAS Dixon M: The determination of enzyme inhibitor constants. Biochem J 1953;55:170. Dixon M: The graphical determination of Km and Ki. Biochem J 1972;129:197. Fersht A: Structure and Mechanism in Protein Science: A Guide to Enzyme Catalysis and Protein Folding. Freeman, 1999. Fraser CM, Rappuoli R: Application of microbial genomic science to advanced therapeutics. Annu Rev Med 2005;56:459. Henderson PJF: A linear equation that describes the steady-state kinetics of enzymes and subcellular particles interacting with tightly bound inhibitors. Biochem J 1972;127:321. Schramm, VL: Enzymatic transition-state theory and transition-state analogue design. J Biol Chem 2007;282:28297. Schultz AR: Enzyme Kinetics: From Diastase to Multi-enzyme Systems. Cambridge University Press, 1994. Segel IH: Enzyme Kinetics. Wiley Interscience, 1975. Wlodawer A: Rational approach to AIDS drug design through structural biology. Annu Rev Med 2002;53:595. 27/11/09 13:52:52 c Enzimas: regulación de actividades Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA El fisiólogo del siglo xix Claude Bernard enunció la base conceptual para la regulación metabólica. Observó que los organismos vivos responden de modos apropiados tanto cuantitativo como temporalmente para permitirles sobrevivir a los múltiples desafíos planteados por cambios de sus ambientes externo e interno. Después, Walter Cannon acuñó el término “homeostasis” para describir la capacidad de los animales para mantener un ambiente intracelular constante a pesar de los cambios en su ambiente externo. Ahora se sabe que los organismos responden a cambios en sus ambientes externo e interno por medio de ajustes balanceados y coordinados de los índices de reacciones metabólicas específicas. Las perturbaciones de la maquinaria de estímulo-respuesta, de la cual depende el mantenimiento del equilibrio homeostático, pueden ser nocivas para la salud de seres humanos. El cáncer, la diabetes, la fibrosis quística y la enfermedad de Alzheimer, por ejemplo, se caracterizan por disfunciones de la regulación desencadenadas por agentes patógenos o mutaciones genéticas. Muchos virus oncogénicos elaboran tirosina cinasas de proteínas que modifican los eventos reguladores que controlan los modelos de expresión de gen, lo que contribuye al inicio de cáncer y la progresión del mismo. La toxina de Vibrio cholerae, el agente causal del cólera, inhabilita vías de estímulo-respuesta en las células del epitelio intestinal al producir ADP-ribosilación de las proteínas de unión a GTP (proteínas G) que enlazan receptores de la adenilil ciclasa en la superficie celular. La activación consiguiente de la ciclasa conduce al flujo irrestricto de agua a los intestinos, lo que resulta en diarrea masiva y deshidratación. Yersinia pestis, el agente causal de la peste, elabora una proteína-tirosina fosfatasa que hidroliza grupos fosforilo en proteínas clave del citoesqueleto. Se cree que las disfunciones en los sistemas proteolíticos de los cuales depende la degradación de proteínas defectuosas o anormales, participan en enfermedades neurodegenerativas, como la de Alzheimer y la de Parkinson. Así, el conocimiento de los factores que controlan los índices de reacciones catalizadas por enzima es esencial para un entendimiento de la base molecular de la enfermedad. Este capítulo esboza los modelos mediante los cuales se controlan los procesos metabólicos y proporciona ejemplos ilustrativos. Capítulos subsiguientes ofrecen más ejemplos. LA ReguLACIóN DeL fLujO De MeTABOLITOs PueDe seR ACTIvA O PAsIvA Las enzimas que operan a su velocidad máxima no pueden mostrar respuesta a un aumento de la concentración de sustrato, y sólo pue- a 9 P í t u l o den hacerlo a una disminución precipitada de la misma. En consecuencia, los valores de Km para casi todas las enzimas tienden a ser cercanos a la concentración intracelular promedio de sus sustratos, de modo que los cambios de la concentración de sustrato generan cambios correspondientes del flujo de metabolitos (fig. 9-1). Las respuestas a cambios de la concentración de sustrato representan un medio importante pero pasivo para coordinar el flujo de metabolitos y mantener la homeostasis en células quiescentes. Sin embargo, ofrecen un alcance limitado para mostrar respuesta a cambios en variables ambientales. A continuación se comentan los mecanismos que regulan la eficiencia de las enzimas de una manera activa en respuesta a señales internas y externas. El flujo de metabolitos tiende a ser unidireccional Pese a la existencia de oscilaciones a corto plazo de las concentraciones de metabolitos y de enzimas, las células vivas existen en un estado dinámico de reposo en el cual las concentraciones medias de intermediarios metabólicos permanecen relativamente constantes con el tiempo (fig. 9-2). Aun cuando todas las reacciones químicas son hasta cierto grado reversibles, en las células vivas los productos de reacción sirven como sustratos para —y son eliminados por— otras reacciones catalizadas por enzima. De este modo, muchas reacciones nominalmente reversibles ocurren de manera unidireccional. Tal sucesión de reacciones metabólicas acopladas se acompaña de un cambio global de la energía libre que favorece el flujo unidireccional de metabolitos (cap. 11). El flujo unidireccional de metabolitos a través de una vía con un cambio negativo global grande en energía libre es análogo al flujo de agua a través de una tubería en la cual un extremo está más bajo que el otro. Las vueltas y codos en la tubería simulan pasos individuales catalizados por enzima con un cambio pequeño negativo o positivo de la energía libre. Empero, el flujo de agua a través de la tubería permanece unidireccional debido al cambio general de altura, que corresponde al cambio general de la energía libre en una vía (fig. 9-3). LA COMPARTAMeNTALIZACIóN AseguRA efICIeNCIA MeTABóLICA Y sIMPLIfICA LA ReguLACIóN En eucariotas, las vías anabólicas y catabólicas que interconvierten productos comunes pueden tener lugar en compartimientos subcelulares específicos. Por ejemplo, muchas de las enzimas que degra75 09 Bender.indd 75 27/11/09 13:54:38 76 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas ∆VB Moléculas grandes V ∆VA Nutrientes Km ∆S ∆S [S] fIguRA 9-1 Respuesta diferencial del índice de una reacción catalizada por enzima, ΔV, al mismo cambio creciente de la concentración de sustrato, a una concentración de sustrato de Km (ΔVA) o muy por arriba de la Km (ΔVB). dan proteínas y polisacáridos residen dentro de organelos denominados lisosomas. De modo similar, la biosíntesis de ácidos grasos ocurre en el citosol, mientras que la oxidación de ácidos grasos tiene lugar dentro de las mitocondrias (caps. 22 y 23). La segregación de ciertas vías metabólicas dentro de tipos de células especializados puede proporcionar compartamentalización física adicional. De manera alternativa, la posesión de uno o más intermediarios únicos puede permitir que vías que al parecer se oponen coexistan incluso en ausencia de barreras físicas. Por ejemplo, a pesar de muchos intermediarios y enzimas compartidos, tanto la glucólisis como la gluconeogénesis son favorecidas desde el punto de vista energético. Esto podría no ser cierto si todas las reacciones fueran iguales. Si una vía se favoreciera en el aspecto energético, la otra se acompañaría de un cambio de la energía libre ΔG de igual magnitud pero con signo opuesto. La espontaneidad simultánea en ambas vías depende de la sustitución de una o más reacciones por otras diferentes favorecidas desde el punto de vista termodinámico en la dirección opuesta. La enzima glucolítica fosfofructocinasa (cap. 18) es remplazada por la enzima gluconeogénica fructosa-1,6-bisfosfatasa (cap. 20). La capacidad de las enzimas para distinguir entre las coenzimas similares en el aspecto estructural NAD+ y NADP+ también origina una forma de compartimentalización, porque segrega los electrones del NADH que están destinados para la generación de ATP a partir de los del NADPH que participan en los pasos reductivos en muchas vías biosintéticas. El control de una enzima que cataliza una reacción limitante regula una vía metabólica completa Si bien el flujo de metabolitos a través de vías metabólicas incluye catálisis por muchas enzimas, el control activo de la homeostasis se logra por medio de regulación de únicamente un subgrupo selecto de estas enzimas. La enzima ideal para intervención reguladora es aquella cuya cantidad o eficiencia catalítica dicta que la reacción que cataliza sea lenta en comparación con todas las otras en la vía. Por ende, el decremento de la eficiencia catalítica o de la cantidad del catalizador para la reacción limitante de la velocidad (o “cuello de botella”), reduce el flujo de metabolitos por toda la vía. A la inversa, un incremento de su cantidad o eficiencia catalítica aumenta el flujo a través de la vía en conjunto. Por ejemplo, la acetil-CoA carboxilasa cataliza la síntesis de malonil-CoA, la primera reacción comprome- 09 Bender.indd 76 Moléculas ~P pequeñas Moléculas pequeñas ~P Desechos Moléculas pequeñas fIguRA 9-2 Célula idealizada en estado de equilibrio dinámico. Note que el flujo de metabolitos es unidireccional. A B fIguRA 9-3 Analogía hidrostática para una vía con un paso limitante de la velocidad (A) y un paso con un valor de ΔG cercano a cero (B). tida de la biosíntesis de ácidos grasos (cap. 23). Cuando se inhibe la síntesis de malonil-CoA, las reacciones subsiguientes de la síntesis de ácidos grasos cesan por falta de sustratos. Como “rectoras” naturales del flujo metabólico, las enzimas que catalizan pasos limitantes constituyen blancos eficientes para intervención reguladora mediante fármacos. Por ejemplo, la inhibición por medicamentos tipo “estatina” de la HMG-CoA reductasa, que cataliza la reacción limitante de la colesterogénesis, restringe la síntesis de colesterol. ReguLACIóN De LA CANTIDAD De eNZIMA La capacidad catalítica de la reacción limitante en una vía metabólica es el producto de la concentración de moléculas de enzima y su eficiencia catalítica intrínseca. Por ende, resulta que la capacidad catalítica puede influir tanto al cambiar la cantidad de enzima presente como al alterar su eficiencia catalítica intrínseca. Las proteínas se sintetizan y degradan de manera continua Al medir las tasas de incorporación de los aminoácidos 15N marcados hacia proteínas, y los índices de pérdida de 15N desde proteína, Schoenheimer dedujo que las proteínas del cuerpo se encuentran en un estado de “equilibrio dinámico” en el cual se están sintetizando y degradando de manera continua, proceso llamado recambio de proteína. Aun cuando las concentraciones de estado de equilibrio de algunas enzimas y otras proteínas permanecen en esencia constantes, o constitutivas, con el tiempo las concentraciones de mu- 27/11/09 13:54:43 Capítulo 9 chas enzimas están influidas por una amplia gama de factores fisiológicos, hormonales o de la dieta. La cantidad absoluta de una enzima refleja el balance neto entre sus índices de síntesis y de degradación. En seres humanos, las alteraciones de las cifras de enzimas específicas pueden estar afectadas por un cambio de la constante de índice para los procesos generales de síntesis (ks), degradación (kdeg), o ambos. Enzima ks kdeg Aminoácidos Control de la síntesis de enzima La síntesis de ciertas enzimas depende de la presencia de inductores, típicamente sustratos o compuestos relacionados desde el punto de vista estructural que inician su síntesis. Por ejemplo, Escherichia coli cultivada en glucosa sólo cataboliza lactosa luego de adición de un β-galactósido, un inductor que inicia la síntesis de una β-galactosidasa y una galactósido permeasa (fig. 38-3). Las enzimas inducibles de seres humanos comprenden la triptófano pirrolasa, treonina deshidratasa, tirosina-α-cetoglutarato aminotransferasa, enzimas del ciclo de la urea, HMG-CoA reductasa y citocromo P450. A la inversa, un exceso de un metabolito puede restringir la síntesis de su enzima cognada por medio de represión. Tanto la inducción como la represión implican elementos cis, secuencias de DNA específicas localizadas corriente arriba de genes regulados, y proteínas reguladoras que transactúan. Los mecanismos moleculares de la inducción y represión se comentan en el capítulo 38. La síntesis de otras enzimas puede estimularse mediante la unión de hormonas y otras señales extracelulares a receptores celulares específicos. En el capítulo 42 se presenta información detallada sobre el control de la síntesis de proteína en respuesta a estímulos hormonales. Control de la degradación enzimática En animales, muchas proteínas se degradan por medio de la vía de la ubiquitina-proteasoma, cuyo descubrimiento les valió un Premio Nobel a Aaron Ciechanover, Avram Hershko e Irwin Rose. El proteasoma 26S comprende más de 30 subunidades polipeptídicas dispuestas en forma de cilindro hueco. Los sitios activos de sus subunidades proteolíticas miran hacia el interior del cilindro, lo que impide degradación indiscriminada de proteínas celulares. Las proteínas se dirigen hacia el proteasoma mediante “ubiquitinación”, la fijación covalente de una o más moléculas de ubiquitina; esta última es una proteína pequeña, de alrededor de 75 residuos, que está muy conservada entre eucariotas. La ubiquitinación es catalizada por una familia grande de enzimas denominadas ligasas E3, que fijan ubiquitina al grupo amino de la cadena lateral de residuos lisilo. La vía de la ubiquitina-proteasoma se encarga tanto de la degradación regulada de proteínas celulares seleccionadas (p. ej., ciclinas, en respuesta a señales intracelulares y extracelulares específicas), como de la eliminación de especies proteínicas defectuosas o aberrantes. La clave para la versatilidad y selectividad del sistema de ubiquitina-proteasoma reside tanto en la variedad de las ligasas E3 09 Bender.indd 77 Enzimas: regulación de actividades 77 intracelulares, como en su capacidad para distinguir entre diferentes estados físicos o conformacionales de una proteína blanco. De este modo, la vía de la ubiquitina-proteasoma puede degradar de manera selectiva proteínas cuya integridad física y competencia funcional han quedado comprometidas por la pérdida de un grupo prostético o por daño del mismo, oxidación de residuos cisteína o histidina, o desaminación de residuos asparagina o glutamina. El reconocimiento por enzimas proteolíticas también puede ser regulado por modificaciones covalentes, como fosforilación; unión de sustratos o de efectores alostéricos, o asociación con membranas, oligonucleótidos u otras proteínas. Cada vez más pruebas sugieren que las disfunciones de la vía de ubiquitina-proteasoma contribuyen a la acumulación de especies proteínicas plegadas de modo aberrante, características de varias enfermedades neurodegenerativas. HAY MÚLTIPLes OPCIONes PARA ReguLAR LA ACTIvIDAD CATALÍTICA En seres humanos, la inducción de síntesis de proteína es un proceso complejo, de múltiples pasos, que típicamente requiere horas para producir cambios importantes de la concentración total de enzima. En contraste, los cambios de la eficiencia catalítica intrínseca por unión de ligandos disociables (regulación alostérica) o por modificación covalente logran regulación de la actividad enzimática en segundos. Los cambios de la concentración de proteína satisfacen requisitos adaptativos a largo plazo, mientras que los cambios de la eficiencia catalítica son más idóneos para alteraciones rápidas y transitorias del flujo de metabolitos. LOs efeCTORes ALOsTÉRICOs ReguLAN CIeRTAs eNZIMAs Inhibición por retroalimentación se refiere a la inhibición de una enzima en una vía biosintética por un producto terminal de esa vía. En el ejemplo que sigue, para la biosíntesis de D a partir de A, catalizada por las enzimas Enz1 a Enz3, Enz2 Enz1 Enz3 A → B → C → D las altas concentraciones de D inhiben la conversión de A en B. La inhibición no depende del “regreso” de los intermediarios, sino de la capacidad de D para unirse a Enz1 e inhibirla. Por lo general, D se une a un sitio alostérico separado desde el punto de vista espacial del sitio catalítico de la enzima blanco. De esta manera, los inhibidores por retroacción típicamente tienen poca o ninguna similitud estructural con los sustratos de las enzimas que inhiben. En este ejemplo, el inhibidor por retroalimentación D actúa como un efector alostérico negativo de Enz1. En una vía biosintética ramificada, las reacciones iniciales participan en la síntesis de múltiples productos terminales. En la figura 9-4 se muestra una vía biosintética ramificada hipotética en la cual las flechas curvas llevan desde inhibidores por retroacción hacia las enzimas cuya actividad inhiben. Las secuencias S3 → A, S4 → B, S4 → C y S3 → → D representan, cada una, secuencias de reacción lineal que son inhibidas por retroacción por sus productos terminales. Las vías de la biosíntesis de nucleótido (cap. 33) proporcionan ejemplos específicos. 27/11/09 13:54:48 78 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas A S1 S2 S3 B S4 nosina (ATP). El CTP, un producto terminal de la vía biosintética de pirimidina, inhibe la ATCasa, mientras que el ATP la activa. Además, las concentraciones altas de ATP pueden superar la inhibición por CTP, lo que permite que la síntesis de nucleótidos pirimidina proceda cuando las concentraciones de nucleótido purina están altas. C S5 D fIguRA 9-4 Sitios de inhibición por retroalimentación en una vía biosintética ramificada. S1-S5 son intermediarios en la biosíntesis de productos terminales A-D. Las flechas rectas representan enzimas que catalizan las conversiones indicadas. Las flechas curvas de color rojo representan asas de retroalimentación e indican sitios de inhibición por retroalimentación por productos terminales específicos. La cinética de inhibición por retroalimentación puede ser competitiva, no competitiva, parcialmente competitiva o mixta. Los inhibidores por retroalimentación, que suelen ser los pequeños bloques de construcción moleculares de macromoléculas (p. ej., aminoácidos para proteínas, nucleótidos para ácidos nucleicos), por lo general inhiben el primer paso comprometido en una secuencia biosintética particular. Un ejemplo muy estudiado es la inhibición de la aspartato transcarbamoilasa bacteriana por CTP (véase más adelante y cap. 33). Múltiples asas de retroalimentación proporcionan control fino adicional. Por ejemplo, un exceso de producto B aminora el requerimiento de sustrato S2 (fig. 9-5). Con todo, S2 también se necesita para la síntesis de A, C y D. De este modo, para esta vía, el exceso de B restringe la síntesis de los cuatro productos terminales, al margen de la necesidad de los otros tres. Para sortear esta dificultad potencial, cada producto terminal sólo puede inhibir de manera parcial la actividad catalítica. El efecto de un exceso de dos o más productos terminales puede ser estrictamente aditivo o, de modo alternativo, mayor que su efecto individual (inhibición por retroalimentación cooperativa). La aspartato transcarbamoilasa (ATCasa) es un modelo de enzima alostérica La ATCasa, el catalítico para la primera reacción única para la biosíntesis de pirimidina (fig. 33-9), es un blanco de regulación por retroalimentación por trifosfato de citidina (CTP) y trifosfato de ade- A S1 S2 S3 B La disimilitud estructural entre un inhibidor por retroalimentación y el sustrato para la enzima cuya actividad regula, sugiere que estos efectores no son isostéricos con un sustrato, sino alostéricos (“ocupan otro espacio”). Por consiguiente, Jacques Monod propuso la existencia de sitios alostéricos que son distintos desde el punto de vista físico del sitio catalítico. De esta manera, las enzimas alostéricas son aquellas para las cuales la catálisis en el sitio activo puede modularse por la presencia de efectores en un sitio alostérico. Esta hipótesis se ha confirmado por muchas líneas de evidencia, incluso cristalografía con rayos X y mutagénesis dirigida hacia sitio, lo que demuestra la existencia de sitios activo y alostérico distintos desde el punto de vista espacial sobre diversas enzimas. Por ejemplo, la ATCasa de Escherichia coli es un dodecámero que consta de seis subunidades catalíticas y seis subunidades reguladoras; estas últimas se unen a los nucleótido trifosfatos que modulan la actividad. En general, la unión de un regulador alostérico induce un cambio conformacional en la enzima que abarca el sitio activo. Los efectos alostéricos pueden ocurrir sobre Km o sobre Vmáx Hacer referencia a la cinética de la inhibición alostérica como “competitiva” o “no competitiva” con sustrato conlleva implicaciones mecanicistas desorientadoras. En lugar de eso se hace referencia a dos clases de enzimas reguladas: de la serie K y de la serie V. Para las enzimas alostéricas de la serie K, la cinética de saturación de sustrato es competitiva en el sentido de que Km está incrementada sin un efecto sobre Vmáx. Para enzimas alostéricas de la serie V, el inhibidor alostérico disminuye Vmáx sin afectar la Km. Las alteraciones de Km o Vmáx probablemente se producen por cambios conformacionales en el sitio catalítico inducidos por unión del efector alostérico en su sitio. Para una enzima alostérica de la serie K, este cambio conformacional puede debilitar los enlaces entre sustrato y residuos de unión a sustrato. Para una enzima alostérica de la serie V, el efecto primario puede ser alterar la orientación o la carga de residuos catalíticos, lo que genera un decremento de la Vmáx. Aun así, como consecuencia de estos cambios conformacionales, pueden observarse efectos intermedios sobre Km y Vmáx. S4 C S5 D fIguRA 9-5 Inhibición por retroalimentación múltiple en una vía biosintética ramificada. Superpuestas sobre asas de retroalimentación simples (flechas de color rojo punteadas), hay múltiples asas de retroalimentación (flechas de color rojo continuas) que regulan enzimas comunes a la biosíntesis de varios productos terminales. 09 Bender.indd 78 Los sitios alostérico y catalítico son distintos desde el punto de vista espacial LA ReguLACIóN POR ReTROALIMeNTACIóN NO es sINóNIMO De INHIBICIóN POR ReTROACCIóN En células tanto de mamífero como de bacterias, los productos terminales “producen retroalimentación” de su propia síntesis, y la controlan, en muchos casos por medio de inhibición por retroacción de una enzima biosintética temprana. Comoquiera que sea, es 27/11/09 13:54:52 Capítulo 9 necesario distinguir entre regulación por retroalimentación, término fenomenológico desprovisto de inferencias mecanicistas, e inhibición por retroalimentación, mecanismo para la regulación de la actividad enzimática. Por ejemplo, si bien el colesterol de la dieta aminora la síntesis hepática de colesterol, esta regulación por retroacción no incluye inhibición por retroacción. La HMGCoA reductasa, la enzima limitante de la colesterogénesis, queda afectada, pero el colesterol no inhibe por retroalimentación su actividad. La regulación en respuesta al colesterol de la dieta comprende restricción por el colesterol o por un metabolito del colesterol, de la expresión del gen que codifica para HMG-CoA reductasa (represión de enzima) (cap. 26). MuCHAs HORMONAs ACTÚAN MeDIANTe seguNDOs MeNsAjeROs ALOsTÉRICOs Los impulsos nerviosos —y la unión de hormonas a receptores de superficie celular— desencadenan cambios del índice de reacciones catalizadas por enzima dentro de células blanco, al inducir liberación o síntesis de efectores alostéricos especializados llamados segundos mensajeros. El mensajero primario, o “primer mensajero”, es la molécula de hormona o el impulso nervioso. Los segundos mensajeros incluyen 3ʹ,5ʹ-cAMP, sintetizado a partir de ATP por la enzima adenilil ciclasa en respuesta a la hormona adrenalina, y Ca2+, que se almacena dentro del retículo endoplásmico de casi todas las células. La despolarización de membrana originada por un impulso nervioso abre un canal de membrana que libera ion calcio hacia el citoplasma, donde se une a enzimas comprendidas en la regulación de la contracción y la movilización de glucosa almacenada desde glucógeno, y las activa. La glucosa después satisface las demandas de energía aumentadas de la contracción muscular. Otros segundos mensajeros incluyen el 3ʹ,5ʹ-cGMP y los polifosfoinositoles, producidos por la hidrólisis de fosfatidil inosítidos por fosfolipasas reguladas por hormona. En los capítulos 19, 42 y 48 pueden encontrarse ejemplos específicos de la participación de segundos mensajeros en la regulación de procesos celulares. LAs MODIfICACIONes COvALeNTes ReguLADORAs PueDeN seR ReveRsIBLes O IRReveRsIBLes En células de mamífero, las dos formas más frecuentes de modificación covalente reguladora son proteólisis parcial y fosforilación. Dado que los organismos carecen de la capacidad para volver a unir las dos porciones de una proteína producidas por hidrólisis de un enlace peptídico, la proteólisis constituye una modificación irreversible. En contraste, la fosforilación es un proceso de modificación reversible. La fosforilación de proteínas en residuos serilo, treonilo o tirosilo, catalizada por proteína cinasas, es favorecida desde el punto de vista termodinámico. La eliminación hidrolítica de estos grupos fosforilo por enzimas denominadas proteína fosfatasas es igual de favorecida. Las actividades de las proteína cinasas y de las proteína fosfatasas están reguladas, porque de no estarlo, su acción concertada sería improductiva en los aspectos tanto termodinámico como biológico. 09 Bender.indd 79 Enzimas: regulación de actividades 79 LAs PROTeAsAs PueDeN seCReTARse COMO PROeNZIMAs INACTIvAs DesDe eL PuNTO De vIsTA CATALÍTICO Ciertas proteínas son sintetizadas y secretadas como proteínas precursoras inactivas conocidas como proproteínas. Las proproteínas de enzimas se denominan proenzimas o zimógenos. La proteólisis selectiva convierte una proproteína por medio de uno o más “cortes” proteolíticos sucesivos en una forma que muestra la actividad característica de la proteína madura; por ejemplo, su actividad enzimática. Las proteínas sintetizadas como proproteínas son la hormona insulina (proproteína = proinsulina), las enzimas digestivas pepsina, tripsina y quimotripsina (proproteínas = pepsinógeno, tripsinógeno y quimotripsinógeno, respectivamente), varios factores de las cascadas de coagulación de la sangre y de disolución de coágulo de sangre (cap. 51), y la proteína del tejido conectivo colágeno (proproteína = procolágeno). Las proenzimas facilitan la movilización rápida de una actividad en respuesta a demanda fisiológica La síntesis y secreción de proteasas como proenzimas inactivas en el aspecto catalítico, protege al tejido de origen (p. ej., el páncreas) contra autodigestión, como puede ocurrir en la pancreatitis. Ciertos procesos fisiológicos como la digestión son intermitentes, pero bastante regulares y predecibles. Otros, como la formación de coágulo de sangre, la disolución de coágulo y la reparación de tejido, sólo se ponen en marcha en respuesta a necesidad fisiológica o fisiopatológica apremiante. Está claro que los procesos de formación de coágulo de sangre y de disolución del mismo deben estar coordinados de modo temporal para lograr la homeostasis. Las enzimas necesarias de manera intermitente pero con rapidez a menudo se secretan en una forma inicialmente inactiva puesto que el proceso de secreción o la síntesis nueva de las proteínas requeridas podría ser insuficientemente rápida para responder a una demanda fisiopatológica apremiante, como la pérdida de sangre (cap. 51). La activación de la proquimotripsina requiere proteólisis selectiva La proteólisis selectiva comprende uno o más cortes proteolíticos muy específicos que pueden o no acompañarse de la separación de los péptidos resultantes. Lo que es más importante, la proteólisis selectiva suele originar cambios conformacionales que “crean” el sitio catalítico de una enzima. Note que aun cuando los residuos His 57 y Asp 102 residen en el péptido B de la α-quimotripsina, Ser 195 reside en el péptido C (fig. 9-6). Los cambios conformacionales que acompañan a la proteólisis selectiva de la proquimotripsina (quimotripsinógeno) alinean los tres residuos de la red de transmisión de carga (fig. 7-7), lo que forma el sitio catalítico. Note también que los residuos de contacto y catalítico pueden estar ubicados en diferentes cadenas peptídicas, pero aún estar dentro de la distancia formadora de enlace de sustrato unido. 27/11/09 13:54:54 80 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas 1 13 14 15 16 146 149 245 Pro-CT fIguRA 9-6 Representación bidimensional de la secuencia de eventos proteolíticos que a la postre dan por resultado la formación del sitio catalítico de quimotripsina, que incluye la tríada catalítica Asp 102-His57-Ser195 (véase la fig. 7-7). La proteólisis sucesiva forma proquimotripsina (pro-CT), tt-quimotripsina (tt-Ct), y en última instancia α-quimotripsina (α-CT), proteasa activa cuyos tres péptidos permanecen relacionados por enlaces covalentes intercaternarios. 1 13 14 15 16 146 149 245 π-CT 14-15 1 13 147-148 16 146 149 245 α-CT S LA MODIfICACIóN COvALeNTe ReveRsIBLe ReguLA eNZIMAs CLAve De MAMÍfeRO Las proteínas de mamífero son los blancos de una amplia gama de procesos de modificación covalente. Las modificaciones como prenilación, glucosilación, hidroxilación y acilación de ácido graso introducen características estructurales singulares en proteínas recién sintetizadas, que tienden a persistir durante toda la vida de la proteína. Entre las modificaciones covalentes que regulan la función de las proteínas (p. ej., metilación, acetilación), la más frecuente con mucho es la fosforilación-desfosforilación. Las proteína cinasas fosforilan proteínas al catalizar la transferencia del grupo fosforilo terminal de ATP hacia los grupos hidroxilo de residuos serilo, treonilo o tirosilo, lo que forma residuos O-fosfoserilo, O-fosfotreonilo u O-fosfotirosilo, respectivamente (fig. 9-7). Algunas proteína cinasas se dirigen hacia las cadenas laterales de residuos histidilo, lisilo, arginilo y aspartilo. La forma no modificada de la proteína puede regenerarse mediante eliminación hidrolítica de grupos fosforilo, catalizada por proteína fosfatasas. Una célula de mamífero típica posee miles de proteínas fosforiladas y varios cientos de proteína cinasas y proteína fosfata- S S S sas que catalizan su interconversión. La facilidad de interconversión de enzimas entre sus formas fosfo- y desfosfo- explica, en parte, la frecuencia con la cual la fosforilación-desfosforilación se utiliza como un mecanismo para el control regulatorio. La fosforilación-desfosforilación permite alterar las propiedades funcionales de la enzima afectada sólo durante el tiempo que satisfaga una necesidad específica. Una vez que la necesidad ha desaparecido, la enzima puede convertirse de regreso a su forma original, preparada para responder al siguiente evento estimulador. Un segundo factor que fundamenta el uso difundido de fosforilación-desfosforilación de proteínas yace en las propiedades químicas del grupo fosforilo mismo. Para alterar las propiedades funcionales de una enzima, es necesario que cualquier modificación de su estructura química influya sobre la configuración tridimensional de la proteína. La alta densidad de carga de los grupos fosforilo unidos a proteína —en general –2 a pH fisiológico— y su propensión a formar fuertes puentes salinos con residuos arginilo y lisilo, hacen de ellos potentes agentes para modificar la estructura y función de proteínas. La fosforilación regularmente influye sobre la eficiencia catalítica intrínseca de una enzima o sobre otras propiedades al inducir cambios conformacionales. Por tanto, los aminoácidos marcados por fosforilación pueden estar, y por lo general lo están, relativamente distantes del sitio catalítico en sí. La modificación covalente regula el flujo de metabolitos ADP ATP Mg2+ Cinasa Enz Ser OH Enz Ser O PO32– Fosfatasa Mg2+ Pi H2O fIguRA 9-7 Modificación covalente de una enzima regulada por fosforilación-desfosforilación de un residuo serilo. 09 Bender.indd 80 En muchos aspectos, los sitios de fosforilación de proteína y otras modificaciones covalentes pueden considerarse otra forma de sitio alostérico. De cualquier modo, en este caso, el “ligando alostérico” se une de modo covalente a la proteína. Tanto la fosforilación-desfosforilación como la inhibición por retroalimentación proporcionan regulación a corto plazo, fácilmente reversible, del flujo de metabolitos en respuesta a señales fisiológicas específicas. Ambas actúan sin alterar la expresión genética. Las dos actúan sobre las primeras enzimas de una secuencia metabólica larga y a menudo biosintética, y ambas actúan en sitios alostéricos más que catalíticos. No obstante, la inhibición por retroalimentación involucra una sola 27/11/09 13:54:58 Capítulo 9 proteína, y carece de características hormonales y neurales. En contraste, la regulación de enzimas de mamífero por fosforilación-desfosforilación comprende varias proteínas y ATP, y está bajo el control neural y hormonal directo. LA fOsfORILACIóN De PROTeÍNA es eN eXTReMO veRsÁTIL La fosforilación-desfosforilación de proteína es un proceso muy versátil y selectivo. No todas las proteínas están sujetas a fosforilación; esta última sólo se dirige a uno, o un pequeño subgrupo, de los muchos grupos hidroxilo sobre la superficie de una proteína. Si bien la función enzimática afectada más a menudo es la eficiencia catalítica de la proteína, la fosforilación también puede alterar su ubicación dentro de la célula, la susceptibilidad a la degradación proteolítica, o la capacidad de respuesta a regulación por ligandos alostéricos. La fosforilación puede incrementar la eficiencia catalítica de una enzima, y convertirla en su forma activa en una proteína, mientras que la fosforilación de otra proteína la convierte en una forma intrínsecamente ineficiente, o inactiva (cuadro 9-1). Muchas proteínas pueden fosforilarse en múltiples sitios. Otras están sujetas a regulación tanto por fosforilación-desfosforilación, como por la unión de ligandos alostéricos, o por fosforilación-desfosforilación y otra modificación covalente. La fosforilación-desfosforilación en cualquier sitio puede catalizarse por múltiples proteína cinasas o proteína fosfatasas. Muchas proteína cinasas y casi todas las proteína fosfatasas actúan sobre más de una proteína y se interconvierten entre formas activa e inactiva por la unión de segundos mensajeros o por modificación covalente por fosforilación-desfosforilación. La interrelación entre proteína cinasas y proteína fosfatasas, entre las consecuencias funcionales de la fosforilación en diferentes sitios, entre sitios de fosforilación y sitios alostéricos, o entre sitios de fosforilación y otros sitios de modificación covalente, proporciona la base para la formación de redes reguladoras que integran múltiples señales de entrada ambientales para desencadenar una respuesta celular coordinada apropiada. Por ejemplo, la modificación de histonas por medio de una combinación de acetilación y CUADRO 9-1 Ejemplos de enzimas de mamífero cuya actividad catalítica es alterada por fosforilación-desfosforilación covalente Estado de actividad Baja Alta Acetil-CoA carboxilasa Enzima EP E Glucógeno sintasa EP E Piruvato deshidrogenasa EP E HMG-CoA reductasa EP E Glucógeno fosforilasa E EP Citrato liasa E EP Fosforilasa b cinasa E EP HMG-CoA reductasa cinasa E EP Abreviaturas: E, desfosfoenzima; EP, fosfoenzima. 09 Bender.indd 81 Enzimas: regulación de actividades 81 fosforilación constituye la base para el “código de histonas”, que modula la estructura de la cromatina para aumentar o silenciar la expresión de genes (cap. 38). En estas redes reguladoras complejas, las enzimas individuales muestran respuesta a diferentes señales ambientales. Por ejemplo, una enzima que puede fosforilarse por más de una proteína cinasa en un sitio único, puede convertirse catalíticamente en una forma ineficiente (inactiva), o viceversa, en respuesta a cualquiera de varias señales. Si la proteína cinasa es activada en respuesta a una señal diferente de la que activa a la proteína fosfatasa, la fosfoproteína se convierte en un nodo de decisión. El resultado funcional, por lo general actividad catalítica, refleja el estado de fosforilación. Dicho estado o grado de fosforilación está determinado por las actividades relativas de la proteína cinasa y la proteína fosfatasa, un reflejo de la presencia y de la fuerza relativa de las señales ambientales que actúan a través de cada una. La capacidad de muchas proteína cinasas y proteína fosfatasas para marcar a más de una proteína proporciona un medio para una señal ambiental con el fin de regular de manera coordinada múltiples procesos metabólicos. Por ejemplo, las enzimas 3-hidroxi-3metilglutaril-CoA reductasa y acetil-CoA carboxilasa —las enzimas controladoras para la biosíntesis de colesterol y ácido graso, respectivamente— son fosforiladas y desactivadas por la proteína cinasa activada por monofosfato de adenosina (AMP). Cuando esta proteína cinasa se activa sea mediante fosforilación por una u otra proteína cinasa o en respuesta a la unión de su activador alostérico 5ʹ-AMP, las dos vías principales de las cuales depende la síntesis de lípidos a partir de acetil-CoA quedan inhibidas. eveNTOs ReguLADORes INDIvIDuALes se COMBINAN PARA fORMAR ReDes De CONTROL COMPLejAs Las células llevan a cabo una compleja gama de procesos metabólicos que deben regularse en respuesta a una amplia gama de factores ambientales. En consecuencia, las enzimas interconvertibles, y las enzimas de las cuales depende su interconversión no actúan como conmutadores de “encendido” y “apagado” aislados. Para satisfacer las demandas de mantener la homeostasis, estos bloques de construcción están enlazados para formar redes reguladoras integradas. Un ejemplo bien estudiado de ese tipo de red es el ciclo de células eucarióticas que controla la división celular. Cuando emerge del estado quiescente, o G0, el proceso en extremo complejo de división celular procede a través de una serie de fases específicas designadas G1, S, G2 y M (fig. 9-8). Complejos sistemas de vigilancia, llamados puntos de control, evalúan indicadores clave de progreso para asegurar que ninguna fase del ciclo se inicie sino hasta que la fase previa esté completa. En la figura 9-8 se desglosa de modo simplificado parte del punto de control que regula el inicio de replicación de DNA, denominado la fase S. Una proteína cinasa llamada ATM se asocia con el genoma. Si el DNA contiene una rotura de doble cadena, el cambio resultante en la conformación de la cromatina activa a la ATM. En el momento de la activación, una subunidad del dímero de ATM activada se disocia e inicia una serie, o cascada, de eventos de fosforilación-desfosforilación de proteína 27/11/09 13:55:00 82 SECCIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Luz UV, radiación ionizante, etc. ATM cinasa (inactiva) DNA (dañado) DNA ATM ATM ATM ATM G0 ATM cinasa (activa, disociada) Ciclo celular P G1 CHK1/2 CHK1/2 CHK1/2 cinasa (activa) P M G2 Cdc25 S Cdc25 Cdc25 fosfatasa (inactiva) P Cdk Ciclina Cdk Ciclina Ciclina-Cdk (inactiva) fIguRA 9-8 Representación simplificada del punto de control de G1 a S del ciclo de célula eucariótica. El círculo muestra las diversas etapas en el ciclo de célula eucariótica. El genoma se replica durante la fase S, mientras que en el transcurso de la fase M las dos copias del genoma se segregan y ocurre división celular. Cada una de estas fases está separada por una fase G, o de crecimiento (growth), caracterizada por un incremento del tamaño de las células y la acumulación de los precursores requeridos para el ensamblaje de los grandes complejos macromoleculares formados durante las fases S y M. mediados por las proteínas cinasas CHK1 y CHK2, proteína fosfatasa Cdc25 y, por último, un complejo entre una ciclina y una proteína cinasa dependiente de ciclina, o Cdk. La activación del complejo de Cdk/ciclina bloquea la transición de G1 a S, lo que evita la replicación de DNA dañado. La falla en este punto de control puede llevar a mutaciones en el DNA que pueden conducir a cáncer u otras enfermedades. Cada paso en la cascada proporciona un conducto para vigilar indicadores adicionales del estado de la célula antes de entrar en la fase S. RESUMEN ■ ■ ■ ■ La homeostasis incluye mantener un ambiente intracelular y dentro de órganos relativamente constante pese a amplias fluctuaciones en el ambiente externo. Esto se logra por medio de cambios apropiados en las velocidades de reacciones bioquímicas en respuesta a necesidad fisiológica. Los sustratos para casi todas las enzimas por lo general están presentes a una concentración cercana a su Km. Esto facilita el control pasivo de los índices de formación de producto en respuesta a cambios de las concentraciones de intermediarios metabólicos. El control activo del flujo de metabolitos comprende cambios de la concentración, la actividad catalítica, o ambos, de una enzima que cataliza una reacción limitante comprometida. La proteólisis selectiva de proenzimas inactivas desde el punto de vista catalítico, inicia cambios conformacionales que forman el sitio activo. La secreción como una proenzima inactiva facilita la movilización rápida de la enzima en respuesta a lesión o 09 Bender.indd 82 necesidad fisiológica, y puede proteger al tejido de origen (p. ej., autodigestión por proteasas). ■ La unión de metabolitos y segundos mensajeros a sitios distintos del sitio catalítico de enzimas desencadena cambios conformacionales que alteran la Vmáx o la Km. ■ La fosforilación por proteína cinasas de residuos serilo, treonilo o tirosilo específicos —y la desfosforilación subsiguiente por proteína fosfatasas— regula la actividad de muchas enzimas de seres humanos. Las proteína cinasas y fosfatasas que participan en cascadas de regulación que responden a señales hormonales o de segundo mensajero, constituyen redes reguladoras que pueden procesar e integrar información ambiental compleja para producir una respuesta celular apropiada e integral. REFERENCIAS Bray D: Protein molecules as computational elements in living cells. Nature 1995;376:307. Ciechanover A, Schwartz AL: The ubiquitin system: Pathogenesis of human diseases and drug targeting. Biochim Biophys Acta 2004;1695:3. Graves DJ, Martin BL, Wang JH: Co- and Post-translational Modification of Proteins: Chemical Principles and Biological Effects. Oxford Univ Press, 1994. Johnson LN, Lewis RJ: Structural basis for control by phosphorylation. Chem Rev 2001;101:2209. Muoio DM, Newgard CB: Obesity-related derangements in metabolic regulation. Annu Rev Biochem 2006;75:403. 27/11/09 13:55:03 Capítulo 9 Pilkis SJ et al: 6-Phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase: a metabolic signaling enzyme. Annu Rev Biochem 1995;64:799. Rovner SL: Hold that thought. Slowly but surely scientists are unveiling the complex chemical underpinnings of memory. Chem Eng News 2007;85,13. Scriver CR et al (editors): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. McGraw-Hill, 2000. Sitaramayya A (editor): Introduction to Cellular Signal Transduction. Birkhauser, 1999. Stadtman ER, Chock PB (editors): Current Topics in Cellular Regulation. Academic Press, 1969. 09 Bender.indd 83 83 Enzimas: regulación de actividades Stieglitz K et al: Monitoring the transition from the T to the R state in E. coli aspartate transcarbamoylase by x-ray crystallography: Crystal structures of the E50A mutant enzyme in four distinct allosteric states. J Mol Biol 2004;341:853. Tu B et al: Logic of the yeast metabolic cycle: Temporal compartmentalization of cellular processes. Science 2005; 310:1152. Weber G (editor): Advances in Enzyme Regulation. Pergamon Press, 1963. 27/11/09 13:55:04 10 c Bioinformática y biología computacional Peter J. Kennelly, PhD y Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los primeros modelos científicos de patogenia, como la teoría de la enfermedad por gérmenes, de gran influencia, de Louis Pasteur, fueron de naturaleza binaria: cada enfermedad poseía un agente causal único y definible. El paludismo se originó por la ameba Plasmodium falciparum, la tuberculosis por la bacteria Mycobacterium tuberculosis, la drepanocitosis por una mutación en un gen que co­ difica para una de las subunidades de la hemoglobina, la polio­ mielitis por el virus del mismo nombre, y el escorbuto por una defi­ ciencia de ácido ascórbico. De este modo, la estrategia para tratar enfermedad o prevenirla podía reducirse a un proceso sencillo de rastrear el agente causal y después idear algún medio para eliminar­ lo, neutralizar sus efectos, o bloquear su ruta de transmisión. Este método se ha empleado de manera exitosa para entender y tratar una amplia gama de enfermedades infecciosas y genéticas. Sin em­ bargo, ha quedado claro que los determinantes de muchas enferme­ dades —entre ellas cáncer, cardiopatía coronaria, diabetes tipo 2 y enfermedad de Alzheimer— son de naturaleza multifactorial. En lugar de tener uno o varios agentes causales específicos, cuya pre­ sencia es tanto necesaria como suficiente, la aparición y progresión de las enfermedades mencionadas refleja la compleja interrelación entre la constitución genética, la dieta y el estilo de vida de cada in­ dividuo, así como una gama de factores ambientales, como la pre­ sencia de toxinas, virus o bacterias. El desafío planteado por enfermedades multifactoriales deman­ da un aumento de la amplitud y la profundidad del conocimiento de organismos vivos capaces de igualar su sofisticación y complejidad. Es necesario identificar las muchas proteínas hasta ahora desconoci­ das con las cuales interactúan, los vínculos funcionales entre estas proteínas, y las repercusiones de factores de la dieta, genéticos y am­ bientales sobre ellas. La masa total de información que debe procesar­ se para entender, de modo tan completo e integral como sea posible, los mecanismos moleculares que fundamentan la conducta de los or­ ganismos vivos, así como la manera en la cual las perturbaciones pue­ den llevar a enfermedad o disfunción, rebasa la capacidad de la men­ te humana para revisar y analizar. En consecuencia, los científicos biomédicos han echado mano de recursos computacionales sofistica­ dos para reunir y evaluar información biológica a escala masiva. GENÓMICA: UNA AVALANCHA DE INFORMACIÓN Los médicos y científicos desde hace mucho tiempo han entendido que el genoma, la totalidad de información genética de un organis­ a P í t u l o mo vivo, representaba una rica fuente de información respecto de temas que varían desde metabolismo básico y mecanismos de evo­ lución, hasta longevidad y envejecimiento. Empero, el tamaño masi­ vo del genoma humano, 3 × 109 pares de bases de nucleótido, requi­ rió un cambio paradigmático en el modo en el cual los científicos abordaron la determinación de las secuencias de DNA. A su vez, la necesidad de crear nuevos métodos para “explotar” la masa de datos sobre la secuencia del genoma que siguen surgiendo a partir del Human Genome Project (HGP, Proyecto del Genoma Humano) y sus proyectos correlacionados, ha impulsado los avances recientes en bioinformática y biología computacional. El Human Genome Project (HGP) La compleción exitosa del HGP representa la culminación de más de seis decenios de logros en biología molecular, genética y bioquí­ mica. A continuación se listan cronológicamente varios eventos hito que determinaron toda la secuencia del genoma humano. 1944 — 1953 — 1966 — 1972 — 1977 — 1983 — 1985 — 1986 — 1986 — 1989 — 1990 — 1994 — 1996 — 1999 — 1999 — 2000 — 2003 — Se demuestra que el DNA es el material hereditario Se postula el concepto de la doble hélice Se resuelve el código genético Se crea la tecnología de DNA recombinante Surge la tecnología de secuenciación de DNA práctica Se mapea el gen del cual depende la enfermedad de Huntington Se desarrolla la reacción en la cadena de polimerasa (PCR) La secuenciación de DNA se hace automatizada Se identifica el gen del cual depende la distrofia muscu­ lar de Duchenne Se identifica el gen del cual depende la fibrosis quística Se lanza el HGP en EUA Se completa el mapeo genético humano Se establece el primer mapa de genes humanos Se inicia la Single Nucleotide Polymorphism Initiative Se completa la primera secuencia de un cromosoma humano, el número 22 Se completa el “primer borrador” del genoma humano Se completa la secuenciación del primer genoma hu­ mano Coincidió con estos avances la secuenciación de los genomas de cientos de otros organismos, entre ellos Haemophilus influenzae (1995), levadura (1996), Escherichia coli (1997), Caenorhabditis elegans (1998), Mycobacterium tuberculosis (1998), arroz (2000), Liste- 84 10 Bender.indd 84 27/11/09 13:56:18 capítulo 10 ria monocytogenes (2001), el coronavirus que produce el SARS (2003), la rata (2004) y el chimpancé (2005). Dos grupos se encargaron de secuenciar el genoma humano. El Human Genome Sequencing Consortium empleó secuenciación por fragmentación exhaustiva jerárquica (hierarchical shotgun sequencing). Para este método, todo el genoma fue separado en frag­ mentos de alrededor de 100 a 200 kb e insertado en cromosomas artificiales bacterianos (BAC). A continuación, estos últimos se co­ locaron en cromosomas individuales al buscar secuencias marcado­ ras conocidas como sitios de secuencia identificada o única (sequence-tagged sites) (loci genómicos únicos cortos para los cuales se dispone de una valoración de PCR), cuyas localizaciones se cono­ cían. Posteriormente, clonas de los BAC se separaron hacia frag­ mentos pequeños (fragmentación exhaustiva [shotgunning]), y se secuenciaron. Luego se usaron algoritmos de computadora para identificar información de secuencia coincidente a partir de frag­ mentos que se superponían hasta reconstruir la secuencia completa. El equipo de Celera usó el método de fragmentación exhaustiva del genoma entero. Los fragmentos obtenidos por medio de este méto­ do se montaron para formar secuencias contiguas (conjuntos de DNA que poseen secuencias que se superponen) que se dispusieron sobre andamios en el orden correcto, aun cuando no necesariamen­ te conectados en una secuencia continua. Las posiciones correctas de estos andamios después se determinaron al emplear sitios de se­ cuencia identificada o única. Los instrumentos automatizados para la determinación de la secuencia (sequenators), de alta capacidad de procesamiento, programas de computadora potentes, y el elemento de competición, contribuyeron al rápido progreso hecho por ambos grupos, que culminó en la rápida compleción del HGP. En www. genomenewsnetwork.org/articles/06_00/sequence_primer.shtml puede encontrarse una descripción detallada de los dos métodos. Genomas y medicina El fácil acceso a secuencias de genoma de organismos que abarcan los tres dominios filogenéticos, Archaea, Bacteria y Eukarya, junto con acceso a algoritmos poderosos para manipular y transformar datos derivados de estas secuencias, ya han generado transforma­ ciones importantes en biología y bioquímica. En los primeros dece­ nios del siglo xxi se atestiguará la expansión de la “revolución de la genómica” hacia la práctica de la medicina conforme médicos y científicos exploten el nuevo conocimiento del genoma humano y de los genomas de los organismos que colonizan, alimentan e in­ fectan al Homo sapiens. Hoy, las comparaciones entre los genomas de cepas patogéni­ cas y no patogénicas de un microorganismo pueden poner de relie­ ve probables determinantes de virulencia. De manera similar, la genómica comparativa se está aplicando a agentes patógenos y sus huéspedes para identificar listas de productos de gen singulares a los primeros, a partir de los cuales seleccionar blancos de fármacos po­ tenciales. En el futuro, los médicos diagnosticarán y tratarán a en­ fermos guiados por información proporcionada por la secuencia del genoma de un individuo. Si bien la “medicina de diseñador” basada en genoma promete ser eficiente y eficaz, persisten importantes de­ safíos técnicos y científicos por abordar antes de que la promesa de la genómica se pueda cumplir por completo tanto en biología como en medicina. Estos desafíos, resumidos con admirable claridad por FS Collins y asociados en un artículo titulado “A vision for the futu­ 10 Bender.indd 85 85 Bioinformática y biología computacional re of genomic research. A blueprint for the genomic era” (Nature 2003; 422; 6934), son como sigue: • Identificar de modo integral los componentes estructurales y • • • • • • • • • funcionales codificados en un rango de organismos diversos desde el punto de vista biológico. Dilucidar la organización de redes genéticas y vías de proteína, y establecer de qué manera contribuyen a fenotipos celulares y de organismos. Crear una comprensión detallada de la variación hereditaria en genomas. Entender la variación evolutiva a través de las especies y los mecanismos que fundamentan esta variación. Crear opciones de política que faciliten el uso difundido apropiado de genómica en situaciones tanto de investigación como clínicas. Crear estrategias robustas para identificar las contribuciones genéticas a la respuesta a enfermedad y medicamentos. Identificar variantes de gen que contribuyen a buena salud y resistencia a enfermedad. Crear métodos basados en genoma para la predicción de susceptibilidad a enfermedad y respuesta a fármacos, la detección temprana de enfermedad, y la delineación de la taxonomía molecular de estados morbosos. Explotar nueva información sobre genes y vías para la creación de métodos terapéuticos más eficaces para enfermedad. Determinar de qué modo la información sobre el riesgo genético debe comunicarse en situaciones clínicas, y cómo esa información debe guiar estrategias y conducta en cuanto a salud. Las oportunidades ofrecidas por la revolución genómica en avance presentarán a la sociedad profundos desafíos en las áreas de ética, derecho y política pública. Los primeros presagios de estos desa­ fíos pueden vislumbrarse en las controversias activas respecto de alimentos modificados genéticamente, la clonación de animales en­ teros y la utilización de células madre embrionarias humanas en investigación. La información que está por llegar acerca de las con­ tribuciones moleculares y genéticas a rasgos y conducta humanos, así como a la salud física o a enfermedad, exigirá la creación de una nueva generación de políticas nacionales e internacionales en las áreas de derecho, medicina, agricultura, etcétera. BIOINFORMÁTICA Explota las formidables capacidades de almacenamiento y procesa­ miento de información de la computadora para crear recursos para la recolección, la compaginación, la recuperación y el análisis de datos biológicos a escala masiva. Es posible tener acceso a muchos recursos bioinformáticos (véase más adelante) mediante Internet, que los proporciona con alcance y repercusiones mundiales. El ob­ jetivo central de un proyecto de bioinformática típico es montar toda la información disponible relevante para un tema particular en una ubicación única, lo que suele denominarse una biblioteca o base de datos, en un formato uniforme que haga que los datos se presten a manipulación y análisis por medio de algoritmos de computadora. 27/11/09 13:56:20 86 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas El tamaño y las capacidades de las bases de datos bioinformáti­ cas pueden variar ampliamente en función del alcance y la naturale­ za de sus objetivos. La base de datos PubMed (http://www.ncbi.nlm. nih.gov/sites/entrez?db=pubmed) compila citas de todos los artícu­ los publicados en miles de revistas dedicadas a la investigación bio­ médica y biológica. En la actualidad PubMed contiene más de 17 millones de citas. En contraste, la página principal de Cytochrome P450 (http://drnelson.utmem.edu/CytochromeP450.html) se confi­ na a los alrededor de 6 000 miembros de la familia de enzimas cito­ cromo P450 que participan en el metabolismo de muchos medica­ mentos y otros xenobióticos (cap. 53). La construcción de una base de datos integral y fácil de usar plantea muchos desafíos. En primer lugar, la información biomédi­ ca viene en una amplia variedad de formas. Por ejemplo, la informa­ ción sobre codificación en un genoma, aun cuando es voluminosa, está compuesta de secuencias lineales simples de cuatro bases de nucleótidos. Si bien el número de residuos aminoácidos que define la estructura primaria de una proteína es pequeño en comparación con el número de pares de bases en un genoma, una descripción de la estructura de rayos X de una proteína requiere que la localización de cada átomo se especifique en un espacio tridimensional. En segundo lugar, anticipar la manera en la cual los usuarios pueden desear investigar o analizar la información dentro de una base de datos, e idear algoritmos para manejar estas variables, puede resultar en extremo desafiante. Por ejemplo, incluso en la tarea sim­ ple de investigar una base de datos de genes por lo general se em­ plean, solos o en diversas combinaciones, criterios tan diversos como el nombre del gen, el nombre de la proteína para la cual codi­ fica, la función biológica del producto del gen, una secuencia de nucleótidos dentro del gen, una secuencia de aminoácidos dentro de la proteína para la cual codifica, el organismo en el cual está pre­ sente o el nombre de un investigador que trabaja en ese gen. Los investigadores que desean determinar si las repercusiones de un po­ limorfismo genético sobre la longevidad están influidas por la natu­ raleza del clima donde reside una persona quizá hagan necesario comparar datos provenientes de múltiples bases de datos. De modo similar, puede aplicarse un rango diverso de criterios cuando se des­ criben los sujetos de un estudio biomédico: estatura; peso; edad; género; índice de masa corporal; dieta; grupo étnico; antecedentes médicos; profesión; uso de fármacos o drogas, alcohol o productos del tabaco; ejercicio; presión arterial; hábitat; estado marital; tipo de sangre; concentración sérica de colesterol, etcétera. RECURSOS BIOINFORMÁTICOS Y GENÓMICOS La gran colección de bases de datos que se han creado para el monta­ je, la anotación, el análisis y la distribución de datos biológicos y bio­ médicos refleja el alcance y la variedad de investigación molecular, bioquímica, epidemiológica y clínica contemporánea. A continua­ ción se listan ejemplos de recursos de bioinformática importantes. GenBank, UniProt y la Protein Database (PDB) Representan tres de las bases de datos de bioinformática más anti­ guas y más ampliamente usadas. Se complementan entre sí al enfo­ 10 Bender.indd 86 carse en un aspecto diferente de la estructura macromolecular. Los orígenes de la UniProt Knowledgebase (http://www.pir.uniprot. org/) se remontan hasta el Atlas of Protein Sequence and Structure, enciclopedia impresa de secuencias de proteínas, publicada por vez primera en 1968 por Margaret Dayhoff y la National Biomedical Research Foundation en la Georgetown University. El objetivo del atlas fue facilitar estudios de evolución de proteínas usando las secuen­ cias de aminoácidos que se están generando como consecuencia de la creación del método de Edman para la secuenciación de proteínas (cap. 4). En asociación con el Martinsreid Institute for Protein Sequences y la International Protein Information Database de Japón, el atlas hizo la transición hacia la forma electrónica como la Protein Information Resource (PIR) Protein Sequence Database en 1984. En 2002, la PIR integró su base de datos de secuencia y función de pro­ teínas con la base de datos de proteínas Swiss­Prot, establecida por Amos Bairoch en 1986 bajo los auspicios del Swiss Institute of Bioinformatics y el European Bioinformatics Institute, para formar el re­ curso más integral del mundo sobre estructura y función de proteí­ nas, la UniProt Knowledgebase. GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/), la base de datos de secuencia genética, de los National Institutes of Health’s (NIH), es una colección de secuencias de nucleótidos y sus traduc­ ciones. GenBank, establecido en 1979 por Walter Goad de Los Alamos National Laboratory, en la actualidad es mantenido por el National Center for Biotechnology Information en los NIH. GenBank constituye una de las piedras angulares de la International Sequence Database Collaboration, consorcio que incluye la DNA Database of Japan y el European Molecular Biology Laboratory. La Protein Database (http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do), depositario de las estructuras tridimensionales de proteínas, los oli­ gonucleótidos y otras macromoléculas biológicas, fue establecida en 1971 por Edgar Meyer y Walter Hamilton de los Brookhaven National Laboratories. En 1998, la responsabilidad de la PDB se transfirió a la Research Collaboration for Structural Bioinformatics formada por la Rutgers University, la University of California en San Diego, y la University of Wisconsin. La HapMap Database Aun cuando la secuencia del genoma de cualesquiera dos sujetos es 99.9% idéntica, el DNA humano contiene alrededor de 10 millo­ nes de sitios en los cuales los individuos difieren por una base de nucleótido único. Estos sitios se llaman polimorfismos de un solo nucleótido (SNp). Cuando los grupos SNP localizados en el mismo cromosoma se heredan juntos en bloques, el modelo de SNP en cada bloque se llama un haplotipo. Al comparar las distribuciones de haplotipos en grupos de individuos con o sin una enfermedad o respuesta dada, los científicos biomédicos pueden identificar SNP que muestran vínculo con rasgos fenotipos específicos. Este proceso se puede facilitar al enfocarse en SNp marca, subgrupo de SNP en un bloque dado suficiente para proporcionar un marcador singular para un haplotipo determinado. El estudio detallado de cada región debe revelar variantes en genes que contribuyen a una enfermedad o respuesta específica. En 2002, científicos de Estados Unidos, Canadá, China, Japón, Nigeria y el Reino Unido lanzaron el International HapMap Project (http://www.hapmap.org), esfuerzo integral por identificar SNP re­ lacionados con enfermedades frecuentes de seres humanos y respuestas 27/11/09 13:56:21 capítulo 10 Bioinformática y biología computacional 87 diferenciales a compuestos farmacéuticos. El mapa de haplotipo (HapMap) resultante debe llevar al diagnóstico más temprano y preciso, y se espera que también dé pie a mejoras en la prevención y el manejo del paciente. El conocimiento del perfil genético de un sujeto también se empleará para guiar la selección de medicamentos o vacunas seguros y eficaces, proceso llamado farmacogenómica. Estos marcadores genéticos también proporcionarán marcas con las cuales identificar y rastrear genes específicos a medida que los cien­ tíficos tratan de aprender más acerca de los procesos cruciales de la herencia y la selección genéticas. ciales exige que el usuario solicite autorización a un comité de ac­ ceso a datos. Otras bases de datos que tratan de genética y salud humanas son Online Mendelian Inheritance in Man (http://www.ncbi.nlm. nih.gov/sites/entrez?db=omim), la Human Gene Mutation Database (http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php), el Cancer Genome Atlas (http://cancergenome.nih.gov/) y GeneCards (http://www.gene­ cards.org/), que trata de reunir cualquier información importante acerca de un gen dado a partir de bases de datos de todo el mundo, para crear una “ficha” única y completa para cada gen. El ENCODE Project BIOLOGÍA COMPUTACIONAL La identificación de todos los elementos funcionales del genoma ex­ tenderá mucho la comprensión de los eventos moleculares que fun­ damentan el desarrollo, la salud y la enfermedad de seres humanos. Para abordar este objetivo, a finales de 2003, el National Human Genome Research Institute (NHGRI) inició el ENCODE (Encyclopedia Of DNa Elements) Project. Con sede en la University of California en Santa Cruz, ENCODE (http://www.genome.gov/10005107) es un esfuerzo colaborativo que combina métodos de laboratorio y com­ putacionales para identificar cada elemento funcional en el genoma humano. Investigadores del consorcio con diversos trasfondos y ex­ periencia colaboran en la creación y evaluación de nuevas técnicas, tecnologías y estrategias de alta capacidad de procesamiento para abordar las deficiencias actuales en la capacidad para identificar ele­ mentos funcionales. En la fase piloto de ENCODE se establecerá como objetivo al­ rededor de 1% (30 Mb) del genoma humano para análisis compu­ tacional y experimental rigurosos. El consorcio confronta muchos desafíos. Además del tamaño total del genoma humano y la natura­ leza críptica de gran parte de su secuencia, es necesario que los cien­ tíficos afronten las variaciones de la función del genoma que carac­ terizan a diferentes tipos de célula y etapas del desarrollo. Dada la complejidad de los problemas, está claro que ningún método expe­ rimental o tipo de célula único bastará para proporcionar una pers­ pectiva general completa de las interrelaciones entre la secuencia, la estructura y la función del genoma. Entrez Gene y dbGAP Entrez Gene (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=gene), base de datos mantenida por el National Center for Biotechnology Information (NCBI), proporciona información variada acerca de ge­ nes humanos individuales. La información comprende la secuencia del genoma en el gen y alrededor del mismo, la estructura del gen (fronteras de exón­intrón), la secuencia de los mRNA producidos a partir del gen, y cualesquiera fenotipos relacionados con una muta­ ción dada. Entrez Gene también lista, cuando se conoce, la función de la proteína codificada, y las repercusiones de polimorfismos de un solo nucleótido conocidos en la región codificadora. Una base de datos del NCBI que complementa a Entrez Gene es dbGAP, la Database of Genotype and Phenotype (http://www. ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?db=gap). La dbGAP compila los re­ sultados de investigación sobre los enlaces entre genotipos y feno­ tipos específicos. Para proteger datos clínicos confidenciales, la información contenida en dbGAP está organizada en secciones de acceso abierto y de acceso controlado. El acceso a datos confiden­ 10 Bender.indd 87 Su objetivo primario es crear modelos de computadora que apli­ quen principios físicos, químicos y biológicos que reflejen la con­ ducta de moléculas y procesos biológicos. Al contrario de la bioin­ formática, cuyo principal enfoque es la reunión y evaluación de los datos existentes, la biología computacional es de naturaleza experi­ mental y exploradora. Al efectuar experimentos y análisis virtuales en forma de programas informáticos (in silico), la biología computa­ cional ofrece la promesa de acelerar mucho el ritmo y la eficiencia de los descubrimientos científicos. Los biólogos computacionales están intentando crear modelos predictivos que permitirán 1) determinar de manera directa la es­ tructura tridimensional de una proteína a partir de su secuencia primaria; 2) determinar la función de proteínas desconocidas a par­ tir de su secuencia y estructura; 3) investigar inhibidores potencia­ les de una proteína en forma de programas informáticos, y 4) cons­ truir células virtuales que reproduzcan la conducta y predigan las respuestas de sus homólogos vivos a agentes patógenos, toxinas, die­ ta y fármacos. La creación de algoritmos de computadora que imiten la conducta de proteínas, enzimas, células, etc., incrementa­ rá la rapidez, eficiencia y seguridad de la investigación biomédica. La biología computacional también permitirá a los científicos llevar a cabo experimentos en forma de programas informáticos, cuyo al­ cance, peligro o naturaleza los haga inaccesibles, o inapropiados, para métodos de laboratorio o clínicos convencionales. IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS MEDIANTE HOMOLOGÍA Un método importante para la identificación, también denominado anotación, de proteínas y productos de gen nuevos es por medio de comparación con proteínas de secuencia o estructura conocida. Di­ cho de modo sencillo, las búsquedas de homología y las compara­ ciones de secuencia múltiple operan con base en el principio de que las proteínas que desempeñan funciones similares compartirán do­ minios conservados u otras características de secuencias o motivos, y viceversa (fig. 10­1). De los muchos algoritmos creados para este propósito, el más ampliamente usado es el BlaSt. Los orígenes del Basic Local Alignment Search Tool (BlaSt) y otros algoritmos de comparación/alineación de secuencia se re­ montan a los esfuerzos de los primeros biólogos moleculares por determinar si las similitudes observadas en la secuencia entre pro­ teínas que desempeñaban funciones metabólicas paralelas eran in­ dicativas de cambio progresivo desde un origen común. La principal 27/11/09 13:56:23 88 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas Idioma Palabra Inglés Francés Alemán Holandés Español Polaco PHYSIOLOGICAL PHYSIOLOGIQUE PHYSIOLOGISCH FYSIOLOGISCH FISIOLOGICO FIZJOLOGICZNY Alineación FIGURA 10-1 Representación de una alineación de secuencia múltiple. Los idiomas evolucionan de un modo que imitan la manera en que lo hacen los genes y las proteínas. Aquí se muestra la palabra physiological del inglés en varios idiomas. La alineación demuestra sus características conservadas. Las identidades con la palabra en inglés se muestran en color rojo oscuro; las similitudes lingüísticas en color rojo claro. Los algoritmos de alineación de secuencia múltiple identifican letras de nucleótido y aminoácidos conservadas en DNA, RNA y polipéptidos de un modo análogo. pregunta evolutiva abordada fue si las similitudes reflejaban 1) des­ cendencia desde una proteína ancestral común (evolución diver­ gente) o 2) la selección independiente de un mecanismo común para satisfacer alguna necesidad celular específica (evolución con­ vergente), como se anticiparía si una solución particular fuera abru­ madoramente superior a las alternativas. El cálculo del número mínimo de cambios de nucleótido necesario para interconvertir iso­ formas de proteína putativas permite inferir si las similitudes y dife­ rencias muestran o no un modelo que indique cambio progresivo desde un origen compartido. EL BLAST ha evolucionado hacia una familia de programas optimizados para abordar necesidades y conjuntos de datos especí­ ficos. De esta manera, blastp compara una secuencia de consulta de aminoácidos contra una base de datos de secuencia de proteína, blastn compara una secuencia de consulta de nucleótido contra una base de datos de secuencia de nucleótido, blastx compara una se­ cuencia de consulta de nucleótidos traducida en todos los marcos de lectura contra una base de datos de secuencia de proteína para reve­ lar productos de traducción potenciales, tblastn compara una se­ cuencia de consulta de proteína contra una base de datos de secuen­ cia de nucleótido traducidos dinámicamente en los seis marcos de lectura, y tblastx compara las traducciones de seis armazones de una secuencia de consulta de nucleótido contra las traducciones de seis armazones de una base de datos de secuencia de nucleótido. Al con­ trario de los programas de alineación de secuencia múltiple que se fundamentan en alineaciones globales, en los algoritmos de BlaSt se recalcan regiones de alineación local para detectar vínculos entre secuencias con sólo regiones de similitud aisladas. Este método pro­ porciona rapidez y sensibilidad aumentada para relaciones de se­ cuencia distantes. Las secuencias de entrada o “consulta” se frag­ mentan hacia “palabras” (tamaño por omisión 11 para nucleótidos, 3 para aminoácidos); entonces, los aciertos de palabra a bases de datos se extienden en ambas direcciones. IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS “DESCONOCIDAS” Una porción considerable de los genes descubiertos mediante pro­ yectos de secuenciación de genomas codifican para proteínas “des­ 10 Bender.indd 88 conocidas” o hipotéticas, proteínas de función o estructura desco­ nocida, para las cuales se carece de homólogos de función conocida. Los científicos bioinformáticos están creando instrumentos para permitir a otros científicos deducir, a partir de las secuencias de aminoácidos de proteínas desconocidas, su estructura tridimensio­ nal y función. Hoy, la lista de proteínas desconocidas descubiertas por medio de genómica contiene miles de entradas; se están aña­ diendo nuevas entradas conforme se resuelven más secuencias del genoma. La capacidad para generar estructuras e inferir la función en forma de programas informáticos promete acelerar de modo im­ portante la identificación de proteína, y proporcionar información acerca del mecanismo mediante el cual las proteínas se pliegan. Este conocimiento ayudará a entender los mecanismos subyacentes de diversas enfermedades que dependen del plegado de proteínas, y ayudará a los ingenieros moleculares a diseñar nuevas proteínas para efectuar funciones nuevas. La comparación de proteínas cuyas estructuras tridimensiona­ les se han determinado por medio de cristalografía con rayos X o espectroscopia con NMR puede revelar modelos que enlazan carac­ terísticas de secuencia primaria específicas con estructuras prima­ ria, secundaria y terciaria específicas, a veces llamado código de plegado. En los primeros algoritmos se usó la frecuencia con la cual existían aminoácidos individuales en hélices α, hojas β, giros y asas, para predecir la topografía de estructura secundaria de un polipép­ tido. Por ejemplo, se predijo que un segmento de secuencia de pro­ teína con alto contenido de aminoácidos a menudo encontrado en hélices α adopta esta conformación. Al extender este proceso, por ejemplo, al sopesar las repercusiones de interacciones hidrofóbicas en la formación del centro de la proteína, se están creando algorit­ mos de notoria fiabilidad predictiva. Con todo, si bien los programas actuales tienen buen desempeño en la generación de las conforma­ ciones de proteínas formadas de dominios únicos, aún es proble­ mático proyectar la estructura probable de proteínas de membrana y las compuestas de múltiples dominios. Los científicos también están intentando discernir modelos entre la estructura tridimensional y la función fisiológica. Cuando es posible determinar o predecir una estructura tridimensional completa, la superficie de la proteína se puede escanear para deter­ minar los tipos de bolsas y hendiduras indicativos de probables sitios de unión para sustratos, efectores alostéricos, etc. La forma de la bolsa y la distribución de los aminoácidos hidrofóbicos, hi­ drofílicos y en potencia cargados dentro de ella pueden usarse en­ tonces para inferir la estructura de la biomolécula que se une o se “acopla” en ese sitio. La representación llenadora de espacio de la enzima HMG­CoA reductasa y su complejo con el medicamento lovastatina (fig. 10­2), proporciona cierta perspectiva acerca de los desafíos inherentes a la identificación de sitios de unión a ligando a partir de cero. DISEÑO DE FÁRMACOS AUXILIADO POR COMPUTADORA En el Computer-Aided Drug Design (caDD) se emplea el mismo tipo de algoritmos de acoplamiento molecular usados para identifi­ car ligandos para proteínas desconocidas. Aun así, en este caso el conjunto de ligandos potenciales por considerar no se confina a los que existen en la naturaleza, y es auxiliado mediante el conocimien­ 27/11/09 13:56:27 capítulo 10 89 Bioinformática y biología computacional FIGURA 10-2 Representaciones de llenado de espacio de la HMG-CoA reductasa homodimérica de Pseudomonas mevalonii con (derecha) y sin (izquierda) el medicamento estatina lovastatina unido. Cada átomo está representado por una esfera del tamaño de su radio de Waals. Las dos cadenas polipeptídicas están resaltadas con color gris y azul. Los átomos de carbono de la lovastatina se muestran con color negro, y los átomos de oxígeno en rojo. Compare este modelo con las representaciones de esqueleto de proteínas mostradas en los capítulos 5 y 6. (Adaptado de Protein Data Bank ID no. 1t02.) to empírico de la estructura o de las características funcionales de la proteína establecida como objetivo. Para proteínas de estructura tridimensional conocida, en los métodos de acoplamiento molecular se emplean programas que in­ tentan adaptar una serie de ligandos potenciales “clavijas” hacia un sitio de unión designado “agujero” en la plantilla de una proteína. Para identificar ligandos óptimos, los programas de acoplamiento han de tomar en cuenta tanto la coincidencia de formas como atri­ butos hidrofóbicos, hidrofílicos y de carga complementarios. Las afinidades de unión de los inhibidores seleccionados con base en estudios de acoplamiento tempranos fueron desalentadoras, dado que los modelos rígidos para proteínas y ligandos empleados fueron incapaces de replicar los cambios conformacionales que sobrevie­ nen tanto en el ligando como en la proteína como una consecuencia de unión, fenómeno denominado adaptación inducida (cap. 7). Como quiera que sea, dotar a proteínas y ligandos de flexibili­ dad conformacional requiere de un poder de computación masivo. De esta manera, se han creado métodos híbridos que emplean un conjunto de plantillas que representan conformaciones un poco diferentes de la proteína (fig. 10­3) y conjuntos de conformadores de ligando (fig. 10­4) o ligandos en los cuales sólo se permite que algunos enlaces seleccionados roten con libertad. Una vez que se ha estrechado el conjunto de ligandos potenciales, es posible em­ prender análisis de acoplamiento más complejos para identificar ligandos de afinidad alta capaces de interactuar con su blanco pro­ teínico a través del espectro de estados conformacionales de este último. Cuando no se dispone de plantilla estructural para la proteí­ na de interés, es factible emplear computadoras para ayudar a la búsqueda de inhibidores de alta afinidad al calcular y proyectar 10 Bender.indd 89 FIGURA 10-3 Representación bidimensional de un grupo de conformadores de una proteína. Note de qué modo la forma del sitio de unión cambia. vínculos entre estructura y actividad (SaR). Las afinidades de unión para varios inhibidores conocidos se comparan y contras­ tan con el fin de determinar las contribuciones termodinámicas positivas o negativas con las cuales contribuyen características clí­ nicas específicas para la unión a ligando. Esta información se usa para identificar compuestos que ofrecen la mejor combinación de características. BIOLOGÍA DE SISTEMAS Y CÉLULAS VIRTUALES ¿Qué sucedería si con sólo ingresar la consulta apropiada en una computadora, un científico pudiera detectar, en pocos momentos, el efecto de inhibir una enzima particular, o remplazar a un gen deter­ minado, la respuesta de una célula muscular a la insulina, la prolife­ ración de una célula cancerosa, o la producción de amiloide β? El objetivo de la biología de sistemas es construir modelos de compu­ 27/11/09 13:56:31 90 SEccIÓN I Estructuras y funciones de proteínas y enzimas H CH OH 2 O OH H H HO OH HO H H H H HO OH CH OH 2 O H OH H OH H H OH 2 HO O OH CH H H H OH HO H FIGURA 10-4 Conformadores de un ligando simple. Se muestran tres de las muchas conformaciones de la glucosa, por lo común llamadas silla (arriba), bote retorcido (twist boat) (en medio) y media silla (abajo). Note las diferencias no sólo en la forma y lo compacto, sino también en la posición de los grupos hidroxilo, los participantes potenciales en enlaces de hidrógeno, como se pone de relieve en color rojo. tadora que reproduzcan con fidelidad y predigan la conducta de unidades funcionales específicas que varían desde las enzimas y los metabolitos en una vía biosintética, pasando por la red de proteínas que controla el ciclo de división celular, hasta células y organismos enteros. Al construir redes moleculares virtuales, los científicos han lo­ grado determinar de qué modo las cianobacterias construyen un reloj circadiano fiable usando sólo cuatro proteínas. Modelos de la vía de emisión de señales de receptor de célula T han revelado de qué manera estos circuitos moleculares se han ordenado para pro­ ducir respuestas parecidas a conmutador en el momento de la esti­ mulación por complejos de péptido agonista­complejo principal de histocompatibilidad (MHC) sobre una célula presentadora de antí­ geno. Del mismo modo que una persona construye un rompecabe­ zas, en parte, al buscar en las piezas restantes coincidencias con los vacíos en el rompecabezas, los científicos también pueden usar los vacíos encontrados en el modelado de sistemas moleculares y celulares para guiar la identificación y anotación de las piezas de proteína restantes. Este método de ingeniería inversa se ha usado con buenos resultados para definir la función de las glicerato 2­ci­ nasas tipo II en bacterias, y para identificar genes “faltantes” que codifican para la síntesis y el transporte de folato en plantas. Recien­ temente, los científicos han logrado crear de manera exitosa una red metabólica sostenible, compuesta de cerca de 200 proteínas, un paso importante hacia la creación de una célula virtual. El “Santo Grial” de los biólogos de sistemas es replicar la con­ ducta de células humanas vivas en forma de programas informáti­ cos. Los beneficios potenciales de esas células virtuales serán enor­ mes. No sólo permitirán identificar sitios óptimos para intervención terapéutica de un modo rápido y sin sesgos, sino que los efectos se­ 10 Bender.indd 90 cundarios no intencionales pueden revelarse antes de la decisión de invertir tiempo y recursos en la síntesis, el análisis y los estudios de un farmacóforo potencial. La capacidad para efectuar investiga­ ción toxicológica rápida y económica de materiales que varían des­ de herbicidas hasta cosméticos beneficiará la salud de los seres hu­ manos. Las células virtuales también son útiles en el diagnóstico. Al manipular una célula virtual para que reproduzca el perfil metabó­ lico de un enfermo, quizá se revelen anormalidades genéticas subya­ centes. Es factible analizar de manera sistemática la interrelación de los diversos factores ambientales, de la dieta y genéticos que contri­ buyen a enfermedades multifactoriales como el cáncer. Estudios preliminares de terapias génicas potenciales pueden evaluarse con seguridad y rapidez en forma de programas informáticos. La duplicación de una célula viva en forma de programas infor­ máticos representa una empresa en extremo formidable. No sólo es necesario que la célula virtual posea todas las proteínas y todos los metabolitos para el tipo de célula que se va a modelar (p. ej., de ce­ rebro, hígado, nervio, músculo o adipocito), sino que éstos deben estar presentes en la concentración y la ubicación subcelular apro­ piadas. El modelo también ha de tomar en cuenta la dinámica fun­ cional de sus componentes, afinidades de unión, eficiencia catalíti­ ca, modificaciones covalentes, etc. Hacer a una célula virtual capaz de dividirse o diferenciarse conllevará otro enorme salto de comple­ jidad y sofisticación. CONCLUSIÓN Los campos en rápida evolución de la bioinformática y la biología computacional hacen promesas sin precedente para el futuro tanto de la medicina como de la biología básica. Algunas promesas en la actualidad se perciben de manera clara, otras vagamente, mientras que algunas más ni siquiera se han imaginado. Un objetivo impor­ tante de los biólogos computacionales es crear recursos de compu­ tadora que incrementarán la eficiencia, eficacia y rapidez de la crea­ ción de medicamentos. Parece haber pocas dudas respecto de que sus repercusiones sobre el ejercicio de la medicina durante el siglo xxi igualarán o sobrepasarán las del descubrimiento de la patogenia bacteriana en el siglo xix. RESUMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ La genómica ha proporcionado una cantidad masiva de información de gran valor potencial para científicos y médicos. La bioinformática comprende el diseño de algoritmos de computadora y la construcción de bases de datos que permiten a los científicos tener acceso a la avalancha creciente de datos biomédicos y analizarlos. Los desafíos importantes en la construcción de bases de datos fáciles de emplear incluyen idear medios para almacenar y organizar datos complejos que se adaptan a una amplia gama de criterios de búsqueda potenciales. El objetivo del Encode Project es identificar todos los elementos funcionales dentro del genoma humano. Las bases de datos HapMap, Entrez Gene y dbGAP contienen datos respecto del vínculo entre mutaciones genéticas y estados patológicos. En la biología computacional se usan algoritmos de computadora para identificar proteínas desconocidas y llevar a cabo experimentos virtuales. BLAST se usa para identificar proteínas y genes desconocidos al buscar homólogos de secuencia de función conocida. 27/11/09 13:56:34 capítulo 10 ■ ■ ■ ■ Los biólogos computacionales están creando programas que predecirán la estructura tridimensional de proteínas directamente a partir de su secuencia primaria. El diseño ayudado por computadora acelera el descubrimiento de fármacos al tratar de acoplar inhibidores potenciales a blancos proteínicos seleccionados en forma de programas informáticos. Un objetivo principal de los biólogos de sistemas es crear modelos fieles de vías y redes individuales para dilucidar principios funcionales y efectuar experimentos virtuales. El objetivo final de los biólogos de sistemas es crear células virtuales que puedan usarse para diagnosticar y tratar enfermedades con mayor seguridad y eficiencia, en especial las de una naturaleza multifactorial. REFERENCIAS Altschul, SF et al: Basic local alignment search tool. J Mol Biol 1990;215:403. 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Curr Protein Pept Sci 2007;8:381. 27/11/09 13:56:35 Sección ii Bioenergética y el metaBoliSmo de carBohidratoS y lípidoS c Bioenergética: la función del ATP 11 A P í T u l o Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA La bioenergética, o termodinámica bioquímica, es el estudio de los cambios de energía que acompañan a reacciones bioquímicas. Los sistemas biológicos son en esencia isotérmicos y usan energía química para impulsar procesos vivos. El modo en que un animal obtiene combustible idóneo a partir de sus alimentos para proporcionar esta energía es básico para el entendimiento de la nutrición y el metabolismo normales. La muerte por inanición ocurre cuando se agotan las reservas de energía disponibles, y ciertas formas de malnutrición se relacionan con desequilibrio de energía (marasmo). Las hormonas tiroideas controlan el índice de liberación de energía (índice metabólico) y sobreviene enfermedad cuando funcionan mal. El almacenamiento excesivo de energía excedente causa obesidad, misma que es cada vez más común en la sociedad occidental, padecimiento que predispone a muchas enfermedades, como enfermedad cardiovascular y diabetes mellitus tipo 2, además de que disminuye la esperanza de vida del individuo. LA ENERGÍA LIBRE ES LA ENERGÍA ÚTIL EN UN SISTEMA El cambio de energía libre de Gibbs (ΔG) es la porción del cambio de energía total en un sistema que está disponible para desempeñar trabajo, es decir, la energía útil, también conocida como el potencial químico. Los sistemas biológicos se conforman a las leyes generales de la termodinámica La primera ley de la termodinámica establece que la energía total de un sistema, incluso sus alrededores, permanece constante. Eso implica que dentro del sistema total, la energía no se pierde ni se gana durante cambio alguno; sin embargo, sí se puede transferir de una porción del sistema a otra, o transformarse en otra forma de energía. En sistemas vivos, la energía química se transforma hacia calor o hacia energías eléctrica, radiante o mecánica. La segunda ley de la termodinámica establece que para que un proceso ocurra de manera espontánea, es necesario que la entropía total de un sistema aumente. La entropía es la extensión de trastorno o de aleatoriedad del sistema y alcanza su punto máximo conforme alcanza el equilibrio. En condiciones de temperatura y presión constantes, el vínculo entre el cambio de energía libre (ΔG) de un sistema que está reaccionando y el cambio de entropía (ΔS) se expresa por medio de la ecuación que sigue, que combina las dos leyes de la termodinámica: ΔG = ΔH - TΔS donde ΔH es el cambio de la entalpía (calor) y T es la temperatura absoluta. En reacciones bioquímicas, dado que ΔH es aproximadamente igual a ΔE, el cambio total de energía interna de la reacción, la relación anterior puede expresarse como sigue: ΔG = ΔE - TΔS Si ΔG es negativa, la reacción procede de modo espontáneo con pérdida de la energía libre; esto es, es exergónica. Si, además, ΔG es de gran magnitud, la reacción avanza casi hasta completarse y es, en esencia, irreversible. Por otra parte, si ΔG es positiva, la reacción sólo procede si es factible ganar energía libre; de modo que es endergónica. Si, además, ΔG es de gran magnitud, el sistema es estable, con poca o ninguna tendencia a que ocurra una reacción. Si ΔG es de cero, el sistema está en equilibrio y no tiene lugar un cambio neto. 92 11 Bender.indd 92 27/11/09 13:58:49 capítulo 11 Cuando los reactivos están presentes en concentraciones de 1.0 mol/L, ΔG0 es el cambio de energía libre estándar. Para reacciones bioquímicas, un estado estándar es definido como tener un pH de 7.0. El cambio de energía libre estándar a tal estado estándar es indicado por ΔG0ʹ. El cambio de energía libre estándar puede calcularse a partir de la constante de equilibrio Keq. ΔG0ʹ = -RT ln K’eq donde R es la constante gaseosa y T es la temperatura absoluta (cap. 8). Es importante notar que la ΔG real puede ser mayor o menor que ΔG0ʹ, según las concentraciones de los diversos reactivos, incluso el solvente, diversos iones y proteínas. En un sistema bioquímico, una enzima sólo acelera el logro del equilibrio; nunca altera las concentraciones finales de los reactivos en equilibrio. 93 reacciones exergónicas reciben el nombre de catabolismo (en general, la desintegración u oxidación de moléculas de combustible), en tanto que las reacciones sintéticas que acumulan sustancias se llaman anabolismo; los procesos catabólico y anabólico combinados constituyen el metabolismo. Si la reacción que se muestra en la figura 11-1 va de izquierda a derecha, el proceso general debe acompañarse de pérdida de energía libre como calor. Un mecanismo posible de acoplamiento podría imaginarse si un intermediario (I) obligatorio común tomó parte en ambas reacciones, esto es, A+C→I→B+D Algunas reacciones exergónicas y endergónicas en sistemas biológicos están acopladas de este modo. Este tipo de sistema tiene un mecanismo integrado para el control biológico del índice de procesos oxidativos, puesto que el intermediario obligatorio común permite que el índice de utilización del producto de la vía sintética (D) determine mediante acción de masa el índice al cual se oxida A. LOS PROCESOS ENDERGÓNICOS En realidad, estos vínculos proporcionan una base para el concepto de control respiratorio, el proceso que evita que un organismo se PROCEDEN POR MEDIO DE consuma fuera de control. Las reacciones de deshidrogenación, que ACOPLAMIENTO A PROCESOS están acopladas a hidrogenaciones por medio de un acarreador inEXERGÓNICOS termedio (fig. 11-2), proporcionan una extensión del concepto de acoplamiento. Los procesos vitales —p. ej., reacciones sintéticas, contracción musUn método alternativo de acoplar un proceso exergónico a uno cular, conducción de impulsos nerviosos, transporte activo— obtiecHAPteR 11 energía Bioenergetics: The Roleen of ATP 93 endergónico es sintetizar un compuesto de alta potencial nen energía mediante enlace químico, o acoplamiento, a reacciones la reacción exergónica, e incorporar este nuevo compuesto hacia la oxidativas. En su forma más simple, este tipo de acoplamiento puereacción endergónica, lo que efectúa una transferencia de energía de representarse como lo muestra la figura 11-1. La conversión del libre adesde exergónicawhereas hacia la endergónica (fig. 11-3). Lathat venchemical reactions, a standard state is defined as having pH la vía molecules), the synthetic reactions build up submetabolito A en el metabolito B ocurre con liberación de energía taja biológica de este mecanismo es que el compuesto de energía of 7.0. The standard free-energy change at this standard state stances are termed anabolism. The combined catabolic and libre y está acoplada a otra reacción 0ʹen la cual se requiere energía liis denoted by ΔG . anabolic processes constitute metabolism. bre para convertir el metabolito C en el metabolito D. Los términos The standard change can be calculated from If the reaction shown in Figure 11–1 is to go from left to exergónico y endergónico, en lugar free-energy de los términos químicos northe equilibrium constant K . right, then Acarreador the overall process must AH BH2 be accompanied by loss 2 males “exotérmico” y “endotérmico”, indicaneqque un proceso está of free energy as heat. One possible mechanism of coupling acompañado de pérdida o ganancia, respectivamente, de energía liΔG0’ = -RT ln K’eq could be envisaged if a common obligatory intermediate (I) bre en cualquier forma, no siempre como calor. En la práctica, un A B H2 Acarreador took part in both reactions, ie, proceso endergónico existir de manera wherenoR puede is the gas constant and Tindependiente, is the absolute temperature sino que debe ser(Chapter un componente de un sistema FIGURA de deshidrogenación e 8). It is important to exergónico-endernote that the actual ΔG may be 11-2 Acoplamiento de reacciones A+C→I→B+D hidrogenación por medio de un acarreador intermedio. gónico acoplado larger donde or el cambio neto general es exergónico. Las 0ʹ smaller than ΔG depending on the concentrations of the various reactants, including the solvent, various ions, Some exergonic and endergonic reactions in biologic sysand proteins. tems are coupled in this way. This type of system has a built-in A A In a biochemical system, an enzyme only speeds up the mechanism for biologic control of the rate of oxidative proattainment of equilibrium; it neverCalor alters the final concentracesses, since the common obligatory intermediate allows the tions of the reactants at equilibrium. rate of utilization of the product of the synthetic path (D) to D determine by mass action the rate at which A is oxidized. InD deed, these relationships supply a basis for the concept of reE spiratory control, the process that prevents an organism from ENDERGONIC PROCESSES PROCEED BY burning out of control. An extension of the coupling concept COUPLING TO EXERGONIC PROCESSES is provided by dehydrogenation reactions, which are coupled Energía to hydrogenations by an intermediate carrier (Figure 11–2). The vitalicaprocesses—eg, synthetic reactions, muscular contracquímica E ón An alternative method of coupling an exergonic to an engnerve r tion, impulse conduction, active transport—obtain ende n E dergonic process is to synthesize a compound of high-energy ergy by chemical linkage, or coupling, to oxidative reactions. potential in the exergonic reaction and to incorporate this In its simplest form, this type of coupling may be represented new compoundB into the endergonic reaction, thus effecting a as shown in Figure 11–1. The conversion of metabolite A to C C B transference of free energy from the exergonic to the endermetabolite B occurs with release of free energy and is coupled A+C B + D + Calor gonic pathway (Figure 11–3). The biologic advantage of this FIGURA Transferencia de energía libre desde una reacción to another reaction in which free energy is required to con- 11-3 is that the compound of intermedio high potential energy, exergónica una endergónica mediante un compuesto FIGURA 11-1vert Acoplamiento exergónica una exergonic metabolitedeCuna to reacción metabolite D. Thea terms and haciamechanism alta energía (~E,). unlike I in the previous system, need not be structurally endergónica. endergonic, rather than the normal chemical terms de “exothermic” and “endothermic,” are used to indicate that a process Carrier AH2 BH2 is accompanied by loss or gain, respectively, of free energy in any form, not necessarily as heat. In practice, an endergonic process cannot exist independently, but must be a component A B H2 Carrier of a coupled exergonic-endergonic system where the overall net change is exergonic. The exergonic reactions are termed FIGURE 11–2 Coupling of dehydrogenation and hydrogenation 93 27/11/09 13:58:53 Energía libre Energía libre ca ni gó er Ex 11 Bender.indd Bioenergética: la función del ATP alters the muscular final concentraburning cesses, to out hydrogenations since of control. the common An by extension an intermediate obligatory of the intermediate carrier coupling (Figure concept allows 11–2). the contracCreactions, PROCESSES is provided rate of An utilization byalternative dehydrogenation of the method product reactions, of coupling of thewhich synthetic an exergonic are coupled path to (D) antoen- ctive transport—obtain ento hydrogenations determine dergonicby process mass by anaction isintermediate to synthesize the ratecarrier ata compound which (Figure A is oxidized. of 11–2). high-energy Inns, ling, muscular to oxidative contracreactions. deed, An potential alternative these relationships in method the exergonic ofsupply coupling reaction a basis an exergonic and for the to incorporate concept to an enof rethis oupling ransport—obtain may be represented endergonic spiratory new process compound control, is to synthesize into the process the endergonic a that compound prevents reaction, of an high-energy organism thus effecting from a nversion oES oxidative of metabolite reactions. A to PROCEED BY potential burning in out the of exergonic control. An reaction extension andtheof toexergonic the incorporate coupling concept thisendertransference of free energy from to the g f free may energy be represented and is coupled NIC PROCESSES Sección ii pathway Bioenergética y elendergonic metabolismo carbohidratos ywhich lípidos new iscompound provided by into dehydrogenation the reactions, thus effecting are coupled aof this gonic (Figure 11–3).de reaction, The biologic advantage onenergy of metabolite is required A94 toto con94 contracii mechanism Bioenergetics &is the Metabolism of Carbohydrates 94 Section Section ii of Bioenergetics & the Metabolism Carbohydrates &(Figure Lipids to hydrogenations by an intermediate carrier 11–2). transference free energy that the from compound theof exergonic of& Lipids high to potential the enderenergy, D. actions, energy The terms and muscular is exergonic coupled and potencial alta, ~ contrario I previous en elThe sistema previo, no necesita An alternative method of coupling an exergonic tothis anCuadro enpathway (Figure 11–3). biologic advantage E , al unlike I in de the system, need not beofstructurally 11-1 Energía libre estándar de hidrólisis ive al y is chemical transport—obtain requiredterms to con“exotheren- gonic relacionado de modo con A, of B,a high C o D,potential lo queofperdergonic is to synthesize compound high-energy mechanism isprocess thatestructural the compound energy,de algunos organofosfatos de importancia bioquímica d ng, terms totoindicate oxidative exergonic that reactions. and aestar process related to que A,in or allowing E as a transducer ofincorporate related to A, B, D, C, or D, allowing E to as desde a and transducer Carrier AH BHof mite sirva como un transductor deserve energía amplia 11–111–1 Standard Free Energy of Hydrolysis of of in the exergonic reaction tobe this ~B, EC, ,potential unlike I in the previous system, need notuna structurally TABLE Standard Free Energy of Hydrolysis 2 to serve 2TABLE mical spectively, pling terms may be of“exotherfree represented energy ΔG0’ energy from a wide range of exergonic reactions to an equally energy a wide range ofinto exergonic to de anamplia equally Organophosphates of Biochemical Importance Some of Biochemical Importance gama de from reacciones endergónicas hacia unareactions gama igual deeffecting new compound the endergonic reaction, thusSome a Organophosphates ndicate ersion In practice, of that metabolite a an process endergonic A to wide range of endergonic reactions processes, such as biowide of endergonic or from processes, such Carrier AH BH reacciones otransference procesos endergónicos, como biosíntesis, contracción free or energy the exergonic to the ender- Compuesto kJ/mol kcal/mol 2 of reactions 2as biovely, y, reebut energy ofmust freeand be energy aiscomponent coupled in range ΔG0’ ΔG0’ A B H2 Carrier syntheses, muscular contraction, nervous excitation, syntheses, muscular contraction, nervous and muscular, nerviosa y transporte activo. En la and célula viva, of this gonic pathway (Figure 11–3). The excitation, biologic advantage ic nergy actice, system isanrequired where endergonic the to overall con- excitación Fosfoenolpiruvato −61.9 −14.8 active transport. InFIGURE theInliving cell, the principal high-energy the11–2 cell, the principal Compound kJ/molkJ/mol kcal/mol Compound kcal/mol principal intermediario de altaCoupling energía odehydrogenation compuesto acarreador mechanism isliving that the compound of high-energy high potential energy, must The gonic terms bereactions a component exergonic areelactive termed and transport. and hydrogenation A B Carrier of H 2 intermediate or carrier compound (designated ~ E in Figure intermediate or carrier E Figure Carbamoil fosfato −51.4 −12.3 (designado la figura 11-3), es(designated elcarrier. trifosfato de in adenosina , en unlike in intermediate the previous system, ~ need not be structurally em down chemical where or terms oxidation the overall “exotherof fuel ~ E reactions byI compound an Phosphoenolpyruvate −61.9 −61.9 −14.8 −14.8 Phosphoenolpyruvate 11–3) is adenosine triphosphate (AtP). 11–3) is adenosine triphosphate (AtP). (atp). oreactions indicateare that termed a process FIGURE 11–2 Coupling of dehydrogenation and hydrogenation 1,3-bisfosfoglicerato −49.3 −11.8 Free energy Free energy Free energy Carbamoyl phosphate −51.4 −51.4 −12.3 −12.3 Carbamoyl phosphate Carrier AH2 BH2 (a 3-fosfoglicerato) ectively, or oxidation of freeofenergy fuel in reactions by an intermediate carrier. n practice, an endergonic 1,3-Bisphosphoglycerate −49.3 −49.3 1,3-Bisphosphoglycerate Creatina fosfato −43.1 −11.8 −11.8 −10.3 HIGH-ENERGY PHOSPHATES PLAY A A HIGH-ENERGY PHOSPHATES PLAY LOS FOSFATOS (to 3-phosphoglycerate) ADE ALTA ENERGÍA TIENEN (to 3-phosphoglycerate) but must be a component A B H2 Carrier −32.2 −7.7 Heat CENTRAL ATP → AMP + PPi ROLE IN FUNDAMENTAL ENERGY CAPTURE ROLE IN ENERGY CAPTURE system whereCENTRAL the overall FUNCIÓN UNA EN LA Creatine phosphate −43.1 −43.1 −10.3 −10.3 Creatine phosphate A TRANSFER AND TRANSFER onic reactions AND are termed −30.5 −7.3 ATP → ADP + Pi FIGURE Coupling of dehydrogenation and hydrogenation CAPTACIÓN Y 11–2 LA TRANSFERENCIA D −32.2 −32.2 −7.7 −7.7 ATP →ATP AMP PPi + PPi →+AMP Heat own or oxidation of fuel reactions by an intermediate carrier. Glucosa 1-fosfato −20.9 −5.0 DE In order toENERGÍA maintain livingliving processes, all organisms must must ob- ob- ATP →ATP In order to maintain processes, all organisms −30.5 −30.5 −7.3 −7.3 Pi + Pi D ADP→+ ADP D tain supplies of freeof energy from from their their environment. Autotain supplies free energy environment. Auto−19.2 −4.6 PPi E Atrophic finorganisms de mantener procesos vivos, todos los organismos 1-phosphate −20.9 −20.9 −5.0 −5.0 1-phosphate trophic utilize simple exergonic processes; eg,deben theeg, obteorganisms utilize simple exergonic processes; the GlucoseGlucose D 6-fosfato −15.9 −3.8 ner libre(green desde su ambiente. Los 2+ 2+ 3+ energy ofenergía sunlight plants), the reaction Fe→ Fe3+ PPi PPFructuosa energy of sunlight (green plants), theorganismos reaction Feautotróficos −19.2 −19.2 −4.6 −4.6 E Fe → A i Chemical utilizan procesos exergónicos simples; por ejemplo, la energía de la Glucosa 6-fosfato −13.8 −3.3 (some bacteria). On the hand,hand, heterotrophic organ-organ(some bacteria). Onother the other heterotrophic Heat energy Fructose 6-phosphate −15.9 −15.9 −3.8 −3.8 Fructose 6-phosphate solar (plantas laby reacción Fe2+metabolism → Fe3+metabolism (algunas bacterias). isms luz obtain free energy by coupling their to the isms obtain freeverdes), energy coupling their to the Glicerol 3-fosfato −9.2 −2.2 Por otraof parte, organismos heterotróficos obtienen E energía libreGlucose 6-phosphate −13.8 −13.8 −3.3 −3.3 Glucose 6-phosphate D Chemical breakdown complex organic molecules in their environbreakdown ofloscomplex organic molecules in their environenergy acoplar su aATP la desintegración moléculas orgániabreviaturas: PPi, pirofosfato inórganico; Pi, ortofosfato inorgánico. ment.alment. In all In these organisms, plays a central role inrole thein allmetabolismo these organisms, ATP plays a de central the Glycerol 3-phosphate −9.2 −9.2 −2.2 −2.2 Glycerol 3-phosphate cas complejas en su ambiente. En todos estos E organismos, el ATP D Nota: Todos los valores tomados de Jencks (1976), excepto los valores para el PPi, que transference of freeofenergy from from the exergonic to the transference free energy the exergonic the enderB E toenderson de Frey y Arabshahi (1995). Los valores difieren entre investigadores, según las Abbreviations: PPi, pyrophosphate; Pi, inorganic orthophosphate. Abbreviations: PPi, pyrophosphate; Pi, inorganic orthophosphate. una función fundamental enis laatransferencia de energía libre gonictiene processes (Figure 11–3).11–3). ATP nucleoside triphosgonic processes (Figure ATP is aB nucleoside triphoscondiciones precisas en las cuales se hicieron las mediciones. C Heat from Frey andFrey and values Jencks for that PPi which which is from Alltaken valuesfrom taken from(1976), Jencks except (1976), that except for PPis los procesos exergónicos hacia los endergónicos (fig.groups. 11-3).Note: El AllNote: i phatedesde containing adenine, ribose,ribose, and three phosphate groups. phate containing adenine, and three phosphate Arabshahi (1995). Values between investigators, depending on the precise Arabshahi (1995).differ Values differ between investigators, depending on the precise B Chemical ATP es un nucleósido trifosfato que contiene adenina, ribosa y tres 2+ 2+ conditions measurements were made. conditions underthe which the measurements were made. In its In reactions in FIGURE theincell, functions the complex its reactions theit11–3 cell, it Transfer functions asMg the Mg complex rgonic to an endergonic free energy an exergonic tounder an which Bas of Cfrom energy grupos fosfato. En sus reacciones la célula, funciona como el endergonic reaction viaena high-energy intermediate compound (~E). (Figure 11–4). (Figure 11–4). (fig. 11-4). complejo de Mg2+of E The importance phosphates in intermediary metaboThe importance of Transfer phosphates inenergy intermediary metabo-to an de baja energía, ejemplificados por los fosfatos éster que se encuento an endergonic FIGURE 11–3 of free from an exergonic La importancia de los fosfatos en el metabolismo intermediario in thein intermediates of glycolysis, have have G0ʹ values found the intermediates of glycolysis, G0ʹ values endergonic reaction via intermediate compound (~E). lism became evident with the discovery of theof role ATP, lism became evident with thea high-energy discovery theofrole of adATP, ad-found tran en los intermediarios de la glucólisis, tienen valores de G0ʹ mese hizo evidente con el descubrimiento de la función del ATP, difosthan that ATP, while while in high-energy phosphates smaller than ofthat of ATP, in high-energy phosphates enosine diphosphate (ADP), and inorganic phosphate (Pi) in(Pi) insmaller enosine diphosphate (ADP), and inorganic phosphate B nores que los del ATP, mientras que en los fosfatos de alta energía fato de adenosina (ADP) y fosfato inorgánico (Pi) en la glucólisis the value is higher than that of ATP. The components of thisof this the value is higher than that of ATP. The components glycolysis (Chapter 18). glycolysis (Chapter 18). B C el valor es mayor que el del ATP. Los componentes de este último eat (cap. 18). latter latter group,group, including ATP, ATP, are usually anhydrides (eg, the including are usually anhydrides (eg, the grupo, incluso el ATP, por lo general son anhídridos (p. ej., el 1-fos1-phosphate of 8:30:09 1,3-bisphosphoglycerate), enolphosphates (eg, (eg, ofPM 1,3-bisphosphoglycerate), enolphosphates 3/26/2009 onic to an endergonic FIGURE 11–3 Transfer of free energy from an exergonic to1-phosphate an fato del 1,3-bisfosfoglicerato), enolfosfatos (p. ej., fosfoenolpiruvaThe The Intermediate for Intermediate Value for Free the Free phosphoenolpyruvate), and phosphoguanidines (eg, creatine phosphoenolpyruvate), and phosphoguanidines (eg, creatine endergonicValue reaction via a the high-energy intermediate compound (~E). to) y fosfoguanidinas (p. ej., creatina fosfato, arginina fosfato). La El valor intermedio para la energía libre phosphate, arginine phosphate). The intermediate position of of phosphate, phosphate). The intermediate position 8:30:09 PM arginine Energy of Hydrolysis of ATP Has Has Important Energy of Hydrolysis of ATP Important 3/26/2009 posición intermedia del ATP permite que desempeñe una función de hidrólisis del aTP tiene gran ATP allows it to play an important role in energy transfer. The ATP allows it to play an important role in energy transfer. The Bioenergetic Significance Bioenergetic Significance importante en la transferencia de energía. El cambio de energía libre importancia bioenergética high free-energy change on hydrolysis of ATP dueistodue relief high free-energy change on hydrolysis ofisATP to of relief of en el momento de la hidrólisis del ATP se debe a alivio de la repulThe standard free energy of hydrolysis of a number of bioThe standard free energy of hydrolysis of a number of bio-chargecharge repulsion of adjacent negatively charged oxygen atomsatoms repulsion of adjacent negatively charged oxygen Elchemically cuadro 11-1 muestra la energía libre estándar la hidrólisis de sión de carga de átomos de oxígeno adyacentes que tienen carga chemically important phosphates is shown in Table 11–1. An Anand important phosphates is shown in de Table 11–1. toand stabilization of theofreaction products, especially phos-phosto stabilization the reaction products, especially diversos fosfatos importantes desde el punto de vista bioquímico. negativa, y a estabilización de los productos de la reacción, en esestimate of theof comparative tendency of each theof phosphate estimate the comparative tendency ofof each the phosphatephate,phate, as resonance hybrids. OtherOther “high-energy compounds” as8:30:09 resonance hybrids. “high-energy compounds” 3/26/2009 PM Un estimado de la tendencia comparativa de cada uno de los grupos pecial fosfato, como híbridos de resonancia. Otros “compuestos de groups to transfer to a suitable acceptor may be obtained from fromare thiol groups to transfer to a suitable acceptor may be obtained esters involving coenzyme A (eg,Aacetyl-CoA), acyl acyl thiol esters involving coenzyme (eg, acetyl-CoA), fosfato para hacia un value aceptor idóneo puede obtenerse a are 0ʹ 0ʹ alta energía” son ésteres tiol que incluyen a la coenzima A (p. ej., the ∆G of at 37°C. The for the hydrolysis of the ∆Ghydrolysis of transferir hydrolysis at 37°C. The value for the hydrolysis of 0ʹ carriercarrier protein, aminoamino acid esters involved in protein syntheprotein, acid esters involved in protein synthepartir de la ΔG de la hidrólisis a 37°C. El valor para la hidrólisis del acetil-CoA), proteína acarreadora de acilo, y ésteres aminoácidos the terminal phosphate of ATP the listthe into the terminal phosphate ofdivides ATP divides listtwo intogroups. two groups.sis, S-adenosylmethionine (active(active methionine), UDPGlc (uri- (urisis, S-adenosylmethionine methionine), UDPGlc fosfato terminal del ATP divide la lista en dos grupos. Los fosfatos comprendidos en la síntesis de proteína, S-adenosilmetionina (meLow-energy phosphates, exemplified by thebyester Low-energy phosphates, exemplified the phosphates ester phosphatesdine diphosphate glucose), and PRPP (5-phosphoribosyl-1dine diphosphate glucose), and PRPP (5-phosphoribosyl-1tionina activa), UDPGlc (uridina difosfato glucosa) y PRPP (5-fospyrophosphate). pyrophosphate). forribosil-1-pirofosfato). NH NH 2 N 2+ Mg2+ Mg Mg2+ O– O––– O O N N N O––– O O NH22 N N N N N N N N – O O– High-Energy Phosphates Are Arese designan High-Energy Phosphates Los fosfatos de alta energía Designated by ~ ~P Designated by ~P mediante The symbol ~P indicates that the attached to the bond, The symbol ~P indicates that the group bond, de El símbolo indica que elgroup grupo fijo alattached enlace, ento elthe momento on transfer to an to appropriate acceptor, resultsresults transfer of la transontransferencia transfer an appropriate acceptor, in transfer of hacia un aceptor apropiado, dainpor resultado O O O O O O O O O C C C CHHC C the larger quantity of freeofenergy. For this reason, thePor term the larger free energy. this reason, the H ferencia dequantity la cantidad más grande deFor energía libre. esteterm motivo, H H H groupgroup transfer potential, ratherrather than “high-energy bond,”bond, isde ”grupo, transfer potential, than “high-energy is algunos prefieren el término potencial de transferencia H H H H H H preferred some. Thus, ATP two high-energy preferred by some. ATP contains two high-energy másbyque “enlace deThus, alta contains energía”. De esta manera, elphosATPphoscontiene OH OH OH OH OH OH phate phate groups and ADP one, whereas the contiene phosphate in mientras groups and contains ADP contains one, the phosphate in dos grupos fosfato de alta energía y elwhereas ADP uno, (adenosine monophosphate) is of the low-energy type, is of the low-energy que el(adenosine fosfato en elmonophosphate) AMP (monofosfato de adenosina) es deltype, tipo de FIGURE 11–411-4 Adenosine triphosphate (ATP) shown as the as the FIGURE 11–4 Adenosine triphosphate (ATP) FIGURA El trifosfato de adenosina (ATP)shown mostrado como elAMP AMP 2+ magnesium complex. ADP forms aforms similar complex with similar Mg . Mg itbaja is a itenergía, normal ester link 11–5). magnesium complex. ADP a similar complex with is a normal ester link (Figure porque es (Figure un enlace éster11–5). normal (fig. 11-5). complejo de magnesio. El ADP forma un complejo con2+.Mg2+. since since – O Murray_CH11_PTR.indd 94 Murray_CH11_PTR.indd 94 11 Bender.indd 94 –– OO P O PPP O O PPP O O PP CHO O O CH22 O 2OO CH O 3/26/2009 8:30:09 PM 3/26/2009 8:30:09 PM 27/11/09 13:59:00 ermediate D, allowingorEcarrier to serve compound as a transducer (designated of ~TABLE E in Figure 11–1 Standard Free Energy of Hydrolysis of drates & Lipids Phosphoenolpyruvate −61.9 −14.8 range –3) is of adenosine exergonictriphosphate reactions to an (AtP). equally Some Organophosphates of Biochemical Importance Carbamoyl phosphate −51.4 −12.3 gonic reactions or processes, such as bioΔG0’ rtion contraction, nervous excitation, and −49.3 −11.8 ii Bioenergetics & the Metabolism of Carbohydrates &Free Lipids Energy of Hydrolysis nsducer of TABLE 11–1 Standard of IGH-ENERGY PHOSPHATES PLAY A Compound 1,3-Bisphosphoglycerate the living cell, the principal high-energy kJ/mol kcal/mol (to 3-phosphoglycerate) an equally SomeIN Organophosphates of Biochemical Importance cHAPteR 11 Bioenergetics: The Role of ATP 95 ENTRAL ROLE ENERGY CAPTURE ier compound (designated ~E in Figure Creatine phosphate−61.9 −43.1 −10.3 uch as bioPhosphoenolpyruvate −14.8 0’ riphosphate (AtP). ΔG capítulo 11 Bioenergética: la función del ATP 95 ND ation, B, C,TRANSFER or and D, allowing E to serve as a transducer of TABLE 11–1 Standard Free Energy of Hydrolysis of −7.7 −32.2 ATP → AMP + PPi −51.4 Carbamoyl phosphate −12.3 tion ii Bioenergetics & the Metabolism of Carbohydrates & Lipids igh-energy a widetorange of exergonic reactionsall toorganisms an equally kJ/mol Some of Biochemical Importance Phosphoenolpyruvate 1,3-Bisphosphoglycerate –ob- –Organophosphates – kcal/mol order maintain livingCompound processes, must Fosfoenolpiruvato 1,3-Bisfosfoglicerato O–1,3-Bisphosphoglycerate −30.5 −7.3 O O ATP O– → ADP + Pi −49.3 O– O −11.8 E of in endergonic Figure reactions or processes, such as bioY PHOSPHATES PLAY A environment. 0’ n supplies of freePhosphoenolpyruvate energy fromAdenosine their Auto– −14.8 – ΔG (to−61.9 3-phosphoglycerate) SuccinylO P O P O P O Oxidative Succinilmuscular contraction, nervous excitation, Adenosina and O P O P O 1-phosphate Fosforilación −20.9 −5.0 CoA CoA ophic organisms utilize simple exergonic processes; eg, the P O Glucose LE IN ENERGY CAPTURE phosphorylation oxidativa Carbamoyl phosphate −51.4 −12.3 Standard−43.1 Creatine −10.3 port. B, C, In or the D, allowing living cell, E to the serve principal as a transducer high-energy Ophosphate O of Compound kJ/mol kcal/mol 2+ O 3+ O O TABLE 11–1 Free Energy of Hydrolysis of ergy of sunlight (green plants), the reaction Fe → Fe −19.2 −4.6 Creatine PPOi P ER Creatina P eaor wide carrier rangecompound ofOn exergonic reactions toEaninequally Figure Some of Biochemical−7.7 Importance 1,3-Bisphosphoglycerate −11.8 −32.2 ATP → AMP + Organophosphates PP ome bacteria). the (designated other hand, ~ organP orheterotrophic Adenosine P −49.3 PPhosphoenolpyruvate P i −61.9 −14.8 P Y A o Adenosina P P P Fructose 6-phosphate −15.9 −3.8 ofnosine endergonic triphosphate (AtP). orcoupling processes, such as bio3-phosphoglycerate) ms living obtain processes, free reactions energy all(toorganisms by must their ob-metabolism to the+ P P ) de (Store of (Reserva ΔG0’ −30.5 −7.3 ATP → ADP Adenosine triphosphate (ATP)i (ATP) Carbamoyl phosphate −51.4 −12.3 URE muscular contraction, nervous excitation, and Trifosfato de adenosina Glucose −13.8 −3.3 eakdown energy from of complex their environment. organic molecules Auto- in their environP ) Creatine phosphate −43.1 −10.3 6-phosphate Creatine Creatina ATP ATP port. In thethese living cell, the principal high-energy – Compound Glucose −20.9 kJ/mol −5.0 kcal/mol 1,3-Bisphosphoglycerate −49.3 −11.8 – – O O– in1-phosphate ent. tilize In simple all exergonic organisms, processes; ATP plays eg, the a central role the O Glycerol O −9.2 −2.2 NERGY PHOSPHATES PLAY A −32.2 −7.7 3-phosphate ATP →(designated AMP + PP or carrier ~E i (to 3-phosphoglycerate) – nsference green plants), ofcompound free theenergy reaction from Fe2+ the → exergonic Fe3+in Figure toPPthe ender−19.2 −4.6 Ciclo Phosphoenolpyruvate −61.9 −14.8 ATP/ADP – P O Adenosine O P O i del P O Adenosina O P O s must ob- IN ENERGY PPi, pyrophosphate; Pi, inorganic orthophosphate. AL ROLE CAPTURE triphosphate (AtP). cycleATP/ADP −30.5 Creatine Abbreviations: −7.3 ATP → ADP +ATP Pi nnosine nic theprocesses other hand, (Figure heterotrophic 11–3). organis a nucleoside triphosphosphate −43.1 −10.3 Note: All values taken from Jencks (1976), that for −12.3 PPi which is from Fructose 6-phosphate −15.9 −3.8 ent. AutoO O Carbamoyl phosphate −51.4except P Frey and O O ANSFER 6-phosphate ate rgycontaining by coupling adenine, their metabolism ribose, and to three the phosphate groups. Glucosa 6-fosfato Arabshahi (1995). Values differ between investigators, depending on the precise P Glucose Glucose 1-phosphate −20.9 −5.0 −32.2 −7.7 ATP → AMP + PP ses; eg, the ADP −3.3 2+ Glucose 6-phosphate −13.8 conditionsi under which the measurements wereADP made. −11.8 1,3-Bisphosphoglycerate −49.3 lex its reactions organic molecules in the cell, in it their functions environas the Mg complex or Adenosine P P Other phosphorylations, 2+ 3+PHOSPHATES PLAY A o Adenosina P P Otras fosforilaciones, NERGY maintain e → Fe living processes, all organisms must ob- −19.2 ATP PPi activations, (to→ 3-phosphoglycerate) −30.5 −7.3 ADP +−4.6 Pi activaciones gure ganisms, 11–4). ATP plays a central role inAdenosine the Glycerol 3-phosphate −9.2 −2.2 and endergonic diphosphate (ADP)(ADP) Glucose 1,6- 1,6hic sLofROLE organfree energy from their environment. AutoIN ENERGY CAPTURE y procesos Difosfato de adenosina Glucosa Fructose 6-phosphate −15.9Creatine −3.8 energy The importance from the exergonic of phosphates to theinenderintermediary metaboprocesses Glycerol 3-phosphate bisphosphate phosphate −43.1 −10.3 Glucose 1-phosphate −20.9 Glicerol 3-fosfato −5.0 endergónicos bisfosfato anisms lism to utilize the simple exergonic processes; eg, the 0ʹ Abbreviations: Pi, inorganic orthophosphate. – PPi,–pyrophosphate; found in the intermediates of glycolysis, have G values O ad-O ANSFER m ure became 11–3).evident ATP is with a nucleoside the discovery triphosof the 2+ role of 3+ ATP, Glucose 6-phosphate −13.8 −3.3 −32.2 −7.7 ATP → AMP + PP which is from Frey and Note: All values taken from Jencks (1976), except that for PP unlight r environ(green plants), the reaction Fe → Fe 11–6 Role ATP/ADP cycle in transfer of high-energy i than that of FIGURE ATP,i −19.2 while in high-energy phosphates FIGURA 11-6of−4.6 Función del ciclo del ATP/ADP en la transferencia de osine nine, ribose, diphosphate and three (ADP), phosphate and inorganic groups. phosphate )PP in–iValuesOsmaller – Adenosine O (P P Arabshahi (1995). differ between investigators, depending on the precise i OP Adenosina O maintain eria). role inOn the living the other processes, hand, allheterotrophic organisms must organobphosphate. 2+ Glycerol 3-phosphate −9.2 −2.2 the value is higher than that of ATP. The components of this −30.5 −7.3 fosfato de alta energía. ATP → ADP + Pi conditions under which the measurements were made. Fructose 6-phosphate −15.9 −3.8 he colysis cell, it (Chapter functions 18).as the Mg complex sthe free of enderfree energy energy by coupling from their their environment. metabolism Autoto the O O latter group, including ATP, are usually anhydrides (eg, the Abbreviations: PPi, pyrophosphate; Pi, inorganic orthophosphate. Glucose −20.9 −5.0 Glucose1-phosphate 6-phosphate −13.8 −3.3 anisms de of triphoscomplex utilizeorganic simple molecules exergonic processes; in their environeg, the 1-phosphate enolphosphates or Adenosine P PP which is from Frey and of 1,3-bisphosphoglycerate), All values taken from Jencks (1976), except that for of phosphates Note: in intermediary metaboo3+Adenosina i P maintained, but when the ATP/ADP(eg, ratio is high, their con2+ unlight ate these groups. organisms, (green plants), ATPValue the playsreaction a central Fe role→ ininvestigators, Fe the independing 0ʹ −19.2 −4.6 PP Arabshahi (1995). Values differthe between on the precise he Intermediate for Free Glycerol 3-phosphate −9.2 −2.2 found the intermediates phosphoenolpyruvate), of glycolysis, and have phosphoguanidines G values (eg, creatine i with the discovery of the rolewhich of ATP, ad- monophosphate centration can increase to act as a store of high-energy phosAdenosine (AMP)(AMP) 2+ conditions under the measurements were made. Monofosfato de adenosina fuente de energía para la contracción ria). ofcomplex free Onenergy the other fromhand, the exergonic heterotrophic to the organendersmaller than that 6-phosphate phosphate, ofPPATP, while arginine inP high-energy phosphate). phosphates The intermediate position of muscular, los fosfágenos pernergy of ATP Fructose −15.9 −3.8 (ADP),of andHydrolysis inorganic phosphate (Pi)Has in Important Abbreviations: , pyrophosphate; , inorganic orthophosphate. phate (Figure 11–7). i i miten que sus concentraciones se mantengan, pero cuando la prosses free energy (Figure by 11–3). coupling ATP their is a11–5 nucleoside metabolism triphostoofthe the is ADP higher ATP than allows that of it to ATP. playThe an important components role ofacts in energy transfer. Thedonor to form FIGURE Structure ATP,value ADP, and AMP showing the FIGURA 11-5 Estructura del ATP, y AMP, que muestra la which isthis from Frey and Note: All values taken from Jencks (1976), except that for PP 8). oenergetic Significance i When ATP as a phosphate those Glucose 6-phosphate −13.8 −3.3 porción ATP/ADP es alta, su concentración puede incrementarse of ning y metabocomplex adenine, organic ribose, molecules and three in their environgroups. (1995). Values differare between investigators, depending on ATP the precise position and the of high-energy phosphates (~P). posición yphosphate elnumber número de fosfatos deArabshahi alta energía latter group, including high free-energy ATP, usually change anhydrides on hydrolysis (eg, of the is due to relief of 0ʹ compounds of lower free energy of hydrolysis (Table 11–1), 2+ a number found in the intermediates of glycolysis, have G values conditions under which the measurements were made. e standard free energy of hydrolysis of of biopara actuar como una reserva de fosfato de alta energía (fig. 11-7). of ons these ATP, inorganisms, the ad- cell, it ATP functions plays as a central the Mgrolecomplex in 1-phosphate the Glycerol 3-phosphate −9.2 −2.2 oxygen atoms of 1,3-bisphosphoglycerate), charge repulsion of adjacent enolphosphates negatively charged (eg,is the phosphate group invariably converted to one of low ensmaller than that of ATP, while in high-energy phosphates emically important phosphates is shown in Table 11–1. An Cuando el ATP actúa como un donador de fosfato para formar 4). )energy in for hate of free (P from theFree exergonic to the enderate Value the i phosphoenolpyruvate), and and stabilization phosphoguanidines ofergy, the orthophosphate. reaction (eg, products, creatine especially phosAbbreviations: PPi,to pyrophosphate; Pi, inorganic eg, the value is higher than that of ATP. The components of this imate of the comparative tendency of each of the phosphate HIGH-ENERGY PHOSPHATES ACT AS los compuestos de energía libre más baja de hidrólisis (cuadro 11-1), portance of phosphates metabosses (Figure ATP in is intermediary a nucleoside triphosphosphate, phate, phosphate). as resonance intermediate hybrids. position “high-energy of0ʹFrey and compounds” rolysis of11–3). ATP Has Important which is from Note:arginine All values taken from JencksThe (1976), except thatOther for PP i latter group, including ATP, are usually found anhydrides in the (eg, intermediates the of glycolysis, have G values oups to transfer to a suitable acceptor may be obtained from el grupo fosfato siempre se convierte en uno de baja energía, por ening evident with ribose, the discovery of the role ofCURRENCY” ATP, ad- allows adenine, and “ENERGY three phosphate groups. THE OF THE CELL Arabshahi (1995). Values differ between investigators, depending the precise ATP it to play are an thiol important esters involving role in energy coenzyme transfer. Aon(eg, The acetyl-CoA), acyl 0ʹ ignificance 2+ 1-phosphate of 1,3-bisphosphoglycerate), smaller enolphosphates than that of (eg, ATP, while in high-energy phosphates LOS FOSFATOS DE ALTA ENERGÍA GLYCEROL conditions under which the measurements were made. eons ∆G of hydrolysis at 37°C. The value for the hydrolysis of ejemplo, hosphate inorganic phosphate (Phigh ) in free-energy change in the(ADP), cell, it and functions as the Mg complex i carrieron protein, hydrolysis amino of ATP acid isesters due to involved relief ofin protein synthe- KINASE phosphoenolpyruvate), phosphoguanidines the value is(eg, higher creatine ATP isnumber able to act asCOMO aand donor of high-energy phosphate tothan formthat of ATP. The components of this energy of18). hydrolysis phosphate of of ACTÚAN aATP divides ofthe biolist into two groups. Chapter ).terminal LA “MONEDA charge repulsion of sis,adjacent S-adenosylmethionine negatively charged (active oxygen methionine), atoms UDPGlc (uriGLICEROL Glycerolanhydrides + Adenosine (eg,Pthe P P arginine phosphate). The intermediate latter position including ATP, are usually thosein compounds below it inphosphates Table 11–1.group, Likewise, withofthe w-energy t phosphates is phosphate, shown exemplified Table 11–1. by An themetaboester portant portance ofphosphates, phosphates in intermediary and to stabilization dine of the diphosphate reaction products, glucose), especially and PRPP phos(5-phosphoribosyl-1DE ENERGÍA” DE LA CÉLULA 0ʹ ATP allows itofenzymes, to play important rolefound 1-phosphate in high-energy energy in the transfer. ofintermediates 1,3-bisphosphoglycerate), The of glycolysis, enolphosphates have G Glycerol values (eg, P + Adenosine CINASA necessary phosphate arative of each of the phosphate evidenttendency with the discovery the roleanofADP ATP,can ad- accept P P pyrophosphate). phate, as resonance hybrids. Other “high-energy compounds” Glicerol + Adenosina rmediate Value for thepuede Free high free-energy change on hydrolysis of smaller phosphoenolpyruvate), ATP isthan due to that of of ATP, and while phosphoguanidines in high-energy (eg, phosphates creatine P P P to form ATP from those compounds above ATP inrelief the table. a suitable(ADP), acceptor may beATP obtained from El actuar como un donador de fosfato de alta energía hosphate and inorganic phosphate (P ) in NH i are thiol esters involving coenzyme A (eg, acetyl-CoA), acyl 2 ber of biocharge repulsion ofImportant adjacent negatively the phosphate, charged value oxygen isdebajo arginine higher atoms phosphate). thatenofelATP. The The intermediate components position of this ofGlicerol In for effect, an AtP/ADP connects those processes that s atHydrolysis 37°C. The value the formar hydrolysis of N cycle P + Adenosina P P of of ATP Has para los compuestos queprotein, están por delthan mismo carrier amino acid esters involved in protein syntheehapter 11–1. 18). An Ngroups. and to stabilization of the reaction products, latter ATP allows group, especially it including to play phosan ATP, important are usually role in anhydrides energy transfer. (eg, The the generate ~P to those processes that utilize ~P (Figure 11–6), ate of ATP divides the list into two cuadro 11-1. De igual modo, con las enzimas necesarias, ADP getic Significance sis, S-adenosylmethionine (active el methionine), UDPGlc (uriphosphate High-Energy Phosphates Are 2+ as resonance phate, hybrids. Other “high-energy 1-phosphate high free-energy compounds” of ATP 1,3-bisphosphoglycerate), change on de hydrolysis of ATP enolphosphates is due to relief (eg, of Mg continuously consuming and regenerating ATP. This occurs at ates, exemplified by thepuede esteraceptar phosphates fosfato alta energía para formar a partir los N de N dine diphosphate glucose), and PRPP (5-phosphoribosyl-1ained d freefrom energyValue of hydrolysis of involving aFree numbercoenzyme of bio- Aphosphoenolpyruvate), ATP Allows the Coupling of El aTP permite el acoplamiento de rmediate for the Designated by ~P are thiol esters charge (eg, acetyl-CoA), repulsion of acyl adjacent and phosphoguanidines negatively charged oxygen (eg, creatine atoms a very rapid rate, since the total ATP/ADP pool is extremely compuestos que se hallanAn por arriba del ATP en el cuadro. En efecto, – O– O O– in Table 11–1.pyrophosphate). ydrolysis mportantofphosphates is shown Thermodynamically reacciones desfavorables carrier protein, amino acid esters involved and to intissue stabilization protein arginine synthephosphate). theindicates reaction Thethat products, intermediate especially position phosofUnfavorable small sufficient to maintain an active for onlyof a~P few f Hydrolysis of ATP Has Important The symbol the group attached to the bond, en el aspecto unand ciclo de atp/adp conecta losphosphate, procesos que generan con los NH wo he comparative groups. –O sis, each the Ptendency O 2 P Oof P O of CH 2 Ophosphate S-adenosylmethionine (active methionine), ATP phate, allows as UDPGlc resonance it to play (urihybrids. an important Other role “high-energy in energy transfer. compounds” The seconds. Reactions to Favorable Ones termodinámico, a favorables on transfer to an appropriate acceptor, results in transfer of procesos que lo utilizanfrom (fig. 11-6), lo que consume y regenera ATP getic Significance phosphates ansfer to a suitable beglucose), O acceptor O N may O Cobtained C and N dine diphosphate PRPP high are (5-phosphoribosyl-1thiol free-energy esters involving change on coenzyme hydrolysis A of (eg, ATP acetyl-CoA), is due to relief acyl of There are three major sources of ~P taking part in enthe larger quantity of free energy. For this reason, the term manera continua. H H Esto sobreviene a un índice muy rápido, dado The phosphorylation of glucosa glucosehacia to glucose 6-phosphate, the La fosforilación de glucosa-6-fosfato, la primera reacd hydrolysis free energy at 37°C. ofpyrophosphate). hydrolysis Thede value offora the number hydrolysis of bioof High-Energy Phosphates Are charge carrierrepulsion protein, amino of adjacent acid esters negatively involved charged in protein oxygen syntheatoms Mg2+ ergyque conservation or energy capture: group transfer potential, rather than “high-energy bond, ” is total de ATP/ADP es en extremo pequeño, y N el fondo común first reaction of glycolysis (Figure 18–2), is highly endergonic ción de la glucólisis (fig. 18-2), es muy endergónica y no puede proN H H mportant phosphatephosphates of ATP divides is shown the list in into Table two 11–1. groups. An Designated by ~P by and sis, S-adenosylmethionine to stabilization of the reaction (active methionine), products, especially UDPGlc phos(uripreferred some. Thus, ATP contains two high-energy phossuficiente para mantener un tejido activo sólo algunos segundos. – – and cannot proceed under physiologic conditions. ceder en condiciones fisiológicas. 1. oxidative phosphorylation: The greatest quantitative O O exemplified yhephosphates, comparative tendency ofbyeach the of ester the phosphate OH phosphates OH phate, dine diphosphate asindicates resonance glucose), hybrids. Other andattached PRPP “high-energy (5-phosphoribosyl-1compounds” The symbol phate groups that the and contains to one, thewhereas bond, the phosphate in Hayoftres fuentes principales de ~P que participan en group laADP con~P in aerobic organisms. Free energy comes nsfer may be obtained from O P to O a suitable P O CHacceptor 2 O source pyrophosphate). are thiol esters involving coenzyme A (eg, acetyl-CoA), acyl on transfer to an AMP appropriate (adenosine acceptor, monophosphate) results in transfer is of the of low-energy type, 6-fosfato servación dePhosphates energía o captación energía: High-Energy Arede GURE 11–4 Adenosine triphosphate (ATP) shown as the Glucose Glucosa + Pi → Glucose 6-phosphate + H2O + Pi → Glucosa + H2O (1) (1) from respiratory chain oxidation using molecular O2 hydrolysis at 37°C. the hydrolysis of O O C The value C NHfor 2+ carrier protein, amino acid esters involved in protein synthe2 gnesium complex. ADP forms a similar complex with Mg . the larger quantity since of free it is energy. a normal For ester this link reason, (Figure the 11–5). term H H Designated by ~P within mitochondria (Chapterla12). phosphate of ATP divides list into two groups. 1.the Fosforilación oxidativa: mayor fuente cuantitativa(active de 0’ kJ/mol) N sis, S-adenosylmethionine methionine), UDPGlc (∆G0’(uri=(∆G +13.8 = +13.8 kJ/mol) groupoftransfer potential, rather than “high-energy bond, ” is N 2. Glycolysis: A net formation two ~P results from H symbol H by~P phosphates, exemplified theindicates ester phosphates The that the group attached to the bond, en organismos aerobios. La energía libre proviene dine diphosphate glucose), and PRPP (5-phosphoribosyl-1preferred by some. Thus, ATP contains two high-energy phosHigh-Energy Phosphates Are Mg2+ the Nformation of lactate from one molecule ofusando glucose, OH onOH transfer to la anNoxidación appropriate acceptor, results in transfer ofO2 de de la cadena respiratoria pyrophosphate). phate groups and ADP contains one, whereas the phosphate in Designated by ~P generated inof two reactions phosphoglycerate quantity free energy. For this by reason, the12). term molecular dentro de lascatalyzed mitocondrias (cap. – – the larger – NH Creatine O O O 2 H type, AMP (adenosine monophosphate) is of the low-energy nosine triphosphate (ATP) kinase shown as thepyruvate kinase, respectively (Figure 18–2). and kinase group transfer potential, than The “high-energy bond, indicates ” is de thatlathe group attached 2. glucólisis: unarather formación netasymbol de dos ~P depende H2N N to the bond, P N. P aOsimilar P Ocomplex P O N with CH2 O DP–Oforms Mg2+ since it is a normal ester link (Figure 11–5). 3. The citric cycle: One is generated directly preferred byformación some.acid Thus, contains on two transfer high-energy to anphosappropriate of deATP lactato a~P partir de una molécula deinglucosa, acceptor, results inC transfer NH C NH PTR.inddO 94 2+ O 3/26/2009 8:30:09 PM O High-Energy Phosphates Arethis Creatina C cycle at C the succinate thiokinase H Mg the step (Figure 17–3). phate groups and ADP contains one, whereas the larger the phosphate quantity of in free energy. For reason, the term generada en dos reacciones catalizadas por fosfoglicerato H H N N H C H C N 3 3 cinasa N H2N N P Designated by ~P rather than “high-energy ADP AMP (adenosine of group theoflow-energy transfer potential, type, bond, ” is ATP cinasaHmonophosphate) y piruvato cinasa,isforms respectivamente (fig. 18-2). as the O– C NH C NH Phosphagens act as storage high-energy phosCH2 CH2 H O– O– 0′ = –12.6 kJ/mol) Mg2+ . since it is3. a normal link (Figure 11–5). preferred symbol by ~P some. indicates ATP that the contains grouptwo attached high-energy to the bond, phos(∆G elinclude cicloester delcreatine ácido cítrico: seThe genera un deinThus, modo directo – N N H C H C phate and phosphate, which occurs verte3 3 OH OH – – O P O P O P O CH 2 O COO COO on phate transfer groups toand anand ADP appropriate containsacceptor, one, whereas results the inphosphate transfer of in ADP en el muscle, ciclo en heart, el pasospermatozoa, de la succinato tiocinasa (fig.argi17-3). ATP brate skeletal and brain; O O O CH2 C C Creatine phosphate Creatine the AMP larger (adenosine quantitymonophosphate) of free energy. For is ofthis the reason, low-energy the term type,(∆G0′ = –12.6 kJ/mol) CH2 H(ATP)Hshown as the 1–4 Adenosine triphosphate nine phosphate, which2+ occurs invertebrate When 3/26/2009 8:30:09 PM Los fosfágenos actúan in como formas demuscle. almacenamiento de COO– COO– ” is omplex. ADP forms a similar complex with Mg . group sinceof ittransfer is a normal potential, ester link rather (Figure than11–5). “high-energy bond, ATPfosfato isH rapidly being utilized as a source energy for muscuH FIGURE 11–7 Transfer of high-energy phosphate between ATP de alta energía, e incluyen creatina fosfato, que se encuentra preferred by some. Thus, ATP contains two high-energy Creatina phosfosfato Creatina lar contraction, permit its espermatozoides concentrations to and creatine. OHmúsculo OH phosphagens en el estriado, el corazón, los y elbecerebro phate groups and ADP contains one, whereas the phosphate in de vertebrados, y arginina fosfato, que existe en el músculo de inver11-7 Transferencia de fosfato de alta energía entre ATP y 3/26/2009 8:30:09 is PMFIGURA AMP (adenosine monophosphate) of the low-energy type, 1–4 Adenosine triphosphate (ATP) shown as the tebrados. Cuando2+se está utilizando con rapidez ATP como una creatina. omplex. ADP forms a similar complex with Mg . since it is a normal ester link (Figure 11–5). 3/26/2009 8:30:09 PM Murray_CH11_PTR.indd 95 11 Bender.indd 95 3/26/2009 8:30:10 PM 3/26/2009 8:30:09 PM 27/11/09 13:59:13 Section ii Bioenergetics & the Metabolism of Carbohydrates & Lipids 96 Sección ii Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Para que tenga lugar, reacción debe otra reacción o A, B, C, or D, allowing E to serve as alatransducer of acoplarse TABLEcon 11–1 Standard Free Energy of Hydrolysis of —más exergónica—, como la hidrólisis del fosfato terminal del ATP. rom a wide range of exergonic reactions to an equally 2Pi Some Organophosphates of Biochemical Importance nge of endergonic reactions or processes, such as bio0ʹ ATP → ADP + P (∆G = -30.5 kJ/mol) (2) ΔG0’ s, muscular contraction, nervous excitation,i and Pi ansport. In the living cell, (1) they principal high-energy Compound kJ/mol kcal/mol Cuando (2) se acoplan en una reacción catalizada por hexocidiate or carrier compound (designated ~ E in Figure nasa, la fosforilación de la glucosa procede con facilidad en una rePhosphoenolpyruvate −61.9 −14.8 adenosine triphosphate acción (AtP). muy exergónica que en condiciones fisiológicas es irreversiCarbamoyl phosphate ble. Muchas reacciones de “activación” siguen este modelo. 1,3-Bisphosphoglycerate -ENERGY PHOSPHATES PLAY A (to 3-phosphoglycerate) RAL ROLE INLa ENERGY adenilil CAPTURE cinasa (miocinasa)Creatine phosphate TRANSFER interconvierte nucleótidos adenina ATP → AMP + PP i −51.4 −49.3 PPi Acil-CoA sintetasa, etc. −12.3 ATP −43.1 −32.2 Pirofosfatasa inorgánica −11.8 −10.3 ADP −7.7 X 2 AMP enzima presente must en casiobtodas las células. Cataliza la reacto maintain livingDicha processes, allestá organisms Adenilil −30.5 −7.3 ATP → ADP + Pi cinasa ción que sigue: plies of free energy from their environment. AutoGlucose 1-phosphate −20.9 −5.0 organisms utilize simple exergonic processes; eg, the FIGURA 11-8 Ciclos del fosfato e intercambio de nucleótidos 2+ 3+ ADENILIL of sunlight (green plants), the reaction Fe → Fe −4.6 PPi adenina.−19.2 CINASA acteria). On the other hand, heterotrophic organFructose −15.9 −3.8 ATP + AMP 2ADP 6-phosphate tain free energy by coupling their metabolism to the Glucose 6-phosphate −13.8 −3.3 wn of complex organic molecules in their environEsto permite que: otros nucleósidos trifosfato participan en n all these organisms, ATP plays a central role in the Glycerol 3-phosphate −9.2 −2.2 la transferencia de fosfato de alta energía ence of free energy from exergonic the ender1. El the fosfato de alta to energía en el ADP se use en la síntesis de Abbreviations: PPi, pyrophosphate; Pi, inorganic orthophosphate. Mediante la enzima nucleósido difosfato cinasa pueden sintetizarocesses (Figure 11–3).ATP. ATP is a nucleoside triphosNote: All values taken from Jencks (1976), except that for PPi which is from Frey and UTP, GTP y CTPona partir de sus difosfatos, por ejemplo, ntaining adenine, ribose, three phosphate Arabshahi (1995).reacciones Values differ between se investigators, depending the precise 2. Eland AMP, formado comogroups. consecuencia de varias 2+ conditions under which the measurements were made. complex ATP, se recupere mediante actions in the cell, it functions as the Mg de activación que comprenden NUCLEÓSIDO 11–4). refosforilación hacia ADP. DIFOSFATO importance of phosphates in intermediary metabo3. Aumente la concentración de AMP cuando el ATP se agota found in the intermediates of glycolysis, have CINASA G0ʹ values ADP + UTP ame evident with the discovery of theuna roleseñal of ATP, adATP + UDP y actúa como metabólica (alostérica) para smaller than that of ATP, while in high-energy phosphates (trifosfato de uridina) diphosphate (ADP), and inorganic el phosphate ) in i incrementar índice de(P reacciones catabólicas, que a su the value is higher than that of ATP. The components of this is (Chapter 18). Todos estos trifosfatos participan en fosforilaciones en la céluvez llevan a la generación de más ATP (cap. 20). latter group, including ATP, la. areDe usually (eg, the monofosfato cinasas específicas modo anhydrides similar, nucleósido 1-phosphate of 1,3-bisphosphoglycerate), enolphosphates (eg, difosfatos a partir de los mocatalizan la formación de nucleósido ntermediate Value for the Free phosphoenolpyruvate), and phosphoguanidines (eg, creatine nofosfatos correspondientes. Cuando el aTP forma aMP, se produce phosphate, arginine phosphate). The intermediate position of y of Hydrolysis of ATP Has Important pirofosfato inorgánico (PPi)ATP allows it to play an important role in energy transfer. The NUCLEÓSIDO ergetic Significance El ATP también puede hidrolizarse de manera directa hacia AMP,on hydrolysis of ATP is due to relief ofMONOFOSFATO high free-energy change ndard free energy of of de a number of 11-1). bio- Esto CINASAS ESPECÍFICAS conhydrolysis la liberación PPi (cuadro sucede, por ejemplo, en charge repulsion of adjacent negatively charged oxygen atoms lly important phosphates is shown in Table 11–1. An ATP + Nucleósido P la activación de ácidos grasos de cadena larga 22): and (cap. to stabilization of the reaction products, especially phosP P of the comparative tendency of each of the phosphate phate, as resonance hybrids. Other “high-energy compounds”ADP + Nucleósido o transfer to a suitable acceptor may be obtained from are thiol esters involving coenzyme A (eg, acetyl-CoA), acyl ACIL-CoA De esta manera, la adenilil cinasa es una monofosfato cinasa espeof hydrolysis at 37°C. The value for the hydrolysisSINTETASA of carrier protein, amino acid esters involved in protein synthecializada. inal phosphate of ATPATP divides the list+into two groups. + CoA • SH R • COOH sis, S-adenosylmethionine (active methionine), UDPGlc (uriergy phosphates, exemplified by the ester phosphatesAMP dine + R • CO — SCoA + PPi diphosphate glucose), and PRPP (5-phosphoribosyl-1pyrophosphate). rESuMEN Esta reacción se acompaña de pérdida de energía libre como NH 2 ■ En los sistemas biológicos se utiliza energía química para impulsar calor, lo que asegura N que la reacción de activación irá hacia la dereprocesos vivos. N cha, y se auxilia más por la división hidrolítica del PPi, catalizada ■ Las reacciones High-Energy Phosphates Are exergónicas tienen lugar de modo espontáneo, con Mg2+ por pirofosfatasa inorgánica, una reacción que en sí tiene una ΔG0ʹ N N pérdida de energía libre (ΔG es negativa). Las reacciones endergónicas Designated byde~P grande, de –19.2 kJ/mol. Note que las activaciones por medio la requieren la ganancia de energía libre (ΔG es positiva) y sólo ocurren O– O– O– The symbol ~P indicates that the groupseattached the bond, vía del pirofosfato dan por resultado la pérdida de dos más que cuando acoplan a to reacciones exergónicas. – O P O P O P O CH2 O on transfer to an appropriate■ acceptor, results transfer de of energía” de la célula, al transferir de uno, como ocurre cuando se forman ADP y Pi. El ATP actúa comoinla “moneda O O O C C the larger quantity of free energy. Forlibre thisderivada reason,dethe term de potencial de energía superior energía sustancias H H de potencial de bond, energía group transfer potential, ratherhacia thanlas“high-energy ” inferior. is FOSFATASA H H preferred by some. Thus, ATP contains two high-energy phosINORGÁNICA OH OH PPi + H2O 2Pi and ADP contains one, whereas the phosphate in phate groups rEFErENCIaS AMP (adenosine monophosphate) is of the low-energy type, E 11–4 Adenosine triphosphate (ATP) shown as the Una combinación Meis L: The concept of energy-rich phosphate compounds: water, 2+ reacciones anteriores hace posible que um complex. ADP forms a similar complex withde Mglas . since it is a normal ester link de (Figure 11–5). el fosfato se recicle y que los nucleótidos adenina se intercambien transport ATPases, and entropy energy. Arch Biochem Biophys 1993;306:287. (fig. 11-8). d 94 3/26/2009 8:30:09 PM 11 Bender.indd 96 27/11/09 13:59:20 capítulo 11 Frey PA, Arabshahi A: Standard free-energy change for the hydrolysis of the alpha, beta-phosphoanhydride bridge in ATP. Biochemistry 1995;34:11307. Harold FM: The Vital Force: A Study of Bioenergetics. Freeman, 1986. Harris DA: Bioenergetics at a Glance: An Illustrated Introduction. Blackwell Publishing, 1995. 11 Bender.indd 97 Bioenergética: la función del ATP 97 Haynie D: Biological Thermodynamics. Cambridge University Press, 2008. Jencks WP: Free energies of hydrolysis and decarboxylation. In: Handbook of Biochemistry and Molecular Biology, vol 1. Physical and Chemical Data. Fasman GD (editor). CRC Press, 1976:296–304. Klotz IM: Introduction to Biomolecular Energetics. Academic Press, 1986. Nicholls D, Ferguson F: Bioenergetics. Elsevier, 2003. 27/11/09 13:59:20 12 c Oxidación biológica Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA Desde el punto de vista químico, la oxidación se define como la eliminación de electrones, en tanto que la reducción es la ganancia de electrones. De este modo, la oxidación siempre se acompaña de reducción de un aceptor de electrón. Este principio de oxidación-reducción aplica por igual a sistemas bioquímicos y es un concepto importante que fundamenta el entendimiento de la naturaleza de la oxidación biológica. Note que muchas oxidaciones biológicas pueden tener lugar sin la participación de oxígeno molecular, p. ej., deshidrogenaciones. La vida de animales superiores depende por completo de un aporte de oxígeno para la respiración, el proceso por medio del cual las células obtienen energía en forma de ATP a partir de la reacción controlada de hidrógeno con oxígeno para formar agua. Además, el oxígeno molecular se incorpora hacia diversos sustratos mediante enzimas llamadas oxigenasas; muchos fármacos, contaminantes y carcinógenos químicos (xenobióticos) son metabolizados por enzimas de esta clase, conocidas como el sistema de citocromo P450. La administración de oxígeno puede salvar la vida en el tratamiento de pacientes con insuficiencia respiratoria o circulatoria. LOS CAMBIOS DE ENERGÍA LIBRE PUEDEN EXPRESARSE EN TÉRMINOS DE POTENCIAL DE REDOX En reacciones que conllevan oxidación y reducción, el cambio de energía libre es proporcional a la tendencia de los reactivos a donar electrones o aceptarlos. De esta manera, además de expresar cambio de energía libre en cuanto a ΔG0′ (cap. 11), es posible, de un modo análogo, expresarlo de manera numérica como un potencial de oxidación-reducción o redox (E′0). El potencial redox de un sistema (E0) por lo general se compara con el potencial del electrodo de hidrógeno (0.0 voltios a pH de 0.0). Sin embargo, para sistemas biológicos, el potencial redox (E′0) por lo general se expresa a pH de 7.0, al cual el potencial de electrodo de hidrógeno es de –0.42 voltios. El cuadro 12-1 muestra los potenciales redox de algunos sistemas redox de interés especial en bioquímica de mamíferos. Las posiciones relativas de los sistemas redox en el cuadro permiten predecir la dirección de flujo de electrones desde una pareja redox hacia otra. Las enzimas comprendidas en oxidación y reducción reciben el nombre de oxidorreductasas y se clasifican en cuatro grupos: oxidasas, deshidrogenasas, hidroperoxidasas y oxigenasas. A P í t u l O LAS OXIDASAS USAN OXÍGENO COMO UN ACEPTOR DE HIDRÓGENO Las oxidasas catalizan la eliminación de hidrógeno desde un sustrato usando oxígeno como un aceptor de hidrógeno.* Forman agua o peróxido de hidrógeno como un producto de reacción (fig. 12-1). Algunas oxidasas contienen cobre La citocromo oxidasa es una hemoproteína ampliamente distribuida en muchos tejidos, que tiene el grupo prostético hem típico presente en la mioglobina, hemoglobina y otros citocromos (cap. 6). Es el componente terminal de la cadena de acarreadores respiratorios encontrados en mitocondrias (cap. 13) y transfiere electrones originados por la oxidación de moléculas de sustrato por deshidrogenasas hacia su aceptor final, oxígeno. La enzima es envenenada por monóxido de carbono, cianuro y sulfuro de hidrógeno. También se ha denominado “citocromo a3”. Empero, ahora se sabe que el hem a3 se combina con otro hem, el hem a, en una proteína única para formar el complejo de enzima citocromo oxidasa y, así, es más correcto llamarlo citocromo aa3. Contiene dos moléculas de hem, cada una de las cuales tiene un átomo de Fe que oscila entre Fe3+ y Fe2+ durante oxidación y reducción. Más aún, hay dos átomos de Cu, cada uno relacionado con una unidad hem. Otras oxidasas son flavoproteínas Las enzimas flavoproteína contienen flavina mononucleótido (FMN) o flavina adenina dinucleótido (FAD) como grupos prostéticos. Las FMN y FAD se forman en el cuerpo a partir de la vitamina riboflavina (cap. 44); por lo regular están unidos de modo estrecho —aunque no covalente— a sus proteínas apoenzima respectivas. Las metaloflavoproteínas contienen uno o más metales como cofactores esenciales. Los ejemplos de enzimas flavoproteína son: L-aminoácido oxidasa, enzima enlazada a FMN que se encuentra en los riñones con especificidad general por la desaminación oxidativa de los L-aminoácidos que existen de manera natural; xantina oxidasa, que contiene molibdeno, es importante en la conversión de bases purina en ácido úrico (cap. 33) y tiene una particular importancia en animales uricotélicos (cap. 28), y aldehído deshidrogenasa, enzima enlazada a FAD presente en hígados de mamíferos, que *El término “oxidasa” a veces se usa de modo colectivo para denotar todas las enzimas que catalizan reacciones que comprenden oxígeno molecular. 98 12 Bender.indd 98 27/11/09 14:01:18 cAPítuLo 12 E’0 Voltios H /H2 −0.42 NAD /NADH −0.32 Lipoato; ox/red −0.29 Acetoacetato/3-hidroxibutirato −0.27 Piruvato/lactato −0.19 Oxaloacetato/malato −0.17 Fumarato/succinato +0.03 + + Citocromo b; Fe /Fe 3+ Ubiquinona; ox/red +0.10 Citocromo c1; Fe /Fe +0.22 Citocromo a; Fe3+/Fe2+ +0.29 Oxígeno/agua +0.82 3+ Muchas deshidrogenasas dependen de coenzimas nicotinamida +0.08 2+ 2+ 1 AH2 (Red) /2O2 AH2 A (Ox) Estas deshidrogenasas usan nicotinamida adenina dinucleótido (NAD+) o nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP+) —o ambos— que se forman en el cuerpo a partir de la vitamina niacina (cap. 44). Las coenzimas son reducidas por el sustrato específico de la deshidrogenasa, y reoxidadas por un aceptor de electrón idóneo (fig. 12-4). Pueden disociarse de manera libre y reversible desde sus apoenzimas respectivas. En general, las deshidrogenasas ligadas a NAD catalizan reacciones de oxidorreducción en las vías oxidativas del metabolismo, sobre todo en la glucólisis (cap. 18), en el ciclo del ácido cítrico (cap. 17), y en la cadena respiratoria de mitocondrias (cap. 13). Las deshidrogenasas enlazadas a NADP se encuentran de modo característico en síntesis reductivas, como en la vía extramitocondrial de la síntesis de ácido graso (cap. 23) y la síntesis de esteroides (cap. 26), y en la vía de la pentosa fosfato (cap. 21). O2 Oxidasa Oxidasa H2O A H2O2 A B FIGURA 12-1 Oxidación de un metabolito catalizada por una oxidasa (A) formando H2O, (B) formando H2O2. Otras deshidrogenasas dependen de la riboflavina contiene molibdeno y hierro no hem, y actúa sobre aldehídos y sustratos N-heterocíclicos. Los mecanismos de oxidación y reducción de estas enzimas son complejos. La evidencia sugiere una reacción de dos pasos (fig. 12-2). Los grupos flavina vinculados con estas deshidrogenasas son similares al FMN y FAD que ocurren en oxidasas. Por lo general están más estrechamente unidos a sus apoenzimas que las coenzimas nicotinamida. Casi todas las deshidrogenasas enlazadas con riboflavina están relacionadas con el transporte de electrones en (o con) la cadena respiratoria (cap. 13). La NADH deshidrogenasa actúa como un acarreador de electrones entre el NADH y los componentes de potencial redox más alto (fig. 13-3). Otras deshidrogenasas, como la succinato deshidrogenasa, acil-coA deshidrogenasa y glicerol-3-fosfato deshidrogenasa mitocondrial, transfieren equi- LAS DESHIDROGENASAS NO PUEDEN USAR OXÍGENO COMO ACEPTOR DE HIDRÓGENO Esta clase incluye un gran número de enzimas. Desempeñan dos funciones principales: R H3C N H3C N R N O NH O H (H+ + e–) 99 1. Transferencia de hidrógeno desde un sustrato hacia otro en una reacción de oxidación-reducción acoplada (fig. 12-3). Tales deshidrogenasas son específicas para sus sustratos, pero suelen emplear coenzimas o acarreadores de hidrógeno comunes, p. ej., NAD+. Dado que las reacciones son reversibles, estas propiedades permiten que los equivalentes reductores se transfieran de manera libre dentro de la célula. Este tipo de reacción, la cual permite que un sustrato se oxide a expensas de otro, es de particular utilidad para permitir que ocurran procesos oxidativos en ausencia de oxígeno, como durante la fase anaeróbica de la glucólisis (fig. 18-2). 2. Como componentes en la cadena respiratoria del transporte de electrones desde sustrato hacia oxígeno (fig. 13-3). CUADRO 12-1 Algunos potenciales redox de interés especial en sistemas de oxidación de mamíferos Sistema Oxidación biológica H3C N H3C N H N R O NH O H (H+ + e–) H3C N H3C N H H N O NH O FIGURA 12-2 Oxidorreducción de anillo isoaloxazina en nucleótidos flavina mediante un intermediario semiquinona (radical libre) (centro). 12 Bender.indd 99 27/11/09 14:01:20 100 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos AH2 (Red) Acarreador (Ox) BH2 (Red) A (Ox) Acarreador–H2 (Red) B (Ox) Deshidrogenasa específica para A Las hidroperoxidasas protegen al cuerpo contra peróxidos perjudiciales. La acumulación de peróxidos puede llevar a la generación de radicales libres, que a su vez llegan a alterar membranas y tal vez causar enfermedades, entre ellas cáncer y aterosclerosis (caps. 15 y 44). Deshidrogenasa específica para B Las peroxidasas reducen peróxidos usando diversos aceptores de electrones FIGURA 12-3 Oxidación de un metabolito catalizada por deshidrogenasas acopladas. Las peroxidasas se encuentran en la leche y en los leucocitos, las plaquetas y otros tejidos comprendidos en el metabolismo de eicosanoides (cap. 23). El grupo prostético es el protohem. En la reacción catalizada por peroxidasa, el peróxido de hidrógeno se reduce a expensas de varias sustancias que actuarán como aceptores de electrones, como ascorbato, quinonas y citocromo c. La reacción catalizada por peroxidasa es compleja, pero la reacción general es como sigue: valentes reductores de manera directa desde el sustrato hacia la cadena respiratoria (fig. 13-5). Otra función de las deshidrogenasas dependientes de flavina estriba en la deshidrogenación (por medio de la dihidrolipoil deshidrogenasa) de lipoato reducido, intermediario en la descarboxilación oxidativa de piruvato y α-cetoglutarato (figs. 13-5 y 18-5). La flavoproteína transferidora de electrones (EtF) es un acarreador intermediario de electrones entre la acil-CoA deshidrogenasa y la cadena respiratoria (fig. 13-5). PEROXIDASA H2O2+ AH2 Los citocromos también pueden considerarse deshidrogenasas 2H2O + A En los eritrocitos y otros tejidos, la enzima glutatión peroxidasa, que contiene selenio como un grupo prostético, cataliza la destrucción del H2O2 y de hidroperóxidos lípidos mediante la conversión de glutatión reducido hacia su forma oxidada, lo que protege a los lípidos de membrana y a la hemoglobina contra oxidación por peróxidos (cap. 21). Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro en las cuales el átomo de hierro oscila entre Fe3+ y Fe2+ durante la oxidación y reducción. Excepto por la citocromo oxidasa (ya descrita), se clasifican como deshidrogenasas. En la cadena respiratoria, participan como acarreadores de electrones desde flavoproteínas, por un lado, hacia citocromo oxidasa, por el otro (fig. 13-5). Varios citocromos identificables se encuentran en la cadena respiratoria, citocromos b, c1, c y citocromo oxidasa. Los citocromos también se encuentran en otras ubicaciones; por ejemplo, el retículo endoplásmico (citocromos P450 y b5), y en células vegetales, bacterias y levaduras. La catalasa usa peróxido de hidrógeno como donador y aceptor de electrón La catalasa es una hemoproteína que contiene cuatro grupos hem. Además de poseer actividad de peroxidasa, puede emplear una molécula de H2O2 como sustrato donador de electrón, y otra molécula de H2O2 como un oxidante o aceptor de electrón. LAS HIDROPEROXIDASAS USAN PERÓXIDO DE HIDRÓGENO O UN PERÓXIDO ORGÁNICO COMO SUSTRATO CATALASA 2H2O2 Dos tipos de enzimas que se encuentran tanto en animales como en vegetales caen dentro de esta categoría: peroxidasas y catalasa. 2H2O2 + O2 H Deshidrogenasa específica para A AH2 H FIGURA 12-4 Mecanismo de oxidación y reducción de coenzimas nicotinamida. Hay estereoespecificidad alrededor de la posición 4 de la nicotinamida cuando es reducida por un sustrato AH2. Uno de los átomos de hidrógeno se elimina del sustrato como un núcleo de hidrógeno con dos electrones (ion hidrido, H–) y se transfiere hacia la posición 4, donde pueden quedar a fijo en la forma A o en la forma B, de acuerdo con la especificidad determinada por la deshidrogenasa particular que está catalizando la reacción. El hidrógeno restante del par de hidrógeno eliminado del sustrato permanece libre como un ion hidrógeno. 12 Bender.indd 100 4 H 4 CONH2 N Forma A R CONH2 A + H+ + N R H AH2 H 4 Deshidrogenasa específica para B N CONH2 Forma B R NAD+ + AH2 NADH + H+ + A 27/11/09 14:01:23 cAPítuLo 12 En casi todas las circunstancias in vivo, la actividad de peroxidasa de la catalasa parece ser favorecida. La catalasa se encuentra en sangre, médula ósea, mucosas, riñones e hígado. Funciona para destruir el peróxido de hidrógeno formado por la acción de oxidasas. Los peroxisomas se encuentran en muchos tejidos, entre ellos el hígado. Tienen alto contenido de oxidasas y de catalasa. De este modo, las enzimas que originan H2O2 están agrupadas con la enzima que lo destruye. Con todo, los sistemas de transporte de electrones mitocondrial y microsómico, así como la xantina oxidasa, deben considerarse fuentes adicionales de H2O2. LAS OXIGENASAS CATALIZAN LA TRANSFERENCIA E INCORPORACIÓN DIRECTAS DE OXÍGENO HACIA UNA MOLÉCULA DE SUSTRATO Las oxigenasas se encargan de la síntesis o degradación de muchos tipos diferentes de metabolitos. Catalizan la incorporación de oxígeno hacia una molécula de sustrato en dos pasos: 1) el oxígeno se une a la enzima en el sitio activo y 2) el oxígeno unido se reduce o transfiere hacia el sustrato. Las oxigenasas pueden dividirse en dos subgrupos: dioxigenasas y monooxigenasas. Las dioxigenasas incorporan ambos átomos de oxígeno molecular hacia el sustrato La reacción básica se muestra a continuación: A + O2 → AO2 Los ejemplos son las enzimas hepáticas, homogentisato dioxigenasa (oxidasa) y 3-hidroxiantranilato dioxigenasa (oxidasa) que contienen hierro, y l-triptófano dioxigenasa (triptófano pirrolasa) (cap. 29), que utiliza hem. Las monooxigenasas (oxidasas de función mixta, hidroxilasas) incorporan sólo un átomo de oxígeno molecular hacia el sustrato El otro átomo de oxígeno se reduce a agua; para este propósito se requiere un donador de electrón adicional o cosustrato (Z). Oxidación biológica 101 A  H + O2 + ZH2 → A  OH + H2O + Z Los citocromos P450 son monooxigenasas importantes para la destoxificación de muchos fármacos y la hidroxilación de esteroides Los citocromos P450 son una importante superfamilia de monooxigenasas que contienen hem y en el genoma humano se han encontrado más de 50 de esas enzimas. Estos citocromos están localizados sobre todo en el retículo endoplásmico en hígado e intestino, aunque también se encuentran en las mitocondrias en algunos tejidos. Tanto el NADH como el NADPH donan equivalentes reductores para la reducción de estos citocromos (fig. 12-5) que, a su vez, son oxidados por sustratos en una serie de reacciones enzimáticas conocidas en conjunto como ciclo de la hidroxilasa (fig. 12-6). En el retículo endoplásmico del hígado, los citocromos P450 se encuentran junto con el citocromo b5, y tienen una función importante en la destoxificación. El índice de destoxificación de muchos fármacos medicinales por citocromos P450 determina la duración de su acción. El benzpireno, la aminopirina, la anilina, morfina y benzfetamina son hidroxilados, lo que aumenta su solubilidad y ayuda a su excreción. Muchos medicamentos, como el fenobarbital, tienen la capacidad para inducir la síntesis de citocromos P450. Los sistemas de citocromo P450 mitocondriales se encuentran en tejidos esteroidogénicos como corteza suprarrenal, testículos, ovarios y placenta, y participan en la biosíntesis de hormonas esteroides a partir del colesterol (hidroxilación en C22 y C20 en la división de la cadena lateral, y en las posiciones 11β y 18). Además, los sistemas renales que catalizan 1-α y 24-hidroxilaciones del 25-hidroxicolecalciferol en el metabolismo de la vitamina D —y colesterol 7α-hidroxilasa y esterol 27-hidroxilasa incluidas en la biosíntesis de ácidos biliares en el hígado (cap. 26)— son enzimas P450. LA SUPERÓXIDO DISMUTASA PROTEGE A ORGANISMOS AEROBIOS CONTRA TOXICIDAD POR OXÍGENO La transferencia de un electrón único hacia O2 genera el radical — libre anión superóxido (o2 ∙ ) en potencia perjudicial, cuyos efectos destructivos se amplifican porque da lugar a reacciones en cadena de radical libre (cap. 15). La facilidad con la cual puede for- CN– NADH Amina oxidasa, etc. Flavoproteína2 Flavoproteína3 NADPH Flavoproteína1 Estearil-CoA desaturasa Cit b5 – Cit P450 Hidroxilación Peroxidación lípida Hem oxigenasa FIGURA 12-5 Cadena de transporte de electrones en el retículo endoplásmico. El cianuro (CN–) inhibe el paso indicado. 12 Bender.indd 101 27/11/09 14:01:25 102 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Sustrato A-H P450-A-H Fe3+ e– P450 Fe3+ P450-A-H NADPH-Cit P450 reductasa NADP+ Fe2+ 2Fe2S23+ FADH2 O2 e– NADPH + H+ 2Fe2S22+ FAD – CO 2H+ P450-A-H Fe2+ H2O O2 P450-A-H Fe2+ O2– A-OH FIGURA 12-6 Ciclo de la citocromo P450 hidroxilasa. El sistema mostrado es típico de las hidroxilasas esteroides de la corteza suprarrenal. La citocromo P450 hidroxilasa microsómica hepática no necesita la proteína hierro-azufre Fe2S2. El monóxido de carbono (CO) inhibe el paso indicado. marse superóxido a partir de oxígeno en los tejidos, y la aparición de superóxido dismutasa, la enzima que se encarga de su eliminación en todos los organismos aerobios (aunque no en los anaerobios obligados), indica que la toxicidad potencial del oxígeno se debe a su conversión en superóxido. El superóxido se forma cuando flavinas reducidas —presentes, por ejemplo, en la xantina oxidasa— se vuelven a oxidar de manera univalente por oxígeno molecular. Enz − Flavina − H2 + O2 → Enz − Flavina − H + O2−⋅ + H+ El superóxido puede reducir citocromo c oxidado O2−⋅ + Cit c (Fe3+ ) → O2 + Cit c (Fe2+ ) o ser eliminado por la superóxido dismutasa. En esta reacción, el superóxido actúa como oxidante y como reductor. De este modo, la superóxido dismutasa protege a los organismos aerobios contra los efectos perjudiciales potenciales del superóxido. La enzima se encuentra en todos los tejidos aerobios en las mitocondrias y el citosol. Si bien la exposición de animales a una atmósfera de oxígeno al 100% causa un incremento adaptativo de la superóxido dismutasa, sobre todo en pulmones, la exposición prolongada conduce a daño pulmonar y muerte. Los antioxidantes, por ejemplo, α-tocoferol (vitamina E), actúan como recolectores de radicales libres y reducen la toxicidad del oxígeno (cap. 44). 12 Bender.indd 102 RESUMEN ■ ■ ■ En sistemas biológicos, al igual que los sistemas químicos, la oxidación (pérdida de electrones) siempre se acompaña de reducción de un aceptor de electrón. Las oxidorreductasas tienen diversas funciones en el metabolismo; las oxidasas y las deshidrogenasas desempeñan funciones importantes en la respiración; las hidroperoxidasas protegen al cuerpo contra daño por radicales libres, y las oxigenasas median la hidroxilación de fármacos y esteroides. Los tejidos están protegidos contra toxicidad por oxígeno causada por el radical libre superóxido por medio de la enzima específica superóxido dismutasa. REFERENCIAS Babcock GT, Wikstrom M: Oxygen activation and the conservation of energy in cell respiration. Nature 1992;356:301. Coon MJ: Cytochrome P450: Nature’s most versatile biological catalyst. Annu Rev Pharmacol Toxicol 2005;4:1. Harris DA: Bioenergetics at a Glance: An Illustrated Introduction. Blackwell Publishing, 1995. Johnson F, Giulivi C: Superoxide dismutases and their impact upon human health. Mol Aspects Med 2005;26. Nicholls D, Ferguson F: Bioenergetics. Elsevier, 2003. Raha S, Robinson BH: Mitochondria, oxygen free radicals, disease and aging. Trends Biochem Sci 2000;25:502. Tyler DD: The Mitochondrion in Health and Disease. VCH Publishers, 1992. 27/11/09 14:01:28 13 C Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los organismos aerobios pueden captar una proporción mucho mayor de la energía libre disponible de los sustratos respiratorios que los organismos anaerobios. La mayor parte de este proceso tiene lugar dentro de las mitocondrias, que se han denominado las “centrales de energía” de la célula. La respiración está acoplada a la generación del intermediario de alta energía, ATP, por medio de fosforilación oxidativa. Diversos fármacos (p. ej., amobarbital) y venenos (p. ej., cianuro, monóxido de carbono) inhiben la fosforilación oxidativa, por lo general con consecuencias mortales. Se han señalado varios defectos hereditarios de las mitocondrias, que afectan componentes de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa. Los pacientes muestran miopatía y encefalopatía, y suelen tener acidosis láctica. ENZIMAS ESPECÍFICAS ACTÚAN COMO MARCADORES DE COMPARTIMIENTOS SEPARADOS POR LAS MEMBRANAS MITOCONDRIALES Las mitocondrias tienen una membrana externa permeable a casi todos los metabolitos, y una membrana interna selectivamente permeable, que encierra una matriz (fig. 13-1). La membrana externa se caracteriza por la presencia de diversas enzimas, entre ellas la acil-CoA sintetasa y glicerolfosfato aciltransferasa. La adenilil cinasa y la creatina cinasa se encuentran en el espacio intermembrana. El fosfolípido cardiolipina está concentrado en la membrana interna, junto con las enzimas de la cadena respiratoria, ATP sintasa y diversos transportadores de membrana. LA CADENA RESPIRATORIA OXIDA EQUIVALENTES REDUCTORES Y ACTÚA COMO UNA BOMBA DE PROTONES Casi toda la energía que se libera durante la oxidación de carbohidratos, ácidos grasos y aminoácidos queda disponible dentro de las mitocondrias como equivalentes reductores (—H o electrones) (fig. 13-2). Note que las enzimas del ciclo del ácido cítrico y de la β-oxidación (caps. 22 y 17) están contenidas en mitocondrias, junto con la cadena respiratoria, que reúne y transporta equivalentes reductores, y los dirige hacia su reacción final con oxígeno para formar agua, y la maquinaria para la fosforilación oxidativa, el proceso A P í t u l o mediante el cual la energía libre liberada se atrapa como fosfato de alta energía. Los componentes de la cadena respiratoria están contenidos en cuatro complejos proteínicos grandes insertos en la membrana mitocondrial interna Los electrones fluyen por la cadena respiratoria a través de un intervalo redox de 1.1 V desde NAD+/NADH hacia O2/2H2O (cuadro 12-1), y pasan por tres complejos proteínicos grandes: NADH-Q oxidorreductasa (complejo I), donde se transfieren electrones desde NADH hacia la coenzima Q (Q) (también llamada ubiquinona); Q-citocromo c oxidorreductasa (complejo III), que pasa los electrones hacia el citocromo c, y citocromo c oxidasa (complejo IV), que completa la cadena, pasa los electrones hacia O2 y hace que se reduzca a H2O (fig. 13-3). Algunas sustancias con potenciales redox más positivos que NAD+/NADH (p. ej., succinato) pasan electrones hacia Q por medio de un cuarto complejo, la succinatoQ reductasa (complejo II), en lugar de mediante el complejo I. Los cuatro complejos están embebidos en la membrana mitocondrial interna, pero Q y citocromo c son móviles. Q se difunde con rapidez dentro de la membrana, mientras que el citocromo c es una proteína soluble. El flujo de electrones a través de los complejos I, III y IV da por resultado el bombeo de protones desde la matriz a través de la membrana mitocondrial interna hacia el espacio intermembrana (fig. 13-7). Las flavoproteínas y las proteínas hierroazufre (Fe-S) son componentes de los complejos de la cadena respiratoria Las flavoproteínas (cap. 12) son componentes de importancia de los complejos I y II. El nucleótido flavina oxidado (FMN o FAD) puede reducirse en reacciones que involucran la transferencia de dos electrones (para formar FMNH2 o FADH2), pero también pueden aceptar un electrón para formar la semiquinona (fig. 12-2). Las proteínas hierro-azufre (proteínas hierro no hem, Fe-S) se encuentran en los complejos I, II y III, los cuales pueden contener uno, dos o cuatro átomos de Fe enlazados a átomos de azufre inorgánico, o por medio de grupos de cisteína-SH a la proteína, o ambos (fig. 13-4). Las Fe-S participan en reacciones de transferencia de un solo electrón en las cuales un átomo de Fe pasa por oxidorreducción entre Fe2+ y Fe3+. 103 13 Bender.indd 103 27/11/09 14:03:34 104 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Las enzimas de la membrana interna son: Acarreadores de electrones (complejos I a IV) ATP sintasa Transportadores de membrana Matriz Espacio intermembrana do cítrico (fig. 17-3) y a continuación los electrones se pasan por medio de varios centros Fe-S hacia Q (fig. 13-5). El glicerol-3-fosfato (generado en la desintegración de triacilgliceroles o a partir de la glucólisis, fig. 18-2) y la acil-CoA también pasan electrones hacia Q mediante vías diferentes en que participan flavoproteínas (fig. 13-5). Las enzimas de la matriz mitocondrial son: Enzimas del ciclo del ácido cítrico Enzimas de β-oxidación Piruvato deshidrogenasa El ciclo Q acopla la transferencia de electrones al transporte de protones en el complejo III Crestas Los electrones se pasan desde QH2 hacia el citocromo c por medio del complejo III (Q-citocromo c oxidorreductasa): Membrana interna QH2 + 2Cit c oxidado + 2H+matriz → Q + 2Cit c reducido + 4H+ espacio intermembrana Membrana externa Las enzimas en la membrana externa son: Acil CoA sintetasa Glicerolfosfato acil transferasa Se cree que el proceso incluye citocromos c1, bL y bH, y un Fe-S Rieske (un Fe-S poco común en el cual uno de los átomos de Fe está enlazado a dos grupos de histidina-SH más que a dos grupos de cisteína-SH) (fig. 13-5), y se conoce como el ciclo Q (fig. 13-6). Q puede existir en tres formas, la quinona oxidada, el quinol reducido o la semiquinona (fig. 13-6). Esta última se forma de modo transitorio durante el ciclo, una vuelta del cual origina la oxidación de 2QH2 a Q, lo que libera 4H+ hacia el espacio intermembrana, y la reducción de una Q a QH2, lo que hace que 2H+ sean captados desde la matriz (fig. 13-6). Note que aun cuando Q acarrea dos electrones, los citocromos acarrean sólo uno; de esta manera, la oxidación de un QH2 está acoplada a la reducción de dos moléculas de citocromo c mediante el ciclo Q. FIgURA 13-1 Estructura de las membranas mitocondriales. Note que la membrana interna contiene muchos pliegues (crestas). Q acepta electrones mediante el complejo I y el complejo II La NADH-Q oxidorreductasa o complejo I es una proteína grande, en forma de L, de múltiples subunidades, que cataliza la transferencia de electrones desde NADH hacia Q, junto con la transferencia de cuatro H+ a través de la membrana: El oxígeno molecular se reduce hacia agua por medio del complejo IV NADH + Q + 5H+ matriz → NAD + QH2 + 4H+espacio intermembrana El complejo IV (citocromo c oxidasa) oxida el citocromo c reducido, con la reducción concomitante de O2 hacia dos moléculas de agua: En un inicio los electrones se transfieren desde NADH hacia FMN, después hacia una serie de centros Fe-S, y por último hacia Q (fig. 13-5). En el complejo II (succinato-Q reductasa), se forma FADH2 durante la conversión de succinato en fumarato en el ciclo del áci- 4Cit c reducido + O2 + 8H+matriz → 4Cit c oxidado + 2H2O + 4H+espacio intermembrana Grasa Carbohidrato Proteína Digestión y absorción Alimento Ácidos grasos + Glicerol Glucosa, etc. ATP β-Oxidación Acetil-CoA O2 Ciclo del ácido cítrico 2H H2O Cadena respiratoria Aminoácidos Mitocondria ADP Fuentes extramitocondriales de equivalentes reductores FIgURA 13-2 Participación de la cadena respiratoria de las mitocondrias en la conversión de la energía proveniente de alimentos en ATP. La oxidación de los principales alimentos conduce a la generación de equivalentes reductores (2H) que son recolectados por la cadena respiratoria para oxidación y generación acoplada de ATP. 13 Bender.indd 104 27/11/09 14:03:37 CApítuLo 13 Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa 105 CHAPTER 13 The Respiratory Chain & Oxidative Phosphorylation 105 Succinato Fumarato Succinate Fumarate Complejo II Succinato-Q reductasa Complex II succinate-Q reductase NADH + H+ 1/ O 2 2 Cit c Q NADH + H+ NAD + 2H+ 1/ O 2 2 H2O Cyt c Q NAD Complejo I NADH-Q oxidorreductasa FIgURA 13-3 + 2H+ H2O Complejo III Complejo IV Q-cit c Cit c oxidorreductasa oxidasa Complex III Complex IV Complex I Q-cyt c Cyt c NADH-Q oxidase oxidoreductase Perspectiva general del flujo de electrones aoxidoreductase través de la cadena respiratoria. (Q, coenzima Q o ubiquinona; cit, citocromo.) FIGURE 13–3 Overview of electron flow through the respiratory chain. (Q, coenzyme Q or ubiquinone; cyt, cytochrome.) Esta transferencia de cuatro electrones desde el citocromo c hacia hacia el espacio intermembrana. De este modo, por cada par de transfer fromLos cytochrome c to O2 in-que pasa intopor thelaintermembrane space.o FADH Thus, 2for grupos hem, aofyfour a3, y electrons Cu (fig. 13-5). elecelectrones cadena desde NADH , el every com- pair of elecO2 comprende dosThis + passing down the chain from NADH or FADH , 2H+ volves twoa un heme groups, and , and Cu (Figure 13–5). trons trones se pasan inicialmente centro de Cua(Cu que contieplejo IV bombea 2H a través de la membrana. El O permanece A), a 2 3 2 Electrons aregrupos passedproteína initiallycisteína-SH to a Cu center ), which are pumped across IV the hasta membrane Complex ne átomos 2Cu enlazados a dos (que (Cu estrechamente unido al complejo que sebyreduce porIV. The O2 reA atoms linked to two groupsy estomains tightly bound tode Complex IV untilenitpois fully reduced, semejan una Fe-S),contains luego en2Cu secuencia hacia hem a, protein hem a3,cysteine-SH un completo, minimiza la liberación intermediarios an está Fe-S), then ina sequence heme a, heme a3, and como this minimizes the release of potentially segundo centro de(resembling Cu, CuB, que enlazado hem a3, ytopor tencia perjudiciales, aniones superóxido, o peróxido, que sedamaging in+ a second center, Cude , which is linked a3, andcuando fitermediates sucho as or peroxide which are último a O2. De los ocho HCu eliminados la matriz, cuatrotosehemeforman el O2 acepta uno dossuperoxide electrones,anions respectivamenB + to O2. Ofde theagua, eighty H removed from the matrix, formed when O2 accepts one or two electrons, respectively usan para formar nally dos moléculas cuatro se bombean te (cap. four 12). are used to form two water molecules and four are pumped (Chapter 12). Pr Pr Pr Cis Cys S S S Cis Cys Pr S Pr Fe S Cis S Cys Pr Pr Pr Pr Cis S S S Fe S S S Cis Pr B Cys Pr Cys S Fe Fe Cis Pr Cis Cys S S Pr Fe Pr Cys Fe S Cys Pr C Cys S S Cys S S Fe S Fe S S Fe S S Pr Cis S Cis Fe S S Fe S S A Pr Pr Cis Pr Pr A Cys S Fe S Pr Cis S Fe S Fe S S Cis Pr Cys Pr C Pr B FIgURA 13-4FIGURE Proteínas13–4 hierro-azufre (Fe-S).proteins (A) La Fe-S más con un Fe unido cisteínas. Iron-sulfur (Fe-S). (A)simple The simplest Fe-S withpor onecuatro Fe bound by four cysteines. (B) 2Fe-2S (B) Centro de 2Fe-2S. (C) Centro de 4Fe-4S. azufre inorgánico; apoproteína; cisteína.) center. (C) 4Fe-4S center. (S, Inorganic sulfur; Pr,Pr, apoprotein; Cys,Cis, cysteine.) Murray_CH13_PTR.indd 105 13 Bender.indd 105 3/26/2009 8:56: 27/11/09 14:03:40 106 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Glicerol-3-fosfato + + 4H Espacio intermembrana Membrana mitocondrial interna Complejo I Fe-S Cit c Q Cit b Cit c1 FMN + NADH + H NAD Piruvato Ciclo del ácido cítrico Cuerpos cetónicos + 2H FAD Complejo III Fe-S Matriz mitocondrial + 4H 4H Cit c Cit b Hem a + a3 CuACuB Cit c1 Complejo IV Complex III Complejo ETF Q Complejo II Fe-S FAD Fumarato 1/ O 2 2 + 2H+ Succinato H2 O FAD Acil CoA FIgURA 13-5 Flujo de electrones a través de los complejos de cadena respiratoria, que muestra los puntos de entrada de equivalentes reductores desde sustratos importantes. Q y cit son componentes móviles del sistema según se indica por las flechas punteadas. El flujo a través del complejo III (el ciclo Q) se muestra con mayor detalle en la figura 13-6. (Fe-S, proteína hierro-azufre; ETF, flavoproteína transferidora de electrón; Q, coenzima Q o ubiquinona; cit, citocromo.) EL TRANSPORTE DE ELECTRONES MEDIANTE LA CADENA RESPIRATORIA CREA UN gRADIENTE DE PROTÓN QUE IMPULSA LA SÍNTESIS DE ATP El flujo de electrones por la cadena respiratoria genera ATP por medio del proceso de fosforilación oxidativa. La teoría quimiosmótica, propuesta por Peter Mitchell en 1961, postula que los dos procesos están acoplados mediante un gradiente de protón a través de la membrana mitocondrial interna, de manera que la fuerza motriz de protón causada por la diferencia de potencial electroquímico (negativa en el lado de la matriz) impulsa el mecanismo de síntesis de ATP. Como se mencionó, los complejos I, III y IV actúan como bombas de protones. Dado que la membrana mitocondrial interna es impermeable a iones en general, y en especial a protones, éstos se acumulan en el espacio intermembrana, lo que crea la fuerza motriz de protón predicha por la teoría quimiosmótica. Una ATP sintasa ubicada en la membrana funciona como un motor rotatorio para formar ATP La fuerza motriz de protón impulsa una Atp sintasa ubicada en la membrana que en presencia de Pi + ADP forma ATP. La ATP sintasa está embebida en la membrana interna, junto con los complejos de la cadena respiratoria (fig. 13-7). Varias subunidades de la proteína forman una estructura parecida a bola alrededor de un eje conocido como F1, que se proyecta hacia la matriz y contiene el mecanismo de fosforilación (fig. 13-8). F1 está fijo a un complejo de proteína de membrana conocido como F0, que también consta de varias subunidades proteínicas. F0 abarca la membrana y forma un canal de protones. El flujo de estos últimos a través de F0 hace que rote, lo que impulsa la producción de ATP en el complejo F1 (figs. 13-7 y 13 Bender.indd 106 13-8). Se cree que esto ocurre por medio de un mecanismo de cambio de unión en el cual, a medida que el eje rota, la conformación de las subunidades β en F1 cambia desde una que se une con firmeza al ATP hacia otra que libera ATP y se une a ADP y Pi, de modo que puede formarse el siguiente ATP. Los estimados sugieren que por cada NADH oxidado, los complejos I y III translocan cuatro protones cada uno, y el complejo IV transloca dos. LA CADENA RESPIRATORIA PROPORCIONA LA MAYOR PARTE DE LA ENERgÍA CAPTADA DURANTE EL CATABOLISMO El ADP capta, en forma de fosfato de alta energía, una proporción importante de la energía libre derivada de los procesos catabólicos. El ATP resultante se ha denominado la “moneda” de energía de la célula porque pasa esta energía libre para impulsar los procesos que requieren energía (fig. 11-6). Hay una captación directa neta de dos grupos fosfato de alta energía en las reacciones glucolíticas (cuadro 18-1). En el ciclo del ácido cítrico se captan dos fosfatos de alta energía más por mol de glucosa durante la conversión de succinil CoA en succinato. Todas estas fosforilaciones sobrevienen en el nivel de sustrato. Por cada mol de sustrato oxidado mediante los complejos I, III y IV en la cadena respiratoria (es decir, por medio de NADH), se forman 2.5 mol de ATP por cada 0.5 mol de O2 consumido; esto es, la proporción P:O = 2.5 (fig. 13-7). Por otra parte, cuando un mol de sustrato (p. ej., succinato o 3-fosfoglicerato) se oxida por medio de los complejos II, III y IV, sólo se forman 1.5 mol de ATP; es decir, P:O = 1.5. Estas reacciones se conocen como fosforilación oxidativa en el ámbito de la cadena respiratoria. Al tomar en cuenta estos valores, se estima que cerca de 90% de los fosfatos de alta energía producidos a partir de la oxidación completa de 1 mol de glucosa se 27/11/09 14:03:41 CApítuLo 13 OH CH3O Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa O OH O O 107 CH3 CH3 CH3O [CH2CH = CCH2]nH OH QH2: forma reducida (quinol) (QH2) Cit c Espacio intermembrana Membrana mitocondrial interna Q−: forma semiquinona (radical libre) Q: forma por completo oxidada (quinona) 2H+ Cit c1 Cit c 2H+ QH2 Q− Q Fe-S bL bH bH QH2 Q bL Fe-S Cit c1 QH2 Matriz mitocondrial 2H+ FIgURA 13-6 El ciclo Q. Durante la oxidación de QH2 a Q, se dona un electrón a cit c por medio de una Fe-S de Rieske y cit c1, y el segundo a una Q para formar la semiquinona mediante cit bL y cit bH, con liberación de 2H+ hacia el espacio intermembrana. A continuación ocurre un proceso similar con una segunda QH2, pero en este caso el segundo electrón se dona a la semiquinona, lo que la reduce a QH2, y 2H+ son captados desde la matriz. (Fe-S, proteína hierro-azufre; Q, coenzima Q o ubiquinona; cit, citocromo.) 4H + 4H+ 2H+ H+ H+ + H Cit c Espacio intermembrana Membrana mitocondrial interna Complejo I Q Complejo III Complejo IV Desacopladores F0 F1 Matriz mitocondrial H+ H+ H+ H+ NADH + H+ NAD 1/ 2O2 Complejo II + 2H+ H2O ADP + Pi H+ ATP Succinato Fumarato FIgURA 13-7 La teoría quimiosmótica de la fosforilación oxidativa. Los complejos II, III y IV actúan como bombas de protón, lo que crea un gradiente de protón a través de la membrana, que es negativa en el lado de la matriz. La fuerza motriz de protón generada impulsa la síntesis de ATP conforme los protones fluyen de regreso hacia la matriz por medio de la enzima ATP sintasa (fig. 13-8). Los desacopladores aumentan la permeabilidad de la membrana a iones, lo que colapsa el gradiente de protón al permitir que el H+ pase sin atravesar la ATP sintasa y, así, desacopla el flujo de electrón a través de los complejos respiratorios, de la síntesis de ATP. (Q, coenzima Q o ubiquinona; cit, citocromo.) 13 Bender.indd 107 27/11/09 14:03:43 108 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos β ATP α δ γ α β ADP + Pi α β ATP b2 H+ γ Dentro Membrana mitocondrial interna a C Afuera C C C C C H+ obtiene mediante fosforilación oxidativa acoplada a la cadena respiratoria (cuadro 18-1). El control respiratorio asegura un aporte constante de ATP La disponibilidad de ADP puede controlar el índice de respiración de las mitocondrias, lo cual se debe a que la oxidación y fosforilación están firmemente acopladas; esto es, la oxidación no puede proceder por la cadena respiratoria sin fosforilación concomitante de ADP. En el cuadro 13-1 se muestran las cinco condiciones que controlan el índice de respiración en las mitocondrias. Casi todas las células en el estado en reposo se encuentran en estado 4, y la disponibilidad de ADP controla la respiración. Cuando se realiza trabajo, el ATP se convierte en ADP, lo que permite que ocurra más respiración que, a su vez, reabastece las reservas de ATP. En ciertas condiciones, la concentración de fosfato inorgánico también puede afectar el índice de funcionamiento de la cadena respiratoria. A medida que se incrementa la respiración CUADRO 13-1 Estados de control respiratorio Condiciones que limitan el índice de respiración Estado 1 Disponibilidad de ADP y sustrato Estado 2 Disponibilidad sólo de sustrato Estado 3 La capacidad de la cadena respiratoria en sí, cuando todos los sustratos y los componentes están presentes en cantidades que originan saturación Estado 4 Disponibilidad de sólo ADP Estado 5 Disponibilidad de únicamente oxígeno 13 Bender.indd 108 FIgURA 13-8 Mecanismo de producción de ATP por la ATP sintasa. El complejo enzimático consta de un subcomplejo F0 que es un disco de subunidades de proteína “C”. Hay una subunidad γ fija en forma de un “eje doblado”. Los protones que pasan por el disco de unidades “C” hacen rotar el disco y la subunidad γ fija. La subunidad γ se adapta dentro del subcomplejo F1 de tres subunidades α y tres subunidades β, que están fijas a la membrana y no rotan. Las subunidades β captan de manera secuencial ADP y Pi para formar ATP, que se expulsa a medida que la subunidad γ rotatoria saca cada subunidad β a la vez y cambia su conformación. De este modo, se generan tres moléculas de ATP por cada revolución. En aras de la claridad, no todas las subunidades que se han identificado se muestran; p. ej., el “eje” también contiene una subunidad. (como durante ejercicio), la célula se aproxima al estado 3 o el estado 5 cuando la capacidad de la cadena respiratoria queda saturada o la PO2 disminuye por debajo de la Km para el hem a3. También existe la posibilidad de que el transportador de ADP/ ATP, que facilita la entrada de ADP citosólico a la mitocondria, y la salida de ATP desde esta última, se conviertan en el limitante de la velocidad. De este modo, la manera en la cual los procesos oxidativos biológicos permiten que la energía libre resultante de la oxidación de alimento quede disponible para ser captada es por pasos, eficiente y controlada, en lugar de explosiva, ineficiente e incontrolada, como en muchos procesos biológicos. La energía libre restante que no se capta como fosfato de alta energía se libera como calor. Esto no necesita considerarse “desperdicio”, porque asegura que el sistema respiratorio en conjunto sea lo bastante exergónico como para que se saque de equilibrio, lo que permite el flujo unidireccional continuo y suministro constante de ATP. También contribuye al mantenimiento de la temperatura corporal. MUCHOS VENENOS INHIBEN LA CADENA RESPIRATORIA Gran parte de la información acerca de la cadena respiratoria se ha obtenido por medio del uso de inhibidores y, a la inversa, esto ha proporcionado conocimiento respecto del mecanismo de acción de varios venenos (fig. 13-9), mismos que se clasifican como inhibidores de la cadena respiratoria, inhibidores de la fosforilación oxidativa y desacopladores de esta última. Los barbitúricos, como el amobarbital, inhiben el transporte de electrones mediante el complejo I al bloquear la transferencia desde Fe-S hacia Q. En dosificación suficiente, son mortales in vivo. La antimicina A y el dimercaprol inhiben la cadena respiratoria en 27/11/09 14:03:45 CApítuLo 13 109 Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa Malonato Complejo II FAD Fe-S Succinato – FMN, Fe-S NADH Cit b, Fe-S, Cit c1 – ATP hem a3 Cu Cu ADP + Pi – – Oligomicina ATP O2 – Desacopladores – ADP + Pi Cit. c hem a – Piericidina A Amobarbital Rotenona – Oligomicina Complejo IV Complejo III Q – Desacopladores H2S CO CN– BAL Antimicina A – – Complejo I Carboxina TTFA ADP + Pi ATP FIgURA 13-9 Sitios de inhibición (⊝) de la cadena respiratoria por fármacos, sustancias químicas y antibióticos específicos. (BAL, dimercaprol; TTFA, un agente quelante de Fe. Las otras abreviaturas significan lo mismo que las de la figura 13-5.) Membrana mitocondrial interna Afuera Dentro N-etilmaleimida OH– H2PO4– N-etilmaleimida hidroxicinamato piruvato– 1 – 2 H+ – HPO42– 3 Malato2– Malato2– Citrato3– + H+ 4 Malato2– α-Cetoglutarato2– 5 – 3– ADP 6 ATP4– Atractilosida FIgURA 13-10 Sistemas de transporte de la membrana mitocondrial interna.  Transportador de fosfato,  simporte piruvato,  transportador de dicarboxilato,  transportador de tricarboxilato,  transportador de α-cetoglutarato,  transportador de nucleótido adenina. La N-etilmaleimida, hidroxicinamato y atractilosida inhiben (⊝) los sistemas indicados. También hay sistemas transportadores para glutamato/aspartato (pero no se muestran aquí) (fig. 13-13), glutamina, ornitina, aminoácidos neutros y carnitina (fig. 22-1). 13 Bender.indd 109 el complejo III. Los venenos clásicos H2S, monóxido de carbono y cianuro inhiben el complejo IV y, en consecuencia, pueden suspender por completo la respiración. El malonato es un inhibidor competitivo del complejo II. El atractilósido inhibe la fosforilación oxidativa mediante la inhibición del transportador de ADP hacia dentro de la mitocondria, y de ATP hacia afuera de ella (fig. 13-10). El antibiótico oligomicina bloquea por completo la oxidación y fosforilación al bloquear el flujo de protones por medio de la ATP sintasa (fig. 13-9). Los desacopladores disocian la oxidación en la cadena respiratoria, de la fosforilación (fig. 13-7). Estos compuestos son tóxicos in vivo, lo que hace que la respiración se torne incontrolada, puesto que el índice ya no queda limitado por la concentración de ADP o Pi. El desacoplador que se ha usado con mayor frecuencia es el 2,4dinitrofenol, pero otros compuestos actúan de manera similar. La termogenina (o la proteína desacopladora) es un desacoplador fisiológico que se encuentra en el tejido adiposo pardo que funciona para generar calor corporal, en particular para el recién nacido y durante la hibernación en animales (cap. 25). LA TEORÍA QUIMIOSMÓTICA PUEDE EXPLICAR EL CONTROL RESPIRATORIO Y LA ACCIÓN DE DESACOPLADORES La diferencia de potencial electroquímico a través de la membrana, una vez establecida como resultado de translocación de protón, inhibe el transporte adicional de equivalentes reductores por la cadena respiratoria, a menos que se descargue por translocación retrógrada de protones a través de la membrana mediante la ATP sintasa. Esto, a su vez, depende de la disponibilidad de ADP y Pi. Los desacopladores (p. ej., dinitrofenol) son anfipáticos (cap. 15) y aumentan la permeabilidad de la membrana mitocondrial interna lipoide a protones, lo que reduce el potencial electroquímico y suscita cortocircuito de la ATP sintasa (fig. 13-7). De este modo, la oxidación puede proceder sin fosforilación. 27/11/09 14:03:48 110 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos LA IMPERMEABILIDAD RELATIVA DE LA MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA REQUIERE TRANSPORTADORES DE INTERCAMBIO Sistemas de difusión de intercambio que incluyen proteínas transportadoras que abarcan la membrana están presentes en la misma para intercambio de aniones contra iones OH– y cationes contra iones H+. Esos sistemas se necesitan para captación y salida de metabolitos ionizados, mientras que preservan los equilibrios eléctrico y osmótico. La membrana mitocondrial interna es libremente permeable a moléculas pequeñas no cargadas, como oxígeno, agua, CO2, NH3 y ácidos monocarboxílicos, como 3-hidroxibutírico, acetoacético y acético. Los ácidos grasos de cadena larga se transportan hacia las mitocondrias por medio del sistema de carnitina (fig. 221), y hay también un acarreador especial para el piruvato que comprende un simporte que utiliza el gradiente de H+ desde afuera hacia dentro de la mitocondria (fig. 13-10). Sin embargo, los aniones dicarboxilato y tricarboxilato y los aminoácidos requieren sistemas transportadores o acarreadores específicos para facilitar su paso a través de la membrana. Los ácidos monocarboxílicos penetran con mayor facilidad en su forma no disociada y más liposoluble. El transporte de aniones dicarboxilato y tricarboxilato está estrechamente enlazado con el de fosfato inorgánico, que penetra con facilidad como el ion H2PO4– en intercambio por OH–. La captación neta de malato por el transportador dicarboxilato necesita fosfato inorgánico para intercambio en la dirección opuesta. La captación neta de citrato, isocitrato o cis-aconitato por el transportador tricarboxilato requiere malato a cambio. El transporte de α-cetoglutarato también exige un intercambio con malato. El transportador de nucleótido adenina permite el intercambio de ATP y ADP, no así de AMP. Es vital para permitir que el ATP salga de las mitocondrias hacia los sitios de utilización extramitocondrial y que ocurra el regreso de ADP para la producción de ATP dentro de la mitocondria (fig. 13-11). Dado que en esta translocación se eliminan de la matriz cuatro cargas negativas por cada tres introducidas, el gradiente electroquímico a través de la membrana (la fuerza motriz de protón) favorece la exportación de ATP. El Na+ puede intercambiarse por H+, impulsado por el gradiente de protón. Se cree que la captación activa de Ca2+ por mitocondrias ocurre con una transferencia de carga neta de 1 (uniporte de Ca+), posiblemente por medio de un Membrana mitocondrial interna Afuera F1 NAD+ NADH + H+ Glicerol 3-fosfato ATP sintasa 3H+ ATP4– ATP4– ADP3– Pi– H+ 2 1 ADP3– H+ FIgURA 13-11 Combinación de transportador de fosfato  con el transportador de nucleótido adenina  en la síntesis de ATP. El simporte H+/Pi mostrado es equivalente al antiporte Pi/OH– mostrado en la figura 13-10. antiporte Ca2+/H+. La liberación de calcio a partir de las mitocondrias se facilita por intercambio con Na+. Los ionóforos permiten que cationes específicos penetren en las membranas Los ionóforos son moléculas lipofílicas que forman complejos con cationes específicos y facilitan su transporte a través de membranas biológicas, por ejemplo, valinomicina (K+). En realidad, los desacopladores clásicos como el dinitrofenol, son ionóforos de protón. Una transhidrogenasa translocadora de protón es una fuente de NADPH intramitocondrial La transhidrogenasa enlazada con energía, una proteína de la membrana mitocondrial interna, acopla el paso de protones por el gradiente electroquímico desde afuera hacia dentro de la mitocondria, con la transferencia de H desde NADH intramitocondrial ha- Membrana externa Citosol Dentro Membrana interna Mitocondria Glicerol 3-fosfato Glicerol 3-fosfato deshidrogenasa (citosólica) Glicerol 3-fosfato deshidrogenasa (mitocondrial) Dihidroxiacetona fosfato Dihidroxiacetona fosfato FAD FADH2 Cadena respiratoria FIgURA 13-12 Transbordador de glicerofosfato para la transferencia de equivalentes reductores desde el citosol hacia la mitocondria. 13 Bender.indd 110 27/11/09 14:03:50 CApítuLo 13 Membrana interna Citosol + NAD Cadena respiratoria y fosforilación oxidativa 111 Mitocondria Malato NAD+ Malato 1 Malato deshidrogenasa NADH + H+ Oxaloacetato Malato deshidrogenasa α-KG α-KG Oxaloacetato Transaminasa Transaminasa Glutamato NADH + H+ Asp Glutamato Asp 2 H+ H+ FIgURA 13-13 Transbordador de malato para la transferencia de equivalentes reductores desde el citosol hacia la mitocondria.  transportador de alfa-cetoglutarato,  transportador de glutamato/aspartato (note el simporte protón con glutamato). cia NADPH para enzimas intramitocondriales como glutamato deshidrogenasa e hidroxilasas incluidas en la síntesis de esteroide. ATP La oxidación de NADH extramitocondrial está mediada por transbordadores de sustrato El transporte de ion en las mitocondrias está enlazado con energía Las mitocondrias mantienen o acumulan cationes como K+, Na+, Ca2+, Mg2+ y Pi. Se supone que una bomba de protón primaria impulsa el intercambio de catión. 13 Bender.indd 111 ADP CKa ATP ADP Creatina Creatina-P CKc CKg ATP ADP Glucólisis Citosol Membrana mitocondrial externa P P CKm ATP Espacio intermembrana ADP Transportador de nucleótido adenina Fosforilación oxidativa M mi e to int c a an l br ria m o nd a n er El NADH no puede penetrar en la membrana mitocondrial, sino que se produce de manera continua en el citosol por la 3-fosfogliceraldehído deshidrogenasa, una enzima en la secuencia de glucólisis (fig. 18-2). Empero, en condiciones aeróbicas, el NADH extramitocondrial no se acumula, y se cree que la cadena respiratoria lo oxida en las mitocondrias. La transferencia de equivalentes reductores a través de la membrana mitocondrial requiere pares de sustrato, enlazados por deshidrogenasas idóneas a cada lado de la membrana mitocondrial. En la figura 13-12 se muestra el mecanismo de transferencia usando el transbordador de glicerofosfato. Puesto que la enzima mitocondrial está enlazada a la cadena respiratoria por medio de una flavoproteína más que por NAD, por cada átomo de oxígeno consumido sólo se forman 1.5 mol de ATP en lugar de 2.5. Si bien este transbordador está presente en algunos tejidos (p. ej., cerebro, músculo blanco), en otros (p. ej., músculo cardiaco) es deficiente. Por ende, se cree que el sistema del transbordador malato (fig. 13-13) es de utilidad más universal. La complejidad de este sistema se debe a la impermeabilidad de la membrana mitocondrial al oxaloacetato, que debe reaccionar con el glutamato para formar aspartato y α-cetoglutarato mediante transaminación antes de transporte a través de la membrana mitocondrial y reconstitución hacia oxaloacetato en el citosol. Procesos que requieren energía (p. ej., contracción muscular) Matriz FIgURA 13-14 El transbordador de creatina fosfato del corazón y el músculo estriado. El transbordador permite el transporte rápido de fosfato de alta energía desde la matriz mitocondrial hacia el citosol. (CKa, creatina cinasa relacionada con requerimientos grandes de ATP, p. ej., contracción muscular; CKc, creatina cinasa para mantener el equilibrio entre creatina y creatina fosfato y ATP/ADP; CKg, creatina cinasa que acopla la glucólisis con la síntesis de creatina fosfato; CKm, creatina cinasa mitocondrial que media la producción de creatina fosfato a partir de ATP formado en la fosforilación oxidativa; P, proteína poro en la membrana mitocondrial externa.) 27/11/09 14:03:52 112 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos El transbordador de creatina fosfato facilita el transporte de fosfato de alta energía desde mitocondrias Este transbordador (fig. 13-14) incrementa las funciones de la creatina fosfato como un amortiguador de energía al actuar como un sistema dinámico para la transferencia de fosfato de alta energía desde mitocondrias en tejidos activos como el corazón y el músculo estriado. Una isoenzima de la creatina cinasa (CKm) se encuentra en el espacio intermembrana mitocondrial, catalizando la transferencia de fosfato de alta energía hacia creatina desde ATP que surge a partir del transportador de nucleótido adenina. A su vez, la creatina fosfato se transporta hacia el citosol por medio de poros de proteína en la membrana mitocondrial externa, y queda disponible para la generación de ATP extramitocondrial. ASPECTOS CLÍNICOS La enfermedad conocida como miopatía mitocondrial mortal infantil con disfunción renal comprende disminución grave o falta de casi todas las oxidorreductasas de la cadena respiratoria. En el síndrome MELAS (del inglés mitochondrial encephalopathy, lactic acidosis and stroke, mitencefalopatía, acidosis láctica y apoplejía mitocondriales) es una enfermedad hereditaria debida a deficiencia de NADH-Q oxidorreductasa (complejo I) o citocromo oxidasa (complejo IV). Se produce por una mutación del DNA mitocondrial, y se cree que está involucrada en la enfermedad de Alzheimer y la diabetes mellitus. Diversos fármacos y venenos actúan por inhibición de la fosforilación oxidativa. RESUMEN ■ Casi toda la energía liberada a partir de la oxidación de carbohidratos, grasas y proteínas se pone a disposición en las mitocondrias como equivalentes reductores (—H o e–), los cuales se encauzan hacia la 13 Bender.indd 112 ■ ■ ■ ■ cadena respiratoria, donde pasan por un gradiente redox de acarreadores hacia su reacción final con oxígeno para formar agua. Los acarreadores redox están agrupados en cuatro complejos de cadena respiratoria en la membrana mitocondrial interna. Tres de los cuatro complejos tienen la capacidad para usar la energía liberada en el gradiente redox para bombear protones hacia el exterior de la membrana, lo que crea un potencial electroquímico entre la matriz y el espacio de la membrana interna. La ATP sintasa abarca la membrana y actúa como un motor rotatorio usando la energía potencial del gradiente de protón o fuerza motriz de protón para sintetizar ATP a partir de ADP y Pi. De este modo, la oxidación está estrechamente acoplada a la fosforilación para satisfacer las necesidades de energía de las células. Dado que la membrana mitocondrial interna es impermeable a protones y otros iones, los transportadores de intercambio especiales abarcan la membrana para permitir que iones como OH–, ATP4–, ADP3– y metabolitos, pasen sin descargar el gradiente electroquímico a través de la membrana. Muchos venenos bien conocidos, como el cianuro, suspenden la respiración mediante inhibición de la cadena respiratoria. REFERENCIAS Hinkle PC et al: P/O ratios of mitochondrial oxidative phosphorylation. Biochem Biophys Acta 2005;1706:1. Mitchell P: Keilin’s respiratory chain concept and its chemiosmotic consequences. Science 1979;206:1148. 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Los animales pueden sintetizar carbohidratos a partir de aminoácidos, pero casi todos se derivan finalmente de vegetales. La glucosa es el carbohidrato más importante; casi todo el carbohidrato de la dieta se absorbe hacia el torrente sanguíneo como glucosa formada mediante hidrólisis del almidón y los disacáridos de la dieta, y otros azúcares se convierten en glucosa en el hígado. La glucosa es el principal combustible metabólico de mamíferos (excepto de los rumiantes), y un combustible universal del feto. Es el precursor para la síntesis de todos los otros carbohidratos en el cuerpo, incluso glucógeno para almacenamiento; ribosa y desoxirribosa en ácidos nucleicos; galactosa en la lactosa de la leche, en glucolípidos, y en combinación con proteína en glucoproteínas y proteoglucanos. Las enfermedades relacionadas con el metabolismo de los carbohidratos son diabetes mellitus, galacto­ semia, enfermedades por depósito de glucógeno e intolerancia a la lactosa. LOS CARBOHIDRATOS SON DERIVADOS ALDEHÍDO O CETONA DE ALCOHOLES POLIHÍDRICOS Los carbohidratos se clasifican como sigue: 1. Los monosacáridos son los azúcares que no se pueden hidrolizar hacia carbohidratos más simples. Pueden clasificarse como triosas, tetrosas, pentosas, hexosas o heptosas, dependiendo del número de átomos de carbono, y como aldosas o cetosas, dependiendo de si tienen un grupo aldehído o cetona. En el cuadro 14-1 se listan ejemplos. Además de aldehídos y cetonas, los alcoholes polihídricos (alcoholes azúcar o polioles), en los cuales el grupo aldehído o cetona se ha reducido a un grupo alcohol, también se encuentran de modo natural en los alimentos. Son sintetizados por medio de reducción de monosacáridos para uso en la manufactura de alimentos para reducción de peso, y para diabéticos. Se absorben poco y tienen alrededor de la mitad del rendimiento de energía de los azúcares. 2. Los disacáridos son productos de condensación de dos unidades de monosacárido; los ejemplos son maltosa y sacarosa. A P í t u l o 3. Los oligosacáridos son productos de condensación de 3 a 10 monosacáridos. Casi ninguno es digerido por las enzimas del ser humano. 4. Los polisacáridos son productos de condensación de más de 10 unidades de monosacáridos; los ejemplos son los almidones y las dextrinas, que pueden ser polímeros lineales o ramificados. Los polisacáridos a veces se clasifican como hexosanos o pentosanos, dependiendo de la identidad de los monosacáridos que los constituyen (hexosas y pentosas, respectivamente). Además de almidones y dextrinas, los alimentos contienen una amplia variedad de otros polisacáridos que se conocen en conjunto como polisacáridos no almidón; las enzimas del ser humano no los digieren, y son el principal componente de la fibra en la dieta. Los ejemplos son celulosa (un polímero de glucosa) de paredes de células vegetales, e inulina (un polímero de fructosa), el carbohidrato de almacenamiento en algunos vegetales. DESDE EL PUNTO DE VISTA BIOMÉDICO, LA GLUCOSA ES EL MONOSACÁRIDO DE MAYOR IMPORTANCIA La estructura de la glucosa puede representarse de tres maneras La fórmula estructural de cadena recta (aldohexosa; fig. 14-1A) puede explicar algunas de las propiedades de la glucosa, pero una estructura cíclica (un hemiacetal formado por reacción entre el grupo aldehído y un grupo hidroxilo) es favorecida en el aspecto termodinámico, y explica otras propiedades. La estructura cíclica normalmente se dibuja como se muestra en la figura 14-1B, la proyección de Haworth, en la cual la molécula se ve desde el lado y por arriba del plano del anillo; los enlaces más cercanos al observador son marcados y engrosados, y los grupos hidroxilo están por arriba o por debajo del plano del anillo. El anillo de seis miembros que contiene un átomo de oxígeno en realidad tiene la forma de una silla (fig. 14-1C). Los azúcares muestran diversas formas de isomerismo La glucosa, con cuatro átomos de carbono asimétricos, puede formar 16 isómeros. Los tipos de isomerismo de mayor importancia encontrados con la glucosa son: 113 14 Bender.indd 113 27/11/09 14:04:26 114 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos cuadro 14-1 clasificación de azúcares importantes aldosas Glicerosa (gliceraldehído) Dihidroxiacetona Tetrosas (C4H8O4) Eritrosa Eritrulosa Pentosas (C5H10O5) Ribosa Ribulosa Hexosas (C6H12O6) Glucosa Fructosa Heptosas (C7H14O7) — Sedoheptulosa 1. Isomerismo d y l: la designación de un isómero de azúcar como la forma d o su imagen en espejo como la forma l está determinada por su relación espacial con el compuesto original de los carbohidratos, el azúcar de tres carbonos glicerosa (gliceraldehído). En la figura 14-2 se muestran las formas l y d de este azúcar, y de la glucosa. La orientación de los grupos —H y —OH alrededor del átomo de carbono adyacente al carbono alcohol primario terminal (carbón 5 en la glucosa) determina si el azúcar pertenece a las series d o l. Cuando el grupo —OH en dicho carbono está a la derecha (fig. 14-2), el azúcar es el isómero d; cuando está a la izquierda, es el isómero l. Casi todos los monosacáridos que se encuentran en mamíferos son azúcares d, y las enzimas de las cuales depende su metabolismo son específicas para esta configuración. La presencia de átomos de carbono asimétricos también confiere actividad óptica al compuesto. Cuando un haz de luz polarizada por plano se hace pasar a través de una solución de un isómero óptico, rota hacia la derecha (es dextrorrotatorio [+]), o hacia la izquierda (es levorrotatorio [–]). La dirección de rotación de luz pola- O 1C H H 2C OH HO 3C H H 4C OH H 5C OH 6 CH O H 2 H C cetosas Triosas (C3H6O3) A O 1 C HO 3 CH2OH L-Glicerosa (L-gliceraldehído) OH CH2OH (D-gliceraldehído) O H HO 2 H H 3 OH HO 4 HO 5 C C C C C C H H C OH HO C H H H C OH H H C OH CH2OH L-Glucosa FIGURA 14-2 C D-Glicerosa O 1 6 H CH2OH D-Glucosa d- y l-isomerismo de glicerosa y glucosa. rizada es independiente de la estereoquímica del azúcar, de modo que puede designarse d(–), d(+), l(–) o l(+). Por ejemplo, la forma de fructosa que existe de manera natural es el isómero d(–). En solución, la glucosa es dextrorrotatoria, y las soluciones de glucosa a veces se conocen como dextrosa. 2. Estructuras en anillo piranosa y furanosa: las estructuras en anillo de monosacáridos son similares a las estructuras en anillo de pirano (un anillo de seis miembros) o furano (un anillo de cinco miembros) (figs. 14-3 y 14-4). Para la glucosa en solución, más de 99% está en la forma de piranosa. 3. Anómeros α y β: la estructura en anillo de una aldosa es hemiacetal, porque se forma por combinación de un grupo aldehído y un alcohol. De modo similar, la estructura en anillo de una cetosa es un hemicetal. La glucosa cristalina es α-d-glucopiranosa. La estructura cíclica se retiene en solución, pero ocurre isomerismo alrededor de la posición 1, el carbonilo o átomo de carbono anomé­ 2 OH O O 6 B HOCH 2 5 O H H H 4 Pirano 1 HO OH 3 H H OH Furano 2 OH HOCH 2 HOCH 2 C H HO 4 HOCH 2 O 2 3 H FIGURA 14-1 H H 5 HO HCOH O 6 H OH 1 O H H HO OH H OH H OH H H OH H OH d-glucosa. (a) Forma de cadena recta. (B) α-d- glucosa; proyección de Haworth. (c) α-d-glucosa; forma de silla. 14 Bender.indd 114 H C H OH α-D-Glucopiranosa FIGURA 14-3 H OH α-D-Glucofuranosa Formas piranosa y furanosa de la glucosa. 27/11/09 14:04:29 CApítulo 14 1 H HOCH 2 H H 2 HO OH H H 5 HO H O 6 5 2 HO H OH HO 1 4 3 OH H 6 3 OH α-D-Fructopiranosa β-D-Fructopiranosa 1 6 HOCH 2 HOCH 2 OH HOCH 2 O O 5 2 H H COH H H2 4 5 2 HO OH H H 3 4 4 OH H α-D-Fructofuranosa FIGURA 14-4 HO 3 1 COH H H2 OH Formas piranosa y furanosa de la fructosa. HOCH 2 O H H 4 Los derivados de triosas, tetrosas y pentosas, y de un azúcar de siete carbonos (sedoheptulosa) se forman como intermediarios metabólicos en la glucólisis (cap. 18) y la vía de la pentosa fosfato (cap. 21). Las pentosas son importantes en nucleótidos, ácidos nucleicos y varias coenzimas (cuadro 14-2). La glucosa, galactosa, fructosa y manosa son las hexosas de mayor importancia fisiológica (cuadro 14-3). Las cetosas importantes desde el punto de vista bioquímico se muestran en la figura 14-6, y las aldosas, en la figura 14-7. Además, los derivados de la glucosa del ácido carboxílico, son importantes, entre ellos el d-glucuronato (para la formación de glucurónido y en glucosaminoglucanos) y su derivado metabólico, l-iduronato (en glucosaminoglucanos) (fig. 14-8) y l-gulonato (un intermediario de la vía del ácido urónico; fig. 21-4). HOCH 2 O HO H Muchos monosacáridos son importantes en el aspecto fisiológico β-D-Fructofuranosa HOCH 2 O H H H H H 4 H OH H OH OH OH H OH OH OH HO 2 H OH H α-D-Galactosa FIGURA 14-5 OH 2 OH H α-D-Glucosa H α-D-Manosa Epímeros de la glucosa. CHO CHO HO C CHO CHO CHO CHO CHO H C OH HO C H H C OH C OH HO C H H C OH HO C H HO C H HO C H HO C H H C OH H C OH HO C H H C OH H C OH H C OH C OH H C OH H C OH H C OH H C OH H H 115 rico, para dar una mezcla de α-glucopiranosa (38%) y β-glucopiranosa (62%). Menos de 0.3% está representado por anómeros α y β de glucofuranosa. 4. Epímeros: los isómeros que difieren como resultado de variaciones de configuración del —OH y —H en los átomos de carbono 2, 3 y 4 de la glucosa, se conocen como epímeros. Desde el punto de vista biológico, los epímeros de mayor importancia de la glucosa son manosa (epimerizada en el carbono 2) y galactosa (epimerizada en el carbono 4) (fig. 14-5). 5. Isomerismo de aldosa­cetosa: la fructosa tiene la misma fórmula molecular que la glucosa, pero difieren en su fórmula estructural, porque hay un grupo ceto potencial en la posición 2, el carbono anomérico de la fructosa (figs. 14-4 y 14-6), mientras que hay un grupo aldehído potencial en la posición 1, el carbono anomérico de la glucosa (figs. 14-2 y 14-7). H O 6 Carbohidratos importantes desde el punto de vista fisiológico CHO CHO H C H C OH HO C H H C OH H C OH OH CH2OH D-Glicerosa (D-gliceraldehído) CH2OH D-Eritrosa FIGURA 14-6 CH2OH CH2OH CH2OH D-Arabinosa D-Xilosa D-Lixosa H CH2OH D-Ribosa CH2OH D-Galactosa CH2OH CH2OH D-Manosa D-Glucosa Ejemplos de aldosas de importancia fisiológica. CH2OH CH2OH CH2OH C O CH2OH Dihidroxiacetona FIGURA 14-7 14 Bender.indd 115 CH2OH CH2OH C O C O HO C H H C H C OH H C CH2OH D-Xilulosa C O C O HO C H HO C H H C OH OH H C OH H C OH OH H C OH H C OH CH2OH D-Ribulosa CH2OH D-Fructosa CH2OH D-Sedoheptulosa Ejemplos de cetosas de importancia fisiológica. 27/11/09 14:04:33 116 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos cuadro 14-2 Pentosas de importancia fisiológica azúcar Fuente Importancia bioquímica y clínica d-Ribosa Ácidos nucleicos e intermediario metabólico Componente estructural de ácidos nucleicos y coenzimas, entre ellos ATP, NAD(P) y coenzimas flavina d-Ribulosa Intermediario metabólico Intermediario en la vía de la pentosa fosfato d-Arabinosa Gomas vegetales Constituyente de glucoproteínas d-Xilosa Gomas vegetales, proteoglucanos, glucosaminoglucanos Constituyente de glucoproteínas l-Xilulosa Intermediario metabólico Se excreta en la orina en la pentosuria esencial cuadro 14-3 Hexosas de importancia fisiológica azúcar Fuente Importancia bioquímica Importancia clínica d-Glucosa Jugos de frutas, hidrólisis del almidón, azúcar de caña o de remolacha (betabel), maltosa y lactosa El principal combustible metabólico para tejidos; “azúcar en sangre” Se excreta en la orina (glucosuria) en la diabetes mellitus mal controlada como resultado de hiperglucemia d-Fructosa Jugos de frutas; miel; hidrólisis de azúcar de caña o de remolacha, y de inulina; isomerización enzimática de jarabes de glucosa para la manufactura de alimentos Se metaboliza con facilidad por medio de glucosa o de modo directo La intolerancia hereditaria a la fructosa conduce a acumulación de fructosa e hipoglucemia d-Galactosa Hidrólisis de lactosa Se metaboliza con facilidad hacia glucosa; se sintetiza en la glándula mamaria para síntesis de lactosa en la leche. Un constituyente de glucolípidos y glucoproteínas La galactosemia hereditaria como resultado de fracaso para metabolizar galactosa da pie a cataratas d-Manosa Hidrólisis de gomas manano vegetales Constituyente de glucoproteínas COO– H O H H H HO OH H FIGURA 14-8 O H OH OH H COO– HO OH H H H OH OH α-d-glucuronato (izquierda) y β-l-iduronato (derecha). Los azúcares forman glucósidos con otros compuestos y entre sí Los glucósidos se forman por condensación entre el grupo hidroxilo del carbono anomérico de un monosacárido, y un segundo compuesto que puede o no (en el caso de una aglicona) ser otro monosacárido. Si el segundo grupo es un hidroxilo, el enlace O-glucosídico es un enlace acetal porque se produce por una reacción entre un grupo hemiacetal (formado a partir de un aldehído y un grupo —OH) y otro grupo —OH. Si la porción hemiacetal es glucosa, el compuesto resultante es un glucósido; si es galactosa, un galactósido, y así sucesivamente. Si el segundo grupo es una amina, se forma un enlace N-glucosídico, por ejemplo, entre adenina y ribosa en nucleótidos como ATP (fig. 11-4). Los glucósidos están ampliamente distribuidos en la Naturaleza; la aglicona puede ser metanol, glicerol, un esterol, un fenol, o 14 Bender.indd 116 una base como adenina. Los glucósidos importantes en medicina debido a su acción sobre el corazón (glucósidos cardiacos) contienen esteroides como la aglicona. Éstos incluyen derivados de la digital y del estrofanto, como ouabaína, un inhibidor de la Na+-K+ ATPasa de las membranas celulares. Otros glucósidos comprenden antibióticos como la estreptomicina. Los azúcares desoxi carecen de un átomo de oxígeno Los azúcares desoxi son aquellos en los cuales un grupo hidroxilo ha quedado remplazado por hidrógeno. Un ejemplo es la desoxirribo­ sa (fig. 14-9) en el DNA. El azúcar desoxi l-fucosa (fig. 14-13) existe en glucoproteínas; la 2-desoxiglucosa se usa de forma experimental como un inhibidor del metabolismo de la glucosa. Los azúcares amino (hexosaminas) son componentes de glucoproteínas, gangliósidos y glucosaminoglucanos Los azúcares amino incluyen d-glucosamina, un constituyente del ácido hialurónico (fig. 14-10), d-galactosamina (también conocida como condrosamina), un constituyente de la condroitina y la d-manosamina. Varios antibióticos (p. ej., eritromicina) contienen azúcares amino, que son importantes para su actividad antibiótica. 27/11/09 14:04:34 CApítulo 14 La maltosa, sacarosa y lactosa son disacáridos importantes 5 HOCH2 O OH H H H H 3 2 OH FIGURA 14-9 Los disacáridos son azúcares compuestos de dos residuos monosacárido unidos por un enlace glucósido (fig. 14-11). Los disacáridos importantes en el aspecto fisiológico son maltosa, sacarosa y lactosa (cuadro 14-4). La hidrólisis de la sacarosa da una mezcla de glucosa y fructosa denominada “azúcar invertido” porque la fructosa es fuertemente levorrotatoria y cambia (invierte) la acción dextrorrotatoria más débil de la sacarosa. 1 4 H 2-Desoxi-d-ribofuranosa (forma β). HOCH2 LOS POLISACÁRIDOS DESEMPEÑAN FUNCIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTRUCTURALES O H H H HO OH H + NH H OH Los polisacáridos comprenden los siguientes carbohidratos de importancia fisiológica: El almidón es un homopolímero de glucosa que forma una cadena α-glucosídica, llamada glucosano o glucano. Es el carbohidrato más importante de la dieta en cereales, papas (patatas), legumbres y otras verduras. Los dos constituyentes principales son amilosa 3 FIGURA 14-10 Glucosamina (2-amino-d-glucopiranosa) (forma α). La galactosamina es una 2-amino-d-galactopiranosa. Tanto la glucosamina como la galactosamina existen como derivados N-acetilo en carbohidratos más complejos, por ejemplo, glucoproteínas. Maltosa 1 HO OH 3 H H 2 * 4 OH O OH 1 3 H H * OH 2 OH O-α-D-glucopiranosil-(1 → 4)-α-D-glucopiranosa 1 H OH 3 H H * O OH 4 H 1 OH 2 OH 3 H H H * 2 OH O-β-D-Galactopiranosil-(1 → 4)-β-D-glucopiranosa HOCH 2 O 5 H H 4 O 5 HO H H 1 HOCH 2 HOCH 2 O 5 H H H 4 O 5 H 6 6 6 HOCH 2 HOCH 2 O 5 H Sacarosa Lactosa 6 6 HOCH 2 117 Carbohidratos importantes desde el punto de vista fisiológico H H 4 1 HO OH 3 H O H H 2 * * O OH 2 H 5 H 3 OH 6 HO COH 4 H2 H O-α-D-Glucopiranosil-(1 → 2)-β-D-fructofuranósida FIGURA 14-11 Estructuras de disacáridos importantes. La α y la β se refieren a la configuración del átomo de carbono anomérico (*). Cuando el carbono anomérico del segundo residuo participa en la formación de enlace glucosídico, como en la sacarosa, el residuo se convierte en un glucósido conocido como un furanósido o un piranósido. Dado que el disacárido ya no tiene un carbono anomérico con un grupo aldehído o cetona potencial libre, ya no muestra propiedades reductoras. La configuración del residuo β-fructofuranosa en la sacarosa se origina por giro de 180° e inversión de la molécula de β-fructofuranosa presentada en la figura 14-4. cuadro 14-4 disacáridos de importancia fisiológica azúcar composición Fuente Azúcar de caña y de remolacha, sorgo y algunas frutas y verduras Sacarosa O-α-d-glucopiranosil-(1→2)β-d-fructofuranósida Lactosa O-α-d-galactopiranosil-(1→4)-β- Leche (y muchas preparaciones farmacéuticas como un relleno) d-glucopiranosa Maltosa O-α-d-glucopiranosil-(1→4)α-d-glucopiranosa Hidrólisis enzimática del almidón (amilasa); cereales germinados y malta Isomaltosa O-α-d-glucopiranosil-(1→6)α-d-glucopiranosa Hidrólisis enzimática del almidón (los puntos de ramificación en la amilopectina) Lactulosa O-α-d-galactopiranosil-(1→4)-β- Leche calentada (pequeñas cantidades), principalmente sintética d-fructofuranosa Trehalosa O-α-d-glucopiranosil-(1→1)α-d-glucopiranosida 14 Bender.indd 117 Importancia clínica La falta de sucrasa de origen genético, que es rara, lleva a intolerancia a la sacarosa —diarrea y flatulencia La falta de lactasa (alactasia) conduce a intolerancia a la lactosa —diarrea y flatulencia—; puede excretarse en la orina durante el embarazo Las enzimas intestinales no la hidrolizan, pero las bacterias intestinales la fermentan; se usa como laxante osmótico leve Levaduras y hongos; el principal azúcar de la hemolinfa de insectos 27/11/09 14:04:38 118 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos 6 O H H2 C 4 O 6 O H 1 H2 C 4 O O B O O O O O O O O 1 A O O 6 6 HOCH 2 HOCH 2 O O 6 O 1 O 1 4 HOCH 2 O 1 4 1 4 O 4 6 CH 2 O O O O O O FIGURA 14-12 Estructura del almidón. (a) Amilosa, que muestra estructura en espiral helicoidal. (B) Amilopectina, que muestra punto de ramificación 1 → 6. (13 a 20%), que tiene una estructura helicoidal no ramificada, y amilopectina (80 a 85%), que consta de cadenas ramificadas compuestas de 24 a 30 residuos de glucosa unidos por enlaces α1 → 4 en las cadenas, y por enlaces α1 → 6 en los puntos de ramificación (fig. 14-12). El grado al cual la amilasa hidroliza el almidón en los alimentos está determinado por su estructura, el nivel de cristalización o hidratación (el resultado del cocinado), y por el hecho de si está encerrado en paredes de células vegetales intactas (e indigeribles). El índice glucémico de un alimento feculento es una medida de su digestibilidad, con base en el grado al cual aumenta la concentración de glucosa en sangre en comparación con una cantidad equivalente de glucosa o un alimento de referencia, como pan blanco o arroz hervido. El glucógeno (fig. 14-13) es el polisacárido de almacenamiento en animales, y a veces se llama almidón animal. Es una estructura más ramificada que la amilopectina con cadenas de residuos 12-14 α-d-glucopiranosa (en enlace α1 → 4 glucosídico) con ramificación mediante enlaces α1 → 6 glucosídicos. La inulina es un polisacárido de la fructosa (y, en consecuencia, un fructosano) que se encuentra en tubérculos y raíces de dalias, alcachofas y dientes de león. Es fácilmente soluble en agua y se usa para determinar el índice de filtración glomerular, pero las enzimas intestinales no la hidrolizan. Las dextrinas son intermediarios en la hidrólisis del almidón. La celulosa es el principal constituyente de las paredes de las células vegetales. Es insoluble y consta de unidades de β-d-glucopiranosa unidas por enlaces β1 → 4 para formar cadenas largas y rectas fortalecidas por enlaces de hidrógeno que se entrecruzan. Los mamífe- O O H O CH2 4 4 6 1 O O 1 O 4 O 6 CH2 4 1 G 1 2 O HOCH2 1 O HOCH2 O O 3 H O CH2 4 4 6 1 O O A B FIGURA 14-13 La molécula de glucógeno. (a) Estructura general. (B) Agrandamiento de la estructura en un punto de ramificación. La molécula es una esfera de ~21 nm de diámetro que puede observarse en micrografías electrónicas. Tiene una masa molecular de ~107 Da y consta de cadenas de polisacárido, cada una de las cuales contiene alrededor de 13 residuos glucosa. Las cadenas son ramificadas o no ramificadas, y están dispuestas en 12 capas concéntricas (en la figura sólo se muestran cuatro). Las cadenas ramificadas (cada una de las cuales tiene dos ramas) se encuentran en las capas internas, y las cadenas no ramificadas, en la capa externa. (G, glucogenina, la molécula preparadora para la síntesis de glucógeno.) 14 Bender.indd 118 27/11/09 14:04:39 CApítulo 14 ros carecen de enzimas que hidrolicen los enlaces β1 → 4; de esta manera, no pueden digerir la celulosa. Es una fuente importante de “volumen” en la dieta, y el principal componente de la fibra de la misma. Los microorganismos que se encuentran en el intestino de rumiantes y otros herbívoros pueden hidrolizar el enlace y fermentar los productos hacia ácidos grasos de cadena corta como una importante fuente de energía. Hay cierto metabolismo bacteriano de celulosa en el colon de seres humanos. La quitina es un polisacárido Carbohidratos importantes desde el punto de vista fisiológico cuadro 14-5 carbohidratos que se encuentran en glucoproteínas Hexosas Manosa (Man), galactosa (Gal) Acetil hexosaminas N-acetilglucosamina (GlcNAc), N-acetil galactosamina (GalNAc) Pentosas Arabinosa (Ara), xilosa (Xil) Metil pentosa l-fucosa (Fuc, fig. 14-15) Ácidos siálicos Derivados N-acilo del ácido neuramínico; el ácido siálico predominante es ácido N-acetil-neuramínico (NeuAc, fig.14-16) Quitina HOCH 2 HOCH 2 O O H H O 1 OH O O 4 H H H H H O OH H CH 3 HN CO CH 3 H N-acetilglucosamina H H H HO H H 119 HN CO CH 3 n N-acetilglucosamina OH FIGURA 14-15 HO OH H β-l-Fucosa (6-desoxi-β-l-galactosa). Ácido hialurónico HOCH 2 O COO – H H O O 1 HO O H H 4 3 1 OH H H OH O H H H H HN CO CH 3 n Ácido β-glucurónico N-acetilglucosamina Condroitín 4-sulfato (Nota: también hay 6-sulfato) HOCH 2 O COO – – SO O 3 H H O O O 4 H H OH H H 3 1 OH O 1 H H H H HN CO CH 3 n Ácido β-glucurónico Sulfato de N-acetilgalactosamina estructural en el exoesqueleto de crustáceos e insectos, y en hongos. Consta de unidades de N-acetil-d-glucosamina unidas por enlaces β1 → 4 glucosídicos (fig. 14-14). Los glucosaminoglucanos (mucopolisacáridos) son carbohidratos complejos que contienen azúcares amino y ácidos urónicos. Pueden estar fijos a una molécula de proteína, lo que forma un pro­ teoglucano. Los proteoglucanos proporcionan la sustancia fundamental o de relleno del tejido conjuntivo. Sostienen grandes cantidades de agua y ocupan espacio, lo que amortigua o lubrica otras estructuras, debido al gran número de grupos —OH y cargas negativas en la molécula que, por repulsión, mantienen separadas las cadenas de carbohidrato. Los ejemplos son el ácido hialurónico, el condroitín sulfato y la heparina (fig. 14-14). Las glucoproteínas (también conocidas como mucoproteínas) son proteínas que contienen cadenas de oligosacárido ramificadas o no ramificadas (cuadro 14-5, fig. 14-15); se encuentran en membranas celulares (caps. 40 y 47) y en muchas otras situaciones; la albúmina sérica es una glucoproteína. Los ácidos siálicos son derivados N- u O-acilo del ácido neuramínico (fig. 14-16); este último es un azúcar de nueve carbonos derivado de la manosamina (un epímero de la glucosamina) y el piruvato. Los ácidos siálicos son constituyentes tanto de glucoproteínas como de gangliósidos. Heparina COSO3– H O H H O H O H 1 COO – O 4 OH H H NH SO 3– H OH H H OSO3– O Glucosamina sulfatada Ácido idurónico sulfatado FIGURA 14-14 Estructura de algunos polisacáridos y glucosaminoglucanos complejos. 14 Bender.indd 119 n FIGURA 14-16 Estructura del ácido N-acetilneuramínico, un ácido siálico (Ac = CH3—CO—). 27/11/09 14:04:42 120 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos LOS CARBOHIDRATOS SE ENCUENTRAN EN MEMBRANAS CELULARES Y EN LIPOPROTEÍNAS Alrededor de 5% del peso de las membranas celulares es carbohidrato en glucoproteínas y glucolípidos. Su presencia sobre la superficie externa de la membrana plasmática (el glucocáliz) se ha mostrado con el uso de lectinas vegetales, aglutininas proteínicas que unen residuos glucosilo específicos. Por ejemplo, la concanavalina A une residuos α-glucosilo y α-manosilo. La glucoforina es una importante glucoproteína de membrana integral de los eritrocitos del ser humano. Tiene 130 residuos aminoácido y abarca la membrana lipídica, con regiones polipeptídicas fuera de las superficies tanto externa como interna (citoplásmica). Las cadenas de carbohidrato están fijas a la porción amino terminal fuera de la superficie externa. Los carbohidratos también están presentes en apo-proteína B de lipoproteínas plasmáticas. rESuMEN ■ ■ Los carbohidratos son constituyentes importantes del alimento de los animales y del tejido de éstos. Se caracterizan por el tipo y número de residuos monosacárido en sus moléculas. La glucosa es el carbohidrato de mayor importancia en la bioquímica de mamíferos, porque casi todo el carbohidrato en los alimentos se convierte en glucosa para el metabolismo. 14 Bender.indd 120 ■ Los azúcares tienen grandes números de estereoisómeros porque contienen varios átomos de carbono asimétricos. ■ Los monosacáridos de mayor importancia fisiológica son la glucosa, el “azúcar de la sangre” y la ribosa, un importante constituyente de nucleótidos y ácidos nucleicos. ■ Los disacáridos importantes son maltosa (glucosil glucosa), un intermediario en la digestión del almidón; la sacarosa (glucosil fructosa), importante como un constituyente de la dieta, que contiene fructosa, y la lactosa (galactosil glucosa), en la leche. ■ El almidón y el glucógeno son polímeros de glucosa de almacenamiento en vegetales y animales, respectivamente. El almidón es la principal fuente de energía en la dieta. ■ Los carbohidratos complejos contienen otros derivados de azúcar como azúcares amino, ácidos urónicos y ácidos siálicos. Incluyen proteoglucanos y glucosaminoglucanos, que se relacionan con elementos estructurales de los tejidos, y glucoproteínas, que son proteínas que contienen cadenas de oligosacárido; se encuentran en muchas situaciones, incluso en la membrana celular. rEFErENcIaS Davis BG, Fairbanks AJ: Carbohydrate Chemistry. Oxford University Press, 2002. Ernst B, Hart GW, Sinay P: Carbohydrates in Chemistry and Biology. Wiley-VCH, 2000. Lindhorst TK, Thisbe K: Essentials of Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, 3rd ed. Wiley-VCH, 2007. 27/11/09 14:04:42 15 c Lípidos de importancia fisiológica Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los lípidos son un grupo de compuestos heterogéneo, que incluye grasas, aceites, esteroides, ceras y compuestos relacionados más por sus propiedades físicas que por sus propiedades químicas. Tie­ nen la propiedad común de ser: 1) relativamente insolubles en agua y 2) solubles en solventes no polares, como éter y cloroformo. Son importantes constituyentes de la dieta no sólo debido a su alto valor energético, sino también debido a las vitaminas liposolubles y los ácidos grasos esenciales contenidos en la grasa de alimentos natura­ les. La grasa se almacena en el tejido adiposo, donde también sirve como un aislante térmico de los tejidos subcutáneos y alrededor de ciertos órganos. Los lípidos no polares actúan como aisladores eléctricos, lo que permite la propagación rápida de las ondas de despo­ larización a lo largo de nervios mielinizados. Las combinaciones de lípido y proteína (lipoproteínas) sirven como el medio para transportar lípidos en la sangre. El conocimiento de las propiedades bio­ químicas de los lípidos se necesita para entender muchas áreas biomédicas importantes, como obesidad, diabetes mellitus, aterosclerosis, y la función de diversos ácidos grasos poliinsaturados en la nutrición y la salud. LOS LÍPIDOS SE CLASIFICAN COMO SIMPLES O COMPLEJOS 1. Lípidos simples: ésteres de ácidos grasos con diversos alcoholes. a. Grasas: ésteres de ácidos grasos con glicerol. Los aceites son grasas en el estado líquido. b. Ceras: ésteres de ácidos grasos con alcoholes monohídricos de masa molecular relativa (peso molecular) más alta. 2. Lípidos complejos: ésteres de ácidos grasos que contienen grupos además de un alcohol y un ácido graso. a. Fosfolípidos: lípidos que contienen, además de ácidos grasos y un alcohol, un residuo ácido fosfórico. A menudo poseen bases que contienen nitrógeno y otros sustituyentes; por ejemplo, en los glicerofosfolípidos el alcohol es glicerol, y en los esfingofosfolípidos el alcohol es la esfingosina. b. Glucolípidos (glucoesfingolípidos): lípidos que contienen un ácido graso, esfingosina y carbohidrato. c. Otros lípidos complejos: lípidos como sulfolípidos y aminolípidos. Las lipoproteínas también pueden colocarse en esta categoría. A P í t u L o 3. Lípidos precursores y derivados: comprenden ácidos grasos, glicerol, esteroides, otros alcoholes, aldehídos gra­ sos, cuerpos cetónicos (cap. 22), hidrocarburos, vitaminas liposolubles y hormonas. Dado que no tienen carga, los acilgliceroles (glicéridos), el co­ lesterol y los ésteres de colesterol se llaman lípidos neutrales. LOS ÁCIDOS GRASOS SON ÁCIDOS CARBOXÍLICOS ALIFÁTICOS Los ácidos grasos se encuentran en el cuerpo principalmente como ésteres en grasas y aceites naturales, pero existen en la forma no es­ terificada como ácidos grasos libres, una forma que se transporta en el plasma. Los ácidos grasos que se hallan en grasas naturales por lo general contienen un número par de átomos de carbono. La cade­ na puede ser saturada (que no contiene dobles enlaces) o insaturada (que contiene uno o más dobles enlaces). Los ácidos grasos se denominan con base en los hidrocarburos correspondientes La nomenclatura sistemática de uso más frecuente denomina al áci­ do graso con base en el hidrocarburo con el mismo nombre y orde­ namiento de átomos de carbono; la -o final se sustituye por ­oico (sistema ginebrino). De este modo, los ácidos saturados terminan en -anoico, por ejemplo, ácido octanoico, y los ácidos grasos insatu­ rados con dobles enlaces terminan en -enoico, por ejemplo, ácido octadecenoico (ácido oleico). Los átomos de carbono se numeran desde el carbono carboxilo (carbono núm. 1). Los átomos de carbono adyacentes al carbono carbonilo (núms. 2, 3 y 4) también se conocen como los carbonos α, β y γ, respectivamente, y el carbono metilo terminal recibe el nom­ bre de carbono ω o n. En diversas fuentes se usa Δ para indicar el número y la posi­ ción de los dobles enlaces (fig. 15­1); por ejemplo, Δ9 indica un do­ ble enlace entre los carbonos 9 y 10 del ácido graso; ω9 denota un doble enlace en el noveno carbono contando desde el carbono ω. En animales, se introduce un doble enlace adicional entre el doble en­ lace existente (p. ej., ω9, ω6 o ω3) y el carbono carboxilo, lo que conduce a tres series de ácidos grasos conocidos como las familias ω9, ω6 y ω3, respectivamente. 121 15 Bender.indd 121 27/11/09 14:05:58 122 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos 18:1;9 o ∆9 18:1 18 10 9 CH3(CH2)7CH 1 CH(CH2)7COOH o ω9,C18:1 o n–9, 18:1 ω 2 n 17 3 4 5 6 7 8 9 CH3CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH FIGuRA 15-1 10 10 18 9 1 CH(CH2)7COOH Ácido oleico. n – 9 (n menos 9) es equivalente a ω9. Los ácidos grasos saturados no contienen dobles enlaces Los ácidos grasos saturados pueden imaginarse como basados en ácido acético (CH3—COOH) como el primer miembro de la serie en la cual se agrega de manera progresiva —CH2— entre los grupos CH3— y —COOH terminales. En el cuadro 15­1 se muestran ejem­ plos. Se sabe que existen otros miembros de la serie con más carbo­ nos, sobre todo en ceras. Algunos ácidos grasos de cadena ramifica­ da se han aislado a partir de fuentes tanto vegetales como animales. Los ácidos grasos insaturados contienen uno o más dobles enlaces Los ácidos grasos insaturados (cuadro 15­2) pueden subdividirse como sigue: 1. Ácidos monoinsaturados (monoetenoide, monoenoico) que contienen un doble enlace. 2. Ácidos poliinsaturados (polietenoide, polienoico), que contienen dos o más dobles enlaces. 3. Eicosanoides: estos compuestos, derivados de ácidos grasos polienoicos eicosa (20 carbonos), incluyen prostanoides, leucotrienos (LT) y lipoxinas (LX). Los prostanoides comprenden prostaglandinas (PG), prostaciclinas (PGI) y tromboxanos (TX). Cuadro 15-1 Ácidos grasos saturados Nombre común Número de átomos de C Acético 2 Producto terminal principal de la fermentación de carbohidratos por organismos del rumen Butírico 4 Valérico 5 Caproico 6 En ciertas grasas en pequeñas cantidades (en particular mantequilla). Principal producto terminal de la fermentación de carbohidrato por organismos del rumen* Láurico 12 Esperma de ballena; canela, palma y coco; laurel; mantequilla Mirístico 14 Aceites de nuez moscada, palma y coco; arrayán (mirto); mantequilla Palmítico 16 Esteárico 18 Común en todas las grasas de origen animal y vegetal * También se forma en el ciego de herbívoros y en menor grado en el colon de seres humanos. 15 Bender.indd 122 Las prostaglandinas existen en casi todos los tejidos de mamí­ feros y actúan como hormonas locales; tienen importantes activida­ des fisiológicas y farmacológicas. Se sintetizan in vivo por medio de ciclización por el centro de la cadena de carbono de ácidos grasos poliinsaturados de 20 carbonos (eicosanoicos) (p. ej., ácido araqui­ dónico) para formar un anillo ciclopentano (fig. 15­2). Una serie relacionada de compuestos, los tromboxanos, tiene el anillo ciclo­ pentano interrumpido con un átomo de oxígeno (anillo oxano) (fig. 15­3). Tres diferentes ácidos grasos eicosanoicos dan lugar a tres grupos de eicosanoides caracterizados por el número de dobles en­ laces en las cadenas laterales, por ejemplo, PG1, PG2, PG3. Tanto en la serie de prostaglandinas como en la de tromboxa­ nos, diferentes grupos de sustituyentes dan lugar a estructuras iden­ tificadas como A, B, etc.; por ejemplo, el tipo “E” de prostaglandina (PGE2) tiene un grupo ceto en la posición 9, mientras que el tipo “F” tiene un grupo hidroxilo en esta posición. Los leucotrienos y las lipoxinas (fig. 15­4) son un tercer grupo de derivados eicosanoides formados mediante la vía de la lipooxigenasa (fig. 23­11). Se carac­ terizan por la presencia de tres o cuatro dobles enlaces conjugados, respectivamente. Los leucotrienos causan broncoconstricción; son potentes agentes proinflamatorios y están implicados en el asma. Casi todos los ácidos grasos insaturados naturales tienen dobles enlaces cis Las cadenas de carbono de ácidos grasos saturados forman un mo­ delo en zigzag cuando se extienden a temperaturas bajas. A tempe­ raturas más altas, algunos enlaces rotan, lo que da por resultado acortamiento de la cadena; ello explica por qué las biomembranas se hacen más delgadas con los aumentos de la temperatura. En los áci­ dos grasos insaturados se observa un tipo de isomerismo geométrico, según la orientación de átomos o grupos alrededor de los ejes de dobles enlaces, que impide la rotación. Si las cadenas acilo están en el mismo lado del enlace, es cis-, como en el ácido oleico; si están en lados opuestos, es trans-, como en el ácido elaídico, el isómero trans del ácido oleico (fig. 15­5). Casi todos los dobles enlaces en ácidos grasos de cadena larga insaturados presentes de manera na­ tural están en la configuración cis; las moléculas están “dobladas” 120 grados en el doble enlace. De este modo, el ácido oleico tiene una forma de L, mientras que el ácido elaídico permanece “recto”. El incremento del número de dobles enlaces cis en un ácido graso da pie a diversas posibles configuraciones espaciales de la molécula; p. ej., el ácido araquidónico, con cuatro dobles enlaces cis, está dobla­ do en forma de U. Esto tiene profunda importancia para la organiza­ ción molecular en membranas celulares y sobre las posiciones ocu­ padas por ácidos grasos en moléculas más complejas, como los fosfolípidos. Los dobles enlaces trans alteran estas relaciones espa­ ciales. Los ácidos grasos trans están presentes en ciertos alimentos, y surgen como un subproducto de la saturación de ácidos grasos durante hidrogenación, o “solidificación” de aceites naturales en la manufactura de margarina. Una pequeña contribución adicional proviene de la ingestión de grasa de rumiante que contiene ácidos grasos trans, sintetizados a partir de la acción de microorganismos en el rumen. Ahora se sabe que el consumo de ácidos grasos trans es nocivo para la salud, y se relaciona con aumento del riesgo de enfer­ medades, entre ellas enfermedad cardiovascular y diabetes mellitus. Esto ha llevado a desarrollar tecnología mejorada para producir margarina blanda con bajo o nulo contenido de ácidos grasos trans. 27/11/09 14:05:59 CaPíTuLO 15 Lípidos de importancia fisiológica 123 Cuadro 15-2 Ácidos grasos insaturados de importancia fisiológica y nutricional Número de átomos de C y número y posición de dobles enlaces comunes Nombre común Familia Nombre sistemático Presencia Ácidos monoenoicos (un doble enlace) 16:1;9 ω7 Palmitoleico cis-9-Hexadecenoico En todas las grasas. 18:1;9 ω9 Oleico cis-9-Octadecenoico Es quizá el ácido graso más común en grasas naturales; especialmente alto en el aceite de oliva. 18:1;9 ω9 Elaídico trans-9-Octadecenoico Grasas hidrogenadas y de rumiantes. Ácidos dienoicos (dos dobles enlaces) ω6 18:2;9,12 Linoleico todo-cis-9,12-Octadecadienoico Aceites de maíz, cacahuate (maní), semilla de algodón, soya (soja) y muchos aceites vegetales. Ácidos trienoicos (tres dobles enlaces) 18:3;6,9,12 ω6 γ-Linolénico todo-cis-6,9,12-Octadecatrienoico Algunas plantas, por ejemplo, aceite de onagra, aceite de borraja; ácido graso menor en animales. 18:3;9,12,15 ω3 α-Linolénico todo-cis-9,12,15-Octadecatrienoico Suele encontrarse con ácido linoleico, pero en particular en el aceite de linasa. Ácidos tetraenoicos (4 dobles enlaces) ω6 20:4;5,8,11,14 Araquidónico todo-cis-5,8,11,14-Eicosatetraenoico Se encuentra en grasas de origen animal; componente importante de fosfolípidos en animales. Ácidos pentaenoicos (cinco dobles enlaces) ω3 20:5;5,8,11,14,17 Timnodónico todo-cis-5,8,11,14,17-Eicosapentaenoico Componente importante de aceites de pescado, por ejemplo, aceites de hígado de bacalao, caballa, sábalo, salmón. Ácidos hexaenoicos (seis dobles enlaces) ω3 22:6;4,7,10,13,16,19 Cervónico todo-cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoico Aceites de pescado, fosfolípidos en el cerebro. 18 CH3 FIGuRA 15-2 Forma trans (ácido elaídico) Prostaglandina E2 (PGE2). COO– O 120 Forma cis (ácido oleico) O 10 C C 9 OH FIGuRA 15-3 CH3 Tromboxano A2 (TXA2). H H C H H C 110 O COO– 1 COO– FIGuRA 15-4 15 Bender.indd 123 COO– FIGuRA 15-5 Leucotrieno A4 (LTA4). Isomerismo geométrico de Δ9, ácidos grasos 18:1 (ácidos oleico y elaídico). 27/11/09 14:06:02 124 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Las propiedades físicas y fisiológicas de ácidos grasos reflejan la longitud de la cadena y el grado de insaturación El punto de fusión de ácidos grasos con un número par de carbonos se incrementa con la longitud de la cadena y disminuyen de acuerdo con la insaturación. Un triacilglicerol que contiene tres ácidos gra­ sos saturados de 12 carbonos o más es sólido a la temperatura cor­ poral, mientras que si los residuos ácido graso son 18:2, es líquido hasta por debajo de 0°C. En la práctica, los acilgliceroles naturales contienen una mezcla de ácidos grasos adaptados para que satisfa­ gan sus necesidades funcionales. Los lípidos de membrana, que de­ ben ser líquidos a todas las temperaturas ambientales, están más insaturados que los lípidos de almacenamiento. Los lípidos en los tejidos que están sujetos a enfriamiento, por ejemplo, en hibernado­ res o en las extremidades de animales, están más insaturados. O 1 O R2 C CH2 O CH2 Los triacilgliceroles (fig. 15­6) son ésteres del alcohol trihidroxilado glicerol y ácidos grasos. Los monoacilgliceroles y los diacilglicero­ les, en los cuales uno o dos ácidos grasos están esterificados al glice­ rol, también se encuentran en los tejidos. Estos últimos tienen par­ ticular importancia en la síntesis e hidrólisis de triacilgliceroles. Los carbonos 1 y 3 del glicerol no son idénticos A fin de numerar los átomos de carbono del glicerol de manera no ambigua, se usa el sistema ­sn (del inglés, stereochemical numbering, numeración estereoquímica). Tiene importancia percatarse de que los carbonos 1 y 3 del glicerol no son idénticos cuando se observan en tres dimensiones (que se muestran como una fórmula de proyec­ ción en la fig. 15­7). Las enzimas distinguen con facilidad entre ellos, y casi siempre son específicas para un carbono o para el otro; por ejemplo, el glicerol siempre es fosforilado en sn-3 por la glicerol cinasa para dar glicerol 3­fosfato y no glicerol 1­fosfato. LOS FOSFOLÍPIDOS SON LOS PRINCIPALES CONSTITuYENTES LÍPIDOS DE MEMBRANAS Los fosfolípidos pueden considerarse derivados del ácido fosfatídico (fig. 15­8), en el cual el fosfato está esterificado con el —OH de un alcohol idóneo. El ácido fosfatídico es importante como interme­ *De acuerdo con la terminología estandarizada de la International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) y la International Union of Biochemistry (IUB), los monoglicéridos, diglicéridos y triglicéridos deben designarse mono­ acilgliceroles, diacilgliceroles y triacilgliceroles, respectivamente. Sin embargo, la terminología más antigua aún recibe una amplia difusión, sobre todo en medicina clínica. 15 Bender.indd 124 R1 O C R2 Triacilglicerol. O 1 H2C O C R1 O R2 C O 2 H C O 3 LOS TRIACILGLICEROLES (TRIGLICÉRIDOS)* SON LAS PRINCIPALES FORMAS DE ALMACENAMIENTO DE ÁCIDOS GRASOS C O CH 3 FIGuRA 15-6 O 2 H2C FIGuRA 15-7 O C R3 Triacil-sn-glicerol. diario en la síntesis de triacilgliceroles, así como de fosfogliceroles, pero no se encuentra en gran cantidad en los tejidos. Las fosfatidilcolinas (lecitinas) se encuentran en membranas celulares Los fosfoacilgliceroles que contienen colina (fig. 15­8) son los fos­ folípidos más abundantes de la membrana celular y representan una proporción grande de la reserva de colina del cuerpo. La colina es importante en la transmisión nerviosa, como acetilcolina, y como una reserva de grupos metilo lábiles. La dipalmitoil lecitina es un agente tensoactivo muy eficaz y un constituyente fundamen­ tal del surfactante que evita la adherencia, debido a tensión super­ ficial de las superficies internas de los pulmones. Su ausencia en los pulmones de prematuros causa síndrome de dificultad respiratoria. Casi todos los fosfolípidos tienen un radical acilo saturado en la posición sn­1, pero un radical insaturado en la posición sn­2 del glicerol. La fosfatidiletanolamina (cefalina) y la fosfatidilserina (que se encuentra en casi todos los tejidos) también se hallan en las membranas celulares, y sólo difieren de la fosfatidilcolina en que la etanolamina o serina, respectivamente, remplaza a la colina (fig. 15­8). La fosfatidilserina también participa en la apoptosis (muerte celular programada). El fosfatidilinositol es un precursor de segundos mensajeros El inositol está presente en el fosfatidilinositol como el estereoisó­ mero, mioinositol (fig. 15­8). El fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato es un constituyente de importancia de los fosfolípidos de membrana celular; en el momento de la estimulación por una hormona agonis­ ta idónea, se divide hacia diacilglicerol e inositol trifosfato, los cuales actúan como señales internas o segundos mensajeros. 27/11/09 14:06:03 CaPíTuLO 15 O 1 O C R2 2 O O CH2 C O CH2 P R1 HO O– 1 CH2 2 CH 3 CH2 O R C O O P CH2 O CH2 CH2 O CH2 FIGuRA 15-9 CH3 N CH3 R2 FIGuRA 15-10 NH3 CH2 OH 3 O H H 1 H 4 OH OH H H 6 O– E O CH2 O OH P O CH2 R4 O CH2 O H C C O CH2 O O C R3 Fosfatidilglicerol FIGuRA 15-8 Ácido fosfatídico y sus derivados. El O– que se muestra sombreado en el ácido fosfatídico es sustituido por los sustituyentes que, según se muestra, forman en (a) 3-fosfatidilcolina, (B) 3-fosfatidiletanolamina, (C) 3-fosfatidilserina, (d) 3-fosfatidilinositol y (E) cardiolipina (difosfatidilglicerol). La cardiolipina es un importante lípido de las membranas mitocondriales El ácido fosfatídico es un precursor del fosfatidilglicerol que, a su vez, da lugar a la cardiolipina (fig. 15­8). Este fosfolípido sólo se encuentra en las mitocondrias y es esencial para la función de las mismas. El decremento de las concentraciones de cardiolipina o las alteraciones de su estructura o metabolismo causan disfunción mitocondrial en el envejecimiento y en estados patológicos, entre ellos insuficiencia cardiaca, hipotiroidismo y síndrome de Barth (miopatía cardioesquelética). 15 Bender.indd 125 CH R1 O O P O– O CH2 CH2 NH3+ Etanolamina Plasmalógeno. Los plasmalógenos se encuentran en el cerebro y el músculo H Mioinositol C CH2 CH 5 OH H O CH Son fosfoacilgliceroles que contienen sólo un radical acilo, por ejemplo, la lisofosfatidilcolina (lisolecitina) (fig. 15­9), importante en el metabolismo y la interconversión de fosfolípidos. También se encuentra en lipoproteínas oxidadas y se considera que algunos de sus efectos promueven la aterosclerosis. OH 2 CH3 Los lisofosfolípidos son intermediarios en el metabolismo de fosfogliceroles COO– CH Serina D CH2 O CH2NH3 + O C 2 3 Etanolamina C 1 + CH2 O CH3 Lisofosfatidilcolina (lisolecitina). O CH3 Colina B CH3 Colina Ácido fosfatídico A + N O– O– + 125 O O CH 3 Lípidos de importancia fisiológica Dichos compuestos constituyen hasta 10% de los fosfolípidos del cerebro y el músculo. Desde el punto de vista estructural, los plas­ malógenos semejan fosfatidiletanolamina, pero poseen un enlace éter en el carbono sn­1 en lugar del enlace éster que se encuentra en acilgliceroles. En forma típica, el radical alquilo es un alcohol insa­ turado (fig. 15­10). En algunos casos, la etanolamina puede susti­ tuirse por colina, serina o inositol. Las esfingomielinas se encuentran en el sistema nervioso Las esfingomielinas se encuentran en grandes cantidades en el cere­ bro y el tejido nervioso. En el momento de la hidrólisis, las esfingo­ mielinas dan un ácido graso, ácido fosfórico, colina, y un amino al­ cohol complejo, la esfingosina (fig. 15­11). No hay glicerol. La combinación de esfingosina más ácidos grasos se conoce como ceramida, estructura que también se encuentra en los glucoesfingolí­ pidos (véase más adelante). LOS GLuCOLÍPIDOS (GLuCOESFINGOLÍPIDOS) SON IMPORTANTES EN LOS TEJIDOS NERVIOSOS Y EN LA MEMBRANA CELuLAR Los glucolípidos están ampliamente distribuidos en todos los tejidos del cuerpo, en particular en el tejido nervioso, como el cerebro. Se 27/11/09 14:06:06 126 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Ceramida Ceramida (acilesfingosina) Esfingosina OH CH3 CH (CH2)12 CH CH CH2 Ácido fosfórico C R Cer O– O CH2 CH2 Gal GalNAc Gal NeuAc FIGuRA 15-13 Gangliósido GM1, un monosialogangliósido, el receptor para la toxina del cólera en el intestino del ser humano. + N(CH3)3 terés biológico, puesto que se sabe que en el intestino del ser huma­ no es el receptor para la toxina del cólera. Otros gangliósidos pueden contener una a cinco moléculas de ácido siálico, lo que da lugar a disialogangliósidos, trisialogangliósidos, etcétera. Colina FIGuRA 15-11 Glc Ácido graso P Galactosa NeuAc o O O N-acetilgalactosamina Galactosa O H N CH Glucosa Una esfingomielina. encuentran sobre todo en la cara externa de la membrana plasmáti­ ca, donde contribuyen a carbohidratos de superficie celular. Los principales glucolípidos que se encuentran en tejidos de animales son glucoesfingolípidos. Contienen ceramida y uno o más azúcares. La galactosilceramida es el más importante glucoesfingo­ lípido del cerebro y otros tejidos nerviosos, y se encuentra en canti­ dades relativamente bajas en otros sitios. Contiene varios ácidos grasos C24 característicos, por ejemplo, ácido cerebrónico. La galactosilceramida (fig. 15­2) puede convertirse en sulfoga­ lactosilceramida (sulfatido), presente en altas cantidades en la mie­ lina. La glucosilceramida es el glucoesfingolípido simple predomi­ nante de tejidos extraneurales; también se encuentra en el cerebro en pequeñas cantidades. Los gangliósidos son glucoesfingolípidos complejos derivados de la glucosilceramida, que además contienen una o más moléculas de un ácido siálico. El ácido acetilneuramíni­ co (NeuAc; cap. 14) es el principal ácido siálico que se encuentra en los tejidos del ser humano. Los gangliósidos también están presen­ tes en cifras altas en tejidos nerviosos; parecen tener funciones de receptor y otras. El gangliósido más simple que se encuentra en los tejidos es GM3, que contiene ceramida, una molécula de glucosa, una molécula de galactosa y una molécula de NeuAc. En la nomen­ clatura taquigráfica usada, G representa gangliósido; M es una espe­ cie que contiene monosialo y el número en subíndice 3 es asignado con base en la migración cromatográfica. GM1 (fig. 15­13), un gan­ gliósido más complejo derivado de GM3, despierta considerable in­ LOS ESTEROIDES DESEMPEÑAN MuCHAS FuNCIONES IMPORTANTES EN EL ASPECTO FISIOLÓGICO El colesterol es quizá el esteroide mejor conocido debido a su rela­ ción con la aterosclerosis y las enfermedades cardiacas; también es significativo desde el punto de vista bioquímico porque es el precur­ sor de un gran número de esteroides igual de importantes que com­ prenden los ácidos biliares, hormonas adrenocorticales, hormonas sexuales, vitaminas D, glucósidos cardiacos, sitoesteroles del reino vegetal y algunos alcaloides. Todos los esteroides tienen núcleo cíclico similar al del fenan­ treno (anillos A, B y C) al cual está fijo un anillo ciclopentano (D). Las posiciones de carbono en el núcleo esteroide se numeran como se muestra en la figura 15­14. Es importante percatarse de que en 18 17 12 19 11 1 9 2 3 A B 5 4 FIGuRA 15-14 10 13 C 8 14 D 16 15 7 6 El núcleo esteroide. Ceramida Esfingosina OH CH3 (CH2 ) 12 CH CH CH CH CH 2 OH Galactosa HO H H OR 3 H 15 Bender.indd 126 O OH O C CH(OH) (CH2 ) 21 CH3 Ácido graso (p. ej., ácido cerebrónico) O H H N H CH2 FIGuRA 15-12 Estructura de la galactosilceramida (galactocerebrósido, R = H), y sulfogalactosilceramida (una sulfatida, R = SO42–). 27/11/09 14:06:09 CaPíTuLO 15 Lípidos de importancia fisiológica 127 17 Forma de “silla” FIGuRA 15-15 Forma de “bote” Conformaciones de estereoisómeros del núcleo HO esteroide. FIGuRA 15-17 fórmulas estructurales de esteroides, un anillo hexagonal simple de­ nota un anillo de seis carbonos por completo saturado, con todas las valencias satisfechas por enlaces hidrógeno, a menos que se muestre lo contrario; es decir, no es un anillo benceno. Todos los dobles en­ laces se muestran como tales. Los grupos metilo se unen mediante enlaces únicos sueltos en el extremo más lejano (metilo), mismos que existen típicamente en las posiciones 10 y 13 (que constituyen los átomos C 19 y 18). Una cadena lateral en la posición 17 es habi­ tual (como en el colesterol). Si el compuesto tiene uno o más grupos hidroxilo y ningún grupo carbonilo o carboxilo, es un esterol, y el nombre termina en -ol. A FIGuRA 15-18 3 5 C H 1 A 3 9 10 5 H H B C H 8 El ergosterol es un precursor de la vitamina d El ergosterol se encuentra en plantas y levaduras, y es importante como un precursor de la vitamina D (fig. 15­18). Cuando se irra­ dia con luz ultravioleta, el anillo B se abre para formar vitamina D2 en un proceso similar al que forma vitamina D3 a partir del 7­deshi­ drocolesterol en la piel (fig. 44­3). B 13 H D 10 B 5 14 H H o Ergosterol. El colesterol (fig. 15­17) está ampliamente distribuido en todas las células del cuerpo, pero en particular en el tejido nervioso. Es un constituyente de importancia de la membrana plasmática y de las lipoproteínas plasmáticas. A menudo se encuentra como colesteril éster, donde el grupo hidroxilo en la posición 3 está esterificado con un ácido graso de cadena larga. Se encuentra en animales, no así en vegetales ni en bacterias. 13 8 B Colesterol, 3-hidroxi-5,6-colesteno. El colesterol es un constituyente importante de muchos tejidos H 9 6 B Cada uno de los anillos de seis carbonos del núcleo esteroide tiene la capacidad de existir en la conformación tridimensional de “silla” o de “bote” (fig. 15­15). En los esteroides que existen de modo natu­ ral, casi todos los anillos están en la forma de “silla”, que es la confor­ mación más estable. Los anillos pueden ser cis o trans, en función uno del otro (fig. 15­16). La unión entre los anillos A y B puede ser cis o trans en esteroides presentes de manera natural. La que hay entre B y C es trans, como por lo regular lo es la unión C/D. Los enlaces que fijan grupos sustituyentes por arriba del plano de los anillos (enlaces β) se muestran con líneas continuas y marca­ das, mientras que los enlaces que fijan grupos por debajo (enlaces α) se indican con líneas discontinuas. El anillo A de un esteroide 5α siempre es trans respecto al anillo B, mientras que es cis en un este­ roide 5β. Los grupos metilo fijos a C10 y C13 siempre están en la configuración β. 10 5 HO debido a asimetría en la molécula de esteroide, muchos estereoisómeros son posibles A 3 A 3 o 17 D 1 14 H A 3 10 5 B H FIGuRA 15-16 Núcleo esteroide generalizado, que muestra (a) una configuración todo-trans entre anillos adyacentes y (B) una configuración cis entre anillos A y B. 15 Bender.indd 127 27/11/09 14:06:11 128 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos rados que existen de modo natural (fig. 15­21). La peroxidación lí­ pida es una reacción en cadena que proporciona un aporte continuo de radicales libres que inician peroxidación adicional y, así, tienen efectos en potencia devastadores. El proceso entero puede describir­ se como sigue: CH3 CH FIGuRA 15-19 C CH CH Unidad de isopreno. 1. Iniciación: CH2OH X • + RH → R • + XH 16 FIGuRA 15-20 ROOH + Metal(n) + → ROO• + Metal(n −1) + + H+ Dolicol —un alcohol C95. 2. Propagación: R • + O2 → ROO• ROO• + RH → ROOH + R • ,etc. Los poliprenoides comparten el mismo compuesto original que el colesterol Aun cuando no son esteroides, estos compuestos están relacionados porque se sintetizan, al igual que el colesterol (fig. 26­2), a partir de unidades de isopreno de cinco carbonos (fig. 15­19). Incluyen la ubiquinona (cap. 13), que participa en la cadena respiratoria en las mitocondrias, y el alcohol de cadena larga dolicol (fig. 15­20), que participa en la síntesis de glucoproteína al transferir residuos carbo­ hidrato hacia residuos asparagina del polipéptido (cap. 47). Los compuestos isoprenoide derivados de vegetales comprenden cau­ cho, alcanfor, las vitaminas liposolubles A, D, E y K, y β­caroteno (provitamina A). LA PEROXIDACIÓN LÍPIDA ES uNA FuENTE DE RADICALES LIBRES La peroxidación (autooxidación) de lípidos expuestos a oxígeno no sólo causa deterioro de alimentos (rancidez) sino que también daña tejidos in vivo, y puede ser una causa de cáncer, enfermedades infla­ matorias, aterosclerosis y envejecimiento. Se considera que los efec­ tos nocivos se originan por radicales libres (ROO•, RO•, OH•) pro­ ducidos en el transcurso de la formación de peróxido a partir de ácidos grasos que contienen dobles enlaces interrumpidos por me­ tileno, esto es, los que se encuentran en los ácidos grasos poliinsatu­ Malondialdehído 3. Terminación: ROO• + ROO• → ROOR + O2 ROO• + R • → ROOR R • + R • → RR Para controlar la peroxidación lípida y reducirla, tanto los seres humanos en sus actividades, como la Naturaleza, recurren al uso de antioxidantes. El propil galato, el butilhidroxianisol (BHA) y el bu­ tilhidroxitolueno (BHT) son antioxidantes que se usan como aditi­ vos de alimentos. Los antioxidantes naturales incluyen vitamina E (tocoferol), que es liposoluble, y urato y vitamina C, que son hidro­ solubles. El β­caroteno es un antioxidante a PO2 baja. Los antioxi­ dantes caen dentro de dos clases: 1) antioxidantes preventivos, que reducen el índice de iniciación de cadena oxidativa, y 2) antioxidan­ tes que rompen la cadena oxidativa, que interfieren con la propaga­ ción de dicha cadena. Los antioxidantes preventivos comprenden la catalasa y otras peroxidasas, como la glutatión peroxidasa (fig. 21­3), que reaccionan con ROOH; selenio, un componente esencial de la glutatión peroxidasa y que regula su actividad, y quelantes de iones metálicos, como EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) y DTPA (ácido dietilentriaminopentaacético). In vivo, los principales an­ tioxidantes que rompen la cadena oxidativa son la superóxido dis­ mutasa, que actúa en la fase acuosa para atrapar radicales libres su­ Endoperóxido Hidroperóxido ROOH FIGuRA 15-21 Peroxidación lípida. La reacción se inicia por un radical libre existente (X•), por luz o por iones metálicos. El malondialdehído sólo se forma a partir de ácidos grasos con tres o más dobles enlaces, y se usa como una medida de peroxidación lipídica junto con etano proveniente de los dos carbonos terminales de ácidos grasos ω3 y pentano de los cinco carbonos terminales de ácidos grasos ω6. 15 Bender.indd 128 27/11/09 14:06:15 CaPíTuLO 15 Lípidos de importancia fisiológica 129 Lípido anfipático A Grupos polares o hidrofílicos Grupos no polares o hidrofóbicos Fase acuosa Fase acuosa Fase acuosa Fase “oleosa” o no polar Fase no polar Fase “oleosa” o no polar Fase acuosa Bicapa lipídica B Emulsión de aceite en agua D Micela C Fase no polar Fase acuosa Fase acuosa Bicapa lipídica Liposoma (unilaminar) E Compartimientos acuosos Bicapas lipídicas Liposoma (multilaminar) F FIGuRA 15-22 Formación de membranas lipídicas, micelas, emulsiones y liposomas a partir de lípidos anfipáticos, por ejemplo, fosfolípidos. peróxido (O2—· ) urato y vitamina E, que actúa en la fase líquida para atrapar los radicales ROO• (fig. 44­6). La peroxidación también es catalizada in vivo por compuestos hem y por lipooxigenasas que se encuentran en plaquetas y leuco­ citos. Otros productos de autooxidación u oxidación enzimática de importancia fisiológica incluyen oxiesteroles (formados a partir del colesterol) e isoprostanos (formados a partir de la peroxidación de ácidos grasos poliinsaturados, como el ácido araquidónico). LOS LÍPIDOS ANFIPÁTICOS SE ORIENTAN POR SÍ MISMOS EN INTERFASES DE ACEITE:AGuA Forman membranas, micelas, liposomas y emulsiones En general, los lípidos son insolubles en agua porque contienen un predominio de grupos no polares (hidrocarbonos). Sin embargo, los ácidos grasos, los fosfolípidos, los esfingolípidos, las sales biliares y, en menor grado, el colesterol, contienen grupos polares. En conse­ cuencia, parte de la molécula es hidrofóbica, o insoluble en agua, y parte hidrofílica, o soluble en agua. Tales moléculas se describen 15 Bender.indd 129 como anfipáticas (fig. 15­22); se orientan en interfases de aceite: agua con el grupo polar en la fase acuosa y el grupo no polar en la fase oleosa. Una bicapa de ese tipo de lípidos anfipáticos es la estruc­ tura básica en membranas biológicas (cap. 40). Cuando hay una concentración crítica de estos lípidos en un medio acuoso, forman micelas. Los liposomas pueden formarse sometiendo a ultrasonido un lípido anfipático en un medio acuoso. Constan de esferas de bi­ capas lipídicas que encierran parte del medio acuoso. Las agregacio­ nes de sales biliares hacia micelas y liposomas, y la formación de micelas mixtas con los productos de la digestión de grasas tienen importancia en la facilitación de la absorción de lípidos en el intes­ tino. Los liposomas tienen uso clínico potencial —en particular cuando se combinan con anticuerpos específicos para tejido— como acarreadores de fármacos en la circulación, y dirigidos hacia órga­ nos específicos, por ejemplo, en la terapia para el cáncer. Además, se usan para transferencia genética hacia células vasculares, y como acarreadores para el aporte tópico y transdérmico de medicamentos y cosméticos. Las emulsiones son partículas de tamaño mucho ma­ yor —por lo general, formadas por lípidos no polares en un medio acuoso— y se estabilizan por medio de agentes emulsificantes, como lípidos anfipáticos (p. ej., lecitina), que forman una capa superficial que separa la masa principal del material no polar de la fase acuosa (fig. 15­22). 27/11/09 14:06:24 130 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos RESuMEN ■ ■ ■ ■ ■ Los lípidos tienen la propiedad común de ser relativamente insolubles en agua (hidrofóbicos) pero solubles en solventes no polares. Los lípidos anfipáticos también contienen uno o más grupos polares, lo que hace que sean idóneos como constituyentes de membranas en interfases entre lípido y agua. Los lípidos de gran importancia fisiológica son los ácidos grasos y sus ésteres, junto con el colesterol y otros esteroides. Los ácidos grasos de cadena larga pueden ser saturados, monoinsaturados o poliinsaturados, de acuerdo con el número de dobles enlaces presentes. Su fluidez se aminora con la longitud de la cadena, y aumenta de acuerdo con el grado de insaturación. Los eicosanoides se forman a partir de ácidos grasos poliinsaturados de 20 carbonos, y constituyen un importante grupo de compuestos que tienen actividad fisiológica y farmacológica, conocidos como prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos y lipoxinas. Los ésteres de glicerol son los lípidos de mayor importancia en el aspecto cuantitativo, representados por el triacilglicerol (“grasa”), un constituyente importante de lipoproteínas, y del almacén de lípidos en el tejido adiposo. Los fosfoacilgliceroles son lípidos anfipáticos, y tienen funciones importantes: como constituyentes principales de membranas y la capa externa de lipoproteínas, como surfactantes en los pulmones, como precursores de segundos mensajeros, y como constituyentes del tejido nervioso. 15 Bender.indd 130 ■ ■ ■ Los glucolípidos también son constituyentes importantes del tejido nervioso, como el cerebro y la cara externa de la membrana celular, donde contribuyen a los carbohidratos sobre la superficie de la célula. El colesterol, un lípido anfipático, es un componente de importancia de las membranas. Es la molécula original a partir de la cual se sintetizan todos los otros esteroides en el cuerpo, incluso hormonas importantes como las hormonas adrenocorticales y sexuales, vitaminas D y ácidos biliares. La peroxidación de lípidos que contienen ácidos grasos poliinsaturados lleva a la generación de radicales libres que dañan tejidos y causan enfermedad. rEFErENCIaS Benzie IFF: Lipid peroxidation: a review of causes, consequences, measurement and dietary influences. Int J Food Sci Nutr 1996;47:233. Christie WW: Lipid Analysis, 3rd ed. The Oily Press, 2003. Dowhan W, Bodanov H: Functional roles of lipids in membranes. In: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 4th ed. Vance DE, Vance JE (editors). Elsevier, 2002. Gurr MI: Lipids in Nutrition and Health: A Reappraisal. The Oily Press, 1999. Gurr MI, Harwood JL, Frayn K: Lipid Biochemistry. Blackwell Publishing, 2002. 27/11/09 14:06:25 Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos David A. Bender, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA “Metabolismo” es el término que se usa para describir la interconversión de compuestos químicos en el cuerpo, las vías que siguen moléculas individuales, sus interrelaciones, y los mecanismos que regulan el flujo de metabolitos a través de las vías. Las vías metabólicas se clasifican en tres categorías: 1) vías anabólicas, que son las implicadas en la síntesis de compuestos de mayor tamaño y más complejos a partir de precursores de menor tamaño, por ejemplo, la síntesis de proteína a partir de aminoácidos, y la síntesis de reservas de triacilglicerol y glucógeno. Las vías anabólicas son endotérmicas. 2) Vías catabólicas, que están involucradas en la degradación de moléculas de mayor tamaño; por lo general implican reacciones oxidativas; son exotérmicas; dan por resultado equivalentes reductores y, principalmente por medio de la cadena respiratoria, ATP. 3) Vías anfibólicas, que se presentan en las “encrucijadas” del metabolismo, y actúan como enlaces entre las vías anabólicas y catabólicas, por ejemplo, el ciclo del ácido cítrico. El conocimiento del metabolismo normal es esencial para entender las anormalidades que fundamentan la enfermedad. El metabolismo normal incluye adaptación a periodos de inanición, ejercicio, embarazo y lactancia. El metabolismo anormal puede producirse por deficiencia nutricional, deficiencia de enzimas, secreción anormal de hormonas, o las acciones de fármacos y toxinas. Un ser humano adulto de 70 kg requiere alrededor de 8 a 12 MJ (1 920 a 2 900 kcal) provenientes de combustibles metabólicos cada día, según su actividad física. Los animales de mayor tamaño necesitan menos y los animales de menor tamaño más, por kilogramo de peso corporal, y los niños y animales en crecimiento tienen un requerimiento proporcionalmente mayor debido al costo de energía del crecimiento. Para seres humanos este requerimiento se satisface a partir de carbohidratos (40 a 60%), lípidos (sobre todo triacilglicerol, 30 a 40%) y proteína (10 a 15%), así como alcohol. La mezcla de carbohidratos, lípidos y proteínas que se está oxidando varía, según si el sujeto se encuentra en el estado alimentado o de ayuno, y de la duración y la intensidad del trabajo físico. El requerimiento de combustibles metabólicos es relativamente constante durante todo el día, dado que la actividad física promedio sólo aumenta la tasa metabólica alrededor de 40 a 50% sobre el basal. Sin embargo, la mayoría de las personas consume en dos o tres comidas su ingestión diaria de combustibles metabólicos, de modo que hay una necesidad de almacenar carbohidratos (glucógeno en el hígado y en los músculos) y lípidos (triacilglicerol en el tejido adiposo) durante el periodo que sigue 16 c A P í t u l o a una comida, para uso durante el tiempo intermedio cuando no hay ingestión de alimento. Si la ingestión de combustibles metabólicos es constantemente mayor que el gasto de energía, el excedente se almacena, en su mayor parte como triacilglicerol en el tejido adiposo, lo que conduce a obesidad y a los peligros para la salud que conlleva. En contraste, si la ingestión de combustibles metabólicos es constantemente menor que el gasto de energía, las reservas de grasas y carbohidratos son insignificantes, y se usan aminoácidos que surgen a partir del recambio de proteína, para metabolismo que origina energía más que para remplazar la síntesis de proteínas, lo que da pie a emaciación, consunción y la muerte (cap. 43). En el estado posprandial, después de una comida, hay un amplio aporte de carbohidratos, y el combustible metabólico para casi todos los tejidos es la glucosa. En el estado de ayuno, es necesario reservar la glucosa para uso por el sistema nervioso central (que depende en su mayor parte de glucosa) y los eritrocitos (que dependen por completo de la glucosa). De modo que los tejidos que pueden usar otros combustibles distintos a la glucosa, lo hacen; el músculo y el hígado oxidan ácidos grasos, y el hígado sintetiza cuerpos cetónicos a partir de ácidos grasos para exportarlos hacia los músculos y otros tejidos. Conforme se agotan las reservas de glucógeno, se usan para gluconeogénesis aminoácidos que proceden del recambio de proteína. La formación y utilización de reservas de triacilglicerol y glucógeno, y el grado al cual los tejidos captan y oxidan glucosa, están controlados en su mayor parte por las hormonas insulina y glucagon. En la diabetes mellitus hay síntesis y secreción alteradas de insulina (diabetes de inicio juvenil, o tipo 1) o sensibilidad alterada de los tejidos a la acción de la insulina (diabetes de inicio en el adulto, o tipo 2), lo que lleva a alteración metabólica grave. En el ganado vacuno, las demandas de lactancias intensas pueden llevar a cetosis, al igual que las demandas que plantea una gestación gemelar en ovejas. VÍAS QUE PROCESAN LOS PRINCIPALES PRODUCTOS DE LA DIGESTIÓN La naturaleza de la dieta establece el modelo básico de metabolismo. Hay una necesidad de procesar los productos de la digestión de carbohidratos, lípidos y proteínas de la dieta, se trata en particular de glucosa, ácidos grasos y glicerol, y aminoácidos, respectivamente. En rumiantes (y, un tanto menos, en otros herbívoros) los microorganismos simbióticos fermentan la celulosa de la dieta hacia ácidos grasos de cadena corta (acético, propiónico, butírico), y en estos 131 16 Bender.indd 131 27/11/09 14:07:14 132 SECCIÓN II Carbohidrato Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Dieta Grasa Proteína Glucosa Digestión y absorción Azúcares simples (sobre todo glucosa) Aminoácidos Glucógeno Glucosa fosfatos Ácidos grasos + glicerol 3CO2 Vía de la pentosa fosfato Glucólisis Catabolismo Acetil-CoA Piruvato 2CO2 FIGURA 16-1 Resumen de las vías para el catabolismo de carbohidratos, proteínas y grasas de la dieta. Todas las vías llevan a la producción de acetil-CoA, que se oxida en el ciclo del ácido cítrico y al final produce ATP mediante el proceso de fosforilación oxidativa. animales el metabolismo está adaptado para emplear estos ácidos grasos como los principales sustratos. Todos los productos de la digestión se metabolizan hacia un producto común, la acetil-CoA, que luego se oxida mediante el ciclo del ácido cítrico (fig. 16-1). Am i ácid noos CO2 Acetil-CoA RNA DNA Lactato ATP Proteína 2H Ribosa fosfato Acilgliceroles (grasa) Ácidos grasos Colesterol Aminoácidos Ciclo del ácido cítrico Triosa fosfatos Ciclo del ácido cítrico 2CO2 El metabolismo de los carbohidratos se centra en el suministro de glucosa y el destino de la misma La glucosa es el principal combustible de casi todos los tejidos (fig. 16-2). Se metaboliza hacia piruvato por la vía de la glucólisis. Los tejidos aeróbicos metabolizan el piruvato hacia acetil-CoA, que puede entrar al ciclo del ácido cítrico para oxidación completa hacia CO2 y H2O, enlazada a la formación de ATP en el proceso de fosforilación oxidativa (fig. 13-2). La glucólisis también puede ocurrir de manera anaeróbica (en ausencia de oxígeno) cuando el producto terminal es lactato. La glucosa y sus metabolitos también participan en otros procesos: 1) la síntesis del polímero de almacenamiento glucógeno en el músculo esquelético y el hígado. 2) La vía de la pentosa fosfato, una alternativa para parte de las vías de la glucólisis. Es una fuente de equivalentes reductores (NADPH) para la síntesis de ácido graso, y la fuente de ribosa para la síntesis de nucleótido y ácido nucleico. 3) Los triosa fosfatos dan lugar a la porción glicerol de los triacilgliceroles. 4) El piruvato y los intermediarios del ciclo del ácido cítrico proporcionan los esqueletos de carbono para la síntesis de aminoácidos, y la acetil-CoA es el precursor de ácidos grasos y colesterol (y, por ende, de todos los esteroides sintetizados en el cuerpo). La gluconeogénesis es el proceso de formación de glucosa a partir de precursores no carbohidratos, por ejemplo, lactato, aminoácidos y glicerol. 16 Bender.indd 132 Figura 16-2 Perspectiva general del metabolismo de los carbohidratos, que muestra las principales vías y productos terminales. No se muestra la gluconeogénesis. El metabolismo de los lípidos se relaciona principalmente con ácidos grasos y colesterol La fuente de ácidos grasos de cadena larga son los lípidos de la dieta o la síntesis de novo a partir de acetil-CoA derivada de carbohidratos o aminoácidos. Los ácidos grasos se pueden oxidar hacia acetilCoA (β-oxidación) o esterificar con glicerol, lo que forma triacilglicerol (grasa) como la principal reserva de combustible del cuerpo. La acetil-CoA formada mediante β-oxidación puede tener tres destinos (fig. 16-3). 1. Al igual que con la acetil-CoA que se origina a partir de la glucólisis, se oxida hacia CO2 + H2O por medio del ciclo del ácido cítrico. 2. Es el precursor para la síntesis de colesterol y otros esteroides. 3. En el hígado se usa para formar cuerpos cetónicos (acetoacetato y 3-hidroxibutirato) que son combustibles importantes en el ayuno prolongado. 27/11/09 14:07:16 Esteroidogénesis pólisis oxidació L Carbohidrato Acetil-CoA Aminoácidos 133 Los aminoácidos son necesarios para efectuar la síntesis de proteína (fig. 16-4). Algunos deben suministrarse en la dieta (los aminoácidos esenciales), porque no se pueden sintetizar en el organismo. El resto son aminoácidos no esenciales, que provienen de la dieta, pero también pueden formarse a partir de intermediarios metabólicos mediante transaminación usando el nitrógeno amino de otros aminoácidos. Después de desaminación, el nitrógeno amino se excreta como urea, y los esqueletos de carbono que permanecen luego de transaminación pueden: 1) oxidarse hacia CO2 por medio del ciclo del ácido cítrico, 2) usarse para sintetizar glucosa (gluconeogénesis) o 3) formar cuerpos cetónicos, que pueden ser oxidados o emplearse para la síntesis de ácidos grasos. Varios aminoácidos también son los precursores de otros compuestos, por ejemplo, purinas, pirimidinas, hormonas como epinefrina y tiroxina, y neurotransmisores. Colesterol β- ip ogénesi s Ácidos grasos n Li eri st E Dieta Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos gran parte del metabolismo de aminoácidos involucra transaminación Esteroides Triacilglicerol (grasa) n ficac ió CApítulo 16 Colesterogénesis Cetogénesis Cuerpos cetónicos Ciclo del ácido cítrico LAS VÍAS METABÓLICAS PUEDEN ESTUDIARSE A DIFERENTES NIVELES DE ORGANIZACIÓN 2CO2 Figura 16-3 Perspectiva general del metabolismo de los ácidos grasos, que muestra las principales vías y productos terminales. Los cuerpos cetónicos son acetoacetato, 3-hidroxibutirato y acetona. Además de estudios en el organismo entero, la localización e integración de vías metabólicas se revela mediante estudios a varios niveles de organización. 1) En el nivel de tejido y órgano, se define la naturaleza de los sustratos que entran a ellos, y de los metabolitos que salen de los mismos. 2) En el nivel subcelular cada organelo (p. ej., la mitocondria) o compartimiento (p. ej., el citosol) celular tiene Proteína de la dieta Proteína hística Derivados del nitrógeno no proteínicos Aminoácidos TRANSAMINACIÓN Carbohidrato (glucosa) Cuerpos cetónicos Nitrógeno amino en glutamato Acetil-CoA DESAMINACIÓN NH3 Urea Figura 16-4 Ciclo del ácido cítrico 2CO2 Perspectiva general del metabolismo de aminoácidos que muestra las principales vías y productos terminales. 16 Bender.indd 133 27/11/09 14:07:18 134 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos funciones específicas que forman parte de un patrón subcelular de vías metabólicas. En el nivel de tejido y órgano, la circulación de la sangre integra el metabolismo Los aminoácidos generados por la digestión de proteína de la dieta y la glucosa producida por la digestión de carbohidratos, se absorben por medio de la vena porta hepática. El hígado tiene la función de regular la concentración sanguínea de metabolitos hidrosolubles (fig. 16-5). En el caso de la glucosa, esto se logra al captar la que excede los requerimientos inmediatos, y convertirla en glucógeno (glucogénesis, cap. 19) o en ácidos grasos (lipogénesis, cap. 23). Entre las comidas, el hígado actúa para mantener las cifras sanguíneas de glucosa al degradar glucógeno (glucogenólisis, cap. 19) y, junto con los riñones, al convertir metabolitos no carbohidrato, como lactato, glicerol y aminoácidos, en glucosa (gluconeogénesis, cap. 20). El mantenimiento de una concentración adecuada de glucosa en la sangre es vital para los tejidos en los cuales es el principal combustible (el cerebro) o el único combustible (los eritrocitos). El hígado también sintetiza las principales proteínas plasmáticas (p. ej., albúmina) y desamina aminoácidos que exceden los requerimientos, formando urea, que es transportada hacia los riñones y excretada (cap. 28). El músculo esquelético utiliza glucosa como combustible, de modo tanto aeróbico, formando CO2, como anaeróbico, formando lactato. Almacena glucógeno como un combustible para uso en la contracción muscular, y sintetiza proteína muscular a partir de aminoácidos plasmáticos. El músculo conforma alrededor de 50% de la masa corporal y, por consiguiente, representa una considerable reserva de proteína a la cual puede recurrirse para aportar aminoácidos para gluconeogénesis en la inanición (cap. 20). Los lípidos en la dieta (fig. 16-6) son sobre todo triacilglicerol, y se hidrolizan hacia monoacilgliceroles y ácidos grasos en el intestino, y después se vuelven a esterificar en la mucosa intestinal. Ahí son empacados con proteína y secretados hacia el sistema linfático y, desde allí, hacia el torrente sanguíneo como quilomicrones, las lipoproteínas plasmáticas de mayor tamaño; éstos también contienen otros nutrientes liposolubles. A diferencia de la glucosa y los aminoácidos, el hígado no capta de manera directa los triacilgliceroles de los quilomicrones. Primero los quilomicrones se metabolizan en los tejidos que tienen lipoproteína lipasa, que hidroliza el triacilglicerol, lo que libera ácidos grasos que se incorporan hacia lípidos hísticos o se oxidan como combustible. El hígado elimina los remanentes de quilomicrón. La otra fuente principal de ácidos grasos de cadena larga es la síntesis (lipogénesis) a partir de carbohidrato, en el tejido adiposo y en el hígado. El triacilglicerol del tejido adiposo es la principal reserva de combustible del cuerpo. Se hidroliza (lipólisis) y se liberan glicerol y ácidos grasos libres hacia la circulación. El glicerol es un sustrato para la gluconeogénesis. Los ácidos grasos son transportados unidos a albúmina sérica; son captados por casi todos los tejidos (aunque no por el cerebro o los eritrocitos), y se esterifican hacia triacilgliceroles para almacenamiento o se oxidan como un combustible. En el hígado, el triacilglicerol que surge Proteínas plasmáticas Hígado Proteína Urea Aminoácidos Glucosa CO2 Aminoácidos Glucógeno Proteína Lactato Urea Aminoácidos Alanina, etc. Eritrocitos Glucosa Riñón Orina Plasma sanguíneo Glucosa Aminoácidos Dieta Carbohidrato Proteína Glucosa fosfato CO2 Glucógeno Músculo Intestino delgado Figura 16-5 Transporte y destino de los sustratos y metabolitos carbohidratos y aminoácidos principales. Note que hay poca glucosa libre en el músculo, pues se fosforila con rapidez en el momento de la entrada. 16 Bender.indd 134 27/11/09 14:07:20 CApítulo 16 Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos 135 FFA Glucosa CO2 Ácidos grasos Cuerpos cetónicos isi ón Li p Hígado LPL CO2 VL Ácidos grasos DL ó nes is cro lis mi Músculo a ci ó p lo Li ui Esterific ón TG Tejido adiposo TG a Q lis is Lipoproteína TG LPL Esterific Ácidos grasos Glucosa ón ci ól a TG ci s Esterific Plasma sanguíneo Dieta TG MG + ácidos grasos TG Li p Intestino delgado Figura 16-6 Transporte y destino de sustratos y metabolitos lípidos principales. (FFA, ácidos grasos libres; LPL, lipoproteína lipasa; MG, monoacilglicerol; TG, triacilglicerol; VLDL, lipoproteína de muy baja densidad.) a partir de la lipogénesis, ácidos grasos libres y remanentes de quilomicrón (fig. 25-3) se secreta hacia la circulación en lipoproteína de muy baja densidad (VlDl, del inglés very low density lipoprotein), dicho triacilglicerol tiene un destino similar al de los quilomicrones. La oxidación parcial de ácidos grasos en el hígado conduce a la producción de cuerpos cetónicos (cetogénesis, cap. 22), que se transportan hacia tejidos extrahepáticos, donde actúan como un combustible en el ayuno y la inanición prolongados. En el nivel subcelular, la glucólisis ocurre en el citosol, y el ciclo del ácido cítrico en las mitocondrias La compartamentalización de vías en compartimientos subcelulares u organelos separados permite la integración y regulación del metabolismo. No todas las vías tienen igual importancia en todas las células. En la figura 16-7 se describe la compartamentalización subcelular de vías metabólicas en una célula del parénquima hepático. La principal función de la mitocondria queda de manifiesto de inmediato, porque actúa como el foco del metabolismo de carbohidratos, lípidos y aminoácidos. Contiene las enzimas del ciclo del ácido cítrico (cap. 17), la β-oxidación de ácidos grasos y la cetogénesis (cap. 22), así como la cadena respiratoria y la ATP sintasa (cap. 13). 16 Bender.indd 135 La glucólisis (cap. 18), la vía de la pentosa fosfato (cap. 21) y la síntesis de ácidos grasos (cap. 23) ocurren en el citosol. En la gluconeogénesis (cap. 20), los sustratos como lactato y piruvato, que se forman en el citosol, entran en la mitocondria y dan oxaloacetato como un precursor para la síntesis de glucosa en el citosol. Las membranas del retículo endoplásmico contienen el sistema de enzimas para la síntesis de triacilglicerol (cap. 24), y los ribosomas se encargan de la síntesis de proteína (cap. 37). EL FLUJO DE METABOLITOS A TRAVÉS DE VÍAS METABÓLICAS DEBE REGULARSE DE UN MODO CONCERTADO La regulación del flujo general a través de una vía es importante para asegurar un aporte apropiado de los productos de esa vía. Se logra por medio del control de una o más reacciones clave en la vía, catalizadas por las enzimas reguladoras. Los factores físico-químicos que controlan la velocidad de una reacción catalizada por la enzima, como las concentraciones de sustrato, tienen importancia primaria en el control de la velocidad general de una vía metabólica (cap. 9). 27/11/09 14:07:22 136 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Citosol Glucógeno AA Retículo endotelial Vía de la pentosa fosfato Glucosa Proteína Ribosoma Triosa fosfato Glicerol fosfato Triacilglicerol Ácidos grasos Glicerol Glucólisis Lactato ac ió n Fosfoenolpiruvato id ox Piruvato gé CO2 Li po AA AA ne sis β- Gluconeogénesis Piruvato Oxaloacetato Fumarato AA Acetil-CoA AA Citrato Ciclo del ácido cítrico Succinil-CoA Cuerpos cetónicos AA CO2 AA α-Cetoglutarato CO2 AA Mitocondria AA AA Figura 16-7 Localización intracelular y perspectiva general de vías metabólicas principales en una célula parenquimatosa del hígado. (AA →, metabolismo de uno o más aminoácidos esenciales; AA ↔, metabolismo de uno o más aminoácidos no esenciales.) Las reacciones no en equilibrio son puntos de control potenciales En una reacción en equilibrio, las reacciones hacia adelante e inversas suceden a velocidades iguales y, por tanto, no hay flujo neto en una u otra dirección. A↔B↔C↔D In vivo, en condiciones de “estado estable”, hay flujo neto de izquierda a derecha porque hay aporte de A y eliminación de D, continuos. En la práctica, siempre hay una o más reacciones no en equilibrio en una vía metabólica, donde los reactivos están presentes en concentraciones que están lejos del equilibrio. Al inten- 16 Bender.indd 136 tar alcanzar el equilibrio, se pierden grandes cantidades de energía libre, lo que hace que este tipo de reacción sea en esencia irreversible. A Calor B C D Ese tipo de vía tiene tanto flujo como dirección. Las enzimas que catalizan reacciones no en equilibrio por general están presentes en cifras bajas, y están sujetas a diversos mecanismos reguladores. Empero, casi ninguna reacción en vías metabólicas puede clasificarse como en equilibrio o no en equilibrio, sino que cae en algún lugar entre ambos extremos. 27/11/09 14:07:25 CApítulo 16 La reacción generadora de flujo es la primera reacción en una vía que se satura con sustrato Puede identificarse como una reacción no en equilibrio en la cual la Km de la enzima es mucho menor que la concentración normal de sustrato. La primera reacción en la glucólisis, catalizada por hexocinasa (fig. 18-2), es un paso generador de flujo de ese tipo porque su Km para la glucosa de 0.05 mmol/L está bastante por abajo de las cifras normales de glucosa en la sangre de 5 mmol/L. LOS MECANISMOS ALOSTÉRICOS Y HORMONALES TIENEN IMPORTANCIA EN EL CONTROL METABÓLICO DE REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMA En la figura 16-8 se muestra una vía metabólica hipotética, en la cual las reacciones A ↔ B y C ↔ D son reacciones en equilibrio y B ↔ C es una reacción no en equilibrio. El flujo por ese tipo de vía puede estar regulado por la disponibilidad de sustrato A. Esto depende de su aporte desde la sangre que, a su vez, depende de la ingestión de alimento o de reacciones clave que liberan sustratos desde reservas en los tejidos hacia el torrente sanguíneo, por ejemplo, glucógeno fosforilasa en el hígado (fig. 19-1) y lipasa sensible a hormona en el tejido adiposo (fig. 25-8). Asimismo, depende del transporte del sustrato A hacia la célula. El flujo también está determinado por la eliminación del producto terminal D y la disponibilidad de cosustratos o cofactores representados por Y y X. Las enzimas que catalizan reacciones no de equilibrio suelen ser proteínas alostéricas sujetas a las acciones rápidas de control por “retroalimentación” o “anteroalimentación” mediante modificadores alostéricos, en respuesta inmediata a las necesidades de las células (cap. 9). A menudo, el producto de una vía biosintética inhibe la enzima que cataliza la primera reacción en la vía. Otros mecanismos de control dependen de la acción de hormonas que muestran respuesta a las necesidades del cuerpo en conjunto; pueden actuar con rapidez al alterar la actividad de moléculas de enzima existentes, o con lentitud si se altera el índice de síntesis de enzima (cap. 42). MUCHOS COMBUSTIBLES METABÓLICOS SON INTERCONVERTIBLES Los carbohidratos que exceden los requerimientos para metabolismo productor de energía inmediato y la formación de reservas de glucógeno en los músculos y el hígado pueden usarse con facilidad para la síntesis de ácidos grasos y, en consecuencia, de triacilglicerol, tanto en el tejido adiposo como en el hígado (desde donde se exporta en lipoproteínas de muy baja densidad). Aún no se dilucida del todo la importancia de la lipogénesis en seres humanos; en países occidentales la grasa en la dieta de las personas proporciona 35 a 45% de la ingestión de energía, mientras que en países menos desarrollados, donde los carbohidratos llegan a proporcionar 60 a 75% del ingreso de energía, la ingestión total de alimento es tan baja que hay poco excedente para la lipogénesis de cualquier modo. Una ingestión alta de grasa inhibe la lipogénesis en el tejido adiposo y el hígado. No es posible emplear para la síntesis de glucosa a los ácidos grasos (y los cuerpos cetónicos formados a partir de ellos). La 16 Bender.indd 137 Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos 137 reacción de piruvato deshidrogenasa, que forma acetil-CoA, es irreversible, y por cada unidad de dos carbonos proveniente de acetil-CoA que entra al ciclo del ácido cítrico, hay una pérdida de dos átomos de carbono como dióxido de carbono antes de que vuelva a formarse oxaloacetato. Eso significa que la acetil-CoA (y, por ende, cualquier sustrato que la produzca) nunca puede usarse para la gluconeogénesis. Los ácidos grasos (relativamente raros) con un número impar de átomos de carbono dan propionil CoA como el producto final del ciclo de la β-oxidación, y ésta puede ser un sustrato para la gluconeogénesis, como puede serlo el glicerol liberado por medio de la lipólisis de reservas de triacilglicerol en el tejido adiposo. Casi todos los aminoácidos que exceden los requerimientos para la síntesis de proteína (que surgen a partir de la dieta o a partir del recambio de proteína en los tejidos) dan piruvato, o intermediarios de cuatro y cinco carbonos del ciclo del ácido cítrico (cap. 29). El piruvato se puede carboxilar hacia oxaloacetato, que es el sustrato primario para la gluconeogénesis, y los otros intermediarios del ciclo también dan por resultado un incremento neto de la formación de oxaloacetato, que entonces está disponible para gluconeogénesis. Estos aminoácidos se clasifican como glucogénicos. Dos aminoácidos (lisina y leucina) sólo dan acetil-CoA en el momento de la oxidación y, por consiguiente, no pueden emplearse para la gluconeogénesis, y otros cuatro (es decir, fenilalanina, tirosina, triptófano e isoleucina) dan lugar tanto a acetil-CoA como a intermediarios que pueden usarse para gluconeogénesis. Los aminoácidos que dan origen a acetil-CoA se denominan cetogénicos, porque en el ayuno y la inanición prolongados gran parte de la acetil-CoA se usa para la síntesis de cuerpos cetónicos en el hígado. EN LOS ESTADOS TANTO DE ALIMENTACIÓN COMO DE AYUNO SE PROPORCIONA UN APORTE DE COMBUSTIBLES METABÓLICOS El sistema nervioso central y los eritrocitos siempre necesitan glucosa Los eritrocitos carecen de mitocondrias y, por tanto, en todo momento dependen por completo de la glucólisis (anaeróbica) y de la vía de la pentosa fosfato. El cerebro puede metabolizar cuerpos cetónicos para satisfacer alrededor de 20% de sus requerimientos de energía; el resto debe suministrarse mediante glucosa. Los cambios metabólicos que suceden en el estado de ayuno y en la inanición son las consecuencias de la necesidad de preservar la glucosa y las reservas limitadas de glucógeno en el hígado y los músculos para uso por el cerebro y los eritrocitos, y de asegurar el suministro de combustibles metabólicos alternativos para otros tejidos. En el embarazo el feto requiere una cantidad importante de glucosa, al igual que la síntesis de lactosa durante la lactancia (fig. 16-9). En el estado posprandial, se depositan reservas de combustible metabólico Durante varias horas luego de una comida, mientras se están absorbiendo los productos de la digestión, hay un aporte abundante de 27/11/09 14:07:25 138 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Enz1 inactiva 2 2 + + Ca2+/calmodulina cAMP Membrana celular X Activa Y Enz1 A A B C + 1 + o – o – Síntesis ribosómica de nueva proteína enzima 3 Figura 16-8 Mecanismos de control de una reacción catalizada por enzima. Los números encerrados en un círculo indican posibles sitios de acción de hormonas:  alteración de la permeabilidad de membrana;  conversión de una enzima inactiva en una activa, que por lo regular comprende reacciones de fosforilación/desfosforilación;  alteración del índice de traducción del mRNA en el nivel ribosómico;  inducción de la formación de mRNA nuevo, y  represión de la formación de mRNA.  y  son vías rápidas, mientras que  a  son las vías más lentas de regulación de la actividad enzimática. combustibles metabólicos. En estas condiciones, la glucosa es el principal combustible para la oxidación en casi todos los tejidos; esto se observa como un aumento del cociente respiratorio (la proporción de dióxido de carbono producido/oxígeno consumido) desde alrededor de 0.8 en el estado de ayuno hasta cerca de 1 (cuadro 16-1). La captación de glucosa hacia el músculo y el tejido adiposo está controlada por la insulina, secretada por las células de los islotes β del páncreas en respuesta a un incremento de la concentración de glucosa en la sangre porta. En el estado de ayuno el transportador de glucosa del músculo y el tejido adiposo (GLUT-4) se encuentra en vesículas intracelulares. Una respuesta temprana a la insulina es la migración de estas vesículas hacia la superficie celular, donde se fusionan con la membrana plasmática, lo que expone transportadores de glucosa activos. Estos tejidos sensibles a insulina sólo captan glucosa a partir del torrente sanguíneo en cualquier grado importante en presencia de la hormona. A medida que la secreción de insulina disminuye en el estado de ayuno, los receptores también se internalizan de nuevo, lo que reduce la captación de glucosa. La captación de glucosa por el hígado es independiente de la insulina, pero el hígado tiene una isoenzima de la hexocinasa (glucocinasa) con una Km alta, de modo que conforme aumentan las cifras de glucosa que entran al hígado, también lo hace el índice de síntesis de glucosa-6-fosfato. Esto excede el requerimiento del hígado de metabolismo productor de energía, y se usa principalmente para la síntesis de glucógeno. Tanto en el hí- 16 Bender.indd 138 – Inhibición alostérica negativa por retroacción Activación alostérica positiva por anteroacción + D Enz2 Producción nuclear de mRNA + 4 Inducción – 5 Represión gado como en el músculo esquelético, la acción de la insulina estimula la glucógeno sintetasa e inhibe la glucógeno fosforilasa. Parte de la glucosa adicional que entra al hígado también puede emplearse para lipogénesis y, en consecuencia, para la síntesis de triacilglicerol. En el tejido adiposo, la insulina estimula la captación de glucosa, su conversión en ácidos grasos, y su esterificación hacia triacilglicerol. Inhibe la lipólisis intracelular y la liberación de ácidos grasos libres. Los productos de la digestión de lípidos entran a la circulación como quilomicrones, las lipoproteínas plasmáticas de mayor tamaño, que tienen contenido en especial alto de triacilglicerol (cap. 25). En el tejido adiposo y el músculo esquelético, la lipoproteína lipasa extracelular se sintetiza y activa en respuesta a la insulina; los ácidos grasos no esterificados resultantes son captados en su mayor parte por el tejido, y se usan para la síntesis de triacilglicerol, mientras que el glicerol permanece en el torrente sanguíneo y es captado por el hígado y usado para gluconeogénesis y síntesis de glucógeno o lipogénesis. El hígado capta los ácidos grasos que permanecen en el torrente sanguíneo, y vuelve a esterificarlos. Dicho órgano elimina los remanentes de quilomicrones que ya tienen los lípidos, y el triacilglicerol restante se exporta, junto con el que se sintetiza en el hígado, en VlDl. En condiciones normales, la velocidad de catabolismo de proteína en los tejidos es más o menos constante durante todo el día; sólo en la caquexia que se relaciona con cáncer avanzado y otras enfermedades hay un incremento del índice de catabolismo de proteína. Hay catabolismo neto de proteína en el estado 27/11/09 14:07:27 CApítulo 16 Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos 139 Glucosa-6-fosfato Acil-CoA Glicerol-3-fosfato Tejido adiposo Triacilglicerol (TG) cAMP FFA Glicerol LPL Tejido extrahepático (p. ej., músculo cardiaco) FFA Sangre Glicerol Glicerol Quilomicrones TG (lipoproteínas) Oxidación LPL FFA Tubo digestivo FFA Glucosa Glucosa Desgaste de glucosa adicional (p. ej., diabetes, embarazo, lactancia) VLDL Cuerpos cetónicos FFA Glucosa TG Hígado Acil-CoA Glicerol-3-fosfato Acetil-CoA Ciclo del ácido cítrico is é og ne o luc G 2CO2 Aminoácidos, lactato de ayuno, y síntesis neta de proteínas en el estado posprandial, cuando el índice de síntesis aumenta de 20 a 25%. De nuevo, el incremento de la velocidad de síntesis de proteína en respuesta a aumento de la disponibilidad de aminoácidos y combustible metabólico, es una respuesta a la acción de la insulina. La síntesis de proteína es un proceso con alto costo de energía; puede explicar hasta 20% del gasto de energía en reposo después de una comida, pero sólo 9% en el estado de ayuno. Las reservas de combustible metabólico se movilizan en el estado de ayuno En el estado de ayuno hay un pequeño decremento de la glucosa plasmática, y luego poco cambio a medida que el ayuno se prolonga 16 Bender.indd 139 Glucosa-6-fosfato s ne Glucógeno Figura 16-9 Interrelaciones metabólicas entre tejido adiposo, hígado y tejidos extrahepáticos. En tejidos como el corazón, los combustibles metabólicos se oxidan en el orden de preferencia que sigue: cuerpos cetónicos > ácidos grasos > glucosa. (LPL, lipoproteína lipasa; FFA, ácidos grasos libres; VLDL, lipoproteínas de muy baja densidad.) hacia inanición. Los ácidos grasos plasmáticos se incrementan en el ayuno, pero después aumentan poco más en la inanición; conforme se prolonga el ayuno, hay incremento notorio de la concentración plasmática de cuerpos cetónicos (acetoacetato y 3-hidroxibutirato) (cuadro 16-2, fig. 16-10). En el estado de ayuno, a medida que las cifras de glucosa en la sangre de la porta se aminoran, también lo hace la secreción de insulina, y el músculo esquelético y el tejido adiposo captan menos glucosa. El aumento de la secreción de glucagon por las células α del páncreas inhibe la glucógeno sintetasa, y activa la glucógeno fosforilasa en el hígado. La glucosa-6-fosfato resultante es hidrolizada por la glucosa-6-fosfatasa, y se libera glucosa hacia el torrente sanguíneo para uso por el cerebro y los eritrocitos. 27/11/09 14:07:28 140 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Cuadro 16-1 rendimientos de energía, consumo de oxígeno y producción de dióxido de carbono en la oxidación de combustibles metabólicos rendimiento de energía (kJ/g) o2 consumido (L/g) Co2 producido (L/g) rQ (Co2 producido/o2 consumido) Energía (kJ)/L o2 Carbohidrato 16 0.829 0.829 1.00 20 Proteína 17 0.966 0.782 0.81 20 Grasa 37 2.016 1.427 0.71 20 Alcohol 29 1.429 0.966 0.66 20 Cuadro 16-2 Concentraciones plasmáticas de combustibles metabólicos (mmol/L) en los estados posprandial y de ayuno Posprandial ayuno de 40 h 7 días de inanición Glucosa 5.5 3.6 3.5 Ácidos grasos libres 0.30 1.15 1.19 Cuerpos cetónicos Insignificante 2.9 4.5 El glucógeno muscular no puede contribuir de manera directa a la glucosa plasmática, puesto que el músculo carece de glucosa-6-fosfatasa, y el propósito primario del glucógeno muscular es proporcionar una fuente de glucosa-6-fosfato para metabolismo productor de energía en el músculo mismo. Aun así, la acetil-CoA formada por medio de oxidación de ácidos grasos en el músculo inhibe la piruvato deshidrogenasa, lo que da pie a una acumulación de piruvato; la mayor parte de éste es objeto Glucagon plasmático má tic a el en Ác ido sg pla ra s Cambio relativo os li sm bres a Insulina p las ng re Glucosa en sangre o tónic Cuerpos ce nl se as a Gl 0 uc óg en o he pá tic ASPECTOS CLÍNICOS o 12 a 24 Horas de inanición Figura 16-10 Cambios relativos de los parámetros metabólicos durante el comienzo de la inanición. 16 Bender.indd 140 de transaminación hacia alanina, a expensas de aminoácidos que surgen por desintegración de reservas de proteína “lábiles” sintetizadas en el estado alimentado. La alanina y gran parte de los cetoácidos originados por esta transaminación se exportan desde el músculo y son captados por el hígado, donde la alanina sufre transaminación para producir piruvato. Los aminoácidos resultantes se exportan en su mayor parte de regreso al músculo, para proporcionar grupos amino para la formación de más alanina, mientras que el piruvato es un sustrato importante para gluconeogénesis en el hígado. En el tejido adiposo la disminución de insulina y el incremento del glucagon suscitan inhibición de la lipogénesis, desactivación de la lipoproteína lipasa, y activación de lipasa sensible a hormona intracelular (cap. 25). Esto lleva a liberación desde el tejido adiposo de cantidades aumentadas de glicerol (que es un sustrato para la gluconeogénesis en el hígado) y ácidos grasos libres, que son usados por el hígado, el corazón y el músculo esquelético como su combustible metabólico preferido, lo que, por ende, preserva la glucosa. Aun cuando el músculo de preferencia capta y metaboliza ácidos grasos libres en el estado de ayuno, no puede satisfacer todos sus requerimientos de energía mediante β-oxidación. En contraste, el hígado tiene una mayor capacidad de β-oxidación que la que se necesita para satisfacer sus propias necesidades de energía, y conforme el ayuno se torna más prolongado, forma más acetil-CoA que la que puede oxidarse. Esta acetil-CoA se usa para sintetizar los cuerpos cetónicos (cap. 22), que son importantes combustibles metabólicos para los músculos estriado y cardiaco, y puede satisfacer algunas de las necesidades de energía del cerebro. En la inanición prolongada, la glucosa llega a representar menos de 10% del metabolismo productor de energía de todo el cuerpo. En ausencia de otra fuente de glucosa, el glucógeno hepático y muscular se agotaría luego de alrededor de 18 h de ayuno. A medida que el ayuno se hace más prolongado, una cantidad cada vez mayor de los aminoácidos que se liberan como resultado del catabolismo de proteína se utiliza en el hígado y los riñones para gluconeogénesis (cuadro 16-3). En la inanición prolongada, conforme se agotan las reservas de tejido adiposo, hay un incremento muy considerable del índice neto de catabolismo de proteína para proporcionar aminoácidos, no sólo como sustratos para la gluconeogénesis, sino también como el prin- 27/11/09 14:07:29 CApítulo 16 141 Perspectiva general del metabolismo y el suministro de combustibles metabólicos Cuadro 16-3 resumen de las características metabólicas importantes de los principales órganos Órgano Principales vías Principales sustratos Principales productos exportados Enzimas especializadas Hígado Glucólisis, gluconeogénesis, lipogénesis, β-oxidación, ciclo del ácido cítrico, cetogénesis, metabolismo de lipoproteína, metabolismo de fármacos, síntesis de sales biliares, urea, ácido úrico, colesterol, proteínas plasmáticas Ácidos grasos libres, glucosa (en el estado posprandial), lactato, glicerol, fructosa, aminoácidos, alcohol Glucosa, triacilglicerol en VLDL, cuerpos cetónicos, urea, ácido úrico, sales biliares, colesterol, proteínas plasmáticas Glucocinasa, glucosa6-fosfatasa, glicerol cinasa, fosfoenolpiruvato carboxicinasa, fructocinasa, arginasa, HMG CoA sintasa, HMG CoA liasa, alcohol deshidrogenasa Cerebro Glucólisis, ciclo del ácido cítrico, metabolismo de aminoácidos, síntesis de neurotransmisores Glucosa, aminoácidos, cuerpos cetónicos en inanición prolongada Lactato, productos terminales del metabolismo de neurotransmisores Aquellas que se usan para la síntesis y el catabolismo de neurotransmisores Corazón β-oxidación y ciclo del ácido cítrico Cuerpos cetónicos, ácidos grasos libres, lactato, triacilglicerol de quilomicrón y de VLDL, algo de glucosa — Lipoproteína lipasa, cadena de transporte de electrones muy activa Tejido adiposo Lipogénesis, esterificación de ácidos grasos, lipólisis (en ayuno) Glucosa, triacilglicerol de quilomicrón y de VLDL Ácidos grasos libres, glicerol Lipoproteína lipasa, lipasa sensible a hormona, enzimas de la vía de la pentosa fosfato Músculo que se contrae con rapidez Glucólisis Glucosa, glucógeno Lactato (alanina y cetoácidos en ayuno) — Músculo que se contrae con lentitud β-oxidación y ciclo del ácido cítrico Cuerpos cetónicos, triacilglicerol de quilomicrón y de VLDL — Lipoproteína lipasa, cadena de transporte de electrones muy activa Riñón Gluconeogénesis Ácidos grasos libres, lactato, glicerol, glucosa Glucosa Glicerol cinasa, fosfoenolpiruvato carboxicinasa Eritrocitos Glucólisis anaeróbica, vía de la pentosa fosfato Glucosa Lactato Hemoglobina, enzimas de la vía de la pentosa fosfato abreviatura: VLDL, lipoproteínas de muy baja densidad. cipal combustible metabólico de todos los tejidos. La muerte se produce cuando proteínas hísticas esenciales se catabolizan y no se remplazan. En enfermos con caquexia como resultado de la liberación de citocinas en respuesta a tumores, y varios otros estados patológicos, hay un aumento del índice de catabolismo de proteína hística, así como incremento considerable del índice metabólico, de modo que se encuentran en estado de inanición avanzada. De nuevo, la muerte sobreviene cuando proteínas hísticas esenciales se catabolizan y no son remplazadas. La alta demanda de glucosa por el feto, y para la síntesis de lactosa durante la lactancia, puede llevar a cetosis. Esto llega a observarse como cetosis leve con hipoglucemia en seres humanos; en ganado vacuno en lactancia y en ovejas que cursan una gestación gemelar puede haber cetoacidosis muy pronunciada e hipoglucemia profunda. En la diabetes mellitus tipo 1 mal controlada, los pacientes llegan a presentar hiperglucemia, en parte como resultado de falta de insulina para estimular la captación y utilización de glucosa, y en parte porque en ausencia de insulina hay aumento de la gluconeogénesis a partir de aminoácidos en el hígado. Al mismo tiempo, la falta de insulina ocasiona incremento de la lipólisis en 16 Bender.indd 141 el tejido adiposo, y los ácidos grasos libres resultantes son sustratos para la cetogénesis en el hígado. La utilización de estos cuerpos cetónicos en el músculo (y en otros tejidos) puede estar alterada debido a la falta de oxaloacetato (todos los tejidos tienen un requerimiento de algo de metabolismo de glucosa para mantener una cantidad adecuada de oxaloacetato para la actividad del ciclo del ácido cítrico). En la diabetes no controlada, la cetosis puede ser lo bastante grave como para dar por resultado acidosis (cetoacidosis) pronunciada dado que el acetoacetato y el 3-hidroxibutirato son ácidos relativamente fuertes. El coma resulta tanto por la acidosis como por el aumento considerable de la osmolalidad del líquido extracelular (en particular como resultado de la hiperglucemia). rESuMEN ■ ■ Los productos de la digestión proporcionan a los tejidos los bloques de construcción para la biosíntesis de moléculas complejas y el combustible para impulsar los procesos vivos. Casi todos los productos de la digestión de carbohidratos, grasas y proteínas se metabolizan hacia un metabolito común, la acetil-CoA, antes de oxidación hacia CO2 en el ciclo del ácido cítrico. 27/11/09 14:07:30 142 ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos La acetil-CoA también es el precursor para la síntesis de ácidos grasos de cadena larga y esteroides, incluso colesterol y cuerpos cetónicos. La glucosa proporciona esqueletos de carbono para el glicerol de triacilgliceroles y aminoácidos no esenciales. Los productos de la digestión hidrosolubles se transportan de manera directa hacia el hígado por medio de la vena porta hepática. El hígado regula las concentraciones de glucosa y aminoácidos en sangre. Las vías están compartamentalizadas dentro de la célula. La glucólisis, glucogénesis, glucogenólisis, la vía de la pentosa fosfato y la lipogénesis ocurren en el citosol. Las mitocondrias contienen las enzimas del ciclo del ácido cítrico, β-oxidación de ácidos grasos, y la cadena respiratoria y la ATP sintasa. Las membranas del retículo endoplásmico contienen las enzimas para varios otros procesos, entre ellos la síntesis de triacilglicerol y el metabolismo de fármacos. Las vías metabólicas están reguladas por mecanismos rápidos que afectan la actividad de las enzimas existentes, esto es, modificación alostérica y covalente (a menudo en respuesta a la acción de hormona), y mecanismos lentos que afectan la síntesis de enzimas. Los carbohidratos y aminoácidos de la dieta que exceden los requerimientos pueden usarse para la síntesis de ácidos grasos y, por consiguiente, de triacilglicerol. En el ayuno y la inanición, debe proporcionarse glucosa para el cerebro y los eritrocitos; en el estado de ayuno temprano, esto se suministra a partir de las reservas de glucógeno. Para preservar la glucosa, el músculo y otros tejidos no la captan cuando la secreción de insulina es baja; utilizan ácidos grasos (y más tarde cuerpos cetónicos) como su combustible preferido. 16 Bender.indd 142 ■ ■ ■ En el estado de ayuno, el tejido adiposo libera ácidos grasos libres; en el ayuno y la inanición prolongados el hígado los usa para síntesis de cuerpos cetónicos, que se exportan para proporcionar el principal combustible para el músculo. Casi todos los aminoácidos, provenientes de la dieta o del recambio de proteína en los tejidos, pueden emplearse para gluconeogénesis, al igual que el glicerol proveniente del triacilglicerol. Ni los ácidos grasos —derivados de la dieta o de lipólisis de triacilglicerol del tejido adiposo— ni los cuerpos cetónicos —formados a partir de ácidos grasos en el estado de ayuno— pueden proporcionar sustratos para la gluconeogénesis. rEFErENCiaS Bender DA: Introduction to Nutrition and Metabolism, 4th ed. CRC Press, 2007. Brosnan JT: Comments on the metabolic needs for glucose and the role of gluconeogenesis. European Journal of Clinical Nutrition 1999;53:Suppl 1,S107–S111. Frayn KN: Integration of substrate flow in vivo: some insights into metabolic control. Clinical Nutrition 1997;16:277–282. Frayn KN: Metabolic Regulation: A Human Perspective, 2nd ed. Blackwell Science, 2003. Zierler K: Whole body metabolism of glucose. American Journal of Physiology 1999;276:E409–E426. 27/11/09 14:07:30 17 C El ciclo del ácido cítrico: el catabolismo de la acetil-CoA David A. Bender, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA El ciclo del ácido cítrico (ciclo de Krebs, ciclo del ácido tricarboxílico) es una secuencia de reacciones en las mitocondrias que oxidan la porción acetilo de la acetil-CoA, y reducen coenzimas que se reoxidan por medio de la cadena de transporte de electrones, enlazada a la formación de ATP. El ciclo del ácido cítrico es la vía común final para la oxidación de carbohidratos, lípidos y proteínas porque la glucosa, los ácidos grasos y casi todos los aminoácidos se metabolizan hacia acetil-CoA o intermediarios del ciclo. También tiene una función fundamental en la gluconeogénesis, lipogénesis e interconversión de aminoácidos. Muchos de estos procesos ocurren en casi todos los tejidos, pero el hígado es el único tejido en el cual todos suceden en un grado significativo. En consecuencia, hay profundas repercusiones cuando, por ejemplo, grandes números de células hepáticas quedan dañadas, como en la hepa­ titis aguda, o remplazadas por tejido conjuntivo (como en la ci­ rrosis). Los pocos defectos genéticos de las enzimas del ciclo del ácido cítrico que se han informado se relacionan con daño neurológico grave como resultado de alteración muy considerable de la formación de ATP en el sistema nervioso central. EL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO PROPORCIONA SUSTRATO PARA LA CADENA RESPIRATORIA El ciclo empieza con la reacción entre la porción acetilo de la acetil-CoA y el ácido dicarboxílico de cuatro carbonos oxaloacetato, lo que forma un ácido tricarboxílico de seis carbonos, el citrato. En las reacciones subsiguientes, se liberan dos moléculas de CO2, y se regenera el oxaloacetato (fig. 17-1). Sólo se requiere una pequeña cantidad de oxaloacetato para la oxidación de una gran cantidad de acetil-CoA; puede considerarse que desempeña una función catalítica. El ciclo del ácido cítrico es una parte integral del proceso mediante el cual se pone a disposición gran parte de la energía libre liberada en el transcurso de la oxidación de combustibles. Durante la oxidación de acetil-CoA, las coenzimas se reducen y después se reoxidan en la cadena respiratoria, enlazadas a la formación de ATP (fosforilación oxidativa, fig. 17-2; cap. 13). Este proceso es aerobio; requiere oxígeno como el oxidante final de las coenzimas reducidas. Las enzimas del ciclo del ácido cítrico están ubicadas en la matriz mitocondrial, libres o fijas a A P í t u l o la membrana mitocondrial interna y la membrana de las crestas, donde también se encuentran las enzimas y coenzimas de la cadena respiratoria (cap. 13). LAS REACCIONES DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO LIBERAN EQUIVALENTES REDUCTORES Y CO2 La reacción inicial entre la acetil-CoA y el oxaloacetato para formar citrato está catalizada por la citrato sintasa, que forma un enlace de carbono-carbono entre el carbono metilo de la acetil-CoA y el carbono carbonilo del oxaloacetato (fig. 17-3). El enlace tioéster de la citril-CoA resultante se hidroliza, lo que libera citrato y CoASH, una reacción exotérmica. La enzima aconitasa (aconitato hidratasa) isomeriza el citrato hacia isocitrato; la reacción ocurre en dos pasos: deshidratación hacia cis-aconitato, y rehidratación hacia isocitrato. Aun cuando el citrato es una molécula simétrica, con la aconitasa reacciona de manera asimétrica, de modo que los dos átomos de carbono que se pierden en reacciones subsiguientes del ciclo no son los que se añadieron provenientes de la acetil-CoA. Tal conducta asimétrica depende de canalización: transferencia del producto de la citrato sintasa de manera directa hacia el sitio activo de la aconitasa, sin entrar en solución libre. Esto proporciona integración de la actividad del ciclo del ácido cítrico y el suministro de citrato en el citosol como una fuente de acetilCoA para la síntesis de ácido graso. El veneno fluoroacetato es tóxico porque la fluoroacetil-CoA se condensa con oxaloacetato para formar fluorocitrato, que inhibe la aconitasa, lo que hace que se acumule citrato. El isocitrato pasa por deshidrogenación catalizada por la isocitrato deshidrogenasa para formar, en un inicio, oxalosuccinato, que permanece unido a enzima y pasa por descarboxilación hacia α-cetoglutarato. La descarboxilación requiere iones Mg++ o Mn++. La isocitrato deshidrogenasa tiene tres isoenzimas. Una, que usa NAD+, sólo se encuentra en mitocondrias; las otras dos usan NADP+ y se ubican en las mitocondrias y en el citosol. La oxidación del isocitrato enlazada a la cadena respiratoria procede casi por completo por medio de la enzima dependiente de NAD+. El α-cetoglutarato pasa por descarboxilación oxidativa en una reacción catalizada por un complejo de múltiples enzimas similar al involucrado en la descarboxilación oxidativa del piruvato (fig. 18-5). El complejo de α­cetoglutarato deshidroge­ 143 17 Bender.indd 143 27/11/09 14:08:02 144 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Acetil-CoA (C2) Carbohidrato Proteína Lípidos CoA Acetil-CoA (C2) Citrato (C6) Oxaloacetato (C4) Ciclo del ácido cítrico Malato (C4) CO2 CO2 Figura 17-1 El ciclo del ácido cítrico, mismo que ilustra la función catalítica del oxaloacetato. 17 Bender.indd 144 H 2O Cis-aconitato (C6) H 2O 2H Isocitrato (C6) CO 2 H 2O 2H Fumarato (C4) NAD Succinato (C4) nasa requiere los mismos cofactores que el complejo de piruvato deshidrogenasa —difosfato de tiamina, lipoato, NAD+, FAD y CoA— y origina la formación de succinil-CoA. El equilibrio de esta reacción favorece a tal grado la formación de succinil-CoA, que debe considerarse unidireccional desde el punto de vista fisiológico. Como sucede con la oxidación del piruvato (cap.18), la arsenita inhibe la reacción, lo que hace que se acumule el sustrato, α­cetoglutarato. La succinil-CoA se convierte en succinato mediante la enzima succinato tiocinasa (succinil­CoA sintetasa); se trata del único ejemplo en el ciclo del ácido cítrico de fosforilación en el ámbito de sustrato. Los tejidos en los cuales ocurre gluconeogénesis (el hígado y los riñones) contienen dos isoenzimas de succinato tiocinasa, una específica para difosfato de guanosina (guanosín difosfato; GDP) y la otra para ADP. El trifosfato de guanosina (guanosín trifosfato; GTP) formado se usa para la descarboxilación de oxaloacetato hacia fosfoenolpiruvato en la gluconeogénesis, y proporciona un enlace regulador entre la actividad del ciclo del ácido cítrico y el retiro de oxaloacetato para la gluconeogénesis. Los tejidos no gluconeogénicos sólo tienen la isoenzima que usa ADP. Cuando los cuerpos cetónicos se están metabolizando en tejidos extrahepáticos, hay una reacción alternativa catalizada por la succinil­CoA­acetoacetato­CoA transferasa (tioforasa), que comprende transferencia de CoA desde la succinil-CoA hacia el acetoacetato, lo que forma acetoacetil-CoA (cap. 22). El metabolismo anterógrado de succinato, que lleva a la regeneración de oxaloacetato, es la misma secuencia de reacciones químicas que ocurre en la β-oxidación de ácidos grasos: deshidrogenación para formar un doble enlace de carbonocarbono, adición de agua para formar un grupo hidroxilo, y deshidrogenación adicional para dar el grupo oxo del oxaloacetato. La primera reacción de deshidrogenación, que forma fumarato, es catalizada por la succinato deshidrogenasa, que está unida a la superficie interna de la membrana mitocondrial interna. La enzima contiene FAD y proteína hierro-azufre (Fe:S), Citrato (C6) H 2O Oxaloacetato (C4) 2H 2H α-cetoglutarato (C5) CO 2 Succinil-CoA (C4) Fp ATP ADP Q Cit b Fosforilación oxidativa Cit c Cit aa3 1/2 O 2 – Cadena respiratoria Anaerobiosis (hipoxia, anoxia) H 2O Fp Flavoproteína Cit Citocromo Figura 17-2 El ciclo del ácido cítrico: la principal vía catabólica para la acetil-CoA en organismos aerobios. La acetil-CoA, el producto del catabolismo de carbohidratos, proteínas y lípidos, se capta hacia el ciclo y se oxida hacia CO2, con la liberación de equivalentes reductores (2H). La oxidación subsiguiente de 2H en la cadena respiratoria lleva a fosforilación de ADP hacia ATP. Por cada vuelta del ciclo, se generan nueve ATP por medio de fosforilación oxidativa, y un ATP (o GTP) surge en el ámbito de sustrato a partir de la conversión de succinil-CoA en succinato. y reduce de manera directa la ubiquinona en la cadena de transporte de electrones. La fumarasa (fumarato hidratasa) cataliza la adición de agua a través del doble enlace del fumarato, lo que produce malato. La malato deshidrogenasa convierte a este último en oxaloacetato, una reacción que requiere NAD+. Aunque el equilibrio de esta reacción favorece con fuerza al malato, el flujo neto es hacia el oxaloacetato debido a la eliminación continua de este último (para formar citrato, como un sustrato para la gluconeogénesis, o para pasar por transaminación hacia aspartato), y a la reoxidación continua de NADH. 27/11/09 14:08:05 CApítulo 17 CH3 O Malato deshidrogenasa CoA – CoA SH * – COO CH2 COO NADH + H+ Oxaloacetato * – COO CH * S CO Acetil-CoA H2O NAD+ HO COO– C CH2 COO– Citrato * – CH2 COO L-Malato Aconitasa Fe2+ Fumarasa Fluoroacetato H2O H C 145 Citrato sintasa COO– C CH2 HO El ciclo del ácido cítrico: el catabolismo de la acetil-CoA H2O * – COO CH2 COO– C * – COO CH COO– Cis-aconitato * C H OOC Fumarato – FADH2 H2O Succinato deshidrogenasa Aconitasa Fe2+ FAD Malonato CH2 CH2 * COO – CH * – COO CH2 Succinato HO NAD+ ATP CoA Mg2+ SH Succinato tiocinasa CH COO– Isocitrato Isocitrato deshidrogenasa * – COO CH2 Arsenita CH2 S CoA O C Succinil-CoA COO– NADH + H+ ADP + P i CH2 * – COO + NADH + H NAD + CH2 Complejo de α-cetoglutarato deshidrogenasa CoA SH * – COO CH2 CO2 O C COO– α-Cetoglutarato CO2 Mn2+ CH * – COO COO– O C COO– Oxalosuccinato Isocitrato deshidrogenasa Figura 17-3 El ciclo del ácido cítrico (de Krebs). La oxidación de NADH y FADH2 en la cadena respiratoria lleva a la formación de ATP por medio de fosforilación oxidativa. Para seguir el paso de la acetil-CoA por el ciclo, los dos átomos de carbono del radical acetilo se muestran marcados en el carbono carbonilo (*) y en el carbono metilo (•). Aunque dos átomos de carbono se pierden como CO2 en una vuelta del ciclo, estos átomos no se derivan de la acetil-CoA que ha entrado de inmediato al ciclo, sino de la porción de la molécula de citrato que se derivó del oxaloacetato. Sin embargo, en el momento en que se completa una vuelta única del ciclo, el oxaloacetato que se regenera ahora está marcado, lo que lleva a que el CO2 marcado se desprenda durante la segunda vuelta del ciclo. Dado que el succinato es un compuesto simétrico, la “aleatorización” del marcado ocurre en este paso, de modo que los cuatro átomos de carbono del oxaloacetato parecen quedar marcados después de una vuelta del ciclo. Durante la gluconeogénesis, parte de la marca en el oxaloacetato se incorpora hacia glucosa y glucógeno (fig. 20-1). Están indicados los sitios de inhibición (⊝) por fluoroacetato, malonato y arsenita. POR CADA VUELTA DEL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO SE FORMAN 10 ATP Como resultado de oxidaciones catalizadas por las deshidrogenasas del ciclo del ácido cítrico, se producen tres moléculas de NADH y una de FADH2 por cada molécula de acetil-CoA catabolizada en 17 Bender.indd 145 una vuelta del ciclo. Estos equivalentes reductores se transfieren hacia la cadena respiratoria (fig. 13-3), donde la reoxigenación de cada NADH origina la formación de ~2.5 ATP, y de FADH2, ~1.5 ATP. Además, 1 ATP (o GTP) se forma mediante fosforilación en el ámbito de sustrato catalizada por la succinato tiocinasa. 27/11/09 14:08:06 146 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos LAS VITAMINAS DESEMPEÑAN FUNCIONES CLAVE EN EL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO (cap. 27), así como para gluconeogénesis (cap. 20) y síntesis de áci­ dos grasos (cap. 23). Dado que funciona en procesos tanto oxidativos como sintéticos, es anfibólico (fig. 17-4). Cuatro de las vitaminas B (cap. 44) son esenciales en el ciclo del ácido cítrico y, por ende, en el metabolismo productor de energía: 1) la riboflavina, en forma de flavina adenina dinucleótido (FAD), un cofactor para la succinato deshidrogenasa; 2) niacina, en forma de nicotinamida adenina dinucleótido (NAD), el aceptor de electrón para la isocitrato deshidrogenasa, α-cetoglutarato deshidrogenasa, y malato deshidrogenasa; 3) tiamina (vitamina B1), como difosfato de tiamina, la coenzima para la descarboxilación en la reacción de α-cetoglutarato deshidrogenasa, y 4) ácido pantoténi­ co, como parte de la coenzima A, el cofactor fijo a residuos ácido carboxílicos “activos” como acetil-CoA y succinil-CoA. El ciclo del ácido cítrico participa en la gluconeogénesis, transaminación y desaminación EL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO DESEMPEÑA UNA FUNCIÓN CRUCIAL EN EL METABOLISMO El ciclo del ácido cítrico no sólo es una vía para la oxidación de unidades de dos carbonos, sino que también es una vía importante para la interconversión de metabolitos que surgen por transaminación y desaminación de aminoácidos (caps. 28 y 29), y proporciona los sustratos para la síntesis de aminoácidos mediante transaminación Hidroxiprolina Serina Cisteína Treonina Glicina Triptófano Glucosa Tirosina Fenilalanina Todos los intermediarios del ciclo son en potencia glucogénicos, porque pueden dar lugar a oxaloacetato y, por ende, a producción neta de glucosa (en hígado y riñones, los órganos que llevan a cabo la gluconeogénesis; cap. 20). La enzima clave que cataliza la transferencia neta hacia afuera del ciclo hacia la gluconeogénesis es la fos­ foenolpiruvato carboxicinasa, la cual cataliza la descarboxilación de oxaloacetato hacia fosfoenolpiruvato; el GTP actúa como el donador de fosfato (fig. 20-1). La transferencia neta hacia el ciclo ocurre como resultado de varias reacciones. Entre las más importantes de esas reacciones anapleróticas, está la formación de oxaloacetato mediante la carboxilación de piruvato, catalizada por la piruvato carboxilasa. La reacción anterior es importante para mantener una concentración adecuada de oxaloacetato para la reacción de condensación con acetil-CoA. Si esta última se acumula, actúa como activador alostérico de la piruvato carboxilasa y como inhibidor de la piruvato deshidrogenasa, lo que asegura un aporte de oxaloacetato. El lactato, un importante sustrato para Lactato Transaminasa Alanina Fosfoenolpiruvato Piruvato Acetil-CoA Piruvato carboxilasa Fosfoenolpiruvato carboxicinasa Oxaloacetato Transaminasa Fumarato Aspartato Citrato Isoleucina Metionina Valina Succinil-CoA α-Cetoglutarato Propionato CO2 Histidina Prolina Glutamina Arginina CO2 Transaminasa Glutamato Figura 17-4 Participación del ciclo del ácido cítrico en la transaminación y la gluconeogénesis. Las flechas gruesas indican la principal vía de la gluconeogénesis. 17 Bender.indd 146 27/11/09 14:08:07 CApítulo 17 la gluconeogénesis, entra al ciclo por medio de oxidación hacia piruvato y después carboxilación hacia oxaloacetato. Las reacciones de aminotransferasa (transaminasa) forman piruvato a partir de alanina, oxaloacetato a partir de aspartato, y α-cetoglutarato a partir de glutamato. Dado que estas reacciones son reversibles, el ciclo también sirve como una fuente de esqueletos de carbono para la síntesis de estos aminoácidos. Otros aminoácidos contribuyen a la gluconeogénesis porque sus esqueletos de carbono dan origen a intermediarios del ciclo del ácido cítrico. La alanina, cisteína, glicina, hidroxiprolina, serina, treonina y triptófano dan piruvato; la arginina, histidina, glutamina y prolina dan α-cetoglutarato; la isoleucina, metionina y valina dan succinilCoA; la tirosina y fenilalanina dan fumarato (fig. 17-4). En rumiantes, cuyo principal combustible metabólico son los ácidos grasos de cadena corta formados mediante fermentación bacteriana, tiene especial importancia la conversión de propionato, el principal producto glucogénico de la fermentación en el rumen, en succinil-CoA por medio de la vía de la metilmalonil-CoA (fig. 20-2). El ciclo del ácido cítrico participa en la síntesis de ácidos grasos La acetil-CoA, formada a partir del piruvato mediante la acción de la piruvato deshidrogenasa, es el principal sustrato para la síntesis de ácidos grasos de cadena larga en no rumiantes (fig. 17-5). (En rumiantes, la acetil-CoA se deriva de manera directa del acetato.) La piruvato deshidrogenasa es una enzima mitocondrial, y la síntesis de ácidos grasos es una vía citosólica; la membrana mitocondrial es impermeable a acetil-CoA; esta última se pone a disposición en el citosol a partir del citrato sintetizado en la mitocondria, transportado hacia el citosol, y dividido en una reacción catalizada por la Atp­ citrato liasa. El citrato sólo está disponible para transporte hacia afuera de la mitocondria cuando la aconitasa se satura con su sus- Glucosa Piruvato deshidrogenasa Ácidos grasos Acetil-CoA Acetil-CoA Ciclo del ácido cítrico Oxaloacetato Oxaloacetato Piruvato ATP-citrato liasa Citrato La regulación del ciclo del ácido cítrico depende principalmente de un aporte de cofactores oxidados En casi todos los tejidos, donde la función primaria del ciclo del ácido cítrico yace en el metabolismo productor de energía, el control respiratorio por medio de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa regula la actividad del ciclo del ácido cítrico (cap. 13). De este modo, la actividad es dependiente del aporte de NAD+ que, a su vez, debido al estrecho acoplamiento entre la oxidación y fosforilación, depende de la disponibilidad de ADP y, por ende, finalmente del índice de utilización de ATP en trabajo químico y físico. Además, enzimas individuales del ciclo están reguladas. Los sitios más probables para regulación son las reacciones no de equilibrio catalizadas por la piruvato deshidrogenasa, citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y α-cetoglutarato deshidrogenasa. Las deshidrogenasas son activadas por Ca2+, que aumenta de concentración durante la contracción muscular y secreción, cuando hay aumento de la demanda de energía. En un tejido como el cerebro, que depende en su mayor parte de carbohidratos para el aporte de acetil-CoA, el control del ciclo del ácido cítrico puede ocurrir en la piruvato deshidrogenasa. Varias enzimas se encargan de la situación en cuanto a energía, como se demuestra por las proporciones [ATP]/ [ADP] y [NADH]/[NAD+]. De este modo, hay inhibición alostérica de la citrato sintasa por el ATP y acil-CoA grasa de cadena larga. La activación alostérica de la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NAD, mitocondrial, por ADP, es contrarrestada por ATP y NADH. El complejo de α-cetoglutarato deshidrogenasa está regulado de la misma manera que la piruvato deshidrogenasa (fig. 18-6). La succinato deshidrogenasa es inhibida por el oxaloacetato, y la disponibilidad de este último, según se controla por la malato deshidrogenasa, depende de la proporción [NADH]/[NAD+]. Dado que la Km para oxaloacetato de la citrato sintasa es del mismo orden de magnitud que la concentración intramitocondrial, es probable que la concentración de oxaloacetato controle el índice de formación de citrato. Queda por resolver cuáles de estos mecanismos son importantes in vivo. RESUMEN ■ Citrato CO2 Membrana mitocondrial Figura 17-5 Participación del ciclo del ácido cítrico en la síntesis de ácidos grasos a partir de glucosa. Véase también la figura 23-5. 17 Bender.indd 147 147 trato, y el citrato no puede canalizarse de manera directa desde la citrato sintasa hacia la aconitasa. Esto asegura que el citrato se use para la síntesis de ácidos grasos sólo cuando hay una cantidad adecuada para asegurar actividad continua del ciclo. ■ CO2 El ciclo del ácido cítrico: el catabolismo de la acetil-CoA ■ El ciclo del ácido cítrico es la vía final para la oxidación de carbohidratos, lípidos y proteínas. Su metabolito terminal común, la acetil-CoA, reacciona con el oxaloacetato para formar citrato. Mediante una serie de deshidrogenaciones y descarboxilaciones, el citrato es degradado, lo que reduce coenzimas, libera 2CO2 y regenera oxaloacetato. Las coenzimas reducidas se oxidan mediante la cadena respiratoria enlazada a la formación de ATP. De este modo, el ciclo es la principal vía para la formación de ATP, y está ubicado en la matriz de mitocondrias adyacente a las enzimas de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa. El ciclo del ácido cítrico es anfibólico, puesto que además de oxidación, es importante en el suministro de esqueletos de carbono para la gluconeogénesis, la síntesis de ácidos grasos y la interconversión de aminoácidos. 27/11/09 14:08:08 148 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos rEFErENCiaS Baldwin JE, Krebs HA: The evolution of metabolic cycles. Nature 1981;291:381. Bowtell JL, Bruce M: Glutamine: an anaplerotic precursor. Nutrition 2002;18:222. Briere JJ, Favier J, et al: Tricarboxylic acid cycle dysfunction as a cause of human diseases and tumor formation. Am J Physiol Cell Physiol 2006;291:C1114. Brunengraber H & Roe CR: Anaplerotic molecules: current and future. J Inherit Metab Dis 2006;29:327. De Meirleir L: Defects of pyruvate metabolism and the Krebs cycle. J Child Neurol 2002;Suppl 3:3S26. Gibala MJ, Young ME: Anaplerosis of the citric acid cycle: role in energy metabolism of heart and skeletal muscle. 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Bender, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Casi todos los tejidos tienen al menos cierto requerimiento de glucosa. En el cerebro, esa demanda es considerable. La glucólisis, la principal vía para el metabolismo de la glucosa, ocurre en el citosol de todas las células. Es singular, por cuanto puede funcionar de manera aerobia o anaerobia, según la disponibilidad de oxígeno y la cadena de transporte de electrones. Los eritrocitos, que carecen de mitocondrias, dependen por completo de la glucosa como su combustible metabólico y la metabolizan mediante glucólisis anaeróbica. Sin embargo, oxidar glucosa más allá del piruvato (el producto terminal de la glucólisis) requiere tanto oxígeno como sistemas de enzimas mitocondriales: el complejo de piruvato deshidrogenasa, el ciclo del ácido cítrico y la cadena respiratoria. La glucólisis es la principal ruta para el metabolismo de la glucosa y la principal vía para el metabolismo de la fructosa, galactosa y otros carbohidratos derivados de la dieta. La capacidad de la glucólisis para proporcionar ATP en ausencia de oxígeno tiene especial importancia, porque esto permite al músculo esquelético tener un nivel muy alto de desempeño cuando el aporte de oxígeno es insuficiente, y permite a los tejidos sobrevivir a episodios de anoxia. Sin embargo, el músculo cardiaco, que está adaptado para el desempeño aerobio, tiene actividad glucolítica relativamente baja, y poca supervivencia en condiciones de isquemia. Las enfermedades en las cuales hay deficiencia de las enzimas de la glucólisis (p. ej., piruvato cinasa) se observan sobre todo como anemias hemolíticas o, si el defecto afecta el músculo esquelético (p. ej., fosfofructocinasa), como fatiga. En las células cancerosas en crecimiento rápido, la glucólisis procede a un índice alto, formando grandes cantidades de piruvato, el cual es reducido hacia lactato y exportado. Esto produce un ambiente local hasta cierto punto ácido en el tumor, mismo que puede tener inferencias para la terapia del cáncer. El lactato se usa para gluconeogénesis en el hígado, proceso costoso en cuanto a energía, del cual depende gran parte del hipermetabolismo que se observa en la caquexia por cáncer. La acidosis láctica se produce por varias causas, entre ellas actividad alterada de la piruvato deshidrogenasa. LA GLUCÓLISIS PUEDE FUNCIONAR EN CONDICIONES ANAEROBIAS En las primeras investigaciones de la glucólisis quedó de manifiesto que la fermentación en levaduras era similar a la degradación de A P í t u l o glucógeno en el músculo. Fue evidente que cuando un músculo se contrae en un medio anaerobio, esto es, uno a partir del cual se excluye el oxígeno, el glucógeno desaparece y aparece lactato; cuando se admite oxígeno, tiene lugar la recuperación aerobia, y ya no se produce lactato. No obstante, si ocurre contracción en condiciones aerobias, no hay acumulación de lactato, y el piruvato es el principal producto terminal de la glucólisis. El piruvato se oxida más hacia CO2 y agua (fig. 18-1). Cuando hay carencia de oxígeno, la reoxidación mitocondrial de NADH formado durante la glucólisis está disminuida, y el NADH se reoxida al reducir piruvato a lactato, de modo que se permite que proceda la glucólisis (fig. 18-1). Si bien la glucólisis puede ocurrir en condiciones anaerobias, esto tiene un precio, puesto que limita la cantidad de ATP formado por cada mol de glucosa oxidada, de modo que debe metabolizarse mucho más glucosa en condiciones anaerobias que en condiciones aerobias. En levaduras y algunos otros microorganismos, el piruvato formado en la glucólisis anaerobia no se reduce a lactato, sino que se descarboxila y reduce a etanol. LAS REACCIONES DE LA GLUCÓLISIS CONSTITUYEN LA PRINCIPAL VÍA DE UTILIZACIÓN DE GLUCOSA La ecuación general para la glucólisis de glucosa a lactato es como sigue: Glucosa + 2 ADP + 2 Pi → 2 Lactato + 2 ATP + 2 H2O Todas las enzimas de la glucólisis (fig. 18-2) se encuentran en el citosol. La glucosa entra a la glucólisis por medio de fosforilación hacia glucosa 6-fosfato, catalizada por la hexocinasa, usando ATP como el donador de fosfato. En condiciones fisiológicas, la fosforilación de glucosa hacia glucosa 6-fosfato puede considerarse irreversible. La hexocinasa es inhibida de manera alostérica por su producto, la glucosa 6-fosfato. En tejidos que no son el hígado (y en las células β de los islotes pancreáticos), la disponibilidad de glucosa para glucólisis (o para síntesis de glucógeno en el músculo, cap. 19, y lipogénesis en el tejido adiposo, cap. 23) se controla mediante transporte hacia la célula, que a su vez está regulado por la insulina. La hexocinasa tiene afinidad alta (Km baja) por la glucosa, y en el hígado está saturada en condiciones normales y, así, actúa a una velocidad constante para proporcionar glucosa 6-fosfato para satisfacer las necesidades de la célula. Las células del hígado 149 18 Bender.indd 149 27/11/09 14:09:02 150 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Glucosa C6 Glucógeno (C6 ) n Hexosa fosfatos C6 Triosa fosfato C3 Triosa fosfato C3 NAD + NADH + H+ O2 CO2 + H 2O H2 O Piruvato C3 1/2O 2 Lactato C3 FIguRA 18-1 Resumen de la glucólisis. , bloqueado por condiciones anaerobias o por falta de mitocondrias que contienen enzimas respiratorias clave, como en los eritrocitos. también contienen una isoenzima de la hexocinasa, la glucocinasa, que tiene una Km mucho más alta que la concentración intracelular normal de glucosa. La función de la glucocinasa en el hígado es eliminar glucosa de la sangre después de una comida, proporcionando glucosa 6-fosfato en una cantidad superior a los requerimientos para la glucólisis, que se usa para la síntesis de glucógeno y lipogénesis. La glucosa 6-fosfato es un importante compuesto en la unión de varias vías metabólicas: glucólisis, gluconeogénesis, la vía de la pentosa fosfato, glucogénesis y glucogenólisis. En la glucólisis se convierte en fructosa 6-fosfato mediante la fosfohexosa isomerasa, que comprende una isomerización aldosa-cetosa. Esta reacción va seguida por otra fosforilación catalizada por la enzima fosfofructocinasa (fosfofructocinasa-1) que forma fructosa 1,6-bisfosfato. En condiciones fisiológicas puede considerarse que la reacción de la fosfofructocinasa es funcionalmente irreversible; es inducible, está sujeta a regulación alostérica, y tiene una participación importante en la regulación del índice de glucólisis. La aldolasa (fructosa 1,6-bisfosfato aldolasa) divide a la fructosa 1,6-bisfosfato en dos triosa fosfatos, el gliceraldehído 3-fosfato y dihidroxiacetona fosfato. La enzima fosfotriosa isomerasa interconvierte estos dos últimos compuestos. La glucólisis continúa con la oxidación de gliceraldehído 3-fosfato a 1,3-bisfosfoglicerato. La enzima que cataliza esta oxidación, gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa, es dependiente del NAD. Desde el punto de vista estructural consta de cuatro polipéptidos idénticos (monómeros) que forman un tetrámero. En cada polipéptido hay cuatro grupos —SH, derivados de residuos cisteína dentro de la cadena polipeptídica. Uno de los grupos —SH se encuentra en el sitio activo de la enzima (fig. 18-3). El sustrato inicialmente se combina con este grupo 18 Bender.indd 150 —SH, lo que forma un tiohemiacetal que se oxida hacia un tiol éster; los hidrógenos removidos en esta oxidación se transfieren al NAD+. El tiol éster pasa después por fosforólisis; se agrega fosfato inorgánico (Pi), lo que forma 1,3-bisfosfoglicerato, y el grupo —SH se reconstituye. En la reacción siguiente, catalizada por la fosfoglicerato cinasa, el fosfato se transfiere desde el 1,3-bisfosfoglicerato hacia ADP, lo que forma ATP (fosforilación a nivel de sustrato) y 3-fosfoglicerato. Dado que se forman dos moléculas de triosa fosfato por cada molécula de glucosa que pasa por glucólisis, en esta etapa se forman dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa que pasa por glucólisis. La toxicidad del arsénico resulta de la competencia del arsenato con el fosfato inorgánico (Pi) en esta reacción anterior para dar 1-arseno-3-fosfoglicerato, que se hidroliza de manera espontánea hacia 3-fosfoglicerato sin formar ATP. La fosfoglicerato mutasa isomeriza el 3-fosfoglicerato hacia 2-fosfoglicerato. Es probable que el 2,3-bisfosfoglicerato (difosfoglicerato, DPG) sea un intermediario en esta reacción. El paso subsiguiente es catalizado por la enolasa, y comprende una deshidratación, lo que forma fosfoenolpiruvato. La enolasa es inhibida por el fluoruro, y cuando se obtienen muestras de sangre para medición de glucosa, se deben recolectar en tubos que contengan fluoruro a fin de inhibir la glucólisis. La enzima también depende de la presencia de Mg2+ o Mn2+. El fosfato del fosfoenolpiruvato se transfiere hacia el ADP mediante la piruvato cinasa para formar dos moléculas de ATP por cada molécula de glucosa oxidada. El estado redox del tejido ahora determina cuál de dos vías se sigue. En condiciones anaerobias, el NADH no se puede reoxidar por medio de la cadena respiratoria a oxígeno. El NADH reduce el piruvato hacia lactato, lo cual es catalizado por la lactato deshidrogenasa. Hay diferentes isoenzimas de lactato deshidrogenasa específicas para tejido, que tienen importancia clínica (cap. 7). La reoxidación de NADH por medio de la formación de lactato permite que la glucólisis proceda en ausencia de oxígeno al regenerar suficiente NAD+ para otro ciclo de la reacción catalizada por gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa. En condiciones aerobias, el piruvato es captado hacia las mitocondrias, y después de descarboxilación oxidativa hacia acetilCoA, el ciclo del ácido cítrico lo oxida hacia CO2 (cap. 17). Los equivalentes reductores provenientes del NADH formado en la glucólisis son captados hacia las mitocondrias para oxidación por medio de uno de los dos transbordadores (lanzaderas) descritos en el capítulo 13. Los tejidos que funcionan en condiciones hipóxicas producen lactato Lo anterior es cierto para el músculo esquelético, en particular las fibras blancas, donde el índice de gasto de trabajo y, por ende, la necesidad de formación de ATP, puede exceder el índice al cual se puede captar oxígeno y utilizarlo (fig. 18-2). La glucólisis en los eritrocitos siempre termina en lactato, porque las reacciones subsiguientes de oxidación de piruvato son mitocondriales, y los eritrocitos carecen de mitocondrias. Otros tejidos que en circunstancias normales obtienen gran parte de su energía de la glucólisis y producen lactato son el cerebro, el tubo digestivo, la médula renal, la retina y la piel. La producción de lactato también se incrementa en el cho- 27/11/09 14:09:04 Capítulo 18 Glucólisis y la oxidación de piruvato 151 Glucógeno Glucosa 1-fosfato Hexocinasa CH2OH H HO O CH2 Glucocinasa H H OH H H OH H 2+ Mg OH HO ATP ADP α-D-Glucosa P O O H OH H H OH OH H CH2 1,6-bisfosfato Yodoacetato Fosfoglicerato cinasa COO– H C Mg2+ OH C H P O CH2 ATP 3-Fosfoglicerato Mg2+ O P * 2 CH HO HO H OH C H Pi P CH2 O NADH ADP + H+ 1,3-Bisfosfoglicerato H NAD+ C * 2 CH C C O Dihidroxiacetona fosfato OH CH2 P CH2OH O C O Fosfotriosa isomerasa P O 1/ 2 O 2 Cadena respiratoria mitocondrial H2O ~2.5 ADP ~2.5 ATP + Pi 2-Fosfoglicerato P O 6-fosfato Aldolasa OH COO– H H P O Gliceraldehído 3-fosfato Fosfoglicerato mutasa OH Fosfofructocinasa Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa O HO H P O O H H CH2OH D-Fructuosa ATP ADP P O O OH α-D-Glucosa 6-fosfato D-Fructosa CH2 Fosfohexosa isomerasa H CH2OH Anaerobiosis Fluoruro Mg2+ Enolasa H2O COO– C CH2 Mg2+ O ADP ATP P Fosfoenolpiruvato Oxidación en el ciclo del ácido cítrico Piruvato cinasa COO– C OH CH2 (Enol) piruvato + NADH + H+ NAD COO– COO– Espontánea C HO O CH3 Lactato deshidrogenasa (Ceto) piruvato C H CH3 L(+)-Lactato FIguRA 18-2 La vía de la glucólisis. ( P , —PO32−; Pi, HOPO32−; ⊝, inhibición.) *Los carbonos 1-3 de la fructosa bifosfato forman dihidroxiacetona fosfato, y los carbonos 4-6 forman gliceraldehído 3-fosfato. El término “bis-”, como en el bisfosfato, indica que los grupos fosfato están separados, mientras que el término “di-”, como en difosfato de adenosina, indica que están unidos. que séptico; asimismo, muchos cánceres producen lactato. El hígado, los riñones y el corazón por lo general captan lactato y lo oxidan, pero lo producen en condiciones de hipoxia. Cuando la producción de lactato es alta, como en el ejercicio vigoroso, el choque séptico y la caquexia por cáncer, gran parte 18 Bender.indd 151 se utiliza en el hígado para gluconeogénesis (cap. 20), lo que lleva a un incremento de la velocidad metabólica para proporcionar el ATP y GTP necesarios. El aumento resultante del consumo de oxígeno se observa como deuda de oxígeno después de ejercicio vigoroso. 27/11/09 14:09:05 152 SECCIÓN II H C O H C OH CH2 O Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos P H C OH H C OH Coenzima unida O O C OH P Enz NAD+ Oxidación de sustrato por NAD+ unido P C NAD+ Complejo de enzima-sustrato HS H Enz CH2 Gliceraldehído 3-fosfato O S Pi FIguRA 18-3 Mecanismo de oxidación del gliceraldehído 3-fosfato. (Enz, gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa.) La enzima es inhibida por el veneno —SH yodoacetato que, así, tiene la capacidad para inhibir la glucólisis. El NADH producido en la enzima no está tan firmemente unido a la enzima como el NAD+. En consecuencia, el NADH es desplazado con facilidad por otra molécula de NAD+. CH2 O P 1,3-Bisfosfoglicerato S H C O C OH CH2 S Enz O * + NAD P NADH + H+ * + NAD H C O C OH CH2 En algunas circunstancias llega a formarse lactato en el citosol, pero después entra a la mitocondria para ser oxidado hacia piruvato por el metabolismo posterior. Esto proporciona una vía para la transferencia de equivalentes reductores desde el citosol hacia la mitocondria para la cadena de transporte de electrones además de los transbordadores de glicerofosfato (fig. 13-12) y malato (fig. 13-13). LA GLUCÓLISIS ESTÁ REGULADA EN TRES PASOS QUE INVOLUCRAN REACCIONES NO EN EQUILIBRIO Aunque la mayor parte de las reacciones de la glucólisis son reversibles, tres son en gran medida exergónicas y, por ende, deben considerarse irreversibles desde el punto de vista fisiológico. Estas reacciones, catalizadas por la hexocinasa (y glucocinasa), fosfofructocinasa y piruvato cinasa, son los principales sitios de regulación de la glucólisis. La fosfofructocinasa está significativamente inhibida a concentraciones intracelulares normales de ATP; esta inhibición puede aliviarse con rapidez mediante 5ʹAMP que se forma a medida que empieza a acumularse ADP, lo que señala la necesidad de un incremento en la velocidad de la glucólisis (cap. 20). Las células que tienen la capacidad de gluconeogénesis (que revierten la vía glucolítica, cap. 20) tienen diferentes enzimas que catalizan reacciones para revertir estos pasos irreversibles; glucosa 6-fosfatasa, fructosa 1,6-bisfosfatasa y, para revertir la reacción de la piruvato cinasa, piruvato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carboxicinasa. La fructosa entra a la glucólisis mediante fosforilación hacia fructosa 1-fosfato, 18 Bender.indd 152 Enz NADH + H+ O P H H C O C OH CH2 Glucosa O P Gliceraldehído 3-fosfato NAD+ Pi Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa NADH + H+ O H C O C OH CH2 P O Bisfosfoglicerato mutasa P 1,3-Bisfosfoglicerato COO– ADP Fosfoglicerato cinasa ATP C CH2 O CH2 P O P Pi OH O P 3-Fosfoglicerato FIguRA 18-4 C 2,3-Bisfosfoglicerato COO– H H 2,3-Bisfosfoglicerato fosfatasa Piruvato Vía del 2,3-bisfosfoglicerato en los eritrocitos. 27/11/09 14:09:07 Capítulo 18 y evita los principales pasos reguladores; de este modo, da por resultado la formación de más piruvato (y acetil-CoA) que es necesario para la formación de ATP (cap. 21). En el hígado y el tejido adiposo, esto lleva a aumento de la lipogénesis, y una ingestión alta de fructosa puede ser un factor en la aparición de obesidad. 153 Glucólisis y la oxidación de piruvato neto nulo de ATP por glucólisis. Sin embargo, sirve para proporcionar 2,3-bisfosfoglicerato, que se une a la hemoglobina, lo que disminuye su afinidad por el oxígeno y, así, hace que el oxígeno esté disponible con más facilidad para los tejidos (cap. 6). LA OXIDACIÓN DEL PIRUVATO HACIA ACETIL-CoA ES LA RUTA IRREVERSIBLE DESDE LA GLUCÓLISIS HACIA EL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO En los eritrocitos es posible evitar el paso por el primer sitio de formación de ATP en la glucólisis En los eritrocitos, es factible evitar hasta cierto grado el paso por la reacción catalizada por la fosfoglicerato cinasa mediante la reacción de la bisfosfoglicerato mutasa, que cataliza la conversión de 1,3-bisfosfoglicerato en 2,3-bisfosfoglicerato, seguida por hidrólisis hacia 3-fosfoglicerato y Pi, catalizada por la 2,3-bisfosfoglicerato fosfatasa (fig. 18-4). Esta vía alternativa comprende rendimiento El piruvato, formado en el citosol, es transportado hacia la mitocondria mediante un simportador (symporter) de protones (fig. 13-10). Dentro de la mitocondria, se descarboxila de manera oxidativa hacia acetil-CoA mediante un complejo multienzimático relacionado con la membrana mitocondrial interna. Este complejo de piruvato O C CH3 COO– + H+ TDP Piruvato Acetil lipoamida HS CoA-SH H C S H N C O TDP CH 2 C O CO2 CH 2 H 3C Piruvato deshidrogenasa H 3C C OH Hidroxietilo Lipoamida oxidada H C H2 H 2C S C S Ácido lipoico Dihidrolipoil transacetilasa O Cadena lateral de lisina O FADH2 C N H NAD+ H N C H C SH CH 2 CH 2 Dihidrolipoil deshidrogenasa CH3 CO S Acetil-CoA CoA SH Dihidrolipoamida NADH + H+ FAD FIguRA 18-5 Descarboxilación oxidativa del piruvato por el complejo de piruvato deshidrogenasa. El ácido lipoico está unido mediante un enlace amida a un residuo lisina del componente transacetilasa del complejo enzimático. Forma un brazo flexible largo, que permite que el grupo prostético del ácido lipoico rote de manera secuencial entre los sitios activos de cada una de las enzimas del complejo. (NAD+, nicotinamida adenina dinucleótido; FAD, flavina adenina dinucleótido; TDP, difosfato de tiamina.) 18 Bender.indd 153 27/11/09 14:09:08 154 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos deshidrogenasa es análogo al complejo de α-cetoglutarato deshidrogenasa del ciclo del ácido cítrico (fig. 17-3). El piruvato es descarboxilado por la piruvato deshidrogenasa componente del complejo enzimático hacia un derivado hidroxietilo del anillo tiazol de tiamina difosfato unido a enzima que, a su vez, reacciona con lipoamida oxidada, el grupo prostético de la dihidrolipoil transacetilasa, para formar acetil lipoamida (fig. 18-5). La tiamina es la vitamina B1 (cap. 44) y, cuando hay deficiencia, el metabolismo de la glucosa está alterado, y hay acidosis láctica y pirúvica importantes (y que en potencia ponen en peligro la vida). La acetil lipoamida reacciona con la coenzima A para formar acetil-CoA y lipoamida reducida. La reacción se completa cuando la lipoamida reducida se vuelve a oxidar mediante una flavoproteína, la dihidrolipoil deshidrogenasa, que contiene FAD. Por último, la flavoproteína reducida se oxida mediante NAD+ que, a su vez, transfiere equivalentes reductores a la cadena respiratoria. Piruvato + NAD+ + CoA → Acetil-CoA + NADH + H+ + CO2 El complejo de piruvato deshidrogenasa consta de varias cadenas polipeptídicas de cada una de las tres enzimas componentes, y los intermediarios no se disocian, sino que permanecen unidos a las enzimas. Ese complejo de enzimas, en el cual los sustratos pasan desde una enzima hacia la siguiente, aumenta la velocidad de la reacción y elimina reacciones colaterales, lo que aumenta la eficiencia general. La piruvato deshidrogenasa está regulada mediante inhibición por producto terminal y modificación covalente La piruvato deshidrogenasa es inhibida por sus productos, acetilCoA y NADH (fig. 18-6). También está regulada por una cinasa que fosforila tres residuos de serina del componente piruvato deshidrogenasa del complejo de múltiples enzimas, lo que da por resultado decremento de la actividad, y por desfosforilación por una fosfatasa que causa un aumento de la actividad. La cinasa se activa por incre- [ Acetil-CoA] [ NADH ] [ CoA ] [ NAD+ ] + + [ ATP ] [ ADP ] + Dicloroacetato – Acetil-CoA Ca2+ + NADH + H – – PDH cinasa Piruvato Mg2+ CO2 ATP ADP – PDH – PDH-a (enzima desfosforilada activa) PDH-b (enzima fosforilada inactiva) P NAD+ CoA Pi H2O Piruvato PDH fosfatasa A B + Mg2+, Ca2+ + Insulina (en tejido adiposo) FIguRA 18-6 Regulación de la piruvato deshidrogenasa (PDH). Las flechas onduladas indican efectos alostéricos. (A) Regulación mediante inhibición por producto terminal. (B) Regulación por interconversión de formas activa e inactiva. 18 Bender.indd 154 27/11/09 14:09:10 Capítulo 18 155 Glucólisis y la oxidación de piruvato CuADRO 18-1 Formación de ATP en el catabolismo de la glucosa Vía Glucólisis ATP por mol de glucosa Reacción catalizada por Método de formación de ATP Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa Oxidación de 2 NADH en la cadena respiratoria 5* Fosfoglicerato cinasa Fosforilación en el ámbito de sustrato 2 Piruvato cinasa Fosforilación en el ámbito de sustrato 2 10 Consumo de ATP por las reacciones de hexocinasa y fosfofructocinasa −2 7 netos Ciclo del ácido cítrico Piruvato deshidrogenasa Oxidación de 2 NADH en la cadena respiratoria 5 Isocitrato deshidrogenasa Oxidación de 2 NADH en la cadena respiratoria 5 α-Cetoglutarato deshidrogenasa Oxidación de 2 NADH en la cadena respiratoria 5 Succinato tiocinasa Fosforilación a nivel de sustrato 2 Succinato deshidrogenasa Oxidación de 2 FADH2 en la cadena respiratoria 3 Malato deshidrogenasa Oxidación de 2 NADH en la cadena respiratoria 5 25 netos Total por mol de glucosa en condiciones aerobias 32 Total por mol de glucosa en condiciones anaerobias 2 *Esto supone que el NADH formado en la glucólisis se transporta hacia las mitocondrias mediante el transbordador de malato (fig. 13-13). Si se usa el transbordador de glicerofosfato, sólo se formarán 1.5 ATP por cada mol de NADH. Note que hay una ventaja considerable en el uso de glucógeno en lugar de glucosa para la glucólisis anaerobia en el músculo, porque el producto de la glucógeno fosforilasa es la glucosa 1-fosfato (figura 19-1), que es interconvertible con glucosa 6-fosfato. Esto ahorra el ATP que de otro modo sería usado por la hexocinasa, lo que aumenta el rendimiento neto de ATP de dos a tres por cada glucosa. mentos de las proporciones [ATP]/[ADP], [acetil-CoA]/[CoA], y [NADH]/[NAD+]. De este modo, la piruvato deshidrogenasa y, por ende, la glucólisis, son inhibidas tanto cuando se dispone de cantidades adecuadas de ATP (y coenzimas reducidas para la formación de ATP), como cuando los ácidos grasos se están oxidando. En el ayuno, cuando aumentan las concentraciones de ácido graso libre, hay un decremento de la proporción de la enzima en la forma activa, lo que lleva a una preservación de carbohidrato. En el tejido adiposo, donde la glucosa proporciona acetil-CoA para lipogénesis, la enzima se activa en respuesta a insulina. La oxidación de la glucosa da hasta 32 moles de ATP en condiciones aerobias, pero sólo 2 moles en ausencia de O2 Cuando un mol de glucosa es objeto de combustión en un calorímetro hasta CO2 y agua, se liberan unos 2 870 kJ como calor. Cuando la oxidación ocurre en los tejidos, se generan alrededor de 32 moles de ATP por cada molécula de glucosa oxidada hasta CO2 y agua. In vivo, la ΔG para la reacción de ATP sintasa se ha calculado como cercana a 51.6 kJ. Resulta que la energía total captada en el ATP por cada mol de glucosa oxidada es de 1 651 kJ, un 58% de la energía de combustión. La mayor parte del ATP se forma mediante fosforilación oxidativa originada por la reoxidación de coenzimas reducidas por la cadena respiratoria; el resto se forma por fosforilación a nivel de sustrato (cuadro 18-1). 18 Bender.indd 155 ASPECTOS CLÍNICOS La inhibición del metabolismo del piruvato lleva a acidosis láctica La arsenita y los iones mercúricos reaccionan con los grupos —SH del ácido lipoico, e inhiben la piruvato deshidrogenasa, como lo hace una deficiencia de tiamina en la dieta, lo que permite que se acumule piruvato. Muchos alcohólicos tienen deficiencia de tiamina (tanto por llevar una dieta inadecuada como porque el alcohol inhibe la absorción de tiamina) y a menudo presentan acidosis pirúvica y láctica que en potencia es mortal. Los pacientes con deficiencia hereditaria de piruvato deshidrogenasa, que puede ser el resultado de defectos en uno o más de los componentes del complejo de enzimas, también presentan acidosis láctica, en particular después de una carga de glucosa. Debido a la dependencia del cerebro de la glucosa como un combustible, estos defectos metabólicos por lo general causan alteraciones neurológicas. La deficiencia hereditaria de aldolasa A y la deficiencia de piruvato cinasa en los eritrocitos causan anemia hemolítica. Los pacientes con deficiencia de fosfofructocinasa muscular tienen baja capacidad para hacer ejercicio, en particular si están recibiendo dietas con alto contenido de carbohidratos. Al proporcionar lípido como un combustible alternativo, por ejemplo, durante la inanición, cuando los ácidos grasos libres y los cuerpos cetónicos en la sangre están aumentados, la capacidad para desempeñar trabajo mejora. 27/11/09 14:09:10 156 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos RESuMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ ■ La glucólisis es la vía citosólica de todas las células de mamífero para el metabolismo de la glucosa (o del glucógeno) el piruvato a lactato. Puede funcionar de manera anaeróbica al regenerar NAD+ oxidado (que se requiere en la reacción de la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa), al reducir piruvato hacia lactato. El lactato es el producto terminal de la glucólisis en condiciones anaerobias (p. ej., en músculo que está haciendo ejercicio), o cuando falta la maquinaria metabólica para la oxidación adicional de piruvato (p. ej., en los eritrocitos). La glucólisis está regulada por tres enzimas que catalizan reacciones no en equilibrio (irreversibles): hexocinasa, fosfofructocinasa y piruvato cinasa. En los eritrocitos, puede evitarse el paso por el primer sitio en la glucólisis para la generación de ATP, lo que lleva a la formación de 2,3-bisfosfoglicerato, que tiene importancia en el decremento de la afinidad de la hemoglobina por el O2. El piruvato se oxida a acetil-CoA mediante un complejo de múltiples enzimas, piruvato deshidrogenasa, que es dependiente del cofactor difosfato de tiamina derivado de vitamina. Las condiciones que involucran un deterioro del metabolismo del piruvato suelen llevar a acidosis láctica. REFERENCIAS Behal RH, Buxton DB, Robertson JG, Olson MS: Regulation of the pyruvate dehydrogenase multienzyme complex. Annu Rev Nutr 1993;13:497. Boiteux A, Hess B: Design of glycolysis. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 1981;293:5. 18 Bender.indd 156 Fothergill-Gilmore LA: The evolution of the glycolytic pathway. 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Aunque el contenido de glucógeno en hígado es mayor que en músculos, dado que la masa muscular del cuerpo es bastante mayor que la del hígado, alrededor de tres cuartas partes del glucógeno corporal total están en el músculo (cuadro 19-1). El glucógeno del músculo proporciona una fuente de glucosa fácilmente disponible para glucólisis dentro del músculo en sí. La función del glucógeno hepático es almacenar glucosa y exportarla para mantener la glucosa sanguínea entre las comidas. La concentración de glucógeno en el hígado es de alrededor de 450 mM después de una comida; disminuye a alrededor de 200 mM tras ayuno de toda la noche; luego de 12 a 18 horas de ayuno, el glucógeno hepático está agotado casi en su totalidad. Si bien el glucógeno hepático no produce de manera directa glucosa libre (porque el músculo carece de glucosa 6-fosfatasa), el piruvato formado mediante glucólisis en el músculo puede pasar por transaminación hacia alanina, que se exporta desde el músculo y se usa para gluconeogénesis en el hígado (fig. 20-4). Las enfermedades por depósito de glucógeno son un grupo de trastornos hereditarios que se caracterizan por movilización deficiente de glucógeno o depósito de formas anormales del mismo, lo que lleva a debilidad muscular; algunas de estas enfermedades dan por resultado muerte temprana. La estructura muy ramificada del glucógeno proporciona un gran número de sitios para glucogenólisis, lo que permite liberación rápida de glucosa 1-fosfato para actividad muscular. Los atletas de resistencia requieren liberación más lenta y más sostenida de glucosa 1-fosfato. La formación de puntos de ramificación en el glucógeno es más lenta que la adición de unidades de glucosa a una cadena lineal, y algunos atletas de resistencia practican carga de carbohidratos: hacer ejercicio hasta quedar exhausto (cuando el glucógeno muscular está agotado en su mayor parte), seguido por una comida con alto contenido de carbohidratos, lo que da por resultado síntesis rápida de glucógeno, con menos puntos de ramificación que lo normal. LA GLUCOGÉNESIS OCURRE DE MANERA PRINCIPAL EN MÚSCULO E HÍGADO La vía de la biosíntesis de glucógeno implica un nucleótido especial de la glucosa Al igual que en la glucólisis, la glucosa se fosforila hacia glucosa 6-fosfato, lo cual es catalizado por la hexocinasa en el músculo y la A P í t u l o glucocinasa en el hígado (fig. 19-1). La glucosa 6-fosfato se isomeriza hacia glucosa 1-fosfato mediante la fosfoglucomutasa. La enzima en sí está fosforilada y el grupo fosfo participa en una reacción reversible en la cual la glucosa 1,6-bisfosfato es un intermediario. A continuación, la glucosa 1-fosfato reacciona con uridina trifosfato (UTP) para formar el nucleótido activo uridina difosfato glucosa (UDPGlc) y pirofosfato (fig. 19-2), catalizado por la UDPGlc pirofosforilasa. La reacción procede en la dirección de la formación de UDPGlc porque la pirofosfatasa cataliza la hidrólisis de pirofosfato hacia 2 × fosfato, de modo que se elimina uno de los productos de la reacción. La glucógeno sintasa cataliza la formación de un enlace glucósido entre el C-1 de la glucosa de UDPGlc y el C-4 de un residuo glucosa terminal de glucógeno, lo que libera uridina difosfato (UDP). Una molécula de glucógeno preexistente, o “preparador de glucógeno” debe estar presente para iniciar esta reacción. El preparador de glucógeno a su vez se forma sobre un preparador de proteína conocido como glucogenina, esta última es una proteína de 37 kDa que es glucosilada en un residuo tirosina específico por la UDPGlc. Se fijan más residuos glucosa en la posición 1 → 4 (catalizada por la glucogenina en sí) para formar una cadena corta que es un sustrato para la glucógeno sintasa. En el músculo estriado, la glucogenina permanece fija en el centro de una molécula de glucógeno (fig. 14-13); en el hígado, el número de moléculas de glucógeno es mayor que el de moléculas de glucogenina. La ramificación comprende el desprendimiento de cadenas de glucógeno existentes La adición de un residuo glucosa a una cadena de glucógeno preexistente, o “preparador”, ocurre en el extremo externo, no reductor, de la molécula, de modo que las ramas de la molécula de glucógeno se alargan a medida que se forman enlaces 1 → 4 sucesivos (fig. 19-3). Cuando la cadena tiene al menos 11 residuos de glucosa de largo, la enzima ramificadora transfiere una parte de la cadena 1 → 4 (por lo menos seis residuos de glucosa) hacia una cadena vecina para formar un enlace 1 → 6, lo que establece un punto de ramificación. Las ramas crecen mediante adiciones extra de unidades 1 → 4-glucosilo y ramificación adicional. LA GLUCOGENÓLISIS NO ES EL INVERSO DE LA GLUCOGÉNESIS, SINO QUE ES UNA VÍA SEPARADA La glucógeno fosforilasa cataliza el paso limitador en la glucogenólisis al catalizar la división fosforolítica (fosforólisis; de hidrólisis) de 157 19 Bender.indd 157 27/11/09 14:10:21 158 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Cuadro 19-1 almacenamiento de carbohidrato en un ser humano de 70 kg Porcentaje del peso de tejido Glucógeno hepático Peso de tejido Contenido corporal 1.8 kg 90 g 5.0 O 6CH2OH Glucógeno muscular 0.7 35 kg 245 g Glucosa extracelular 0.1 10 L 10 g H HO O H O O P O O– OH P O O H Figura 19-2 H H HO Glucosa N CH2 O– H los enlaces 1 → 4 del glucógeno para dar glucosa 1-fosfato (fig. 194). La glucógeno fosforilasa requiere fosfato de piridoxal (cap. 44) como su coenzima. Al contrario de las reacciones del metabolismo de aminoácidos (cap. 29), en las cuales el aldehído es el grupo reactivo, en la fosforilasa es el grupo fosfato el que tiene actividad catalítica. Los residuos glucosilo terminales de las cadenas más externas de la molécula de glucógeno se eliminan de manera secuencial hasta que quedan alrededor de cuatro residuos glucosa a uno u otro lados de una rama 1 → 6 (fig. 19-4). Otra enzima (α-[1 → 4] → α-[1 → 4] Uracilo HN O H H 1 OH H O Difosfato Ribosa OH Uridina Uridina difosfato glucosa (UDPGlc). glucano transferasa) transfiere una unidad de trisacárido desde una rama hacia la otra, lo que expone el punto de ramificación 1 → 6. La hidrólisis de los enlaces 1 → 6 requiere la enzima desramificadora; la transferencia de glucano y la enzima desramificadora son Glucógeno (unidades 1 → 4 y 1 → 6 glucosilo)x Enzima ramificadora (Unidades 1 → 4 glucosilo)x Pi Insulina UDP Glucógeno sintasa Glucógeno fosforilasa cAMP Preparador de glucógeno Glucagon epinefrina Glucano transferasa Enzima desramificadora Glucogenina Uridina difosfato glucosa (UDPGlc) * Hacia la vía del ácido urónico Pirofosfatasa inorgánica 2 Pi UDP Glucosa libre proveniente de la enzima desramificadora UDPGlc pirofosforilasa PPi Uridina trifosfato (UTP) Glucosa 1-fosfato Mg2+ Fosfoglucomutasa Glucosa 6-fosfatasa ATP Nucleósido difosfocinasa Glucógeno (unidades 1 → 4 yADP 1 → 6 glucosilo)x H 2O Glucosa-6 Mg2+ fosfatasaEnzima ramificadora ADP Pi (Unidades 1 → 4 glucosilo) x UDP Hacia glucólisis y la vía Glucógeno de la (unidades pentosa1fosfato → 4 y 1 → 6 glucosilo) Glucocinasa Enzima ramificadora P x Insulina Insulina UDP Figura 19-1 Vías de la glucogénesis yGlucógeno la glucogenólisis en el hígado. ( Glucógeno Estimulación; , inhibición.) La Glucógeno cAMP cAMP sintasa fosforilasa o epinefrina; insulina disminuye la concentración de cAMPsintasa sólo después de que ha aumentado por glucagon esto es, Preparador Preparador antagoniza su acción. El glucagon es activo en el músculo cardiaco, no así en el estriado. *La glucano transferasa y la de glucógeno de glucógeno enzima desramificadora parecen ser dos actividades separadas de la misma enzima. Glucagon epinefrina Glucogenina Glucogenina Uridina difosfato glucosa (UDPGlc) Hacia la vía del ácido urónico 19 Bender.indd 158 Pirofosfatasa inorgánica Uridina difosfato glucosa (UDPGlc) Hacia la vía del ácido urónico inorgánica Glucano transferasa Enzima desramificadora * Glucagon epinefrina Glucosa libre proveniente de la enzima desramificadora UDPGlc pirofosforilasa UDPGlc pirofosforilasa Pirofosfatasa PPi Pi i ATP (Unidades 1 → 4 glucosilo) Glucosa x PPi Glucógeno fosforilasa Glucano transferasa Enzima desramificadora * Glucosa libre proveniente de la enzima desramificadora 27/11/09 14:10:23 CaPítUlo 19 Metabolismo del glucógeno 159 Enlace 1→ 4-glucosídico Residuo glucosa no marcado Enlace 1→ 6-glucosídico Residuo glucosa 14C-marcado 14 C-glucosa añadida Nuevo enlace 1→6 Glucógeno sintasa Enzima ramificadora actividades separadas de una proteína única que tiene dos sitios catalíticos. Entonces puede proceder acción adicional de fosforilasa. La acción combinada de la fosforilasa y estas otras enzimas lleva a la desintegración completa del glucógeno. La reacción catalizada por la fosfoglucomutasa es reversible, de modo que puede formarse glucosa 6-fosfato a partir de glucosa 1-fosfato. En hígado (y riñones), no así en el músculo, la glucosa 6-fosfatasa hidroliza a la glucosa 6-fosfato, lo que da glucosa que se exporta, y lleva a un incremento de la concentración de glucosa en la sangre. La glucosa 6-fosfatasa está en la luz del retículo endoplásmico liso, y los defectos genéticos del transportador de glucosa 6-fosfato pueden causar una variante de la enfermedad por depósito de glucógeno tipo I (cuadro 19-2). EL AMP CÍCLICO INTEGRA LA REGULACIÓN DE LA GLUCOGENÓLISIS Y LA GLUCOGÉNESIS Las principales enzimas que controlan el metabolismo del glucógeno —glucógeno fosforilasa y glucógeno sintasa— están reguladas Fosforilasa Fosforilasa Figura 19-4 19 Bender.indd 159 Glucano transferasa Enzima desramificadora Enzima Glucano Residuos glucosa unidos por desramificadora transferasa enlaces 1 → 4-glucosídicos Residuos glucosa unidos por enlaces 1 → 4-glucosídicos 6-glucosídicos Residuos glucosa unidos por enlaces 1 → 6-glucosídicos Pasos en la glucogenólisis. Figura 19-3 La biosíntesis de glucógeno. El mecanismo de ramificación según se revela por alimentación con glucosa 14C-marcada, y examen del glucógeno hepático a intervalos. por mecanismos alostéricos y modificación covalente por fosforilación y desfosforilación reversibles de proteína enzima en respuesta a la acción hormonal (cap. 9). La fosforilación está aumentada en respuesta a monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) (fig. 19-5) formado a partir del ATP mediante la adenilil ciclasa en la superficie interna de membranas celulares en respuesta a hormonas como epinefrina (adrenalina), norepinefrina (noradrenalina) y glucagon. La fosfodiesterasa hidroliza al cAMP y así termina la acción de hormona; en el hígado la insulina aumenta la actividad de la fosfodiesterasa. El control de la fosfodiesterasa difiere entre el hígado y el músculo La función del glucógeno en el hígado es proporcionar glucosa libre para exportación a fin de mantener la concentración de glucosa en la sangre, y en el músculo es proporcionar una fuente de glucosa 6-fosfato para glucólisis en respuesta a la necesidad de ATP para la contracción muscular. En ambos tejidos, la enzima es activada por fosforilación catalizada por la fosforilasa cinasa (para dar fosforilasa a) y desactivada por desfosforilación catalizada por la fosfoproteína fosfatasa (para dar fosforilasa b), en respuesta a señales hormonales y de otros tipos. Hay anulación instantánea de este control hormonal. La fosforilasa a activa en ambos tejidos es inhibida de manera alostérica por el ATP y la glucosa 6-fosfato; en el hígado, no así en el músculo, la glucosa libre también es un inhibidor. La fosforilasa muscular difiere de la isoenzima hepática por cuanto tiene un sitio de unión para 5ʹAMP, que actúa como un activador alostérico de la forma b desfosforilada (inactiva) de la enzima. El 5ʹAMP actúa como una potente señal del estado de energía de la célula muscular; se forma a medida que la concentración de ADP se incrementa (lo que indica la necesidad de metabolismo de sustrato aumentado para permitir la formación de ATP), como resultado de la reacción de adenilato cinasa: 2 × ADP ↔ ATP + 5ʹAMP. El caMP activa la fosforilasa La fosforilasa cinasa es activada en respuesta al cAMP (fig. 19-6). El incremento de la concentración de cAMP activa a la proteína cinasa dependiente de caMP, que cataliza la fosforilación por ATP de fosforilasa cinasa b inactiva hacia fosforilasa cinasa a activa, que, a su vez, fosforila a la fosforilasa b hacia fosforilasa a. En el hígado, el cAMP se forma en respuesta a glucagon, que se secreta en respuesta 27/11/09 14:10:26 160 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Cuadro 19-2 Enfermedades por depósito de glucógeno Tipo Nombre 0 — deficiencia de enzima datos clínicos Glucógeno sintasa Hipoglucemia; hipercetonemia; muerte temprana Glucosa 6-fosfatasa Acumulación de glucógeno en hígado y en células de túbulos renales; hipoglucemia; acidemia láctica; cetosis; hiperlipidemia Transportador de glucosa 6-fosfato en el retículo endoplásmico Igual que el tipo Ia; neutropenia y función de neutrófilos alterada, que lleva a infecciones recurrentes Enfermedad de Pompe α1 → 4 y α1 → 6 glucosidasa (maltasa ácida) lisosómica Acumulación de glucógeno en lisosomas: variante de inicio juvenil, hipotonía muscular, muerte por insuficiencia cardiaca hacia los dos años de edad; variante de inicio en el adulto, distrofia muscular IIIa Dextrinosis límite, enfermedad de Forbe o de Cori Enzima desramificadora en hígado y músculo Hipoglucemia en ayuno, hepatomegalia durante la lactancia; acumulación de polisacárido ramificado característico (dextrina límite); debilidad muscular IIIb Dextrinosis límite Enzima desramificadora en hígado Igual que el tipo IIIa, pero sin debilidad muscular IV Amilopectinosis, enfermedad de Andersen Enzima ramificadora Hepatosplenomegalia; acumulación de polisacárido con pocos puntos de ramificación; muerte por insuficiencia cardiaca o hepática antes de los 5 años de edad V Deficiencia de mielofosforilasa, síndrome de McArdle Fosforilasa muscular Poca tolerancia al ejercicio; glucógeno muscular anormalmente alto (2.5 a 4%); lactato en sangre muy bajo después de hacer ejercicio VI Enfermedad de Hers Fosforilasa hepática Hepatomegalia; acumulación de glucógeno en hígado; hipoglucemia leve, pronóstico en general bueno VII Enfermedad de Tarui Fosfofructocinasa 1 muscular y de eritrocitos Poca tolerancia al ejercicio; glucógeno muscular anormalmente alto (2.5 a 4%); lactato en sangre muy bajo después de hacer ejercicio; también anemia hemolítica VIII Fosforilasa cinasa hepática Hepatomegalia; acumulación de glucógeno en hígado; hipoglucemia leve, por lo general buen pronóstico IX Fosforilasa cinasa hepática y muscular Hepatomegalia; acumulación de glucógeno en hígado y músculo; hipoglucemia leve; pronóstico en general bueno X Proteína cinasa A dependiente de cAMP Hepatomegalia; acumulación de glucógeno en hígado Ia Enfermedad de von Gierke Ib II — NH2 N N N N 5′ CH2 O O – O P O H H H O Figura 19-5 H 3′ OH Ácido 3’,5’-adenílico (AMP cíclico; cAMP). a disminución de la glucosa en la sangre. El músculo es insensible al glucagon; en el músculo, la señal para el aumento de la formación de cAMP es la acción de la norepinefrina, que se secreta en respuesta a miedo o susto, cuando hay necesidad de incremento de la glucogenólisis para permitir actividad muscular rápida. 19 Bender.indd 160 El Ca2+ sincroniza la activación de la fosforilasa con la contracción muscular La glucogenólisis en el músculo aumenta varios cientos de veces al principio de la contracción; la misma señal (aumento de la concentración de ion Ca2+ citosólico) es la causa del inicio tanto de contracción como de glucogenólisis. La fosforilasa cinasa muscular, que activa a la glucógeno fosforilasa, es un tetrámero de cuatro subunidades, α, β, γ y δ. Las subunidades α y β contienen residuos serina que son fosforilados por la proteína cinasa dependiente de cAMP. La subunidad δ es idéntica a la proteína de unión a Ca2+ calmodulina (cap. 42), y se une a cuatro Ca2+. La unión de Ca2+ activa el sitio catalítico de la subunidad γ incluso mientras la enzima se encuentra en estado b desfosforilado; la forma fosforilada a sólo está por completo activada en presencia de concentraciones altas de Ca2+. La glucogenólisis en el hígado puede ser independiente de caMP En el hígado, hay activación independiente de cAMP de la glucogenólisis en respuesta a estimulación de receptores α1 adrenérgicos por epinefrina y norepinefrina. Esto comprende la movilización de Ca2+ hacia el citosol, seguida por estimulación de una fosforilasa 27/11/09 14:10:27 19 Bender.indd 161 Inhibidor-1-fosfato (activo) + + Proteína cinasa dependiente de cAMP inactiva ATP + Adenilil ciclasa activa Pi Fosforilasa cinasa b (inactiva) ATP + cAMP – Proteína fosfatasa-1 –Ca2+ Ca2+ Componente calmodulina de la fosforilasa cinasa ADP 5′-AMP H2O Fosforilasa cinasa a (activa) Proteína cinasa dependiente de cAMP activa Fosfodiesterasa ATP ADP Pi – Glucógeno(n+1) + Fosforilasa b (inactiva) G6P Fosforilasa a (activa) Insulina Pi H2O – Proteína fosfatasa-1 Glucógeno(n) + Glucosa 1-fosfato Figura 19-6 Control de la fosforilasa en el músculo. La secuencia de reacciones dispuesta como una cascada permite la amplificación de la señal hormonal en cada paso (n, número de residuos glucosa; G6P, glucosa 6-fosfato). ADP ATP Inhibidor-1 (inactivo) Adenilil ciclasa inactiva Receptor β Epinefrina CaPítUlo 19 Metabolismo del glucógeno 161 27/11/09 14:10:28 162 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos cinasa sensible a Ca2+/calmodulina. La glucogenólisis independiente de cAMP también es activada por vasopresina, oxitocina y angiotensina II que actúan por medio de la vía del calcio o del fosfatidilinositol bisfosfato (fig. 42-10). La proteína fosfatasa-1 desactiva a la fosforilasa La proteína fosfatasa-1 desfosforila y desactiva tanto a la fosforilasa a como la fosforilasa cinasa a. La proteína fosfatasa-1 es inhibida por una proteína, inhibidor-1, que sólo se activa después de que la proteína cinasa dependiente de cAMP la ha fosforilado. De este modo, el cAMP controla tanto la activación como la desactivación de la fosforilasa (fig. 19-6). La insulina refuerza este efecto al inhibir la activación de la fosforilasa b. Hace esto de manera indirecta al aumentar la captación de glucosa, lo que lleva a incremento de la formación de glucosa 6-fosfato, que es un inhibidor de la fosforilasa cinasa. Las actividades de la glucógeno sintasa y de la fosforilasa están reguladas de manera recíproca Al igual que la fosforilasa, la glucógeno sintasa existe en estados tanto fosforilado como no fosforilado, y el efecto de la fosforilación es el inverso de lo que se observa en la fosforilasa (fig. 19-7). La glucógeno sintasa a activa es desfosforilada, y la glucógeno sintasa b inactiva es fosforilada. Seis proteína cinasas actúan sobre la glucógeno sintasa. Dos son dependientes de Ca2+/calmodulina (una de éstas es la fosforilasa cinasa). Otra cinasa es la proteína cinasa dependiente de cAMP, que permite que la acción hormonal mediada por cAMP inhiba la síntesis de glucógeno de manera sincrónica con la activación de la glucogenólisis. La insulina también promueve la glucogénesis en el músculo al mismo tiempo que inhibe la glucogenólisis al aumentar la concentración de glucosa 6-fosfato, que estimula la desfosforilación y activación de la glucógeno sintasa. La proteína fosfatasa-1, que está bajo el control de la proteína cinasa dependiente de cAMP, desfosforila a la glucógeno sintasa b. UN EQUILIBRIO DE LAS ACTIVIDADES ENTRE LA GLUCÓGENO SINTASA Y LA FOSFORILASA REGULA EL METABOLISMO DEL GLUCÓGENO Al mismo tiempo que la fosforilasa es activada por un aumento de la concentración de cAMP (por medio de la fosforilasa cinasa), la glucógeno sintasa es convertida en la forma inactiva; ambos efectos están mediados por la proteína cinasa dependiente de caMP (fig. Epinefrina Receptor β + Adenilil ciclasa inactiva Adenilil ciclasa activa + Fosfodiesterasa ATP cAMP 5′-AMP Fosforilasa cinasa + Proteína cinasa dependiente de cAMP inactiva Inhibidor-1 (inactivo) Ca2+ + Proteína cinasa dependiente de cAMP activa ATP Glucógeno(n+1) GSK ADP Proteína cinasa dependiente de calmodulina ATP + Glucógeno sintasa b (inactiva) Glucógeno sintasa a (activa) + Ca2+ Insulina G6P + ADP + Proteína fosfatasa H2O Inhibidor-1-fosfato (activo) Pi – Glucógeno(n) + UDPG Proteína fosfatasa-1 Figura 19-7 Control de la glucógeno sintasa en el músculo (n, número de residuos glucosa; GSK, glucógeno sintasa cinasa; G6P, glucosa 6-fosfato). 19 Bender.indd 162 27/11/09 14:10:29 CaPítUlo 19 Epinefrina (hígado, músculo) Glucagon (hígado) Metabolismo del glucógeno 163 Fosfodiesterasa cAMP 5′-AMP Inhibidor-1 fosfato Inhibidor-1 Glucógeno sintasa b Fosforilasa cinasa b Proteína cinasa dependiente de cAMP Proteína fosfatasa-1 Proteína fosfatasa-1 Glucógeno sintasa a Fosforilasa cinasa a Glucógeno UDPGIc Ciclo del glucógeno Fosforilasa b Fosforilasa a Glucosa 1-fosfato Proteína fosfatasa-1 Glucosa (hígado) Glucosa Lactato (músculo) Figura 19-8 Control coordinado de la glucogenólisis y la glucogénesis mediante la proteína cinasa dependiente de cAMP. Las reacciones que llevan a glucogenólisis como resultado de un aumento de las concentraciones de cAMP se muestran con flechas gruesas, y las que son inhibidas por la activación de la proteína fosfatasa-1, con flechas discontinuas. Sucede lo inverso cuando las concentraciones de cAMP disminuyen como resultado de la actividad de fosfodiesterasa, lo que lleva a glucogénesis. 19-8). De este modo, la inhibición de la glucogenólisis aumenta la glucogénesis neta, y la inhibición de la glucogénesis aumenta la glucogenólisis neta. Asimismo, la desfosforilación de la fosforilasa a, fosforilasa cinasa y glucógeno sintasa b es catalizada por una enzima única con especificidad amplia, la proteína fosfatasa-1. A su vez, esta última es inhibida por la proteína cinasa dependiente de cAMP por medio del inhibidor-1. De este modo, la glucogenólisis puede terminar, y la glucogénesis puede ser estimulada, o viceversa, de manera sincrónica, porque ambos procesos son dependientes de la actividad de la proteína cinasa dependiente de cAMP. Cinasas y fosfatasas separadas pueden fosforilar de manera reversible en más de un sitio tanto la fosforilasa cinasa como la glucógeno sintasa. Estas fosforilaciones secundarias modifican la sensibilidad de los sitios primarios a la fosforilación y desfosforilación (fosforilación de múltiples sitios). Asimismo, permiten que la insulina, por medio de un incremento de la glucosa 6-fosfato, tenga efectos que actúan de manera recíproca a los del cAMP (figs. 19-6 y 19-7). 19 Bender.indd 163 ASPECTOS CLÍNICOS Las enfermedades por depósito de glucógeno son hereditarias “Enfermedad por depósito de glucógeno” es un término genérico empleado para describir un grupo de trastornos hereditarios caracterizados por depósito de un tipo o cantidad anormal de glucógeno en los tejidos, o fracaso de la movilización de glucógeno. Las principales enfermedades se resumen en el cuadro 19-2. RESUMEN ■ ■ El glucógeno representa el principal carbohidrato de almacenamiento en el cuerpo, sobre todo en el hígado y el músculo. En el hígado, su importante función es proporcionar glucosa para tejidos extrahepáticos. En el músculo, sirve sobre todo como una 27/11/09 14:10:30 164 ■ ■ ■ SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos fuente fácil de combustible metabólico para uso en el músculo. El músculo carece de glucosa 6-fosfatasa y no puede liberar la glucosa libre a partir del glucógeno. El glucógeno se sintetiza a partir de la glucosa mediante la vía de la glucogénesis. Se desintegra mediante una vía separada, la glucogenólisis. El cAMP integra la regulación de la glucogenólisis y la glucogénesis mediante promover la activación de la fosforilasa y la inhibición de la glucógeno sintasa en forma simultánea. La insulina actúa de manera recíproca al inhibir la glucogenólisis y estimular la glucogénesis. Las deficiencias hereditarias de las enzimas del metabolismo del glucógeno tanto en el hígado como en el músculo causan enfermedades por depósito de glucógeno. REFERENCIAS Bollen M, Keppens S, Stalmans W: Specific features of glycogen metabolism in the liver. Biochem J 1998;336:19. Ferrer JC, Favre C, Gomis RR, Fernandez-Novell JM, Garcia-Rocha M, de la Iglesia N, Cid E, Guinovart JJ: Control of glycogen deposition. FEBS Lett 2003;546:127. 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Los principales sustratos son los aminoácidos glucogénicos (cap. 29), el lactato, el glicerol y el propionato. El hígado y los riñones son los principales tejidos gluconeogénicos, pero el intestino delgado también puede ser una fuente de glucosa en el estado de ayuno. La gluconeogénesis satisface las necesidades de glucosa del cuerpo cuando los carbohidratos disponibles a partir de la dieta o de las reservas de glucógeno son insuficientes. Se requiere un aporte de glucosa en especial para el sistema nervioso y los eritrocitos. La falla en la gluconeogénesis por lo general es mortal. La hipoglucemia causa disfunción cerebral, lo que puede conducir a coma y muerte. La glucosa también tiene importancia en el mantenimiento de la concentración de intermediarios del ciclo del ácido cítrico aun cuando los ácidos grasos son la principal fuente de acetil-CoA en los tejidos. Además, la gluconeogénesis elimina lactato producido por los músculos y los eritrocitos, y glicerol producido por el tejido adiposo. En rumiantes, el propionato es un producto del metabolismo de los carbohidratos en el rumen, y es un sustrato importante para la gluconeogénesis. LA GLUCONEOGÉNESIS INVOLUCRA GLUCÓLISIS, EL CICLO DEL ÁCIDO CÍTRICO, MÁS ALGUNAS REACCIONES ESPECIALES Las barreras termodinámicas impiden una reversión simple de la glucólisis Tres reacciones que no están en equilibrio en la glucólisis (cap. 18), catalizadas por hexocinasa, fosfofructocinasa y piruvato cinasa, impiden la reversión simple de la glucólisis para la síntesis de glucosa (fig. 20-1); tales reacciones se esquivan de las siguientes maneras. Piruvato y fosfoenolpiruvato La reversión de la reacción catalizada por la piruvato cinasa en la glucólisis involucra dos reacciones endotérmicas. La piruvato carboxilasa mitocondrial cataliza la carboxilación de piruvato hacia oxaloacetato, una reacción que necesita ATP en la cual la vitamina biotina es la coenzima. La biotina se une al CO2 proveniente de bicarbonato como carboxibiotina antes de la unión del CO2 al piruvato (fig. 44-17). Una segunda enzima, la fosfoenolpiruvato car- A P í t u l o boxicinasa, cataliza la descarboxilación y fosforilación de oxaloacetato hacia fosfoenolpiruvato usando GTP como el donador de fosfato. En hígado y riñones, la reacción de la succinato tiocinasa en el ciclo del ácido cítrico (cap. 17) produce GTP (en lugar de ATP como en otros tejidos), y este GTP se usa para la reacción de fosfoenolpiruvato carboxicinasa, lo que proporciona un enlace entre la actividad del ciclo del ácido cítrico y la gluconeogénesis, con el fin de prevenir la eliminación excesiva de oxaloacetato para gluconeogénesis, lo que alteraría la actividad del ciclo del ácido cítrico. Fructosa 1,6-bisfosfato y fructosa 6-fosfato La fructosa 1,6-bisfosfatasa cataliza la conversión de fructosa 1,6-bisfosfato en fructosa 6-fosfato, para la reversión de la glucólisis. Su presencia determina si un tejido tiene la capacidad para sintetizar glucosa (o glucógeno) no sólo a partir de piruvato, sino también a partir de triosas fosfato. Se encuentra presente en el hígado, los riñones y el músculo estriado, pero probablemente falta en el corazón y el músculo liso. Glucosa 6-fosfato y glucosa La glucosa 6-fosfatasa cataliza la conversión de glucosa 6-fosfato en glucosa. Dicha enzima está presente en hígado y riñones, pero falta en el músculo y el tejido adiposo, que, en consecuencia, no pueden exportar glucosa hacia el torrente sanguíneo. Glucosa 1-fosfato y glucógeno La fosforilasa cataliza la desintegración de glucógeno hacia glucosa 1-fosfato. La síntesis de glucógeno comprende una vía diferente por medio de la uridina difosfato glucosa y la glucógeno sintasa (fig. 19-1). En la figura 20-1 se muestran las relaciones entre gluconeogénesis y la vía glucolítica. Luego de transaminación o desaminación, los aminoácidos glucogénicos dan piruvato o intermediarios del ciclo del ácido cítrico. Por ende, las reacciones antes descritas pueden explicar la conversión tanto de lactato como de aminoácidos glucogénicos en glucosa o glucógeno. El propionato es un precursor importante de la glucosa en rumiantes; entra en la gluconeogénesis por medio del ciclo del ácido cítrico. Después de su esterificación con CoA, la propionil-CoA es carboxilada hacia d-metilmalonil-CoA, catalizado por la propionilCoA carboxilasa, una enzima dependiente de biotina (fig. 20-2). La metilmalonil-CoA racemasa cataliza la conversión de d-metilmalonil-CoA en l-metilmalonil-CoA, que luego pasa por isomerización hacia succinil-CoA, catalizada por la metilmalonil-CoA mu165 20 Bender.indd 165 27/11/09 14:11:29 166 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Pi Glucosa ATP Glucocinasa Glucosa 6-fosfatasa H2 O Glucosa 6-fosfato Pi Fructosa 6-fosfato Hexocinasa ADP Glucógeno AMP Fructosa 1,6bisfosfatasa AMP ATP Fosfofructocinasa Fructosa 1,6bisfosfato H2 O Fructosa 2,6 bisfosfato ADP Fructosa 2,6-bisfosfato Gliceraldehído 3-fosfato NAD + Dihidroxiacetona fosfato Pi NADH + H+ Glicerol 3-fosfato deshidrogenasa NADH + H + cAMP (glucagon) cAMP (glucagon) NAD+ Glicerol 3-fosfato 1,3-Bisfosfoglicerato ADP ADP Glicerol cinasa ATP ATP 3-Fosfoglicerato Glicerol 2-Fosfoglicerato cAMP (glucagon) Fosfoenolpiruvato ADP Piruvato cinasa GDP + CO2 Fosfoenolpiruvato carboxicinasa NADH + H + l so to Ci ria d on ito M Ácidos grasos Citrato NAD+ Piruvato deshidrogenasa Piruvato c NADH + H + Lactato Piruvato GTP Oxaloacetato Alanina ATP Acetil-CoA CO2 + ATP Mg 2 + NAD + Piruvato carboxilasa ADP + Pi NADH + H + Oxaloacetato NAD + Malato Malato Citrato Ciclo del ácido cítrico α- Cetoglutarato Fumarato Succinil-CoA Propionato FiGura 20-1 Principales vías y regulación de la gluconeogénesis y glucólisis en el hígado. Los puntos de entrada de aminoácidos glucogénicos luego de la transaminación están indicados por flechas que se extienden desde círculos (véase también la fig. 17-4). Las enzimas gluconeogénicas clave están encerradas en cuadros con doble marco. El ATP requerido para la gluconeogénesis se obtiene mediante la oxidación de ácidos grasos. El propionato sólo tiene importancia cuantitativa en rumiantes. Las flechas onduladas significan efectos alostéricos; las flechas discontinuas, modificación covalente por fosforilación reversible. Las altas concentraciones de alanina actúan como una “señal gluconeogénica” al inhibir la glucólisis en el paso de la piruvato cinasa. tasa. En no rumiantes, incluso seres humanos, el propionato surge a partir de la β-oxidación de ácidos grasos de cadena impar que se encuentran en lípidos de rumiante (cap. 22), así como la oxidación 20 Bender.indd 166 de isoleucina y de la cadena lateral de colesterol, y es un sustrato (relativamente menor) para la gluconeogénesis. La metilmalonilCoA mutasa es una enzima dependiente de vitamina B12, y en su 27/11/09 14:11:29 CApítulo 20 167 Gluconeogénesis y control de la glucosa en sangre deficiencia se excreta el ácido metilmalónico en la orina (aciduria metilmalónica). El glicerol se libera a partir del tejido adiposo como resultado de lipólisis de los triacilgliceroles de las lipoproteínas en el estado posprandial; puede usarse para reesterificación de ácidos grasos libres como triacilglicerol en el tejido adiposo o el hígado, o puede ser un sustrato para la gluconeogénesis en el hígado. En el estado de ayuno el glicerol liberado a partir de la lipólisis del triacilglicerol del tejido adiposo se usa únicamente como un sustrato para la gluconeogénesis en el hígado y los riñones. comprendidas en la utilización de glucosa (es decir, las de la glucólisis y la lipogénesis) se tornan más activas cuando hay superfluidez de glucosa, y en estas condiciones las enzimas de la gluconeogénesis tienen actividad baja. La insulina, misma que es secretada en respuesta a glucosa sanguínea aumentada, incrementa la síntesis de las enzimas clave en la glucólisis. También antagoniza el efecto de los glucocorticoides y del aumento del cAMP por glucagon, lo que induce la síntesis de las enzimas clave de la gluconeogénesis. DADO QUE LA GLUCÓLISIS Y LA GLUCONEOGÉNESIS COMPARTEN LA MISMA VÍA PERO EN DIRECCIONES OPUESTAS, ES NECESARIO QUE SE REGULEN DE MODO RECÍPROCO El glucagon y la epinefrina, hormonas de las cuales depende una disminución de la glucosa en la sangre, inhiben la glucólisis y estimulan la gluconeogénesis en el hígado al aumentar la concentración de cAMP. Esto, a su vez, activa a la proteína cinasa dependiente de cAMP, lo que da pie a la fosforilación y desactivación de la piruvato cinasa. Asimismo, afectan las cifras de la fructosa 2,6-bisfosfato y, por consiguiente, la glucólisis y la gluconeogénesis (véase más adelante). La modificación covalente por medio de fosforilación reversible es rápida Los cambios de la disponibilidad de sustratos son la causa de la mayor parte de las modificaciones del metabolismo al actuar de manera directa o indirecta por medio de variaciones de la secreción de hormona. Tres mecanismos se encargan de regular la actividad de enzimas vinculadas con el metabolismo de carbohidratos: 1) cambios en la velocidad de síntesis de enzima; 2) modificación covalente por medio de fosforilación reversible, y 3) efectos alostéricos. La modificación alostérica es instantánea En la gluconeogénesis, la piruvato carboxilasa, que cataliza la síntesis de oxaloacetato a partir de piruvato, necesita acetil-CoA como un activador alostérico. La adición de acetil-CoA suscita un cambio de la estructura terciaria de la proteína, lo que origina decremento de la Km para bicarbonato. Esto significa que a medida que se forma acetil-CoA a partir de piruvato, asegura de manera automática el suministro de oxaloacetato y, por tanto, su oxidación adicional en el ciclo del ácido cítrico, al activar a la piruvato carboxilasa. La activación de esta última, y la inhibición recíproca de piruvato deshidrogenasa por la acetil-CoA derivada de la oxidación de ácidos grasos, explican la acción de la oxidación de ácidos grasos en la limitación de la oxidación de piruvato y la estimulación de la gluconeogénesis. La relación recíproca entre estas dos enzimas altera el La inducción y represión de enzimas clave requiere varias horas El cuadro 20-1 lista los cambios de la actividad enzimática en el hígado que ocurren en diversos estados metabólicos. Las enzimas involucradas catalizan reacciones no en equilibrio (irreversibles desde el punto de vista fisiológico). Los efectos por lo común se refuerzan porque la actividad de las enzimas que catalizan las reacciones en la dirección opuesta varía de modo recíproco (fig. 20-1). Las enzimas CH3 CoA CH2 COO– Propionato SH Acil-CoA sintetasa Mg2+ ATP AMP + PPi CO2 + H2O CH3 CH3 H CH2 CO Propionil-CoA carboxilasa S CoA Propionil-CoA Biotina ATP COO– C CO ADP + Pi S CoA D-Metil- malonil-CoA Metilmalonil-CoA racemasa COO– Intermediarios del ciclo del ácido cítrico Metilmalonil-CoA isomerasa CH2 CH2 CO Coenzima B12 S CoA Succinil-CoA FiGura 20-2 20 Bender.indd 167 CH3 – OOC C CO H S CoA L-Metil malonil-CoA Metabolismo del propionato. 27/11/09 14:11:30 168 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Cuadro 20-1 Enzimas reguladoras y adaptativas relacionadas con el metabolismo de carbohidratos actividad en alimentación con carbohidratos ayuno y diabetes inductor represor activador inhibidor Glucogenólisis, glucólisis y oxidación de piruvato Glucógeno sintasa ↑ ↓ Insulina, glucosa 6-fosfato Hexocinasa Glucagon Glucosa 6-fosfato Glucocinasa ↑ ↓ Insulina Glucagon Fosfofructocinasa-1 ↑ ↓ Insulina Glucagon 5’AMP, fructosa 6-fosfato, fructosa 2,6-bisfosfato, Pi Citrato, ATP, glucagon Piruvato cinasa ↑ ↓ Insulina, fructosa Glucagon Fructosa 1,6-bisfosfato, insulina ATP, alanina, glucagon, norepinefrina Piruvato deshidrogenasa ↑ ↓ CoA, NAD+, insulina, ADP, piruvato Acetil CoA, NADH, ATP (ácidos grasos, cuerpos cetónicos) Piruvato carboxilasa ↓ ↑ Glucocorticoides, glucagon, epinefrina Insulina Acetil CoA ADP Fosfoenolpiruvato carboxicinasa ↓ ↑ Glucocorticoides, glucagon, epinefrina Insulina ¿Glucagon? Glucosa 6-fosfatasa ↓ ↑ Glucocorticoides, glucagon, epinefrina Insulina Gluconeogénesis destino metabólico del piruvato a medida que el tejido cambia desde la oxidación de carbohidratos (glucólisis) hacia gluconeogénesis en el transcurso de la transición desde el estado posprandial hacia el de ayuno (fig. 20-1). Una función importante de la oxidación de ácidos grasos en la promoción de la gluconeogénesis es suministrar el ATP requerido. La fosfofructocinasa (fosfofructocinasa-1) ocupa una posición clave en la regulación de la glucólisis, y queda sujeta también a control por retroalimentación. Es inhibida por citrato y por concentraciones intracelulares normales de ATP, y activada por el 5ʹAMP. Este último actúa como un indicador del estado energético de la célula. La presencia de adenilil cinasa en el hígado y muchos otros tejidos permite el equilibrio rápido de la reacción 2ADP ↔ ATP + 5’AMP Así, cuando se usa ATP en procesos que requieren energía, lo que da por resultado formación de ADP, el [AMP] aumenta. Una disminución hasta cierto punto pequeña del [ATP] causa un incremento de varias veces del [AMP], de modo que este último actúa como un amplificador metabólico de un cambio pequeño de [ATP] y, en consecuencia, una señal sensible del estado energético de la célula. De esta manera, la actividad de la fosfofructocinasa-1 está regulada en respuesta al estado energético de la célula para controlar la cantidad 20 Bender.indd 168 de carbohidrato que está pasando por glucólisis antes de su entrada hacia el ciclo del ácido cítrico. De modo simultáneo, el AMP activa a la fosforilasa, lo que aumenta la glucogenólisis. Una consecuencia de la inhibición de la fosfofructocinasa-1 es una acumulación de glucosa 6-fosfato que, a su vez, inhibe la captación adicional de glucosa en tejidos extrahepáticos mediante inhibición de la hexocinasa µ. La fructosa 2,6-bisfosfato desempeña una función singular en la regulación de la glucólisis y la gluconeogénesis en el hígado La fructosa 2,6-bisfosfato es el más potente activador alostérico positivo de la fosfofructocinasa-1, e inhibidor de la fructosa 1,6-bisfosfatasa en el hígado. Alivia la inhibición de la fosfofructocinasa-1 por el ATP, y aumenta la afinidad por la glucosa 6-fosfato. Inhibe la fructosa 1,6-bisfosfatasa al incrementar la Km para la fructosa 1,6-bisfosfato. Sus cifras están bajo control tanto de sustrato (alostérico) como hormonal (modificación covalente) (fig. 20-3). La fructosa 2,6-bisfosfato se forma por fosforilación de la fructosa 6-fosfato por la fosfofructocinasa-2. La misma proteína enzima también se encarga de su degradación, porque tiene actividad de fructosa 2,6-bisfosfatasa. Esta enzima bifuncional tiene el control 27/11/09 14:11:31 CApítulo 20 alostérico de la fructosa 6-fosfato, que estimula a la cinasa e inhibe a la fosfatasa. Por ende, cuando hay aporte abundante de glucosa, aumenta la concentración de fructosa 2,6-bisfosfato, lo que estimula la glucólisis al activar a la fosfofructocinasa-1 e inhibir a la fructosa 1,6-bisfosfatasa. En estado de ayuno, el glucagon estimula la producción de cAMP, lo que activa a la proteína cinasa dependiente de cAMP que, a su vez, desactiva a la fosfofructocinasa-2 y activa a la fructosa 2,6-bisfosfatasa por medio de fosforilación. Por consiguiente, la gluconeogénesis es estimulada por un decremento de la concentración de fructosa 2,6-bisfosfato, lo que inactiva a la fosfofructocinasa-1 y elimina la inhibición de fructosa 1,6-bisfosfatasa. Los ciclos de sustrato (inútiles) permiten ajuste fino y respuesta rápida Los puntos de control en la glucólisis y el metabolismo del glucógeno incluyen un ciclo de fosforilación y desfosforilación catalizado por la glucocinasa y la glucosa 6-fosfatasa; la fosfofructocinasa-1 y Fructosa 6-fosfato Glucagon cAMP Proteína cinasa dependiente de cAMP ADP ATP P F-2,6-pasa inactiva PFK-2 activa H2O Glucólisis Gluconeogénesis F-2,6-pasa activa PFK-2 inactiva Pi Proteína fosfatasa-2 ADP Citrato Fructosa 2,6-bisfosfato ATP Pi F-1,6-pasa PFK-1 H2O ADP Fructosa 1,6-bisfosfato Piruvato FiGura 20-3 Control de la glucólisis y la gluconeogénesis en el hígado por medio de la fructosa 2,6-bisfosfato y la enzima bifuncional PFK-2/F-2,6-Pasa (6-fosfofructo-2-cinasa/fructosa 2,6-bisfosfatasa). (PKF-1, fosfofructocinasa-1 [6-fosfofructo-1-cinasa]; F-1,6-Pasa, fructosa 1,6-bisfosfatasa.) Las flechas onduladas indican efectos alostéricos. 20 Bender.indd 169 169 la fructosa 1,6-bisfosfatasa; la piruvato cinasa, piruvato carboxilasa y fosfoenolpiruvato carboxicinasa, y la glucógeno sintasa y fosforilasa. Parecería obvio que estas enzimas que se oponen están reguladas de tal manera que cuando las que participan en la glucólisis están activas, las que lo hacen en la gluconeogénesis están inactivas, porque de otro modo estarían pasando por ciclos entre intermediarios fosforilados y no fosforilados, con hidrólisis neta de ATP. Aun cuando esto es así, en el músculo tanto la fosfofructocinasa como la fructosa 1,6-bisfosfatasa tienen cierta actividad en todo momento, de manera que en realidad hay cierta medida de paso por ciclos de desecho (inútiles). Esto permite el aumento muy rápido del índice de glucólisis necesario para la contracción muscular. En reposo el índice de actividad de fosfofructocinasa es alrededor de 10 veces más alto que el de la fructosa 1,6-bisfosfatasa; en anticipación de contracción muscular, la actividad de ambas enzimas aumenta, la de fructosa 1,6-bisfosfatasa 10 veces más que la de la fosfofructocinasa, lo que mantiene el mismo índice neto de glucólisis. Al principio de la contracción muscular, la actividad de la fosfofructocinasa aumenta más, y hay decremento de la de fructosa 1,6-bisfosfatasa, lo que incrementa la velocidad neta de glucólisis (y, por tanto, la formación de ATP) hasta 1 000 veces. LA CONCENTRACIÓN SANGUÍNEA DE GLUCOSA ESTÁ REGULADA DENTRO DE LÍMITES ESTRECHOS Glucógeno glucosa Pi Gluconeogénesis y control de la glucosa en sangre En el estado posterior a la absorción, las cifras de glucosa en la sangre en casi todos los mamíferos se mantienen entre 4.5 y 5.5 mmol/L. Después de la ingestión de una comida de carbohidrato, llegan a aumentar hasta 6.5 a 7.2 mmol/L, y en la inanición, pueden aminorarse hasta 3.3 a 3.9 mmol/L. Una disminución repentina de la glucosa en la sangre (p. ej., en respuesta a sobredosis de insulina) causa convulsiones, debido a la dependencia del cerebro de un aporte de glucosa. Sin embargo, es posible que se toleren concentraciones mucho menores si la hipoglucemia sobreviene con suficiente lentitud como para que haya adaptación. La concentración de glucosa en la sangre en aves es bastante más alta (14.0 mmol/L), y en rumiantes mucho más baja (alrededor de 2.2 mmol/L en ovejas, y 3.3 mmol/L en el ganado vacuno). Estas concentraciones normales más bajas parecen vincularse con el hecho de que los rumiantes fermentan casi todo el carbohidrato de la dieta hacia ácidos grasos de cadena corta, y éstos remplazan en su mayor parte a la glucosa como el principal combustible metabólico de los tejidos en el estado posprandial. LA GLUCOSA EN SANGRE PROVIENE DE LA DIETA, LA GLUCONEOGÉNESIS Y LA GLUCOGENÓLISIS La digestión de los carbohidratos de la dieta produce glucosa, galactosa y fructosa que se transportan hacia el hígado mediante la vena porta hepática. La galactosa y la fructosa se convierten con facilidad en glucosa en hígado (cap. 21). La glucosa se forma a partir de dos grupos de compuestos que pasan por gluconeogénesis (figs. 17-4 y 20-1): 1) los que comprenden una conversión neta directa en glucosa, incluso casi todos los 27/11/09 14:11:32 170 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos aminoácidos y el propionato, y 2) los que son los productos del metabolismo de la glucosa en los tejidos. De este modo, el lactato, formado por medio de glucólisis en el músculo estriado y los eritrocitos, se transporta hacia el hígado y los riñones donde vuelve a formar glucosa, la cual de nuevo queda disponible mediante la circulación para oxidación en los tejidos. Este proceso se conoce como el ciclo de Cori, o el ciclo del ácido láctico (fig. 20-4). En el estado de ayuno, hay considerable producción de alanina en el músculo estriado, que excede con mucho sus cifras en las proteínas musculares que se están catabolizando. Se forma por transaminación de piruvato producido en la glucólisis de glucógeno muscular, y se exporta hacia el hígado, donde, luego de transaminación de regreso a piruvato, es un sustrato para la gluconeogénesis. Así, este ciclo de glucosa-alanina (fig. 20-4) proporciona una manera indirecta de emplear el glucógeno muscular para mantener la glucosa sanguínea en el estado de ayuno. El ATP requerido para la síntesis hepática de glucosa a partir del piruvato proviene de la oxidación de ácidos grasos. También se forma glucosa a partir del glucógeno hepático mediante glucogenólisis (cap. 19). Mecanismos metabólicos y hormonales regulan la concentración de glucosa en sangre El mantenimiento de concentraciones estables de glucosa en sangre es uno de los mecanismos homeostáticos regulados de manera más fina, que incluye el hígado, tejidos extrahepáticos y varias hormonas. Las células hepáticas son libremente permeables a la glucosa (por medio del transportador GLUT 2), mientras que las células de los tejidos extrahepáticos (excepto los islotes β pancreáticos) son relativamente impermeables, y sus transportadores de glucosa están regulados por insulina. Como resultado, la captación desde el torrente sanguíneo es el paso limitante en la utilización de glucosa en tejidos extrahepáticos. El cuadro 20-2 muestra la función de diversas proteínas transportadoras de glucosa que se encuentran en membranas celulares. La glucocinasa tiene importancia en la regulación de la glucosa en sangre después de una comida La hexocinasa tiene una Km baja para la glucosa, y en el hígado está saturada y actuando a una velocidad constante en todas las condiciones normales. La glucocinasa tiene una Km mucho más alta (menor afinidad) para la glucosa, de modo que su actividad aumenta con los incrementos de la concentración de glucosa en la vena porta hepática (fig. 20-5). Promueve la captación hepática de grandes cantidades de glucosa luego de una comida de carbohidratos. No se encuentra en el hígado de rumiantes, en los cuales entra poca glucosa a la circulación porta desde los intestinos. A concentraciones normales de glucosa en sangre sistémica (4.5 a 5.5 mmol/L), el hígado es un productor neto de glucosa. Empero, conforme aumentan las cifras de esta última, su producción cesa y hay una captación neta. La insulina desempeña una función fundamental en la regulación de la glucosa en la sangre Además de los efectos directos de la hiperglucemia en el aumento de la captación de glucosa hacia el hígado, la hormona insulina desempeña una función fundamental en la regulación de la glucosa en la sangre. Se produce en las células β de los islotes de Langerhans en el páncreas en respuesta a hiperglucemia. Las células β de los islotes son libremente permeables a la glucosa mediante el transportador GLUT 2, y la glucosa es fosforilada por la glucocinasa. En consecuencia, el aumento de la glucosa en la sangre incrementa el flujo metabólico por glucólisis, el ciclo del ácido cítrico, y la generación de ATP. El aumento de [ATP] inhibe los canales de K+ sensibles a ATP, lo que causa despolarización de la membrana celular; ello incrementa el flujo de entrada de Ca2+ por medio de canales del Ca2+ sensibles a voltaje, lo que estimula la exocitosis de insulina. De esta manera, la concentración de insulina en sangre corre a la par con la de la glucosa sanguínea. Otras sustancias que suscitan liberación de Glucosa en sangre Hígado Glucosa 6-fosfato Lactato Lactato Tra ns am ina ció Piruvato Piruvato –NH2 ión Lactato en la sangre Glucosa 6-fosfato c na Alanina Glucógeno i am ns Tra –NH2 Piruvato Glucógeno n Urea Músculo Alanina Alanina FiGura 20-4 20 Bender.indd 170 Los ciclos del ácido láctico (ciclo de Cori) y de la glucosa-alanina. 27/11/09 14:12:13 CApítulo 20 Gluconeogénesis y control de la glucosa en sangre 171 Cuadro 20-2 Principales transportadores de glucosa Localización en los tejidos Funciones Transportadores bidireccionales facilitadores GLUT 1 Cerebro, riñones, colon, placenta, eritrocitos Captación de glucosa GLUT 2 Hígado, células β pancreáticas, intestino delgado, riñones Captación o liberación rápida de glucosa GLUT 3 Cerebro, riñones, placenta Captación de glucosa GLUT 4 Músculo cardiaco y estriado, tejido adiposo Captación de glucosa estimulada por insulina GLUT 5 Intestino delgado Absorción de glucosa Transportador unidireccional dependiente de sodio SGLT 1 Intestino delgado y riñones Captación activa de glucosa contra un gradiente de concentración insulina desde el páncreas son aminoácidos, ácidos grasos libres, cuerpos cetónicos, glucagon, secretina y los fármacos de sulfonilurea tolbutamida y gliburida. Estos medicamentos se usan para estimular la secreción de insulina en la diabetes de tipo 2 (diabetes sacarina [mellitus] no insulinodependiente, DMNID); actúan al inhibir los canales de K+ sensibles a ATP. La epinefrina y la norepinefrina bloquean la liberación de insulina. La insulina produce decremento inmediato de la glucosa en sangre al incrementar el transporte de glucosa hacia el tejido adiposo y el músculo por medio de reclutamiento de transportadores de glucosa (GLUT 4) desde el interior de la célula hacia la membrana plasmática. Si bien no afecta la captación de glucosa hacia el hígado de modo directo, la insulina aumenta la captación a largo plazo como resultado de sus acciones sobre las enzimas que controlan la glucólisis, la glucogénesis y la gluconeogénesis (cap. 19 y cuadro 20-1). El glucagon se opone a las acciones de la insulina El glucagon es la hormona producida por las células α de los islotes pancreáticos; su secreción es estimulada por la hipoglucemia. En el Actividad Vmáx 100 Hexocinasa 50 0 Glucocinasa 5 10 15 20 25 Glucosa en sangre (mmol/L) FiGura 20-5 Variación de la actividad fosforilante de glucosa de la hexocinasa y la glucocinasa con el aumento de la concentración de glucosa en la sangre. La Km para la glucosa de la hexocinasa es de 0.05 mmol/L, y de la glucocinasa, de 10 mmol/L. 20 Bender.indd 171 hígado estimula la glucogenólisis al activar la fosforilasa. Al contrario de la epinefrina, el glucagon carece de efecto sobre la fosforilasa muscular. El glucagon también aumenta la gluconeogénesis a partir de aminoácidos y lactato. En todas estas acciones, el glucagon actúa por medio de generación de cAMP (cuadro 20-1). Tanto la glucogenólisis como la gluconeogénesis hepáticas contribuyen al efecto hiperglucemiante del glucagon, cuyas acciones se oponen a las de la insulina. La mayor parte del glucagon (y de la insulina) endógeno se elimina de la circulación mediante el hígado (cuadro 20-3). otras hormonas afectan la glucosa en sangre La parte anterior de la hipófisis secreta hormonas que tienden a aumentar la glucosa en la sangre y, por ende, antagonizan la acción de la insulina. Son la hormona de crecimiento, la hormona adrenocorticotrópica (ACTH; corticotropina) y quizá otras hormonas “diabetogénicas”. La hipoglucemia estimula la secreción de hormona de crecimiento; esta última aminora la captación de glucosa en el músculo. Parte de este efecto puede ser indirecto, porque estimula la movilización de ácidos grasos libres desde el tejido adiposo, que por sí mismos inhiben la utilización de glucosa. Los glucocorticoides (11-oxiesteroides) se secretan por la corteza suprarrenal y son sintetizados también de una manera no regulada en el tejido adiposo. Su acción incrementa la gluconeogénesis como resultado de aumento del catabolismo hepático de aminoácidos, debido a la inducción de aminotransferasas (y otras enzimas como la triptófano dioxigenasa) y enzimas clave de la gluconeogénesis. Además, los glucocorticoides inhiben la utilización de glucosa en tejidos extrahepáticos. En todas estas acciones, los glucocorticoides actúan de un modo antagonista a la insulina. Varias citocinas secretadas por macrófagos que infiltran el tejido adiposo también tienen acciones antagonistas de la insulina; junto con los glucocorticoides secretados por el tejido adiposo, esto explica la resistencia a la insulina que suele observarse en individuos obesos. La epinefrina es secretada por la médula suprarrenal como resultado de estímulos estresantes (miedo, emoción, hemorragia, hipoxia, hipoglucemia, etc.) y lleva a glucogenólisis en el hígado y el músculo debido a estimulación de la fosforilasa por medio de generación de cAMP. En el músculo, la glucogenólisis produce incremento de la glucólisis, mientras que en el hígado ocasiona la liberación de glucosa hacia el torrente sanguíneo. 27/11/09 14:12:15 172 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Cuadro 20-3 respuestas del tejido a la insulina y el glucagon Hígado Aumentado por insulina Síntesis de ácidos grasos Síntesis de glucógeno Síntesis de proteína Captación de glucosa Síntesis de ácidos grasos Disminuido por insulina Cetogénesis Gluconeogénesis Lipólisis Aumentado por glucagon Glucogenólisis Gluconeogénesis Cetogénesis Lipólisis Cuando se supera el umbral renal para la glucosa se produce glucosuria Cuando la glucosa en sangre aumenta hasta cifras relativamente altas, los riñones también ejercen un efecto regulador. Los glomérulos filtran de manera continua la glucosa, pero en circunstancias normales se reabsorbe por completo en los túbulos renales mediante transporte activo. La capacidad del sistema tubular para reabsorber glucosa está limitada a un índice de alrededor de 2 mmol/min, y en la hiperglucemia (como ocurre en la diabetes sacarina [mellitus] mal controlada), el filtrado glomerular puede contener más glucosa que la que es posible reabsorber, lo que da por resultado glucosuria. Esta última sobreviene cuando la concentración de glucosa en sangre venosa excede alrededor de 10 mmol/L; esto se llama el umbral renal para la glucosa. La hipoglucemia puede aparecer durante el embarazo y en el recién nacido Durante la gestación, el consumo de glucosa por el feto aumenta, y hay riesgo de hipoglucemia materna y quizá fetal, en particular si hay intervalos prolongados entre las comidas o por la noche. Además, los lactantes prematuros y con peso bajo al nacer son más susceptibles a la hipoglucemia, porque tienen poco tejido adiposo para que proporcione ácidos grasos libres. Las enzimas de la gluconeogénesis pueden no ser por completo funcionales en este momento, y la gluconeogénesis de cualquier modo depende de un aporte de ácidos grasos libres para obtener energía. Hay poco glicerol, que por lo normal se liberaría a partir del tejido adiposo, disponible para gluconeogénesis. al medir la tolerancia a la glucosa es posible determinar la capacidad del cuerpo para utilizarla La tolerancia a la glucosa es la capacidad para regular su concentración en sangre después de la administración de una dosis de prueba de glucosa (por lo general 1 g/kg de peso corporal) (fig. 20-6). La diabetes sacarina (diabetes mellitus tipo 1 o insulinodependiente; DMID) se caracteriza por disminución de la tolerancia a la glucosa a consecuencia de decremento de la secreción de insulina por destrucción progresiva de células β de los islotes pancreáticos. Asimismo, la tolerancia a la glucosa se ve afectada en la diabetes mellitus tipo 2 (NIDDM) como resultado de sensibilidad alterada de los teji- Músculo Captación de glucosa Síntesis de glucógeno Síntesis de proteína dos a la acción de la insulina. La resistencia a la insulina relacionada con obesidad (y en particular con la obesidad abdominal) que conduce a la aparición de hiperlipidemia, y luego a aterosclerosis y cardiopatía coronaria, así como a diabetes manifiesta, se conoce como el síndrome metabólico. La tolerancia a la glucosa también está alterada en situaciones en las cuales hay daño del hígado, en algunas infecciones, y en respuesta a algunos fármacos, así como en circunstancias que llevan a hiperactividad de la hipófisis o de la corteza suprarrenal debido a antagonismo de las hormonas secretadas por estas glándulas a la acción de la insulina. La administración de insulina (como en el tratamiento de la diabetes mellitus) aminora la concentración sanguínea de glucosa, y aumenta su utilización y almacenamiento como glucógeno en el hígado y el músculo. Un exceso de insulina puede causar hipoglucemia, lo que origina convulsiones e incluso la muerte a menos que se administre glucosa con prontitud. En la insuficiencia hipofisaria o adrenocortical se observa incremento de la tolerancia a la glucosa, atribuible a una disminución del antagonismo para la insulina por las hormonas normalmente secretadas por estas glándulas. 15 Dia bét Glucosa en sangre (mmol/L) ASPECTOS CLÍNICOS ADICIONALES 20 Bender.indd 172 Tejido adiposo ico 10 No 5 0 rm 1 al 2 Tiempo (h) FIGURA 20-6 Prueba de tolerancia a la glucosa. Curvas de glucosa en sangre de una persona normal y de una diabética después de la administración por vía oral de 1 g de glucosa/kilogramo de peso corporal. Note la concentración aumentada inicial en el diabético en ayuno. Un criterio de normalidad es el regreso de la curva al valor inicial en el transcurso de 2 h. 27/11/09 14:12:16 CApítulo 20 El costo energético de la gluconeogénesis explica por qué las dietas con muy bajo contenido de carbohidratos promueven la pérdida de peso Las dietas con muy bajo contenido de carbohidratos, que sólo proporcionan 20 g o menos de carbohidratos por día (en comparación con una ingestión deseable de 100 a 120 g/día), pero que permiten el consumo ilimitado de grasa y proteína, se han promovido como un régimen eficaz para la pérdida de peso, aun cuando esas dietas son contrarias a todas las recomendaciones respecto a una dieta prudente para que haya salud. Puesto que hay una demanda continua de glucosa, habrá una cantidad considerable de gluconeogénesis a partir de aminoácidos; el alto costo de ATP vinculado debe satisfacerse entonces por medio de la oxidación de ácidos grasos. rESuMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ La gluconeogénesis es el proceso de síntesis de glucosa o glucógeno a partir de precursores que no son carbohidratos. Tiene especial importancia cuando el carbohidrato no está disponible a partir de la dieta. Los sustratos importantes son aminoácidos, lactato, glicerol y propionato. La vía de la gluconeogénesis en hígado y riñones utiliza las reacciones en la glucólisis que son reversibles, más cuatro reacciones adicionales que evitan el paso por las reacciones no de equilibrio irreversibles. Dado que la glucólisis y la gluconeogénesis comparten la misma vía pero operan en direcciones opuestas, es necesario que sus actividades se regulen de manera recíproca. El hígado regula la glucosa en la sangre después de una comida, porque contiene la glucocinasa que presenta una Km alta que promueve el aumento de la utilización hepática de glucosa. La insulina se secreta como una respuesta directa a la hiperglucemia; estimula al hígado para que almacene glucosa como glucógeno, y facilita la captación de glucosa hacia tejidos extrahepáticos. El glucagon se secreta como una respuesta a la hipoglucemia y activa tanto la glucogenólisis como la gluconeogénesis en el hígado, lo que causa liberación de glucosa hacia la sangre. rEFErENCiaS Barthel A, Schmoll D: Novel concepts in insulin regulation of hepatic gluconeogenesis. Am J Physiol Endocrinol Metab 2003;285:E685. 20 Bender.indd 173 Gluconeogénesis y control de la glucosa en sangre 173 Boden G: Gluconeogenesis and glycogenolysis in health and diabetes. J Investig Med 2004;52:375. Dzugaj, A: Localization and regulation of muscle fructose 1,6-bisphosphatase, the key enzyme of glyconeogenesis. 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El ácido glucurónico se sintetiza a partir de la glucosa mediante la vía del ácido urónico, de importancia cuantitativa menor, pero muy importante para la excreción de metabolitos y sustancias químicas extrañas (xenobióticos) como glucurónidos. Una deficiencia en la vía lleva a la enfermedad de pentosuria esencial. La falta de una enzima de la vía (gulonolactona oxidasa) en primates y en algunos otros animales explica por qué el ácido ascórbico (vitamina C) es un requerimiento de la dieta para seres humanos, mas no para casi todos los otros mamíferos. Las deficiencias de las enzimas del metabolismo de la fructosa y galactosa pueden ser la causa de enfermedades metabólicas como fructosuria esencial, intolerancia hereditaria a la fructosa y galactosemia. LA VÍA DE LA PENTOSA FOSFATO FORMA NADPH Y RIBOSA FOSFATO La vía de la pentosa fosfato (derivación de hexosa monofosfato) es una vía más compleja que la glucólisis (fig. 21-1). Tres moléculas de glucosa 6-fosfato dan lugar a tres moléculas de CO2 y a tres azúcares de cinco carbonos, los cuales se reordenan para generar a su vez dos moléculas de glucosa 6-fosfato y una molécula del intermediario glucolítico, gliceraldehído 3-fosfato. Puesto que dos moléculas de gliceraldehído 3-fosfato pueden regenerar glucosa 6-fosfato, la vía puede explicar la oxidación completa de la glucosa. 21 c A P í t u L o LAS REACCIONES DE LA VÍA DE LA PENTOSA FOSFATO SUCEDEN EN EL CITOSOL Al igual que la glucólisis, las enzimas de la vía de la pentosa fosfato son citosólicas. Al contrario de la glucólisis, la oxidación se logra por medio de deshidrogenación usando NADP+, no NAD+, como el aceptor de hidrógeno. La secuencia de reacciones de la vía puede dividirse en dos fases: una fase irreversible oxidativa y una fase reversible no oxidativa. En la primera fase, la glucosa 6-fosfato pasa por deshidrogenación y descarboxilación para dar una pentosa, la ribulosa 5-fosfato. En la segunda fase, la ribulosa 5-fosfato se convierte de regreso en glucosa 6-fosfato mediante una serie de reacciones que comprenden principalmente dos enzimas: transcetolasa y transaldolasa (fig. 21-1). La fase oxidativa genera NADPH La deshidrogenación de la glucosa 6-fosfato hacia 6-fosfogluconato ocurre por medio de la formación de 6-fosfogluconolactona catalizada por la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, una enzima dependiente de NADP (figs. 21-1 y 21-2). La hidrólisis de la 6-fosfogluconolactona se logra mediante la enzima gluconolactona hidrolasa. Un segundo paso oxidativo es catalizado por la 6-fosfogluconato deshidrogenasa, que también necesita NADP+ como aceptor de hidrógeno. A continuación hay descarboxilación, con la formación de la cetopentosa ribulosa 5-fosfato. La fase no oxidativa genera precursores de la ribosa La ribulosa 5-fosfato es el sustrato para dos enzimas. La ribulosa 5-fosfato 3-epimerasa altera la configuración alrededor del carbono 3, lo que forma el epímero xilulosa 5-fosfato, también una cetopentosa. La ribosa 5-fosfato cetoisomerasa convierte a la ribulosa 5-fosfato en la aldopentosa correspondiente, ribosa 5-fosfato, que se usa para la síntesis de nucleótido y ácido nucleico. La transcetolasa transfiere la unidad de dos carbonos que incluye los carbonos 1 y 2 de una cetosa hacia el carbono aldehído de un azúcar aldosa. Por consiguiente, afecta la conversión de un azúcar cetosa en una aldosa con dos carbonos menos y un azúcar aldosa en una cetosa con dos carbonos más. La reacción requiere Mg2+ y 174 21 Bender.indd 174 27/11/09 14:13:45 cAPítulo 21 La vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de hexosas 175 Glucosa 6-fosfato Glucosa 6-fosfato Glucosa 6-fosfato C6 C6 C6 + + NADP + H2O NADP + H2O NADP+ + H2O Glucosa 6-fosfato deshidrogenasa NADPH + H+ 6-fosfogluconato C6 NADP+ 6-fosfogluconato deshidrogenasa NADPH + H+ 6-fosfogluconato C6 NADP+ NADPH + H+ 6-fosfogluconato C6 NADP+ NADPH + H+ CO2 NADPH + H+ CO2 Ribulosa 5-fosfato C5 3-Epimerasa NADPH + H+ CO2 Ribulosa 5-fosfato C5 Ceto-isomerasa Xilulosa 5-fosfato C5 Ribulosa 5-fosfato C5 3-Epimerasa Ribosa 5-fosfato C5 Xilulosa 5-fosfato C5 Transcetolasa Gliceraldehído 3-fosfato C3 Síntesis de nucleótidos, RNA, DNA Sedoheptulosa 7-fosfato C7 Transaldolasa Fructosa 6-fosfato C6 Eritrosa 4-fosfato C4 Transcetolasa Fructosa 6-fosfato C6 Fosfohexosa isomerasa Glucosa 6-fosfato C6 Fosfohexosa isomerasa Glucosa 6-fosfato C6 Gliceraldehído 3-fosfato C3 Fosfotriosa isomerasa Aldolasa 1/2 Fructosa 1,6 bisfosfato C6 Fructosa 1,6bisfosfatasa 1/2 Fructosa 6-fosfato C6 Fosfohexosa isomerasa 1/2 Glucosa 6-fosfato C6 difosfato de tiamina (vitamina B1) como coenzima. Es probable que la porción de dos carbonos transferida sea glucolaldehído unido a difosfato de tiamina. De este modo, la transcetolasa cataliza la transferencia de la unidad de dos carbonos desde la xilulosa 5-fosfato hacia la ribosa 5-fosfato, lo que produce la cetosa de siete carbonos sedoheptulosa 7-fosfato, y la aldosa gliceraldehído 3-fosfato. Estos dos productos luego pasan por transaldolación. La transaldolasa cataliza la transferencia de una porción dihidroxiacetona de tres carbonos (carbonos uno a tres) desde la cetosa se- 21 Bender.indd 175 FigurA 21-1 Diagrama de flujo de la vía de la pentosa fosfato y sus conexiones con la vía de la glucólisis. La vía completa, según se indica, consta de tres ciclos interconectados en los cuales la glucosa 6-fosfato es tanto sustrato como producto terminal. Las reacciones que están por arriba de la línea discontinua son irreversibles, mientras que todas las que están bajo esa línea son libremente reversibles excepto la catalizada por la fructosa 1,6-bisfosfatasa. doheptulosa 7-fosfato hacia la aldosa gliceraldehído 3-fosfato para formar una cetosa fructosa 6-fosfato y la aldosa de cuatro carbonos eritrosa 4-fosfato. En una reacción adicional catalizada por transcetolasa, la xilulosa 5-fosfato sirve como un donador de glucolaldehído. En este caso la eritrosa 4-fosfato es el aceptor, y los productos de la reacción son fructosa 6-fosfato y gliceraldehído 3-fosfato. A fin de oxidar la glucosa por completo a CO2 por medio de la vía de la pentosa fosfato, debe haber enzimas presentes en el tejido 27/11/09 14:13:47 176 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos O HO + H C NADP H C OH HO C H H C OH O H + C NADPH + H Mg2+ o Ca2+ H C OH HO C H H C OH O Glucosa 6-fosfato deshidrogenasa C H O CH2 H2O P Mg , Mn o Ca2+ 2+ H C C H H C OH C OH Gluconolactona hidrolasa H O – HO C CH2 β -D-glucosa 6-fosfato COO 2+ OH CH2 P 6-Fosfogluconolactona O P 6-Fosfogluconato NADP+ 2+ Mg , Mn2+ o Ca2+ 6-Fosfogluconato deshidrogenasa NADP+ + H+ COO CHOH C CH2OH Ribosa 5-fosfato cetoisomerasa OH C O H – C OH C O H C OH H C OH H C OH H C OH H C OH H C OH CH2 O CH2 P Forma enediol O CO2 P Ribulosa 5-fosfato CH2 O P 3-Ceto 6-fosfogluconato Ribulosa 5-fosfato 3-epimerasa CH2OH CH2OH C H C OH H C OH H C OH H C CH2 HO H *C H *C OH C 2 O *CH C H H C OH H C OH Xilulosa 5-fosfato H C OH CH2 P O P Sedoheptulosa 7-fosfato Ribosa 5-fosfato ATP Transcetolasa Mg2+ PRPP sintetasa AMP H C O H C OH H C OH H O HO P O O C O P Tiamina– P Mg2+ 2 H P O *C O *C OH C 2 O *CH CH2OH P Gliceraldehído 3-fosfato HO P PRPP C O C H H C O H C OH *C OH *C OH C 2 O *CH H C OH Fructosa 6-fosfato Transaldolasa O C CH2 H CH2 H H O P P Eritrosa 4-fosfato CH2OH CH2OH C O HO C H H C OH CH2 C Transcetolasa O Tiamina– P Mg2+ 2 H H P Xilulosa 5-fosfato FigurA 21-2 O C OH CH2 O C H H C OH C OH H P Gliceraldehído 3-fosfato CH2 O P Fructosa 6-fosfato La vía de la pentosa fosfato. (P, — PO32–; PRPP, 5-fosforribosil 1-pirofosfato.) para convertir el gliceraldehído 3-fosfato en glucosa 6-fosfato. Esto comprende reversión de la glucólisis y la enzima gluconeogénica fructosa 1,6-bisfosfatasa. En los tejidos que carecen de esta enzima, la gliceraldehído 3-fosfato continúa la vía normal de la glucólisis hacia piruvato. 21 Bender.indd 176 C O HO Las dos principales vías para el catabolismo de la glucosa tienen poco en común Si bien la glucosa 6-fosfato es común a ambas vías, la vía de la pentosa fosfato difiere de manera notoria de la glucólisis. En la oxida- 27/11/09 14:13:49 cAPítulo 21 ción se utiliza NADP en lugar de NAD, y el CO2, que no es generado durante la glucólisis, es un producto característico. En la vía de la pentosa fosfato no se genera ATP, mientras que es un producto importante de la glucólisis. Los equivalentes reductores se generan en los tejidos especializados en síntesis reductivas La vía de la pentosa fosfato es activa en el hígado, el tejido adiposo, la corteza suprarrenal, tiroides, eritrocitos, testículos y glándula mamaria en lactancia. Su actividad es baja en la glándula mamaria no en lactancia y en el músculo estriado. Los tejidos en los cuales la vía es activa usan NADPH en síntesis reductivas, por ejemplo, de ácidos grasos, esteroides, aminoácidos mediante la glutamato deshidrogenasa y glutatión reducido. En el estado posprandial, cuando se incrementa la lipogénesis, la insulina también puede inducir la síntesis de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa y 6-fosfogluconato deshidrogenasa. La ribosa puede sintetizarse en casi todos los tejidos En el torrente sanguíneo circula poca o ninguna ribosa, de modo que los tejidos deben sintetizar la que necesitan para síntesis de nucleótido y ácido nucleico, usando la vía de la pentosa fosfato (fig. 21-2). No es necesario tener una vía de la pentosa fosfato que funcione por completo para que un tejido sintetice ribosa 5-fosfato. El músculo sólo tiene actividad baja de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa y 6-fosfogluconato deshidrogenasa pero, al igual que casi todos los otros tejidos, tiene la capacidad para sintetizar ribosa 5-fosfato por medio de reversión de la fase no oxidativa de la vía de la pentosa fosfato utilizando fructosa 6-fosfato. LA VÍA DE LA PENTOSA FOSFATO Y LA GLUTATIÓN PEROXIDASA PROTEGEN A LOS ERITROCITOS CONTRA HEMÓLISIS En los eritrocitos la vía de la pentosa fosfato proporciona NADPH para la reducción de glutatión oxidado, catalizada por la glutatión reductasa, una flavoproteína que contiene FAD. El glutatión reducido elimina H2O2 en una reacción catalizada por la glutatión peroxi- NADPH + H+ Vía de la pentosa fosfato 2H NADP+ 177 dasa, una enzima que contiene el análogo selenio de cisteína (selenocisteína) en el sitio activo (fig. 21-3). La reacción es importante, porque la acumulación de H2O2 puede acortar el lapso de vida del eritrocito al causar daño oxidativo de la membrana celular, lo que conduce a hemólisis. EL GLUCURONATO, UN PRECURSOR DE PROTEOGLUCANOS Y DE GLUCURÓNIDOS CONJUGADOS, ES UN PRODUCTO DE LA VÍA DEL ÁCIDO URÓNICO En el hígado, la vía del ácido urónico cataliza la conversión de glucosa en ácido glucurónico, ácido ascórbico (salvo en seres humanos y otras especies para las cuales el ascorbato es una vitamina), y pentosas (fig. 21-4). Asimismo, es una vía oxidativa alternativa para la glucosa que, al igual que la vía de la pentosa fosfato, no lleva a la formación de ATP. La glucosa 6-fosfato se isomeriza hacia glucosa 1-fosfato, que entonces reacciona con uridina trifosfato (UTP) para formar uridina difosfato glucosa (UDPGlc) en una reacción catalizada por la uDPGlc pirofosforilasa, como sucede en la síntesis de glucógeno (cap. 19). La UDPGlc se oxida en el carbono 6 por la uDPGlc deshidrogenasa dependiente de NAD, en una reacción de dos pasos para generar UDP-glucuronato. El UDP glucuronato es la fuente de glucuronato para reacciones que incluyen su incorporación hacia proteoglucanos o para reacción con sustratos como hormonas esteroideas, bilirrubina y diversos medicamentos que se excretan en la orina o la bilis como conjugados glucurónido (fig. 31-13). El glucuronato se reduce hacia l-gulonato, el precursor directo del ascorbato en los animales que tienen la capacidad para sintetizar esta vitamina, en una reacción dependiente de NADPH. Los seres humanos y otros primates, así como los conejillos de Indias (cobayos), murciélagos y algunas aves y peces, no pueden sintetizar ácido ascórbico debido a la falta de l-gulonolactona oxidasa. El l-gulonato se oxida hacia 3-ceto-l-gulonato, que después es descarboxilado hacia l-xilulosa; esta última se convierte en el isómero d por medio de una reducción dependiente del NADPH hacia xilitol, seguida por oxidación en una reacción dependiente de NAD hacia d-xilulosa. Luego de conversión en d-xilulosa 5-fosfato, se metaboliza por medio de la vía de la pentosa fosfato. S G FAD La vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de hexosas S Glutatión reductasa 2G 2H2O G Se SH Glutatión peroxidasa H2O2 FigurA 21-3 Función de la vía de la pentosa fosfato en la reacción de glutatión peroxidasa de eritrocitos. (G-S-S-G, glutatión oxidado; G-SH, glutatión reducido; Se, enzima que contiene selenio.) 21 Bender.indd 177 27/11/09 14:13:50 178 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos H *C OH H C OH HO C H H C OH H C CH2 Fosfoglucomutasa O O H *C H C HO C H H C OH H C O P UDPGlc pirofosforilasa OH O UTP PPi H *C H C HO C H H C OH H C O UDP UDPGlc deshidrogenasa OH O + 2NAD + H2O CH2OH CH2OH Glucosa 1-fosfato Uridina difosfato glucosa (UDPGlc) P 2NADH + 2H+ H *C H C HO C H H C OH H C C O UDP OH O O– O α-D-glucosa 6-fosfato Uridina difosfato glucuronato Glucurónidos H2O Proteoglucanos O CH2OH H HO C O C OH C H HO CO2 H HO *CH2OH C O– C H C O C OH C H NADH + H+ + NAD H *C OH H C OH HO C H OH H C OH H H C C O– HO C H HO C H H C C HO *CH2OH L-xilulosa UDP O NADP + NADPH + H+ *CH2OH 3-Ceto-L-gulonato C O O– O L-Gulonato D-Glucuronato NADPH + H+ H2O Oxalato Glicolato L-Gulonolactona CO2 O2 NADP+ Glucoaldehído D-Xilulosa 1-fosfato *CH2OH C OH HO C H H C OH NAD+ CH2OH Xilitol Bloqueo en seres humanos 2-Ceto-L-gulonolactona Bloqueo en pentosuria H Bloqueo en primates y conejillos de Indias (cobayos) *CH2OH NADH + H+ O HO C H D-Xilulosa HO C H C OH HO C H C HO C D-Xilulosa reductasa O C CH2OH ATP Mg2+ O C Dieta ADP C [2H] O H O C O C H C HO C O H Oxalato *CH2OH *CH2OH L-Ascorbato L-Deshidroascorbato D-Xilulosa 5-fosfato Vía de la pentosa fosfato FigurA 21-4 Vía del ácido urónico. (*Indica el destino del carbono 1 de la glucosa; P , —PO32–.) LA INGESTIÓN DE GRANDES CANTIDADES DE FRUCTOSA TIENE PROFUNDAS CONSECUENCIAS METABÓLICAS Las dietas con alto contenido de sacarosa o con jarabes con alto contenido de fructosa usados en alimentos y bebidas manufacturados 21 Bender.indd 178 provocan la entrada de grandes cantidades de fructosa (y glucosa) a la vena porta hepática. La fructosa pasa por glucólisis más rápida en el hígado que la glucosa, porque sortea el paso regulador catalizado por la fosfofructocinasa (fig. 21-5); lo cual permite que la fructosa sature las vías en el hígado, lo que lleva a aumento de la síntesis y la esterificación de ácidos grasos, y de la secreción de VLDL, lo que puede incrementar 27/11/09 14:13:52 cAPítulo 21 La vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de hexosas 179 ATP Hexocinasa Glucógeno Glucocinasa D-Glucosa Glucosa 6-fosfato Glucosa 6-fosfatasa Fosfohexosa isomerasa ATP * D-Sorbitol NADPH + H+ Hexocinasa Fructosa 6-fosfato Fructosa 1,6bisfosfatasa Aldosa reductasa NAD+ NADP+ Sorbitol deshidrogenasa NADH + H+ D-Fructosa ATP Fructocinasa Fosfofructocinasa Dieta ATP Bloqueo en la fructosuria esencial Fructosa 1,6-bisfosfato Fructosa 1-fosfato Bloqueo en la intolerancia hereditaria a la fructosa Dihidroxiacetona-fosfato Aldolasa A Aldolasa B Fosfotriosa isomerasa Aldolasa B Esterificación de ácido graso ATP Gliceraldehído 3-fosfato Triocinasa D-Gliceraldehído 2-Fosfoglicerato Piruvato Síntesis de ácido graso FigurA 21-5 Metabolismo de la fructosa. La aldolasa A se encuentra en todos los tejidos, mientras que la aldolasa B es la forma predominante en el hígado. (*No se encuentra en el hígado.) las cifras séricas de triacilgliceroles y por último de colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL). Una cinasa específica, la fructocinasa, cataliza la fosforilación de fructosa hacia fructosa 1-fosfato en hígado, riñones e intestino. Esta enzima no actúa sobre la glucosa y, al contrario de la glucocinasa, su actividad no es afectada por el ayuno ni por la insulina, lo cual puede explicar por qué en diabéticos la fructosa se elimina de la sangre a un índice normal. La fructosa 1-fosfato se divide hacia d-gliceraldehído y dihidroxiacetona fosfato mediante la aldolasa B, una enzima en el hígado, que también funciona en la glucólisis hepática al dividir a la fructosa 1,6-bisfosfato. El d-gliceraldehído entra a la glucólisis por medio de fosforilación hacia gliceraldehído 3-fosfato catalizada por la triocinasa. Los dos triosa fosfatos, dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehído 3-fosfato, pueden degradarse mediante glucólisis o ser sustratos para la aldolasa y, por tanto, para la gluconeogénesis, que es el destino de gran parte de la fructosa que se metaboliza en el hígado. En tejidos extrahepáticos, la hexocinasa cataliza la fosforilación de casi todas las hexosas, incluso la fructosa, pero la glucosa inhibe 21 Bender.indd 179 la fosforilación de la fructosa, porque es un mejor sustrato para la hexocinasa. Aun así, algo de fructosa puede metabolizarse en el tejido adiposo y el músculo. La fructosa se encuentra en el plasma seminal y en la circulación del feto de ungulados y ballenas. La aldosa reductasa se encuentra en la placenta de ovejas y se encarga de la secreción de sorbitol hacia la sangre fetal. La conversión de sorbitol en fructosa depende de la presencia de la enzima sorbitol deshidrogenasa en el hígado, incluso el hígado del feto. Esta vía también es la causa de la presencia de fructosa en el líquido seminal. LA GALACTOSA SE REQUIERE PARA LA SÍNTESIS DE LACTOSA, GLUCOLÍPIDOS, PROTEOGLUCANOS Y GLUCOPROTEÍNAS La galactosa se deriva de la hidrólisis intestinal del disacárido lactosa, el azúcar de la leche, y en el hígado se convierte con facilidad en 27/11/09 14:13:54 180 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos A Glucógeno Galactosa Glucógeno sintasa ATP Pi Mg 2+ Fosforilasa Galactocinasa Glucosa 1-fosfato ADP Galactosa 1-fosfato Bloqueo en la galactosemia Fosfoglucomutasa UDPGlc Galactosa 1-fosfato uridil transferasa Glucosa 1-fosfato Uridina difosfogalactosa 4-epimerasa NAD+ UDPGal Glucosa 6-fosfatasa Glucosa 6-fosfato B Glucosa NAD+ Glucosa UDPGlc UDPGal Uridina difosfogalactosa 4-epimerasa ATP Mg2+ Hexocinasa UDPGlc pirofosforilasa PPi Lactosa Lactosa sintasa ADP Fosfoglucomutasa Glucosa 6-fosfato Glucosa 1-fosfato Glucosa FigurA 21-6 Vía de la conversión de (A) galactosa en glucosa en el hígado y (B) glucosa en lactosa en la glándula mamaria en lactancia. glucosa. La galactocinasa cataliza la fosforilación de galactosa, usando ATP como donador de fosfato (fig. 21-6). La galactosa 1-fosfato reacciona con la uridina difosfato glucosa (UDPGlc) para formar uridina difosfato galactosa (UDPGal) y glucosa 1-fosfato, en una reacción catalizada por la galactosa 1-fosfato uridil transferasa. La conversión de UDPGal en UDPGlc es catalizada por la uDPGal 4-epimerasa. La reacción comprende oxidación, después reducción, en el carbono 4, con NAD+ como coenzima. La UDPGlc luego se incorpora hacia el glucógeno (cap. 19). Dado que la reacción de epimerasa es libremente reversible, la glucosa se puede convertir en galactosa, de manera que esta última no es un constituyente esencial de la dieta. La galactosa es necesaria en el cuerpo no sólo para la formación de lactosa, sino también como un constituyente de glucolípidos (cerebrósidos), proteoglucanos y glucoproteínas. En la síntesis de lactosa en la glándula mamaria, la UDPGal se condensa con glucosa para dar lactosa, catalizada por la lactosa sintasa (fig. 21-6). La glucosa es el precursor de azúcares amino (hexosaminas) Los azúcares amino son componentes de importancia de las glucoproteínas (cap. 47), y de ciertos glucoesfingolípidos (p. ej., gangliósidos; cap. 15), y de glucosaminoglucanos (cap. 48). Los principales 21 Bender.indd 180 azúcares amino son las hexosaminas glucosamina, galactosamina y manosamina, y el compuesto de nueve carbonos ácido siálico. El principal ácido siálico que se encuentra en tejidos humanos es el ácido N-acetilneuramínico (NeuAc o NANA). En la figura 21-7 se resumen las interrelaciones metabólicas entre los azúcares amino. ASPECTOS CLÍNICOS El deterioro de la vía de la pentosa fosfato conduce a hemólisis Los defectos genéticos de la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, con deterioro consiguiente de la generación de NADPH, son frecuentes en poblaciones de origen mediterráneo y afrocaribeño. El gen está en el cromosoma X, de modo que los afectados son principalmente varones. Alrededor de 400 millones de personas portan un gen mutado para la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, lo que hace que sea el defecto genético más frecuente, pero la mayoría es asintomática. La distribución de genes mutantes se asemeja a la del paludismo, lo que sugiere que ser heterocigoto confiere resistencia contra el paludismo. El defecto se manifiesta como lisis de eritrocitos (anemia hemolítica) cuando los pacientes susceptibles quedan sujetos a estrés oxidativo (cap. 52) por infección, fármacos como el antipalúdico primaquina, y sulfonamidas, o cuando han comido habas (Vicia 27/11/09 14:13:56 cAPítulo 21 La vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de hexosas 181 Glucógeno Glucosa 1-fosfato ATP ADP Glucosa Glucosa 6-fosfato Fructosa 6-fosfato Glutamina ATP Aminotransferasa ADP Glucosamina Glucosamina 6-fosfato Acetil-CoA ATP UTP Glutamato – N-acetilglucosamina 6-fosfato UDPglucosamina* PPi Acetil-CoA ADP N-acetilglucosamina Glucosamina 1-fosfato Fosfoglucomutasa N-acetilglucosamina 1-fosfato Glucosaminoglucanos (p. ej., heparina) UTP Epimerasa N-acetilmanosamina 6-fosfato PP i UDPN-acetilglucosamina* Fosfoenolpiruvato NAD+ Ácido N-acetilneuraminico 9-fosfato Glucosaminoglucanos (ácido hialurónico), glucoproteínas Epimerasa UDPN-acetilgalactosamina* – Ácido siálico, gangliósidos, glucoproteínas Inhibe el efecto alostérico Glucosaminoglucanos (condroitinas), glucoproteínas FigurA 21-7 Resumen de las interrelaciones en el metabolismo de azúcares amino. (*Análogo a UDPGlc.) Otros nucleótidos purina o pirimidina pueden estar enlazados de modo similar a azúcares o azúcares amino. Los ejemplos son difosfato de timidina-glucosamina, y difosfato de timidina-N-acetilglucosamina. fava, de ahí el nombre de la enfermedad, favismo). Hay dos variantes principales del favismo, en la afrocaribeña la enzima es inestable, de manera que aun cuando las actividades promedio de los eritrocitos son bajas, el estrés oxidativo sólo afecta a los eritrocitos más viejos y las crisis hemolíticas tienden a ser autolimitadas; en contraste, en la variante del Mediterráneo la enzima es estable, pero tiene actividad baja en todos los eritrocitos. Las crisis hemolíticas en estas personas son más graves y pueden ser mortales. La glutatión peroxidasa depende de un aporte suficiente de NADPH, que en los eritrocitos sólo puede formarse por medio de la vía de la pentosa fosfato. Reduce peróxidos orgánicos y H2O2, como parte de la defensa del cuerpo contra peroxidación lípida (fig. 15-21). La medición de la transcetolasa de eritrocitos y su activación mediante difosfato de tiamina, se usan para evaluar el estado nutricional en cuanto a tiamina (cap. 44). 21 Bender.indd 181 La alteración de la vía del ácido urónico se produce por defectos enzimáticos y por algunos medicamentos En la rara enfermedad hereditaria benigna pentosuria esencial, aparecen cantidades considerables de l-xilulosa en la orina, debido a falta de la enzima necesaria para reducir l-xilulosa hacia xilitol. Diversos fármacos aumentan el índice al cual la glucosa entra a la vía del ácido urónico. Por ejemplo, la administración de barbital o clorobutanol a ratas suscita un incremento importante de la conversión de glucosa en glucuronato, l-gulonato y ascorbato. La aminopirina y la antipirina aumentan la excreción de l-xilulosa en individuos pentosúricos. La pentosuria también tiene lugar después del consumo de grandes cantidades de frutas (como peras) que son ricas fuentes de pentosas (pentosuria alimentaria). 27/11/09 14:13:58 182 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Cargar el hígado con fructosa puede potenciar la hipertriacilglicerolemia, hipercolesterolemia e hiperuricemia En el hígado, la fructosa incrementa la síntesis de ácidos grasos y triacilglicerol, y la secreción de VLDL, lo que da pie a hipertriacilglicerolemia —e incremento del colesterol LDL—, que en potencia es aterogénico (cap. 26). Esto se debe a que la fructosa entra a la glucólisis por medio de la fructocinasa y la fructosa 1-fosfato resultante evita el paso regulador catalizado por la fosfofructocinasa (cap. 18). Más aún, la carga aguda del hígado con fructosa, como llega a suceder con la administración por vía intravenosa lenta o luego de ingestiones muy altas de fructosa, causa secuestro de fosfato inorgánico en la fructosa 1-fosfato, y síntesis disminuida de ATP. Como resultado hay menos inhibición de la síntesis de purina de novo por ATP, y hay incremento de la formación de ácido úrico, lo que produce hiperuricemia, que es una causa de gota (cap. 33). Los defectos del metabolismo de la fructosa suscitan enfermedad Una falta de fructocinasa hepática genera fructosuria esencial, una enfermedad benigna y asintomática. La falta de aldolasa B, que divide a la fructosa 1-fosfato, lleva a intolerancia hereditaria a la fructosa, caracterizada por hipoglucemia profunda y vómito después del consumo de fructosa (o de sacarosa, que da fructosa en el momento de la digestión) (fig. 21-5). Las dietas con bajo contenido de fructosa, sorbitol y sacarosa son beneficiosas para ambas enfermedades. Una consecuencia de la intolerancia hereditaria a la fructosa, y de una enfermedad vinculada como resultado de deficiencia de fructosa 1,6-bisfosfatasa es la hipoglucemia inducida por fructosa a pesar de la presencia de reservas altas de glucógeno, debido a que las fructosas 1-fosfato y 1,6 bisfosfato inhiben de modo alostérico la fosforilasa hepática. El secuestro de fosfato inorgánico también conduce a agotamiento de ATP e hiperuricemia. La fructosa y el sorbitol en el cristalino se relacionan con catarata de origen diabético En personas con diabetes mellitus hay concentraciones aumentadas tanto de fructosa como de sorbitol en el cristalino que quizás estén implicadas en la patogenia de la catarata diabética. La formación de fructosa a partir de glucosa depende de la vía del sorbitol (poliol) (que no se encuentra en el hígado) (fig. 21-5); la actividad de dicha vía se incrementa a medida que la concentración de glucosa aumenta en los tejidos que no son sensibles a la insulina, es decir, el cristalino, los nervios periféricos y los glomérulos renales. La aldosa reductasa reduce la glucosa a sorbitol, lo cual va seguido por oxidación de este último hacia fructosa en presencia de NAD+ y sorbitol deshidrogenasa (poliol deshidrogenasa). El sorbitol no se difunde a través de las membranas celulares, sino que se acumula, lo que causa daño de origen osmótico. Al mismo tiempo, hay decremento de las cifras de mioinositol. La acumulación de sorbitol y el agotamiento de mioinositol, así como la catarata diabética, se pueden prevenir mediante inhibidores de la aldosa reductasa en animales de experimentación, pero hasta la fecha no hay evidencia de que los inhibido- 21 Bender.indd 182 res sean eficaces para prevenir catarata o neuropatía diabética en seres humanos. Las deficiencias de enzima en la vía de la galactosa causan galactosemia En las galactosemias hay incapacidad para metabolizar galactosa, y pueden producirse por defectos hereditarios de la galactocinasa, uridil transferasa, o 4-epimerasa (fig. 21-6A), aunque la deficiencia de uridil transferasa es la mejor conocida. La galactosa es un sustrato para la aldosa reductasa, lo que forma galactitol, que se acumula en el cristalino y ocasiona catarata. La enfermedad general es más grave si depende de un defecto de la uridil transferasa, puesto que se acumula galactosa 1-fosfato y agota el fosfato inorgánico en el hígado; por último sobrevienen insuficiencia hepática y deterioro mental. En la deficiencia de uridil transferasa, la epimerasa está presente en cantidades adecuadas, de manera que el paciente galactosémico aún puede formar UDPGal a partir de la glucosa. Esto explica cómo es posible que los niños afectados tengan crecimiento y desarrollo normales pese a las dietas libres de galactosa usadas para controlar los síntomas de la enfermedad. rESuMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ La vía de la pentosa fosfato, presente en el citosol, puede explicar la oxidación completa de glucosa, lo que produce NADPH y CO2, no así ATP. La vía tiene una fase oxidativa, que es irreversible y genera NADPH, y una fase no oxidativa, que es reversible y proporciona precursores de ribosa para la síntesis de nucleótido. La vía completa sólo se encuentra en los tejidos que tienen un requerimiento de NADPH para síntesis reductivas, por ejemplo, lipogénesis o esteroidogénesis, mientras que la fase no oxidativa está presente en todas las células que requieren ribosa. En los eritrocitos, la vía tiene una función importante en la prevención de la hemólisis al proporcionar NADPH para mantener el glutatión en el estado reducido como el sustrato para la glutatión peroxidasa. La vía del ácido urónico es la fuente de ácido glucurónico para conjugación de muchas sustancias endógenas y exógenas antes de excreción como glucurónidos en la orina y la bilis. La fructosa evita el principal paso regulador en la glucólisis, catalizado por la fosfofructocinasa, y estimula la síntesis de ácidos grasos y la secreción hepática de triacilglicerol. La galactosa se sintetiza a partir de la glucosa en la glándula mamaria durante la lactancia y en otros tejidos donde es necesaria para la síntesis de glucolípidos, proteoglucanos y glucoproteínas. rEFErENCiAS Ali M, Rellos P, Cox TM: Hereditary fructose intolerance. J Med Gen 1998;35:353. Cappellini MD, Fiorelli G: Glucose 6-phosphate dehydrogenase deficiency. Lancet 2008;371:64. Dunlop M: Aldose reductase and the role of the polyol pathway in diabetic nephropathy. Kidney Int 2000;77:S3. Hers HG, Hue L: Gluconeogenesis and related aspects of glycolysis. Annu Rev Bioche 1983;52:617. 27/11/09 14:13:58 cAPítulo 21 Horecker BL: The pentose phosphate pathway. J Biol Chem 2002;277:47965. Le KA, Tappy L: Metabolic effects of fructose. Curr Opin Clin Nutr Metab Care 2006;9:469. Leslie ND: Insights into the pathogenesis of galactosemia. Ann Rev Nutr 2003;23:59. 21 Bender.indd 183 183 La vía de la pentosa fosfato y otras vías del metabolismo de hexosas Mayes PA: Intermediary metabolism of fructose. Amer J Clin Nutr 1993;58:754. Van den Berghe G: Inborn errors of fructose metabolism. Ann Rev Nutr 1994;14:41. Wong D: Hereditary fructose intolerance. Mol Genet Metab 2005;85:165. 27/11/09 14:13:59 22 c Oxidación de ácidos grasos: cetogénesis Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA Aun cuando los ácidos grasos se oxidan hacia acetil-CoA y se sintetizan a partir de esta última, la oxidación de ácidos grasos no es la reversión de su biosíntesis, sino que es un proceso por completo diferente que tiene lugar en un compartimiento separado de la célula. La separación entre la oxidación de los ácidos grasos en las mitocondrias y la biosíntesis en el citosol permite que cada proceso se controle de modo individual y se integre con los requerimientos del tejido. Cada paso en la oxidación de ácidos grasos incluye derivados de acil-CoA, y es catalizado por enzimas separadas, utiliza NAD+ y FAD como coenzimas, y genera ATP. Es un proceso aerobio; requiere la presencia de oxígeno. El incremento en la oxidación aumentada de ácidos grasos es una característica de la inanición y de la diabetes mellitus, que conduce a la producción de cuerpos cetónicos por el hígado (cetosis). Los cuerpos cetónicos son ácidos, y cuando se producen en exceso durante periodos prolongados, como en la diabetes, dan por resultado cetoacidosis, que por último es mortal. Dado que la gluconeogénesis depende de la oxidación de ácidos grasos, cualquier deterioro de dicha oxidación da pie a hipoglucemia. Esto ocurre en diversos estados de deficiencia de carnitina o deficiencias de enzimas esenciales en la oxidación de ácidos grasos, por ejemplo, carnitina palmitoiltransferasa, o inhibición de la oxidación de ácidos grasos por venenos, por ejemplo, hipoglicina. LA OXIDACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS OCURRE EN LAS MITOCONDRIAS Los ácidos grasos se transportan en la sangre como ácidos grasos libres (AGL) Los AGL —también denominados ácidos grasos no esterificados— son ácidos grasos que se encuentran en el estado no esterificado. En el plasma, los AGL de cadena más larga se combinan con albúmina, y en la célula están fijos a una proteína de unión a ácido graso así que, de hecho, nunca son en realidad “libres”. Los ácidos grasos de cadena más corta son más hidrosolubles y existen como ácidos no ionizados o como aniones de ácidos grasos. Los ácidos grasos se activan antes de ser catabolizados Antes de que los ácidos grasos se puedan catabolizar deben convertirse en un intermediario activo; es el único paso en la degradación A P í t u l O completa de un ácido graso que necesita energía proveniente del ATP. En presencia de ATP y coenzima A, la enzima acil-CoA sintetasa (tiocinasa) cataliza la conversión de un ácido graso (o AGL) en un “ácido graso activo” o acil-CoA, que usa un fosfato de alta energía con la formación de AMP y PPi (fig. 22-1). La pirofosfatasa inorgánica hidroliza al PPi, con pérdida de otro fosfato de alta energía, lo que asegura que la reacción general continúe hasta que se complete. Las acil-CoA sintetasas se encuentran en el retículo endoplásmico, los peroxisomas, y dentro y sobre la membrana externa de las mitocondrias. Los ácidos grasos de cadena larga penetran en la membrana mitocondrial interna como derivados de carnitina La carnitina (β-hidroxi-γ-trimetilamonio butirato), (CH3)3N+— CH2—CH(OH)—CH2—COO−, se encuentra ampliamente distribuida, y es en particular abundante en el músculo. La acil-CoA de cadena larga (o AGL) no puede penetrar en la membrana interna de las mitocondrias. Sin embargo, en presencia de carnitina, la carnitina palmitoiltransferasa-I, ubicada en la membrana mitocondrial externa, convierte a la acil-CoA de cadena larga en acilcarnitina, que tiene la capacidad para penetrar la membrana interna y tener acceso al sistema de enzimas de la β-oxidación (fig. 22-1). La carnitina-acilcarnitina translocasa actúa como un transportador de intercambio en la membrana interna. La acilcarnitina es transportada hacia adentro, acoplada con el transporte hacia afuera de una molécula de carnitina. A continuación la acilcarnitina reacciona con la CoA, lo cual es catalizado por la carnitina palmitoiltransferasa-II, ubicada en el interior de la membrana interna, con lo que vuelve a formarse acil-CoA en la matriz mitocondrial, y se libera carnitina. LA β-OXIDACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS COMPRENDE DIVISIÓN SUCESIVA CON LIBERACIÓN DE ACETIL-CoA En la β-oxidación (fig. 22-2), dos carbonos a la vez se separan de moléculas de acil-CoA, empezando en el extremo carbonilo. La cadena se rompe entre los átomos de carbono α(2) y β(3) —de ahí el nombre β-oxidación—. Las unidades de dos carbonos que se for- 184 22 Bender.indd 184 27/11/09 14:14:51 CApítulo 22 ATP + CoA Acil-CoA Carnitina palmitoiltransferasa I Acil-CoA sintetasa Membrana mitocondrial externa CoA Acil-CoA Carnitina CoA Acilcarnitina Carnitina acilcarnitina translocasa Carnitina palmitoiltransferasa II Carnitina Acilcarnitina 185 La secuencia de reacción cíclica genera FADH2 y NADH AMP + PPi AGL Oxidación de ácidos grasos: cetogénesis Membrana mitocondrial interna Acilcarnitina β-oxidación Acil-CoA FIGuRA 22-1 Función de la carnitina en el transporte de ácidos grasos de cadena larga a través de la membrana mitocondrial interna. La acil-CoA de cadena larga no puede pasar por la membrana mitocondrial interna, pero su producto metabólico, la acilcarnitina, sí puede hacerlo. CoA H 3C SH α CO β Palmitoil-CoA H 3C S CoA α CO β CH3 S + CoA CO S CoA Acetil-CoA Varias enzimas, conocidas en conjunto como “ácido graso oxidasas”, se encuentran en la matriz mitocondrial o membrana interna adyacentes a la cadena respiratoria. Éstas catalizan la oxidación de acilCoA hacia acetil-CoA; el sistema está acoplado con la fosforilación de ADP hacia ATP (fig. 22-3). El primer paso es la eliminación de dos átomos de hidrógeno de los átomos de carbono 2(α) y 3(β), lo cual es catalizado por la acil-CoA deshidrogenasa, y requiere FAD. Esto origina la formación de Δ2-trans-enoil-CoA y FADH2. La reoxidación de FADH2 por la cadena respiratoria necesita la mediación de otra flavoproteína, llamada flavoproteína transferidora de electrón (cap. 12). Se añade agua para saturar el doble enlace y formar 3-hidroxiacilCoA, lo cual es catalizado por la Δ2-enoil-CoA hidratasa. El derivado 3-hidroxi pasa por otra deshidrogenación en el carbono 3, catalizado por la l(+)-3-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa para formar el compuesto 3-cetoacil-CoA correspondiente. En este caso, el NAD+ es la coenzima involucrada. Por último, la 3-cetoacil-CoA se rompe en la posición 2,3 por medio de la tiolasa (3-cetoacilCoA-tiolasa), lo que forma acetil-CoA y una nueva acil-CoA dos carbonos más corta que la molécula de acil-CoA original. La acilCoA formada en la reacción de división vuelve a entrar a la vía oxidativa en la reacción 2 (fig. 22-3). De este modo, un ácido graso de cadena larga puede degradarse por completo hacia acetil-CoA (unidades C2). Puesto que la acetil-CoA se puede oxidar hacia CO2 y agua mediante el ciclo del ácido cítrico (que también se encuentra dentro de las mitocondrias), se logra la oxidación completa de ácidos grasos. La oxidación de un ácido graso con un número impar de átomos de carbono da acetil-CoA más una molécula de propionil-CoA Los ácidos grasos con un número impar de átomos de carbono se oxidan por medio de la vía de la β-oxidación, lo que produce acetilCoA, hasta que queda un residuo de tres carbonos (propionil-CoA). Este compuesto se convierte en succinil-CoA, un constituyente del ciclo del ácido cítrico (fig. 20-2). En consecuencia, el residuo propionilo de un ácido graso de cadena impar es la única parte glucogénica de un ácido graso. Eliminación sucesiva de unidades de acetil-CoA (C2) 8 CH3 CO S CoA Acetil-CoA FIGuRA 22-2 Perspectiva general de la β-oxidación de ácidos grasos. man son acetil-CoA; así, la palmitoil-CoA forma ocho moléculas de acetil-CoA. 22 Bender.indd 185 La oxidación de ácidos grasos produce una gran cantidad de ATP El transporte en la cadena respiratoria de electrones desde FADH2 y NADH lleva a la síntesis de cuatro fosfatos de alta energía (cap. 13) para cada uno de los siete ciclos necesarios para la desintegración de palmitato hacia acetil-CoA (7 × 4 = 28). Se forma un total de 8 mol de acetil-CoA y cada uno da lugar a 10 mol de ATP en el momento de la oxidación en el ciclo del ácido cítrico, lo que hace 8 × 10 = 80 mol. Dos deben sustraerse para la activación inicial del ácido graso, lo que da una ganancia neta de 106 moles de ATP por cada mol 27/11/09 14:14:52 186 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos O 3 R CH2 2 CH2 cis O– C O cis 12 C 9 Ácido graso CoA ATP SH Acil-CoA sintetasa 1 R 3 2 CH2 CH2 Tres ciclos de β-oxidación AMP + PPi C S CoA cis Acil-CoA cis 6 CH2 ns C S CoA 3 2 CH 1.5 CH FADH2 C S P Cadena respiratoria CoA 1 Ciclo de β-oxidación H2O cis 4 2 tra H 2O ∆ -Enoil-CoA hidratasa R 3 CH C S CoA ∆2-trans-∆4-cis-Dienoil-CoA H+ + NADPH O 2 Acetil-CoA O 2 OH CH2 C S CoA 2 ns ∆ -trans-Enoil-CoA 3 S (Etapa de β-oxidación ∆2-trans-Enoil-CoA) Acil-CoA deshidrogenasa R C ∆2-trans-∆6-cis-Dienoil-CoA FAD O CoA O Acil-CoA 2 S 2 tra 2 CH2 C 3 ∆3-cis (o trans) → ∆2-trans-Enoil-CoA isomerasa O 3 O cis 6 Transportador de carnitina C Lado M (dentro) R 3 Acetil-CoA ∆3-cis-∆6-cis-Dienoil-CoA Lado C (fuera) Membrana mitocondrial interna CoA Linoleil-CoA Mg2+ O S CoA NADP L(+)-3-Hidroxi- Acil-CoA deshidrogenasa ∆4-cis-Enoil-CoA ∆2-trans-∆4-cis-Dienoil-CoA reductasa + acil-CoA NAD+ O R 3 C NADH + H+ O 2 CH2 C S Cadena respiratoria P H2O CoA C S ∆3-trans-Enoil-CoA ∆3-cis (o trans) → ∆2-trans-Enoil-CoA isomerasa 3-Cetoacil-CoA CoA 5 SH Tiolasa O O O S Acil-CoA CoA + CH3 C S CoA Acetil-CoA Ciclo del ácido cítrico 2CO2 FIGuRA 22-3 β-oxidación de ácidos grasos. La acil-CoA de cadena larga pasa por ciclos a través de reacciones  a ; cada ciclo, la tiolasa separa acetil-CoA (reacción ). Cuando el radical acilo sólo tiene cuatro átomos de carbono de longitud, se forman dos moléculas de acetil-CoA en la reacción . 22 Bender.indd 186 S CoA 2 ns C C tra R CoA ns 2.5 tra 4 O 3 L(+)-3-HidroxiacilCoA deshidrogenasa ∆2-trans-Enoil-CoA 4 Ciclos de β-oxidación 5 Acetil-CoA FIGuRA 22-4 Secuencia de reacciones en la oxidación de ácidos grasos insaturados, por ejemplo, ácido linoleico. Los ácidos grasos Δ4-cis o los ácidos grasos que forman Δ4- cis-enoil-CoA entran a la vía en la posición mostrada. El NADPH para el paso de la dienoil-CoA reductasa es proporcionado por fuentes intramitocondriales, como la glutamato deshidrogenasa, isocitrato deshidrogenasa y NAD(P)H transhidrogenasa. 27/11/09 14:14:55 CApítulo 22 Oxidación de ácidos grasos: cetogénesis de palmitato, o 106 × 51.6* = 5 470 kJ; esto representa 68% de la energía libre de combustión del ácido palmítico. O CH3 LA OXIDACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS INSATURADOS OCURRE POR MEDIO DE UNA VÍA DE β-OXIDACIÓN MODIFICADA Los ésteres CoA de estos ácidos se degradan mediante las enzimas que en circunstancias normales se encargan de la β-oxidación hasta que se forma un compuesto Δ3-cis-acil-CoA o uno Δ4-cis-acil-CoA, según la posición de los dobles enlaces (fig. 22-4). El compuesto anterior se isomeriza (Δ3cis → Δ2-trans-enoil-CoA isomerasa) hacia la etapa de β-oxidación Δ2-trans-CoA correspondiente para hidratación y oxidación subsiguientes. Cualquier Δ4-cis-acil-CoA que quede, como en el caso del ácido linoleico, o que entre a la vía en este punto después de conversión por la acil-CoA deshidrogenasa hacia Δ2-trans-Δ4-cis-dienoil-CoA, luego se metaboliza como se indica en la figura 22-4. LA CETOGÉNESIS SUCEDE CUANDO HAY UN ÍNDICE ALTO DE OXIDACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS EN EL HÍGADO En condiciones metabólicas relacionadas con un índice alto de oxidación de ácidos grasos, el hígado produce considerables cantidades de acetoacetato y D (–)-3-hidroxibutirato (β-hidroxibutirato). El acetoacetato pasa de manera continua por descarboxilación espontánea para dar acetona. Estas tres sustancias se conocen en conjunto como cuerpos cetónicos (también denominados cuerpos de aceto- *ΔG para la reacción de ATP, como se explica en el capítulo 18. 22 Bender.indd 187 C CH3 Acetona CO2 Es po ntá ne a Los peroxisomas oxidan ácidos grasos de cadena muy larga Una forma modificada de β-oxidación se encuentra en los peroxisomas, y conduce a la formación de acetil-CoA y H2O2 (a partir del paso de deshidrogenasa enlazado a flavoproteína), que se desintegra mediante catalasa (cap. 12). Así, esta deshidrogenación en peroxisomas no está enlazada de modo directo a fosforilación y la generación de ATP. El sistema facilita la oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga (p. ej., C20, C22). Estas enzimas se inducen por dietas con alto contenido de grasa, y en algunas especies por fármacos hipolipemiantes como el clofibrato. Las enzimas en peroxisomas no atacan a ácidos grasos de cadena más corta; la secuencia de β-oxidación termina en octanoil-CoA. Los grupos octanoilo y acetilo se oxidan ambos en las mitocondrias. Otra función de la β-oxidación peroxisómica es acortar la cadena lateral de colesterol en la formación de ácido biliar (cap. 26). Asimismo, los peroxisomas participan en la síntesis de glicerolípidos éter (cap. 24), colesterol y dolicol (fig. 26-2). 187 O CH3 C CH2 COO– Acetoacetato D(–)-3-Hidroxibutirato deshidrogenasa NADH + H+ OH NAD+ CH3 CH CH2 COO– D(–)-3-Hidroxibutirato FIGuRA 22-5 Interrelaciones de los cuerpos cetónicos. La D (–)-3-hidroxibutirato deshidrogenasa es una enzima mitocondrial. na o [de modo incorrecto*] “cetonas”) (fig. 22-5). El acetoacetato y el 3-hidroxibutirato son interconvertidos por la enzima mitocondrial D(–)-3-hidroxibutirato deshidrogenasa; el equilibrio es controlado por la proporción [NAD+]/[NADH] mitocondrial, es decir, el estado de redox. La concentración de cuerpos cetónicos totales en la sangre de mamíferos bien alimentados por lo normal no excede 0.2 mmol/L excepto en rumiantes, en los cuales se forma de manera continua 3-hidroxibutirato a partir de ácido butírico (un producto de la fermentación en el rumen) en la pared del rumen. In vivo, el hígado parece ser el único órgano en no rumiantes que contribuye con cantidades importantes de cuerpos cetónicos a la sangre. Los tejidos extrahepáticos los utilizan como sustratos respiratorios. El flujo neto de cuerpos cetónicos desde el hígado hacia los tejidos extrahepáticos da por resultado síntesis hepática activa, junto con utilización muy baja. Ocurre la situación inversa en tejidos extrahepáticos (fig. 22-6). La 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) es un intermediario en la vía de la cetogénesis Las enzimas de las cuales depende la formación de cuerpos cetónicos se relacionan sobre todo con las mitocondrias. Dos moléculas de acetil-CoA formadas en la β-oxidación se condensan entre sí para formar acetoacetil-CoA por medio de una reversión de la reacción de la tiolasa. La acetoacetil-CoA, que es el material inicial para la cetogénesis, también surge de modo directo a partir de los cuatro carbonos terminales de un ácido graso en el transcurso de la β-oxidación (fig. 22-7). La condensación de acetoacetil-CoA con otra molécula de acetil-CoA mediante la 3-hidroxi-3-metilglutarilCoA sintasa forma 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA). *El término “cetonas” no debe usarse porque el 3-hidroxibutirato no es una cetona y hay cetonas en la sangre que no son cuerpos cetónicos, como el piruvato y la fructosa. 27/11/09 14:14:56 188 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Hígado Sangre Acil-CoA AGL Tejidos extrahepáticos Glucosa Glucosa Orina Acetil-CoA Cuerpos cetónicos Acetil-CoA Cuerpos cetónicos Cuerpos cetónicos Acetona Ciclo del ácido cítrico FIGuRA 22-6 Formación, utilización y excreción de cuerpos cetónicos. (Las flechas continuas indican la principal vía.) Acil-CoA Ciclo del ácido cítrico Pulmones 2CO2 2CO2 AGL ATP CoA Acil-CoA sintetasa Esterificación Acil-CoA β oxidación (Acetil-CoA)n O CH3 Fosfolípido triacilglicerol O C CH2 C S CoA Acetoacetil-CoA CoA Tiolasa HMG-CoA sintasa SH H2O CH3 O *CH3 *C S CoA CoA SH Acetil-CoA CH3 O OH CO S C CH2 C S CoA *CH2 *COO– 3-Hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) HMG-CoA liasa CoA Acetil-CoA Ciclo del ácido cítrico O CH3 C *CH2 *COO– Acetoacetato 2CO2 NADH + H+ D(–)-3-Hidroxibutirato deshidrogenasa NAD+ OH FIGuRA 22-7 Vías de la cetogénesis en el hígado. (AGL, ácidos grasos libres.) 22 Bender.indd 188 CH3 CH *CH2 *COO– D(–)-3-Hidroxibutirato 27/11/09 14:14:58 CApítulo 22 La 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA liasa hace entonces que la acetilCoA se separe de la HMG-CoA, lo que deja acetoacetato libre. Los átomos de carbono separados en la molécula de acetil-CoA se derivan de la molécula de acetoacetil-CoA original. Ambas enzimas deben estar presentes en las mitocondrias para que tenga lugar la cetogénesis. Esto sólo ocurre en el hígado y el epitelio del rumen. Desde el punto de vista cuantitativo, el D(–)-3-hidroxibutirato es el cuerpo cetónico predominante presente en la sangre y la orina cuando hay cetosis. Oxidación de ácidos grasos: cetogénesis 189 Cuando sucede esto, una proporción grande del consumo de oxígeno puede explicarse por la oxidación de cuerpos cetónicos. En la mayor parte de los casos, la cetonemia se debe a incremento de la producción de cuerpos cetónicos por el hígado, más que a una deficiencia de su utilización por los tejidos extrahepáticos. Aun cuando los tejidos extrahepáticos oxidan con facilidad el acetoacetato y el D(–)-3-hidroxibutirato, la acetona es difícil de oxidar in vivo, y en gran parte se volatiliza en los pulmones. En la cetonemia moderada, la pérdida de cuerpos cetónicos por medio de la orina sólo es un porcentaje bajo de la producción y utilización totales de cuerpos cetónicos. Dado que hay efectos parecidos a umbral renal (no hay un umbral verdadero) que varían entre especies e individuos, el método preferido para evaluar la gravedad de la cetosis es la medición de la cetonemia, no de la cetonuria. Los cuerpos cetónicos sirven como un combustible para tejidos extrahepáticos Si bien un mecanismo enzimático activo produce acetoacetato a partir de acetoacetil-CoA en el hígado, el acetoacetato, una vez formado, no se puede reactivar de manera directa salvo en el citosol, donde se usa en una vía mucho menos activa como un precursor en la síntesis de colesterol. Esto explica la producción neta de cuerpos cetónicos por el hígado. En tejidos extrahepáticos, el acetoacetato se activa hacia acetoacetil-CoA por medio de la succinil-CoA-acetoacetato CoA transferasa. La CoA se transfiere desde la succinil-CoA para formar acetoacetil-CoA (fig. 22-8). Con la adición de una CoA, la acetoacetil-CoA se divide en dos acetil-CoA mediante tiolasa, y se oxida en el ciclo del ácido cítrico. Si hay incremento de las cifras sanguíneas, la oxidación de cuerpos cetónicos aumenta hasta que, a una concentración de alrededor de 12 mmol/L, saturan la maquinaria oxidativa. LA CETOGÉNESIS ESTÁ REGULADA EN TRES PASOS CRUCIALES 1. La cetosis no sucede in vivo a menos que haya un aumento de las cifras de AGL circulantes que surgen a partir de lipólisis de triacilglicerol en tejido adiposo. los AGl son los precursores de cuerpos cetónicos en el hígado; este último, en condiciones tanto posprandiales como de ayuno, extrae alrededor de 30% de los AGL que pasan por él, de modo que a concentraciones altas el flujo que pasa hacia el hígado es considerable. por ende, los factores que regulan la movilización de AGl desde el tejido adiposo son importantes en el control de la cetogénesis (figs. 22-9 y 25-8). Tejidos extrahepáticos, por ejemplo, músculo AGL Acil-CoA β-Oxidación Acetil-CoA Hígado Acetil-CoA Tiolasa Acetoacetil-CoA Succinato CoA transferasa HMG-CoA Acetoacetato NADH + H+ NAD+ 3-Hidroxibutirato FIGuRA 22-8 OAA Ciclo del ácido cítrico Citrato SuccinilCoA 2CO2 Acetoacetato + NADH + H NAD+ 3-Hidroxibutirato Transporte de cuerpos cetónicos desde el hígado y vías de utilización y oxidación en tejidos extrahepáticos. 22 Bender.indd 189 27/11/09 14:14:59 190 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Triacilglicerol Tejido adiposo 1 Lipólisis AGL Sangre AGL Hígado Puerta de CPT-I Acil-CoA 2 Esterificación b-Oxidación Acilgliceroles Acetil-CoA 3 Ciclo del ácido cítrico Cetogénesis CO2 Cuerpos cetónicos FIGuRA 22-9 Regulación de la cetogénesis.  a  muestran tres pasos cruciales en la vía del metabolismo de AGL que determinan la magnitud de la cetogénesis. (CPT-I, carnitina palmitoiltransferasa-I.) 2. Después de su captación por el hígado, los AGL son objeto de β-oxidación hacia CO2 o cuerpos cetónicos, o de esterificación hacia triacilglicerol y fosfolípido. Hay regulación de la entrada de ácidos grasos hacia la vía oxidativa mediante la carnitina palmitoiltransferasa-I (CPT-I), y el resto de los ácidos grasos captados se esterifica. La actividad de CPT-I es baja en el estado posprandial, lo que da pie a depresión de la oxidación de ácidos grasos, y alta en la inanición, lo que permite que haya incremento de la oxidación de ácidos grasos. La malonil-CoA, el intermediario inicial en la biosíntesis de ácidos grasos (fig. 23-1), formado por la acetil-CoA carboxilasa en el estado posprandial, es un potente inhibidor de la CPT-I (fig. 22-10). En estas circunstancias, los FFA entran a la célula hepática en cifras bajas, y casi todos se esterifican hacia acilgliceroles y se transportan hacia afuera del hígado en lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL). Empero, conforme la concentración de AGL aumenta con el inicio de inanición, la acil-CoA inhibe de manera directa a la acetil-CoA carboxilasa, y la [malonil-CoA] disminuye, lo que libera la inhibición de la CPT-I y permite que más acil-CoA pase por β-oxidación. Estos eventos se refuerzan en la inanición por un decremento de la proporción [insulina]/[glucagon]. Así, la β-oxidación por AGL está controlada por la compuerta de CPT-I hacia la mitocondria, y el saldo de la captación de AGL no oxidado es esterificado. 3. Por su parte, la acetil-CoA formada en la β-oxidación se oxida en el ciclo del ácido cítrico, o entra en la vía de la cetogénesis para formar cuerpos cetónicos. A medida que las cifras de AGL séricos se incrementan, proporcionalmente más AGL se convierte en cuerpos cetónicos, y menos se oxida por medio del ciclo del ácido cítrico hacia CO2. La distribución de acetil-CoA entre la vía cetogénica y la Glucosa Sangre AGL VLDL Hígado Acilgliceroles Acetil-CoA − + Lipogénesis ión ac Insulina Acil-CoA fic eri t Es Acetil-CoA carboxilasa Citosol − Glucagon Malonil-CoA Carnitina palmitoiltransferasa I − Mem mito bran a con dri al Palmitato Acil-CoA FIGuRA 22-10 Regulación de la oxidación de ácidos grasos de cadena larga en el hígado. (AGL, ácidos grasos libres; VLDL, lipoproteína de muy baja densidad.) Los efectos reguladores positivo ( ) y negativo ( ) están representados mediante flechas discontinuas y el flujo de sustrato por flechas continuas. 22 Bender.indd 190 Mitocondria b -Oxidación to Ce s esi n gé Acetil-CoA CO2 Cuerpos cetónicos 27/11/09 14:15:02 CApítulo 22 vía de oxidación hacia CO2 está regulada de modo que la energía libre total captada en ATP que se produce por la oxidación de AGL permanece constante conforme su concentración en el suero cambia. Esto se aprecia cuando se comprende que la oxidación completa de 1 mol de palmitato implica una producción neta de 106 mol de ATP mediante β-oxidación y producción de CO2 en el ciclo del ácido cítrico (véase antes), mientras que sólo se producen 26 mol de ATP cuando el acetoacetato es el producto terminal, y sólo 21 mol cuando el 3-hidroxibutirato es dicho producto. De esta manera, la cetogénesis puede considerarse un mecanismo que permite al hígado oxidar cantidades crecientes de ácidos grasos dentro de las restricciones de un sistema estrechamente acoplado de fosforilación oxidativa. Una disminución de las cifras de oxaloacetato, en particular dentro de la mitocondria, es posible que altere la capacidad del ciclo del ácido cítrico para metabolizar acetil-CoA y desviar la oxidación de ácidos grasos hacia la cetogénesis. Esa disminución puede ocurrir debido a un aumento de la proporción [NADH]/[NAD+] suscitado por incremento de la β-oxidación de ácidos grasos que afecta el equilibrio entre oxaloacetato y malato, lo que lleva a un decremento de la concentración de oxaloacetato, y cuando la gluconeogénesis está alta, lo que sobreviene cuando las cifras sanguíneas de glucosa son bajas. La activación de piruvato carboxilasa, que cataliza la conversión de piruvato en oxaloacetato, por medio de acetil-CoA, alivia en forma parcial este problema, pero en circunstancias como inanición y diabetes mellitus no tratada, los cuerpos cetónicos se producen en exceso, lo que origina cetosis. ASPECTOS CLÍNICOS La oxidación de ácidos grasos alterada da lugar a enfermedades asociadas con hipoglucemia La deficiencia de carnitina puede aparecer sobre todo en el recién nacido —de modo particular en lactantes pretérmino— debido a biosíntesis inadecuada o escape renal. Las pérdidas también llegan a suceder en la hemodiálisis. Ello sugiere que en algunos enfermos el requerimiento de carnitina en la dieta es parecido al de una vitamina. Los síntomas de deficiencia son hipoglucemia, que es una consecuencia de oxidación alterada de ácidos grasos, y acumulación de lípido con debilidad muscular. El tratamiento consta de complementos de carnitina por vía bucal. La deficiencia hereditaria de Cpt-I sólo afecta el hígado y ocasiona una reducción en la oxidación de ácidos grasos y cetogénesis acompañada de hipoglucemia. La deficiencia de Cpt-II afecta de modo primario el músculo estriado y, cuando es grave, el hígado. Los medicamentos sulfonilurea (gliburida [glibenclamida] y tolbutamida), usados en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2, reducen la oxidación de ácidos grasos y, por consiguiente, la hiperglucemia al inhibir la CPT-I. Los defectos hereditarios de las enzimas de la β-oxidación y de la cetogénesis también llevan a hipoglucemia no cetósica, coma e hígado graso. Se conocen defectos en la 3-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa de cadenas larga y corta (la deficiencia de la enzima de cadena larga puede ser una causa de hígado graso agudo del embarazo). La deficiencia de 3-cetoacil-CoA tiolasa y de HMG-CoA 22 Bender.indd 191 Oxidación de ácidos grasos: cetogénesis 191 liasa también afecta la degradación de leucina, un aminoácido cetogénico (cap. 29). La enfermedad del vómito jamaicano se produce por comer la fruta no madura del árbol Blighia sapida, que contiene la toxina hipoglicina, la cual inactiva a la acil-CoA deshidrogenasa de cadenas media y corta, lo que inhibe la β-oxidación y origina hipoglucemia. La aciduria dicarboxílica se caracteriza por la excreción de ácidos C6–C10 ω-dicarboxílicos y por hipoglucemia no cetósica, y se produce por una falta de acil-CoA deshidrogenasa de cadena media mitocondrial. La enfermedad de Refsum es un raro trastorno neurológico debido a un defecto metabólico que causa la acumulación de ácido fitánico, que se encuentra en productos lácteos, y en la grasa y carne de rumiantes. Se cree que dicho ácido tiene efectos patológicos sobre la función de membrana, la prenilación de proteína y la expresión de gen. El síndrome de Zellweger (cerebrohepatorrenal) ocurre en individuos que tienen una rara falta hereditaria de peroxisomas en todos los tejidos. Acumulan ácidos C26–C38 polienoicos en el tejido cerebral, y muestran una pérdida generalizada de funciones de peroxisomas. La enfermedad suscita síntomas neurológicos graves y la mayoría de los sujetos muere en el transcurso del primer año de vida. La cetoacidosis se produce por cetosis prolongada La presencia de cantidades más altas que lo normal de cuerpos cetónicos en la sangre o la orina constituye la cetonemia (hipercetonemia) o cetonuria, respectivamente. El estado general se llama cetosis. La forma básica de la cetosis sucede en la inanición, y comprende agotamiento de los carbohidratos disponibles junto con movilización de AGL. Este modelo general de metabolismo se exagera para producir los estados patológicos que se encuentran en la diabetes mellitus, la forma tipo 2 de la cual es cada vez más frecuente en países occidentales; la enfermedad de los corderos gemelos, y la cetosis en ganado vacuno lactando. Las formas no patológicas de cetosis se encuentran en situaciones de alimentación con alto contenido de grasa, y luego de ejercicio intenso durante el estado posterior a la absorción. Los ácidos acetoacético y 3-hidroxibutírico son moderadamente fuertes y deben amortiguarse cuando están presentes en sangre u otros tejidos. Con todo, su excreción continua en gran cantidad agota de manera progresiva la reserva de álcalis, lo que produce cetoacidosis. Esto puede ser mortal en la diabetes mellitus no controlada. RESuMEN ■ ■ La oxidación de ácidos grasos en las mitocondrias conduce a la generación de grandes cantidades de ATP mediante un proceso llamado β-oxidación que divide unidades de acetil-CoA de modo secuencial a partir de cadenas de acil graso. La acetil-CoA se oxida en el ciclo del ácido cítrico, lo que genera más ATP. Los cuerpos cetónicos (acetoacetato, 3-hidroxibutirato y acetona) se forman en las mitocondrias hepáticas, cuando hay un alto índice de oxidación de ácidos grasos. La vía de la cetogénesis incluye síntesis y degradación de 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) por medio de dos enzimas clave, la HMG-CoA sintasa y la HMG-CoA liasa. 27/11/09 14:15:02 192 ■ ■ ■ ■ SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Los cuerpos cetónicos son combustibles importantes en tejidos extrahepáticos. La cetogénesis está regulada en tres pasos cruciales: 1) el control de la movilización de AGL desde el tejido adiposo; 2) la actividad de la carnitina palmitoiltransferasa-I en el hígado, que determina la proporción del flujo de ácidos grasos que se oxida en lugar de esterificarse, y 3) partición de acetil-CoA entre la vía de la cetogénesis y el ciclo del ácido cítrico. Las enfermedades relacionadas con deterioro de la oxidación de ácidos grasos llevan a hipoglucemia, infiltración grasa de órganos, e hipocetonemia. La cetosis es leve en la inanición pero grave en la diabetes mellitus y en la cetosis de rumiantes. 22 Bender.indd 192 REFERENCIAS Eaton S, Bartlett K, Pourfarzam M: Mammalian mitochondrial β-oxidation. Biochem J 1996;320:345. Fukao T, Lopaschuk GD, Mitchell GA: Pathways and control of ketone body metabolism: on the fringe of lipid metabolism. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids 2004;70:243. Gurr MI, Harwood JL, Frayn K: Lipid Biochemistry. Blackwell Publishing, 2002. Reddy JK, Mannaerts GP: Peroxisomal lipid metabolism. Annu Rev Nutr 1994;14:343. Scriver CR et al (editors): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. McGraw-Hill, 2001. Wood PA: Defects in mitochondrial beta-oxidation of fatty acids. Curr Opin Lipidol 1999;10:107. 27/11/09 14:15:03 23 c Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los ácidos grasos se sintetizan por medio de un sistema extramitocondrial, que se encarga de la síntesis completa de palmitato a partir de acetil-CoA en el citosol. En casi todos los mamíferos, la glucosa es el sustrato primario para la lipogénesis, pero en rumiantes es el acetato, la principal molécula combustible producida por la dieta. En seres humanos no se han informado enfermedades cruciales de la vía. Sin embargo, en la diabetes mellitus tipo 1 (insulinodependiente) hay inhibición de la lipogénesis, y las variaciones de su actividad influyen sobre la naturaleza y extensión de la obesidad. Los ácidos grasos insaturados en fosfolípidos de la membrana celular tienen importancia en el mantenimiento de la fluidez de la membrana. Se considera que una proporción entre ácidos grasos poliinsaturados y saturados (proporción P:S) alta en la dieta es beneficiosa para prevenir cardiopatía coronaria. Los tejidos animales tienen capacidad limitada para desaturar ácidos grasos, y requieren ciertos ácidos grasos poliinsaturados provenientes de la dieta, derivados de vegetales. Estos ácidos grasos esenciales (EFA) se usan para formar ácidos grasos eicosanoicos (C20), que dan lugar a los eicosanoides prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos y lipoxinas. Las prostaglandinas median la inflamación y el dolor e inducen el sueño; también regulan la coagulación de la sangre y la reproducción. Los antiinflamatorios no esteroideos (AINE), como el ácido acetilsalicílico (aspirina) y el ibuprofeno, actúan al inhibir la síntesis de prostaglandina. Los leucotrienos tienen propiedades de contracción muscular y quimiotácticas, y son importantes en reacciones alérgicas e inflamación. LA PRINCIPAL VÍA PARA LA SÍNTESIS DE NOVO DE ÁCIDOS GRASOS (LIPOGÉNESIS) OCURRE EN EL CITOSOL Este sistema está presente en muchos tejidos, entre ellos hepático, renal, pulmonar, de la glándula mamaria y adiposo. Sus requerimientos de cofactor incluyen NADPH, ATP, Mn2+, biotina y HCO3– (una fuente de CO2). La acetil-CoA es el sustrato inmediato y el palmitato libre es el producto terminal. La producción de malonil-CoA es el paso inicial y controlador en la síntesis de ácidos grasos El bicarbonato como una fuente de CO2 se necesita en la reacción inicial para la carboxilación de la acetil-CoA hacia malonil-CoA en A P í t u l o presencia de ATP y acetil-CoA carboxilasa. Esta última tiene un requerimiento de la vitamina B biotina (fig. 23-1). La enzima es una proteína multienzimática que contiene un número variable de subunidades idénticas, cada una de las cuales contiene biotina, biotina carboxilasa, proteína acarreadora de carboxilo biotina y transcarboxilasa, así como un sitio alostérico regulador. La reacción tiene lugar en dos pasos: 1) carboxilación de biotina que comprende ATP, y 2) transferencia del grupo carboxilo hacia la acetil-CoA para formar malonil-CoA. El complejo de ácido graso sintasa es un polipéptido que contiene siete actividades enzimáticas En bacterias y vegetales, las enzimas individuales del sistema de la ácido graso sintasa están separadas, y los radicales acilo se encuentran en combinación con la proteína acarreadora de acilo (ACP). Empero, en vertebrados, el sistema de sintasa es un complejo polipeptídico de múltiples enzimas que incorpora ACP, que asume la función de CoA. Contiene la vitamina ácido pantoténico en forma de 4ʹ-fosfopanteteína (fig. 44-18). El uso de una unidad funcional de múltiples enzimas plantea las ventajas de lograr el efecto de compartamentalización del proceso dentro de la célula sin erigir barreras de permeabilidad y la síntesis de todas las enzimas en el complejo está coordinada, dado que un solo gen la codifica. En mamíferos, el complejo de ácido graso sintasa es un dímero que incluye dos monómeros idénticos, cada uno de los cuales contiene siete actividades enzimáticas de ácido graso sintasa en una cadena polipeptídica (fig. 23-2). Al principio, una molécula preparadora de acetil-CoA se combina con un grupo —SH de cisteína, lo cual es catalizado por la acetil transacilasa (fig. 23-3, reacción 1a). La malonil-CoA se combina con el —SH adyacente en la 4ʹ-fosfopanteteína de la ACP del otro monómero, lo cual es catalizado por la malonil transacilasa (reacción 1b), para formar la enzima acetil (acil)-malonil. El grupo acetilo ataca al grupo metileno del residuo malonilo, lo cual es catalizado por la 3-cetoacil sintasa, y libera CO2; esto forma enzima 3-cetoacil (enzima acetoacetil) (reacción 2) y libera el grupo —SH de la cisteína. La descarboxilación permite que la reacción avance hasta que se completa, lo que impulsa toda la secuencia de reacciones en dirección anterógrada. El grupo 3-cetoacilo se reduce, deshidrata y reduce de nuevo (reacciones 3, 4, 5) para formar la acil-S-enzima saturada correspondiente. Una nueva molécula de malonil-CoA se combina con el —SH de la 4ʹ-fosfopanteteína, lo que desplaza el residuo acilo saturado sobre el grupo —SH de cisteína libre. La secuencia de reacciones se repite seis veces 193 23 Bender.indd 193 27/11/09 14:15:59 194 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos CH3 CO S – CoA OOC Acetil-CoA biotina COO– CH3CO ⋅ S ⋅ CoA + 7HOOC ⋅ CH CO ⋅ S ⋅ CoA + 14NADPH + 14H+ → CH3 (CH2 )14 COOH + 7CO2 + 6H2O + 8CoA ⋅ SH + 14NADP + La principal fuente de NADPH para la lipogénesis es la vía de la pentosa fosfato El NADPH está involucrado como donador de equivalentes reductores en la reducción de derivados tanto 3-cetoacilo como de 2,3-acilo insaturado (fig. 23-3, reacciones 3 y 5). Las reacciones oxidativas de la vía de la pentosa fosfato (cap. 21) son la principal fuente del Enoil reductasa n Divisió al funcion ACP SH División de SH subunidad ACP Tioesterasa 4′-fosfopanteteína Cis Tioesterasa biotina Cetoacil reductasa Cetoacil sintasa 2. CoA ATP + HCO3– Acetil transacilasa 4′-fosfopanteteína S La acetil-CoA que se usa como un preparador forma los átomos de carbono 15 y 16 del palmitato. La adición de todas las unidades C2 subsiguientes se efectúa mediante la malonil-CoA. La propionil-CoA actúa como un preparador para la síntesis de ácidos grasos de cadena larga que tienen un número impar de átomos de carbono, que se encuentran sobre todo en la grasa y la leche de rumiantes. Hidratasa Malonil transacilasa 1. Enz ADP + Pi más hasta que se ha montado un radical acilo de 16 carbonos saturado (palmitil). Se libera del complejo enzimático mediante la actividad de una séptima enzima en el complejo, la tioesterasa (desacilasa). Es necesario que el palmitato libre se active hacia acilCoA antes de que pueda proceder por medio de cualquier otra vía metabólica. Su destino habitual es la esterificación hacia acilgliceroles, alargamiento o desaturación de cadena, o esterificación hacia colesteril éster. En la glándula mamaria hay una tioesterasa separada específica para residuos acilo de C8, C10 o C12, que después se encuentra en los lípidos de la leche. La ecuación para la síntesis general de palmitato a partir de acetil-CoA y malonil-CoA es: CO Malonil-CoA Enz FIGURA 23-1 Biosíntesis de malonil-CoA. (Enz, acetil-CoA carboxilasa.) CH2 SH SH Cis Cetoacil sintasa Acetil transacilasa Cetoacil reductasa Enoil reductasa Hidratasa Malonil transacilasa FIGURA 23-2 Complejo multienzimático de ácido graso sintasa. El complejo es un dímero de dos monómeros polipeptídicos idénticos, 1 y 2, cada uno de los cuales consta de siete actividades enzimáticas y la proteína acarreadora de acilo (ACP). (Cis —SH, cisteína tiol.) El —SH de la 4’-fosfopanteteína de un monómero se encuentra en estrecha proximidad al —SH del residuo cisteína de la cetoacil sintasa del otro monómero, lo que sugiere un ordenamiento “cabeza a cola” de los dos monómeros. Aun cuando cada monómero contiene todas las actividades de la secuencia de reacción, la unidad funcional real consta de la mitad de un monómero que interactúa con la mitad complementaria del otro. Así, se producen de manera simultánea dos cadenas acilo. 23 Bender.indd 194 27/11/09 14:16:02 CAPítulo 23 Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides 195 *CO2 Acetil-CoA C2 HS HS 1 Pan Cis 2 Cis Pan SH *Malonil-CoA C3 Acetil-CoA carboxilasa 1a 1b Acetil transacilasa SH Complejo multienzimático de ácido graso sintasa CoA C2 1 CoA Transferencia desde Cn Malonil transacilasa Cis 2 a 1 O S C CH 3 O 2 Pan S C CH 2 *COO – (C3 ) Enzima acil(acetil)-malonil 3-Cetoacil sintasa *CO2 1 Cis SH O 2 Pan 2 S C O CH 2 C CH 3 Enzima3-cetoacil (enzima acetoacetil) NADPH + H + 3-Cetoacil reductasa NADP + 1 Cis SH 2 Pan S O Generadores de NADPH C 3 OH CH 2 CH CH 3 Enzima D(–)-3-hidroxiacil Vía de la pentosa fosfato Hidratasa Isocitrato deshidrogenasa 4 H 2O Enzima málica 1 Cis SH O 2 Pan S C CH CH CH 3 Enzima acil 2,3-insaturada NADPH + H + Enoil reductasa 5 NADP + H2O Tioesterasa Luego de pasar siete veces por ciclos a través de los pasos 2 a 5 1 Cis SH 2 Pan S O C CH2 CH2 CH3 (Cn ) Enzima acilo Palmitato CLAVE: 1 , 2 , monómeros individuales de ácido graso sintasa hidrógeno necesario para la síntesis reductiva de ácidos grasos. Es importante el hecho de que los tejidos especializados en la lipogénesis activa —es decir, el hígado, el tejido adiposo y la glándula mamaria en lactancia— también poseen una vía de pentosa fosfato activa. Además, ambas vías metabólicas se encuentran en el citosol de la célula; así, no hay membranas o barreras de permeabilidad contra la transferencia de NADPH. Otras fuentes de este último comprenden la reacción que convierte malato en piruvato catalizada por la “enzima málica” (NADP malato deshidrogenasa) (fig. 23-4) y la re- 23 Bender.indd 195 FIGURA 23-3 Biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga. Detalles de cómo la adición de un residuo malonilo hace que la cadena acilo crezca por dos átomos de carbono. (Cis, residuo cisteína; Pan, 4’-fosfopanteteína.) Los bloques resaltados en azul contienen en un inicio una unidad C2 derivada de acetil-CoA (según se ilustra) y después la unidad Cn formada en la reacción 5. acción de isocitrato deshidrogenasa extramitocondrial (que quizá no es una fuente considerable, excepto en rumiantes). La acetil-CoA es el principal bloque de construcción de ácidos grasos La acetil-CoA se forma a partir de la glucosa por medio de la oxidación de piruvato dentro de las mitocondrias. Con todo, no se difunde con facilidad hacia el citosol extramitocondrial, el principal sitio 27/11/09 14:16:04 196 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Glucosa Palmitato Glucosa 6-fosfato NADP+ PPP NADP+ Fructosa 6-fosfato Gliceraldehído 3-fosfato Gliceraldehído3-fosfato deshidrogenasa Malato deshidrogenasa NAD+ NADPH + H+ Enzima málica Malonil-CoA Malato NADH + H+ NADPH + H+ CO2 Oxaloacetato ATP Acetil-CoA carboxilasa CO2 Piruvato Acetil-CoA ATPcitrato liasa Citosol + H Citrato CoA ATP Citrato Fuera T P Membrana mitocondrial interna T Acetato Isocitrato Isocitrato deshidrogenasa Dentro Piruvato deshidrogenasa Piruvato CoA ATP Acetil-CoA Malato Mitocondria NADH + H+ NAD+ Oxaloacetato α-Cetoglutarato Citrato Ciclo del ácido cítrico Malato α-Cetoglutarato K FIGURA 23-4 El suministro de acetil-CoA y NADPH para la lipogénesis. (PPP, vía de la pentosa fosfato; T, transportador de tricarboxilato; K, transportador de α-cetoglutarato; P, transportador de piruvato.) de síntesis de ácidos grasos. El citrato, que se forma luego de condensación de acetil-CoA con oxaloacetato en el ciclo del ácido cítrico dentro de las mitocondrias, se transloca hacia el compartimiento extramitocondrial mediante el transportador de tricarboxilato, donde en presencia de CoA y ATP, se divide hacia acetil-CoA y oxaloacetato, catalizado por la AtP-citrato liasa, que aumenta de actividad en el estado bien alimentado. La acetil-CoA entonces queda disponible para la formación y síntesis de malonil-CoA para palmitato (fig. 23-4). El oxaloacetato resultante puede formar malato por medio de la malato deshidrogenasa enlazada a NADH, lo cual va seguido por la generación de NADPH mediante la enzima málica. El NADPH queda disponible para lipogénesis, y el piruvato puede usarse para regenerar acetil-CoA después de transporte hacia la mitocondria. Esta vía es un medio de transferir equivalentes reductores desde NADH hacia NADP extramitocondriales. De modo alternativo, el malato mismo puede transportarse hacia la mitocondria, donde tiene la capacidad para volver a formar oxaloacetato. Note que el transportador de citrato (tricarboxilato) en la membrana mitocondrial requiere malato para intercambio con citrato (fig. 13-10). Hay poca ATP-citrato liasa o enzima málica en rumiantes, probablemente porque en estas especies el acetato (derivado de la digestión de carbohidratos en el rumen, y activado hacia acetil-CoA fuera de la mitocondria) es la principal fuente de acetil-CoA. 23 Bender.indd 196 La elongación de cadenas de ácido graso sucede en el retículo endoplásmico Esta vía (el “sistema microsómico”) alarga dos carbonos acil-CoA grasas saturadas e insaturadas (desde C10 en adelante), usando malonil-CoA como el donador de acetilo, y NADPH como el reductor, y es catalizada por el sistema de enzimas de ácido graso elongasa microsómico (fig. 23-5). La elongación de estearil-CoA en el cerebro se incrementa con rapidez durante la mielinización con el fin de proporcionar ácidos grasos C22 y C24 para esfingolípidos. EL ESTADO NUTRICIONAL REGULA LA LIPOGÉNESIS El carbohidrato excesivo se almacena como grasa en muchos animales en anticipación de periodos de deficiencia calórica, como inanición, hibernación, etc., y para proporcionar energía para uso entre las comidas en animales, incluso seres humanos, que toman sus alimentos a intervalos espaciados. La lipogénesis convierte la glucosa excedente e intermediarios como piruvato, lactato y acetilCoA, en grasa, lo que ayuda a la fase anabólica de este ciclo de alimentación. El estado nutricional del organismo es el principal factor 27/11/09 14:16:05 CAPítulo 23 O R CH2 C O S CoA + CH2 C S CoA COOH Acil-CoA Malonil-CoA 3-Cetoacil-CoA sintasa O R CH2 SH + CO2 CoA O C CH2 C S CoA 3-Cetoacil-CoA NADPH + H+ 3-Cetoacil-CoA reductasa NADP+ OH R CH2 CH O C CH2 S CoA S CoA 3-Hidroxiacil-CoA 3-Hidroxiacil-CoA deshidratasa H2O O R CH2 CH CH C 2-trans-Enoil-CoA NADPH + H+ 2-trans-Enoil-CoA reductasa NADP + O R CH2 CH2 CH2 C S CoA Acil-CoA FIGURA 23-5 Sistema de elongasa microsómico para la elongación de cadena de ácido graso. Las reductasas también usan NADH, pero se prefiere NADPH. Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides 197 MECANISMOS A PLAZOS CORTO Y LARGO REGULAN LA LIPOGÉNESIS La síntesis de ácidos grasos de cadena larga está controlada a corto plazo mediante modificación alostérica y covalente de enzimas, y a largo plazo por cambios de la expresión de gen que rigen los índices de síntesis de enzimas. La acetil-CoA carboxilasa es la enzima de mayor importancia en la regulación de la lipogénesis La acetil-CoA carboxilasa es una enzima alostérica y es activada por el citrato, cuya concentración aumenta en el estado bien alimentado, y es un indicador de un aporte suficiente de acetil-CoA. El citrato convierte la enzima desde un dímero inactivo hacia una forma polimérica activa, con una masa molecular de varios millones. La desactivación es promovida por fosforilación de la enzima y por moléculas de acil-CoA de cadena larga, un ejemplo de inhibición por retroacción negativa por un producto de una reacción. De este modo, si se acumula acil-CoA porque no se esterifica con suficiente rapidez, o debido a incremento de la lipólisis o a un flujo de AGL hacia adentro del tejido, reducirá de manera automática la síntesis de ácido graso nuevo. La acil-CoA también inhibe el transportador de tricarboxilato mitocondrial, lo que impide la activación de la enzima por egreso de citrato desde la mitocondria hacia el citosol. La acetil-CoA carboxilasa también está regulada por hormonas como glucagon, epinefrina e insulina por medio de cambios en su estado de fosforilación (véanse los detalles en la figura 23-6). La piruvato deshidrogenasa también está regulada por la acil-CoA La acil-CoA da por resultado inhibición de la piruvato deshidrogenasa al inhibir el transportador de intercambio de ATP-ADP de la membrana mitocondrial interna, lo que conduce a aumento de las proporciones [ATP]/[ADP] intramitocondriales y, en consecuencia, a conversión de piruvato deshidrogenasa activa en inactiva (fig. 18-6), lo que regula la disponibilidad de acetil-CoA para lipogénesis. Más aún, la oxidación de acil-CoA debido a incremento de las concentraciones de AGL puede aumentar las proporciones de [acetil-CoA]/[CoA] y [NADH]/[NAD+] en las mitocondrias, lo que inhibe la piruvato deshidrogenasa. La insulina también regula la lipogénesis mediante otros mecanismos que regula el índice de lipogénesis. De esta manera, el índice es alto en el animal bien alimentado cuya dieta contiene una alta proporción de carbohidratos. Es deprimido por la ingestión calórica restringida, dieta con alto contenido de grasa, o una deficiencia de insulina, como en la diabetes mellitus; este tipo de condiciones muestran vínculo con aumento de las concentraciones de AGL en plasma, y se ha demostrado una relación inversa entre la lipogénesis hepática y la concentración de AGL en el suero. Cuando la alimentación consta de sacarosa en lugar de glucosa hay incremento de la lipogénesis, porque la fructosa evita el paso por el punto de control de fosfofructocinasa en la glucólisis, e inunda la vía lipogénica (fig. 21-5). 23 Bender.indd 197 La insulina estimula la lipogénesis por medio de varios otros mecanismos, así como al incrementar la actividad de acetil-CoA carboxilasa. Aumenta el transporte de glucosa hacia la célula (p. ej., en el tejido adiposo), lo que incrementa la disponibilidad tanto de piruvato para la síntesis de ácidos grasos como de glicerol 3-fosfato para la esterificación de los ácidos grasos recién formados, y convierte también la forma inactiva de la piruvato deshidrogenasa en la forma activa en el tejido adiposo, no así en el hígado. Asimismo, la insulina —mediante su capacidad para deprimir la concentración de cAMP intracelular— inhibe la lipólisis en el tejido adiposo y reduce la concentración de AGL y, por ende, de acil-CoA de cadena larga en el plasma, que son inhibidores de la lipogénesis. 27/11/09 14:16:07 198 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Proteína fosfatasa Pi Acetil-CoA carboxilasa (activa) P 16 H2O Ácido palmitoleico (ω7, 16:1, ∆9) Acetil-CoA carboxilasa (inactiva) 18 Ácido oleico (ω9, 18:1, ∆ ) 12 18 H2O MalonilCoA Insulina + Pi AMPK (activa) ADP 18 9 COOH *Ácido linoleico (ω6, 18:2, ∆9,12) 15 12 COOH 9 9,12,15 *Ácido α-linolénico (ω3, 18:3, ∆ P AMPK (inactiva) COOH 9 9 AcetilCoA ATP COOH 9 AMPKK + ATP 14 + 20 11 8 ) 5 COOH *Ácido araquidónico (ω6, 20:4, ∆5,8,11,14) Acil-CoA Glucagon + cAMP + Proteína cinasa dependiente de cAMP FIGURA 23-6 Regulación de la acetil-CoA carboxilasa por medio de fosforilación/desfosforilación. La enzima es desactivada por fosforilación por la proteína cinasa activada por AMP (AMPK), que a su vez es fosforilada y activada por la proteína cinasa cinasa activada por AMP (AMPKK). El glucagon (y la epinefrina) incrementan el cAMP y, de este modo, activan esta última enzima mediante la proteína cinasa dependiente de cAMP. También se cree que la acil-CoA activa a la enzima cinasa cinasa. La insulina activa a la acetil-CoA carboxilasa por medio de desfosforilación de AMPK. El complejo de ácido graso sintasa y acetilCoA carboxilasa son enzimas adaptativas Estas enzimas se adaptan a las necesidades fisiológicas del cuerpo al aumentar de cantidad total en el estado posprandial y al disminuir durante la ingestión de una dieta con alto contenido de grasa y en situaciones como inanición y diabetes mellitus. La insulina es una importante hormona que origina expresión de gen e inducción de biosíntesis de enzimas, en tanto que el glucagon (por medio del cAMP) antagoniza este efecto. La ingestión de grasas que contienen ácidos grasos poliinsaturados regula de modo coordinado la inhibición de la expresión de enzimas clave de la glucólisis y la lipogénesis. Estos mecanismos para la regulación a plazo más largo de la lipogénesis tardan varios días en manifestarse por completo, e incrementan el efecto directo e inmediato de los AGL y de hormonas como insulina y glucagon. ALGUNOS ÁCIDOS GRASOS POLIINSATURADOS NO PUEDEN SINTETIZARSE EN MAMÍFEROS Y SON ESENCIALES DESDE EL PUNTO DE VISTA NUTRICIONAL La figura 23-7 muestra ciertos ácidos grasos insaturados de cadena larga de importancia metabólica en mamíferos. Otros ácidos grasos 23 Bender.indd 198 20 17 14 11 8 5 Ácido eicosapentaenoico (ω3, 20:5, ∆ 5,8,11,14,17 COOH ) FIGURA 23-7 Estructura de algunos ácidos grasos insaturados. Si bien los átomos de carbono en las moléculas están numerados de manera convencional —desde el carboxilo terminal—, los números ω (p. ej., ω7 en el ácido palmitoleico) se calculan desde el extremo inverso (el metilo terminal) de las moléculas. La información entre paréntesis muestra, por ejemplo, que el ácido α-linolénico contiene dobles enlaces empezando en el tercer carbono desde el metilo terminal, tiene 18 carbonos y 3 dobles enlaces, y tiene estos dobles enlaces en los carbonos noveno, duodécimo y décimo quinto desde el carboxilo terminal. (*Clasificados como “ácidos grasos esenciales”.) polienoicos C20, C22 y C24 se derivan de los ácidos oleico, linoleico y α-linolénico mediante alargamiento de cadena. Los ácidos palmitoleico y oleico no son esenciales en la dieta porque los tejidos pueden introducir un doble enlace en la posición Δ9 de un ácido graso saturado. Los ácidos linoleico y α-linolénico son los únicos ácidos grasos que se sabe que son esenciales para la nutrición completa de muchas especies de animales, incluso seres humanos, y se conocen como los EFA en el aspecto nutricional. En casi todos los mamíferos, el ácido araquidónico puede formarse a partir de ácido linoleico (fig. 23-10). Pueden introducirse dobles enlaces en las posiciones Δ4, Δ5, Δ6 y Δ9 (cap. 15) en la mayoría de los animales, pero nunca más allá de la posición Δ9. En contraste, los vegetales tienen la capacidad para sintetizar los EFA desde el punto de vista nutricional al introducir dobles enlaces en las posiciones Δ12 y Δ15. LOS ÁCIDOS GRASOS MONOINSATURADOS SE SINTETIZAN POR MEDIO DE UN SISTEMA DE Δ9 DESATURASA Varios tejidos, entre ellos el hígado, se encargan de la formación de ácidos grasos monoinsaturados no esenciales a partir de ácidos grasos saturados. En un ácido graso saturado el primer doble enlace casi siempre se introduce en la posición Δ9. Un sistema de enzima —Δ9 desaturasa (fig. 23-8)— en el retículo endoplásmico cataliza la 27/11/09 14:16:10 CAPítulo 23 Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides Estearoil — CoA O O2 + NADH + H+ ∆9 Desaturasa 9 12 C S CoA 18 Cit b5 Linoleoil-CoA (∆9,12-octadecadienoil-CoA) NAD++ 2H2O O2 + NADH + H+ Oleoil — CoA FIGURA 23-8 199 ∆6 desaturasa Δ9 Desaturasa microsómica. 2H2O + NAD+ 9 12 conversión de palmitoil-CoA o estearoil-CoA en palmitoleoil-CoA u oleoil-CoA, respectivamente. Se necesitan oxígeno y NADH o NADPH para la reacción. Las enzimas parecen ser similares a un sistema de monooxigenasa que incluye el citocromo b5 (cap. 12). 6 C 18 γ-Linolenoil-CoA (∆ C2 (Malonil-CoA, NADPH) -octadecatrienoil-CoA) Sistema de elongación de cadena microsómico (elongasa) 11 14 8 C 20 Los dobles enlaces adicionales introducidos en ácidos grasos monoinsaturados existentes siempre están separados entre sí por un grupo metileno (están interrumpidos por metileno) salvo en bacterias. Puesto que los animales tienen una Δ9 desaturasa, tienen capacidad de sintetizar la familia de ácidos grasos insaturados ω9 (ácido oleico) por completo mediante una combinación de alargamiento y desaturación de cadena (fig. 23-9). Aun así, como se mencionó, los ácidos linoleico (ω6) o α-linolénico (ω3) necesarios para la síntesis de los otros miembros de las familias ω6 u ω3 deben obtenerse a partir de la dieta. El linoleato se convierte en araquidonato por medio del γ-linolenato mediante la vía que se muestra en la figura 23-10. Así, el requerimiento nutricional de araquidonato puede surtirse si hay linoleato adecuado en la dieta. Hay un gran decremento del sistema de desaturación y alargamiento de cadena en estado de inanición como respuesta a administración de glucagon y epinefrina, y en ausencia de insulina, como en la diabetes tipo 1. 24:1 Ácido oleico 18:1 1 1 1 22:1 20:1 ω6 Ácido linoleico Familia 18:2 1 20:2 ω3 Familia ω9 Familia 24:1 Ácido oleico 18:1 1 1 1 22:1 20:1 2 2 S CoA O Dihomo-γ-linolenoil-CoA (∆ 8,11,14 -eicosatrienoil-CoA) + O2 + NADH + H ∆5 desaturasa 2H2O + NAD+ O 11 14 8 5 C S CoA 20 Araquidonoil-CoA (∆5,8,11,14-eicosatetraenoil-CoA) FIGURA 23-10 Conversión de linoleato en araquidonato. Los gatos no pueden efectuar esta conversión debido a la falta de Δ6 desaturasa y deben obtener el araquidonato en la dieta. 1 18:2 CoA O 6,9,12 LA SÍNTESIS DE ÁCIDOS GRASOS POLIINSATURADOS COMPRENDE SISTEMAS DE ENZIMAS DE DESATURASA Y ELONGASA ω9 Familia S 20:2 3 20:3 1 22:3 4 22:4 Se acumula en la deficiencia de EFA — 2 1 18:3 20:3 3 20:4 1 22:4 4 22:5 — 1 Ácido α-linolénico 1 3 18:2 18:3 20:2 20:3 3 20:3 1 22:3 4 20:4 1 22:4 4 22:5 22:4 Se acumula en la deficiencia de EFA — FIGURA 23-9 Biosíntesis de las familias ω9, ω6 y ω3 de ácidos grasos 2 1 paso 3es catalizado 1 4 poliinsaturados. Cada por el sistema de alargamiento de cadena 18:3 20:3 20:4 22:4 22:5 microsómico o de desaturasa: 1, elongasa; 2, Δ6 desaturasa; 3, Δ5 desaturasa; 4, Δ4 desaturasa. ( — , inhibición.) 20:2 ω6 Ácido linoleico Familia 18:2 1 ω3 Familia 23 Bender.indd 199 1 Ácido α-linolénico 18:3 20:3 3 20:4 1 22:4 4 22:5 27/11/09 14:16:13 200 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos SE PRODUCEN SÍNTOMAS DE DEFICIENCIA CUANDO HAY CARENCIA DE EFA EN LA DIETA Las ratas alimentadas con una dieta sin lípidos purificada, que contiene vitaminas A y D, muestran índice de crecimiento reducido, y deficiencia reproductiva, que pueden curarse al añadir ácidos linoleico, α-linolénico y araquidónico a la dieta; dichos ácidos grasos se encuentran en concentraciones altas en aceites vegetales (cuadro 15-2) y en pequeñas cantidades en cadáveres de animales. Los EFA son indispensables para la formación de prostaglandina, tromboxano, leucotrieno y lipoxina (véase más adelante), y tienen varias otras funciones menos bien definidas. Se encuentran en los lípidos estructurales de la célula, a menudo en la posición 2 de fosfolípidos y están relacionados con la integridad estructural de la membrana mitocondrial. El ácido araquidónico se encuentra presente en membranas y explica 5 a 15% de los ácidos grasos en fosfolípidos. El ácido docosahexaenoico (DHA; ω3, 22:6), que se sintetiza en un grado limitado a partir del ácido α-linolénico, o que se obtiene de manera directa a partir de aceites de pescado, está presente en concentraciones altas en la retina, la corteza cerebral, los testículos y el semen. El DHA es en particular necesario para el desarrollo del cerebro y la retina, y se proporciona mediante la placenta y la leche. Se informa que los pacientes con retinitis pigmentosa tienen concentraciones bajas de DHA. En la deficiencia de EFA, los ácidos polienoicos no esenciales de la familia ω9, en particular ácido Δ5,8,11-eicosatrienoico (ω9, 20:3) (fig. 23-9), remplazan a los EFA en fosfolípidos, otros lípidos complejos, y membranas. Es posible emplear la proporción trieno:tetraeno en lípidos plasmáticos para diagnosticar la magnitud de la deficiencia de EFA. Los ácidos grasos trans están implicados en diversos trastornos Pequeñas cantidades de ácidos grasos trans-insaturados se encuentran en la grasa de rumiante (p. ej., la grasa de la mantequilla tiene 2 a 7%), donde surgen a partir de la acción de microorganismos en el rumen, pero la principal fuente en la dieta de ser humano son los aceites vegetales parcialmente hidrogenados (p. ej., margarina). Los ácidos grasos trans compiten con los EFA y pueden exacerbar la deficiencia de EFA. Además, son similares en referencia con el aspecto estructural a los ácidos grasos saturados (cap. 15), y tienen efectos comparables en la promoción de hipercolesterolemia y aterosclerosis (caps. 26). LOS EICOSANOIDES SE FORMAN A PARTIR DE ÁCIDOS GRASOS POLIINSATURADOS C20 El araquidonato y algunos otros ácidos grasos poliinsaturados C20 dan lugar a eicosanoides, compuestos que tienen actividad fisiológica y farmacológica conocidos como prostaglandinas (PG), tromboxanos (tX), leucotrienos (lt) y lipoxinas (lX) (cap. 15). Desde el punto de vista fisiológico, se considera que actúan como hormo- 23 Bender.indd 200 nas locales que funcionan por medio de receptores enlazados a proteína G para desencadenar sus efectos bioquímicos. Existen tres grupos de eicosanoides que se sintetizan a partir de ácidos eicosanoicos C20 derivados de los EFA linoleato y α-linolenato, o de modo directo a partir del araquidonato y eicosapentaenoato de la dieta (fig. 23-11). El araquidonato, que puede obtenerse a partir de la dieta, pero que por lo general se deriva de la posición 2 de fosfolípidos en la membrana plasmática mediante la acción de la fosfolipasa A2 (fig. 24-6), es el sustrato para la síntesis de PG2, serie TX2 (prostanoides) por medio de la vía de la ciclooxigenasa, o las series LT4 y LX4 mediante la vía de la lipooxigenasa; las dos vías compiten por el sustrato araquidonato (fig. 23-11). LA VÍA DE LA CICLOOXIGENASA (COX) SE ENCARGA DE LA SÍNTESIS DE PROSTANOIDES La síntesis de prostanoides (fig. 23-12) involucra el consumo de dos moléculas de O2 catalizado por la COX (también llamada prostaglandina H sintasa), una enzima que tiene dos actividades, una ciclooxigenasa y peroxidasa. La COX está presente como dos isoenzimas, CoX-1 y CoX-2. El producto, un endoperóxido (PGH), se convierte en prostaglandinas D y E, así como en un tromboxano (TXA2) y prostaciclina (PGI2). Cada tipo de célula sólo produce un tipo de prostanoide. El AINE ácido acetilsalicílico inhibe a la COX-1 y COX-2; otros AINE son la indometacina y el ibuprofeno, y por lo regular inhiben COX al competir con el araquidonato. Dado que la inhibición de la COX-1 causa la irritación del estómago que a menudo muestra vínculo con la ingestión de AINE, se ha intentado crear fármacos que inhiben de manera selectiva a la COX-2 (coxibs). Como quiera que sea, por desgracia el éxito de este método ha sido limitado y algunos coxibs se han retirado o suspendido del mercado debido a efectos secundarios indeseables y aspectos de seguridad. La transcripción de la COX-2 —no así de la COX-1— es inhibida por completo por los corticosteroides antiinflamatorios. Los EFA no ejercen todos sus efectos fisiológicos por medio de la síntesis de PG La función de los EFA en la formación de membrana no se relaciona con la formación de PG. Las PG no alivian síntomas de deficiencia de EFA y la inhibición de la síntesis de PG no suscita una deficiencia de ese tipo. La COX es una “enzima suicida” La “desactivación” de la actividad de PG se logra en parte mediante una propiedad notoria de la COX: la de destrucción autocatalizada; esto es, es una “enzima suicida”. Más aún, la desactivación de PG por la 15-hidroxiprostaglandina deshidrogenasa es rápida. El bloqueo de la acción de esta enzima con sulfasalazina o indometacina puede prolongar la vida media de las PG en el cuerpo. 27/11/09 14:16:14 CAPítulo 23 Dieta Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides 201 Fosfolípido de membrana Fosfolipasa A2 Linoleato + –2H γ-Linolenato +2C 1 COOH 8,11,14-Eicosatrienoato (dihomo γ-linolenato) 2 Grupo 1 Prostanoides PGE1 PGF1 TXA1 Dieta COOH –2H Leucotrienos LTA3 LTC3 LTD3 5,8,11,14Eicosatetraenoato Araquidonato Eicosatetraenoato COOH –2H +2C 5,8,11,14,17Eicosapentaenoato Octadecatetraenoato –2H 1 2 Angiotensina II bradicinina epinefrina trombina Grupo 2 Prostanoides PGD2 PGE2 1 PGF2 PGI2 TXA2 Leucotrienos Lipoxinas LTA4 LXA4 LTB4 LXB4 2 LTC4 LXC4 LTD4 LXD4 LTE4 LXE4 Grupo 3 Prostanoides PGD3 PGE3 PGF3 PGI3 TXA3 Leucotrienos LTA5 LTB5 LTC5 Dieta α-Linolenato Dieta FIGURA 23-11 Los tres grupos de eicosanoides y sus orígenes biosintéticos. (PG, prostaglandina; PGI, prostaciclina; TX, tromboxano; LT, leucotrieno; LX, lipoxina; , vía de la ciclooxigenasa; , vía de la lipooxigenasa.) El número en subíndice denota el número total de dobles enlaces en la molécula y la serie a la cual pertenece el compuesto. LOS LEUCOTRIENOS Y LAS LIPOXINAS SE FORMAN POR MEDIO DE LA VÍA DE LA LIPOOXIGENASA Los leucotrienos son una familia de trienos conjugados que se forman a partir de ácidos eicosanoicos en leucocitos, células de mastocitoma, plaquetas y macrófagos mediante la vía de la lipooxigenasa en respuesta a estímulos inmunitarios y no inmunitarios. Tres diferentes lipooxigenasas (dioxigenasas) insertan oxígeno en las posiciones 5, 12 y 15 del ácido araquidónico, lo que da lugar a hidroperóxidos (HPETE). Sólo la 5-lipooxigenasa forma leucotrienos (véanse los detalles en la fig. 23-13). Las lipoxinas son una familia de tetraenos conjugados que también surgen en leucocitos. Se forman por medio de la acción combinada de más de una lipooxigenasa (fig. 23-13). 23 Bender.indd 201 ASPECTOS CLÍNICOS Los síntomas de deficiencia de EFA en seres humanos comprenden lesiones en la piel y deterioro del transporte de lípidos En adultos que subsisten con dietas ordinarias no se han informado signos de deficiencias de EFA. De cualquier modo, los lactantes que reciben dietas con leche artificial con bajo contenido de grasa, y los enfermos que se mantienen durante periodos prolongados de modo exclusivo mediante nutrición por vía intravenosa con bajo contenido de EFA muestran síntomas de deficiencia que pueden prevenirse por medio de una ingestión de EFA de 1 a 2% del requerimiento calórico total. 27/11/09 14:16:16 202 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos COOH Araquidonato O COOH PGI2 O O COOH OOH PGG2 Prostaciclina sintasa Peroxidasa O OH 6-Ceto PGF1 α OH OH COOH COOH HO OH OH O PGF2 α Imidazol TXA2 Isomerasa COOH – COOH OH OH COOH + Tromboxano sintasa O O OH PGE2 Reductasa OH C H OH O Malondialdehído + HHT OH PGH2 COOH OH O C H Isomerasa O * COOH OH COOH O Aspirina Indometacina Ibuprofeno – O O OH * Ciclooxigenasa 2O2 O OH OH PGD2 TXB2 FIGURA 23-12 Conversión del ácido araquidónico en prostaglandinas y tromboxanos de la serie 2 (PG, prostaglandina; TX, tromboxano; PGI, prostaciclina; HHT, hidroxiheptadecatrienoato). (*Estas dos actividades marcadas con asterisco se atribuyen a la enzima ciclooxigenasa [prostaglandina H sintasa]. Suceden conversiones similares en las prostaglandinas y los tromboxanos de las series 1 y 3.) En varias enfermedades ocurre metabolismo anormal de EFA El metabolismo anormal de los EFA, que puede estar vinculado con insuficiencia en la dieta, se ha notado en la fibrosis quística, la acrodermatitis enteropática, el síndrome hepatorrenal, síndrome de Sjögren-Larsson, degeneración neonatal de múltiples sistemas, enfermedad de Crohn, cirrosis y alcoholismo, y síndrome de Reye. Se han encontrado concentraciones altas de ácidos polienoicos de cadena muy larga en el cerebro de individuos con síndrome de Zellweger (cap. 22). Las dietas con una proporción P:S (ácido graso poliinsaturado:saturado) alta reducen las concentraciones séricas de colesterol, y se considera que son beneficiosas en cuanto al riesgo de aparición de cardiopatía coronaria. Los prostanoides son sustancias potentes que tienen actividad biológica Los tromboxanos se sintetizan en plaquetas y en el momento de su liberación producen vasoconstricción y agregación plaquetaria. El ácido acetilsalicílico en dosis bajas inhibe su síntesis de manera específica. Las prostaciclinas (PGI2) se producen en las paredes de los vasos sanguíneos y son potentes inhibidores de la agregación plaquetaria. De este modo, los tromboxanos y las prostaciclinas son antagonistas. La PG3 y el TX3, que se forman a partir del ácido eico- 23 Bender.indd 202 sapentaenoico (EPA), inhiben la liberación de araquidonato a partir de fosfolípidos, y la formación de PG2 y TX2. La PGI3 es un antiagregador de plaquetas tan potente como la PGI2, pero el TXA3 es un agregador más débil que el TXA2, lo que modifica el equilibrio de actividad y favorece tiempos de coagulación más prolongados. Una cantidad de PG plasmática tan pequeña como 1 ng/ml ocasiona contracción del músculo liso en animales. Los usos terapéuticos potenciales incluyen prevención de la concepción, inhibición del trabajo de parto al término, terminación del embarazo, prevención de úlceras gástricas o alivio de las mismas, y control de la inflamación y de la presión arterial, y alivio del asma y de la congestión nasal. Además, la PGD2 es una potente sustancia que promueve el sueño. Las prostaglandinas aumentan el cAMP en las plaquetas, la tiroides, el cuerpo amarillo, hueso fetal, adenohipófisis y pulmones, pero lo reducen en las células de los túbulos renales y en el tejido adiposo (cap. 25). Los leucotrienos y las lipoxinas son potentes reguladores de muchos procesos morbosos La sustancia de reacción lenta de anafilaxia (SRS-A) es una mezcla de leucotrienos C4, D4 y E4, la cual es un potente constrictor de la musculatura de las vías respiratorias bronquiales. Todos ellos, junto 27/11/09 14:16:18 CAPítulo 23 Biosíntesis de ácidos grasos y eicosanoides 203 COOH 15-Lipooxigenasa 12-Lipooxigenasa COOH Araquidonato COOH O2 HOO 12-HPETE 1 OOH 15-HPETE 5-Lipooxigenasa COOH 1 COOH OH 15-HETE HO OOH 12-HETE OH COOH COOH 5-Lipooxigenasa 1 5-HPETE OH 5-HETE H2O COOH H2O OH O OH COOH COOH 15-Lipooxigenasa 2 Leucotrieno A4 Leucotrieno B4 OH OH Lipoxinas, p. ej., LXA 4 Glutatión 3 Ácido glutámico O NH2 Glicina O HO Glicina OH NH O NH O O HO Cisteína S OH NH Ácido glutámico COOH O NH2 NH2 Cisteína S 4 Leucotrieno C4 OH COOH Leucotrieno D4 Glicina HO O Cisteína S 5 OH COOH Leucotrieno E4 FIGURA 23-13 Conversión del ácido araquidónico en leucotrienos y lipoxinas de la serie 4 mediante la vía de la lipooxigenasa. Ocurren algunas conversiones similares en leucotrienos de las series 3 y 5. (HPETE, hidroperoxieicosatetraenoato; HETE, hidroxieicosatetraenoato; , peroxidasa; , leucotrieno A4 epóxido hidrolasa; , glutatión S-transferasa; , γ-glutamiltranspeptidasa; , cisteinil-glicina dipeptidasa.) con el leucotrieno B4, también dan por resultado permeabilidad vascular y atracción y activación de leucocitos, y son reguladores importantes en muchas enfermedades que comprenden reacciones inflamatorias o de hipersensibilidad inmediata, como el asma. Los leucotrienos son vasoactivos, y se ha hallado 5-lipooxigenasa en las paredes arteriales. La evidencia apoya una función antiinflamatoria para las lipoxinas en la función vasoactiva e inmunorreguladora, por ejemplo, como compuestos contrarreguladores (chalonas) de la respuesta inmunitaria. RESUMEN ■ 23 Bender.indd 203 Dos sistemas de enzimas: acetil-CoA carboxilasa y ácido graso sintasa, llevan a cabo la síntesis de ácidos grasos de cadena larga (lipogénesis). ■ ■ ■ La vía convierte a la acetil-CoA en palmitato, y necesita NADPH, ATP, Mn2+, biotina, ácido pantoténico y como cofactores. La acetil-CoA carboxilasa convierte a la acetil-CoA en malonil-CoA, y luego la ácido graso sintasa, un complejo multienzimático, de una cadena polipeptídica con siete actividades enzimáticas separadas, cataliza la formación de palmitato a partir de una molécula de acetil-CoA y siete moléculas de malonil-CoA. La lipogénesis está regulada en el paso de la acetil-CoA carboxilasa mediante modificadores alostéricos, fosforilación/ desfosforilación, e inducción y represión de la síntesis de enzima. La enzima es activada de manera alostérica por citrato y desactivada por la acil-CoA de cadena larga. La desfosforilación (p. ej., por medio de insulina) promueve su actividad, mientras que la fosforilación (p. ej., por glucagon o epinefrina) es inhibitoria. 27/11/09 14:16:19 204 ■ ■ ■ SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos La biosíntesis de ácidos grasos de cadena larga insaturados se logra mediante las enzimas desaturasa y elongasa, los cuales introducen dobles enlaces y alargan las cadenas acilo existentes, respectivamente. Los animales superiores tienen Δ4, Δ5, Δ6 y Δ9 desaturasas, pero no pueden insertar nuevos dobles enlaces más allá de la posición 9 de ácidos grasos. De este modo, es necesario que los EFA linoleico (ω6) y α-linolénico (ω3) se obtengan a partir de la dieta. Los eicosanoides se derivan de ácidos grasos C20 (eicosanoicos) sintetizados a partir de los EFA, y constituyen importantes grupos de compuestos que tienen actividad fisiológica y farmacológica, entre ellos las prostaglandinas, los tromboxanos, los leucotrienos y las lipoxinas. REFERENCIAS Cook HW, McMaster CR: Fatty acid desaturation and chain elongation in eukaryotes. In: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 4th ed. Vance DE, Vance JE (editors). Elsevier, 2002;181–204. 23 Bender.indd 204 Fischer S: Dietary polyunsaturated fatty acids and eicosanoid formation in humans. Adv Lipid Res 1989;23:169. Fitzpatrick FA: Cyclooxygenase enzymes: regulation and function. Curr Pharm Des 2004;10:577. Tong L: Acetyle-coenzyme A carboxylase: crucial metabolic enzyme and an attractive target for drug discovery. Cell Mol Life Sci 2005;62:1784. McMahon B et al: Lipoxins: revelations on resolution. Trends Pharmacol Sci 2001;22:391. Rangan VS, Smith S: Fatty acid synthesis in eukaryotes. In: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 4th ed. Vance DE, Vance JE (editors). Elsevier, 2002;151–180. Sith S, Witkowski A, Joshi AK: Structural and functional organization of the animal fatty acid synthase. Prog Lipid Res 2003;42:289. Smith WL, Murphy RC: The eicosanoids: cyclooxygenase, lipoxygenase, and epoxygenase pathways. In: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 4th ed. Vance DE, Vance JE (editors). Elsevier, 2002;341–372. Wijendran V, Hayes KC: Dietary n-6 and n-3 fatty acid balance and cardiovascular health. Annu Rev Nutr 2004;24:597. 27/11/09 14:16:20 24 c Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos Kathleen M. Botham, PhD, DSc y Peter A. Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA Los acilgliceroles constituyen la mayor parte de los lípidos en el cuerpo. Los triacilgliceroles son los principales lípidos en depósitos de grasa y en los alimentos, y en capítulos subsiguientes se descri­ birán sus participaciones en el transporte y almacenamiento de lí­ pidos, y en diversas enfermedades como la obesidad, diabetes e hiperlipoproteinemia. La naturaleza anfipática de los fosfolípidos y esfingolípidos hace que sean ideales como el principal componente lípido de las membranas celulares. Asimismo, los fosfolípidos parti­ cipan en el metabolismo de muchos otros lípidos. Algunos fosfolípi­ dos tienen funciones especializadas; p. ej., la dipalmitoil lecitina es un componente de importancia del surfactante pulmonar, que falta en el síndrome de dificultad respiratoria del recién nacido. Los fosfolípidos inositol en la membrana celular actúan como precurso­ res de segundos mensajeros hormonales, y el factor activador de plaquetas es un alquilfosfolípido. Los glucoesfingolípidos, que con­ tienen esfingosina y residuos azúcar, así como ácido graso, se en­ cuentran en la hojuela externa de la membrana plasmática con sus cadenas de oligosacárido mirando hacia afuera, forman parte del glucocáliz de la superficie celular, y son importantes: 1) en la adhe­ rencia y el reconocimiento celular; 2) como receptores para toxinas bacterianas (p. ej., la toxina que causa el cólera), y 3) como sustan­ cias del grupo sanguíneo ABO. Se han descrito alrededor de una docena de enfermedades por depósito de glucolípidos (p. ej., en­ fermedad de Gaucher, enfermedad de Tay­Sachs), cada una de las cuales se debe a un defecto genético en la vía de la degradación de glucolípidos en los lisosomas. LA HIDRÓLISIS INICIA EL CATABOLISMO DE LOS TRIACILGLICEROLES Los triacilgliceroles deben hidrolizarse por medio de una lipasa ha­ cia los ácidos grasos y el glicerol que los constituyen, antes de que pueda proceder más catabolismo. Gran parte de esta hidrólisis (li­ pólisis) ocurre en el tejido adiposo, con liberación de ácidos grasos libres hacia el plasma, donde se encuentran combinados con la albú­ mina sérica. Esto va seguido por captación de AGL hacia los tejidos (entre ellos hígado, corazón, riñones, músculo, pulmones, testículos y tejido adiposo, aunque no de manera fácil por el cerebro), donde se oxidan o se reesterifican. La utilización de glicerol depende de si esos tejidos poseen glicerol cinasa, que se encuentra en cantidades importantes en hígado, riñones, intestino, tejido adiposo pardo y glándula mamaria en lactancia. A P í t u l o LOS TRIACILGLICEROLES Y LOS FOSFOGLICEROLES SE FORMAN MEDIANTE ACILACIÓN DE TRIOSA FOSFATOS La figura 24­1 esboza las principales vías de la biosíntesis de triacilgli­ cerol y fosfoglicerol. Las sustancias importantes, como los triacilglice­ roles, la fosfatidilcolina, la fosfatidiletanolamina, el fosfatidilinositol y la cardiolipina, un constituyente de las membranas mitocondriales, se forman a partir del glicerol-3-fosfato. Suceden puntos de ramifi­ cación importantes en la vía en los pasos de fosfatidato y diacilglice­ rol. A partir de dihidroxiacetona fosfato se derivan fosfogliceroles que contienen un enlace éter (—C—O—C—); los mejor conocidos entre ellos son los plasmalógenos y el factor activador de plaquetas (PAF). El glicerol 3­fosfato y el dihidroxiacetona fosfato son inter­ mediarios en la glucólisis, y hacen una conexión muy importante entre el metabolismo de carbohidratos y de lípidos. El fosfatidato es el precursor común en la biosíntesis de triacilgliceroles, muchos fosfogliceroles y cardiolipina Antes de que tanto el glicerol como los ácidos grasos se puedan in­ corporar hacia acilgliceroles, es necesario que se activen por ATP. La glicerol cinasa cataliza la activación de glicerol hacia sn­glicerol 3­fosfato. Si la actividad de esta enzima falta o es baja, como en Glicerol 3-fosfato Fosfatidato Dihidroxiacetona fosfato Plasmalógenos Diacilglicerol Cardiolipina Fosfatidilcolina Fosfatidiletanolamina Triacilglicerol PAF Fosfatidilinositol Fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato Figura 24-1 Perspectiva general de la biosíntesis de acilglicerol. (PAF, factor activador de plaquetas.) 205 24 Bender.indd 205 27/11/09 14:17:16 206 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos ATP H 2C HO C H 2C NAD+ ADP OH H 2C H HO Glicerol cinasa OH H 2C OH C H H 2C O Glicerol3-fosfato deshidrogenasa P sn-glicerol 3-fosfato Glicerol NADH + H+ OH C O H 2C O Glucólisis P Dihidroxiacetona fosfato Acil-CoA (principalmente saturada) Glicerol3-fosfato aciltransferasa 2 CoA O H 2C H 2C R2 C O O HO OH C H 2C H H 2C O C O P 1-Acilglicerol3-fosfato (lisofosfatidato) OH 2-Monoacilglicerol Acil-CoA (por lo regular insaturada) 1-Acilglicerol3-fosfato aciltransferasa Acil-CoA 1 Monoacilglicerol aciltransferasa (intestino) CoA O H 2C CoA R2 C O O O C H H 2C O C Colina H 2O ATP Fosfocolina H 2C CTP R2 CTP: fosfocolina citidil transferasa C O O C O P1 PP 1 O O C R1 H 2C R2 H C O H 2 COH Acil-CoA CDP-colina: diacilglicerol fosfocolina transferasa Diacilglicerol aciltransferasa O H 2C O O C H H 2C O C R1 H 2C R2 C O O P O Colina Fosfatidiletanolamina CO2 Fosfatidilserina H O R1 P P Fosfatidilinositol sintasa CoA CMP O C H O H 2C O C Cardiolipina Inositol R1 H 2C R2 R3 C O O O C H H 2C O C ATP ADP O Cinasa R1 H 2C R2 C Fosfatidilinositol O O P O C H H 2C O C P R1 Inositol P Fosfatidilinositol 4-fosfato Inositol Fosfatidilcolina Fosfatidiletanolamina N-metiltransferasa C H 2C C O C Triacilglicerol O O Citidina CDP-diacilglicerol CDP-colina CMP O CDP-DG sintasa 1,2-Diacilglicerol PP1 C CTP Fosfatidato fosfohidrolasa Colina cinasa R2 R1 P 1,2-Diacilglicerol fosfato (fosfatidato) ADP R1 CH ATP (–CH3)3 Cinasa Serina ADP Etanolamina R2 C O O H 2C O C H H 2C O O C P R1 Inositol P P Fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato Figura 24-2 Biosíntesis de triacilglicerol y fosfolípidos. (, vía del monoacilglicerol; (, vía del glicerol fosfato.) La fosfatidiletanolamina puede formarse a partir de etanolamina mediante una vía similar a la que se muestra para la formación de fosfatidilcolina a partir de colina. 24 Bender.indd 206 27/11/09 14:17:17 Capítulo 24 músculo o tejido adiposo, la mayor parte del glicerol 3­fosfato se forma a partir de dihidroxiacetona fosfato por medio de la glicerol3-fosfato deshidrogenasa (fig. 24­2). CDP-Diacilglicerol Biosíntesis de glicerol éter fosfolípidos Esta vía se encuentra en peroxisomas. La dihidroxiacetona fosfato es el precursor de la porción glicerol de los glicerol éter fosfolípidos (fig. 24­4). Este compuesto se combina con acil­CoA para dar 1­acil­ dihidroxiacetona fosfato. El enlace éter se forma en la reacción siguiente, y origina 1­alquildihidroxiacetona fosfato, que luego se convierte en 1­alquil­glicerol 3­fosfato. Después de acilación adicio­ nal en la posición 2, el 1­alquil­2­acilglicerol 3­fosfato (análogo al 24 Bender.indd 207 207 sn-Glicerol 3-fosfato CMP Fosfatidilglicerol fosfato Biosíntesis de triacilgliceroles Dos moléculas de acil­CoA, formadas por la activación de ácidos grasos por la acil-Coa sintetasa (cap. 22), se combinan con glice­ rol 3­fosfato para formar fosfatidato (1,2­diacilglicerol fosfato). Esto tiene lugar en dos etapas, catalizadas por la glicerol-3-fosfato aciltransferasa y por la 1-acilglicerol-3-fosfato aciltransferasa. La fosfatidato fosfohidrolasa y la diacilglicerol aciltransferasa (DGat) convierten el fosfatidato en 1,2­diacilglicerol, y después en triacilglicerol. La DGAT cataliza el único paso específico para la síntesis de triacilglicerol y se cree que es limitante en casi todas las circunstancias. En la mucosa intestinal, la monoacilglicerol aciltransferasa convierte el monoacilglicerol en 1,2­diacilglicerol en la vía del monoacilglicerol. Casi toda la actividad de estas enzi­ mas reside en el retículo endoplásmico, pero parte se encuentra en las mitocondrias. La fosfatidato fosfohidrolasa se encuentra sobre todo en el citosol, pero la forma activa de la enzima está unida a membrana. En la biosíntesis de fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina (fig. 24­2), la colina o la etanolamina debe activarse primero mediante fosforilación por ATP seguida por enlace a difosfato de citidina (CDP). La CDP­colina o CDP­etanolamina resultante reacciona con 1,2­diacilglicerol para formar fosfatidilcolina o fosfatidiletanolami­ na, respectivamente. La fosfatidilserina se forma a partir de la fosfa­ tidiletanolamina de modo directo por medio de reacción con serina (fig. 24­2). La fosfatidilserina puede volver a formar fosfatidiletano­ lamina mediante descarboxilación. Una vía alternativa en el hígado permite que la fosfatidiletanolamina dé lugar de manera directa a fosfatidilcolina por medio de metilación progresiva del residuo eta­ nolamina. A pesar de estas fuentes de colina, se considera que es un nutriente esencial en muchas especies de mamíferos, aunque esta certeza no se ha establecido en seres humanos. La disponibilidad de AGL impulsa la regulación de la biosínte­ sis de triacilglicerol, fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina. Los AGL que escapan a la oxidación se convierten de preferencia en fos­ folípidos y cuando este requerimiento se satisface se usan para la síntesis de triacilglicerol. Un fosfolípido presente en las mitocondrias es la cardiolipina (difosfatidilglicerol; fig. 15­8), la cual se forma a partir del fosfatidil­ glicerol que, a su vez, se sintetiza a partir del CDP­diacilglicerol (fig. 24­2) y glicerol 3­fosfato de acuerdo con el esquema que se muestra en la figura 24­3. La cardiolipina, que se encuentra en la membrana interna de las mitocondrias, tiene una participación clave en la es­ tructura y función mitocondriales, y se cree también que participa en la muerte celular programada (apoptosis). Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos H2O Pi Fosfatidilglicerol CMP Cardiolipina (difosfatidilglicerol) Figura 24-3 Biosíntesis de cardiolipina. fosfatidato en la fig. 24­2) resultante se hidroliza para dar el deri­ vado glicerol libre. Los plasmalógenos, que comprenden gran parte de los fosfolí­ pidos en las mitocondrias, se forman por desaturación del derivado 3­fosfoetanolamina análogo (fig. 24­4). El factor activador de plaquetas (paF) (1­alquil­2­acetil­sn­glicerol­3­fosfocolina) se sinte­ tiza a partir del derivado 3­fosfocolina correspondiente. Este factor se forma en muchas células sanguíneas y en otros tejidos, y agrega plaquetas a concentraciones de apenas 10–11 mol/L. También tiene propiedades hipotensivas y ulcerogénicas, y participa en diversas respuestas biológicas, entre ellas inflamación, quimiotaxis y fosfori­ lación de proteína. La fosfolipasa permite la degradación y el remodelado de fosfogliceroles Aun cuando los fosfolípidos se degradan de modo activo, cada por­ ción de la molécula muestra recambio a un índice diferente; p. ej., el tiempo de recambio del grupo fosfato es diferente del tiempo de re­ cambio del grupo 1­acilo. Esto se debe a la presencia de enzimas que permiten degradación parcial seguida por resíntesis (fig. 24­5). La fosfolipasa a2 cataliza la hidrólisis de glicerofosfolípidos para for­ mar un AGL y lisofosfolípido que, a su vez, se puede volver a acilar por la acil­CoA en presencia de una aciltransferasa. De manera alternativa, el lisofosfolípido (p. ej., lisolecitina) es atacado por la li­ sofosfolipasa, lo que forma la base glicerilo fosforilo correspondien­ te, que entonces puede ser dividida por una hidrolasa, lo que libera glicerol 3­fosfato más base. Las fosfolipasas a1, a2, B, C y D atacan los enlaces indicados en la figura 24­6. La fosfolipasa a2 se encuen­ tra en el líquido pancreático y en el veneno de serpiente, así como en muchos tipos de células; la fosfolipasa C es una de las principales toxinas secretadas por bacterias, y se sabe que la fosfolipasa D par­ ticipa en la transducción de señal en mamíferos. La lisolecitina (lisofosfatidilcolina) puede formarse mediante una ruta alternativa que involucra la lecitina:colesterol aciltransferasa (lCat). Esta enzima, que se encuentra en el plasma, cataliza la transferencia de un residuo ácido graso desde la posición 2 de la 27/11/09 14:17:19 208 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos O Acil-CoA H2COH H2C C O O Aciltransferasa P Dihidroxiacetona fosfato C (CH2)2 NADPH + H+ OH H2C R1 C O H 2C O R2 O P Sintasa 1-Acildihidroxiacetona fosfato H2C O C H H2 C O HO H2C HOOC NADP+ R2 C O H2C (CH2)2 O O Reductasa P R1 1-Alquildihidroxiacetona fosfato (CH2)2 R2 P 1-Alquilglicerol 3-fosfato Acil-CoA Aciltransferasa CDPCMP etanolamina O R3 C O H2C O C H H 2C O (CH2)2 P CH2 CH2 NH2 1-Alquil-2-acilglicerol 3-fosfoetanolamina NADPH, O2, Cit b5 O R3 C O CDP-etanolamina: alquilacilglicerol fosfoetanolamina transferasa Desaturasa H2C O C H H 2C O Pi O R2 CH P CH (CH2)2 R2 NH2 R3 O C H2 C O C H H2 C (CH2)2 H 2O O R2 Fosfohidrolasa H 2C O (CH2)2 R2 P Alquil, diacil gliceroles CMP O 1-Alquenil-2-acilglicerol 3-fosfoetanolamina plasmalógeno H CDP-colina CDP-colina: alquilacilglicerol fosfocolina transferasa C O C 1-Alquil-2-acilglicerol 3-fosfato 1-Alquil-2-acilglicerol R3 H2 C O C R3 OH * H 2C O C H H 2C O O (CH2)2 R2 H 2O R3 COOH HO P Fosfolipasa A2 Colina 1-Alquil-2-acilglicerol 3-fosfocolina H 2C O C H H2 C O (CH2)2 R2 P Colina Acetil-CoA 1-Alquil-2-lisoglicerol 3-fosfocolina Acetiltransferasa O H3C C H 2C O O C H H 2C O (CH2)2 R2 P Colina 1-Alquil-2-acetilglicerol 3-fosfocolina PAF Figura 24-4 Biosíntesis de lípidos éter, incluso plasmalógenos y PAF. En la vía de novo para la síntesis de PAF, la acetil-CoA se incorpora en la etapa*, lo que evita los dos últimos pasos en la vía mostrada aquí. lecitina hacia el colesterol para formar colesteril éster y lisolecitina, y se considera que es la causa de gran parte del colesteril éster en las lipoproteínas plasmáticas. Los ácidos grasos saturados de cadena larga se encuentran de modo predominante en la posición 1 de fos­ folípidos, mientras que los ácidos poliinsaturados (p. ej., los precur­ sores de PG) se incorporan con mayor frecuencia hacia la posición 2. La incorporación de ácidos grasos hacia lecitina ocurre por me­ dio de síntesis completa del fosfolípido, mediante transacilación en­ tre colesteril éster y lisolecitina, y por medio de acilación directa de la lisolecitina por la acil­CoA. Así, es posible un intercambio conti­ nuo de los ácidos grasos, sobre todo en lo que se refiere a introducir EFA en moléculas de fosfolípido. TODOS LOS ESFINGOLÍPIDOS SE FORMAN A PARTIR DE CERAMIDA La ceramida se sintetiza en el retículo endoplásmico a partir del aminoácido serina (fig. 24­7). La ceramida es una importante mo­ 24 Bender.indd 208 lécula emisora de señales (segundo mensajero) que regula vías, in­ cluso la muerte celular programada (apoptosis), el ciclo celular, y la diferenciación y senescencia celulares. Las esfingomielinas (fig. 15­11) son fosfolípidos y se forman cuando la ceramida reacciona con fosfatidilcolina para formar esfin­ gomielina más diacilglicerol (fig. 24­8A). Esto sucede sobre todo en el aparato de Golgi y en menor grado en la membrana plasmática. Los glucoesfingolípidos son una combinación de ceramida con uno o más residuos azúcar Los glucoesfingolípidos (cerebrósidos) más simples son la galactosilceramida (GalCer) y la glucosilceramida (GlcCer). La GalCer es un lípido importante de la mielina, mientras que la GlcCer es el principal glucoesfingolípido de los tejidos extraneurales y un precur­ sor de casi todos los glucoesfingolípidos más complejos. La GalCer (fig. 24­8B) se forma en una reacción entre ceramida y UDPGal (formada por epimerización a partir de UDPGlc, fig. 21­6). 27/11/09 14:17:21 Capítulo 24 O O R2 C O H2C O C H H2 C O + O C R1 CH3 (CH2)14 C NH3 S − CoA OOC HO Acil-CoA Serina palmitoiltransferasa CoA SH CO2 O H2 C O C H H2C O O C R1 CH3 (CH2)12 CH2 CH2 C 3-cetoesfinganina reductasa NADP+ CH3(CH2)12 COOH H H2 C O CH2 CH2 CH OH OH C OH NADPH + H+ Lisofosfolipasa HO CH2 NH3 3-cetoesfinganina Colina P H 2O H2C CH + Lisofosfatidilcolina (lisolecitina) R1 OH Piridoxal fosfato, Mn2+ Fosfolipasa A2 COOH CH2 Serina Colina P Fosfatidilcolina R2 CH Palmitoil-CoA H 2O Aciltransferasa 209 Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos CH NH3 CH2 OH + Dihidroesfingosina (esfinganina) R Colina P Glicerilfosfocolina hidrolasa S CoA Dihidroesfingosina N-acetiltransferasa Acil-CoA Glicerilfosfocolina H 2O CO CH3 CoA SH (CH2)12 CH2 CH2 CH CH CH2 OH NH CO OH R Dihidroceramida H 2C HO OH C H H2 C O P sn-Glicerol 3-fosfato Figura 24-5 CH3 Metabolismo de la fosfatidilcolina (lecitina). Fosfolipasa A1 O H 2C O R2 C O O C H H 2C O Fosfolipasa A2 C R1 Fosfolipasa D O P O N-base – O Fosfolipasa C Figura 24-6 Sitios de actividad hidrolítica de fosfolipasas sobre un sustrato fosfolípido. (CH2)12 CH CH CH CH CH2 OH NH CO OH R Ceramida Figura 24-7 Fosfolipasa B Dihidroceramida desaturasa 2H + Colina Biosíntesis de ceramida. activados (p. ej., UDPGlc y UDPGal) y un ácido siálico, por lo gene­ ral ácido N­acetilneuramínico (fig. 24­9). Puede formarse un gran número de gangliósidos de peso molecular creciente. Casi todas las enzimas que transfieren a azúcares desde azúcares nucleótido (glu­ cosil transferasas) se encuentran en el aparato de Golgi. Los glucoesfingolípidos son constituyentes de la hojuela externa de las membranas plasmáticas, y tienen importancia en la adherencia celular y el reconocimiento celular. Algunos son antígenos, por ejemplo, sustancias del grupo sanguíneo ABO. Ciertos gangliósidos funcionan como receptores para toxinas bacterianas (p. ej., para la toxina del cólera, que después activa a la adenilil ciclasa). ASPECTOS CLÍNICOS La sulfogalactosilceramida y otros sulfolípidos como los sulfo(galacto)-glicerolípidos, y los esteroide sulfatos se forman luego de reacciones adicionales que comprenden 3′­fosfoadenosina­ 5′­fosfosulfato (PAPS; “sulfato activo”). Los gangliósidos se sinteti­ zan a partir de la ceramida mediante la adición por pasos de azúcares 24 Bender.indd 209 La deficiencia de surfactante pulmonar suscita síndrome de dificultad respiratoria El surfactante pulmonar está compuesto en gran medida de lípido con algunas proteínas y carbohidratos, y evita que los alvéolos se 27/11/09 14:17:24 210 SECCIÓN II A Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Ceramida Fosfatidilcolina Diacilglicerol UDPGal UDP B Ceramida Los fosfolípidos y esfingolípidos participan en la esclerosis múltiple y en las lipidosis Esfingomielina PAPS Galactosilceramida (cerebrósido) Ciertas enfermedades se caracterizan por cantidades anormales de estos lípidos en los tejidos, a menudo en el sistema nervioso. Es fac­ tible clasificarlas en dos grupos: 1) enfermedades desmielinizantes verdaderas, y 2) esfingolipidosis. En la esclerosis múltiple, que es una enfermedad desmielini­ zante, hay pérdida tanto de fosfolípidos (en particular plasmalógeno etanolamina) como de esfingolípidos de la sustancia blanca. De este modo, la composición de lípido de la sustancia blanca semeja la de la sustancia gris. El líquido cefalorraquídeo muestra cifras aumenta­ das de fosfolípido. Las esfingolipidosis (enfermedades por depósito de lípido) son un grupo de enfermedades hereditarias que se producen por un defecto genético del catabolismo de lípidos que contienen esfingo­ sina. Forman parte de un grupo de mayor tamaño de trastornos li­ sosómicos y muestran varias características constantes: 1) lípidos complejos que contienen ceramida se acumulan en las células, par­ ticularmente en las neuronas, y ocasionan neurodegeneración y acortamiento del lapso de vida. 2) El índice de síntesis del lípido Sulfogalactosilceramida (sulfatida) Figura 24-8 Biosíntesis de (a) esfingomielina, (B) galactosilceramida y su derivado sulfo. (PAPS, “sulfato activo”, adenosina 3’-fosfato-5’-fosfosulfato.) colapsen. El fosfolípido dipalmitoil-fosfatidilcolina disminuye la tensión de superficie en la interfaz aire­líquido y, de esta manera, reduce mucho el trabajo de la respiración, pero otros componentes lípidos y proteínicos surfactantes también tienen importancia en la función surfactante. La deficiencia de surfactante pulmonar en mu­ chos recién nacidos pretérmino da lugar al síndrome de dificultad respiratoria del recién nacido. La administración de surfactante natural o artificial genera beneficio terapéutico. UDPGlc UDP UDPGal UDP Glucosil ceramida (Cer-Glc) Ceramida CMP-NeuAc CMP Cer-Glc-Gal Cer-Glc-Gal NeuAc (GM3) UDP-N-acetil galactosamina UDP Figura 24-9 Biosíntesis de gangliósidos. (NeuAc, ácido N-acetilneuramínico.) Gangliósidos superiores (disialo-gangliósidos y trisialo-gangliósidos) UDPGal Cer-Glc-Gal-GalNAc-Gal UDP Cer-Glc-Gal-GalNAc NeuAc (GM2) NeuAc (GM1) Cuadro 24-1 Ejemplos de esfingolipidosis Enfermedad deficiencia de enzima Lípido que se acumula Enfermedad de TaySachs Hexosaminidasa A .. Cer—Glc—Gal(NeuAc)— . GalNAc GM2 Gangliósido Enfermedad de Fabry α-Galactosidasa .. Cer—Glc—Gal— . Gal Globotriaosilceramida Leucodistrofia metacromática Arilsulfatasa A Enfermedad de Krabbe β-Galactosidasa .. Cer— . Gal Galactosilceramida Enfermedad de Gaucher β-Glucosidasa .. Cer— . Glc Glucosilceramida Enfermedad de Niemann-Pick Esfingomielinasa .. Cer— . P—colina Esfingomielina Enfermedad de Farber Ceramidasa .. Acil— . Esfingosina Ceramida Síntomas clínicos . Retraso mental, ceguera, debilidad muscular . Exantema cutáneo, insuficiencia renal (los síntomas completos sólo se observan en varones; recesiva ligada a X) Retraso mental y alteraciones psicológicas en adultos; desmielinización . .. Cer—Gal— . OSO3 3-Sulfogalactosilceramida . Retraso mental; casi no hay mielina . Agrandamiento de hígado y bazo, erosión de huesos largos, retraso mental en lactantes . Hígado y bazo agrandados, retraso mental; mortal en etapas tempranas de la vida . Ronquera, dermatitis, deformación del esqueleto, retraso mental; mortal en etapas tempranas de la vida . abreviaturas: NeuAc, ácido N-acetilneuramínico; Cer, ceramida; Glc, glucosa; Gal, galactosa; —... , sitio de reacción enzimática deficiente. 24 Bender.indd 210 27/11/09 14:17:27 Capítulo 24 almacenado es normal. 3) El defecto enzimático yace en la vía de degradación lisosómica de esfingolípidos. 4) La magnitud del de­ cremento de la actividad de la enzima afectada es similar en todos los tejidos. No se dispone de tratamiento eficaz para muchas de las enfermedades, si bien se ha logrado cierto éxito con la terapia de restitución de enzima y el trasplante de médula ósea en el trata­ miento de las enfermedades de Gaucher y de Fabry. Otros métodos promisorios son la terapia de privación de sustrato para inhibir la síntesis de esfingolípidos, y la terapia con chaperón químico. Tam­ bién se encuentra en investigación la terapia génica para trastornos lisosómicos. El cuadro 24­1 muestra algunos ejemplos de las más importantes enfermedades por depósito de lípido. La deficiencia múltiple de sulfatasa da por resultado acumu­ lación de sulfogalactosilceramida, esteroide sulfatos y proteogluca­ nos, debido a una deficiencia combinada de arilsulfatasas A, B y C, y esteroide sulfatasa. rESuMEN ■ ■ ■ ■ 24 Bender.indd 211 Los triacilgliceroles son los principales lípidos de almacenamiento de energía, mientras que los fosfogliceroles, la esfingomielina y los glucoesfingolípidos son anfipáticos y tienen funciones estructurales en membranas celulares, así como otras funciones especializadas. Los triacilgliceroles y algunos fosfogliceroles se sintetizan por medio de acilación progresiva de glicerol 3­fosfato. La vía se bifurca en el fosfatidato, y forma inositol fosfolípidos y cardiolipina por una parte, y triacilglicerol y fosfolípidos colina y etanolamina por la otra. Los plasmalógenos y el PAF son éter fosfolípidos formados a partir de la dihidroxiacetona fosfato. Los esfingolípidos se forman a partir de ceramida (N­acilesfingosina). La esfingomielina está presente en membranas de organelos involucrados en procesos secretorios (p. ej., el aparato de Golgi). Los glucoesfingolípidos más simples son una combinación de ceramida ■ Metabolismo de acilgliceroles y esfingolípidos 211 más un residuo azúcar (p. ej., GalCer en la mielina). Los gangliósidos son glucoesfingolípidos más complejos que contienen más residuos azúcar más ácido siálico. Están presentes en la capa externa de la membrana plasmática, donde contribuyen al glucocálix, y tienen importancia como antígenos y receptores celulares. Los fosfolípidos y esfingolípidos están implicados en varios procesos morbosos, entre ellos síndrome de dificultad respiratoria del recién nacido (falta de surfactante pulmonar), esclerosis múltiple (desmielinización) y esfingolipidosis (incapacidad para desintegrar esfingolípidos en lisosomas debido a defectos hereditarios de enzimas hidrolasa). rEFErENCiaS McPhail LC: Glycerolipid in signal transduction. In: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 4th ed. Vance DE, Vance JE (Eds.). Elsevier, 2002:315–340. Merrill AH, Sandhoff K: Sphingolipids: metabolism and cell signaling. In: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 4th ed. Vance DE, Vance JE (Eds.). Elsevier, 2002:373–408. Meyer KC, Zimmerman JJ: Inflammation and surfactant. Paediatr Respir Rev 2002;3:308. Prescott SM et al: Platelet­activating factor and related lipid mediators. Annu Rev Biochem 2000;69:419. Ruvolo PP: Intracellular signal transduction pathways activated by ceramide and its metabolites. 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Dado que los lípidos son insolubles en agua, el problema de cómo transpor­ tarlos en el plasma sanguíneo acuoso se resuelve al asociar lípidos no polares (triacilglicerol y colesteril ésteres) con lípidos (fosfolípi­ dos y colesterol) y proteínas anfipáticos para hacer lipoproteínas miscibles en agua. Los omnívoros (como el ser humano) que están alimentándose ingieren calorías en exceso en la fase anabólica del ciclo de alimen­ tación, lo cual va seguido por un periodo de balance calórico nega­ tivo cuando el organismo recurre a sus reservas de carbohidratos y grasas. Las lipoproteínas median este ciclo al transportar lípidos desde los intestinos como quilomicrones —y desde el hígado como lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL)— hacia casi todos los tejidos para oxidación y hacia el tejido adiposo para almacenamien­ to. El lípido se moviliza desde el tejido adiposo como ácidos grasos libres (AGL) unidos a la albúmina sérica. Las anormalidades del metabolismo de lipoproteínas dan por resultado diversas hipoli­ poproteinemias o hiperlipoproteinemias (cuadro 26­1). La más frecuente de éstas se observa en la diabetes mellitus, en la cual la deficiencia de insulina origina movilización excesiva de AGL y subutilización de quilomicrones y VLDL, lo que conduce a hiper­ triacilglicerolemia. Casi todos los otros estados patológicos que afectan el transporte de lípidos se deben principalmente a defectos hereditarios, algunos de los cuales causan hipercolesterolemia y aterosclerosis prematura. La obesidad —en especial la abdomi­ nal— es un factor de riesgo para mortalidad aumentada, hiperten­ sión, diabetes mellitus tipo 2, hiperlipidemia, hiperglucemia y di­ versas disfunciones endocrinas. LOS LÍPIDOS SE TRANSPORTAN EN EL PLASMA COMO LIPOPROTEÍNAS En las lipoproteínas hay cuatro clases principales de lípidos Los lípidos plasmáticos constan de triacilgliceroles (16%), fosfolí­ pidos (30%), colesterol (14%) y colesteril ésteres (36%) y una frac­ ción de tamaño mucho menor de ácidos grasos de cadena larga no esterificados (4%). Esta última fracción, los AGL, es la más activa de los lípidos plasmáticos desde el punto de vista metabólico. A P í T u l o Se han identificado cuatro grupos principales de lipoproteínas plasmáticas Dado que la grasa es menos densa que el agua, la densidad de una lipoproteína disminuye conforme se incrementa la proporción entre lípido y proteína (cuadro 25­1). Se han identificado cuatro grupos principales de lipoproteínas que tienen importancia fisiológica y en el diagnóstico clínico: 1) quilomicrones, derivados de la absorción intestinal de triacilglicerol y otros lípidos; 2) lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL, o pre­β­lipoproteínas), derivadas del hígado para la exportación de triacilglicerol; 3) lipoproteínas de baja den­ sidad (LDL, o β­lipoproteínas), que representan una etapa final en el catabolismo de VLDL, y 4) lipoproteínas de alta densidad (HDL, o α­lipoproteínas), comprendidas en el transporte de colesterol y en el metabolismo de LDL y de quilomicrones. El triacilglicerol es el lípido predominante en quilomicrones y VLDL, mientras que el co­ lesterol y los fosfolípidos son los lípidos predominantes en LDL y HDL, respectivamente (cuadro 25­1). Las lipoproteínas pueden se­ pararse de acuerdo con sus propiedades electroforéticas en α­, β­ y pre­β­lipoproteínas. Las lipoproteínas constan de un centro no polar y una capa de superficie única de lípidos anfipáticos El centro de lípidos no polar consta sobre todo de triacilglicerol y colesteril éster, y está rodeado por una capa de superficie única de moléculas de fosfolípido y colesterol anfipáticas (fig. 25­1), las cuales se encuentran orientadas de modo que sus grupos polares miran hacia afuera, hacia el medio acuoso, como en la membrana celular (cap. 15). La porción proteína de una lipoproteína se conoce como una apolipoproteína o apoproteína, y constituye cerca de 70% de algunas HDL, y apenas 1% de los quilomicrones. Algunas apolipoproteínas son integrales y no se pueden eliminar, mientras que otras están libres para transferir hacia otras lipoproteínas. La distribución de las apolipoproteínas caracteriza a la lipoproteína En cada lipoproteína hay una o más apolipoproteínas (proteínas o polipéptidos). Las principales apolipoproteínas de HDL (α­lipopro­ teína) se designan A (cuadro 25­1). La principal apolipoproteína de la LDL (β­lipoproteína) es la apolipoproteína B (B­100), que tam­ bién se encuentra en VLDL. Los quilomicrones contienen una forma truncada de apo B (B­48) que se sintetiza en el intestino, mientras 212 25 Bender.indd 212 27/11/09 14:18:19 cApítuLo 25 213 Transporte y almacenamiento de lípidos CuaDro 25-1 Composición de las lipoproteínas en plasma de humanos Composición Lipoproteína Fuente Diámetro (nm) Densidad (g/ml) Proteínas (%) Lípidos (%) Principales componentes lípidos apolipoproteínas Quilomicrones Intestino 90–1000 < 0.95 1–2 98–99 Triacilglicerol A-I, A-II, A-IV,1 B-48, C-I, C-II, C-III, E Residuos de quilomicrones Quilomicrones 45–150 < 1.006 6–8 92–94 Triacilglicerol, fosfolípidos, colesterol B-48, E VLDL Hígado (intestino) 30–90 0.95–1.006 7–10 90–93 Triacilglicerol B-100, C-I, C-II, C-III IDL VLDL 25–35 1.006–1.019 11 89 Triacilglicerol, colesterol B-100, E LDL VLDL 20–25 1.019–1.063 21 79 Colesterol B-100 HDL Hígado, intestino, VLDL, quilomicrones Fosfolípidos, colesterol A-I, A-II, A-IV, C-I, C-II, C-III, D,2 E HDL1 20–25 1.019–1.063 32 68 HDL2 10–20 1.063–1.125 33 67 5–10 1.125–1.210 57 43 HDL3 Preβ-HDL <5 3 Albúmina/AGL > 1.210 Tejido adiposo > 1.281 A-I 99 1 AGL abreviaturas: HDL, lipoproteínas de alta densidad; IDL, lipoproteínas de densidad intermedia; LDL, lipoproteínas de baja densidad; VLDL, lipoproteínas de muy baja densidad. 1 Secretadas con quilomicrones, pero se tansfieren a HDL. 2 Asociadas con subfracciones HDL2 y HDL3. 3 Parte de una fracción menor conocida como lipoproteínas de muy alta densidad (VHDL). Apoproteína periférica (p. ej., apo C) Colesterol libre Fosfolípido Colesteril éster Triacilglicerol Centro de lípidos principalmente no polares Apoproteína integral (p. ej., apo B) Monocapa de lípidos principalmente anfipáticos Figura 25-1 Estructura generalizada de una lipoproteína plasmática. Cabe hacer notar las similitudes con la estructura de la membrana plasmática. En la capa superficial hay pequeñas cantidades de colesteril éster y triacilglicerol, y un poco de colesterol libre en el centro. que la B­100 se sintetiza en el hígado. La apo B­100 es una de las cadenas polipeptídicas únicas más largas conocidas; tiene 4 536 aminoácidos, y una masa molecular de 550 000 Da. La apo B­48 (48% de B­100) se forma a partir del mismo ácido ribonucleico mensajero (mRNA) que la apo B­100 después de la introducción de una señal de detención por una enzima que edita el RNA. Las apo C­I, C­II y C­III son polipéptidos de menor tamaño (masa molecu­ lar de 7 000 a 9 000 Da) libremente transferibles entre varias lipo­ 25 Bender.indd 213 proteínas distintas. La apo E se encuentra en VLDL, HDL, quilomi­ crones y remanentes de quilomicrón; explica 5 a 10% de las apolipoproteínas VLDL totales en sujetos normales. Las apolipoproteínas llevan a cabo varias funciones: 1) pueden formar parte de la estructura de la lipoproteína, por ejemplo, apo B; 2) son cofactores de enzimas, por ejemplo, C­II para la lipoproteína lipasa, A­I para la lecitina:colesterol aciltransferasa, o inhibidores de enzima, por ejemplo, apo A­II y apo C­III para la lipoproteína lipa­ sa, apo C­I para la proteína de transferencia de colesteril éster, y 3) actúan como ligandos para la interacción con receptores de lipo­ proteína en los tejidos, por ejemplo, apo B­100 y apo E para el recep­ tor de LDL, apo E para la proteína relacionada con receptor de LDL (LRP), que se ha identificado como el receptor de remanente, y apo A­I para el receptor de HDL. Sin embargo, las funciones de la apo A­IV y de la apo D aún no se definen con claridad, aunque se cree que la apo D es un factor importante en trastornos neurodegenera­ tivos en seres humanos. LOS AGL SE METABOLIZAN CON RAPIDEZ Los AGL (ácidos grasos no esterificados) surgen en el plasma a par­ tir de la desintegración de triacilglicerol en el tejido adiposo, o como resultado de la acción de la lipoproteína lipasa sobre los triacilglice­ roles plasmáticos. Se encuentran en combinación con la albúmina, un solubilizante muy eficaz, en concentraciones que varían entre 0.1 y 2.0 µeq/ml de plasma. Las cifras son bajas cuando el individuo está completamente alimentado y aumentan hasta 0.7 a 0.8 µeq/ml en el estado de inanición. En la diabetes mellitus no controlada, la con­ centración puede incrementarse hasta 2 µeq/ml. 27/11/09 14:18:21 214 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos Los AGL se eliminan de la sangre con rapidez extrema y se oxi­ dan (lo que satisface 25 a 50% de los requerimientos de energía en la inanición) o se esterifican para formar triacilglicerol en los tejidos. En la inanición, los lípidos esterificados de la circulación o en los tejidos también se oxidan, de modo particular en células del cora­ zón y el músculo estriado, donde se encuentran considerables reser­ vas de lípido. La captación de AGL por los tejidos muestra vínculo directo con las cifras plasmáticas de AGL que, a su vez, están determinadas por el índice de lipólisis en el tejido adiposo. Luego de disociación del complejo de ácido graso­albúmina en la membrana plasmática, los ácidos grasos se unen a una proteína de transporte de ácido graso de membrana que actúa como un cotransportador de mem­ brana con Na+. En el momento de entrar al citosol, los AGL son unidos por proteínas de unión a ácido graso intracelulares. Se cree que la función de estas proteínas en el transporte intracelular es si­ milar a la de la albúmina sérica en el transporte extracelular de áci­ dos grasos de cadena larga. También se encuentran pequeñas cantidades de VLDL en el quilo; empero, casi todas las VLDL en el plasma son de origen hepático. Son los vehículos de transporte de triacilglicerol desde el hígado hacia los tejidos extrahepáticos. Hay notorias similitudes en los mecanismos de formación de quilomicrones por las células intestinales y de VLDL por las células del parénquima hepático (fig. 25­2), quizá porque —aparte de la glándula mamaria— el intestino y el hígado son los únicos tejidos a partir de los cuales se secreta lípido particulado. Los quilomicrones y las VLDL recién secretados o “nacientes” sólo contienen una pe­ queña cantidad de apolipoproteínas C y E, y el complemento com­ pleto se adquiere a partir de HDL en la circulación (figs. 25­3 y 25­4). La apo B es esencial para la formación de quilomicrón y de VLDL. En la abetalipoproteinemia (una enfermedad rara), no se forman lipoproteínas que contienen apo B, y se acumulan gotitas de lípido en el intestino y el hígado. A continuación se presenta una exposición más detallada de los factores que controlan la secreción hepática de VLDL. EL TRIACILGLICEROL SE TRANSPORTA DESDE LOS INTESTINOS EN QUILOMICRONES Y DESDE EL HÍGADO EN LIPOPROTEÍNAS DE MUY BAJA DENSIDAD LOS QUILOMICRONES Y LAS LIPOPROTEÍNAS DE MUY BAJA DENSIDAD SE CATABOLIZAN CON RAPIDEZ La depuración de quilomicrones de la sangre es rápida; el tiempo medio de desaparición es de menos de 1 h en seres humanos. Las partículas de mayor tamaño se catabolizan con mayor rapidez que las de menor tamaño. Los ácidos grasos que se originan a partir del tria­ Por definición, los quilomicrones se encuentran en el quilo forma­ do sólo por el sistema linfático que drena el intestino. Se encargan del transporte de todos los lípidos de la dieta hacia la circulación. B Luz intestinal • •• •• • • • • • • • •• ••••• •••••• •• •• • •••• ••••••• •• • •• • •• • • • ••• • •• • RER •• •• • • ••••• • • • • • • •• • • • • • •• • • •••••• • G • ••••••••• • • • • • • • ••• ••• SER • •• •• •• • • • • •• • • • • • •• •• • • • RER •••• • •• • • •• • • ••• • • •• •• • • ••• • •• • • •• A • •••• SER N N Canalículo biliar G C VLDL Fenestraciones ED Capilar sanguíneo Vaso linfático que va al conducto torácico Célula endotelial E Luz del sinusoide sanguíneo Figura 25-2 La formación y excreción de (a) quilomicrones por una célula intestinal y (B) VLDL por una célula hepática. (RER, retículo endoplásmico rugoso; REL, retículo endoplásmico liso; G, aparato de Golgi; N, núcleo; C, quilomicrones; VLDL, lipoproteínas de muy baja densidad; E, endotelio; ED, espacio de Disse, que contiene plasma sanguíneo.) La apolipoproteína B, sintetizada en el RER, se incorpora en lipoproteínas en el REL, el principal sitio de síntesis de triacilglicerol. Luego de la adición de residuos carbohidrato en el G, se liberan de las células mediante pinocitosis inversa. Los quilomicrones pasan hacia el sistema linfático. La VLDL se secreta hacia el ED y después hacia los sinusoides hepáticos a través de fenestraciones en el revestimiento endotelial. 25 Bender.indd 214 27/11/09 14:18:23 cApítuLo 25 Transporte y almacenamiento de lípidos 215 Km baja para triacilglicerol, alrededor de una décima parte de aque­ lla para la enzima en el tejido adiposo. Esto permite que el suminis­ tro de ácidos grasos provenientes de triacilglicerol se redirija desde el tejido adiposo hacia el corazón en el estado de inanición cuan­ do hay decremento del triacilglicerol plasmático. Ocurre una redi­ rección similar hacia la glándula mamaria durante la lactación, lo que permite la captación de ácido graso de triacilglicerol de lipopro­ teína para la síntesis de grasa de la leche. El receptor de VLDL tiene importancia en el suministro de ácidos grasos desde triacilglicerol de VLDL hacia adipocitos al unir VLDL y llevarla en contacto estre­ cho con la lipoproteína lipasa. En el tejido adiposo, la insulina au­ menta la síntesis de lipoproteína lipasa en los adipocitos, y su trans­ locación hacia la superficie luminal del endotelio capilar. cilglicerol de quilomicrón van de modo predominante al tejido adi­ poso, corazón y músculo (80%), mientras que alrededor de 20% va al hígado. Con todo, el hígado no metaboliza quilomicrones o VLDL naturales de modo significativo; así, los ácidos grasos en el hígado deben ser secundarios a su metabolismo en tejidos extrahepáticos. Los triacilgliceroles de quilomicrones y VLDL se hidrolizan por medio de la lipoproteína lipasa La lipoproteína lipasa está localizada sobre las paredes de los capi­ lares sanguíneos y anclada al endotelio mediante cadenas de pro­ teoglucano con carga negativa de heparán sulfato. Se ha encontrado en el corazón, el tejido adiposo, el bazo, pulmones, médula renal, aorta, diafragma y glándula mamaria en lactación, aunque no es activa en el hígado de adultos. Por lo general no se encuentra en sangre; aun así, después de la inyección de heparina se libera lipo­ proteína lipasa desde sus sitios de unión a heparán sulfato hacia la circulación. La lipasa hepática está unida a la superficie sinusoidal de células hepáticas, y la heparina también la libera. Como quiera que sea, esta enzima no reacciona con facilidad con quilomicrones o VLDL, sino que participa en el metabolismo de remanente de qui­ lomicrón y de HDL. Tanto los fosfolípidos como la apo c­II se requieren como co­ factores para la actividad de la lipoproteína lipasa, mientras que la apo A­II y la apo c­III actúan como inhibidores. La hidrólisis tiene lugar mientras las lipoproteínas están fijas a la enzima sobre el endo­ telio. El triacilglicerol se hidroliza de manera progresiva pasando por un diacilglicerol hasta un monoacilglicerol y, por último, hacia AGL más glicerol. Algunos de los AGL liberados regresan a la circu­ lación, fijos a albúmina, pero la mayor parte se transporta hacia el tejido (figs. 25­3 y 25­4). La lipoproteína lipasa cardiaca tiene una La acción de la lipoproteína lipasa forma lipoproteínas remanentes La reacción con lipoproteína lipasa causa la pérdida de 70 a 90% del triacilglicerol de quilomicrones, y la pérdida de apo C (que regresa a HDL), no así de apo E, que se retiene. El remanente de quilomi­ crón resultante tiene alrededor de la mitad del diámetro del quilo­ micrón original, y está relativamente enriquecido en colesterol y colesteril ésteres debido a la pérdida de triacilglicerol (fig. 25­3). Ocurren cambios similares a VLDL, con la formación de remanen­ tes de VLDL (también denominados lipoproteínas de densidad intermedia [IDL]) (fig. 25­4). El hígado se encarga de la captación de lipoproteínas remanentes El hígado capta remanentes de quilomicrón por medio de endocito­ sis mediada por receptor, y los colesteril ésteres y triacilgliceroles se TG de la dieta Quilomicrón naciente B-48 Intestino delgado Linfáticos A TG C o Ap Receptor de LDL (apo B-100, E) Ácidos grasos HL Hígado LRP B-48 E A Tejidos extrahepáticos TG C C E PL, C C HDL Colesterol Quilomicrón E Apo C, A Ap o A , A po C Lipoproteína lipasa B-48 TG C E Remanente de quilomicrón Glicerol Ácidos grasos Figura 25-3 Destino metabólico de quilomicrones. (A, apolipoproteína A; B-48, apolipoproteína B-48; , apolipoproteína C; E, apolipoproteína E; HDL, lipoproteína de alta densidad; TG, triacilglicerol; C, colesterol y colesteril éster; PL, fosfolípido; HL, lipasa hepática; LRP, proteína relacionada con el receptor de LDL.) Sólo se muestran los lípidos predominantes. © 25 Bender.indd 215 27/11/09 14:18:25 216 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos VLDL naciente B-100 TG C E Receptor de LDL (apo B-100, E) A C po C, VLDL B-100 E Apo A C E PL, C C HDL Ácidos grasos Tejidos extrahepáticos TG C E A po C Lipoproteína lipasa B-100 Colesterol B-100 C Hígado Receptor de LDL (apo B 100, E) Destrucción final en el hígado, tejidos extrahepáticos (p. ej., linfocitos, fibroblastos) por medio de endocitosis TG C E IDL (remanente de VLDL) Ácidos grasos LDL Glicerol Tejidos extrahepáticos Figura 25-4 Destino metabólico de VLDL y producción de LDL. (A, apolipoproteína A; B-100, apolipoproteína B-100; ©, apolipoproteína C; E, apolipoproteína E; HDL, lipoproteína de alta densidad; TG, triacilglicerol; IDL, lipoproteína de densidad intermedia; C, colesterol y colesteril éster; PL, fosfolípido.) Sólo se muestran los lípidos predominantes. Es posible que algo de IDL también se metabolice por medio de la LRP. hidrolizan y metabolizan. La captación está mediada por apo E (fig. 25­3), mediante dos receptores dependientes de apo E, el receptor de LDL (apo B­100, E) y la LRp. La lipasa hepática tiene una fun­ ción doble: 1) actúa como un ligando para facilitar la captación de remanentes, y 2) hidroliza el triacilglicerol y fosfolípido remanente. Luego de metabolismo hacia IDL, la VLDL puede ser captada de modo directo por el hígado por medio del receptor de LDL (apo B­100, E), o convertirse en LDL. En cada una de estas partículas de lipoproteína únicamente hay una molécula de apo B­100 y ésta se conserva en el transcurso de las transformaciones. De esta manera, cada partícula de LDL se deriva de una partícula de VLDL precur­ sora única (fig. 25­4). En seres humanos, una proporción relativa­ mente grande de IDL forma LDL, lo que explica las concentraciones incrementadas del LDL en seres humanos en comparación con mu­ chos otros mamíferos. LA LDL SE METABOLIZA MEDIANTE EL RECEPTOR DE LDL El hígado y muchos otros tejidos extrahepáticos expresan el recep­ tor de LDL (apo B­100, E), recibe ese nombre porque es específico para apo B­100, no así para B­48, que carece del dominio terminal carboxilo de B­100 que contiene el ligando receptor de LDL, y capta también lipoproteínas ricas en apo E. Un 30% de la LDL se degrada en tejidos extrahepáticos y 70% en el hígado. Hay una correlación positiva entre la incidencia de aterosclerosis y las cifras plasmáticas de colesterol de LDL. El receptor de LDL (Apo B­100, E) es defec­ tuoso en la hipercolesterolemia familiar, enfermedad genética que 25 Bender.indd 216 aumenta las concentraciones de colesterol de LDL y suscita ateros­ clerosis prematura. En el capítulo 26 se presentan más detalles de la regulación del receptor de LDL. LA HDL PARTICIPA EN EL METABOLISMO TANTO DE TRIACILGLICEROL COMO DE COLESTEROL DE LIPOPROTEÍNA La HDL se sintetiza tanto en hígado como en intestino y se secreta a partir de los mismos (fig. 25­5). De cualquier modo, la apo C y la apo E se sintetizan en el hígado y se transfieren desde la HDL hepá­ tica hacia la HDL intestinal cuando esta última entra en el plasma. Una función importante de la HDL es actuar como un depósito para la apo C y apo E requeridas en el metabolismo de quilomicrones y VLDL. La HDL naciente consta de bicapas de fosfolípido discoi­ dales que contienen apo A y colesterol libre. Estas lipoproteínas son similares a las partículas que se encuentran en el plasma de enfermos que tienen una deficiencia de la enzima plasmática lecitina:colesterol aciltransferasa (LcAt) y en el de aquellos con ictericia obstructiva. La LCAT —y el activador de LCAT apo A­I— se unen a las partículas discoidales, y el fosfolípido de superficie y el colesterol libre se convierten en colesteril ésteres y lisolecitina (cap. 24). Los colesteril ésteres no polares se mueven hacia el interior hi­ drofóbico de la bicapa, mientras que la lisolecitina se transfiere ha­ cia la albúmina plasmática. De este modo, se genera un centro no polar, lo que forma una HDL seudomicelar, esférica, cubierta por una película superficial de lípidos y apolipoproteínas polares. Esto ayuda a la eliminación de colesterol no esterificado excesivo desde 27/11/09 14:18:27 cApítuLo 25 Transporte y almacenamiento de lípidos Bicapa de fosfolípido Hígado C y ácidos biliares en la bilis PL C Síntesis C CE PL Lipasa hepática SR-B1 Lipasa endotelial Riñón A-I 217 Intestino delgado Síntesis LCAT HDL discoidal A-I A-I PL C Tejidos Preβ-HDL ABCA1 C SR-B1 C CE PL HDL2 A-I C CE PL A-I ABCG1 LCAT HDL3 Figura 25-5 Metabolismo de HDL en el transporte inverso de colesterol (LCAT, lecitina:colesterol aciltransferasa; C, colesterol; CE, colesteril éster; PL, fosfolípido; A-I, apolipoproteína A-I; SR-B1, receptor recolector B1; ABCA1, transportadores de casete A1 de unión a ATP; ABCG1, transportadores de casete G1 de unión a ATP). Preβ-HDL, HDL2, HDL3 (cuadro 25-1). Los constituyentes de superficie excedentes por la acción de la lipoproteína lipasa sobre los quilomicrones y VLDL son otra fuente de preβ-HDL. La actividad de lipasa hepática es incrementada por andrógenos y disminuida por estrógenos, lo cual quizá explique las cifras plasmáticas más altas de HDL2 en mujeres. lipoproteínas y tejidos (véase más adelante). El receptor recolector B1 clase B (SR­B1) ha sido identificado como un receptor de HDL con una función doble en el metabolismo de HDL. En el hígado y en tejidos esteroidogénicos, se une a la HDL por medio de la apo A­I, y el colesteril éster se lleva de manera selectiva hacia las células, aunque la partícula en sí, incluso apo A­I, no es captada. Por otra parte, en los tejidos, el SR­B1 media la aceptación del colesterol que sale de las células por la HDL, que después lo transporta hacia el hígado para excreción mediante la bilis (sea como colesterol o luego de conversión en ácidos biliares) en el proceso conocido como transporte inverso de colesterol (fig. 25­5). La HDL3, generada a partir de HDL discoidal por medio de la acción de LCAT, acepta colesterol proveniente de los tejidos mediante el SR­B1, y a conti­ nuación la LCAT esterifica el colesterol, lo que incrementa el tama­ ño de las partículas para formar la HDL2 menos densa. Después se vuelve a formar HDL3, sea después de suministro selectivo de coles­ teril éster al hígado por medio del SR­B1 o mediante hidrólisis de fosfolípido y triacilglicerol de HDL2 por medio de la lipasa hepática y la lipasa endotelial. Este intercambio de HDL2 y HDL3 se llama el ciclo de HDL (fig. 25­5). La apo A­I libre se libera mediante estos procesos y forma preβ­HDL luego de relacionarse con una cantidad mínima de fosfolípido y colesterol. La apo A­I excesiva se destruye en los riñones. Un segundo mecanismo importante para el trans­ porte inverso de colesterol comprende los transportadores de case­ 25 Bender.indd 217 te A1 de unión a Atp (ABcA1) y G1 (ABcG1), los cuales son miembros de una familia de proteínas transportadoras que unen la hidrólisis de ATP a la unión de un sustrato, lo que permite que se transporten a través de la membrana. El ABCG1 media el transpor­ te de colesterol desde células hacia HDL, mientras que el ABCA1 promueve de preferencia el flujo de salida de partículas poco lipida­ das, como preβ­HDL o apo A­1, que después se convierten en HDL3 por medio de la HDL discoidal (fig. 25­5). La preβ­HDL es la forma más potente de HDL que induce el flujo de salida de colesterol desde los tejidos. Las cifras de HDL varían de modo recíproco con las concentra­ ciones plasmáticas de triacilglicerol, y de manera directa con la acti­ vidad de la lipoproteína lipasa. Esto puede deberse a constituyentes de superficie excesivos, p. ej., fosfolípido y apo A­I, que se liberan durante la hidrólisis de quilomicrones y VLDL, y contribuyen a la formación de preβ­HDL y HDL discoidal. Las cifras de HDL2 mues­ tran relación inversa con la incidencia de aterosclerosis, quizá porque reflejan la eficiencia del transporte de colesterol inverso. El HDLc (HDL1) se encuentra en la sangre de animales con hipercoles­ terolemia inducida por la dieta. Tiene alto contenido de colesterol, y su única apolipoproteína es la apo E. Parece ser que todas las lipo­ proteínas plasmáticas son componentes interrelacionados de uno o más ciclos metabólicos que juntos se encargan del proceso complejo del transporte de lípidos en el plasma. 27/11/09 14:18:37 218 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos EL HÍGADO DESEMPEÑA UNA FUNCIÓN FUNDAMENTAL EN EL TRANSPORTE Y METABOLISMO DE LÍPIDOS El hígado efectúa las funciones importantes que siguen en el meta­ bolismo de lípidos: 1. Facilita la digestión y absorción de lípidos mediante la producción de bilis, que contiene colesterol y sales biliares sintetizados dentro del hígado de novo o luego de captación de colesterol de lipoproteína (cap. 26). 2. Sintetiza y oxida ácidos grasos de modo activo (caps. 22 y 23), y sintetiza triacilgliceroles y fosfolípidos (cap. 24). 3. convierte ácidos grasos en cuerpos cetónicos (cetogénesis) (cap. 22). 4. Tiene una participación esencial en la síntesis y el metabolismo de proteínas plasmáticas (este capítulo). La secreción de VLDL hepática se relaciona con el estado hormonal y en cuanto a dieta Los eventos celulares comprendidos en la formación y secreción de VLDL ya se describieron (fig. 25­2) y se muestran en la figura 25­6. La síntesis hepática de triacilglicerol proporciona el estímulo inme­ diato para la formación y secreción de VLDL. Los ácidos grasos usa­ dos se derivan de dos posibles fuentes: 1) síntesis en el hígado a partir de acetil­coA derivada principalmente de carbohidratos (tal vez no tan importante en seres humanos), y 2) captación de AGL desde la circulación. La primera fuente predomina en el estado bien alimentado, cuando la síntesis de ácidos grasos es alta y la concen­ tración de AGL circulantes es baja. Dado que en estas condiciones el triacilglicerol por lo normal no se acumula en el hígado, debe infe­ rirse que se transporta desde dicho órgano en VLDL con tanta rapi­ dez como se sintetiza, y que la síntesis de apo B­100 no es limitante. Los AGL que provienen de la circulación son la principal fuente en el transcurso de inanición, el consumo de dietas con alto contenido de grasa, o en la diabetes mellitus, cuando la lipogénesis hepática está inhibida. Los factores que aumentan tanto la síntesis de triacil­ glicerol como la secreción de VLDL por el hígado son: 1) el estado posprandial más que el de inanición; 2) el consumo de dietas con alto contenido de carbohidratos (en particular si contienen sacarosa o fructosa), lo que lleva a índices altos de lipogénesis y esterificación de ácidos grasos; 3) cifras altas de AGL circulantes; 4) ingestión de etanol, y 5) la presencia de concentraciones altas de insulina, y bajas de glucagon, lo que incrementa la síntesis y la esterificación de áci­ dos grasos, e inhibe su oxidación (fig. 25­6). ASPECTOS CLÍNICOS El desequilibrio del índice de la formación y exportación de triacilglicerol produce hígado graso Por diversas razones, los lípidos —principalmente como triacilgli­ cerol— pueden acumularse en el hígado (fig. 25­6). La acumulación extensa se considera un estado patológico. La enfermedad de híga­ do graso no alcohólico es el trastorno hepático más frecuente en todo el mundo. Cuando la acumulación de lípido en el hígado se 25 Bender.indd 218 hace crónica, pueden aparecer cambios inflamatorios y fibróticos que llevan a esteatohepatitis no alcohólica, la cual puede progresar hacia enfermedades del hígado, entre ellas cirrosis, hepatocarcino­ ma e insuficiencia hepática. Los hígados grasos caen dentro de dos categorías principales. El primer tipo muestra vínculo con cifras plasmáticas aumentadas de AGL que dependen de la movilización de grasa desde el tejido adiposo o de la hidrólisis de triacilglicerol de lipoproteína por la li­ poproteína lipasa en tejidos extrahepáticos. La producción de VLDL no lleva el mismo ritmo que el flujo hacia adentro y esterificación cada vez mayores de AGL, lo que permite que se acumule triacilgli­ cerol, que a su vez ocasiona hígado graso. Esto ocurre durante la inanición y el consumo de dietas con alto contenido de grasa. También puede haber alteración de la capacidad para secretar VLDL (p. ej., en la inanición). En la diabetes mellitus no controlada, la enfermedad de los corderos gemelos y la cetosis en ganado vacu­ no, la infiltración grasa es lo bastante grave como para dar por re­ sultado palidez (aspecto adiposo) visible y agrandamiento del híga­ do con posible disfunción hepática. El segundo tipo de hígado graso por lo general se debe a un bloqueo metabólico en la producción de lipoproteínas plasmáti­ cas, lo que permite que se acumule triacilglicerol. En teoría, la lesión quizá se deba a: 1) bloqueo de la síntesis de apolipoproteína; 2) blo­ queo de la síntesis de la lipoproteína a partir de lípido y apolipopro­ teína; 3) fracaso en el suministro de fosfolípidos que se encuentran en las lipoproteínas, o 4) fracaso del mecanismo secretorio mismo. Un tipo de hígado graso que se ha estudiado de manera extensa en ratas se produce por una deficiencia de colina que, en conse­ cuencia, se ha llamado un factor lipotrópico. El antibiótico puro­ micina, la etionina (ácido α­amino­γ­mercaptobutírico), el tetraclo­ ruro de carbono, cloroformo, fósforo, plomo y arsénico originan hígado graso, y una notoria reducción de la concentración de VLDL en ratas. La colina no protegerá al organismo contra estos agentes, pero parece ayudar en la recuperación. La acción del tetracloruro de carbono probablemente comprende la formación de radicales libres que causan peroxidación lípida. La acción antioxidante de dietas complementadas con vitamina E proporciona cierta protección contra esto. Se cree que la acción de la etionina depende de una re­ ducción de la disponibilidad de ATP debido a que remplaza metio­ nina en la S­adenosilmetionina, lo que atrapa la adenina disponible y evita la síntesis de ATP. El ácido orótico también suscita hígado graso; se cree que interfiere con la glucosilación de la lipoproteína, lo que inhibe la liberación, y puede alterar también el reclutamiento de triacilglicerol hacia las partículas. Una deficiencia de vitamina E incrementa la necrosis hepática del tipo de hígado graso de defi­ ciencia de colina. La vitamina E o una fuente de selenio añadida tiene un efecto protector al combatir la peroxidación lípida. Además de deficiencia de proteína, las deficiencias de ácido graso esencial y de vitamina (p. ej., ácido linoleico, piridoxina y ácido pantoténico) pueden producir infiltración adiposa del hígado. El etanol también ocasiona hígado graso El hígado graso de origen alcohólico es la primera etapa de la he­ patopatía alcohólica que se produce por alcoholismo y por último produce cirrosis. La grasa se acumula en el hígado por una combi­ nación de oxidación de ácidos grasos alterada y aumento de la lipo­ génesis, que se cree que se debe a cambios del potencial redox 27/11/09 14:18:39 cApítuLo 25 Transporte y almacenamiento de lípidos 219 VLDL Apo C Apo E VLDL naciente SANGRE HEPATOCITO HDL VLDL naciente – Residuos glucosilo Complejo de Golgi Retículo endoplásmico liso Ácido orótico Tetracloruro de carbono Puromicina AminoEtionina ácidos Destrucción de la apo B-100 excedente Tetracloruro de carbono Colesterol Colesteril éster Apo B-100 Apo C Apo E – M Polirribosomas M – Retículo endoplásmico rugoso Síntesis de membrana Triacilglicerol * Síntesis de proteína Fosfolípido Alimentación con colesterol Deficiencia de EFA – Cadenas polipeptídicas de apo B-100 nacientes Lípido EFA Deficiencia de colina TRIACILGLICEROL 1,2-Diacilglicerol Insulina Etanol + Fosfocolina Glucagon Acil-CoA Colina – + Insulina CDP-colina Oxidación – Insulina + AGL Lipogénesis a partir de carbohidrato Figura 25-6 La síntesis de VLDL en hígado y los posibles lugares de acción de factores que ocasionan la acumulación de triacilglicerol e hígado graso. (EFA, ácidos grasos esenciales; AGL, ácidos grasos libres; HDL, lipoproteínas de alta densidad; Apo, apolipoproteína; M, proteína de transferencia de triacilglicerol microsómica.) Las vías indicadas forman una base para los eventos descritos en la figura 25-2. El principal fondo común de triacilglicerol (resaltado en un cuadrado de color naranja) en el hígado no está en la vía directa de síntesis de VLDL desde acil-CoA. Así, los AGL, la insulina y el glucagon tienen efectos inmediatos sobre la secreción de VLDL, puesto que sus efectos repercuten de modo directo sobre el pequeño fondo común de precursor de triacilglicerol*. En el estado por completo alimentado, la síntesis de apo B-100 excede los requerimientos para la secreción de VLDL y el excedente se destruye en el hígado. Durante la traducción de apo B-100, el transporte de lípido mediado por proteína de transferencia microsómica permite que el lípido se asocie con la cadena polipeptídica naciente. Luego de liberación desde los ribosomas, estas partículas se fusionan con más lípidos provenientes del retículo endoplásmico liso, lo que produce LDL naciente. [NADH]/[NAD+] en el hígado, y a interferencia con la acción de factores de transcripción que regulan la expresión de las enzimas comprendidas en las vías. La oxidación de etanol por la alcohol des­ hidrogenasa da pie a la producción excesiva de NADH. ALCOHOL DESHIDROGENASA CH3 CH2 Etanol 25 Bender.indd 219 OH CH3 NAD+ NADH + H+ CHO Acetaldehído El NADH generado compite con equivalentes reductores pro­ venientes de otros sustratos, entre ellos ácidos grasos, por la cadena respiratoria; ello inhibe su oxidación y da por resultado incremento de la esterificación de ácidos grasos para formar triacilglicerol, lo que origina hígado graso. La oxidación del etanol lleva a la forma­ ción de acetaldehído, que es oxidado por la aldehído deshidroge­ nasa, lo que produce acetato. La proporción [NADH]/[NAD+] au­ mentada también origina incremento del [lactato]/[piruvato], lo que causa hiperlacticacidemia, que aminora la excreción de ácido úrico, lo cual agrava la gota. Algo del metabolismo de etanol tiene 27/11/09 14:18:42 220 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos lugar por medio de un oxidante de etanol microsómico (MEOS) de­ pendiente del citocromo P450, que comprende NADPH y O2. La actividad de este sistema aumenta en el alcoholismo crónico, y pue­ de explicar el incremento de la depuración metabólica en esta enfer­ medad. El etanol también inhibe el metabolismo de algunos fárma­ cos, por ejemplo, barbitúricos, al competir por enzimas dependientes del citocromo P450. Glucosa Sangre Tejido adiposo MEOS CH3 CH2 Etanol CO2 OH + NADPH + H+ + O2 CH3 Insulina Glucosa 6-fosfato Glucólisis PPP NADPH + H+ CHO + NADP+ + 2H2O + Acetil-CoA CO2 Acetaldehído En algunas poblaciones asiáticas e indios americanos, el consu­ mo de alcohol suscita reacciones adversas aumentadas al acetaldehí­ do debido a un defecto genético de la aldehído deshidrogenasa mi­ tocondrial. Esterificación ATP CoA EL TEJIDO ADIPOSO ES LA PRINCIPAL RESERVA DE TRIACILGLICEROL EN EL CUERPO Los triacilgliceroles se almacenan en el tejido adiposo en gotitas de lípido grandes, y están pasando de modo continuo por lipólisis (hi­ drólisis) y reesterificación (fig. 25­7). Estos dos procesos son vías por completo diferentes que comprenden distintos reactivos y enzi­ mas. Esto permite que muchos factores nutricionales, metabólicos y hormonales regulen por separado los procesos de esterificación o lipólisis. El equilibrio entre estos dos procesos determina la magni­ tud del fondo común de AGL en el tejido adiposo que, a su vez, de­ termina las cifras de AGL circulantes en plasma. Puesto que esta última tiene efectos más profundos sobre el metabolismo de otros tejidos, en particular el hígado y el músculo, los factores que operan en el tejido adiposo que regulan el flujo de salida de AGL ejercen una influencia más allá del tejido mismo. El suministro de glicerol 3-fosfato regula la esterificación: la lipasa sensible a hormona controla la lipólisis El triacilglicerol se sintetiza a partir de acil­CoA y glicerol 3­fosfato (fig. 24­2). Dado que la enzima glicerol cinasa no se expresa en el tejido adiposo, el glicerol no puede utilizarse para el suministro de glicerol 3­fosfato, que debe obtenerse a partir de la glucosa median­ te glucólisis. El triacilglicerol pasa por hidrólisis por medio de una lipasa sensible a hormona para formar AGL y glicerol. Esta lipasa es dis­ tinta de la lipoproteína lipasa, que cataliza la hidrólisis de triacilgli­ cerol de lipoproteína antes de su captación hacia tejidos extrahepá­ ticos (véase antes). Puesto que el glicerol no puede utilizarse, entra en la sangre y es captado y transportado hacia tejidos como el híga­ do y los riñones, que poseen una glicerol cinasa activa. Los AGL formados mediante lipólisis pueden reconvertirse en el tejido adi­ poso hacia acil­CoA por la acil­coA sintetasa y reesterificarse con glicerol 3­fosfato para formar triacilglicerol. Así, hay un ciclo con­ tinuo de lipólisis y reesterificación dentro del tejido. No obstante, cuando el índice de reesterificación no basta para igualar el índice de lipólisis, se acumulan AGL y se difunden hacia el plasma, donde 25 Bender.indd 220 Glicerol 3-fosfato Acil-CoA TG Acil-CoA sintetasa Hormona sensible a lipasa Lipólisis AGL AGL (fondo común 2) (fondo común 1) Glicerol Lipoproteína lipasa AGL Glicerol TG (quilomicrones, VLDL) Sangre AGL Glicerol Figura 25-7 Metabolismo del triacilglicerol en el tejido adiposo. La lipasa sensible a hormona es activada por ACTH, TSH, glucagon, epinefrina, norepinefrina y vasopresina, e inhibida por insulina, prostaglandina E1 y ácido nicotínico. Los detalles de la formación de glicerol 3-fosfato a partir de intermediarios de la glucólisis se muestran en la figura 24-2. (PPP, vía de la pentosa fosfato; TG, triacilglicerol; AGL, ácidos grasos libres; VLDL, lipoproteína de muy baja densidad.) se unen a la albúmina e incrementan la concentración plasmática de AGL. El metabolismo de glucosa aumentado reduce el gasto de agL Cuando hay incremento de la utilización de glucosa por el tejido adiposo, el flujo de salida de AGL disminuye. Sin embargo, la libera­ ción de glicerol continúa, lo que demuestra que el efecto de la gluco­ sa no está mediado por reducción del índice de lipólisis. El efecto se debe al suministro de glicerol 3­fosfato, que aumenta la esterifica­ ción de AGL. La glucosa puede tomar varias vías en el tejido adipo­ so, entre ellas oxidación hacia CO2 por medio del ciclo del ácido cí­ trico, oxidación en la vía de la pentosa fosfato, conversión en ácidos 27/11/09 14:18:44 cApítuLo 25 grasos de cadena larga, y formación de acilglicerol mediante el gli­ cerol 3­fosfato (fig. 25­7). Cuando la utilización de glucosa es alta, una proporción más grande de la captación se oxida hacia CO2, y se convierte en ácidos grasos. Empero, a medida que la utilización to­ tal de glucosa disminuye, la mayor proporción de la glucosa se diri­ ge hacia la formación de glicerol 3­fosfato para la esterificación de acil­CoA, lo que ayuda a minimizar el flujo de salida de AGL. La insulina inhibe la lipólisis en el tejido adiposo El índice de liberación de AGL a partir del tejido adiposo está afec­ tado por muchas hormonas que influyen sobre el índice de esterifi­ cación o el de lipólisis. La insulina inhibe la liberación de AGL a partir del tejido adiposo, lo cual va seguido por decremento de los AGL que circulan en el plasma. Incrementa la lipogénesis y la sínte­ sis de acilglicerol, así como la oxidación de glucosa hacia CO2 por medio de la vía de la pentosa fosfato. Todos estos efectos dependen ( Bloqueadores β-adrenérgicos ACTH, TSH, glucagon ) Varias hormonas promueven la lipólisis Otras hormonas aceleran la liberación de AGL desde el tejido adipo­ so, e incrementan las cifras plasmáticas de AGL al aumentar el índice de lipólisis de las reservas de triacilglicerol (fig. 25­8); son epinefrina, Insulina, prostaglandina E1, ácido nicotínico – ATP + Hormona tiroidea + + – – Adenilil ciclasa GTP Lipasa b sensible a hormona (inactiva) AGL Hormona tiroidea Pi + – – Inhibidores de la Epinefrina, Epinefrina,síntesis de proteína ACTH, norepinefrina norepinefrina TSH, glucagon Metilxantinas – Bloqueadores Bloqueadores –(p. ej., cafeína) β-adrenérgicos β-adrenérgicos + + ? – ( Insulina ATP + Hormona de crecimiento 221 de la presencia de glucosa y pueden explicarse, en gran medida, con base en la capacidad de la insulina para aumentar la captación de glucosa hacia las células adiposas mediante el transportador GLut 4. La insulina también incrementa la actividad de la piruvato deshi­ drogenasa, acetil­CoA carboxilasa, y glicerol fosfato aciltransferasa, lo que refuerza los efectos de la captación aumentada de glucosa sobre el incremento de la síntesis de ácidos grasos y acilglicerol. Es­ tas tres enzimas están reguladas de una manera coordinada por me­ canismos de fosforilación­desfosforilación. Una de las acciones principales de la insulina en el tejido adipo­ so consiste en inhibir la actividad de lipasa sensible a hormona, lo que disminuye la liberación no sólo de AGL sino también de glice­ rol. El tejido adiposo es considerablemente más sensible a la insuli­ na que muchos otros tejidos, lo cual apunta al tejido adiposo como un sitio importante de acción de la insulina in vivo. LAS HORMONAS REGULAN LA MOVILIZACIÓN DE GRASA Epinefrina, norepinefrina Transporte y almacenamiento de lípidos ) – PPi cAMP Insulina,ACTH, prostaglandina E1, Adenosina ácido nicotínico TSH, glucagon ( ) + Proteína cinasa dependiente Insulina, prostaglandina E1, cAMP ácido de nicotínico Mg2+ ADP Fosfo– diesterasa ATP ++ + – Hormona tiroidea Hormona tiroidea Lipasa a sensible a hormona (activa) ATP + + – P M cA + P Lipasa fosfatasa Triacilglicerol – AGL + diacilglicerol de e nt b sensible Lipasa e i – nd a hormona AGL pe Insulina (inactiva) de Lipasa sensible Lipasa b sensible a hormona Insulina Insulina a hormona Adenilil GTP AGL + GTP AGL Insulina (inactiva) ciclasa 2-Monoacilglicerol in a ATP ATP Pi 2-Monoacilglicerol + Pi Ví + + + – lipasa – – Inhibidores de Hormona Hormona de crecimiento Proteína – Proteína – de crecimiento AGL + glicerol la síntesis de proteína – – + PP + Glucocorticoides PP cinasa+ i cinasa Lipasa Lipasa 2 Inhibidores dei la Inhibidores de la cAMP cAMP Mg2+ Mg dependiente dependiente fosfatasa fosfatasa síntesis de proteína síntesis de proteína Adenosina Figura 25-8Adenosina Control de la lipólisis de tejido adiposo. (TSH, hormona estimulante de la tiroides; AGL, ácidos grasos de cAMP de cAMP – Adenilil ciclasa 5′ AMP – libres.) Note la secuencia de reacciones en cascada que permiten la amplificación en cada paso. El estímulo lipolítico se Metil“desactiva” por eliminaciónMetilde la hormona estimulante; la acción la inhibición de la lipasa y la adenilil ADP de la lipasa fosfatasa;ADP Triacilglicerol Triacilglicerol xantinas xantinas – la inhibición a sensible Lipasa apor sensible ciclasa por–concentraciones altas de AGL; de la adenilil ciclasa la adenosina, eliminación de cAMP por FosfoFosfo– la –y laLipasa (p. ej., cafeína) (p. ej., cafeína) a hormona a hormona diesterasa La ACTH, la TSH ydiesterasa acción de la fosfodiesterasa. el glucagon tal vez no activen la adenilil ciclasa in vivo, dado que las cifras de (activa) (activa) AGL + cada hormona requerida in vitro son?considerablemente mayores que las que se encuentran en la circulación. Los efectos AGL + ? P P P P diacilglicerol diacilglicerol + AM AM – positivo ( + ) y negativo ( – ) están representados reguladores por+ líneas discontinuas y el flujo de sustrato por líneas + c c Hormona tiroidea Hormona tiroidea Lipasa sensible de Lipasa sensiblee de continuas. e t a hormona nt a hormonaien 5′ AMP e 5′ AMP i – – nd nd e e AGL + AGL + Insulina Insulina ep Insulina ep Insulina 2-Monoacilglicerol 2-Monoacilglicerol ind ind a a 2-Monoacilglicerol Ví 2-Monoacilglicerol Ví – – lipasa lipasa Inhibidores de Inhibidores de AGL + glicerol AGL + glicerol la síntesis de proteína Glucocorticoides la síntesisGlucocorticoides de proteína 25 Bender.indd 221 27/11/09 14:18:46 SEccIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos norepinefrina, glucagon, hormona adrenocorticotrópica (ACTH), hormonas estimulantes de melanocitos (MSH) α y β, hormona es­ timulante de la tiroides (TSH), hormona de crecimiento (GH) y va­ sopresina. Muchas de éstas activan a la lipasa sensible a hormona. Para que el efecto sea óptimo, casi todos estos procesos lipolíticos necesitan la presencia de glucocorticoides y hormonas tiroideas. Estas hormonas actúan en una calidad facilitadora o permisiva en lo que se refiere a otros factores endocrinos lipolíticos. Las hormonas que actúan con rapidez en la promoción de la lipólisis, esto es, las catecolaminas, lo hacen al estimular la actividad de la adenilil ciclasa, la enzima que convierte el ATP en cAMP. El mecanismo es análogo al que se encarga de la estimulación hormo­ nal de la glucogenólisis (cap. 19). El cAMP, al estimular la proteína cinasa dependiente de cAMp, activa a la lipasa sensible a hormona. De este modo, los procesos que destruyen el cAMP o que lo preser­ van influyen sobre la lipólisis. El cAMP se degrada hacia 5ʹ­AMP por la enzima 3ʹ,5ʹ­nucleótido fosfodiesterasa cíclica. Esta enzima es inhibida por metilxantinas como cafeína y teofilina. La insulina antagoniza el efecto de las hormonas lipolíticas. La lipólisis parece ser más sensible a cambios de la concentración de insulina que la utilización de glucosa y la esterificación. Los efectos antilipolíticos de la insulina, el ácido nicotínico y la prostaglandina E1 se explican por inhibición de la síntesis de cAMP en el sitio de la adenilil ciclasa, actuando por medio de una proteína Gi. La insulina también es­ timula a la fosfodiesterasa y la lipasa fosfatasa que desactiva a la li­ pasa sensible a hormona. El efecto de la GH en la promoción de la lipólisis depende de la síntesis de proteínas comprendidas en la for­ mación de cAMP. Los glucocorticoides promueven la lipólisis me­ diante la síntesis de nueva proteína lipasa por medio de una vía in­ dependiente de cAMP, que puede ser inhibida por la insulina, y al promover la transcripción de genes comprendidos en la cascada de señales del cAMP. Estos datos ayudan a explicar la participación de la hipófisis y de la corteza suprarrenal en el aumento de la movili­ zación de grasa. El tejido adiposo secreta hormonas como adipo­ nectina, que modula el metabolismo de glucosa y de lípido en el músculo y el hígado, y leptina, que regula la homeostasis de energía. Aunque la lectina protege contra la obesidad en roedores, las prue­ bas actuales sugieren que su principal función en seres humanos es actuar como una señal de suficiencia de energía más que de exceso de energía. El sistema nervioso simpático, mediante liberación de norepi­ nefrina en el tejido adiposo, tiene una participación fundamental en la movilización de AGL. De esta manera, el incremento de la lipóli­ sis que se produce por muchos de los factores antes descritos se pue­ de reducir o suprimir por desnervación del tejido adiposo o por bloqueo ganglionar. La perilipina regula el equilibrio entre almacenamiento y lipólisis de triacilglicerol en adipocitos La perilipina, una proteína comprendida en la formación de goti­ tas de lípido en adipocitos, inhibe la lipólisis en condiciones basa­ les al impedir el acceso de las enzimas lipasas a los triacilgliceroles almacenados. Con todo, en el momento de la estimulación con hormonas que promueven la degradación de triacilglicerol, la pro­ teína dirige la lipasa sensible a hormona hacia la superficie de goti­ 25 Bender.indd 222 tas de lípido y, así, promueve la lipólisis. Por ende, la perilipina permite que el almacenamiento y la desintegración de triacilglice­ rol estén coordinados de acuerdo con las necesidades metabólicas del cuerpo. El tejido adiposo de seres humanos quizá no sea un sitio importante de lipogénesis No hay incorporación importante de glucosa o piruvato hacia áci­ dos grasos de cadena larga; la ATP­citrato liasa, una enzima clave en Membrana mitocondrial interna Fuera Dentro Norepinefrina F0 + F1 ATP sintasa cAMP H+ F0 + Lipasa sensible a hormona Calor H+ + Cadena respiratoria Triacilglicerol H+ H+ AGL Termogenina + Acil-CoA Equivalentes reductores + Calor – Purina nucleótidos Transportador de carnitina β-oxidación 222 Figura 25-9 Termogénesis en el tejido adiposo pardo. La actividad de la cadena respiratoria produce calor además de translocar protones (cap. 13). Estos protones disipan más calor cuando son regresados hacia el compartimiento mitocondrial interno mediante la termogenina en lugar de por medio de la F1 ATP sintasa, la ruta que genera ATP (fig. 13-7). El paso de H+ mediante la termogenina es inhibido por purina nucleótidos cuando el tejido adiposo pardo no está estimulado. Bajo la influencia de la norepinefrina, la inhibición se elimina por la producción de AGL y acil-CoA. Note la función doble de la acil-CoA tanto en la facilitación de la acción de la termogenina como en el suministro de equivalentes reductores para la cadena respiratoria. y significan efecto regulador positivo o negativo. 27/11/09 14:18:48 cApítuLo 25 la lipogénesis, no parece estar presente y otras enzimas lipogénicas —por ejemplo, glucosa­6­fosfato deshidrogenasa y la enzima máli­ ca— no pasan por cambios adaptativos. De hecho, se ha sugerido que en seres humanos hay un “síndrome de exceso de carbohidra­ tos” debido a una limitación singular de la capacidad para eliminar el exceso de carbohidrato por medio de lipogénesis. En aves, la lipo­ génesis está confinada al hígado, donde es en particular importante en el suministro de lípidos para la formación de huevos, estimulada por estrógenos. EL TEJIDO ADIPOSO PARDO PROMUEVE LA TERMOGÉNESIS El tejido adiposo pardo participa en el metabolismo, sobre todo en periodos en que se requiere generación de calor. De este modo, el tejido es en extremo activo en algunas especies durante el despertar que ocurre después de hibernación, en animales expuestos al frío (termogénesis sin estremecimiento), y en la producción de calor en el animal recién nacido. Aun cuando no es un tejido prominente en seres humanos, está presente en sujetos normales, donde podría ser la causa de “termogénesis inducida por la dieta”. Cabe hacer notar que el tejido adiposo pardo está reducido o no se encuentra en personas obesas. El tejido se caracteriza por un riego sanguíneo bien desarrollado y un contenido alto de mitocondrias y citocromos, pero actividad baja de ATP sintasa. El hincapié metabólico se hace en la oxidación tanto de glucosa como de ácidos grasos. La norepi­ nefrina liberada a partir de terminaciones nerviosas simpáticas tie­ ne importancia en el aumento de la lipólisis en el tejido y de la sín­ tesis de lipoproteína lipasa para incrementar la utilización de lipoproteínas ricas en triacilglicerol desde la circulación. La oxida­ ción y fosforilación no están acopladas en las mitocondrias de este tejido, y la fosforilación que ocurre es en el ámbito de sustrato, por ejemplo, en el paso de la succinato tiocinasa y en la glucólisis. De esta manera, la oxidación produce mucho calor, y poca energía libre es atrapada en Atp. Una proteína desacopladora termógena, la termogenina, actúa como una vía de conductancia de protón que disipa el potencial electroquímico a través de la membrana mito­ condrial (fig. 25­9). rESuMEN ■ ■ 25 Bender.indd 223 Dado que los lípidos no polares son insolubles en agua, para transporte entre los tejidos en el plasma sanguíneo acuoso se combinan con lípidos y proteínas anfipáticos para hacer lipoproteínas miscibles en agua. Se reconocen cuatro grupos principales de lipoproteínas: los quilomicrones transportan lípidos que se producen por la digestión y la absorción. Las VLDL transportan triacilglicerol desde el hígado; ■ ■ ■ ■ Transporte y almacenamiento de lípidos 223 las LDL llevan colesterol a los tejidos y las HDL eliminan colesterol de los tejidos y lo regresan al hígado para excreción en el proceso conocido como transporte inverso de colesterol. Los quilomicrones y la VLDL se metabolizan mediante hidrólisis de su triacilglicerol, y quedan remanentes de lipoproteína en la circulación, los cuales son captados por el hígado, pero algunos de los remanentes (IDL) originados a partir de VLDL forman LDL, que es captada por el hígado y otros tejidos por medio del receptor de LDL. Las apolipoproteínas constituyen la porción proteína de lipoproteínas. Actúan como activadores de enzima (p. ej., apo C­II y apo A­I) o como ligandos para receptores celulares (p. ej., apo A­I, apo E y apo B­100). El triacilglicerol es el principal lípido de almacenamiento en el tejido adiposo. En el momento de la movilización, se liberan AGL y glicerol. Los AGL son una importante fuente de combustible. El tejido adiposo pardo es el sitio de “termogénesis sin estremecimiento”. Se encuentra en animales en hibernación y recién nacidos, y está presente en pequeña cantidad en seres humanos. La termogénesis se produce por la presencia de una proteína desacopladora, la termogenina, en la membrana mitocondrial interna. rEFErENCiaS Arner P: Human fat cell lipolysis: biochemistry, regulation and clinical role. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab 2005;19:471. Brasaemle DL: Thematic review series: adipocyte biology. The perilipin family of structural lipid droplet proteins: stabilization of lipid droplets and control of lipolysis. J Lipid Res 48:2547. Goldberg IJ, Merkel M: Lipoprotein lipase: physiology, biochemistry and molecular biology. Front Biosci 2001;6:D388. Holm C et al: Molecular mechanisms regulating hormone sensitive lipase and lipolysis. Annu Rev Nutr 2000;20:365. Kershaw EE, Flier JS: Adipose tissue as an endocrine organ. J Clin Endocrinol Metab 2004;89:2548. Lenz A, Diamond FB: Obesity: the hormonal milieu. Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes 2008;15:9. Redgrave TG: Chylomicron metabolism. Biochem Soc Trans 2004;32:79. 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Mayes, PhD, DSc IMPORTANCIA BIOMÉDICA El colesterol está presente en los tejidos y en el plasma, sea como colesterol libre o combinado con un ácido graso de cadena larga como colesteril éster, la forma de almacenamiento. En el plasma, ambas formas se transportan en lipoproteínas (cap. 25). El colesterol es un lípido anfipático y, como tal, es un componente estructural esencial de las membranas, y de la capa externa de las lipoproteínas plasmáticas. Se sintetiza en muchos tejidos a partir de la acetil-CoA, y es el precursor de todos los otros esteroides en el organismo, incluso corticosteroides, hormonas sexuales, ácidos biliares y vitamina D. Como un producto típico del metabolismo en animales, el colesterol se encuentra en alimentos de origen animal, como yema de huevo, carne, hígado y cerebro. La lipoproteína de baja densidad (LDL) plasmática es el vehículo de captación de colesterol y colesteril éster hacia muchos tejidos. El colesterol libre se elimina de los tejidos por medio de la lipoproteína de alta densidad (HDL) plasmática, y se transporta hacia el hígado, donde se elimina del cuerpo, sea sin cambios o después de conversión en ácidos biliares en el proceso conocido como transporte inverso de colesterol (cap. 25). El colesterol es un constituyente importante de los cálculos biliares. Sin embargo, su principal participación en procesos patológicos es como un factor en la génesis de aterosclerosis de arterias vitales, lo que da por resultado enfermedad cerebrovascular, coronaria y vascular periférica. EL COLESTEROL SE DERIVA CASI POR IGUAL DE LA DIETA Y DE BIOSÍNTESIS Poco más de la mitad del colesterol del cuerpo surge por síntesis (alrededor de 700 mg/día), y el resto proviene de la dieta promedio. El hígado y el intestino dan cuenta de cerca de 10% cada uno de la síntesis total en seres humanos. Casi todos los tejidos que contienen células nucleadas tienen la capacidad de síntesis de colesterol, la cual ocurre en el retículo endoplásmico y el citosol. La acetil-CoA es la fuente de todos los átomos de carbono en el colesterol La biosíntesis de colesterol se divide en cinco pasos: 1) síntesis de mevalonato a partir de acetil-CoA (fig. 26-1). 2) La formación A P í t u l o de unidades isoprenoides a partir del mevalonato por pérdida de CO2 (fig. 26-2). 3). La condensación de seis unidades isoprenoides forma escualeno (fig. 26-2). 4) La ciclización de escualeno da lugar al esteroide madre, lanosterol. 5) Formación de colesterol a partir de lanosterol (fig. 26-3). Paso 1. Biosíntesis de mevalonato: la HMG-CoA (3-hidroxi3-metilglutaril-CoA) se forma por las reacciones que se usan en las mitocondrias para sintetizar cuerpos cetónicos (fig. 22-7). Empero, dado que la síntesis de colesterol es extramitocondrial, las dos vías son diferentes. Al principio, dos moléculas de acetil-CoA se condensan para formar acetoacetil-CoA, lo cual es catalizado por la tiolasa citosólica. La acetoacetil-CoA se condensa con otra molécula de acetil-CoA, paso catalizado por la HMG-CoA sintasa, para formar HMG-CoA, a la cual el NADPH reduce a mevalonato, reacción catalizada por la HMG-CoA reductasa. Éste es el principal paso regulador en la vía de la síntesis de colesterol, y es el sitio de acción de la clase más eficaz de fármacos que disminuyen el colesterol, las estatinas, que son inhibidores de la HMG-CoA reductasa (fig. 26-1). Paso 2. Formación de unidades isoprenoides: el ATP fosforila de modo secuencial el mevalonato mediante tres cinasas y, luego de descarboxilación (fig. 26-2), se forma la unidad isoprenoide activa, el isopentenil difosfato. Paso 3. Seis unidades isoprenoides forman escualeno: el isopentenil difosfato es isomerizado por medio de un desplazamiento del doble enlace para formar dimetilalil difosfato, que después se condensa con otra molécula de isopentenil difosfato para formar el intermediario de 10 carbonos geranil difosfato (fig. 26-2). Una condensación adicional con isopentenil difosfato forma farnesil difosfato. Dos moléculas de este último se condensan en el extremo difosfato para formar el escualeno. En un inicio se elimina el pirofosfato inorgánico, lo cual forma prescualeno difosfato, que luego se reduce mediante NADPH con eliminación de una molécula de pirofosfato inorgánico adicional. Paso 4. Formación de lanosterol: el escualeno puede plegarse hacia una estructura que semeja de manera estrecha el núcleo esteroide (fig. 26-3). Antes de que se cierre el anillo, una oxidasa de función mixta en el retículo endoplásmico, la escualeno epoxidasa, convierte al escualeno en escualeno 2,3-epóxido. El grupo metilo en el C14 se transfiere hacia C13 y el grupo metilo en C8 se transfiere a C14 conforme sucede ciclización, lo cual es catalizado por la oxidoescualeno:lanosterol ciclasa. 224 26 Bender.indd 224 27/11/09 14:19:36 CAPítulo 26 C S CoA 2 Acetil-CoA Tiolasa CoA CH3 SH O C CH2 S O Acetoacetil-CoA C H 2O CoA O CH3 C S CoA Acetil-CoA HMG-CoA sintasa CoA OOC CH2 C SH O CH3 – CH2 C S CoA OH 3-Hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) Ácido biliar, colesterol 2NADPH + 2H+ Estatinas, p. ej., sinvastatina HMG-CoA reductasa 2NADP+ + CoA Mevalonato – OOC SH CH3 CH2 C CH2 CH2 OH OH Mevalonato FigurA 26-1 Biosíntesis de mevalonato. Las estatinas inhiben la HMG-CoA reductasa. Los círculos blancos y negros indican el destino de cada uno de los carbonos en la porción acetilo de la acetil-CoA. Paso 5. Formación de colesterol: la formación de colesterol a partir de lanosterol tiene lugar en las membranas del retículo endoplásmico, e incluye cambios en el núcleo y la cadena lateral esteroides (fig. 26-3). Los grupos metilo en C14 y C4 se eliminan para formar 14-desmetil lanosterol y después zimosterol. El doble enlace en C8-C9 luego se mueve hacia C5-C6 en dos pasos, lo que forma desmosterol. Por último, el doble enlace de la cadena lateral se reduce, lo que genera colesterol. El farnesil difosfato da lugar a dolicol y ubiquinona Los poliisoprenoides dolicol (fig. 15-20 y cap. 47) y ubiquinona (fig. 13-5) se forman a partir del farnesil difosfato por medio de la adición de hasta 16 (dolicol) o 3 a 7 (ubiquinona) residuos isopentenil difosfato (fig. 26-2). Algunas proteínas de unión a GtP en la membrana celular están preniladas con residuos farnesil o geranilgeranil (20 carbonos). Se cree que la prenilación de proteína facilita la fijación de proteínas en membranas lipoides, y quizá también participe en interacciones entre una proteína y otra, y en el tráfico de proteína relacionado con membrana. 26 Bender.indd 225 225 LA REGULACIÓN DE LA HMG-CoA REDUCTASA CONTROLA LA SÍNTESIS DE COLESTEROL O CH3 Síntesis, transporte y excreción de colesterol La síntesis de colesterol se regula cerca del principio de la vía, en el paso de la HMG-CoA reductasa. La síntesis reducida de colesterol en animales en inanición se acompaña de un decremento de la actividad de la enzima. Con todo, el colesterol de la dieta sólo inhibe la síntesis hepática. La HMG-CoA reductasa en el hígado es inhibida por el mevalonato, el producto intermediario de la vía, y por colesterol, el principal producto. El colesterol y los metabolitos reprimen la transcripción de la HMG-CoA reductasa mediante activación de un factor de transcripción proteína de unión a elemento regulador esterol (SREBP). Las SREBP son una familia de proteínas que regulan la transcripción de una gama de genes comprendidos en la captación y el metabolismo celulares de colesterol y otros lípidos: ocurre una variación diurna de la síntesis de colesterol y la actividad de reductasa. Además de estos mecanismos que regulan el índice de síntesis de proteína, la modificación postraduccional también modula con mayor rapidez la actividad enzimática (fig. 26-4). La insulina o la hormona tiroidea aumenta la actividad de la HMG-CoA reductasa, mientras que el glucagon o los glucocorticoides la aminoran. Mecanismos de fosforilación-desfosforilación modifican de modo reversible la actividad; algunos de estos mecanismos pueden ser dependientes de cAMP y, en consecuencia, tienen capacidad de respuesta inmediata al glucagon. Los intentos por disminuir el colesterol plasmático en seres humanos al reducir la cantidad de colesterol en la dieta producen resultados variables. En general, un decremento de 100 mg del colesterol de la dieta origina una aminoración de alrededor de 0.13 mmol/L de suero. MUCHOS FACTORES INFLUYEN SOBRE EL EQUILIBRIO DE COLESTEROL EN LOS TEJIDOS En los tejidos, el equilibrio del colesterol se regula como sigue (fig. 26-5): el incremento de colesterol en las células se debe a la captación de lipoproteínas que contienen colesterol por receptores, por ejemplo, el receptor de LDL o el receptor recolector, captación de colesterol libre desde lipoproteínas con alto contenido de colesterol hacia la membrana celular, la síntesis de colesterol, e hidrólisis de colesteril ésteres por la enzima colesteril éster hidrolasa. La disminución se debe a flujo de salida de colesterol desde la membrana hacia HDL por medio de ABCA1, ABCG1 o SR-B1 (fig. 25-5). La esterificación de colesterol por ACAt (acil-CoA:colesterol aciltransferasa), y utilización de colesterol para la síntesis de otros esteroides, como hormonas, o ácidos biliares en el hígado. El receptor de LDL está muy regulado Los receptores de LDL (apo B-100, E) existen sobre la superficie celular en hoyuelos que están cubiertos sobre el lado citosólico de la membrana celular con una proteína denominada clatrina. El receptor de glucoproteína abarca la membrana; la región de unión B-100 está en el extremo amino terminal expuesto. Después de unión, la LDL es captada intacta mediante endocitosis. La apoproteína y el 27/11/09 14:19:38 226 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos CH3 – OOC ATP OH CH3 Mg CH2 C CH2 CH2 ADP 2+ – OOC CH2 C Mevalonato cinasa OH OH CH2 Mevalonato CH2 O P Mevalonato 5-fosfato ATP Mg2+ Fosfomevalonato cinasa ADP OOC P O CH3 – CH2 CH2 P O P Derivación del trans-metilglutaconato CH Isopentenildifosfato isomerasa cis-Prenil transferasa P CH2 CH2 CH2 O P P Isopentenil difosfato PPi CH3 CH3 CH2 C CH3 P CH3 3,3-dimetilalil difosfato Proteínas preniladas O Mevalonato 5-difosfato P P CH2 CO2 + Pi C O CH2 C CH2 CH2 C CH3 OOC Difosfomevalonato descarboxilasa CH3 OH – Difosfomevalonato cinasa Mevalonato 3-fosfo-5-difosfato HMG-CoA CH3 Mg2+ CH2 C ATP ADP CH CH2 C CH2 CH P O P Geranil difosfato cis-Prenil transferasa Cadena lateral de ubiquinona trans-Prenil transferasa PPi cis-Prenil transferasa * 2 CH Farnesil difosfato Hem a Escualeno sintetasa 2PPi Dolicol O P P NADPH + H+ Mg , Mn2+ NADP+ 2+ * 2 CH *CH2 Escualeno FigurA 26-2 Biosíntesis de escualeno, ubiquinona, dolicol y otros derivados poliisopreno (HMG, 3-hidroxi-3metilglutaril.) Hay un residuo farnesilo en el hem a de la citocromo oxidasa. El carbono marcado con un asterisco se convierte en C11 o C12 en el escualeno. La escualeno sintetasa es una enzima microsómica; todas las otras enzimas indicadas son proteínas citosólicas solubles y algunas se encuentran en peroxisomas. colesteril éster a continuación se hidrolizan en los lisosomas, y el colesterol se transloca hacia la célula. Los receptores se reciclan hacia la superficie celular. Este flujo hacia adentro de colesterol inhibe la transcripción de los genes que codifican para la HMG-CoA sintasa, la HMG-CoA reductasa y otras enzimas involucradas en la síntesis de colesterol, así como el receptor de LDL en sí, por medio de la vía 26 Bender.indd 226 de la SREBP y, así, de manera coordinada suprime la síntesis y captación de colesterol. Además, la actividad de la ACAT se estimula, lo que promueve la esterificación de colesterol. De este modo, la actividad del receptor de LDL sobre la superficie celular está regulada por el requerimiento de colesterol para síntesis de membranas, hormonas esteroides o ácidos biliares (fig. 26-5). 27/11/09 14:19:39 CAPítulo 26 O CH3 CH3 C S –OOC CoA C CH2 CH2 CH2OH CH3 CH3 Epóxido de escualeno 11 CH3 H2C CH2 24 HC CH CH CH2 CH3 C C CH CH2 C CH3 11 1 Escualeno epoxidasa CH3 CH2 H2C 1/2 3 O2 HC * CH2 * 13 CH2 CH CH3 H CH3 C CH3 CH2 CH3 C CH CH2 CH2 CH3 X6 Escualeno CH3 COOH 2CO2 14 14 8 NADPH O2 4 HO HC CH2 14 C 8 24 CH CH C C Oxidoescualeno: lanosterol ciclasa CH3 CH2 CH3 NADPH FAD CH2 O CH2 12 CH3 C CH3 HC3 CH2– C CH2 14 C 8 CH CH3 CH 13 C Unidad isoprenoide CH2 12 CH2 H2O CH2 C CH2 CO2 Mevalonato Acetil-CoA 227 CH3 OH 1 Síntesis, transporte y excreción de colesterol O2, NADPH NAD+ HO Lanosterol 8 HO 14-desmetil lanosterol Zimosterol Isomerasa 22 21 18 20 23 24 12 11 13 C 14 19 2 3 HO 1 A 4 10 5 9 B 6 17 16 D 15 8 25 26 27 24 NADPH O2 ∆24-Reductasa 3 7 Colesterol – Triparanol HO 24 NADPH 7 5 HO Desmosterol (24-deshidrocolesterol) ∆7,24-Colestadienol FigurA 26-3 Biosíntesis de colesterol. Las posiciones numeradas son las del núcleo esteroide, y los círculos blancos y negros indican el destino de cada uno de los carbonos en la porción acetilo de la acetil-CoA. (*Véase el marcado del escualeno en la figura 26-2.) EL COLESTEROL SE TRANSPORTA ENTRE TEJIDOS EN LIPOPROTEÍNAS PLASMÁTICAS El colesterol se transporta en el plasma en lipoproteínas; la mayor parte en forma de colesteril éster (fig. 26-6) y en seres humanos la proporción más alta se encuentra en la LDL. El colesterol en la dieta se equilibra con el colesterol plasmático en días y con el colesterol hístico en semanas. El colesteril éster en la dieta se hidroliza hacia 26 Bender.indd 227 colesterol, que a continuación se absorbe en el intestino junto con el colesterol no esterificado y otros lípidos de la dieta. Con el colesterol que se sintetiza en los intestinos, a continuación se incorpora hacia quilomicrones (cap. 25). Del colesterol absorbido, 80 a 90% se esterifica con ácidos grasos de cadena larga en la mucosa intestinal. Del colesterol de quilomicrón, 95% se lleva al hígado en remanentes de quilomicrón, y la mayor parte del colesterol secretado por el hígado en VLDL se retiene durante la formación de IDL y por último de LDL, que es captada por el receptor de LDL en el hígado y los tejidos extrahepáticos (cap. 25). 27/11/09 14:19:41 228 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos ATP Reductasa cinasa (inactiva) Pi + Reductasa cinasa cinasa Proteína fosfatasas Insulina ? P – ADP Reductasa cinasa (activa) Glucagon H2O + ADP ATP Inhibidor-1fosfato* + cAMP HMG-CoA HMG-CoA reductasa (activa) Colesterol de las LDL HMG-CoA reductasa (inactiva) P Colesterol H2O ? Pi – Oxiesteroles Insulina + Proteína fosfatasas Transcripción de gen – FigurA 26-4 Posibles mecanismos en la regulación de la síntesis de colesterol por la HMG-CoA reductasa. La insulina tiene una participación dominante en comparación con el glucagon. (*Véase la figura 19-6.) Casi todo el colesteril éster plasmático en seres humanos depende de la LCAT plasmática EL COLESTEROL SE EXCRETA DESDE EL CUERPO EN LA BILIS COMO COLESTEROL O ÁCIDOS (SALES) BILIARES La actividad de la lecitina:colesterol aciltransferasa (lCAt) se relaciona con HDL que contiene apo A-I. A medida que el colesterol en HDL se esterifica, crea un gradiente de concentración e introduce colesterol desde los tejidos y desde otras lipoproteínas (figs. 26-5 y 26-6), lo que permite al HDL funcionar en el transporte inverso de colesterol (fig. 25-5). El colesterol se excreta del organismo por medio de la bilis sea en forma no esterificada o luego de conversión en ácidos biliares en el hígado. El coprostanol es el principal esterol en las heces; las bacterias lo forman a partir del colesterol en la parte baja del intestino. La proteína de transferencia de colesteril éster facilita la transferencia de este último desde HDL hacia otras lipoproteínas Esta proteína, relacionada con HDL, se encuentra en el plasma de seres humanos y muchas otras especies. Facilita la transferencia de colesteril éster desde HDL hacia VLDL, IDL y LDL en intercambio por triacilglicerol, lo que alivia la inhibición por producto de la actividad de LCAT en HDL. De esta manera, en seres humanos, gran parte del colesteril éster formado por LCAT encuentra su camino hacia el hígado mediante remanentes de VLDL (IDL) o LDL (fig. 26-6). La HDL2 enriquecida con triacilglicerol, lleva su colesterol hacia el hígado en el ciclo de la HDL (fig. 25-5). 26 Bender.indd 228 Los ácidos biliares se forman a partir de colesterol Los ácidos biliares primarios se sintetizan en el hígado a partir de colesterol, se trata del ácido cólico (que se encuentra en la mayor cantidad) y el ácido quenodesoxicólico (fig. 26-7). La 7α-hidroxilación de colesterol es el primer y principal paso regulador en la biosíntesis de ácidos biliares, y es catalizada por la colesterol 7αhidroxilasa, una enzima microsómica. Una monooxigenasa típica requiere oxígeno, NADPH y citocromo P450. Los pasos de hidroxilación subsiguientes también son catalizados por monooxigenasas. La vía de la biosíntesis de ácido biliar se divide en etapas tempranas hacia una subvía que lleva a colil-CoA, caracterizada por un grupo α-OH extra en la posición 12 y otra vía que lleva a quenodesoxicolil-CoA (fig. 26-7). Una segunda vía en las mitocondrias que comprende la 27-hidroxilación de colesterol por la esterol 27-hidroxilasa como el primer paso explica una proporción importante de los 27/11/09 14:19:42 CAPítulo 26 Síntesis, transporte y excreción de colesterol 229 Membrana celular Vesícula en reciclado Síntesis de receptor Lisosoma CE Endosoma LDL CE CE LDL LDL VLDL Síntesis de colesterol – ACAT + Fondo común de colesterol no esterificado (principalmente en membranas) CE Vesícula cubierta Receptor recolector o vía no regulada C – Regulación descendente Receptores de LDL (apo B-100, E) (en hoyuelos cubiertos) CE C CE CE hidrolasa Lisosoma C Síntesis de esteroides ABCA1 A-1 PL C Preβ-HDL SR-B1/ ABCG1 LCAT CE A-1 PL HDL3 FigurA 26-5 Factores que afectan el equilibrio de colesterol en el ámbito celular. El transporte inverso de colesterol puede estar mediado mediante la proteína transportadora ABCA-1 (con preβ-HDL como el aceptor exógeno) o el SR-B1 o ABCG-1 (con HDL3 como el aceptor exógeno). (C, colesterol; CE, colesteril éster; PL, fosfolípido; ACAT, acil-CoA:colesterol aciltransferasa; LCAT, lecitina:colesterol aciltransferasa; A-I, apolipoproteína A-I; LDL, lipoproteína de baja densidad; VLDL, lipoproteína de muy baja densidad.) La LDL y HDL no se muestran a escala. ácidos biliares primarios sintetizados. Los ácidos biliares primarios (fig. 26-7) entran a la bilis como conjugados de glicina o taurina. La conjugación tiene lugar en peroxisomas. En seres humanos, la proporción entre conjugados de glicina y de taurina normalmente es de 3:1. En la bilis alcalina (pH de 7.6 a 8.4), se supone que los ácidos biliares y sus conjugados están en una forma de sal; de ahí el término “sales biliares”. Una porción de los ácidos biliares primarios en el intestino está sujeta a cambios adicionales mediante la actividad de las bacterias intestinales, las cuales incluyen desconjugación y 7α-deshidroxilación, que producen los ácidos biliares secundarios, ácido desoxicólico y ácido litocólico. elimina en las heces. Como quiera que sea, esto representa una vía importante para la eliminación de colesterol. Cada día el pequeño fondo común de ácidos biliares (de 3 a 5 g) pasa 6 a 10 veces por un ciclo por el intestino, y una cantidad de ácido biliar equivalente a la que se pierde en las heces se sintetiza a partir de colesterol, de manera que se mantiene un fondo común de ácidos biliares de tamaño constante. Esto se logra mediante un sistema de controles por retroacción. Casi todos los ácidos biliares regresan al hígado en la circulación enterohepática El principal paso limitante en la biosíntesis de ácidos biliares está en la reacción de colesterol 7α-hidroxilasa (fig. 26-7). La actividad de la enzima está regulada por retroacción por medio del receptor de unión a ácido biliar nuclear receptor X farnesoide (FXR). Cuando aumenta el tamaño del fondo común de ácidos biliares en la circulación enterohepática, el FXR se activa, y se suprime la transcripción del gen que codifica para la colesterol 7α-hidroxilasa. El ácido quenodesoxicólico tiene especial importancia en la activación de FXR. La actividad de la colesterol 7α-hidroxilasa también se incrementa por el colesterol de origen endógeno y de la dieta, y está regulada por insulina, glucagon, glucocorticoides y hormona tiroidea. Aun cuando los productos de la digestión de grasa, incluso el colesterol, se absorben en los primeros 100 cm del intestino delgado, los ácidos biliares primarios y secundarios se absorben de modo casi exclusivo en el íleon, y 98 a 99% se regresa hacia el hígado por medio de la circulación porta. Esto se conoce como la circulación enterohepática (fig. 26-6). Aun así, el ácido litocólico, debido a su insolubilidad, no se reabsorbe en un grado importante. Sólo una pequeña fracción de las sales biliares escapa a la absorción y, por ende, se 26 Bender.indd 229 La síntesis de ácido biliar está regulada en el paso de la 7α-hidroxilasa 27/11/09 14:19:43 230 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos CIRCULACIÓN ENTEROHEPÁTICA VENA PORTA HEPÁTICA Síntesis Dieta (0.4 g/día) VESÍCULA BILIAR Ácidos biliares (fondo común total, 3 a 5 g) CONDUCTO BILIAR Fondo común de colesterol no esterificado Ácidos biliares Quilomicrón HÍGADO ÍLEON Receptor de LDL (apo B-100, E) A-I IDL (remanente de VLDL) Ácidos biliares (0.4 g/d) Heces Remanente de quilomicrón Receptor de LDL (apo B-100, E) TEJIDOS EXTRAHEPÁTICOS Síntesis FigurA 26-6 Transporte de colesterol entre los tejidos en seres humanos. (C, colesterol no esterificado; CE, colesteril éster; TG, triacilglicerol; VLDL, lipoproteína de muy baja densidad; IDL, lipoproteína de densidad intermedia; LDL, lipoproteína de baja densidad; HDL, lipoproteína de alta densidad; ACAT, acil-CoA:colesterol aciltransferasa; LCAT, lecitina:colesterol aciltransferasa; A-I, apolipoproteína A-I; CETP, proteína de transferencia de colesteril éster; LPL, lipoproteína lipasa; HL, lipasa hepática; LRP, proteína relacionada con el receptor de LDL.) ASPECTOS CLÍNICOS El colesterol sérico se correlaciona con la incidencia de aterosclerosis y cardiopatía coronaria Si bien se cree que las concentraciones plasmáticas altas de colesterol (> 5.2 mmol/L) son un factor importante en la promoción de la aterosclerosis, ahora se reconoce que los triacilgliceroles son un factor de riesgo independiente. La aterosclerosis se caracteriza por el depósito de colesterol y colesteril éster desde las proteínas plasmáticas hacia la pared arterial. Las enfermedades en las cuales hay incremento prolongado de las cifras de LDL, IDL, remanentes de quilomicrón, o LDL en la sangre (p. ej., diabetes mellitus, nefrosis lípida, hipotiroidismo y otros estados de hiperlipidemia) suelen acompañarse de aterosclerosis prematura o más grave. También hay una relación inversa entre las concentraciones de HDL (HDL2) y la 26 Bender.indd 230 cardiopatía coronaria, lo que hace que la proporción de colesterol de lDl:HDl sea un buen parámetro predictivo. Esto es congruente con la función de la HDL en el transporte inverso de colesterol. La susceptibilidad a aterosclerosis varía de manera significativa entre las especies, y los seres humanos son una de las pocas en las cuales la enfermedad se induce por dietas con alto contenido de colesterol. La dieta puede tener importancia en la reducción del colesterol sérico Los factores hereditarios tienen la función más importante en la determinación de las cifras de colesterol sérico individuales; de cualquier modo, también participan factores de la dieta y ambientales, y el más beneficioso de éstos es la sustitución de los ácidos grasos saturados en la dieta por ácidos grasos poliinsaturados y monoinsaturados. Los aceites vegetales, como el aceite de maíz y el aceite de se- 27/11/09 14:19:45 CAPítulo 26 12 3 NADPH + H+ O2 7 NADP+ 7 7α-hidroxilasa HO OH Colesterol 7α-hidroxicolesterol Ácidos biliares Deficiencia de vitamina C 12α-hidroxilasa O2 O2 NADPH + H+ 2 CoA NADPH + H+ (Varios pasos) SH 2 CoA Propionil-CoA OH H 231 Vitamina C 17 HO HO Síntesis, transporte y excreción de colesterol SH Propionil-CoA C H C N (CH2) O CoA SH Ácido taurocólico (ácido biliar primario) CoA HO OH Taurina OH C 12 S HO Ácidos tauroquenodesoxicólico y glucoquenodesoxicólico (ácidos biliares primarios) H C N Quenodesoxicolil-CoA CoA OH H Colil-CoA OH OH H O Glicina SH CoA O SO3H 2 S * CH2COOH Desconjugación + 7α-deshidroxilación O HO H OH OH COOH COOH Ácido glucocólico (ácido biliar primario) * Desconjugación + 7α-deshidroxilación HO HO H Ácido desoxicólico (ácido biliar secundario) H Ácido litocólico (ácido biliar secundario) FigurA 26-7 Biosíntesis y degradación de ácidos biliares. Una segunda vía en las mitocondrias comprende la hidroxilación de colesterol por la esterol 27-hidroxilasa. *Catalizada por enzimas microbianas. millas de girasol, contienen una proporción alta de ácidos grasos poliinsaturados, mientras que el aceite de oliva contiene una concentración alta de ácidos grasos monoinsaturados. Por otra parte, la grasa de la mantequilla, la grasa de la carne de res, y el aceite de palma contienen una proporción alta de ácidos grasos saturados. La sacarosa y la fructosa tienen mayor efecto en el aumento de los lípidos en la sangre, en particular triacilgliceroles, que otros carbohidratos. Aún no se entiende por completo el motivo del efecto de decremento del colesterol, de los ácidos grasos poliinsaturados. No obstante, está claro que uno de los mecanismos comprendidos es la regulación ascendente de los receptores de LDL por ácidos grasos poliinsaturados y monoinsaturados en comparación con los saturados, lo que causa un incremento del índice catabólico de LDL, la principal lipoproteína aterogénica. Más aún, los ácidos grasos saturados suscitan la formación de partículas de VLDL de menor tamaño que contienen relativamente más colesterol, así como los tejidos ex- 26 Bender.indd 231 trahepáticos, las utilizan a un índice más lento que las partículas de mayor tamaño, tendencias que pueden considerarse aterogénicas. El estilo de vida afecta las cifras séricas de colesterol Otros factores que se considera que participan en la cardiopatía coronaria son presión arterial alta, tabaquismo, género masculino, obesidad (en especial obesidad abdominal), falta de ejercicio y consumo de agua blanda en contraposición con dura. Los factores relacionados con aumento de los AGL plasmáticos seguido por incremento del gasto de triacilglicerol y colesterol hacia la circulación en VLDL son el estrés emocional y el consumo de café. Las mujeres premenopáusicas parecen estar protegidas contra muchos de estos factores perjudiciales y se cree que esto se relaciona con los efectos beneficiosos de los estrógenos. Hay una relación entre el consumo 27/11/09 14:19:47 232 SECCIÓN II Bioenergética y el metabolismo de carbohidratos y lípidos moderado de alcohol y una incidencia más baja de cardiopatía coronaria. Esto tal vez se deba al aumento de las concentraciones de HDL producidas por incremento de la síntesis de apo A-I y cambios de la actividad de la proteína de transferencia de colesteril éster. Se ha afirmado que el vino tinto es en particular benéfico, quizá debido a su contenido de antioxidantes. El ejercicio regular aminora la LDL plasmática, pero aumenta la HDL. Las cifras de triacilglicerol también se reducen, debido más probablemente a incremento de la sensibilidad a la insulina, que aumenta la expresión de lipoproteína lipasa. Cuando los cambios de la dieta fracasan, los medicamentos hipolipidémicos reducirán el colesterol y el triacilglicerol séricos Una familia de fármacos conocidos como estatinas ha resultado muy eficaz para disminuir el colesterol plasmático y evitar enfermedad del corazón. Las estatinas actúan al inhibir la HMG-CoA reduc- tasa y regular de modo ascendente la actividad del receptor de LDL. Los ejemplos en uso actual son atorvastatina, sinvastatina, fluvastatina y pravastatina. La ezetimiba reduce las concentraciones sanguíneas de colesterol al inhibir la absorción de colesterol por el intestino al bloquear la captación mediante la proteína parecida a la C1 de Neimann-Pick. Otros medicamentos usados incluyen fibratos como el clofibrato, y el genfibrozil y el ácido nicotínico, que actúan sobre todo para producir decremento de los triacilgliceroles plasmáticos al aminorar la secreción hepática de VLDL que contienen triacilglicerol y colesterol. Los trastornos primarios de las lipoproteínas plasmáticas (dislipoproteinemias) son hereditarios Los defectos hereditarios del metabolismo de lipoproteína conducen a la enfermedad primaria de hipolipoproteinemia o hiperlipo- CuADro 26-1 Trastornos primarios de lipoproteínas plasmáticas (dislipoproteinemias) Nombre Hipolipoproteinemias Abetalipoproteinemia Defecto observaciones No se forman quilomicrones, VLDL o LDL debido a defectos de la carga de apo B con lípido. Es rara; acilgliceroles bajos en sangre; el intestino y el hígado acumulan acilgliceroles. Malabsorción intestinal. La muerte temprana es evitable por medio de administración de dosis grandes de vitaminas liposolubles, en especial vitamina E. En todas hay HDL baja o falta casi total de la misma. Tendencia hacia hipertriacilglicerolemia como resultado de falta de apo C-II, que causa LPL inactiva. Cifras bajas de LDL. Aterosclerosis en ancianos. Hipertriacilglicerolemia debida a deficiencia de LPL, LPL anormal o deficiencia de apo C-II que produce LPL inactiva. Depuración lenta de quilomicrones y VLDL. Concentraciones bajas de LDL y de HDL. No hay aumento del riesgo de coronariopatía. Hipercolesterolemia familiar (tipo IIa) Receptores de LDL defectuosos o mutación en la región ligando de apo B-100. Cifras altas de LDL e hipercolesterolemia, que suscitan aterosclerosis y enfermedad coronaria. Hiperlipoproteinemia familiar tipo III (enfermedad de beta amplia, enfermedad por eliminación de remanente, disbetalipoproteinemia familiar) La deficiencia de la depuración de remanente por el hígado se debe a anormalidad de la apo E. Los pacientes carecen de isoformas E3 y E4, y sólo tienen E2, que no reacciona con el receptor E.1 Incremento de remanentes de quilomicrón y de VLDL de densidad < 1.019 (β-VLDL). Produce hipercolesterolemia, xantomas y aterosclerosis. Hipertriacilglicerolemia familiar (tipo IV) Producción excesiva de VLDL a menudo relacionada con intolerancia a la glucosa e hiperinsulinemia. Las concentraciones de colesterol aumentan con las cifras de VLDL. La LDL y la HDL tienden a ser subnormales. Este tipo de modelo por lo general se relaciona con cardiopatía coronaria, diabetes mellitus tipo II, obesidad, alcoholismo y administración de hormonas progestacionales. Hiperalfalipoproteinemia familiar Incremento de las concentraciones de HDL. Una enfermedad rara al parecer beneficiosa para la salud y la longevidad. Deficiencia de lipasa hepática La deficiencia de la enzima lleva a acumulación de remanentes de HDL y VLDL ricos en triacilglicerol. Los enfermos tienen xantomas y cardiopatía coronaria. Deficiencia familiar de lecitina:colesterol aciltransferasa (LCAT) La falta de LCAT conduce a bloqueo del transporte inverso de colesterol. La HDL permanece como discos nacientes incapaces de captar colesterol y esterificarlo. Las concentraciones plasmáticas de colesteril ésteres y lisolecitina son bajas. Hay una fracción de LDL anormal, lipoproteína X, que también se encuentra en individuos con colestasis. La VLDL es anormal (β-VLDL). Exceso familiar de lipoproteína (a) La Lp (a) consta de 1 mol de LDL fijo a 1 mol de apo (a). La apo (a) muestra homología estructural con el plasminógeno. Cardiopatía coronaria prematura debida a aterosclerosis, más trombosis debida a inhibición de la fibrinólisis. Deficiencia familiar de α-lipoproteína Enfermedad de Tangier Enfermedad de ojo de pescado Deficiencias de apo-A-I Hiperlipoproteinemias Deficiencia familiar de lipoproteína lipasa (tipo I) Hay una relación entre sujetos que poseen el alelo de apo E4 y la incidencia de enfermedad de Alzheimer. Al parecer, la apo E4 se une con más avidez al β-amiloide que se encuentra en las placas neuríticas. 1 26 Bender.indd 232 27/11/09 14:19:48 CAPítulo 26 proteinemia (cuadro 26-1). Además, las enfermedades como la diabetes mellitus, el hipotiroidismo, la enfermedad renal (síndrome nefrótico) y la aterosclerosis, se relacionan con modelos de lipoproteínas anormales secundarios que son muy similares a una u otra de las enfermedades hereditarias primarias. Casi todas las enfermedades primarias se deben a un defecto a una etapa de formación, transporte o destrucción de lipoproteína (figs. 25-4, 26-5 y 26-6). No todas las anormalidades son perjudiciales. RESUMEN ■ ■ ■ ■ 26 Bender.indd 233 El colesterol es el precursor de todos los otros esteroides en el cuerpo, por ejemplo, corticosteroides, hormonas sexuales, ácidos biliares y vitamina D. También desempeña una función estructural importante en las membranas y en la capa externa de lipoproteínas. El colesterol se sintetiza en el organismo por completo a partir de la acetil-CoA. Tres moléculas de acetil-CoA forman mevalonato por medio de la importante reacción reguladora para la vía, catalizada por la HMG-CoA reductasa. A continuación se forma una unidad de isoprenoide de cinco carbonos y seis de éstas se condensan para formar escualeno; este último pasa por ciclos para formar el esteroide madre lanosterol, que después de la pérdida de tres grupos metilo, forma colesterol. La síntesis de colesterol en el hígado está regulada en parte por el colesterol en la dieta. En los tejidos, el equilibrio del colesterol se mantiene entre los factores que ocasionan ganancia de colesterol (p. ej., síntesis, captación mediante LDL o receptores recolectores) y los factores que dan por resultado pérdida de colesterol (p. ej., síntesis de esteroide, formación de colesteril éster, excreción). La actividad del receptor de LDL es modulada por las cifras celulares de colesterol para lograr este equilibrio. En el transporte inverso de colesterol, la HDL capta colesterol desde los tejidos, y la LCAT lo esterifica y deposita en el centro de las partículas. El colesteril éster en la HDL es captado por el hígado, sea de manera directa o luego de transferencia hacia VLDL, IDL o LDL por medio de la proteína de transferencia de colesteril éster. El colesterol excesivo se excreta desde el hígado en la bilis como colesterol o sales biliares. Una proporción grande de estas últimas se ■ ■ Síntesis, transporte y excreción de colesterol 233 absorbe hacia la circulación porta y regresa hacia el hígado como parte de la circulación enterohepática. Las concentraciones altas de colesterol presentes en VLDL, IDL o LDL se relacionan con aterosclerosis, mientras que las cifras altas de HDL tienen un efecto protector. Los defectos hereditarios del metabolismo de lipoproteína dan pie a un estado primario de hipolipoproteinemia o hiperlipoproteinemia. Las enfermedades como la diabetes mellitus, el hipotiroidismo, la enfermedad renal y la aterosclerosis muestran modelos de lipoproteína anormales secundarios que semejan ciertas enfermedades primarias. rEFErENCiAS Chiang JL: Regulation of bile acid synthesis: pathways, nuclear receptors and mechanisms. J Hepatol 2004;40:539. Denke MA: Dietary fats, fatty acids and their effects on lipoproteins. Curr Atheroscler Rep 2006;8:466. Jiang XC, Zhou HW: Plasma lipid transfer proteins. Curr Opin Lipidol 2006;17:302. Ness GC, Chambers CM: Feedback and hormonal regulation of hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase: the concept of cholesterol buffering capacity. Proc Soc Exp Biol Med 2000;224:8. Parks DJ et al: Bile acids: natural ligands for a nuclear orphan receptor. Science 1999;284:1365. Russell DW: Cholesterol biosynthesis and metabolism. Cardiovascular Drugs Therap 1992;6:103. Spady DK, Woollett LA, Dietschy JM: Regulation of plasma LDL cholesterol levels by dietary cholesterol and fatty acids. Annu Rev Nutr 1993;13:355. Various authors: Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes, 5th ed. Vance DE, Vance JE (editors). Elsevier, 2008. Zhang FL, Casey PJ: Protein prenylation: molecular mechanisms and functional consequences. Annu Rev Biochem 1996;65:241. 27/11/09 14:19:48 SECCIÓN III METABOLISMO DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS Biosíntesis de los aminoácidos no esenciales desde el punto de vista nutricional 27 c a P í t u l o Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Las inferencias médicas del material que se presenta en este capítulo se relacionan con los estados de deficiencia de aminoácidos que pueden producirse si faltan aminoácidos esenciales en la dieta, o si están presentes en cantidades inadecuadas. Los estados de deficiencia de aminoácidos, aun cuando son comparativamente raros en el mundo occidental, son endémicos en ciertas regiones de África occidental donde las dietas se fundamentan mucho en cereales que son fuentes inadecuadas de triptófano y lisina. Estos trastornos nutricionales incluyen kwashiorkor, que sobreviene cuando se desteta a un niño y se le suministra una dieta farinácea con poca proteína, y el marasmo, en el cual tanto la ingestión calórica como aminoácidos específicos son deficientes. Los individuos con síndrome de intestino corto que carecen de la capacidad para absorber suficientes cantidades de calorías y nutrientes sufren anormalidades nutricionales y metabólicas importantes. Tanto el trastorno nutricional escorbuto, una deficiencia de vitamina C en la dieta, como trastornos genéticos específicos, se relacionan con alteración de la capacidad del tejido conjuntivo para formar hidroxiprolina e hidroxilisina. La inestabilidad conformacional resultante del colágeno origina sangrado de encías, hinchazón de articulaciones, cicatrización inadecuada de heridas y la muerte. El síndrome de Menkes, que se caracteriza por pelo rizado y retraso del crecimiento, depende de una deficiencia de cobre en la dieta, que es un cofactor esencial para la lisil oxidasa, una enzima que funciona en la formación de los enlaces covalentes que fortalecen las fibras de colágeno. Los trastornos genéticos de la biosíntesis del colágeno comprenden varias formas de osteogénesis imperfecta, caracterizada por huesos frágiles, y síndrome de Ehlers-Danlos, un grupo de trastornos del tejido conjuntivo que suscitan hipermovilidad articular y anormalidades cutáneas debidas a defectos de los genes que codifican para enzimas que incluyen la lisil hidroxilasa (cap. 47). AMINOÁCIDOS ESENCIALES Y NO ESENCIALES EN EL ASPECTO NUTRICIONAL Aplicados a los aminoácidos, los términos “esencial” y “no esencial” son desorientadores, porque los 20 aminoácidos comunes son esenciales para asegurar la salud. De estos 20 aminoácidos, ocho deben estar presentes en la dieta del ser humano y, así, es mejor llamarlos “esenciales desde el punto de vista nutricional”; los otros 12 son “no esenciales en el aspecto nutricional” porque no requieren estar presentes en la dieta (cuadro 27-1). La distinción entre estas dos clases de aminoácidos se estableció durante el decenio de 1930-1939 al alimentar a individuos humanos con aminoácidos purificados en lugar de proteína. Investigaciones bioquímicas subsiguientes revelaron las reacciones y los intermediarios comprendidos en la biosíntesis de los 20 aminoácidos. Vías metabólicas largas forman los aminoácidos esenciales desde el punto de vista nutricional La existencia de requerimientos nutricionales sugiere que la dependencia de un aporte externo de un nutriente dado puede tener mayor valor para la supervivencia que la capacidad para biosintetizarlo. ¿Por qué? Si un nutriente específico está presente en el alimento, un organismo que puede sintetizarlo transferirá a su progenie información genética de valor negativo acerca de supervivencia. El valor respecto a supervivencia es negativo en lugar de nulo porque se necesitan ATP y nutrientes para sintetizar DNA “innecesario”, incluso si genes codificados específicos ya no se expresan. El número de enzimas que las células procarióticas requieren para sintetizar los aminoácidos esenciales en el aspecto nutricional es grande en comparación con el 234 27 Bender.indd 234 27/11/09 14:22:53 CAPÍTuLO 27 Cuadro 27-1 requerimientos de aminoácidos de seres humanos Esencial desde el punto de vista nutricional 235 Biosíntesis de los aminoácidos no esenciales desde el punto de vista nutricional No esencial en el aspecto nutricional tejidos humanos de los 12 aminoácidos no esenciales desde el punto de vista nutricional, y trastornos nutricionales y metabólicos seleccionados relacionados con su metabolismo. La glutamato deshidrogenasa, la glutamina sintetasa y las aminotransferasas tienen funciones cruciales en la biosíntesis de aminoácidos Arginina1 Alanina Fenilalanina Glicina Histidina Asparagina Isoleucina Aspartato Leucina Cisteína Lisina Glutamato Metionina Glutamina Treonina Hidroxiprolina2 Triptófano Hidroxilisina2 Valina Prolina La acción combinada de las enzimas glutamato deshidrogenasa, glutamina sintetasa y las aminotransferasas, convierte el ion amonio en el nitrógeno α-amino de los aminoácidos. Esto se ilustra a continuación por las vías cortas que convierten intermediarios anfibólicos en los aminoácidos no esenciales en el aspecto nutricional. glutamato La glutamato deshidrogenasa cataliza la amidación reductiva de α-cetoglutarato (fig. 27-1); esta reacción constituye el primer paso en la biosíntesis de la “familia glutamato” de aminoácidos. Serina Tirosina “Semiesencial” desde el punto de vista nutricional. Es sintetizada a índices inadecuados durante el crecimiento de los niños. 2 No se requiere para la síntesis de proteína, pero se forma durante el procesamiento postraduccional de colágeno. 1 Cuadro 27-2 Enzimas requeridas para la síntesis de aminoácidos a partir de intermediarios anfibólicos Número de enzimas requeridas para sintetizar Esencial en el aspecto nutricional No esencial desde el punto de vista nutricional Arg1 7 Ala 1 His 6 Asp 1 Tre 6 Asn2 1 Met 5 (4 compartidas) Glu 1 Lis 8 Gln1 1 Ile 8 (6 compartidas) Hil3 1 Val 1 (7 compartidas) Hip Leu 3 (7 compartidas) Fen Trp 4 1 1 Pro 3 10 Ser 3 5 (8 compartidas) Gli 5 1 59 Cis6 2 Tir7 1 glutamina La amidación de glutamato hacia glutamina catalizada por la glutamina sintetasa (fig. 27-2) comprende la formación intermedia de γ-glutamil fosfato. Después de la unión ordenada de glutamato y ATP, el glutamato ataca el γ-fósforo del ATP, lo que forma γ-glutamil fosfato y ADP. A continuación se une el NH4+ y, al igual que el NH3+, ataca al γ-glutamil fosfato para formar un intermediario tetraédrico. La liberación de Pi y de un protón desde el grupo γ-amino del intermediario tetraédrico posteriormente facilita la liberación del producto, glutamina. alanina y aspartato La transaminación de piruvato forma alanina (fig. 27-3). De modo similar, la transaminación del oxaloacetato forma aspartato. O – 6 A partir de Glu. A partir de Asp. A partir de Lis. A partir de Pro. 5A partir de Ser. A partir de Ser más S2−. 7A partir de Fe. 2 3 4 27 Bender.indd 235 O – O H2O NAD(P)+ Reacción de la glutamato deshidrogenasa. NH3+ O O– L-Glutamato NAD(P)H+H+ O número de enzimas requeridas para sintetizar los aminoácidos no esenciales desde el punto de vista nutricional (cuadro 27-2). Esto sugiere una ventaja en cuanto a supervivencia al retener la capacidad para fabricar aminoácidos “fáciles” mientras que se pierde la capacidad para hacer aminoácidos “difíciles”. En este capítulo se abordan las reacciones y los intermediarios involucrados en la biosíntesis por O NH4+ Figura 27-1 NH3+ – O O α-Cetoglutarato 17 1 O– O O– O L-Glutamato NH3+ H2N O O– O L-Glutamina NH4+ Mg-ATP Figura 27-2 Mg-ADP + Pi Reacción de la glutamina sintetasa. 27/11/09 14:22:53 236 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos O Piruvato NH3+ O– O glicina O– Alanina O α-Cetoglutarato u oxaloacetato Glu o Asp Figura 27-3 Formación de alanina por transaminación de piruvato. El donador de amino puede ser glutamato o aspartato. De esta manera, el otro producto es α-cetoglutarato u oxaloacetato. O – NH 3 + O + O – NH 3 O – H 2N O O Glu Mg-ATP En la biosíntesis de prolina a partir de glutamato se emplean reacciones similares a las del catabolismo de la prolina, pero en las cuales el glutamato γ-fosfato es un intermediario (fig. 27-8). Si bien no es esencial desde el punto de vista nutricional, la cisteína se forma a partir de metionina, que sí lo es. Luego de conversión de metionina en homocisteína (fig. 29-19), la homocisteína y la serina forman cistationina, cuya hidrólisis forma cisteína y homoserina (fig. 27-9). L-Asparagina Gln Prolina Cisteína O L-Aspartato Las glicina aminotransferasas pueden catalizar la síntesis de glicina a partir de glioxilato y glutamato o alanina. Al contrario de casi todas las reacciones de aminotransferasa, éstas favorecen con fuerza la síntesis de glicina. En mamíferos, otras vías importantes para la formación de glicina son a partir de colina (fig. 27-6) y de serina (fig. 27-7). Mg-AMP + PPi Figura 27-4 La reacción de la asparagina sintetasa. Note las similitudes y las diferencias con la reacción de la glutamina sintetasa (fig. 27-2). H3C asparagina La conversión de aspartato en asparagina, catalizada por la asparagina sintetasa (fig. 27-4), semeja la reacción de la glutamina sintetasa (fig. 27-2), pero la glutamina, más que el ion amonio, proporciona el nitrógeno. Sin embargo, las asparagina sintetasas bacterianas también pueden usar ion amonio. La reacción involucra la formación intermedia de aspartil fosfato. La hidrólisis acoplada de PPi hacia Pi por la pirofosfatasa asegura que la reacción se vea favorecida con fuerza. N+ Colina H3C H + N O P O− NADH O P D-3-Fosfoglicerato O O Fosfohidroxipiruvato Betaína aldehído CH3 CH3 O H2O CH3 [CH3] Dimetilglicina N+ H3C O− CH3 O− Betaína O O [CH2O] H H + N CH3 [CH2O] NH3+ O− O− Sarcosina O N+ H3C NAD+ La oxidación del grupo α-hidroxilo del intermediario glucolítico 3-fosfoglicerato por la 3-fosfoglicerato deshidrogenasa, lo convierte en 3-fosfohidroxipiruvato. La transaminación y la desfosforilación subsiguiente a continuación forman serina (fig. 27-5). O− CH3 CH3 OH Serina OH 2H CH3 O Glicina O Figura 27-6 Formación de glicina a partir de colina. Las enzimas que catalizan las reacciones mostradas son la colina deshidrogenasa, betaína deshidrogenasa, betaína-homocisteína N-metiltransferasa, sarcosina desmetilasa y sarcosina oxidasa, respectivamente. α-AA α-KA NH3+ HO O O L-Serina Figura 27-5 α-cetoácidos.) 27 Bender.indd 236 − Pi NH3+ H2O P − O O Fosfo- L-serina Biosíntesis de serina. (α-AA, α-aminoácidos; α-KA, H4 folato NH3+ NH3+ O HO Metileno H4 folato O Serina – O– O Glicina Figura 27-7 La reacción de serina hidroximetiltransferasa. La reacción es libremente reversible (H4 folato, tetrahidrofolato). 27/11/09 14:22:58 CAPÍTuLO 27 NH3+ O ONH3+ L-Glutamato ATP O O −O HO + H3N+ O− O L-Serina H S H2O NH3+ O ADP L-Homocisteína O O −O H2O O- O S Cistationina Glutamato γ -fosfato NADPH NH3+ Pi NADP+ H3N+ O− O NH3+ O -O P 3 237 Biosíntesis de los aminoácidos no esenciales desde el punto de vista nutricional −O O ONH3+ O L-Glutamato γ-semialdehído H3N+ O− O HS OH L-Cisteína + O L-Homoserina Figura 27-9 Conversión de homocisteína y serina en homoserina y cisteína. El azufre de la cisteína se deriva de la metionina, y el esqueleto de carbono, de la serina. H2O NADP+ NADPH + H+ O O- NH+ 1 – Pirrolina–5–carboxilato NADPH NADP+ Tetrahidrobiopterina Dihidrobiopterina O2 H 2O CH2 CH COO– CH2 CH COO− NH3+ NH3+ HO O L-Fenilalanina L-Tirosina ONH2+ L-Prolina Figura 27-8 Biosíntesis de prolina a partir de glutamato. Los catalíticos para estas reacciones son la glutamato 5-cinasa, la glutamato semialdehído deshidrogenasa, cierre de anillo no catalizado y pirrolina 5-carboxilato reductasa. Tirosina La fenilalanina hidroxilasa convierte a la fenilalanina en tirosina (fig. 27-10). Si la dieta contiene cantidades adecuadas del aminoácido esencial desde el punto de vista nutricional fenilalanina, la tirosina es no esencial en ese sentido. Empero, dado que la reacción de la fenilalanina hidroxilasa es irreversible, la tirosina de la dieta no puede remplazar a la fenilalanina. La catálisis por medio de esta oxigenasa de función mixta incorpora un átomo de O2 en la posición para de la fenilalanina y reduce el otro átomo a agua. El poder reductivo, proporcionado como tetrahidrobiopterina (fig. 27-10), finalmente deriva del NADPH. 27 Bender.indd 237 O H H N N H N H N H2 N OH OH Tetrahidrobiopterina Figura 27-10 La reacción de la fenilalanina hidroxilasa. Hay dos actividades enzimáticas distintas involucradas. La actividad II cataliza la reducción de la dihidrobiopterina por el NADPH, y la actividad I la reducción de O2 hacia H2O y de fenilalanina a tirosina. Esta reacción se relaciona con varios defectos del metabolismo de la fenilalanina que se comentan en el capítulo 29. Hidroxiprolina e hidroxilisina Se encuentran sobre todo en el colágeno; puesto que no hay tRNA para uno u otro aminoácido hidroxilado, ni la hidroxiprolina ni la hidroxilisina de la dieta se incorporan durante la síntesis de proteína. La peptidil hidroxiprolina e hidroxilisina surgen a partir de pro- 27/11/09 14:23:00 238 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos α-Cetoglutarato [18O] Succinato Fe2+ 18O 2 Ascorbato 18OH Pro Pro Figura 27-11 La reacción de la prolil hidroxilasa. El sustrato es un péptido rico en prolina. En el transcurso de la reacción, el oxígeno molecular se incorpora tanto hacia succinato como hacia prolina. La lisil hidroxilasa cataliza una reacción análoga. H H Se CH2 C COO– NH3+ O Se + ATP AMP + Pi + H Se P O– O– Figura 27-12 Selenocisteína (arriba) y la reacción catalizada por la selenofosfato sintetasa (abajo). lina y lisina, pero sólo después de que estos aminoácidos se han incorporado a péptidos. La hidroxilación de residuos peptidil prolilo y lisilo, catalizada por la prolil hidroxilasa y la lisil hidroxilasa de la piel, el músculo estriado y heridas en granulación necesita, además del sustrato, O2 molecular, ascorbato, Fe2+ y α-cetoglutarato (fig. 27-11). Por cada mol de prolina o lisina hidroxilado, un mol de α-cetoglutarato se descarboxila hacia succinato. Las hidroxilasas son oxigenasas de función mixta. Un átomo de O2 se incorpora hacia prolina o lisina, y el otro hacia succinato (fig. 27-11). Una deficiencia de la vitamina C necesaria para estas hidroxilasas produce escorbuto. fato, que se forma a partir de ATP y selenato (fig. 27-12), sirve como el donador de selenio. Al contrario de la hidroxiprolina o la hidroxilisina, la selenocisteína surge de modo cotraduccional en el transcurso de su incorporación hacia péptidos. El anticodón UGA del tRNA poco común designado tRNASec por lo normal es señalado como STOP (codón de terminación o sin sentido). La capacidad del aparato sintético de proteína para identificar un codón UGA específico para selenocisteína involucra el elemento de inserción de selenocisteína, una estructura en tallo-asa en la región no traducida del mRNA. La selenocisteína-tRNASec se carga primero con serina por la ligasa que carga al tRNASer. El remplazo subsiguiente del oxígeno serina por selenio comprende selenofosfato formado por la selenofosfato sintasa (fig. 27-12). Reacciones catalizadas por enzimas sucesivas convierten a la cisteil-tRNASec en aminoacril-tRNASec y luego en selenocisteil- tRNASec. En presencia de un factor de alargamiento específico que reconoce a la selenocisteil-tRNASec, la selenocisteína a continuación se puede incorporar en proteínas. rESuMEN ■ ■ ■ ■ Valina, leucina e isoleucina Aunque éstos son aminoácidos esenciales desde el punto de vista nutricional, las aminotransferasas hísticas interconvierten de manera reversible los tres aminoácidos y sus α-cetoácidos correspondientes. De este modo, estos α-cetoácidos pueden remplazar sus aminoácidos en la dieta. ■ Todos los vertebrados pueden formar ciertos aminoácidos a partir de intermediarios anfibólicos o de otros aminoácidos en la dieta. Los intermediarios y los aminoácidos a los cuales dan lugar son α-cetoglutarato (Glu, Gln, Pro, Hip), oxaloacetato (Asp, Asn) y 3-fosfoglicerato (Ser, Gli). La cisteína, tirosina e hidroxilisina se forman a partir de aminoácidos esenciales en el aspecto nutricional. La serina proporciona el esqueleto de carbono, y la homocisteína el azufre para la biosíntesis de cisteína. La fenilalanina hidroxilasa convierte a la fenilalanina en tirosina en una reacción irreversible. Ni la hidroxiprolina ni la hidroxilisina de la dieta se incorporan hacia proteínas porque ningún codón o tRNA dicta su inserción hacia péptidos. La peptidil hidroxiprolina e hidroxilisina se forman mediante hidroxilación de peptidil prolina o lisina en reacciones catalizadas por oxidasas de función mixta que necesitan vitamina C como cofactor. La enfermedad nutricional escorbuto refleja hidroxilación alterada debido a deficiencia de vitamina C. La selenocisteína, un residuo del sitio activo esencial en varias enzimas de mamífero, surge por inserción cotraduccional desde un tRNA previamente modificado. Selenocisteína, el vigésimo primer aminoácido rEFErENCiaS Aun cuando rara vez se encuentra en proteínas, la selenocisteína (fig. 27-12) está presente en el sitio activo de varias enzimas del ser humano que catalizan reacciones de redox. Los ejemplos son tiorredoxina reductasa, glutatión peroxidasa, y la desyodasa que convierte la tiroxina en triyodotironina. Cuando está presente, la selenocisteína participa en el mecanismo catalítico de estas enzimas. Un aspecto importante es que el remplazo de selenocisteína por cisteína puede disminuir de manera significativa la actividad catalítica. Los deterioros de las selenoproteínas de ser humano se han implicado en la tumorigénesis y la aterosclerosis, y se relacionan con cardiomiopatía por deficiencia de selenio (enfermedad de Keshan). La biosíntesis de selenocisteína requiere cisteína, selenato (SeO42–), ATP, un tRNA específico y varias enzimas. La serina proporciona el esqueleto de carbono de la selenocisteína. El selenofos- Beckett GJ, Arthur JR: Selenium and endocrine systems. J Endocrinol 2005;184:455. Brown KM, Arthur JR: Selenium, selenoproteins and human health: a review. Public Health Nutr 2001;4:593. Kilberg MS: Asparagine synthetase chemotherapy. Annu Rev Biochem 2006;75:629. Kohrl J et al: Selenium in biology: facts and medical perspectives. Biol Chem 2000;381:849. Lobanov AV, Hatfield DL, Gladyshev VN: Reduced reliance on the trace element selenium during evolution of mammals. Genome Biol 2008;9:R62. Scriver CR et al (editors): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. McGraw-Hill, 2001. Stickel F et al: Role of nutrition in liver transplantation for end-stage chronic liver disease. Nutr Rev 2008;66:47. 27 Bender.indd 238 27/11/09 14:23:02 28 C Catabolismo de proteínas y de nitrógeno de aminoácidos Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA En este capítulo se describe de qué modo el nitrógeno de aminoácidos se convierte en urea y los raros trastornos metabólicos que acompañan a los defectos de la biosíntesis de urea. En adultos normales, la ingestión de nitrógeno es igual al nitrógeno excretado. El balance positivo de nitrógeno, un exceso de nitrógeno ingerido sobre el que se excreta, acompaña al crecimiento y al embarazo. El balance negativo de nitrógeno, en el cual el gasto excede a la ingestión, puede observarse después de una intervención quirúrgica, así como en el cáncer avanzado, el kwashiorkor y el marasmo. El amoniaco, derivado principalmente del nitrógeno α-amino de aminoácidos, es muy tóxico. En consecuencia, los tejidos convierten el amoniaco en el nitrógeno amida del aminoácido no tóxico glutamina. La desaminación subsiguiente de la glutamina en el hígado libera amoniaco, que luego se convierte en urea, que es no tóxica. Si la función del hígado está alterada, como en la cirrosis o la hepatitis, las concentraciones sanguíneas altas de amonio generan signos y síntomas clínicos. Cada enzima del ciclo de la urea proporciona ejemplos de defectos metabólicos y sus consecuencias fisiológicas, y el ciclo en conjunto sirve como un modelo molecular para el estudio de defectos metabólicos en seres humanos. EL RECAMBIO DE PROTEÍNA OCURRE EN TODAS LAS FORMAS DE VIDA La degradación y síntesis continuas de proteínas celulares suceden en todas las formas de vida. Cada día hay recambio de 1 a 2% de la proteína corporal total de seres humanos, principalmente proteína muscular. Los tejidos que están pasando por reordenamiento estructural, por ejemplo, el tejido del útero en el transcurso de la gestación, el músculo estriado en la inanición, y el tejido de la cola del renacuajo durante la metamorfosis, tienen índices altos de degradación de proteína. De los aminoácidos liberados, alrededor de 75% se reutiliza. Dado que los aminoácidos libres excesivos no se almacenan, los que no se incorporan de inmediato hacia nueva proteína se degradan con rapidez. La principal porción de los esqueletos de carbono de los aminoácidos se convierte en intermediarios anfibólicos, mientras que el nitrógeno amino se convierte en urea y se excreta en la orina. PROTEASAS Y PEPTIDASAS DEGRADAN PROTEÍNAS HACIA AMINOÁCIDOS La susceptibilidad relativa de una proteína a degradación se expresa como su vida media (t½), el tiempo necesario para disminuir sus a P í t u l o cifras a la mitad del valor inicial. La vida media de las proteínas del hígado varía desde menos de 30 min hasta más de 150 h. Las enzimas “normalizadoras” o “caseras” (“house keeping”) típicas tienen valores de t½ de más de 100 h. En contraste, muchas enzimas reguladoras clave tienen valores de t½ de apenas 0.5 a 2 h. Las secuencias PEST, regiones ricas en prolina (P), glutamato (E), serina (S) y treonina (T), establecen a algunas proteínas como objetivos para degradación rápida. Las proteasas intracelulares hidrolizan enlaces peptídicos internos. Los péptidos resultantes a continuación se degradan hacia aminoácidos por medio de endopeptidasas que dividen enlaces peptídicos internos, y mediante aminopeptidasas y carboxipeptidasas que eliminan aminoácidos de manera secuencial desde las terminales amino y carboxilo, respectivamente. Los péptidos circulantes, como las hormonas, se degradan después de la pérdida de una porción ácido siálico de los extremos no reductores de sus cadenas de oligosacárido. Los receptores de asialoglucoproteína de las células hepáticas internalizan las asialoglucoproteínas, y las proteasas lisosómicas denominadas catepsinas las degradan. Las proteínas extracelulares, relacionadas con membrana, e intracelulares de vida prolongada se degradan en lisosomas por medio de procesos independientes de ATP. En contraste, las proteínas reguladoras que tienen vida media breve, y las proteínas anormales o plegadas de modo erróneo, se degradan en el citosol, lo cual requiere ATP y ubiquitina. La ubiquitina, así llamada porque está presente en todas las células eucarióticas, es un polipéptido pequeño (8.5 kDa,76 residuos) que establece a muchas proteínas intracelulares como blanco para degradación. La estructura primaria de la ubiquitina está muy conservada. Sólo 3 de 76 residuos difieren entre la ubiquitina de levaduras y la de seres humanos. Las moléculas de ubiquitina están fijas mediante enlaces no α-peptídicos que se forman entre el carboxilo terminal de la ubiquitina y los grupos α-amino de residuos lisilo en la proteína blanco (fig. 28-1). El residuo presente en su amino terminal influye sobre el hecho de si una proteína es ubiquitinada. El amino terminal Met o Ser retarda la ubiquitinación, mientras que Asp o Arg la acelera. La fijación de una molécula de ubiquitina única a proteínas transmembrana altera su localización subcelular y las establece como objetivos para degradación. Las proteínas solubles pasan por poliubiquitinación, la fijación, catalizada por ligasa, de cuatro o más moléculas de ubiquitina adicionales. La degradación subsiguiente de proteínas marcadas con ubiquitina tiene lugar en el proteasoma, una macromolécula con múltiples subunidades diferentes que también está omnipresente en células eucarióticas. En 2004, Aaron Ciechanover y Avram Hershko, de Israel, e Irwin Rose, de EUA, recibieron el premio Nobel en química por el descubrimiento de la degradación de 239 28 Bender.indd 239 27/11/09 14:24:22 240 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos O Ub C ATP Riñón NH3 − O HS AMP + PPi Cerebro E1 O Ub C S E1 HS E2 HS E1 S E2 Ser Val Gln Intestino Ala Ala O Ub C E3 H2N LIS HS E2 Ala Pr O Ub C NH LIS Pr Poliubiquitinación Músculo Urea Glucosa Hígado Figura 28-2 Intercambio de aminoácidos interórganos en seres humanos normales después de absorción. Se muestran la función clave de la alanina en el gasto de aminoácidos desde el músculo y el intestino, y la captación por el hígado. O Ub Ub Ub Ub C NH LIS Pr Figura 28-1 Reacciones comprendidas en la fijación de ubiquitina (Ub) a proteínas. Tres enzimas están involucradas. La E1 es una enzima activadora, E2 es una ligasa, y E3 es una transferasa. Si bien se describen como entidades únicas, hay varios tipos de E1, y más de 500 de E2. El COOH terminal de la ubiquitina primero forma un tioéster. La hidrólisis acoplada de PPi por la pirofosfatasa asegura que la reacción procederá con facilidad. Una reacción de intercambio de tioéster ahora transfiere la ubiquitina activada a E2. Después E3 cataliza la transferencia de ubiquitina hacia el grupo є-amino de un residuo lisilo de la proteína blanco. Rondas adicionales de ubiquitinación originan poliubiquitinación subsiguiente. proteína mediada por ubiquitina. Las enfermedades metabólicas relacionadas con defectos de la ubiquitinación incluyen los síndromes de Angelman y de von Hippel-Lindau, en el cual hay un defecto en la ubiquitina E3 ligasa. En el capítulo 4 se presentan aspectos adicionales de la degradación y ubiquitinación de proteína, incluso su función en el ciclo celular. EL INTERCAMBIO INTERÓRGANO MANTIENE LAS CONCENTRACIONES CIRCULANTES DE AMINOÁCIDOS El mantenimiento de cifras de estado estable de aminoácidos que circulan en el plasma entre las comidas depende del balance neto entre la liberación desde reservas de proteína endógenas y la utilización por diversos tejidos. El músculo genera más de la mitad del fondo común corporal total de aminoácidos libres, y el hígado es el sitio de las enzimas del ciclo de la urea necesarias para la eliminación del nitrógeno excesivo. Así, el músculo y el hígado desempeñan funciones importantes en el mantenimiento de las concentraciones de aminoácidos en la circulación. En la figura 28-2 se resume el estado posterior a la absorción. Los aminoácidos libres, en especial alanina y glutamina, se liberan 28 Bender.indd 240 desde el músculo hacia la circulación. La alanina, que parece ser el vehículo de transporte de nitrógeno en el plasma, se extrae principalmente en el hígado. La glutamina se extrae en el intestino y los riñones, y ambos convierten una porción importante en alanina. La glutamina también sirve como una fuente de amoniaco para excreción por los riñones. Estos últimos proporcionan una fuente importante de serina para captación por tejidos periféricos, incluso hígado y músculo. Los aminoácidos de cadena ramificada, en particular la valina, son liberados por el músculo y captados de forma predominante por el cerebro. La alanina es un aminoácido gluconeogénico clave (fig. 28-3). El índice de gluconeogénesis hepática a partir de alanina es mucho más alto que el proveniente de todos los otros aminoácidos. La capacidad del hígado para gluconeogénesis desde alanina no se satura sino hasta que las cifras de alanina alcanzan 20 a 30 veces su concentración fisiológica. Luego de una comida con alto contenido de proteína, los tejidos esplácnicos liberan aminoácidos (fig. 28-4), mientras que los músculos periféricos extraen aminoácidos, en ambos casos de manera predominante aminoácidos de cadena ramificada. De ese modo, éstos desempeñan una función especial en el metabolismo de nitrógeno, tanto en el estado de ayuno, cuando proporcionan una fuente de energía al cerebro, como después de la alimentación, cuando son extraídos predominantemente por los músculos, una vez que han sido preservados por el hígado. LOS ANIMALES CONVIERTEN EL NITRÓGENO α-AMINO EN PRODUCTOS TERMINALES VARIADOS Diferentes animales excretan el nitrógeno excesivo como amoniaco, ácido úrico o urea. El ambiente acuoso de peces teleósteos, que son amonotélicos (excretan amoniaco), los obliga a excretar agua de manera continua para facilitar la excreción de la molécula muy tóxica amoniaco. Las aves, que deben conservar agua y mantener peso bajo, son uricotélicas y excretan ácido úrico como un guano semisólido. Muchos animales terrestres, incluso los seres humanos, son 27/11/09 14:24:24 Capítulo 28 Hígado Sangre Músculo Glucosa Glucosa Glucosa Piruvato Urea NH2 Alanina Piruvato Alanina –NH2 Aminoácidos Alanina Figura 28-3 El ciclo de la glucosa-alanina. La alanina se sintetiza en el músculo mediante transaminación del piruvato derivado de glucosa, se libera hacia el torrente sanguíneo, y el hígado la capta. En este último órgano, el esqueleto de carbono de la alanina se reconvierte en glucosa y se libera hacia el torrente sanguíneo, donde está disponible para captación por el músculo y resíntesis de alanina. ureotélicos y excretan urea hidrosoluble, no tóxica. Las cifras sanguíneas altas de urea en la nefropatía son una consecuencia, no una causa, de función renal alterada. Catabolismo de proteínas y de nitrógeno de aminoácidos 241 La transaminación transfiere nitrógeno α-amino hacia α-cetoglutarato, lo que forma glutamato Las reacciones de transaminación, que interconvierten pares de α-aminoácidos y α-cetoácidos (fig. 28-6), son reversibles con facilidad y funcionan también en la biosíntesis de aminoácidos. De los aminoácidos de proteínas, todos, excepto lisina, treonina, prolina e hidroxiprolina, participan en la transaminación, la cual sucede por medio de un mecanismo de “ping-pong” (fig. 7-4). La coenzima fosfato de piridoxal (PLP) está presente en el sitio catalítico de todas las aminotransferasas (y de muchas otras enzimas que actúan sobre aminoácidos). El PLP, un derivado de la vitamina B6, forma un intermediario base de Schiff unido a enzima que puede reordenarse de varios modos. Durante la transaminación, el PLP unido a enzima sirve como un acarreador de grupos amino. El reordenamiento forma un α-cetoácido y fosfato de piridoxamina unido a enzima, que luego forma una base de Schiff con un segundo cetoácido. Después de la eliminación de su nitrógeno α-amino mediante transaminación, el “esqueleto” de carbono restante de un aminoácido es degradado por medio de las vías que se comentan en el capítulo 29. La alanina-piruvato aminotransferasa (alanina aminotransferasa) y la glutamato-α-cetoglutarato aminotransferasa (glutamato aminotransferasa) catalizan la transferencia de grupos amino hacia piruvato (lo que forma alanina) o hacia α-cetoglutarato (lo que forma glutamato) (fig. 28-7). Cada aminotransferasa es específica para un par de sustratos, pero inespecífica para el otro par. Puesto que la α-Aminoácido BIOSÍNTESIS DE UREA α-Cetoácido Transaminación Ocurre en cuatro etapas: 1) transaminación; 2) desaminación oxidativa de glutamato; 3) transporte de amoniaco, y 4) reacciones del ciclo de la urea (fig. 28-5). El uso de sondas de DNA complementarias ha mostrado que la expresión en el hígado de los RNA que codifican para todas las enzimas del ciclo de la urea aumenta varias veces durante la inanición. α-Cetoglutarato L-Glutamato Desaminación oxidativa NH3 CO2 Ciclo de la urea Urea Riñón Figura 28-5 Flujo general de nitrógeno en el catabolismo de aminoácidos. Cerebro Val Gln Músculo NH + 3 Ala (2 0 ca % a de m na ino Ci á Intestino rcu ram cid ific os lac ad de ión po a rta (60% aminoácidos de cadena ramificada) Ala R1 C O– R1 C O Hígado R2 C C O– O NH + 3 O Figura 28-4 Resumen del intercambio de aminoácidos entre órganos justo luego de la alimentación. 28 Bender.indd 241 CH O C O O– R2 CH C O– O Figura 28-6 Transaminación. La reacción es libremente reversible, con una constante de equilibrio cercana a la unidad. 27/11/09 14:24:28 242 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos Piruvato L-Alanina α-Cetoglutarato L-Glutamato α-Aminoácido α-Cetoácido NH3+ R C H α-Aminoácido α-Cetoácido C NH2+ Aminoácido oxidasa O– R O α-Aminoácido α-Iminoácido H2O Flavina-H2 Las aminoácido oxidasas también eliminan nitrógeno como amoniaco Aun cuando su importancia fisiológica es incierta, las l-aminoácido oxidasas del hígado y los riñones convierten un aminoácido en un α-iminoácido que se descompone hacia un α-cetoácido con libera- NAD(P)+ NAD(P)H + H+ NH3 L-Glutamato Figura 28-8 α-Cetoglutarato La reacción de la l-glutamato deshidrogenasa. NAD(P)+ significa que el NAD+ o el NADP+ puede servir como el oxidorreductor. La reacción es reversible, pero favorece la formación de glutamato. 28 Bender.indd 242 O O2 Catalasa La transferencia de nitrógeno amino hacia α-cetoglutarato forma lglutamato. La l-glutamato deshidrogenasa hepática (GDH), que puede usar NAD+ o NADP+, libera este nitrógeno como amoniaco (fig. 28-8). La conversión de nitrógeno α-amino en amoniaco por la acción concertada de la glutamato aminotransferasa y la GDH suele denominarse “transdesaminación”. La actividad de GDH en el hígado es inhibida de modo alostérico por ATP, GTP y NADH, y activada por ADP. La reacción de GDH es libremente reversible, y funciona también en la biosíntesis de aminoácidos (fig. 27-1). O– NH4+ H2O2 LA l-GLUTAMATO DESHIDROGENASA OCUPA UNA POSICIÓN FUNDAMENTAL EN EL METABOLISMO DE NITRÓGENO C O Flavina Figura 28-7 Alanina aminotransferasa (arriba) y glutamato aminotransferasa (abajo). alanina también es un sustrato para la glutamato aminotransferasa, todo el nitrógeno amino proveniente de aminoácidos que pasa por transaminación puede concentrarse en el glutamato. Esto es importante porque el l-glutamato es el único aminoácido que pasa por desaminación oxidativa a un índice apreciable en tejidos de mamífero. De esta manera, la formación de amoniaco a partir de grupos α-amino ocurre principalmente por medio del nitrógeno α-amino del l-glutamato. La transaminación no se restringe a grupos α-amino. El grupo δ-amino de la ornitina (no así el grupo є-amino de la lisina) pasa con facilidad por transaminación. Las concentraciones séricas altas de aminotransferasas caracterizan a ciertas enfermedades (cuadro 7-2). C R 1/2O 2 H2O C C O– O α-Cetoácido Figura 28-9 Desaminación oxidativa catalizada por la oxidasa (l-α-aminoácido:O2 oxidorreductasa). El α-iminoácido, que se muestra entre corchetes, no es un intermediario estable. l-aminoácido ción de ion amonio (fig. 28-9). El oxígeno molecular reoxida a la flavina reducida, lo que forma peróxido de hidrógeno (H2O2), al cual luego la catalasa divide hacia O2 y H2O. La intoxicación por amoniaco pone en peligro la vida El amoniaco producido por las bacterias entéricas y que se absorbe hacia la sangre venosa porta, y el amoniaco producido por los tejidos, se eliminan con rapidez de la circulación por medio del hígado, y se convierten en urea. Así, en circunstancias normales únicamente hay cantidades traza (10 a 20 µg/dL) en la sangre periférica. Esto es esencial, dado que el amoniaco es tóxico para el sistema nervioso central. Cuando la sangre porta no pasa por el hígado, las cifras sanguíneas de amoniaco pueden alcanzar concentraciones tóxicas. Esto sucede en presencia de función hepática gravemente alterada, o cuando se forman enlaces colaterales entre las venas porta y sistémicas en la cirrosis. Los síntomas de intoxicación por amoniaco son temblor, lenguaje cercenado, visión borrosa, coma y finalmente la muerte. El amoniaco puede ser tóxico para el cerebro debido en parte a que reacciona con α-cetoglutarato para formar glutamato. El decremento resultante de las cifras de α-cetoglutarato después altera la función del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) en neuronas. La glutamina sintetasa fija el amoniaco como glutamina La glutamina sintetasa mitocondrial cataliza la formación de glutamina (fig. 28-10). Puesto que la síntesis de enlace amida está acoplada a la hidrólisis de ATP hacia ADP y Pi, la reacción favorece fuertemente la síntesis de glutamina. Una función clave de esta última es secuestrar amoniaco en una forma no tóxica. La glutaminasa y asparaginasa desamidan la glutamina y asparagina La glutamina sintetasa tiene importancia en la destoxificación de amoniaco, el flujo de nitrógeno interórganos, y la homeostasis 27/11/09 14:24:30 Capítulo 28 NH + 3 –O C CH 2 CH 2 CH C O O– O L-Glutamato NH + 4 Mg-ATP Glutamina sintetasa Mg-ADP + Pi H2 N C H 2O NH + 3 CH 2 CH 2 CH O C O– O L-Glutamina Figura 28-10 La reacción de la glutamina sintetasa favorece de manera importante la síntesis de glutamina. NH + 3 H2 N C CH 2 CH 2 CH O C Glutaminasa NH + 4 NH + 3 CH 2 CH 2 CH O C O– O L-Glutamato Figura 28-11 La reacción de glutaminasa procede en esencia de modo irreversible en la dirección de la formación de glutamato y NH4+. Note que se elimina el nitrógeno amida, no el nitrógeno α-amino. acidobásica. La liberación hidrolítica del nitrógeno amida de la glutamina como amoniaco, catalizada por la glutaminasa (fig. 28-11), favorece con fuerza la formación de glutamato. La l-asparaginasa cataliza una reacción análoga. De esta manera, la acción concertada de la glutamina sintetasa y de la glutaminasa cataliza la interconversión de ion amonio libre y glutamina. Una rara deficiencia de la glutamina sintetasa en recién nacidos da por resultado daño cerebral grave, insuficiencia multiorgánica y muerte. La formación y secreción de amoniaco mantienen el equilibrio acidobásico La excreción hacia la orina del amoniaco producido por las células de los túbulos renales facilita la conservación de catión y la regulación del equilibrio acidobásico. La acidosis metabólica incrementa la producción de amoniaco a partir de aminoácidos renales intracelulares, en especial glutamina, en tanto que la alcalosis metabólica la aminora. 28 Bender.indd 243 LA UREA ES EL PRINCIPAL PRODUCTO TERMINAL DEL CATABOLISMO DE NITRÓGENO EN SERES HUMANOS La síntesis de 1 mol de urea necesita 3 mol de ATP más 1 mol, cada uno, de ion amonio y del nitrógeno α-amino del aspartato. Cinco enzimas catalizan las reacciones numeradas de la figura 28-12. De los seis aminoácidos que participan, el N-acetilglutamato funciona sólo como un activador de enzima. Los otros funcionan como acarreadores de átomos que, por último, se convierten en urea. La principal función metabólica de la ornitina, la citrulina y el argininosuccinato en mamíferos es la síntesis de urea, que es un proceso cíclico. La ornitina consumida en la reacción 2 se regenera en la reacción 5 y, de este modo, no hay pérdida o ganancia neta de ornitina, citrulina, argininosuccinato o arginina. Sin embargo, hay consumo de ion amonio, CO2, ATP y aspartato. Algunas reacciones de la síntesis de urea ocurren en la matriz de la mitocondria y otras en el citosol (fig. 28-12). La carbamoil fosfato sintetasa i inicia la biosíntesis de urea O H 2O C 243 O– L-Glutamina –O Catabolismo de proteínas y de nitrógeno de aminoácidos La carbamoil fosfato sintetasa I mitocondrial cataliza la condensación de CO2, amoniaco y ATP para formar carbamoil fosfato. Una forma citosólica de esta enzima, la carbamoil fosfato sintetasa II, usa glutamina en lugar de amoniaco como el donador de nitrógeno, y funciona en la biosíntesis de pirimidina (cap. 33). Así, la acción concertada de la GDH y de la carbamoil fosfato sintetasa I, transporta nitrógeno amino hacia el carbamoil fosfato, un compuesto con un alto potencial de transferencia de grupo. La carbamoil fosfato sintetasa I, la enzima limitante del ciclo de la urea, sólo es activa en presencia de N-acetilglutamato, un activador alostérico que aumenta la afinidad de la sintetasa por ATP. La síntesis de 1 mol de carbamoil fosfato requiere 2 mol de ATP. Un ATP sirve como donador del fosforilo para la formación del enlace anhídrido ácido mixto del carbamoil fosfato. El segundo ATP proporciona la fuerza impulsora para la síntesis del enlace amida del carbamoil fosfato. Los otros productos son 2 mol de ADP y 1 mol de Pi (reacción 1, fig. 28-12). La reacción procede por pasos. La reacción de bicarbonato con ATP forma carbonil fosfato y ADP. A continuación el amoniaco desplaza al ADP, lo que forma carbamato y ortofosfato. La fosforilación de carbamato por el segundo ATP forma entonces carbamoil fosfato. El carbamoil fosfato más ornitina forma citrulina La l-ornitina transcarbamoilasa cataliza la transferencia del grupo carbamoilo del carbamoil fosfato hacia ornitina, lo que forma citrulina y ortofosfato (reacción 2, fig. 28-12). Si bien la reacción sucede en la matriz mitocondrial, tanto la formación de ornitina como el metabolismo subsiguiente de citrulina tienen lugar en el citosol. Por ende, la entrada de ornitina hacia las mitocondrias, y el éxodo de citrulina desde estas últimas, comprenden sistemas de transporte de membrana interna mitocondrial (fig. 28-12). 27/11/09 14:24:32 244 SECCIÓN III CO2 Metabolismo de proteínas y aminoácidos NH4+ CO2 + NH4+ NH2 Urea C O Carbamoil fosfato sintasa I 2 Mg-ATP N-Acetilglutamato H2O NH3+ C NH 5 CH2NH3+ CH2 1 2 Mg-ADP + Pi CH2 NH CH2 Arginasa CH2 H C NH3+ COO − L-Arginina − Ornitina transcarbamoilasa O− Pi CH2 H C NH3+ COO − L-Ornitina O O H2N C O P O− Carbamoil fosfato NH2 4 2 HC COO − OOC CH Fumarato Argininosuccinasa NH2 C O CH2 NH CH2 CH2 CH2 CH2 H C NH3+ 3 Argininosuccinato sintetasa COO − L-Citrulina Mg-ATP NH C NH NH COO − CH CH2 COO − Argininosuccinato CH2 H C NH3+ COO − AMP + Mg-PPi − COO H2N C H CH2 COO − L-Aspartato Figura 28-12 Reacciones e intermediarios de la biosíntesis de la urea. Los grupos que contienen nitrógeno que contribuyen a la formación de urea están sombreados. Las reacciones  y  ocurren en la matriz de las mitocondrias hepáticas, y las reacciones ,  y , en el citosol hepático. El CO2 (como bicarbonato), el ion amonio, la ornitina y la citrulina entran a la matriz mitocondrial por medio de acarreadores específicos (véanse los puntos de color rojo) presentes en la membrana interna de las mitocondrias del hígado. La citrulina más aspartato forman argininosuccinato La argininosuccinato sintetasa enlaza aspartato y citrulina mediante el grupo amino del aspartato (reacción 3, fig. 28-12), y proporciona el segundo nitrógeno de la urea. La reacción necesita ATP e incluye la formación intermedia de citrulil-AMP. El desplazamiento subsiguiente de AMP por aspartato a continuación forma argininosuccinato. La adición de agua a fumarato forma l-malato, cuya oxidación dependiente de NAD+ subsiguiente lo convierte en oxaloacetato. Estas dos reacciones son análogas a las reacciones del ciclo del ácido cítrico (fig. 17-3), pero son catalizadas por la fumarasa y la malato deshidrogenasa citosólicas. La transaminación de oxaloacetato por la glutamato aminotransferasa a continuación vuelve a formar aspartato. De esta manera, el esqueleto de carbono del aspartato-fumarato actúa como un acarreador del nitrógeno de glutamato hacia un precursor de urea. La división de argininosuccinato forma arginina y fumarato La división de arginina libera urea y vuelve a formar ornitina La división del argininosuccinato, catalizada por la argininosuccinasa, procede con retención de nitrógeno en la arginina, y liberación del esqueleto aspartato como fumarato (reacción 4, fig. 28-12). La división hidrolítica del grupo guanidino de la arginina, catalizada por la arginasa hepática, libera urea (reacción 5, fig. 28-12). El otro producto, la ornitina, vuelve a entrar a las mitocondrias hepáticas, y 28 Bender.indd 244 27/11/09 14:24:34 Capítulo 28 participa en rondas adicionales de síntesis de urea. La ornitina y la lisina son potentes inhibidores de la arginasa, y compiten con la arginina. Esta última también funciona como un precursor del potente relajante muscular óxido nítrico (NO) en una reacción dependiente de Ca2+ catalizada por la NO sintasa (fig. 48-12). La carbamoil fosfato sintetasa i es la enzima marcapasos del ciclo de la urea La actividad de la carbamoil fosfato sintetasa I está determinada por el N-acetilglutamato, cuya concentración de estado estable está dictada por su índice de síntesis a partir de acetil-CoA y glutamato, y su índice de hidrólisis hacia acetato y glutamato. Estas reacciones son catalizadas por la N-acetilglutamato sintasa y la N-acetilglutamato hidrolasa, respectivamente. Los cambios importantes en la dieta pueden incrementar 10 a 20 veces las cifras de enzimas individuales del ciclo de la urea. Por ejemplo, la inanición aumenta las concentraciones de enzimas, probablemente para afrontar el incremento de la producción de amoniaco que acompaña a la degradación aumentada de proteína inducida por inanición. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS TRASTORNOS METABÓLICOS Los trastornos metabólicos comparativamente raros, pero devastadores desde el punto de vista médico, relacionados con las enzimas de la biosíntesis de la urea, ilustran los siguientes principios generales de las enfermedades metabólicas: 1. Signos y síntomas clínicos similares o idénticos pueden caracterizar a cualquier número de diferentes defectos en el ámbito molecular en una enzima dada. 2. La terapia racional debe basarse en un entendimiento de las reacciones catalizadas por enzimas bioquímicas importantes en sujetos tanto normales como alterados. 3. La identificación de intermediarios y de productos auxiliares que se acumulan antes de un bloqueo metabólico proporciona la base para las pruebas para detectar trastornos metabólicos, y pueden indicar la reacción que está alterada. 4. El diagnóstico preciso requiere evaluación cuantitativa de la actividad de la enzima que se sospecha que es defectuosa. 5. La secuencia de DNA del gen que codifica para una enzima mutante dada se compara con la del gen tipo natural para identificar la o las mutaciones específicas que originan la enfermedad. HAY TRASTORNOS METABÓLICOS RELACIONADOS CON CADA REACCIÓN DEL CICLO DE LA UREA Se han descrito defectos en cada enzima del ciclo de la urea. Muchas de las mutaciones causales han sido “mapeadas” e identificado defectos específicos en las enzimas codificadas. Cinco enfermedades bien documentadas representan defectos de la biosíntesis de enzimas del ciclo de la urea. El análisis genético molecular ha identificado con exactitud los loci de mutaciones relacionadas con cada defi- 28 Bender.indd 245 Catabolismo de proteínas y de nitrógeno de aminoácidos 245 ciencia, cada uno de los cuales muestra considerable variabilidad genética y fenotípica. Los trastornos del ciclo de la urea se caracterizan por hiperamonemia, encefalopatía y alcalosis respiratoria. Cuatro de las cinco enfermedades metabólicas, deficiencias de carbamoil fosfato sintetasa, ornitina transcarbamilasa, argininosuccinato sintetasa, y argininosuccinato liasa, suscitan la acumulación de precursores de urea, en especial amoniaco y glutamina. La intoxicación por amoniaco es más grave cuando el bloqueo metabólico ocurre en las reacciones 1 o 2 (fig. 28-12), porque si puede sintetizarse citrulina, algo de amoniaco ya se ha eliminado al enlazarse de modo covalente a un metabolito orgánico. Los síntomas clínicos comunes a todos los trastornos del ciclo de la urea comprenden vómito, evitación de alimentos con alto contenido de proteína, ataxia intermitente, irritabilidad, letargo y retraso mental grave. La presentación clínica más notoria sucede en lactantes a término que en un inicio parecen normales pero luego muestran letargo progresivo, hipotermia y apnea debido a las cifras plasmáticas altas de amoniaco. Los datos clínicos y el tratamiento de los cinco trastornos son similares. Una dieta hipoproteínica ingerida como comidas frecuentes pequeñas con el fin de evitar incrementos repentinos de las concentraciones sanguíneas de amoniaco puede ir acompañada de mejoría y minimización del daño cerebral significativas. El objetivo de la dietoterapia es proporcionar suficiente proteína, arginina y energía para promover el crecimiento y desarrollo, mientras que al mismo tiempo se minimizan las perturbaciones metabólicas relacionadas con estas enfermedades. Carbamoil fosfato sintetasa i El N-acetilglutamato es esencial para la actividad de la carbamoil fosfato sintetasa I (reacción 1, fig. 28-12). Los defectos de esta enzima producen la enfermedad metabólica relativamente rara (frecuencia estimada, 1:62 000) denominada “hiperamonemia tipo 1”. N-acetilglutamato sintasa (NagS) Cataliza la formación, a partir de acetil-CoA y glutamato, del Nacetilglutamato esencial para la actividad de la carbamoil fosfato sintetasa I. l-Glutamato + Acetil-CoA → N-acetil- l-glutamato + CoASH Aunque las características clínicas y bioquímicas de la deficiencia de NAGS son indistinguibles de las que surgen por un defecto de la fosfato sintetasa I, una deficiencia de NAGS puede mostrar respuesta al N-acetilglutamato administrado. El transportador de ornitina La hiperornitinemia, la hiperamonemia y el síndrome de homocitrulinuria (síndrome HHH) se producen por mutación del gen ORNT1 que codifica para el transportador de ornitina de la membrana mitocondrial. El fracaso para importar ornitina citosólica hacia la matriz mitocondrial hace inoperable al ciclo de la urea, con hiperamonemia consiguiente, e hiperornitinemia debida a la acumulación acompañante de ornitina citosólica. 27/11/09 14:24:34 246 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos En ausencia de su aceptor normal ornitina, el carbamoil fosfato mitocondrial carbamoila la lisina hacia homocitrulina, lo que ocasiona homocitrulinuria. Ornitina transcarbamoilasa La deficiencia enlazada al cromosoma X llamada “hiperamonemia tipo 2” refleja un defecto de la ornitina transcarbamoilasa (reacción 2, fig. 28-12). Las madres también muestran hiperamonemia, y aversión a los alimentos hiperproteínicos. Las cifras de glutamina están altas en la sangre, el líquido cefalorraquídeo y la orina, probablemente como resultado de aumento de la síntesis de glutamina en respuesta a concentraciones altas de amoniaco hístico. argininosuccinato sintetasa Además de los enfermos que carecen de actividad detectable de esta enzima (reacción 3, fig. 28-12), se ha informado un incremento de 25 veces de la Km para citrulina. En la citrulinemia resultante, las cifras de citrulina en el plasma y el líquido cefalorraquídeo están altas, y se excretan 1 a 2 g de citrulina a diario. argininosuccinasa (argininosuccinato liasa) La argininosuccinicaciduria, acompañada de concentraciones altas de argininosuccinato en la sangre, el líquido cefalorraquídeo y la orina, se relaciona con pelo friable y deshilachado en el extremo (tricorrexis nodosa). Se conocen tipos de inicio tanto temprano como tardío. El defecto metabólico yace en la argininosuccinasa (argininosuccinato liasa; reacción 4, fig. 28-12). El diagnóstico basado en la medición de la actividad de argininosuccinasa en los eritrocitos puede efectuarse en sangre de cordón umbilical o en células de líquido amniótico. los Estados de ese país ahora se llevan a cabo pruebas de detección de enfermedades metabólicas en recién nacidos, aun cuando el alcance de las pruebas de detección empleadas varía entre uno y otro. La poderosa y sensible técnica de espectrometría de masa en tándem (cap. 4) puede detectar en algunos minutos más de 40 analitos de importancia en la detección de trastornos metabólicos. En casi todo el territorio estadounidense se emplea la MS (espectometría de masa) en tándem para investigar a recién nacidos con el objeto de detectar trastornos metabólicos, como acidemias orgánicas, aminoacidemias, trastornos de la oxidación de ácidos grasos, y defectos de las enzimas del ciclo de la urea. Con todo, persisten diferencias importantes de la cobertura de analitos entre los estados. En un artículo reciente se revisa la teoría de la MS en tándem, su aplicación a la detección de trastornos metabólicos, y situaciones que pueden dar resultados positivos falsos. También incluye un cuadro grande de analitos detectables, y las enfermedades metabólicas importantes (véase Clinical Chemistry 39, 315-332, 2006). ¿La terapia génica resulta promisoria para corregir defectos de la biosíntesis de la urea? La terapia génica de defectos de las enzimas del ciclo de la urea es un área de investigación activa. Resultados preliminares estimulantes en modelos en animales, por ejemplo, el uso de un vector adenoviral para tratar citrulinemia, sugieren potencial, pero en la actualidad la terapia génica no proporciona una solución eficaz para seres humanos. rESuMEN ■ arginasa Los seres humanos degradan 1 a 2% de su proteína corporal a diario, a índices que varían entre las proteínas y con el estado fisiológico. Las enzimas reguladoras clave a menudo tienen vida media breve. ■ La hiperargininemia es un defecto autosómico recesivo en el gen que codifica para la arginasa (reacción 5, fig. 28-12). Al contrario de otros trastornos del ciclo de la urea, los primeros síntomas de hiperargininemia típicamente no aparecen sino hasta los 2 a 4 años de edad. Las cifras de arginina en la sangre y el líquido cefalorraquídeo están altas. El modelo de aminoácidos urinario, que semeja el de la lisina-cistinuria, quizá refleje competencia por la arginina con lisina y cisteína para resorción en el túbulo renal. Las proteínas se degradan por medio de vías tanto dependientes como independientes, de ATP. La ubiquitina establece como objetivo muchas proteínas intracelulares para degradación. Los receptores de superficie celular hepáticos se unen a asialoglucoproteínas circulantes destinadas para degradación lisosómica, y las internalizan. ■ Los peces excretan de manera directa el altamente tóxico NH3. Las aves convierten el NH3 en ácido úrico. Los vertebrados superiores convierten el NH3 en urea. ■ La transaminación canaliza el nitrógeno de aminoácidos hacia glutamato. La l-glutamato deshidrogenasa (GDH) ocupa una posición fundamental en el metabolismo del nitrógeno. ■ La glutamina sintetasa convierte el NH3 en glutamina no tóxica. La glutamina libera NH3 para uso en la síntesis de urea. ■ El NH3, el CO2 y el nitrógeno amida del aspartato proporcionan los átomos de la urea. ■ La síntesis de urea en el hígado tiene lugar en parte en la matriz mitocondrial, y en parte en el citosol. ■ Los cambios de las concentraciones de enzima y la regulación alostérica de la carbamoil fosfato sintetasa por N-acetilglucosamina regulan la síntesis de la urea. ■ Las enfermedades metabólicas se relacionan con defectos en cada enzima del ciclo de la urea, del transportador de ornitina relacionado con membrana, y de la N-acetilglutamato sintetasa. El análisis de sangre del recién nacido mediante espectrometría de masa en tándem puede detectar enfermedades metabólicas Las enfermedades metabólicas dependientes de falta o deterioro funcional de enzimas metabólicas pueden ser devastadoras. Empero, la intervención temprana respecto a la dieta casi siempre puede disminuir los efectos ominosos que de otra manera son inevitables. De este modo, la detección temprana de esas enfermedades metabólicas tiene importancia primaria. Desde que en EUA iniciaron los programas de detección durante el decenio de 1960-1969, en todos 28 Bender.indd 246 27/11/09 14:24:35 Capítulo 28 ■ La MS en tándem es la mejor técnica para efectuar pruebas de detección de enfermedades metabólicas hereditarias en recién nacidos. rEFErENCiaS Brooks P et al: Subcellular localization of proteasomes and their regulatory complexes in mammalian cells. Biochem J 2000;346:155. Caldovic L et al: Mutations and polymorphisms in the human N-acetylglutamate synthase (NAGS) gene. 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Sin tratamiento, estos trastornos pueden dar por resultado daño cerebral irreversible y muerte temprana. Así, la detección prenatal, o la detección posnatal oportuna, y el inicio oportuno de tratamiento, son esenciales. Muchas de las enzimas afectadas pueden detectarse en células de líquido amniótico en cultivo, lo que facilita el diagnóstico prenatal por medio de amniocentesis. En casi todos los Estados de EUA se efectúan pruebas de detección para hasta 30 enfermedades metabólicas. Estas pruebas incluyen, pero no se limitan a, trastornos que se producen por defectos del catabolismo de aminoácidos. En las mejores pruebas de detección se usa espectrometría de masa en tándem para detectar, en algunas gotas de sangre de recién nacido, catabolitos sugestivos de un defecto metabólico. Aun cuando muchos cambios de la estructura primaria de las enzimas carecen de efectos adversos, otros modifican la estructura tridimensional de sitios catalíticos o reguladores, disminuyen la eficiencia catalítica (producen decremento de la Vmáx o aumentan la Km), o alteran la afinidad de un regulador alostérico de la actividad. De este modo, diversas mutacio- a P í t u l o nes pueden dar lugar a los mismos signos y síntomas clínicos. El tratamiento consta sobre todo de suministro de dietas con bajo contenido de los aminoácidos cuyo catabolismo está alterado. LA TRANSAMINACIÓN TÍPICAMENTE INICIA EL CATABOLISMO DE AMINOÁCIDOS La eliminación del nitrógeno α-amino mediante transaminación (fig. 28-6) es la primera reacción catabólica de los aminoácidos excepto por la prolina, hidroxiprolina, treonina y lisina. El esqueleto de hidrocarburo que persiste, a continuación se degrada hacia intermediarios anfibólicos (fig. 29-1). asparagina, aspartato, glutamina y glutamato Los cuatro carbonos de la asparagina y del aspartato forman oxaloacetato (fig. 29-2, arriba). Reacciones análogas convierten a la glutamina y el glutamato en α-cetoglutarato (fig. 29-2, abajo). No hay defectos metabólicos relacionados con el catabolismo de estos cuatro aminoácidos. Ala Cis Gli Hip Ser Tre lle Leu Trp α-Cetoglutarato Citrato Glutamato Succinil-CoA Piruvato Ciclo del citrato Arg His Gln Pro lle Met Val Acetil-CoA Acetoacetil-CoA Fumarato Oxaloacetato Figura 29-1 Intermediarios anfibólicos formados a partir de los esqueletos de carbono de aminoácidos. Leu, Lis, Fen, Trp, Tir Aspartato Tir Fen Asn 248 29 Bender.indd 248 27/11/09 14:25:35 capítulo 29 C CH2 H C O H2O NH4+ NH2 CH2 NH2 H Asparaginasa COO C C CH2 C Transaminasa H2O NH2 NH4+ CH2 + NH3 O PIR – H NH3 C – COO O O O– O COO– COO L-Glutamina O– CH2 Transaminasa + C – C ALA CH2 CH2 Glutaminasa O Oxaloacetato O C 249 COO– L-Aspartato O CH2 H ALA COO L-Asparagina CH2 O PIR – NH3+ C – C O C Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos α-Cetoglutarato L-Glutamato Figura 29-2 Catabolismo de la l-asparagina (arriba) y de la l-glutamina (abajo) hacia intermediarios anfibólicos. (PIR, piruvato; ALA, l-alanina.) En esta figura y en otras subsiguientes, las porciones de las moléculas que están pasando por cambio químico se marcan con color. Prolina H H El catabolismo de la prolina tiene lugar en las mitocondrias. Dado que la prolina no participa en la transaminación, el nitrógeno de este iminoácido se retiene de principio a fin de su oxidación hacia Δ1-pirrolina-5-carboxilato, abertura del anillo hacia glutamato-γsemialdehído, y oxidación hacia glutamato, y sólo se elimina durante la transaminación de glutamato hacia α-cetoglutarato (fig. 29-3). Hay dos trastornos metabólicos del catabolismo de la prolina. Ambos tipos se heredan como rasgos autosómicos recesivos, y son congruentes con una vida adulta normal. El bloqueo metabólico en la hiperprolinemia tipo I está en la prolina deshidrogenasa. No hay H +N H O− C O L-Prolina NAD+ Prolina deshidrogenasa 1 NADH + H+ NH+ C O− H2N O NH3+ H N C CH2 NH + ∆1-Pirrolina-5-carboxilato C O− O H2O Arginasa Urea NH3+ CH2 CH2 CH O C NH3+ O− CH2 O Figura 29-3 Catabolismo de la prolina. Los números indican los sitios de defectos metabólicos en las hiperprolinemias  tipo I y  tipo II. O− Ornitina δ−aminotransferasa Glu Pir Ala C α-KG L-Glutamato α-Cetoglutarato CH O NADH + H+ Transaminasa CH2 L-Ornitina NAD+ 2 Glutamato semialdehído deshidrogenasa CH2 NH3+ L-Glutamato-γ-semialdehído 29 Bender.indd 249 CH CH2 L-Arginina H2O HC CH2 L-Glutamato-γ-semialdehído Figura 29-4 Catabolismo de la arginina. La división de la catalizada por la arginasa, forma urea y l-ornitina; esta reacción representa el sitio del defecto metabólico en la hiperargininemia. La transaminación subsiguiente de la l-ornitina hacia glutamato-γ-semialdehído va seguida por conversión hacia α-cetoglutarato (fig. 29-3). l-arginina, 27/11/09 14:25:38 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos deterioro relacionado del catabolismo de la hidroxiprolina. El bloqueo metabólico en la hiperprolinemia tipo II está en la glutamatoγ-semialdehído deshidrogenasa, enzima que también funciona en el catabolismo de la hidroxiprolina. De esta manera, hay afección del catabolismo tanto de la prolina como de la hidroxiprolina, y se excretan tanto Δ1-pirrolina-5-carboxilato como Δ1-pirrolina-3hidroxi-5-carboxilato (fig. 29-12). arginina y ornitina La arginina se convierte en ornitina y después en el glutamato-γsemialdehído (fig. 29-4). El catabolismo subsiguiente hacia α-cetoH3N+ –O CH C H + NH HN C H O L-Histidina – O H C C O + HN NH C H El complejo de división de glicina de las mitocondrias hepáticas divide a la glicina en CO2 y NH4+, y forma N5,N10-metileno-tetrahidrofolato. H 2O Urocanasa HN O CH2 C El catabolismo de la histidina procede mediante el urocanato, 4-imidazolona-5-propionato, y N-formiminoglutamato (Figlu). La transferencia del grupo formimino hacia el tetrahidrofolato forma glutamato, y luego α-cetoglutarato (fig. 29-5). En la deficiencia de ácido fólico, la transferencia de grupo del grupo formimino está alterada, y se excreta Figlu. Así, la excreción de Figlu después de una dosis de histidina puede usarse para detectar deficiencia de ácido fólico. Los trastornos benignos del catabolismo de la histidina son la histidinemia y la aciduria urocánica relacionadas con histidasa alterada. glicina Urocanato – Histidina CATABOLISMO DE LA GLICINA, SERINA, ALANINA, CISTEÍNA, TREONINA Y 4-HIDROXIPROLINA Histidasa NH4+ glutarato ocurre como se describió para la prolina (fig. 29-3). Las mutaciones de la ornitina δ-aminotransferasa incrementan la ornitina plasmática y urinaria, y originan atrofia girada de la retina. El tratamiento comprende restricción de la arginina en la dieta. En el síndrome de hiperornitinemia-hiperamonemia, un antiportador de ornitina-citrulina mitocondrial defectuoso (fig. 28-12), altera el transporte de ornitina hacia las mitocondrias para uso en la síntesis de urea. Glicina + H4folato + NAD+ → CO2 + NH3 + 5,10-CH2-H4folato + NADH + H+ + NH O CH2 S O 4-Imidazolona-5-propionato HN O C CH2 CH2 CH O + C O– CO2 HS HS HS Glutamato formimino transferasa L-Glutamato α-Cetoglutarato Figura 29-5 Catabolismo de l-histidina hacia α-cetoglutarato. (H4 folato, tetrahidrofolato.) La histidasa es el sitio probable del defecto metabólico en la histidinemia. 29 Bender.indd 250 1 Proteína H O Formimino H4folato 3 NH2 N-Formiminoglutamato (Figlu) H4folato NH3 + H+ Glicina NAD+ – −OOC O Imidazolona propionato hidrolasa NADH + H+ O H 2O S O 250 2 S NH3 NH3 + 5.10-CH2 – H4folato H4folato Figura 29-6 El sistema de división de glicina de las mitocondrias hepáticas. El complejo consta de tres enzimas y una “proteína H” que tiene dihidrolipoato fijo de modo covalente. Los catalíticos para las reacciones numeradas son  glicina deshidrogenasa (descarboxilante),  una aminometiltransferasa formadora de amoniaco, y  dihidrolipoamida deshidrogenasa. (H4 folato, tetrahidrofolato.) 27/11/09 14:25:40 capítulo 29 El sistema de división de glicina consta de tres enzimas, y una “proteína H” que tiene una porción dihidrolipoilo fija de modo covalente. La figura 29-6 ilustra las reacciones individuales y los intermediarios en la división de la glicina. En la hiperglicinemia no cetótica, un raro error congénito de la degradación de la glicina que hoy sólo se conoce en Finlandia, la glicina se acumula en todos los tejidos corporales, incluso el sistema nervioso central. El defecto en la hiperoxaluria primaria es el fracaso para catabolizar el glioxilato que se forma por la desaminación de la glicina. La oxidación subsiguiente de glioxilato hacia oxalato causa urolitiasis, nefrocalcinosis y mortalidad temprana por insuficiencia renal o hipertensión. La glicinuria depende de un defecto de la resorción en los túbulos renales. 251 Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos NH3+ Cisteína CH H2C HS O− C O [O2] Cisteína dioxigenasa NH3+ Cisteína sulfinato CH H2C −O 2S O− C O α-Cetoácido Serina Luego de conversión en glicina, catalizada por la serina hidroximetiltransferasa, el catabolismo de la serina se fusiona con el de la glicina (fig. 29-7). Transaminasa α-Aminoácido O Sulfinilpiruvato alanina H2C C –O 2S La transaminación de α-alanina forma piruvato. Probablemente a causa de su participación fundamental en el metabolismo, no hay un defecto metabólico conocido del catabolismo de la α-alanina. O− C O SO32− Desulfinasa Piruvato H2C HO α-KA NH3+ NH3+ CH Cisteína Metileno H4folato H4folato C O– CH2 Transaminasa C O– O O L-Serina Glicina α-AA O 3-Mercaptopiruvato C O− (tiolpiruvato) C H2C HS Figura 29-7 Interconversión de serina y glicina por la serina hidroximetiltransferasa. (H4folato, tetrahidrofolato.) H2C CH S −O C S C CH2 NH3+ H 2C O− HS Figura 29-8 29 Bender.indd 251 C OH C O− O 3-Mercaptolactato Figura 29-9 Catabolismo de la l-cisteína mediante la vía de la cisteína sulfinato (arriba) y por la vía del 3-mercaptopiruvato (abajo). L-Cistina NAD+ CH2 H NH3+ SH H NADH + H+ Cistina reductasa 2 CH2 NAD+ H2S O O CH 2H NADH + +H Piruvato NH3+ O CH C O C S COO CH2 CH2 NH3 – O− S + H C NH3+ COO– L-Cisteína La reacción de la cistina reductasa. (Cisteína) Figura 29-10 (Homocisteína) Disulfuro mixto de cisteína y homocisteína. 27/11/09 14:25:43 252 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos Cisteína Serina + homocisteína → cistationina + H2O HH H La cistina se reduce primero hacia cisteína por la cistina reductasa (fig. 29-8). A continuación dos vías convierten a la cisteína en piruvato (fig. 29-9). Hay muchas anormalidades del metabolismo de la cisteína. La cistina, lisina, arginina y ornitina se excretan en la cistina-lisinuria (cistinuria), un defecto de la resorción renal de estos aminoácidos. Salvo por la formación de cálculos de cistina, la cistinuria es benigna. El disulfuro mixto de la l-cisteína y la l-homocisteína (fig. 29-10) excretado por pacientes cistinúricos es más soluble que la cistina y reduce la formación de cálculos de esta última. Varios defectos metabólicos ocasionan homocistinurias con o sin capacidad de respuesta a la vitamina B6, entre ellos se incluyen una deficiencia de la reacción catalizada por la cistationina β-sintasa: OH N+ H O– C O 4-Hidroxi-L-prolina 1 2H OH NH+ O– C L-∆ 1 O -Pirrolina-3-hidroxi-5-carboxilato Las consecuencias son osteoporosis y retraso mental. El transporte mediado por acarreador, defectuoso, de cistina, da por resultado cistinosis (enfermedad por depósito de cistina) con depósito de cristales de cistina en los tejidos, y muerte temprana por insuficien- H2O No enzimática NH3+ OH CH HC CH2 CH O NH3 CH CH OH O NAD+ O− C H2O 2 O NH3+ OH – O C Glicina CH CH2 CH O H 3C CH O Transaminasa α-AA OH NAD + H2O Aldehído deshidrogenasa –O NADH + H + C O− CH 29 Bender.indd 252 C CH O Glioxilato O H3C C C O– O Piruvato CoA O Acetil-CoA Figura 29-11 O Mg-ADP S O– C O O – C C Una aldolasa Mg-ATP Acetato tiocinasa H3C CH2 O O H2O O α-Ceto-γ-hidroxiglutarato Acetato CoASH O– α-KA Acetaldehído C C Eritro-γ-hidroxi-L-glutamato O H3C Deshidrogenasa NADH + H+ L-Treonina Treonina aldolasa O– C γ-Hidroxi-L-glutamato-γ-semialdehído + H3C Hidroxiprolina deshidrogenasa Conversión de treonina en glicina y acetil-CoA. Figura 29-12 Intermediarios en el catabolismo de la (α-KA, α-cetoácido; α-AA, α-aminoácido.) Los números identifican sitios de defectos metabólicos en  hiperhidroxiprolinemia y  hiperprolinemia tipo II. l-hidroxiprolina. 27/11/09 14:25:45 Fe 2+ 3 4 6 5 8 O– C9 O CH2 3 O 2 C 8 H3C –O CH 3 CH2 + O C 2 Fumarato 5 CH Acetoacetato O 9C 4 C 6 Maleilacetoacetato O 7 C4 O PLP 1 O– O C7 O – 6 5 O 7C 4 C O O C 1 O– O C 9 CH2 3 O C 9 O – S Glutatión 6 5 CoA + O 2 C OH 8 9 3 CH2 O 2 C –O 4 C 5 HC Homogentisato OH 7 4 O– Acetato 3 H3C Maleilacetoacetato Cis, trans isomerasa Acetil-CoA O H3C 8 2 2 [O] Ascorbato 1CO2 Cu2+ p-Hidroxifenilpiruvato hidroxilasa C Maleilacetoacetato (reescrito) CH2 8 O– β-Cetotiolasa CoASH O– = OH 8 6 7 9 5 C 2 CH2 4 3 p-Hidroxifenilpiruvato Glu Tirosina transaminasa α-KG O O 7 C 8 CH2 O 9 C Fumarilacetoacetato CH 6 O– 3 CH2 Figura 29-13 Intermediarios en el catabolismo de la tirosina. Los carbonos están numerados para recalcar su destino final. (α-KG, α-cetoglutarato; Glu, glutamato; PLP, fosfato de piridoxal.) Los números en un círculo representan los sitios probables de los defectos metabólicos en  la tirosinemia tipo II;  tirosinemia neonatal;  alcaptonuria, y  tirosinemia tipo I o tirosinosis. Fumarilacetoacetato hidrolasa H2O Homogentisato oxidasa [O] O C 1 L-Tirosina OH 8 6 7 9 5 4 2 CH CH2 3 O– O 29 Bender.indd 253 O NH3+ O 2 C O– capítulo 29 Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos 253 27/11/09 14:25:46 254 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos cia renal aguda. Datos epidemiológicos y de otros tipos enlazan a las concentraciones plasmáticas de homocisteína con el riesgo cardiovascular, pero persisten las controversias acerca de la participación de la homocisteína como un factor de riesgo cardiovascular causal. CH2 NH3+ L-Fenilalanina Treonina α-Cetoglutarato La treonina aldolasa divide a la treonina hacia acetaldehído y glicina. La oxidación del acetaldehído hacia acetato va seguida por formación de acetil-CoA (fig. 29-11). Ya se comentó el catabolismo de la glicina. Transaminasa L-Glutamato CH2 4-Hidroxiprolina El catabolismo de la 4-hidroxi-l-prolina forma, de manera sucesiva, l-Δ1-pirrolina-3-hidroxi-5-carboxilato, γ-hidroxi-l-glutamato-γ-semialdehído, eritro-γ-hidroxi-l-glutamato, y α-ceto-γ-hidroxiglutarato. A continuación una división tipo aldol forma glioxilato más piruvato (fig. 29-12). Un defecto de la 4-hidroxiprolina deshidrogenasa origina hiperhidroxiprolinemia, que es benigna. No hay deterioro relacionado del catabolismo de la prolina. Tirosina En la figura 29-13 se muestra en un diagrama la conversión de tirosina en intermediarios anfibólicos. Puesto que el ascorbato es el reductor para la conversión de p-hidroxifenilpiruvato en homogentisato, los enfermos con escorbuto excretan productos del catabolismo de la tirosina oxidados de modo incompleto. Reacciones subsiguientes forman maleilacetoacetato, fumarilacetoacetato, fumarato, acetoacetato y finalmente acetil-CoA. El defecto metabólico probable en la tirosinemia tipo I (tirosinosis) está en la fumarilacetoacetato hidrolasa (fig. 29-13). La terapia es una dieta con bajo contenido de tirosina y fenilalanina. La tirosinosis aguda y crónica sin tratamiento conduce a muerte por insuficiencia hepática. Los metabolitos alternativos de la tirosina también se excretan en la tirosinemia tipo II (síndrome de Richner-Hanhart), un defecto de la tirosina aminotransferasa (reacción 1, fig. 29-13), y en la tirosinemia neonatal, debida a actividad aminorada de la p-hidroxifenilpiruvato hidroxilasa (reacción 2, fig. 29-13). En la terapia se emplea una dieta con bajo contenido de proteína. La alcaptonuria fue identificada por vez primera en el siglo xvi. Caracterizada en 1859, proporcionó la base para las ideas clásicas de Garrod respecto a trastornos metabólicos hereditarios. El defecto es la falta de homogentisato oxidasa (reacción 3, fig. 29-13). La orina se oscurece cuando queda expuesta al aire, debido a oxidación del homogentisato excretado. En etapas tardías de la enfermedad hay artritis y pigmentación del tejido conjuntivo (ocronosis) debido a oxidación de homogentisato hacia acetato de benzoquinona, que se polimeriza y se une al tejido conjuntivo. Fenilalanina La fenilalanina se convierte primero en tirosina (fig. 27-10); las reacciones subsiguientes son las de la tirosina (fig. 29-13). Las hiper- 29 Bender.indd 254 C COO– O Fenilpiruvato NAD+ NADH + H+ H2O NADH + H+ NAD+ CO2 CH2 OTROS AMINOÁCIDOS QUE FORMAN ACETIL-CoA COO– CH CH2 COO– CH COO– OH Fenilacetato Fenilactato L-Glutamina H 2O CH2 C H N O Fenilacetilglutamina COO– C H CH2 CH2 CONH2 Figura 29-14 Vías alternativas del catabolismo de la fenilalanina en la fenilcetonuria. Las reacciones también suceden en el tejido hepático normal, pero tienen importancia menor. fenilalaninemias surgen por defectos de la fenilalanina hidroxilasa misma (fenilcetonuria o pKu clásica, tipo I, frecuencia de 1 por cada 10 000 nacimientos), de la dihidrobiopterina reductasa (tipos II y III), o de la biosíntesis de la dihidrobiopterina (tipos IV y V) (figura 27-10). Se excretan catabolitos alternativos (fig. 29-14). Una dieta con poca fenilalanina puede evitar el retraso mental propio de la PKU. Las sondas de DNA facilitan el diagnóstico prenatal de defectos de la fenilalanina hidroxilasa o de la dihidrobiopterina reductasa. Las cifras sanguíneas altas de fenilalanina pueden no ser detectables sino hasta 3 a 4 días después del nacimiento. Los resultados positivos falsos en prematuros pueden reflejar retraso de la maduración de las enzimas del catabolismo de la fenilalanina. En una prueba de detección más antigua y menos fiable se emplea FeCl3 para detectar fenilpiruvato urinario. El análisis de la orina de recién nacidos en cuanto a FeCl3, para detección de PKU, es obligatorio en muchos 27/11/09 14:25:47 capítulo 29 L-Lisina NH3 NADH + H+ α-KG 1 Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos H2C + NH3 CH2 CH2 NAD 255 O− CH CH2 C O O Sacaropina 2 C − NAD+ O CH2 O CH2 NADH + H+ Glu C CH NH2 H2C L-α-Aminoadipato- δ-semialdehído CH2 CH2 O− CH CH2 C O NADH + H 3 NH3 NH3 O + H 2O O− HC NAD+ CH2 CH2 CH2 O− CH C O L-α-Aminoadipato NH3 O α-KG 4 Glu − O C CH2 CH2 CH2 O− CH C O α-Cetoadipato O CoASH 5 −O CH2 CH2 C O− C O O + NAD −O C NADH + H+ CO2 CH2 CO2 Glutaril-CoA 6 C O Crotonil-CoA O CH2 CH2 CH2 O −O C C S ~ CoA O CH CH2 CH C S ~ CoA Figura 29-15 Reacciones e intermediarios en el catabolismo de la l-lisina. (α-KG, α-cetoglutarato; Glu, l-glutamato.) A la izquierda se muestran las reacciones y a la derecha las estructuras de los intermediarios. Las reacciones numeradas y los defectos metabólicos vinculados con el catabolismo de la lisina se comentan en el texto acompañante. países, pero en EUA ha sido sustituido casi del todo por la espectrometría de masa en tándem. Lisina Las primeras seis reacciones del catabolismo de la l-lisina en el hígado humano forman la crotonil-CoA, que luego se degrada hacia acetil-CoA y CO2 por medio de las reacciones del catabolismo de ácidos grasos (fig. 22-3). A continuación se hace referencia a las reacciones numeradas de la figura 29-15: las reacciones 1 y 2 convierten la base de Schiff que se forma entre α-cetoglutarato y el grupo є-amino de la lisina en l-α-aminoadipato-δ-semialdehído. Ambas reacciones son catalizadas por una enzima bifuncional única, la aminoadipato semialdehído sintasa (también denominada lisina 2-oxoglutarato reductasa-sacaropina deshidrogenasa). La reducción de l-α-aminoadipato-δ-semialdehído hacia l-α-aminoadi- 29 Bender.indd 255 pato (reacción 3) va seguida por transaminación hacia α-cetoadipato (reacción 4). La conversión en el tioéster glutaril-CoA (reacción 5) va seguida por la descarboxilación de glutaril-CoA hacia crotonilCoA (reacción 6). Las reacciones subsiguientes son las del catabolismo de ácidos grasos α-insaturados con un número impar de carbonos. Los defectos metabólicos relacionados con reacciones de la vía catabólica de la lisina comprenden hiperlisinemias. La hiperlisinemia en ocasiones es dependiente de un defecto de la actividad 1 o 2 de la enzima bifuncional aminoadipato semialdehído sintasa. La hiperlisinemia sólo se acompaña de concentraciones altas de sacaropina en la sangre si el defecto afecta la actividad 2. Un defecto metabólico en la reacción 6 suscita una enfermedad metabólica hereditaria que muestra vínculo con degeneración del cuerpo estriado, y cortical, y que se caracteriza por cifras altas de glutarato y sus metabolitos, glutaconato y 3-hidroxiglutarato. El desafío en el ma- 27/11/09 14:25:48 29 Bender.indd 256 O C NH3+ O− Figura 29-16 O CH NH2 C H2C O C NH3+ O− CO2 − CH C O C O C C C C H2C C O OO CH CH O− NADH + H+ NH3+ H PLP CH O C Quinureninasa H2O H3C NH3+ NH4+ NAD+ O− N H N-L-Formilquinurenina 2-Amino-cis, cis-muconato semialdehído O H H 3-L-Hidroxiquinurenina OH Fe2+ Triptófano oxigenasa (inducible) O2 Catabolismo del l-triptófano (PLP, fosfato de piridoxal). 2-Acroleil-3-aminofumarato CH O −O C O − O NADPH + H+ Quinurenina hidroxilasa O2 C O L-Triptófano CH NH3+ C C − O− O C H O C C O CH2 Oxalocrotonato O H OH O CH NH2 C H 2C O C NAD(P)+ 3-Hidroxiantranilato oxidasa O2 L-Quinurenina NAD(P)H + H+ 3-Hidroxiantranilato NH2 C O− O Formato Quinurenina formilasa H2O NH3− O O− −O O C CH2 C O CH2 α-Cetoadipato C H2C O− SEccIÓN III N H H2C NH3+ 256 Metabolismo de proteínas y aminoácidos 27/11/09 14:25:49 capítulo 29 C CH2 HO O– CH C O 3-Hidroxiquinurenina NH4+ OH Metionina O– La metionina reacciona con la S-adenosilmetionina formadora de ATP, la “metionina activa” (fig. 29-18). Las reacciones subsiguientes forman propionil-CoA (fig. 29-19) y, por último, succinil-CoA (véase fig. 20-2). C N HO O Xanturenato Figura 29-17 Formación de xanturenato en la deficiencia de vitamina B6. La conversión del metabolito del triptófano 3-hidroxiquinurenina en 3-hidroxiantranilato está alterada (fig. 29-16). En consecuencia, una porción grande se convierte en xanturenato. nejo de estos defectos metabólicos es restringir la ingestión de l-lisina en la dieta sin malnutrición acompañante. Triptófano Se degrada hacia intermediarios anfibólicos mediante la vía de la quinurenina-antranilato (fig. 29-16). La triptófano oxigenasa (triptófano pirrolasa) abre el anillo indol, incorpora oxígeno molecular, y forma N-formilquinurenina. La triptófano oxigenasa, una metalo- LAS REACCIONES INICIALES SON COMUNES A LOS TRES AMINOÁCIDOS DE CADENA RAMIFICADA Las reacciones 1 a 3 de la figura 29-20 son análogas a las del catabolismo de ácidos grasos (fig. 22-3). Después de transaminación, los tres α-cetoácidos pasan por descarboxilación oxidativa catalizada por α-cetoácido de cadena ramificada deshidrogenasa mitocondrial. Este complejo enzimático multimérico de una descarboxilasa, una transacilasa y una dihidrolipoil deshidrogenasa semeja de manera estrecha a la piruvato deshidrogenasa (fig. 18-5). Su regulación también corre pareja con la de esta última; la fosforilación la desactiva y la desfosforilación la reactiva (fig. 18-6). La reacción 3 es COO– +H N 3 C COO– +H N 3 H CH2 P + P P O Ribosa HO H2O Pi + PPi H OH ATP CH2 +S Adenina CH2 CH3 L-Metionina C CH2 CH2 S 257 proteína de porfirina de hierro que es inducible en el hígado por los corticosteroides suprarrenales y por el triptófano, es inhibida por retroacción por derivados del ácido nicotínico, incluso NADPH. La eliminación hidrolítica del grupo formilo de la N-formilquinurenina, catalizada por la quinurenina formilasa, produce quinurenina. Dado que la quinureninasa requiere fosfato de piridoxal, la excreción de xanturenato (fig. 29-17) en respuesta a una carga de triptófano es diagnóstica de deficiencia de vitamina B6. La enfermedad de Hartnup refleja alteración del transporte intestinal y renal de triptófano y de otros aminoácidos neutros. Los derivados indol del triptófano no absorbido formados por las bacterias intestinales se excretan. El defecto limita la disponibilidad de triptófano para la biosíntesis de niacina, y explica los signos y síntomas parecidos a pelagra. O N N H2 H3+ Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos L-Metionina adenosiltransferasa Adenina CH2 O CH3 Ribosa HO OH S-Adenosil-L-metionina (“metionina activa”) Figura 29-18 Formación de S-adenosilmetionina. ~CH3 representa el alto potencial de transferencia de grupo de la “metionina activa”. 29 Bender.indd 257 27/11/09 14:25:51 258 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos análoga a la deshidrogenación de acil-CoA tioésteres grasos (fig. 22-3). En la acidemia isovalérica, la ingestión de alimentos con alto contenido de proteínas aumenta el isovalerato, el producto de desacilación de la isovaleril-CoA. Las figuras 29-21, 29-22 y 29-23 ilustran las reacciones subsiguientes singulares para cada esqueleto de aminoácidos. NH3+ H3C CH2 S CH CH2 O– C O L-Metionina ATP TRASTORNOS METABÓLICOS DEL CATABOLISMO DE AMINOÁCIDOS DE CADENA RAMIFICADA Pi + PPi S-Adenosil-L-metionina Aceptor Aceptor de CH3 S-Adenosil-L-homocisteína H2O Adenosina NH3+ S H + OH O – C O CH2 CH CH2 O– O L-Homocisteína CH2 CH C Cistationina β-sintasa NH3+ H 2O L-Serina NH3+ S O –O C CH2 CH2 CH CH CH2 Cistationina C O– O NH3+ rESuMEN H2O SH O –O C CH NH3+ L-Cisteína ■ O CH2 H3C NH4+ Como su nombre lo indica, el olor de la orina en la enfermedad de la orina de jarabe de arce (cetonuria de cadena ramificada) sugiere jarabe de arce o azúcar quemada. El defecto bioquímico incluye el complejo de α-cetoácido descarboxilasa (reacción 2, fig. 29-20). Las concentraciones plasmáticas y urinarias de leucina, isoleucina, valina, α-cetoácidos, y α-hidroxi ácidos (α-cetoácidos reducidos) están altas. Se desconoce el mecanismo de toxicidad. En el diagnóstico temprano, en especial antes de los siete días de edad, se emplean análisis enzimáticos. El remplazo expedito de la proteína de la dieta por una mezcla de aminoácidos que carece de leucina, isoleucina y valina impide el daño cerebral y la muerte temprana. La mutación del componente dihidrolipoato reductasa altera la descarboxilación de α-cetoácidos de cadena ramificada, de piruvato y de α-cetoglutarato. En la cetonuria de cadena ramificada intermitente, la α-cetoácido descarboxilasa retiene algo de actividad, y los síntomas aparecen en etapas más avanzadas de la vida. La enzima alterada en la acidemia isovalérica es la isovaleril-coa deshidrogenasa (reacción 3, fig. 29-20). La ingestión de proteína excesiva va seguida por vómito, acidosis y coma. La isovaleril-CoA acumulada se hidroliza hacia isovalerato y se excreta. CH2 C C O– ■ O α-Cetobutirato NAD+ CoASH ■ NADH + H+ CO2 O H3C Figura 29-19 propionil-CoA. 29 Bender.indd 258 C CH2 S CoA Propionil-CoA Conversión de metionina en ■ ■ ■ Los aminoácidos excesivos se catabolizan hacia intermediarios anfibólicos que sirven como fuentes de energía y para la biosíntesis de carbohidratos y lípidos. La transaminación es la reacción inicial más frecuente del catabolismo de aminoácidos. Las reacciones subsiguientes eliminan cualquier nitrógeno adicional y reestructuran los esqueletos de hidrocarburo para la conversión hacia oxaloacetato, α-cetoglutarato, piruvato y acetil-CoA. Las enfermedades metabólicas relacionadas con el catabolismo de la glicina son la glicinuria, y la hiperoxaluria primaria. Dos vías convierten la cistina en piruvato. Los trastornos metabólicos del catabolismo de la cisteína son la cistina-lisinuria, la enfermedad por depósito de cistina, y las homocistinurias. El catabolismo de la treonina se fusiona con el de la glicina luego de que la treonina aldolasa divide la treonina hacia glicina y acetaldehído. Después de transaminación, el esqueleto de carbono de la tirosina se degrada hacia fumarato y acetoacetato. Las enfermedades 27/11/09 14:25:52 29 Bender.indd 259 C CH C O CO2 C [2H] CoA CH S CoA β-Metilcrotonil-CoA O CH3 C 3 C CH2 S Isovaleril-CoA CH CH3 2 – O CoASH O α-Cetoisocaproato O CH2 O α-Aminoácido CH3 1 O C α-Cetoácido L-Leucina CH CH2 CH CH C CH 1 C O H2C H3C C O C O S C O S CoA [2H] CH3 Metacrilil-CoA C 3 CoA CO2 CoASH – α-Aminoácido CH3 Isobutiril-CoA CH 2 O α-Cetoácido CH3 O L-Valina CH CH3 O α-Cetoisovalerato H3C H3C NH3+ CH3 CH CH CH2 1 CH O C H3C H3C C O C CH C O S CO2 H C C O S [2H] CH3 Tiglil-CoA C 3 CoA CoA CoASH O– α-Aminoácido CH3 α-Metilbutiril-CoA CH 2 O– α-Cetoácido L-Isoleucina CH2 CH3 O α-Ceto-β-metilvalerato H3C H3C NH3+ Figura 29-20 Las primeras tres reacciones análogas en el catabolismo de la leucina, valina e isoleucina. Note también la analogía de las reacciones 2 y 3 con las reacciones del catabolismo de los ácidos grasos (fig. 22-3). La analogía con el catabolismo de los ácidos grasos continúa, como se muestra en las figuras subsiguientes. H3C H3C H3C H3C NH3+ CH3 CH3 4L O Biotina Biotinil-*CO2 O 5L O H2O C C CH2 CH S CoA β-Metilglutaconil-CoA C* O C CH2 CH3 Acetoacetato C* CoA 6L C H3C S CoA Acetil-CoA O Figura 29-21 Catabolismo de la β-metilcrotonil-CoA formada a partir de la l-leucina. Los asteriscos indican átomos de carbono derivados del CO2. O − O S C* H3C OH C −O CH2 CH2 S CoA β-Hidroxi-β-metilglutaril-CoA −O O C CH C β-Metilcrotonil-CoA H3C O CH3 capítulo 29 Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos 259 27/11/09 14:25:54 260 ■ ■ ■ SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos metabólicas del catabolismo de la tirosina son la tirosinosis, el síndrome de Richner-Hanhart, la tirosinemia neonatal y la alcaptonuria. Los trastornos metabólicos del catabolismo de la fenilalanina son la fenilcetonuria (PKU) y varias hiperfenilalaninemias. Ningún nitrógeno de la lisina pasa por transaminación directa. Sin embargo, el mismo efecto se logra por medio de la formación intermedia de sacaropina. Las enfermedades metabólicas del catabolismo de la lisina son formas periódica y persistente de hiperlisinemia-amonemia. El catabolismo de la leucina, valina e isoleucina presenta muchas analogías con el catabolismo de ácidos grasos. Los trastornos metabólicos del catabolismo de los aminoácidos de cadena ramificada son la hipervalinemia, la enfermedad de la orina de jarabe de arce, la cetonuria de cadena ramificada intermitente, acidemia isovalérica y aciduria metilmalónica. O H 2C C C S CoA CH 3 Metacrilil-CoA H2O 4V HO O H 2C CH C S CoA CH 3 β-Hidroxiisobutiril-CoA O H3C CH C CoASH CoA S O HO CH3 H 2C Tiglil-CoA CH C NAD+ 6V O H3C C H H CH NADH + H + O C O S CoA O HC CH CH3 C Metilmalonato semialdehído α-AA CoASH 8V [2H] H3C C O O CH C S –O CoA α-Metilacetoacetil-CoA C CoA + CH2 –O Figura 29-22 C S CoA Propionil-CoA Catabolismo subsiguiente de la tiglil-CoA formada a partir de l-isoleucina. 29 Bender.indd 260 CoA NH 3+ H 2C O CH C O– CH 3 β-Aminoisobutirato B 12 Coenzima C CH 2 H2C CH3 Acetil-CoA S α-KA + O O S C CH 9V CoASH O H3C O CH 3 Metilmalonil-CoA CH3 6L C 7V NAD + NADH + H O O– CH 3 α-Metil-β-hidroxibutiril-CoA 5L O– CH 3 β-Hidroxiisobutirato H2O 4L H2 O 5V C S CoA C O Succinil-CoA Figura 29-23 Catabolismo subsiguiente de la metacrilil-CoA formada a partir de la l-valina (fig. 29-20). (α-KA, α-cetoácido; α-AA, α-aminoácido.) 27/11/09 14:25:56 capítulo 29 rEFErENCiaS Blacher J, Safar ME: Homocysteine, folic acid, B vitamins and cardiovascular risk. J Nutr Health Aging 2001;5:196. Bliksrud YT et al: Tyrosinemia type I, de novo mutation in liver tissue suppressing an inborn splicing defect. J Mol Med 2005;83:406. Flusser H et al: Mild glycine encephalopathy (NKH) in a large kindred due to a silent exonic GLDC splice mutation. Neurology 2005;64:1426. Garg U, Dasouki M: Expanded newborn screening of inherited metabolic disorders by tandem mass spectrometry. Clinical and laboratory aspects. Clin Biochem 2006;39:315. Gerstner B et al: Glutaric acid and its metabolites cause apoptosis in immature oligodendrocytes: a novel mechanism of white matter degeneration in glutaryl-CoA dehydrogenase deficiency. Pediatr Res 2005;57;771. Häussinger D, Schliess F: Glutamine metabolism and signaling in the liver. Front Biosci 2007;12:371. Gjetting T et al: A phenylalanine hydroxylase amino acid polymorphism with implications for molecular diagnostics. Mol Genet Metab 2001;73:280. 29 Bender.indd 261 Catabolismo de los esqueletos de carbono de aminoácidos 261 Heldt K et al: Diagnosis of maple syrup urine disease by newborn screening allows early intervention without extraneous detoxification. Mol Genet Metab 2005;84:313. Moshal K et al: Cardiac dys-synchronization and arrhythmia in hyperhomocysteinemia. Curr Neurovasc Res |2007;4:289. Muller E, Kolker S: Reduction of lysine intake while avoiding malnutrition: major goals and major problems in dietary treatment of glutaryl-CoA dehydrogenase deficiency. J Inherit Metab Dis 2004;27:903. Sacksteder KA et al: Identification of the alpha-aminoadipic semialdehyde synthase gene which is defective in familial hyperlysinemia. Am J Hum Genet 2000;66:1736. Scriver CR et al (editors): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. McGraw-Hill, 2001. 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Además de servir como los bloques de construcción para la síntesis de proteína, ciertos aminoácidos desempeñan otras funciones como precursores de materiales biológicos, como hem, purinas, pirimidinas, hormonas, neurotransmisores y péptidos que tienen actividad biológica. La histamina tiene una función fundamental en muchas reacciones alérgicas. Los neurotransmisores derivados de aminoácidos incluyen γ-aminobutirato, 5-hidroxitriptamina (serotonina), dopamina, norepinefrina y epinefrina. Muchos de los fármacos que se usan para tratar enfermedades neurológicas y psiquiátricas actúan al alterar el metabolismo de estos neurotransmisores. l-α-AMINOÁCIDOS Alanina Sirve como un acarreador de amoniaco y de los carbonos del piruvato desde el músculo estriado hacia el hígado por medio del ciclo de Cori (fig. 20-4), y junto con la glicina constituye una fracción importante de los aminoácidos libres en el plasma. Arginina La figura 30-1 resume los destinos metabólicos de la arginina. La reacción catalizada por la óxido nítrico sintasa, una oxidorreductasa de cinco electrones con múltiples cofactores, convierte un nitrógeno del grupo guanidina de la arginina en óxido nítrico (NO), una molécula emisora de señales intercelulares que sirve como un neurotransmisor, relajante del músculo liso y vasodilatador (cap. 49). l-Arginina + NADPH + H+ + O2 → NO + citrulina + NADP+ El grupo guanidino de la arginina se incorpora en la creatina, y a P í t u l o después de conversión en ornitina, su esqueleto de carbono se convierte en el de las poliaminas putrescina y espermina. Cisteína Participa en la biosíntesis de la coenzima A (fig. 44-18) al reaccionar con pantotenato para formar 4-fosfopantotenoil-cisteína (fig. 30-2). Tres reacciones catalizadas por enzima convierten la cisteína en taurina, que puede desplazar la porción coenzima A de la colil-CoA para formar el ácido biliar ácido taurocólico (fig. 26-7). La conversión de cisteína en taurina se inicia por su oxidación hacia cisteína sulfinato, catalizada por la enzima Fe2+ no hem cisteína dioxigenasa. La descarboxilación de cisteína sulfinato por la cisteína sulfinato descarboxilasa forma hipotaurina, cuya oxidación por la hipotaurina deshidrogenasa forma taurina (fig. 30-3). Glicina Los metabolitos y los productos farmacéuticos excretados como conjugados de glicina hidrosolubles comprenden el ácido glicocólico (cap. 26) y el ácido hipúrico formado a partir del aditivo de alimentos benzoato (fig. 30-4). Muchos medicamentos, metabolitos de fármacos, y otros compuestos con grupos carboxilo se excretan en la orina como conjugados de glicina. Esta última se incorpora en la creatina, y el nitrógeno y el carbono α de la glicina se incorporan en los anillos pirrol y los carbonos de puente de metileno del hem (cap. 31), y toda la molécula de glicina se convierte en los átomos 4, 5 y 7 de purinas (fig. 33-1). Histidina La descarboxilación de la histidina por la enzima histidina descarboxilasa, dependiente de piridoxal 5ʹ-fosfato, forma histamina (fig. 30-5). La histamina, una amina biogénica que funciona en las reacciones alérgicas y la secreción gástrica, está presente en todos los tejidos. Su concentración en el hipotálamo varía de acuerdo con un ritmo circadiano. Los compuestos histidina presentes en el organismo humano son ergotioneína, carnosina y la anserina de la dieta (fig. 30-6). Aun cuando se desconocen sus funciones fisiológicas, la carnosina (β-alanil-histidina) y la homocarnosina (γ-aminobutirilhistidina) son constituyentes importantes de tejidos excitables, del cerebro y del músculo estriado. Las cifras urinarias de 3-metilhistidina son extraordinariamente bajas en pacientes con enfermedad de Wilson. 262 30 Bender.indd 262 27/11/09 14:27:15 capítulo 30 Conversión de aminoácidos en productos especializados 263 Proteínas Óxido nítrico Urea Proteínas Creatina fosfato, creatinina Arginina Prolina Ornitina Glutamato-γsemialdehído Fosfato de arginina Putrescina, espermidina, espermina Glutamato FiGurA 30-1 Metabolismo de la arginina, ornitina y prolina. Todas las reacciones con flechas continuas suceden en tejidos de mamífero. La putrescina y espermina se sintetizan tanto en mamíferos como en bacterias. El fosfato de arginina del músculo de invertebrados funciona como un fosfágeno análogo a la creatina fosfato del músculo de mamíferos. Metionina NH3+ COO− Cisteína O2 Cisteína dioxigenasa NAD(P)H O El principal destino no proteínico de la metionina es la conversión en S-adenosilmetionina, la fuente primordial de grupos metilo en el cuerpo. La S-adenosilmetionina es sintetizada a partir de metionina y ATP, una reacción catalizada por la metionina adenosiltransferasa (MAT) (fig. 30-7). Los tejidos humanos contienen tres isozimas de MAT (MAT-1 y MAT-3 del hígado, y MAT-2 de tejidos no hepáticos). Aun cuando la hipermetioninemia puede producirse por una disminución grave de la actividad de la MAT-1 y MAT-3 hepáticas, si hay actividad residual de MAT-1/MAT-3, y la actividad de la MAT-2 es normal, una concentración hística alta de metionina asegurará síntesis de cantidades adecuadas de S-adenosilmetionina. HS − Fe++ H NH3+ S O COO− Cisteína sulfinato Cisteína sulfinato descarboxilasa CO2 H H_N O− R C O + SH − COO H O 4–Fosfopantotenato S − O Cisteína NH3+ Hipotaurina NAD+ CTP Hipotaurina deshidrogenasa CMP + PPi H N R C −O SH H COO− O 4–Fosfopantotenoil-cisteína FiGurA 30-2 La reacción catalizada por la fosfopantotenatocisteína ligasa. R-COO– representa 4-fosfopantotenato. 30 Bender.indd 263 NADH + H+ O S O NH3+ Taurina FiGurA 30-3 Conversión de cisteína en taurina. Las reacciones son catalizadas por la cisteína dioxigenasa, la cisteína sulfinato descarboxilasa, y la hipotaurina descarboxilasa, respectivamente. 27/11/09 14:27:17 264 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos O C SH + O (CH3)3 N NH2+ N – CH CH2 Benzoato ATP O Ergotioneína CoASH O AMP + PPi O C O– C S CoA NH3+ CH2 NH NH2+ N CH2 C CH CH2 O– C O Benzoil-CoA Carnosina Glicina O CoASH C + N O N H CH2 C N O– CH3 H CH2 COO− O– C O O NH2+ N N CH Anserina FiGurA 30-4 Biosíntesis del hipurato. Ocurren reacciones análogas con muchos medicamentos y catabolitos acídicos. HN NH3+ CH2 NH O Hipurato CH2 – CH – NH3+ CH2 C CO2 CH2 CH2 – CH2 – NH2 HN C CH2 CH2 CH2 NH3+ NH CH O– C O N Homocarnosina Histidina FiGurA 30-5 Histamina La reacción catalizada por la histidina descarboxilasa. FiGurA 30-6 Derivados de la histidina. Los recuadros en color rodean a los componentes no derivados de la histidina. El grupo SH de la ergotioneína se deriva de la cisteína. Luego de descarboxilación de S-adenosilmetionina por la metionina descarboxilasa, tres carbonos y el grupo α-amino de la metionina contribuyen a la biosíntesis de las poliaminas espermina y espermidina (fig. 30-8). Estas poliaminas funcionan en la proliferación y el crecimiento celulares, son factores de crecimiento para células de mamífero en cultivo, y estabilizan células intactas, organelos subcelulares y membranas. Las dosis farmacológicas de poliaminas originan hipotermia e hipotensión. Dado que portan múltiples cargas positivas, las poliaminas se asocian fácilmente con DNA y RNA. En la figura 30-8 se resume la biosíntesis de poliaminas a partir de metionina y ornitina, y en la figura 30-9, el catabolismo de las poliaminas. Mg-PPi + Pi CH3 + S H3N + Adenina O COO– OH OH S-Adenosilmetionina FiGurA 30-7 Biosíntesis de la S-adenosilmetionina, catalizada por la metionina adenosiltransferasa (MAT). Serina Participa en la biosíntesis de la esfingosina (cap. 24), y de purinas y pirimidinas, donde proporciona los carbonos 2 y 8 de las purinas, y el grupo metilo de la timina (cap. 33). La cistationina β-sintasa cataliza la conversión de serina en homocisteína: Serina + homocisteína → cistationina + H2O 30 Bender.indd 264 Metionina + Mg-ATP + H2O Triptófano Después de la hidroxilación del triptófano hacia 5-hidroxitriptófano por la tirosina hidroxilasa hepática, la descarboxilación subsiguien- 27/11/09 14:27:19 capítulo 30 Conversión de aminoácidos en productos especializados 265 Metionina + Mg-ATP + H2O Mg-PPi + Pi H3N CH3 + S H3N + COO– + L-Ornitina Adenina O Ornitina descarboxilasa COO– OH NH3+ CO2 OH S-Adenosilmetionina + H3N CO2 S-Adenosilmetionina descarboxilasa Putrescina CH3 + H3N S + Adenina O OH OH S-Adenosilmetionina descarboxilada CH3 S + NH3+ Espermidina sintasa Adenina O OH OH Metiltioadenosina + H3N S-Adenosilmetionina descarboxilada NH3+ Espermidina Espermina sintasa Metiltioadenosina + H3N NH3+ Espermina FiGurA 30-8 Intermediarios y enzimas que participan en la biosíntesis de la espermidina y la espermina. te forma serotonina (5-hidroxitriptamina), un potente vasoconstrictor y estimulador de la contracción del músculo liso. El catabolismo de la serotonina inicia por la desaminación oxidativa hacia 5-hidroxiindol-3-acetato catalizada por la monoaminooxidasa (MAO) (fig. 30-10). La estimulación psíquica que se observa tras la administración de iproniazida se produce por su capacidad para prolongar la acción de la serotonina al inhibir a la MAO. En el carcinoide (argentafinoma), las células tumorales producen cantidades excesivas de serotonina. Los metabolitos urinarios de esta última en 30 Bender.indd 265 sujetos con carcinoide incluyen N-acetilserotonina glucurónido y el conjugado glicina del 5-hidroxiindolacetato. La serotonina y la 5-metoxitriptamina se metabolizan hacia los ácidos correspondientes por medio de la MAO. La N-acetilación de la serotonina, seguida por su O-metilación en el cuerpo pineal, forma melatonina. La melatonina circulante es captada por todos los tejidos, incluso el cerebro, pero se metaboliza con rapidez por medio de hidroxilación seguida por conjugación con sulfato o con ácido glucurónico. Los tejidos renal y hepático, así como las bacterias fecales, convierten el 27/11/09 14:27:20 266 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos H2+ N +H N 3 N H2+ NH3+ Espermina Sarcosina (N-metilglicina) O2 La biosíntesis y el catabolismo de la sarcosina (N-metilglicina) ocurren en las mitocondrias. La formación de sarcosina a partir de dimetilglicina es catalizada por la flavoproteína dimetilglicina deshidrogenasa, que requiere pteroilpentaglutamato (TPG) reducido Poliamina oxidasa O H2O2 NH3+ β-Aminopropionaldehído H2+ N +H N 3 NH3+ Espermidina Dimetilglicina + FADH2 + H4TPG + H2O → sarcosina + N-formil-TPG Cantidades traza de sarcosina también pueden surgir por metilación de glicina, una reacción catalizada por la S-adenosilmetionina:glicina metiltransferasa. Glicina + S-adenosilmetionina → sarcosina + S-adenosilhomocisteína O2 Poliamina oxidasa β-Aminopropionaldehído H2O2 y de proteínas que participan en cascadas de transducción de señal (cap. 42). El catabolismo de la sarcosina hacia glicina, catalizado por la flavoproteína sarcosina deshidrogenasa, también necesita TPG reducido: Sarcosina + FAD + H4TPG + H2O → glicina + FADH2 + N-formil-TPG +H N 3 NH3+ Putrescina NH4+ + CO2 FiGurA 30-9 Catabolismo de poliaminas. Las estructuras están abreviadas para facilitar la presentación. triptófano en triptamina y luego en indol 3-acetato. Los principales catabolitos urinarios normales del triptófano son el 5-hidroxiindolacetato y el indol 3-acetato. Tirosina Las células neurales convierten la tirosina en epinefrina y norepinefrina (fig. 30-11). Aunque la dopa también es un intermediario en la formación de melanina, diferentes enzimas hidroxilan a la tirosina en melanocitos. La dopa descarboxilasa, una enzima dependiente de fosfato de piridoxal, forma dopamina. La hidroxilación subsiguiente por la dopamina β-oxidasa a continuación forma norepinefrina. En la médula suprarrenal, la feniletanolamina-N-metiltransferasa utiliza S-adenosilmetionina para metilar la amina primaria de la norepinefrina, lo que forma epinefrina (fig. 30-11). La tirosina también es un precursor de la triyodotironina y la tiroxina (véase cap. 41). Fosfoserina, fosfotreonina y fosfotirosina La fosforilación y desfosforilación de residuos serilo, treonilo o tirosilo específicos de proteínas regulan la actividad de ciertas enzimas del metabolismo de los lípidos y los carbohidratos (caps. 9 y 19 a 26) 30 Bender.indd 266 Las reacciones de desmetilación que forman y degradan sarcosina representan importantes fuentes de unidades de un carbono. El FADH2 se reoxida mediante la cadena de transporte de electrones (cap. 13). Creatina y creatinina La creatinina se forma en el músculo a partir del fosfato de creatina por medio de deshidratación no enzimática irreversible, y pérdida de fosfato (fig. 30-12); puesto que la excreción de creatinina en orina de 24 h es proporcional a la masa muscular, proporciona una medida de si se ha reunido un espécimen completo de orina de 24 h. La glicina, arginina y metionina participan en la biosíntesis de creatina. La síntesis de creatina se completa mediante metilación del guanidoacetato por la S-adenosilmetionina (fig. 30-12). AMINOÁCIDOS NO α Los que están presentes en los tejidos en una forma libre son β-alanina, β-aminoisobutirato y γ-aminobutirato (GABA). La β-alanina también está presente en forma combinada en la coenzima A (fig. 44-18) y en los β-alanil dipéptidos carnosina, anserina y homocarnosina (véase más adelante). β-alanina y β-aminoisobutirato Se forman durante el catabolismo de las pirimidinas uracilo y timidina, respectivamente (fig. 33-9). Asimismo, la hidrólisis de β-alanil dipéptidos por la enzima carnosinasa produce cantidades traza de β-alanina. El β-aminoisobutirato también surge por transaminación de metilmalonato semialdehído, un catabolito de la l-valina (fig. 29-23). La reacción inicial del catabolismo de la β-alanina es la transaminación hacia malonato semialdehído. La transferencia subsiguiente de coenzima A desde la succinil-CoA forma malonil-CoA 27/11/09 14:27:21 CHAPTER 30 Conversion of Amino Acids to Specialized Products capítulo 30 HO CH2 Conversión de aminoácidos en productos especializados 267 267 NH3+ CH COO– N H 5-Hidroxitriptófano CO2 HO CH2 CH2 NH3+ N H O2 CH3 5-Hidroxitriptamina (serotonina) MAO Acetil-CoA [NH4+] HO CH2 O– H3C C CH2 O CH2 NH3+ O N H N H CoASH 5-HidroxiindolExcretado 3-acetato como conjugados HO 5-Metoxitriptamina CH2 CH2 H N CH3 C O2 O CH3 MAO N H [NH4+] N-Acetilserotonina H3C CH2 O O– H3C C O N H 5-Metoxiindol3-acetato H2 C O– C O CH3 N H CH2 O 5-Metoxiindol3-acetato CH2 O CH2 H N C CH3 O N H Excretado como conjugados Melatonina (N-acetil-5-metoxiserotonina) Excretado como conjugados + + FIGURE 30–10 Biosynthesis and metabolism of serotonin and melatonin. ], by transamination; MAO, FiGurA 30-10 Biosíntesis y metabolismo de la serotonina y la melatonina. ([NH([NH transaminación; 4 4 ], mediante oxidase; ~CH S-adenosylmethionine.) MAO,monoamine monoaminooxidasa; ~CH33,,from proveniente de S-adenosilmetionina.) ylated to the amphibolic intermediate acetyl-CoA. Analogous these are disorders that result from a total or partial deficiency semialdehído, quecharacterize después se oxida hacia malonil-CoA y se descartornos se producen pordehydrogenase una deficiencia (see totalFigure o parcial de dihireactions the catabolism of β-aminoisobutyrate. of que dihydropyrimidine 33–9). boxila Transamination hacia el intermediario anfibólico acetil-CoA. Reacciones dropirimidina deshidrogenasa (fig. 33-9). forms methylmalonate semialdehyde, which análogas caracterizan β-aminoisobutirato. La by is converted to el thecatabolismo amphibolic del intermediate succinyl-CoA β-Alanyl Dipeptides transaminación forma metilmalonato semialdehído, que es converreactions 8V and 9V of Figure 29–23. Disorders of β-alanine β-alanil dipéptidos tido enand el intermediario anfibólico succinil-CoA por las reacciones The β-alanyl dipeptides carnosine and anserine (N-methylcarβ-aminoisobutyrate metabolism arise from defects in enLos β-alanil dipéptidos carnosina y anserina (fig. 8V y 9V de la figura 29-23. Los trastornos del metabolismo de la nosine) (Figure 30–6) activate myosin(N-metilcarnosina) ATPase, chelate copper, zymes of the pyrimidine catabolic pathway. Principal among 30-6) activan a la miosina ATPasa, producen quelación del cobre y β-alanina y del β-aminoisobutirato surgen por defectos de las enziaumentan la captación de este último. El β-alanil-imidazol amortigua mas de la vía catabólica de pirimidina; entre ellos destacan los tras- Murray_CH30_PTR.indd 267 30 Bender.indd 267 3/26/2009 8:58:11 PM 27/11/09 14:27:23 268 SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos NH3+ HO CH2 CH +H C Arginina-glicina amidinotransferasa Orn NH2 + OH NH3+ CH C O– O Dopa NH3+ Dopamina NH2 C N CH2 CHOO− ATP Creatina cinasa ADP O2 NH~ P Cu2+ HN C Vitamina C OH N CH2 CHOO− CH3 HO Creatina fosfato CH CH2 NH3+ H2O OH Norepinefrina Pi S-Adenosilmetionina Feniletanolamina N-metiltransferasa S-Adenosilhomocisteína OH HO CH CH2 OH N H2+ CH3 Epinefrina FiGurA 30-11 Conversión de tirosina en epinefrina y norepinefrina en células neuronales y suprarrenales (PLP, fosfato de piridoxal). el pH de músculo estriado en contracción, de modo anaeróbico. La biosíntesis de carnosina es catalizada por la carnosina sintetasa en una reacción de dos etapas que comprende la formación inicial de un acil-adenilato de β-alanina unido a enzima, y la transferencia subsiguiente de la porción β-alanilo hacia l-histidina. ATP + β-alanina → β-alanil-AMP + PPi β-alanil-AMP + l-histidina → carnosina + AMP 30 Bender.indd 268 Guanidoacetato metiltransferasa CH3 Creatina OH Dopamina β oxidasa S-Adenosilmetionina + HO CH2 C HN CH2 COO− Guanidinoacetato H2N CO2 CH2 H2N S-Adenosilhomocisteína PLP DOPA descarboxilasa CHOO− Lis H2 • biopterina CH2 CH2 Glicina H4 • biopterina HO + O L-Tirosina Tirosina hidroxilasa 3N O– No enzimática en músculo O H N C HN C N CH2 CH3 Creatinina FiGurA 30-12 Biosíntesis de la creatina y creatinina. La conversión de glicina y el grupo guanidina de la arginina en creatina y creatina fosfato. También se muestra la hidrólisis no enzimática de creatina fosfato hacia creatina. La carnosinasa cataliza la hidrólisis de la carnosina hacia β-alanina y l-histidina. El trastorno hereditario deficiencia de carnosinasa se caracteriza por carnosinuria. La carnosina sintetasa sintetiza en el tejido cerebral la homocarnosina (fig. 30-6) presente en el cerebro de seres humanos a cifras más altas que la carnosina. La carnosinasa sérica no hidroliza a la homocarnosina. La homocarnosinosis, un raro trastorno genético, se relaciona con paraplejía espástica y retraso mental progresivos. γ-Aminobutirato (GABA) Funciona en el tejido cerebral como un neurotransmisor inhibidor al alterar diferencias de potencial transmembrana. El GABA se forma 27/11/09 14:27:25 capítulo 30 Conversión de aminoácidos en productos especializados 269 COO– H NH3+ C descarboxilasa Transaminasa CH2 COO– CO2 H3N CH2 CH2 CH2 – COO– CH2 C O CH2 – COO CH2 γ-Hidroxibutirato [O] [NH4+] CH2OH CH2 COO γ-Aminobutirato PLP α-AA PLP L-Glutamato PLP + α-KA CH2 L-Glutamato COO– α-Cetoglutarato + NAD Lactato deshidrogenasa NADH + H+ CO2 Succínico semialdehído deshidrogenasa O C H COO– CH2 CH2 CH2 COO– H2O NAD + NADH + H por descarboxilación de glutamato por la l-glutamato descarboxilasa (fig. 30-13). La transaminación del γ-aminobutirato forma succinato semialdehído (fig. 30-13), que se puede reducir hacia γ-hidroxibutirato por medio de la l-lactato deshidrogenasa, u oxidar hacia succinato y desde allí, mediante el ciclo del ácido cítrico, hacia CO2 y H2O. Un raro trastorno genético del metabolismo del GABA incluye una GABA aminotransferasa defectuosa, una enzima que participa en el catabolismo del GABA luego de su liberación postsináptica en el tejido cerebral. Los defectos de la succínico semialdehído deshidrogenasa (fig. 30-13) producen otro raro trastorno metabólico del catabolismo del γ-aminobutirato caracterizado por aciduria 4-hidroxibutírica. ■ rESuMEN ■ ■ ■ ■ 30 Bender.indd 269 Además de desempeñar funciones estructurales y funcionales en las proteínas, los α-aminoácidos participan en una amplia variedad de otros procesos biosintéticos. La arginina proporciona el grupo formamidina de la creatina y el nitrógeno del NO. Por medio de la ornitina, la arginina proporciona al esqueleto de poliaminas putrescina, espermina y espermidina. La cisteína proporciona la porción tioetanolamina de la coenzima A, y después de su conversión en taurina, parte del ácido biliar ácido taurocólico. La glicina participa en la biosíntesis de hem, purinas, creatina y N-metilglicina (sarcosina). Muchos medicamentos y metabolitos de fármacos se excretan como conjugados de glicina, lo que incrementa la hidrosolubilidad para excreción urinaria. CH2 COO– Succinato Succinato semialdehído ■ + ■ ■ ■ ■ ■ ■ FiGurA 30-13 Metabolismo del γ-aminobutirato (α-KA, α-cetoácidos; α-AA, α-aminoácidos; PLP, fosfato de piridoxal). La descarboxilación de la histidina forma el neurotransmisor histamina. Los compuestos histidina presentes en el organismo humano comprenden ergotioneína, carnosina y anserina de la dieta. La S-adenosilmetionina, la principal fuente de grupos metilo en el metabolismo, contribuye con su esqueleto de carbono a la biosíntesis de las poliaminas espermina y espermidina. Además de sus funciones en la biosíntesis de fosfolípido y esfingosina, la serina proporciona los carbonos 2 y 8 de las purinas, y el grupo metilo de la timina. Los metabolitos clave del triptófano incluyen serotonina y melatonina. Los tejidos renal y hepático, y las bacterias fecales, convierten el triptófano en triptamina y, de allí, en indol 3-acetato. Los principales catabolitos del triptófano en la orina son el indol 3-acetato y el 5-hidroxiindolacetato. La tirosina forma norepinefrina y epinefrina, y luego de yodación las hormonas tiroideas triyodotironina y tiroxina. La interconversión catalizada por enzima, de las formas fosfo y desfosfo de serina, treonina y tirosina unidas a péptido desempeña funciones clave en la regulación metabólica, incluso transducción de señal. La glicina, arginina y S-adenosilmetionina participan en la biosíntesis de creatina, que como fosfato de creatina sirve como una importante reserva de energía en los tejidos muscular y cerebral. La excreción en la orina de su catabolito creatina es proporcional a la masa muscular. La β-alanina y el β-aminoisobutirato están presentes en los tejidos como aminoácidos libres. La β-alanina también se encuentra en forma unida en la coenzima A, carnosina, anserina y homocarnosina. El catabolismo de β-alanina comprende conversión por pasos en acetil-CoA. Reacciones análogas catabolizan el β-aminoisobutirato hacia succinil-CoA. Los trastornos del metabolismo de la β-alanina y 27/11/09 14:27:26 270 ■ SEccIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos del β-aminoisobutirato surgen por defectos de las enzimas del catabolismo de pirimidina. La descarboxilación de glutamato forma el neurotransmisor inhibidor GABA; dos raros trastornos metabólicos muestran vínculo con defectos del catabolismo del GABA. rEFErENCiAS Conti M, Beavo J: Biochemistry and physiology of cyclic nucleotide phosphodiesterases: essential components in cyclic nucleotide signaling. Annu Rev Biochem 2007;76:481. Dominy JE Jr et al: Synthesis of cysteine dioxygenase’s amino acid cofactor is regulated by substrate and represents a novel post-translational regulation of activity. J Biol Chem 2008;283:12188. 30 Bender.indd 270 Joseph CA, Maroney MJ: Cysteine dioxygenase: structure and mechanism. Chem Commun (Camb) 2007;28:3338. Lindemose S, Nielsen PE, Mollegaard NE: Polyamines preferentially interact with bent adenine tracts in double -stranded DNA. Nucleic Acids Res 2005;33:1790. Moinard C, Cynober L, de Bandt JP: Polyamines: metabolism and implications in human diseases. Clin Nutr 2005;24:184. Pearl PL et al: The pediatric neurotransmitter disorders. J Child Neurol 2007;22:606. Scriver CR et al (editors): The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. McGraw-Hill, 2001. Wu F et al: Inhibitory and structural studies of novel coenzymesubstrate analogs of human histidine decarboxylase. FASEB J 2008;22:890. 27/11/09 14:27:27 31 c Porfirinas y pigmentos biliares Robert K. Murray, MD, PhD En este capítulo se presentan las propiedades bioquímicas de las porfirinas y de los pigmentos biliares. Estos temas se encuentran estrechamente relacionados, porque el hem se sintetiza a partir de porfirinas y hierro, y los productos de degradación del hem son los pigmentos biliares y el hierro. El conocimiento de las propiedades bioquímicas de las porfirinas y del hem es básico para entender las diversas funciones de las hemoproteínas (véase más adelante) en el organismo. Las porfirias son un grupo de enfermedades causadas por anormalidades de la vía de biosíntesis de las diversas porfirinas. Aun cuando las porfirias no son muy prevalecientes, es necesario que los médicos estén informados acerca de ellas. Un estado clínico mucho más prevaleciente es la ictericia, que se debe a aumento de la bilirrubina en el plasma; este incremento se debe a producción excesiva de bilirrubina o a falla de su excreción y se observa en muchas enfermedades que varían desde anemias hemolíticas, pasando por hepatitis viral, hasta cáncer de páncreas. HC t u l o N H CH N Pirrol 1 δ HC 8 HC 2 H C C H C I C HC γ C N C IV NH 7 HC C C H 6 α CH II HN III 3 CH C C C C H CH 4 CH β 5 Porfirina (C20H14N4) Figura 31-1 La molécula de porfirina. Los anillos están marcados como I, II, III y IV. Las posiciones sustituyentes en los anillos están marcadas como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8. Los puentes de metino (— —HC—) están marcados como α, β, γ y δ. El sistema de numeración usado es el de Hans Fischer. Cuadro 31-1 Ejemplos de algunas hemoproteínas importantes de seres humanos y animales1 Proteína Las porfirinas naturales tienen cadenas laterales sustituyentes en el núcleo de porfina Las porfirinas que se encuentran en la Naturaleza son compuestos en los cuales los ocho átomos de hidrógeno numerados en el núcleo de porfirina se sustituyen por diversas cadenas laterales (fig. 31-1). Como un medio simple de mostrar estas sustituciones, Fischer propuso una fórmula abreviada en la cual los puentes de metileno se í CH HC LAS METALOPORFIRINAS Y HEMOPROTEÍNAS SON IMPORTANTES EN LA NATURALEZA Las porfirinas son compuestos cíclicos que se forman por el enlace de cuatro anillos pirrol mediante puentes de metino (— —HC—) (fig. 31-1). Una propiedad típica de las porfirinas es la formación de complejos con iones metálicos unidos al átomo de nitrógeno de los anillos de pirrol. Los ejemplos son porfirinas de hierro como el hem de la hemoglobina, y la porfirina que contiene magnesio, clorofila, el pigmento fotosintético de los vegetales. Las proteínas que contienen hem (hemoproteínas) están ampliamente distribuidas en la Naturaleza. El cuadro 31-1 lista ejemplos de su importancia en seres humanos y en animales. P omiten y cada anillo pirrol se muestra como en la figura 31-2, con las ocho posiciones sustituyentes numeradas como se indica. En las figuras 31-2, 31-3 y 31-4 se representan diversas porfirinas. N IMPORTANCIA BIOMÉDICA a 1 Función Hemoglobina Transporte de oxígeno en la sangre Mioglobina Almacenamiento de oxígeno en el músculo Citocromo c Participación en la cadena de transporte de electrones Citocromo P450 Hidroxilación de xenobióticos Catalasa Degradación de peróxido de hidrógeno Triptófano pirrolasa Oxidación de triptófano Las funciones de las proteínas anteriores se describen en varios capítulos de este libro. 271 31 Bender.indd 271 27/11/09 14:30:47 272 SECCIÓN III 1 Metabolismo de proteínas y aminoácidos 2 A I 8 3 IV 6 II P 4 III A IV II 7 I A P III 5 buidos de modo asimétrico, como en la coproporfirina tipo III). Sin embargo, a veces se identifican como pertenecientes a la serie IX, porque se designaron novenos en una serie de isómeros postulados por Hans Fischer, el investigador pionero en el campo de la química de la porfirina. P P A EL HEM SE SINTETIZA A PARTIR DE SUCCINIL-CoA Y GLICINA Figura 31-2 Uroporfirina III. (A [acetato] = —CH2COOH; P [propionato] = —CH2CH2COOH.) Note la asimetría de los sustituyentes en el anillo IV (véase el texto). El hem se sintetiza en células vivas por medio de una vía que se ha estudiado mucho. Los dos materiales iniciales son la succinil-CoA, derivada del ciclo del ácido cítrico en las mitocondrias, y el aminoácido glicina. Durante esta reacción también se requiere fosfato de piridoxal para “activar” a la glicina. El producto de la reacción de condensación entre la succinil-CoA y la glicina es el ácido α-aminoβ-cetoadípico, que se descarboxila con rapidez para formar α-aminolevulinato (ALA) (fig. 31-5). Esta secuencia de reacción es catalizada por la ALA sintasa, la enzima controladora en la biosíntesis de porfirina en el hígado de mamíferos. El ALA se sintetiza en las mitocondrias. En el citosol, la enzima ALA deshidratasa condensa dos moléculas de ALA para formar dos moléculas de agua y una de porfobilinógeno (PBG) (fig. 31-5). La ALA deshidratasa es una enzima que contiene zinc, y es sensible a la inhibición por plomo, como ocurre en la intoxicación por este último. La disposición de los sustituyentes acetato (A) y propionato (P) en la uroporfirina que se muestran en la figura 31-2 es asimétrica (en el anillo IV, el orden esperado de los sustituyentes A y P está invertido). Una porfirina con este tipo de sustitución asimétrica se clasifica como porfirina tipo III. Una porfirina con una disposición de los sustituyentes por completo simétrica se clasifica como porfirina tipo I. Sólo los tipos I y III se encuentran en la Naturaleza, y la serie tipo III es mucho más abundante (fig. 31-3) y de mayor importancia porque incluye el hem. El hem y su precursor inmediato, la protoporfirina IX (fig. 31-4), son porfirinas tipo III (es decir, los grupos metilo están distri- A P A P P A A A A P P P P A P Uroporfirina II M A Uroporfirina III P M P P M M M M P P P P M P Coproporfirina I M Las uroporfirinas fueron encontradas por vez primera en la orina, pero no se restringen a ésta. Las coproporfirinas fueron aisladas por vez primera a partir de las heces, pero también se encuentran en la orina. M Coproporfirina III V M M M Fe2+ P V P M Protoporfirina III (IX) (porfirina madre del hem) 31 Bender.indd 272 V M M Fe Ferroquelatasa Figura 31-3 Uroporfirinas y coproporfirinas. (A, acetato; P, propionato; M, metilo.) 2+ P V P M Hem (grupo prostético de la hemoglobina) Figura 31-4 Adición de hierro a la protoporfirina para formar hem. (V [vinilo] = —CH2.) —CH — 27/11/09 14:30:49 CApítuLo 31 COOH COOH CH2 Succinil-CoA (succinato “activo”) Glicina CH2 H C O S + H CoA C NH2 H Fosfato de piridoxal C O C NH2 H COOH CH2 CH2 CH2 CH2 C CH2 NH2 O O H C 2H2O NH Dos moléculas de δ-Aminolevulinato H C NH2 δ-Aminolevulinato (ALA) ALA deshidratasa COOH CH2 CH2 CH2 C C C CH2 NH2 CH N H Porfobilinógeno (primer precursor pirrol) Un tetrapirrol cíclico —esto es, una porfirina— se forma por condensación de cuatro moléculas de PBG (fig. 31-6). Estas cuatro moléculas se condensan de una manera de cabeza a cola para formar un tetrapirrol lineal, el hidroximetilbilano (HMB). La uroporfirinógeno I sintasa, también denominada PBG desaminasa o HMB sintasa, cataliza la reacción. El HMB se cicliza de modo espontáneo para formar uroporfirinógeno I (lado izquierdo de la fig. 31-6), o la acción de la uroporfirinógeno III sintasa lo convierte en uroporfirinógeno III (lado derecho de la fig. 31-6). En circunstancias normales, el uroporfirinógeno formado es de manera casi exclusiva el isómero III, pero en ciertas porfirias (véase más adelante), existe formación excesiva de los isómeros tipo I de porfirinógenos. Note que estos dos uroporfirinógenos tienen los anillos pirrol conectados por puentes de metileno (—CH2—), que no forman un sistema de anillos conjugado. Así, estos compuestos son incoloros (como lo son todos los porfirinógenos). Empero, los porfirinógenos se autooxidan con facilidad hacia sus porfirinas coloreadas respectivas. Estas oxidaciones son catalizadas por la luz y por las porfirinas que se forman. El uroporfirinógeno III se convierte en coproporfirinógeno III por descarboxilación de todos los grupos acetato (A), que los cambia a sustituyentes metilo (M). La reacción es catalizada por la uroporfirinógeno descarboxilasa, que también tiene la capacidad de convertir el uroporfirinógeno I en coproporfirinógeno I (fig. 31-7). El coproporfirinógeno III a continuación entra en las mitocondrias, donde es convertido en protoporfirinógeno III y después en protoporfirina III. Esta conversión comprende varios pasos. La enzima mitocondrial coproporfirinógeno oxidasa cataliza la descarboxilación y oxidación de dos cadenas laterales propiónicas para formar protoporfirinógeno. Esta enzima sólo tiene capacidad para actuar 31 Bender.indd 273 O COOH C H C H COOH COOH CH2 CO2 α-Amino-β-cetoadipato COOH CH2 ALA sintasa CH2 CoA • SH 273 COOH CH2 ALA sintasa Porfirinas y pigmentos biliares Figura 31-5 Biosíntesis del porfobilinógeno. La ALA sintasa está presente en las mitocondrias, mientras que la ALA deshidratasa lo está en el citosol. sobre el coproporfirinógeno III, lo cual explicaría por qué las protoporfirinas tipo I por lo general no se encuentran en la naturaleza. La oxidación del protoporfirinógeno hacia protoporfirina es catalizada por otra enzima mitocondrial, la protoporfirinógeno oxidasa. En el hígado de mamíferos, la conversión de coproporfirinógeno en protoporfirina necesita oxígeno molecular. La formación de hem incluye la incorporación de hierro hacia protoporfirina El paso final en la síntesis del hem comprende la incorporación de hierro ferroso hacia protoporfirina en una reacción catalizada por la ferroquelatasa (hem sintasa), otra enzima mitocondrial (fig. 31-4). En la figura 31-8 se resumen los pasos en la biosíntesis de los derivados de porfirina a partir de PBG. Las últimas tres enzimas en la vía y la ALA sintasa están localizadas en la mitocondria, mientras que las otras enzimas son citosólicas. Se encuentran formas de ALA sintasa tanto eritroides como no eritroides (de “administración de la casa”). El hem se biosintetiza en casi todas las células de mamífero, con la excepción de los eritrocitos maduros, que carecen de mitocondrias. Con todo, alrededor de 85% del hem se sintetiza en células precursoras eritroides en la médula ósea y la mayor parte del resto en hepatocitos. Los porfirinógenos antes descritos son incoloros; contienen seis átomos de hidrógeno adicionales en comparación con las porfirinas coloreadas correspondientes. Estas porfirinas reducidas (los porfirinógenos) y no las porfirinas correspondientes son los intermediarios reales en la biosíntesis de la protoporfirina y del hem. 27/11/09 14:30:50 274 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos HOOC A La aLa sintasa es la enzima reguladora clave en la biosíntesis hepática del hem COOH P CH 2 H 2C CH 2 C C C H 2C CH N H NH 2 Cuatro moléculas de porfobilinógeno Uroporfirinógeno I sintasa 4 NH 3 Hidroximetilbilano (tetrapirrol lineal) Ciclización espontánea Uroporfirinógeno III sintasa A P A P A P A P C C H2 C C C C C C C C C H2 C C C I C CH 2 C C II N H N H H N H N C C C C C H2 C P A P IV III CH 2 CH 2 I C II N H N H H N H N C C C C C C C H2 C A A P P IV Uroporfirinógeno tipo I C C CH 2 C III C A Uroporfirinógeno tipo III Figura 31-6 Conversión de porfobilinógeno en uroporfirinógenos. La uroporfirinógeno sintasa I también se llama porfobilinógeno (PBG) desaminasa o hidroximetilbilano (HMB) sintasa. P A P A IV 4CO2 P M IV A Uroporfirinógeno III II P P III I M II P P M A IV M Coproporfirinógeno I P I A Uroporfirinógeno descarboxilasa P III P Uroporfirinógeno I A II M A P M IV P III I P II A P M I 4CO2 P III P M Coproporfirinógeno III Figura 31-7 Descarboxilación de uroporfirinógenos hacia coproporfirinógenos en el citosol. (A, acetilo; M, metilo; P, propionilo.) 31 Bender.indd 274 La ALA sintasa se encuentra en formas tanto hepática (ALAS1) como eritroide (ALAS2). La reacción limitante en la síntesis del hem en el hígado es la catalizada por ALAS1 (fig. 31-5), una enzima reguladora. Parece ser que el hem, quizá al actuar mediante una molécula aporrepresora, actúa como un regulador negativo de la síntesis de ALAS1. Este mecanismo de represión-desrepresión se describe en la figura 31-9. De este modo, el índice de síntesis de ALAS1 aumenta considerablemente en ausencia de hem, y está disminuido en su presencia. En circunstancias normales, el índice de recambio de ALAS1 en hígado de rata es rápido (vida media de aproximadamente 1 h), característica común de una enzima que cataliza una reacción limitante. El hem también afecta la traducción de la enzima y su transferencia desde el citosol hacia la mitocondria. Muchos fármacos, cuando son administrados a seres humanos, pueden dar por resultado un incremento notorio de ALAS1. Casi todos estos medicamentos se metabolizan por medio de un sistema en el hígado que utiliza una hemoproteína específica, el citocromo p450 (cap. 53). Durante su metabolismo, la utilización de hem por el citocromo P450 está muy aumentada, lo que a su vez disminuye la concentración intracelular de hem. Este último evento origina una desrepresión de ALAS1, con un índice incrementado correspondiente de síntesis del hem para satisfacer las necesidades de las células. Varios factores influyen sobre la desrepresión de ALAS1 mediada por fármacos en el hígado; p. ej., la administración de glucosa puede evitarla, al igual que la administración de hematina (una forma oxidada de hem). La importancia de algunos de estos mecanismos reguladores se comenta con mayor detalle más adelante cuando se describen las porfirias. La regulación de la forma eritroide de la ALAS (ALAS2) difiere de la de ALAS1. Por ejemplo, no es inducida por los medicamentos que afectan a la ALAS1, y el hem no causa regulación de la misma por retroacción. LAS PORFIRINAS TIENEN COLOR Y MUESTRAN FLUORESCENCIA Los diversos porfirinógenos son incoloros, mientras que todas las diversas porfirinas son de color. En el estudio de porfirinas o de derivados de porfirina, el espectro de absorción característico que cada uno muestra —en las regiones tanto visible como ultravioleta del espectro— tiene gran valor. Un ejemplo es la curva de absorción para una solución de porfirina en ácido clorhídrico al 5% (fig. 31-10). Note en especial la banda de absorción aguda cerca de 400 nm, la cual es una característica distintiva del anillo de porfirina y es típica de todas las porfirinas, al margen de las cadenas laterales presentes. Dicha banda se denomina la banda de Soret en honor a su descubridor, el físico francés Charles Soret. Cuando porfirinas disueltas en ácidos minerales fuertes o en solventes orgánicos se iluminan mediante luz ultravioleta, emiten una fuerte fluorescencia de color rojo, la cual es tan característica que suele usarse para detectar pequeñas cantidades de porfirinas libres. Los dobles enlaces que unen los anillos pirrol en las porfiri- 27/11/09 14:30:51 CApítuLo 31 Porfirinas y pigmentos biliares 275 Porfobilinógeno Uroporfirinógeno I sintasa Hidroximetilbilano Uroporfirinógeno III sintasa Espontánea 6H Citosol Uroporfirina III Uroporfirinógeno I Uroporfirinógeno III Luz 4CO 2 Luz Uroporfirina I Luz Uroporfirinógeno descarboxilasa 6H Coproporfirina III 6H 6H 4CO 2 Coproporfirinógeno III Coproporfirinógeno I Luz Coproporfirina I Coproporfirinógeno oxidasa Mitocondrias Protoporfirinógeno III Protoporfirinógeno oxidasa O luz in vitro 6H Protoporfirina III Fe2+ Ferroquelatasa Hem Figura 31-8 Pasos en la biosíntesis de los derivados de porfirina a partir del porfobilinógeno. La uroporfirinógeno I sintasa también se llama porfobilinógeno desaminasa o hidroximetilbilano sintasa. nas son la causa de la absorción y la fluorescencia típicas de estos compuestos; estos dobles enlaces no se encuentran en los porfirinógenos. Una interesante posible aplicación de las propiedades fotodinámicas de las porfirinas es en el tratamiento de ciertos tipos de cáncer, procedimiento llamado fototerapia de cáncer. Los tumores a menudo captan más porfirinas que los tejidos normales. De esta manera, se administra hematoporfirina u otros compuestos vinculados a un paciente que tiene un tumor apropiado; a continuación se expone el tumor a un láser de argón, el cual excita las porfirinas y con ello suscita efectos citotóxicos. La espectrofotometría se usa para efectuar pruebas para porfirinas y sus precursores Las coproporfirinas y las uroporfirinas despiertan interés clínico porque se excretan en cantidades aumentadas en las porfirias. Estos compuestos, cuando están presentes en orina o heces, pueden separarse uno de otro por medio de extracción con mezclas solventes apropiadas. A continuación es posible identificarlos y cuantificarlos con métodos espectrofotométricos. El ALA y el pBG también pueden medirse en la orina mediante pruebas colorimétricas apropiadas. 31 Bender.indd 275 LAS PORFIRIAS SON TRASTORNOS GENÉTICOS DEL METABOLISMO DEL HEM Las porfirias son un grupo de trastornos debidos a anormalidades de la vía de biosíntesis del hem; son genéticos o adquiridos. No son prevalecientes, pero es importante considerarlos en ciertas circunstancias (p. ej., en el diagnóstico diferencial de dolor en el abdomen y de diversos datos neuropsiquiátricos); de otro modo, los enfermos quedarán sujetos a tratamientos inapropiados. Se ha especulado que el rey Jorge III sufrió algún tipo de porfiria, lo que quizá explique sus confinamientos periódicos en el Castillo de Windsor, y tal vez algunas de sus opiniones respecto a los colonos americanos. Asimismo, la fotosensibilidad (que favorece actividades nocturnas) y la desfiguración grave mostradas por algunas víctimas de porfiria eritropoyética congénita han llevado a sugerir que estos individuos quizá hayan sido los prototipos de los denominados “hombres lobo”. No se ha presentado evidencia para apoyar esta noción. La bioquímica fundamenta las causas, los diagnósticos y los tratamientos de las porfirias Se han descrito seis tipos principales de porfiria, mismos que se producen por depresiones de las actividades de las enzimas 3 a 8 que 27/11/09 14:30:53 276 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos Hemoproteínas Proteínas Hem Aporrepresor 8. Ferroquelatasa Fe2 + Protoporfirina III 7. Protoporfirinógeno oxidasa Protoporfirinógeno III 6. Coproporfirinógeno oxidasa Coproporfirinógeno III 5. Uroporfirinógeno descarboxilasa Uroporfirinógeno III 4. Uroporfirinógeno III sintasa Hidroximetilbilano Figura 31-9 Intermediarios, enzimas y regulación de la síntesis del hem. Los números de enzima son aquellos a los que se hace referencia en la columna 1 del cuadro 31-2. Las enzimas 1, 6, 7 y 8 están localizadas en las mitocondrias, y las otras en el citosol. Las mutaciones del gen que codifica para la enzima 1 producen anemia sideroblástica ligada a X. Las mutaciones de los genes que codifican para las enzimas 2 a 8 ocasionan las porfirias, aunque sólo se han informado algunos casos debidos a deficiencia de la enzima 2. La síntesis hepática de hem se regula en la ALA sintasa (ALAS1) por medio de un mecanismo de represión-desrepresión mediado por hem y su aporrepresor hipotético. Las líneas punteadas indican la regulación negativa (−) por represión. La enzima 3 también recibe el nombre de porfobilinógeno desaminasa o hidroximetilbilano sintasa. Log de absorbencia 5 4 3 2 1 300 400 500 600 700 Longitud de onda (nm) Figura 31-10 Espectro de absorción de la hematoporfirina (solución al 0.01% en HCl al 5%). se muestran en la figura 31-9 (véase también el cuadro 31-2). Así, la valoración de la actividad de una o más de estas enzimas usando una fuente apropiada (p. ej., eritrocitos) tiene importancia para ha- 31 Bender.indd 276 3. Uroporfirinógeno I sintasa Porfobilinógeno 2. ALA deshidratasa ALA 1. ALA sintasa – Succinil-CoA + glicina cer un diagnóstico definitivo de un caso sospechado de porfiria. Los sujetos con actividades bajas de la enzima 1 (ALAS2) presentan anemia, no porfiria (cuadro 31-2). Se ha informado la existencia de pacientes con actividad baja de la enzima 2 (ALA deshidratasa), pero muy rara vez; la enfermedad resultante recibe el nombre de porfiria con deficiencia de ALA deshidratasa. En general, las porfirias descritas se heredan de una manera autosómica dominante, con la excepción de la porfiria eritropoyética congénita, cuya herencia es recesiva. Las anormalidades precisas en los genes que dirigen las síntesis de las enzimas afectadas en la biosíntesis del hem se han determinado en algunos casos. De este modo, el uso de sondas de gen apropiadas ha hecho posible el diagnóstico prenatal de algunas de las porfirias. Como sucede con casi todos los errores congénitos, los signos y síntomas de porfiria se producen por una deficiencia de productos metabólicos más allá del bloqueo enzimático, o por una acumulación de metabolitos detrás del bloqueo. Si la lesión enzimática ocurre al principio de la vía, antes de la formación de porfirinógenos (p. ej., enzima 3 de la fig. 31-9, que está afectada en la porfiria intermitente aguda), se acumularán ALA y 27/11/09 14:30:54 CApítuLo 31 277 Porfirinas y pigmentos biliares Cuadro 31-2 resumen de los datos importantes en las porfirias1 Enzima incluida2 Tipo, clase y número de oMiM Signos y síntomas importantes resultados de análisis de laboratorio 1. ALA sintasa (forma eritroide) Anemia sideroblástica ligada a X3 (eritropoyética) (OMIM 301300) Anemia Recuento eritrocítico y cifras de hemoglobina disminuidos 2. ALA deshidratasa Deficiencia de ALA deshidratasa (hepática) (OMIM 125270) Dolor abdominal, síntomas neuropsiquiátricos ALA y coproporfirina III urinarias aumentadas 3. Uroporfirinógeno I sintasa4 Porfiria intermitente aguda (hepática) (OMIM 176000) Dolor abdominal, síntomas neuropsiquiátricos ALA y PBG urinarios aumentados 4. Uroporfirinógeno III sintasa Eritropoyética congénita (eritropoyética) (OMIM 263700) Fotosensibilidad Uroporfirina I urinaria, fecal y eritrocítica aumentada 5. Uroporfirinógeno descarboxilasa Porfiria cutánea tarda (hepática) (OMIM 176100) Fotosensibilidad Uroporfirina I urinaria aumentada 6. Coproporfirinógeno oxidasa Coproporfiria hereditaria (hepática) (OMIM 121300) Fotosensibilidad, dolor abdominal, síntomas neuropsiquiátricos ALA, PBG y coproporfirina III urinarias, y coproporfirina III fecal, aumentados 7. Protoporfirinógeno oxidasa Porfiria variegata (hepática) (OMIM 176200) Fotosensibilidad, dolor abdominal, síntomas neuropsiquiátricos ALA, PBG y coproporfirina III urinarias, y protoporfirina IX fecal aumentados 8. Ferroquelatasa Protoporfiria (eritropoyética) (OMIM 177000) Fotosensibilidad Protoporfirina IX fecal y de eritrocitos aumentada abreviaturas: ALA, ácido δ-aminolevulínico; PBG, porfobilinógeno; OMIM, Online Mendelian Inheritance in Man. 1 Sólo se listan los datos bioquímicos en las etapas activas de estas enfermedades. Ciertas anormalidades bioquímicas son detectables durante las etapas latentes de algunas de las enfermedades antedichas. Las enfermedades 3, 5 y 8 en general son las porfirias más prevalecientes. La enfermedad 2 es rara. 2 La numeración de las enzimas en este cuadro corresponde a la usada en la figura 31-9. 3 La anemia sideroblástica ligada a X no es una porfiria pero se incluye aquí porque hay afección de la ALA sintasa. 4 Esta enzima también se llama PBG desaminasa o hidroximetilbilano sintasa. Mutaciones en diversos genes Anormalidades de las enzimas de la síntesis del hem Acumulación de ALA y PBG, o aminoración de hem en células y líquidos corporales, o ambas Acumulación de porfirinógenos en la piel y los tejidos Signos y síntomas neuropsiquiátricos Oxidación espontánea de porfirinógenos hacia porfirinas Fotosensibilidad Figura 31-11 Causas bioquímicas de los principales signos y síntomas de las porfirias. PBG en los tejidos y líquidos corporales (fig. 31-11). Desde el punto de vista clínico, los enfermos se quejan de dolor en el abdomen y síntomas neuropsiquiátricos. No se ha determinado la causa bioquímica exacta de estos síntomas, pero tal vez se relacionen con cifras altas de ALA o PBG, o con una deficiencia de hem. Por otra parte, los bloqueos enzimáticos más adelante en la vía dan por resultado la acumulación de los porfirinógenos indicados en las figuras 31-9 y 31-11. Sus productos de oxidación, los deriva- 31 Bender.indd 277 dos porfirina correspondientes, originan fotosensibilidad, una reacción a la luz visible de alrededor de 400 nm. Se cree que cuando las porfirinas quedan expuestas a luz de esta longitud de onda se “excitan” y luego reaccionan con oxígeno molecular para formar radicales de oxígeno. Estas últimas especies lesionan lisosomas y otros organelos. Los lisosomas dañados liberan sus enzimas degradantes, lo que causa grados variables de daño cutáneo, incluso formación de tejido cicatrizal. Las porfirias se clasifican con base en los órganos o las células más afectados; estos últimos por lo regular son órganos o células en los cuales la síntesis de hem es en particular activa. La médula ósea sintetiza cantidades considerables de hemoglobina, y el hígado es activo en la síntesis de otra hemoproteína, el citocromo P450. De este modo, una clasificación de las porfirias las designa como predominantemente eritropoyéticas o hepáticas; en el cuadro 31-2 se caracterizan así los tipos de porfirias que caen dentro de estas dos clases. Las porfirias también pueden clasificarse como agudas o cutáneas con base en sus características clínicas. ¿Por qué tipos específicos de porfiria afectan a ciertos órganos de manera más notoria que a otros? Una respuesta parcial es que las concentraciones de metabolitos que suscitan daño (p. ej., ALA, PBG, porfirinas específicas o falta de hem) pueden variar de modo notorio en diferentes órganos o células dependiendo de las actividades que difieren de sus enzimas formadoras de hem. Como se describió, la ALAS1 es la enzima reguladora clave de la vía biosintética del hem en el hígado. Muchos fármacos (p. ej., barbitúricos, griseofulvina) la inducen. Casi todos estos medicamentos lo hacen al inducir el citocromo P450 (cap. 53), que usa hem y, así, desreprime (induce) a la ALAS1. En individuos con porfiria, 27/11/09 14:30:55 278 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos las actividades incrementadas de ALAS1 producen cifras aumentadas de precursores en potencia perjudiciales antes del bloqueo metabólico. De esta manera, la ingestión de fármacos que ocasionan inducción del citocromo P450 (los llamados inductores microsómicos) puede precipitar ataques de porfiria. El diagnóstico de un tipo específico de porfiria en general puede establecerse al considerar los antecedentes clínicos y familiares, el examen físico, y análisis de laboratorio apropiados. El cuadro 31-2 lista los datos importantes en los seis tipos principales de porfiria. Las concentraciones altas de plomo pueden afectar el metabolismo del hem al combinarse con grupos SH en enzimas como la ferroquelatasa y la ALA deshidratasa, lo cual afecta al metabolismo de las porfirinas. Hay cifras altas de protoporfirina en los eritrocitos, así como de ALA y coproporfirina en la orina. Se espera que el tratamiento de las porfirias en el ámbito de gen llegue a ser posible; entre tanto, el tratamiento en esencia es sintomático. Es importante que los pacientes eviten los fármacos que dan por resultado inducción del citocromo P450. La ingestión de cantidades grandes de carbohidratos (carga de glucosa) o la administración de hematina (un hidróxido de hem) puede reprimir la ALAS1, lo que origina menor producción de precursores de hem perjudiciales. Los pacientes que muestran fotosensibilidad se benefician a partir de la administración de β-caroteno, que parece disminuir la producción de radicales libres, lo que aminora la fotosensibilidad. Las pantallas solares que filtran luz visible también suelen ser útiles para esos enfermos. EL CATABOLISMO DEL HEM PRODUCE BILIRRUBINA En condiciones fisiológicas en el adulto humano, cada hora se destruyen 1 a 2 × 108 eritrocitos. De este modo, en un día, un ser humano de 70 kg recambia cerca de 6 g de hemoglobina. Cuando la hemoglobina se destruye en el cuerpo, la globina se degrada hacia los aminoácidos que la constituyen, mismos que se vuelven a emplear, y el hierro del hem entra al fondo común de hierro, también para que se vuelva a usar. La porción porfirina libre de hierro del hem también se degrada, principalmente en las células reticuloendoteliales del hígado, el bazo y la médula ósea. El catabolismo del hem a partir de todas las proteínas hem parece llevarse a cabo en las fracciones microsómicas de células mediante un sistema enzimático complejo denominado hem oxigenasa. Para el momento en que el hem derivado de proteínas llega al sistema de oxigenasa, el hierro por lo general se ha oxidado hacia la forma férrica, lo que constituye la hemina. El sistema de hem oxigenasa es inducible por sustrato. La hemina se reduce a hem con NADPH y, con la ayuda de más NADPH, se añade oxígeno al puente de α-metino entre los pirroles I y II de la porfirina (fig. 31-12). El hierro ferroso se oxida de nuevo hacia la forma férrica. Con la adición de oxígeno se libera ion férrico, y se producen monóxido de carbono, y una cantidad equimolar de biliverdina por la división del anillo tetrapirrol. En aves y anfibios, la biliverdina IX de color verde se excreta; en mamíferos, una enzima soluble llamada biliverdina reductasa reduce el puente de metino entre los pirroles III y IV hacia un grupo metileno para producir bilirrubina, un pigmento de color amarillo (fig. 31-12). 31 Bender.indd 278 Se estima que 1 g de hemoglobina da 35 mg de bilirrubina. En humanos adultos cada día se forman alrededor de 250 a 350 mg de bilirrubina, derivada principalmente de la hemoglobina, pero también de eritropoyesis ineficaz y de varias otras proteínas hem, como el citocromo P450. La conversión química de hem en bilirrubina por las células reticuloendoteliales puede observarse in vivo conforme el color púrpura del hem en un hematoma se convierte con lentitud en el pigmento amarillo de la bilirrubina. La albúmina plasmática transporta hacia el hígado la bilirrubina formada en tejidos periféricos. El metabolismo adicional de la bilirrubina sucede principalmente en el hígado. Se divide en tres procesos: 1) captación de bilirrubina por las células parenquimatosas del hígado; 2) conjugación de bilirrubina con glucuronato en el retículo endoplásmico, y 3) secreción de bilirrubina conjugada hacia la bilis. Cada uno de estos procesos se considerará por separado. EL HÍGADO CAPTA BILIRRUBINA La bilirrubina sólo es un poco hidrosoluble en agua, pero la unión no covalente a albúmina incrementa su solubilidad en el plasma. Cada molécula de albúmina parece tener un sitio de alta afinidad y uno de baja afinidad por bilirrubina. En 100 ml de plasma, cerca de 25 mg de bilirrubina pueden estar estrechamente unidos a albúmina en su sitio de afinidad alta. La bilirrubina que excede esta cantidad sólo puede unirse de manera laxa y, así, se puede desprender y difundir con facilidad hacia los tejidos. Varios compuestos, como los antibióticos y otros fármacos, compiten con la bilirrubina por el sitio de alta afinidad en la albúmina. Así, estos compuestos pueden desplazar a la bilirrubina desde la albúmina, y tienen efectos clínicos importantes. En el hígado, la bilirrubina se separa de la albúmina y se capta en la superficie sinusoidal de los hepatocitos por medio de un sistema saturable mediado por acarreador. Este sistema de transporte facilitado tiene capacidad muy grande, de manera que incluso en condiciones patológicas no parece ser limitante en el metabolismo de la bilirrubina. Dado que dicho sistema permite el equilibrio de bilirrubina a través de la membrana sinusoidal del hepatocito, la captación neta de bilirrubina dependerá de la eliminación de esta última por medio de vías metabólicas subsiguientes. Una vez que la bilirrubina entra en los hepatocitos, es posible su unión a ciertas proteínas citosólicas, que ayudan a mantenerla solubilizada antes de la conjugación. La ligandina (un miembro de la familia de las glutatión S-transferasas) y la proteína Y son las proteínas involucradas. También pueden ayudar a prevenir el flujo de salida de bilirrubina de regreso hacia el torrente sanguíneo. La bilirrubina se conjuga con ácido glucurónico en el hígado La bilirrubina es no polar y persistiría en las células (p. ej., unida a lípidos) si no se hiciera hidrosoluble. Al añadirle moléculas de ácido glucurónico, los hepatocitos convierten la bilirrubina en una forma polar, que se excreta con facilidad en la bilis. Este proceso se llama conjugación, y puede emplear otras moléculas polares que no son ácido glucurónico (p. ej., sulfato). Muchas hormonas y medicamen- 27/11/09 14:30:56 CApítuLo 31 Porfirinas y pigmentos biliares 279 Hem O I α Hemina HN N Fe3+ IV N P N II HN N H III P NADPH Sistema de hem oxigenasa microsómico P P H HN NADP HN I α Bilirrubina Hem O N Fe2+ IV N P NADP N II NADPH N O III P HN II NADPH O2 NADP Fe3+ (reutilizado) I OH HN III CO (exhalado) P P N Fe3+ IV N P N II O2 N IV N III P HN I Biliverdina O Figura 31-12 Representación esquemática del sistema de hem oxigenasa microsómico. (Modificada, con autorización, de Schmid R, McDonough AF en: The Porphyrins. Dolphin D [edi.]. Academic Press, 1978. Copyright ©1978. Reimpresa con autorización de Elsevier.) tos esteroides también se convierten en derivados hidrosolubles por medio de conjugación en preparación para excreción (cap. 52). La conjugación de bilirrubina es catalizada por una glucuronosiltransferasa específica. La enzima está localizada principalmente en el retículo endoplásmico, usa ácido UDP-glucurónico como donador de glucuronósilo, y se denomina bilirrubina-UGT. El monoglucurónido de bilirrubina es un intermediario, y después se convierte en el diglucurónido (figs. 31-13 y 31-14). Casi toda la bilirrubina que se excreta en la bilis de mamíferos está en la forma de diglucurónido de bilirrubina. Aun así, cuando conjugados de bilirrubina existen de modo anormal en el plasma de seres humanos (p. 31 Bender.indd 279 ej., en la ictericia obstructiva), son predominantemente monoglucurónidos. Diversos fármacos útiles en clínica son capaces de inducir la actividad de la bilirrubina-UGT, entre ellos el fenobarbital. En la exposición, más adelante, respecto a trastornos hereditarios de la conjugación de la bilirrubina se presenta más información sobre la glucuronosilación. La bilirrubina se secreta hacia la bilis La bilirrubina conjugada se secreta hacia la bilis por medio de un mecanismo de transporte activo, que probablemente es limitante 27/11/09 14:30:57 280 SECCIÓN III – OOC(CH2O)4C M O Metabolismo de proteínas y aminoácidos V II O M O C C Sangre CH2 H2C CH2 C C(CH2O)4COO– O H2C III C O Bilirrubina • Albúmina 1. CAPTACIÓN M IV M V I C O Hepatocito Bilirrubina Figura 31-13 Estructura del diglucurónido de bilirrubina (bilirrubina conjugada, “de reacción directa”). El ácido glucurónico está fijo mediante enlace éster a los dos grupos de ácido propiónico de la bilirrubina para formar un acilglucurónido. UDP-GlcUA UDP-GlcUA 2. CONJUGACIÓN Ictericia neonatal Ictericia “tóxica” Síndrome de Crigler-Najjar Síndrome de Gilbert Diglucurónido de bilirrubina 3. SECRECIÓN Síndrome de Dubin-Johnson UDP-glucosa deshidrogenasa UDP-glucosa Ácido UDP-glucurónico Conductillo biliar 2NAD+ Ácido UDP-glucurónico + bilirrubina Ácido UDP-glucurónico + monoglucurónido de bilirrubina Diglucurónido de bilirrubina 2NADH + 2H+ UDP-glucuronosiltransferasa UDP-glucuronosiltransferasa Monoglucurónido de bilirrubina + UDP Diglucurónido de bilirrubina + UDP Figura 31-14 Conjugación de bilirrubina con ácido glucurónico. El donador de glucuronato, ácido UDP-glucurónico, se forma a partir de UDP-glucosa como se describe. La UDP-glucuronosiltransferasa también se llama bilirrubina-UGT. para todo el proceso del metabolismo hepático de la bilirrubina. La proteína involucrada es la MRP-2 (proteína parecida a la de resistencia a múltiples fármacos 2), también denominada transportador de anión orgánico multiespecífico (MOAT). Se localiza en la membrana plasmática de la membrana de los canalículos biliares, y maneja varios aniones orgánicos. Es un miembro de la familia de los transportadores de casete de unión a ATP (ABC). El transporte hepático de bilirrubina conjugada hacia la bilis es inducible por los fármacos que tienen la capacidad de inducir la conjugación de bilirrubina. De esta manera, los sistemas de conjugación y excreción para bilirrubina se comportan como una unidad funcional coordinada. En la figura 31-15 se resumen los tres procesos principales incluidos en la transferencia de bilirrubina desde la sangre hacia la bilis. También se indican los sitios afectados en diversas enfermedades que dan por resultado ictericia (véase más adelante). Las bacterias intestinales reducen la bilirrubina conjugada hacia urobilinógeno A medida que la bilirrubina conjugada llega al íleon terminal y el intestino grueso, enzimas bacterianas específicas (β-glucuronida- 31 Bender.indd 280 Figura 31-15 Diagrama que representa los tres procesos principales (captación, conjugación y secreción) comprendidos en la transferencia de bilirrubina desde la sangre hacia la bilis. Ciertas proteínas de los hepatocitos, como la ligandina (un miembro de la familia de enzimas glutatión S-transferasa) y la proteína Y, se unen a la bilirrubina intracelular y pueden evitar su flujo de salida hacia el torrente sanguíneo. También se muestra el proceso afectado en diversas enfermedades que originan ictericia. sas) eliminan los glucurónidos, y luego la flora fecal reduce el pigmento hacia un grupo de compuestos tetrapirrólicos incoloros llamados urobilinógenos. En el íleon terminal y el intestino grueso, una pequeña fracción de los urobilinógenos se resorbe y se vuelve a excretar por medio del hígado para constituir el ciclo enterohepático del urobilinógeno. En condiciones anormales, en especial cuando se forma pigmento biliar excesivo o la enfermedad hepática interfiere con este ciclo intrahepático, el urobilinógeno también puede excretarse en la orina. En circunstancias normales, la mayor parte de los urobilinógenos incoloros formados en el colon por la flora fecal se oxida ahí hacia urobilinas (compuestos coloreados), y se excreta en las heces. El oscurecimiento de las heces expuestas al aire se debe a la oxidación de urobilinógenos residuales hacia urobilinas. LA HIPERBILIRRUBINEMIA ORIGINA ICTERICIA Cuando la bilirrubina en sangre excede 1 mg/dl (17.1 µmol/L), existe hiperbilirrubinemia, la cual quizá se deba a la producción de más bilirrubina de la que el hígado normal puede excretar, o al fracaso de un hígado dañado para excretar bilirrubina producida en cantidades normales. En ausencia de daño hepático, la obstrucción de los conductos excretores del hígado —al impedir la excreción de bilirrubina— también suscitará hiperbilirrubinemia. En todas estas 27/11/09 14:30:59 CApítuLo 31 situaciones, se acumula bilirrubina en sangre, y cuando alcanza una cierta concentración (alrededor de 2 a 2.5 mg/dl) se difunde hacia los tejidos, que entonces adoptan un color amarillo. Ese estado recibe el nombre de ictericia. En estudios clínicos de ictericia, la medición de la bilirrubina en el suero tiene gran valor. El primer método para valorar de modo cuantitativo el contenido de bilirrubina del suero fue ideado por Van den Bergh, mediante la aplicación de la prueba de Ehrlich para bilirrubina en la orina. La reacción de Ehrlich se basa en el acoplamiento de ácido sulfanílico diazotizado (reactivo diazo de Ehrlich) y bilirrubina para producir un compuesto azo de color púrpura-rojizo. En el procedimiento original descrito por Ehrlich, se usó metanol para proporcionar una solución en la cual fueron solubles tanto la bilirrubina como el reactivo diazo. Van den Bergh omitió de manera inadvertida el metanol en una ocasión cuando estaba intentando valorar el pigmento biliar en bilis humana. Para su sorpresa, la aparición normal del color ocurrió “de modo directo”. Así, esta forma de bilirrubina que reaccionaría sin la adición de metanol se llamó “de reacción directa”. Después se encontró que esta misma reacción directa también sucedía en suero de individuos con ictericia debida a obstrucción biliar. Comoquiera que sea, aún fue necesario añadir metanol para detectar bilirrubina en el suero normal o la que estuvo presente en exceso en el suero de sujetos con ictericia hemolítica en los cuales no se halló evidencia de obstrucción. A esa forma de bilirrubina que sólo podía medirse luego de la adición de metanol, se aplicó el término “de reacción indirecta”. Después se descubrió que la bilirrubina indirecta es bilirrubina “libre” (no conjugada) en ruta al hígado desde los tejidos reticuloendoteliales, donde la bilirrubina se produjo originalmente por la desintegración de porfirinas hem. Puesto que esta bilirrubina no es hidrosoluble, requiere metanol para iniciar el acoplamiento con el reactivo diazo. En el hígado, la bilirrubina libre se conjuga con ácido glucurónico, y el conjugado, predominantemente diglucurónido de bilirrubina, puede excretarse entonces hacia la bilis. Además, la bilirrubina conjugada, al ser hidrosoluble, puede reaccionar de manera directa con el reactivo diazo, de modo que la “bilirrubina directa” de Van den Bergh en realidad es un conjugado de bilirrubina (glucurónido de bilirrubina). Dependiendo del tipo de bilirrubina presente en el plasma —es decir, conjugada o no conjugada— la hiperbilirrubinemia se clasifica como hiperbilirrubinemia por retención, debida a producción excesiva, o hiperbilirrubinemia por regurgitación, debida a reflujo hacia el torrente sanguíneo por obstrucción biliar. La bilirrubina no conjugada y la especie conjugada se pueden separar y cuantificar usando cromatografía líquida de alta presión. Debido a su hidrofobicidad, únicamente la bilirrubina no conjugada puede cruzar la barrera hematoencefálica hacia el sistema nervioso central; de esta manera, la encefalopatía debida a hiperbilirrubinemia (kernícterus) sólo puede ocurrir en relación con bilirrubina no conjugada, como se encuentra en la hiperbilirrubinemia por retención. Por otra parte, debido a su hidrosolubilidad, únicamente la bilirrubina conjugada puede aparecer en la orina. En consecuencia, la ictericia colúrica (coluria es la presencia de pigmentos biliares en la orina) sólo sucede en la hiperbilirrubinemia por regurgitación, y la ictericia acolúrica únicamente ocurre en presencia de un exceso de bilirrubina no conjugada. 31 Bender.indd 281 Porfirinas y pigmentos biliares 281 En diversas enfermedades hay cantidades altas de bilirrubina no conjugada en la sangre anemias hemolíticas Son causas importantes de hiperbilirrubinemia no conjugada, aunque esta última generalmente sólo es leve (< 4 mg/dl; < 68.4 µmol/L) incluso en caso de hemólisis extensa, debido a la gran capacidad del hígado sano para manejar la bilirrubina. “ictericia fisiológica” neonatal Este estado transitorio es el origen más frecuente de hiperbilirrubinemia no conjugada. Se produce por hemólisis acelerada alrededor del momento del nacimiento, y por un sistema hepático inmaduro para la captación, conjugación y secreción de bilirrubina. No sólo hay reducción de la actividad de bilirrubina-UGT, sino que probablemente hay síntesis reducida del sustrato para esa enzima, el ácido UDP-glucurónico. Dado que la cantidad aumentada de bilirrubina es no conjugada, tiene la capacidad de penetrar en la barrera hematoencefálica cuando su concentración en el plasma excede aquella a la cual la albúmina puede unirse estrechamente (20 a 25 mg/dl). Esto puede causar una encefalopatía tóxica hiperbilirrubinémica, o kernícterus, que puede suscitar retraso mental. Debido a la inducibilidad reconocida de este sistema metabolizador de bilirrubina, se ha administrado fenobarbital a recién nacidos ictéricos, y es eficaz en este trastorno. Más aún, la exposición a luz azul (fototerapia) promueve la excreción hepática de bilirrubina no conjugada al convertir algo de la bilirrubina en otros derivados, como fragmentos maleimida e isómeros geométricos que se excretan en la bilis. Síndrome de Crigler-Najjar tipo i; ictericia no hemolítica congénita El síndrome de Crigler-Najjar tipo I es un raro trastorno autosómico recesivo. Se caracteriza por ictericia congénita grave (la bilirrubina sérica por lo general excede 20 mg/dl) debida a mutaciones del gen que codifica para la actividad de bilirrubina-UGT en tejidos hepáticos. La enfermedad suele ser mortal en el transcurso de los primeros 15 meses de vida. Los niños afectados han sido tratados con fototerapia, lo que produce cierta reducción de las cifras plasmáticas de bilirrubina. El fenobarbital no tiene efecto sobre la formación de glucurónidos de bilirrubina en pacientes con síndrome de Crigler-Najjar tipo I. Un trasplante hepático es una medida curativa. Cabe hacer notar que el gen que codifica para la bilirrubinaUGT humana forma parte del complejo grande de genes que codifican para UGT situado en el cromosoma 2. Muchos sustratos diferentes están sujetos a glucuronosilación, de modo que se necesitan muchas glucuronosiltransferasas. El complejo contiene aproximadamente 13 primeros exones específicos para sustrato, cada uno con su propio promotor. Cuatro son seudogenes, de manera que están codificadas nueve isoformas diferentes con actividades de glucuronosiltransferasa que difieren. El exón A1 es el involucrado en la conjugación de bilirrubina. En el caso de la bilirrubina, el exón A1 se divide hacia los exones 2 a 5 que contienen DNA, lo que produce bilirrubina-UGT. Otras transferasas se producen por división de otros primeros exones (miembros de A 2 a 13) hacia exones 2 a 5. 27/11/09 14:30:59 282 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos Síndrome de Crigler-Najjar tipo ii Este raro trastorno hereditario también se produce por mutaciones del gen que codifica para bilirrubina-UGT, pero se retiene algo de actividad de la enzima, y la evolución de la enfermedad es más benigna que la del tipo I. Las concentraciones séricas de bilirrubina regularmente no exceden 20 mg/dl. Los afectados pueden mostrar respuesta al tratamiento con dosis grandes de fenobarbital. Síndrome de gilbert De nuevo, esta enfermedad relativamente prevaleciente es el resultado de mutaciones del gen que codifica para la bilirrubina-UGT. Predomina en varones. Alrededor de 30% de la actividad de la enzima está preservada, y la enfermedad es por completo inocua. Hiperbilirrubinemia tóxica La hiperbilirrubinemia no conjugada puede originarse por disfunción hepática inducida por toxina, como la causada por cloroformo, arsfenaminas, tetracloruro de carbono, acetaminofeno, virus de la hepatitis, cirrosis, e intoxicación por el hongo Amanita. Estos trastornos adquiridos se deben a daño de células del parénquima hepático, que altera la conjugación. La obstrucción en el árbol biliar es la causa más frecuente de hiperbilirrubinemia conjugada algo de bilirrubina conjugada puede unirse de manera covalente a la albúmina Cuando las cifras de bilirrubina conjugada permanecen altas en el plasma, una fracción puede unirse de modo covalente a la albúmina (bilirrubina δ [delta]). Puesto que está unida de manera covalente a la albúmina, esta fracción tiene una vida media más prolongada en el plasma que la bilirrubina conjugada convencional. Así, permanece alta en el transcurso de la fase de recuperación de la ictericia obstructiva, luego de que el resto de la bilirrubina conjugada ha declinado hasta concentraciones normales; esto explica por qué algunos enfermos siguen pareciendo ictéricos después de que las cifras de bilirrubina conjugada han vuelto a lo normal. El urobilinógeno y la bilirrubina en la orina son indicadores clínicos En circunstancias normales sólo hay cantidades traza de urobilinógeno en la orina. En la obstrucción completa del conducto biliar no se encuentra urobilinógeno en la orina, dado que la bilirrubina no tiene acceso al intestino, donde puede convertirse en urobilinógeno. En este caso, la presencia de bilirrubina (conjugada) en la orina sin urobilinógeno sugiere ictericia obstructiva, sea intrahepática o poshepática. obstrucción del árbol biliar La hiperbilirrubinemia conjugada por lo general se produce por bloqueo de los conductos hepáticos o del colédoco, más a menudo debido a un cálculo biliar o a cáncer de la cabeza del páncreas (fig. 31-16). Debido a la obstrucción, es imposible que haya excreción de diglucurónido de bilirrubina. De esta manera, se regurgita hacia las venas y los linfáticos hepáticos, y aparece bilirrubina conjugada en la sangre y la orina (ictericia colúrica). Asimismo, las heces a menudo son de color pálido y deben examinarse de modo sistemático en cualquier caso de ictericia. El término ictericia colestática se usa para incluir todos los casos de ictericia obstructiva extrahepática. También cubre los casos de ictericia que muestran hiperbilirrubinemia conjugada debido a microobstrucción de conductillos biliares intrahepáticos por hepatocitos tumefactos y dañados (como puede suceder en la hepatitis infecciosa). Síndrome de dubin-Johnson Este trastorno autosómico recesivo benigno consta de hiperbilirrubinemia conjugada durante la niñez o la vida adulta. La hiperbilirrubinemia se produce por mutaciones en el gen que codifica para MRp-2 (véase antes), la proteína incluida en la secreción de bilirrubina conjugada hacia la bilis. Los hepatocitos centrilobulillares contienen un pigmento de color negro anormal que tal vez se derive de la epinefrina. Síndrome de rotor Es una rara enfermedad benigna caracterizada por hiperbilirrubinemia conjugada crónica y datos histológicos normales en el hígado. No se ha identificado su causa precisa. 31 Bender.indd 282 PREHEPÁTICA (vascular) HEPÁTICA (hígado) Anemias hemolíticas Enfermedades del hígado (p. ej., hepatitis, cáncer) Cálculo biliar POSHEPÁTICA (sistema biliar y páncreas) Cáncer pancreático Figura 31-16 Diagrama que representa algunas causas importantes de ictericia. Prehepática indica eventos en el torrente sanguíneo; la principal causa serían diversas formas de anemia hemolítica (cap. 52). Hepática significa eventos en el hígado, como los diversos tipos de hepatitis u otras formas de enfermedad del hígado (p. ej., cáncer). Poshepática se refiere a eventos en el árbol biliar; las principales causas de ictericia poshepática son obstrucción del colédoco por un cálculo (cálculo biliar) o por cáncer de la cabeza del páncreas. 27/11/09 14:31:00 CApítuLo 31 Porfirinas y pigmentos biliares 283 Cuadro 31-3 resultados de laboratorio en sujetos normales y pacientes con tres diferentes causas de ictericia Estado o enfermedad Normal Bilirrubina sérica Directa: 0.1-0.4 mg/dl urobilinógeno urinario Bilirrubina en la orina urobilinógeno fecal 0 a 4 mg/24 h No hay 40 a 280 mg/24 h Indirecta: 0.2-0.7 mg/dl Anemia hemolítica ↑Indirecta Incrementado No hay Aumentado Hepatitis ↑Directa e indirecta Disminuido si hay microobstrucción Presente si hay microobstrucción Disminuido Ictericia obstructiva1 ↑Directa No hay Presente Cantidad traza o no hay Las causas más frecuentes de ictericia obstructiva (poshepática) son cáncer de la cabeza del páncreas, y un cálculo biliar alojado en el colédoco. La presencia de bilirrubina en la orina en ocasiones se denomina coluria; por ende, la hepatitis y la obstrucción del colédoco originan ictericia colúrica, mientras que la ictericia propia de la anemia hemolítica se denomina acolúrica. Los resultados de laboratorio en sujetos con hepatitis son variables, dependiendo de la extensión del daño de las células del parénquima, y de la extensión de la microobstrucción de los conductillos biliares. Las cifras séricas de alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST) por lo general están notoriamente altas en individuos con hepatitis, mientras que las de fosfatasa alcalina están altas en la hepatopatía obstructiva. 1 En la ictericia consecutiva a hemólisis, la producción aumentada de bilirrubina conduce a incremento de la producción de urobilinógeno, que aparece en la orina en grandes cantidades. La bilirrubina por lo general no se encuentra en la orina en la ictericia hemolítica (porque la bilirrubina no conjugada no pasa hacia la orina), de modo que la combinación de urobilinógeno aumentado y ausencia de bilirrubina es sugestiva de ictericia hemolítica. El incremento de la destrucción de sangre por cualquier causa desencadena un aumento del urobilinógeno urinario. El cuadro 31-3 resume los resultados de laboratorio obtenidos en individuos con tres diferentes causas de ictericia: anemia hemolítica (una causa prehepática), hepatitis (una causa hepática) y obstrucción del colédoco (una causa poshepática) (fig. 31-16). Los análisis de laboratorio en la sangre (evaluación de la posibilidad de una anemia hemolítica, y medición del tiempo de protrombina) y en el suero (p. ej., electroforesis de proteínas; actividades de las enzimas ALT, AST y fosfatasa alcalina) también son importantes para ayudar a distinguir entre causas prehepáticas, hepáticas y poshepáticas de ictericia. rESuMEN ■ ■ ■ 31 Bender.indd 283 Las hemoproteínas, como la hemoglobina y los citocromos, contienen hem. El hem es un compuesto de hierro-porfirina (Fe2+-protoporfirina IX) en el cual cuatro anillos pirrol están unidos por puentes de metino. Los ocho grupos laterales (sustituyentes metilo, vinilo y propionilo) en los cuatro anillos pirrol del hem están dispuestos en una secuencia específica. El anillo hem se biosintetiza en las mitocondrias y en el citosol por medio de ocho pasos enzimáticos. Comienza con la formación del δ-aminolevulinato (ALA) a partir de la succinil-CoA y la glicina en una reacción catalizada por la ALA sintasa, la enzima reguladora de la vía. Las anormalidades determinadas por mecanismos genéticos, de siete de las ocho enzimas involucradas en la biosíntesis del hem producen las porfirias hereditarias. Los eritrocitos y el hígado son los principales sitios de expresión metabólica de las porfirias. La fotosensibilidad y los problemas neurológicos son molestias frecuentes. La ingestión de ciertos compuestos (como plomo) puede ocasionar porfirias adquiridas. Pueden detectarse cantidades ■ ■ ■ ■ aumentadas de porfirinas o sus precursores en sangre y orina, lo que facilita el diagnóstico. El catabolismo del anillo hem se inicia por la enzima hem oxigenasa, lo que da por resultado un tetrapirrol lineal. La biliverdina es un producto temprano del catabolismo, y en el momento de reducción da bilirrubina. La albúmina transporta a esta última desde los tejidos periféricos hacia el hígado, donde es captada por los hepatocitos. El hierro de hem y los aminoácidos de la globina se conservan y reutilizan. En el hígado, la bilirrubina se hace hidrosoluble mediante conjugación con dos moléculas de ácido glucurónico, y se secreta hacia la bilis. La acción de las enzimas bacterianas en el intestino produce urobilinógeno y urobilina, que se excretan en las heces y la orina. La ictericia se debe a incremento de la concentración de bilirrubina en la sangre. Las causas de ictericia se clasifican como prehepáticas (p. ej., anemias hemolíticas), hepáticas (p. ej., hepatitis) y poshepáticas (p. ej., obstrucción del colédoco). Las mediciones de la bilirrubina plasmática total y no conjugada, del urobilinógeno y la bilirrubina urinarios, y de ciertas enzimas séricas, así como la inspección y el análisis de muestras de heces, ayudan a distinguir entre estas causas. rEFErENCiaS Anderson KE et al: Disorders of heme biosynthesis: X-linked sideroblastic anemia and the porphyrias. In: The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. Chapter 124. Scriver CR et al (eds). McGraw-Hill, 2001. Chowdhury JR et al: Hereditary jaundice and disorders of bilirubin metabolism. In: The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, 8th ed. Chapter 125. Scriver CR et al (eds). McGraw-Hill, 2001. Deacon AC, Whatley SD, Elder GH: Porphyrins and disorders of porphyrin metabolism. In: Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Chapter 32. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (eds). Elsevier Saunders, 2006. Desnick RJ, Astrin KH: The porphyrias. In: Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17th ed. Fauci AS et al (eds). Chapter 352. McGraw-Hill, 2008. 27/11/09 14:31:01 284 SECCIÓN III Metabolismo de proteínas y aminoácidos Dufour DR: Liver disease. In: Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (eds). Chapter 47. Elsevier Saunders, 2006. Higgins T, Beutler E, Doumas BT: Hemoglobin, iron and bilirubin. In: Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (eds). Chapter 31. Elsevier Saunders, 2006. 31 Bender.indd 284 Pratt DS, Kaplan MM: Jaundice. In: Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17th ed. Fauci AS et al (eds). Chapter 43. McGraw-Hill, 2008. Pratt DS, Kaplan MM: Evaluation of liver function. In: Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17th ed. Fauci AS et al (eds). Chapter 296. McGraw-Hill, 2008. Wolkoff AW: The hyperbilirubinemias. In: Harrison’s Principles of Internal Medicine, 17th ed. Fauci AS et al (eds). Chapter 297. McGraw-Hill, 2008. 27/11/09 14:31:01 SeccióN iV eSTRUcTURA, FUNcióN Y RePLicAcióN De MAcROMOLÉcULAS iNFORMAciONALeS 32 c Nucleótidos Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Además de servir como precursores de ácidos nucleicos, los nucleótidos purina y pirimidina participan en funciones metabólicas tan diversas como el metabolismo de energía, la síntesis de proteína, la regulación de la actividad enzimática y la transducción de señal. Cuando se enlazan a vitaminas o derivados de vitaminas, los nucleótidos forman parte de muchas coenzimas. Como los principales donadores y receptores de grupos fosforilo en el metabolismo, los nucleósidos trifosfatos y difosfatos, como el ATP y ADP, son los principales elementos en las transducciones de energía que acompañan a las interconversiones metabólicas y la fosforilación oxidativa. Enlazados a azúcares o lípidos, los nucleósidos constituyen intermediarios biosintéticos clave. Los derivados del azúcar UDP-glucosa y UDP-galactosa participan en interconversiones de azúcar y en la biosíntesis de almidón y glucógeno. De modo similar, los derivados nucleósido-lípido, como el CDP-acilglicerol, son intermediarios en la biosíntesis de lípidos. Las funciones de los nucleótidos en la regulación metabólica son fosforilación (dependiente de ATP) de enzimas metabólicas clave, regulación alostérica de enzimas por ATP, AMP y CTP, y control por el ADP del índice de fosforilación oxidativa. Los nucleótidos cíclicos cAMP y cGMP sirven como los H 6 1 N 2 H C C N 3 a P í t u l o segundos mensajeros en eventos regulados por hormonas, y el GTP y GDP desempeñan funciones clave en la cascada de eventos que caracterizan a las vías de transducción de señal. Las aplicaciones específicamente médicas son el uso de análogos de purina y pirimidina sintéticos que contienen halógenos, tioles, o átomos de nitrógeno adicionales, en la quimioterapia de cáncer y SIDA, y como supresores de la respuesta inmunitaria durante trasplante de órganos. PROPIEDADES QUÍMICAS DE LAS PURINAS, LAS PIRIMIDINAS, LOS NUCLEÓSIDOS Y LOS NUCLEÓTIDOS Las purinas y pirimidinas son compuestos heterocíclicos Las purinas y pirimidinas son heterociclos que contienen nitrógeno, estructuras que contienen, además de carbono, otros (hetero) átomos, como nitrógeno. Note que la molécula de pirimidina de menor tamaño tiene el nombre más largo, y que la molécula de purina de mayor tamaño tiene el nombre más corto, y que sus anillos de seis átomos están numerados en direcciones opuestas (fig. 32-1). Las purinas o pirimidinas con un grupo —NH2 son bases débiles (valores de pKb de 10 a 11). La naturaleza planar de las purinas y las pirimidinas facilita su asociación estrecha, o “apilamiento”, que H 5 C C 4 Purina 4 7 N 8 CH N9 H 3 N HC 2 C N 5 CH CH 6 1 NH2 NH O OH Pirimidina Figura 32-1 Purina y pirimidina. Los átomos están numerados de acuerdo con el sistema internacional. Figura 32-2 Tautomerismo de los grupos funcionales oxo y amino de purinas y pirimidinas. 285 32 Bender.indd 285 27/11/09 14:34:25 286 SeccióN iV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales NH2 NH2 N N N 9 HO HO O OH OH Adenosina Figura 32-3 1 N HN 9 H2N HO O OH OH N O OH OH Guanosina Citidina 1 O N N HO O OH N HN O N N O O OH Uridina Ribonucleósidos, dibujados como los conformadores sin. NH2 estabiliza el DNA bicatenario (cap. 34). Los grupos oxo y amino de purinas y pirimidinas muestran tautomerismo ceto-enol y aminaimina (fig. 32-2), aunque las condiciones fisiológicas favorecen fuertemente las formas amino y oxo. N N O– HO O P O P – O Los nucleósidos son N-glucósidos O– O O Los nucleósidos son derivados de purinas y pirimidinas que tienen un azúcar enlazado a un nitrógeno de anillo de una purina o pirimidina. Los números con una prima (p. ej., 2ʹ o 3ʹ) distinguen entre los átomos del azúcar y los del heterociclo. El azúcar en los ribonucleósidos es la D-ribosa, y en los desoxirribonucleósidos es la 2-desoxiD-ribosa. Ambos azúcares están unidos al heterociclo por medio de un enlace β-N-glucosídico, casi siempre al N-1 de una pirimidina o al N-9 de una purina (fig. 32-3). P N N O CH2 O O OH OH Adenosina 5′-monofosfato (AMP) Adenosina 5′-difosfato (ADP) Adenosina 5′-trifosfato (ATP) Los nucleótidos son nucleósidos fosforilados Los mononucleótidos son nucleósidos con un grupo fosforilo esterificado a un grupo hidroxilo del azúcar. Los nucleótidos 3ʹ y 5ʹ son nucleósidos con un grupo fosforilo en el grupo 3ʹ- o 5ʹ-hidroxilo del azúcar, respectivamente. Dado que casi todos los nucleótidos son 5ʹ-, el prefijo “5ʹ-” por lo general se omite cuando se les cita. Así, el UMP y el dAMP representan nucleótidos con un grupo fosforilo en el C-5 de la pentosa. Los grupos fosforilo adicionales, ligados por enlaces anhídrido de ácido al grupo fosforilo de un mononucleótido, forman nucleósido difosfatos y trifosfatos (fig. 32-4). Los N-glucósidos heterocíclicos existen como conformadores sin y anti El obstáculo estérico por el heterociclo dicta que no hay libertad de rotación alrededor del enlace β-N-glucosídico de nucleósidos o nucleótidos. En consecuencia, ambos existen como conformadores sin o anti no interconvertibles (fig. 32-5). Al contrario de los tautómeros, los conformadores sin y anti sólo se pueden interconvertir por división y reformación del enlace glucosídico. Los conformadores tanto sin como anti se encuentran en la naturaleza, pero predominan los conformadores anti. 32 Bender.indd 286 Figura 32-4 ATP, su difosfato y su monofosfato. NH2 NH2 N N HO Sin N N N N HO O OH OH Anti N N O OH OH Figura 32-5 Los conformadores sin y anti de la adenosina difieren respecto a la orientación alrededor del enlace N-glucosídico. El cuadro 32-1 lista las principales purinas y pirimidinas, y sus derivados nucleósido y nucleótido. Se usan abreviaturas de una sola letra para identificar a la adenina (A), guanina (G), citosina (C), timina (T) y uracilo (U), sean libres o presentes en nucleósidos o nucleótidos. El prefijo “d” (desoxi) indica que el azúcar es 2ʹ-desoxi-Dribosa (p. ej., en el dATP) (fig. 32-6). 27/11/09 14:34:27 cAPíTULO 32 287 Nucleótidos Cuadro 32-1 Bases purina, ribonucleósidos y ribonucleótidos Purina o pirimidina X=H X = ribosa X = ribosa fosfato NH2 N N Adenina Adenosina Adenosina monofosfato (AMP) Guanina Guanosina Guanosina monofosfato (GMP) Citosina Citidina Citidina monofosfato (CMP) Uracilo Uridina Uridina monofosfato (UMP) Timina Timidina Timidina monofosfato (TMP) N N X O H N N H2N N N X NH2 N O N X O H N O N X O H O CH3 N N dX La modificación de polinucleótidos puede generar estructuras adicionales tosina del DNA bacteriano y de seres humanos, 5-hidroximetilcitosina de ácidos nucleicos bacterianos y virales, y adenina y guanina mono- y di-N-metiladas de RNA mensajeros de mamífero (fig. 32-7) que funcionan en el reconocimiento de oligonucleótido y en la regulación de la vida media de los RNA. Los nucleótidos libres Pequeñas cantidades de purinas y pirimidinas adicionales se encuentran en el DNA y en los RNA. Los ejemplos incluyen 5-metilci- NH2 NH2 N N O O O O O O– – OH AMP Figura 32-6 O O O O N O – OH H dAMP O O O P O– CH3 HN O P OH 32 Bender.indd 287 O O O HN N N P – N N N N O N O P O– – OH OH UMP O O– OH H TMP Estructuras del AMP, dAMP, UMP y TMP. 27/11/09 14:34:31 288 SeccióN iV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales NH2 CH3 N O O 5-Metilcitosina N CH2OH N N H H3C N H 5-Hidroximetilcitosina CH3 H2N Dimetilaminoadenina Figura 32-7 N HN N H N CH3 O N N Los nucleótidos son ácidos polifuncionales NH2 7 N N 7-Metilguanina Cuatro pirimidinas y purinas poco comunes pero naturales. O O N HN HN O N H N Hipoxantina (6-oxopurina) N H N H Xantina (2,6-dioxopurina) O HN O N H N O N N H Ácido úrico (2,6,8-trioxipurina) Los grupos fosforilo de nucleósidos tienen valores de pKa de alrededor de 1.0; por ende, los nucleótidos portan carga negativa importante a pH fisiológico. En contraste, los valores de pKa de los grupos fosforilo secundarios son de aproximadamente 6.2, de manera que éstos pueden servir como donadores o aceptores de protones a valores de pH de alrededor de dos o más unidades por arriba o por debajo de la neutralidad. Los nucleótidos absorben luz ultravioleta Los dobles enlaces conjugados de derivados de purina y pirimidina absorben luz ultravioleta. El efecto mutagénico de la luz ultravioleta se debe a su absorción por nucleótidos en el DNA, que da por resultado modificaciones químicas (cap. 35). Si bien los espectros son dependientes del pH, a pH de 7.0 todos los nucleótidos comunes absorben luz a una longitud de onda cercana a 260 nm. De este modo, la concentración de nucleótidos y ácidos nucleicos suele expresarse en términos de “absorbancia a 260 nm”. Los nucleótidos desempeñan diversas funciones fisiológicas Además de sus funciones como precursores de ácidos nucleicos, ATP, GTP, UTP, CTP y sus derivados, cada uno desempeña funciones fisiológicas singulares que se comentan en otros capítulos. Algunos ejemplos seleccionados incluyen la función del ATP como el principal transductor biológico de energía libre, y el segundo mensajero cAMP (fig. 32-10). Las cifras intracelulares medias de ATP, el nucleótido libre más abundante en células de mamífero, son de aproximadamente 1 mmol/L. Puesto que se requiere poco cAMP, la concentración intracelular de cAMP (alrededor de 1 nmol/L) es tres órdenes de magnitud por debajo de la del ATP. Otros ejemplos son la adenosina 3ʹ-fosfato-5ʹ-fosfosulfato (fig. 32-11), el donador de sulfato para proteoglucanos sulfatados (cap. 48) y para conjugados Figura 32-8 Estructuras de la hipoxantina, xantina y ácido úrico, dibujadas como los tautómeros oxo. O H3C NH2 N N N CH3 Figura 32-9 Cafeína, una trimetilxantina. Las dimetilxantinas teobromina y teofilina son similares, pero carecen del grupo metilo en N-1 y en N-7, respectivamente. comprenden hipoxantina, xantina y ácido úrico (fig. 32-8) que son intermediarios en el catabolismo de la adenina y la guanina (cap. 33). Los heterociclos metilados de vegetales incluyen los derivados de xantina: cafeína del café, teofilina del té y teobromina del cacao (fig. 32-9). 32 Bender.indd 288 H2N CH2 N N HN N N O O N N CH3 O O CH2 O – O P O – O O Figura 32-10 N N O P O O OH OH cAMP, AMP 3’,5’-cíclico, y cGMP, GMP 3’,5’-cíclico. P Adenina Figura 32-11 Ribosa P O SO32– Adenosina 3’-fosfato-5’-fosfosulfato. 27/11/09 14:34:34 cAPíTULO 32 NH2 N N – CH3 CH2 COO CH CH2 CH2 S Cuadro 32-2 Muchas coenzimas y compuestos relacionados son derivados del adenosina monofosfato NH2 N N N N O + R NH3 O P O O Adenina N N O + HO 289 Nucleótidos CH2 – n O OH R'' O OR' Metionina Figura 32-12 Adenosina Coenzima S-Adenosilmetionina. sulfato de fármacos, y el donador de grupo metilo S-adenosilmetionina (fig. 32-12). El GTP sirve como un regulador alostérico y como una fuente de energía para la síntesis de proteína, y el cGMP (fig. 32-10) sirve como un segundo mensajero en respuesta al óxido nítrico (NO) durante la relajación del músculo liso (cap. 49). Los derivados UDP-azúcar participan en epimerizaciones de azúcar y en la biosíntesis de glucógeno, disacáridos glucosilo, y los oligosacáridos de glucoproteínas y proteoglucanos (caps. 47 y 48). El ácido UDPglucurónico forma los conjugados glucurónido urinarios de la bilirrubina (cap. 31) y de muchos medicamentos, incluso el ácido acetilsalicílico (aspirina). El CTP participa en la biosíntesis de fosfoglicéridos, esfingomielina, y otras esfingosinas sustituidas (cap. 24). Finalmente, muchas coenzimas incorporan nucleótidos, así como estructuras similares a nucleótidos purina y pirimidina (cuadro 32-2). Los nucleósido trifosfatos tienen alto potencial de transferencia de grupo Los anhídridos ácidos, al contrario de los ésteres fosfato, tienen alto potencial de transferencia de grupo. La ΔG0ʹ para la hidrólisis de cada uno de los dos grupos fosforilo terminales (β y γ) de nucleósido trifosfatos es de aproximadamente −7 kcal/mol (−30 kJ/mol). El alto potencial de transferencia de grupo de nucleósido trifosfatos purina y pirimidina les permite funcionar como reactivos de transferencia de grupo, con mayor frecuencia del grupo γ-fosforilo. La división de un enlace anhídrido ácido típicamente está unida a un proceso muy endergónico, como la síntesis de enlace covalente; p. ej., polimerización de nucleósido trifosfatos para formar un ácido nucleico. ANÁLOGOS DE NUCLEÓTIDO SINTÉTICOS SE USAN EN QUIMIOTERAPIA Análogos sintéticos de purinas, pirimidinas, nucleósidos y nucleótidos modificados en el anillo heterocíclico o en la porción azúcar, tienen muchas aplicaciones en medicina clínica. Sus efectos tóxicos reflejan inhibición de enzimas esenciales para la síntesis de ácido nucleico o su incorporación hacia ácidos nucleicos con alteración resultante de la formación de pares de bases. Los oncólogos emplean 32 Bender.indd 289 D-Ribosa r r’ r” n 0 Metionina activa Metioninaa H H Aminoácido adenilatos Aminoácido H H Sulfato activo SO3 H PO3 1 H PO3 1 2− AMP 3’,5’-cíclico 1 2− 2− NADb Nicotinamida H H 2 NADPb Nicotinamida PO32− H 2 FAD Riboflavina H H 2 Coenzima A Pantotenato H PO32− 2 Remplaza al grupo fosforilo. R es un derivado de la vitamina B. a b 5-fluorouracilo o 5-yodouracilo, 3-desoxiuridina, 6-tioguanina y 6-mercaptopurina, 5- o 6-azauridina, 5- o 6-azacitidina y 8-azaguanina (fig. 32-13), que se incorporan hacia el DNA antes de la división celular. El análogo de purina alopurinol, usado en el tratamiento de hiperuricemia y gota, inhibe la biosíntesis de purina y la actividad de la xantina oxidasa. La citarabina se usa en la quimioterapia de cáncer, y la azatioprina, que se cataboliza hacia 6-mercaptopurina, se emplea durante trasplante de órgano para suprimir el rechazo inmunitario (fig. 32-14). Los análogos de nucleósido trifosfato no hidrolizables sirven como instrumentos de investigación Los análogos sintéticos, no hidrolizables, de nucleósido trifosfatos (fig. 32-15) permiten a los investigadores distinguir entre los efectos de nucleótidos debidos a la transferencia de fosforilo y los efectos mediados por la ocupación de sitios de unión a nucleótido alostéricos sobre enzimas reguladas. EL DNA Y RNA SON POLINUCLEÓTIDOS El grupo 5ʹ-fosforilo de un mononucleótido puede esterificar un segundo grupo hidroxilo, lo que forma un fosfodiéster. Con mayor frecuencia, este segundo grupo hidroxilo es el 3ʹ-OH de la pentosa 27/11/09 14:34:36 290 SeccióN iV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales O O HN I 5 HN 6 O HO O HO H 5-Yodo-2′-desoxiuridina N HO 5-Fluorouracilo N N 6 OH H2N N H 6-Mercaptopurina Figura 32-13 N 8-Azaguanina OH N N1 6 2 N N H 6-Tioguanina 5 N 4 3 N H N Alopurinol Análogos de pirimidina y purina sintéticos seleccionados. NH2 O Pu/Py N HO O O P O O– O N R O P O P O– O– Nucleósido trifosfato madre Pu/Py HO O O– O R O P O O O– OH P O CH2 O– P O– O– Derivado β-γ-metileno Citarabina O Pu/Py R O P O– NO2 N N H N 6-Azauridina SH 6 8 H2N N H SH N HN 5 O 2′ O O F HN N HO O N N O N O O P O– H N O P O– O– Derivado β-γ-imino N H3C S NH N N N Figura 32-15 Derivados sintéticos de nucleósido trifosfatos incapaces de pasar por liberación hidrolítica del grupo fosforilo terminal. (Pu/Py, una base purina o pirimidina; R, ribosa o desoxirribosa.) Se muestran el nucleósido trifosfato madre (hidrolizable) (arriba) y los derivados β-metileno (centro) y γ-imino (abajo) no hidrolizables. Azatioprina Figura 32-14 Arabinosilcitocina (citarabina) y azatioprina. de un segundo nucleótido. Esto forma un dinucleótido en el cual las porciones pentosa están enlazadas mediante un enlace 3ʹ,5ʹ-fosfodiéster para formar el “esqueleto” del RNA y el DNA. La formación de un dinucleótido puede representarse como la eliminación de agua entre dos mononucleótidos. Sin embargo, la formación biológica de dinucleótidos no ocurre de esta manera porque la reacción inversa, la hidrólisis del enlace fosfodiéster, se favorece fuertemente 32 Bender.indd 290 desde el punto de vista termodinámico. Empero, a pesar de una ΔG en extremo favorable, en ausencia de catálisis por fosfodiesterasas, la hidrólisis de los enlaces fosfodiéster del DNA únicamente sucede al cabo de periodos prolongados. Por consiguiente, el DNA persiste durante lapsos considerables, y se ha detectado incluso en fósiles. Los RNA son mucho menos estables que el DNA porque el grupo 2ʹ-hidroxilo del RNA (que no se encuentra en el DNA) funciona como un nucleófilo en el transcurso de la hidrólisis del enlace 3ʹ,5ʹ-fosfodiéster. La modificación postraduccional de polinucleótidos preformados puede generar estructuras adicionales como seudouridina, 27/11/09 14:34:38 cAPíTULO 32 un nucleósido en el cual una D-ribosa está enlazada a C-5 del uracilo por medio de un enlace entre un carbono y otro, en lugar de mediante el enlace β-N-glucosídico habitual. El nucleótido ácido seudouridílico (ψ) surge por reordenamiento de un UMP de un tRNA preformado. De modo similar, la metilación por S-adenosilmetionina de un UMP de tRNA preformado forma TMP (timidina monofosfato), que contiene ribosa más que desoxirribosa. Los enlaces fosfodiéster unen los carbonos 3ʹ y 5ʹ de monómeros adyacentes. De esta manera, cada extremo de un polímero de nucleótido es distinto; por tanto, se hace referencia al “extremo 5ʹ” o el “extremo 3ʹ” de un polinucleótido; el extremo 5ʹ es aquel con un 5ʹ-hidroxilo libre o fosforilado. La secuencia de bases o estructura primaria de un polinucleótido puede representarse como se muestra a continuación. El enlace de fosfodiéster se representa por P o p, las bases por medio de una letra única, y las pentosas mediante una línea vertical. rESuMEN ■ ■ ■ ■ ■ A T C A ■ P P P P OH Cuando todos los enlaces fosfodiéster son 3ʹ → 5ʹ, es posible una notación más compacta: pGpGpApTpCpA Esta representación indica que el 5ʹ-hidroxilo —no así el 3ʹ-hidroxilo— está fosforilado. La representación más compacta sólo muestra la secuencia de bases con el extremo 5ʹ a la izquierda y el extremo 3ʹ 32 Bender.indd 291 291 a la derecha. Se supone que los grupos fosforilo están presentes, pero no se muestran. ■ Los polinucleótidos son macromoléculas direccionales Nucleótidos En condiciones fisiológicas, predominan los tautómeros amino y oxo de las purinas, pirimidinas y sus derivados. Los ácidos nucleicos contienen, además de A, G, C, T y U, trazas de 5-metilcitosina, 5-hidroximetilcitosina, seudouridina (ψ), o heterociclos N-metilados. Casi todos los nucleósidos contienen D-ribosa o 2-desoxi-D-ribosa enlazada a N-1 de una pirimidina o a N-9 de una purina por medio de un enlace β-glucosídico cuyos conformadores sin predominan. Un número con una prima ubica la posición del fosfato en los azúcares de mononucleótidos (p. ej., 3ʹ-GMP, 5ʹ-dCMP). Grupos fosforilo adicionales enlazados al primero mediante enlaces anhídrido de ácido forman nucleósido difosfatos y trifosfatos. Los nucleósido trifosfatos tienen alto potencial de transferencia de grupo, y participan en síntesis de enlaces covalentes. Los fosfodiésteres cíclicos cAMP y cGMP funcionan como segundos mensajeros intracelulares. Los mononucleótidos unidos por enlaces 3ʹ → 5ʹ-fosfodiéster forman polinucleótidos, macromoléculas direccionales con extremos 3ʹ y 5ʹ distintos. Para pTpGpTp o TGCATCA, el extremo 5ʹ está a la izquierda, y todos los enlaces fosfodiéster son 3ʹ → 5ʹ. Los análogos sintéticos de bases purina y pirimidina y sus derivados sirven como fármacos anticáncer, sea al inhibir una enzima de la biosíntesis de nucleótido o al incorporarse en el DNA o el RNA. rEFErENCiaS Adams RLP, Knowler JT, Leader DP: The Biochemistry of the Nucleic Acids, 11th ed. Chapman & Hall, 1992. Blackburn GM, Gait MJ: Nucleic Acids in Chemistry & Biology. IRL Press, 1990. Pacher P, Nivorozhkin A, Szabo C: Therapeutic effects of xanthine oxidase inhibitors: renaissance half a century after the discovery of allopurinol. Pharmacol Rev 2006;58:87. 27/11/09 14:34:39 33 c Metabolismo de nucleótidos purina y pirimidina Victor W. Rodwell, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA Aun cuando los seres humanos consumen una dieta con alto conte­ nido de nucleoproteínas, las purinas y pirimidinas de la dieta no se incorporan de modo directo hacia los ácidos nucleicos de tejidos. Los seres humanos sintetizan los ácidos nucleicos, ATP, NAD+, coenzima A, etc., a partir de intermediarios anfibólicos. Sin embar­ go, los análogos de purina o pirimidina inyectados, entre ellos fár­ macos anticáncer potenciales, pueden incorporarse hacia el DNA. La biosíntesis de purina y pirimidina oxirribonucleótidos y desoxi­ ribonucleótidos (NTP y dNTP) es un evento regulado con exacti­ tud, coordinado por medio de mecanismos de retroacción que ase­ guran su producción en cantidades apropiadas, y en momentos que se ajustan a una demanda fisiológica variable (p. ej., división celu­ lar). Las enfermedades de seres humanos que incluyen anorma­ lidades del metabolismo de la purina son gota, síndrome de Lesch­ Nyhan, deficiencia de adenosina desaminasa, y deficiencia de nucleósido purina fosforilasa. Las enfermedades de la biosíntesis de la pirimidina son más raras, pero incluyen acidurias oróticas. Al contrario de los uratos, los productos del catabolismo de pirimidina (dióxido de carbono, amoniaco, β­alanina y γ­aminoisobutirato) son muy solubles. Un trastorno genético del catabolismo de la piri­ midina es la aciduria β­hidroxibutírica, debida a deficiencia total o parcial de la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa. Este tras­ torno del catabolismo de pirimidina, también conocido como ura­ ciluria­timinuria combinada, también es un trastorno de la biosín­ tesis de β­aminoácidos, dado que la formación de β­alanina y β­aminoisobutirato está alterada. Una forma no genética puede des­ encadenarse por la administración del medicamento anticáncer 5­fluorouracilo a pacientes que tienen concentraciones bajas de di­ hidropirimidina deshidrogenasa. LAS PURINAS Y PIRIMIDINAS SON NO ESENCIALES EN LO QUE SE REFIERE A LA DIETA Los tejidos humanos son capaces de sintetizar purinas y pirimidinas a partir de intermediarios anfibólicos. Los ácidos nucleicos y nu­ cleótidos ingeridos, que en consecuencia son no esenciales en la dieta, se degradan en el tubo digestivo hacia mononucleótidos, que se pueden absorber o convertir en bases purina y pirimidina. A con­ tinuación, las bases purina se oxidan hacia ácido úrico, que se puede absorber o excretar en la orina. Si bien poca o ninguna purina o pi­ rimidina de la dieta se incorpora hacia ácidos nucleicos de tejidos, a P í t u l o los compuestos inyectados sí lo hacen. De este modo, la incorpora­ ción de [3H]timidina inyectada hacia DNA recién sintetizado, se usa para medir el índice de síntesis de DNA. BIOSÍNTESIS DE NUCLEÓTIDOS PURINA Con la excepción de protozoarios parásitos, todas las formas de vida sintetizan nucleótidos purina y pirimidina. La síntesis a partir de intermediarios anfibólicos procede a índices controlados apropia­ dos para todas las funciones celulares. Con el fin de lograr homeos­ tasis, mecanismos intracelulares detectan y regulan el tamaño del fondo común de nucleótido trifosfatos (NTP), que aumenta durante el crecimiento, o la regeneración de tejido, cuando las células se es­ tán dividiendo con rapidez. Los nucleótidos purina y pirimidina se sintetizan in vivo a índices congruentes con la necesidad fisiológica. En las investigaciones tempranas de biosíntesis de nucleótido se em­ plearon primero aves, y más tarde Escherichia coli. Precursores iso­ tópicos suministrados como alimento a palomas establecieron la fuente de cada átomo de una purina (fig. 33­1) e iniciaron el estudio de los intermediarios de la biosíntesis de purina. Tejidos de aves sir­ vieron como una fuente de genes clonados que codifican para enzi­ mas de la biosíntesis de purina y las proteínas reguladoras que con­ trolan el índice de biosíntesis de purina. Los tres procesos que contribuyen a la biosíntesis de nucleótido purina son, en orden de importancia decreciente: 1. Síntesis a partir de intermediarios anfibólicos (síntesis de novo). 2. Fosforribosilación de purinas. 3. Fosforilación de nucleósidos purina. LA INOSINA MONOFOSFATO (IMP) SE SINTETIZA A PARTIR DE INTERMEDIARIOS ANFIBÓLICOS La figura 33­2 ilustra los intermediarios y las 11 reacciones cataliza­ das por enzima que convierten a la α­d­ribosa 5­fosfato en inosina monofosfato (IMP). Además de ser el primer intermediario forma­ do en la vía de novo para la biosíntesis de purina, el 5­fosforribosil 5­pirofosfato (estructura II, figura 33­2) es un intermediario en la vía de recuperación de purina, y en la biosíntesis de nucleótidos pi­ rimidina, NAD+ y NADP+. A continuación, ramas separadas con­ 292 33 Bender.indd 292 27/11/09 14:35:20 capítulo 33 CO2 respiratorio C 6 5 C Pu + PR-PP → Pu-RP + PPi N 7 8 C N10 -Formiltetrahidrofolato 2 3 N 4 C C 9 N H N 5,N10 -Meteniltetrahidrofolato Nitrógeno amida de la glutamina Figura 33-1 Fuentes de los átomos de nitrógeno y carbono del anillo de purina. Los átomos 4, 5 y 7 (resaltados en azul) se derivan de la glicina. ducen a AMP y GMP (fig. 33­3). La transferencia subsiguiente de fosforilo desde ATP convierte el AMP y el GMP en ADP y GDP. La conversión de GDP en GTP incluye una segunda transferencia de fosforilo desde el ATP, mientras que la conversión de ADP en ATP se logra principalmente mediante fosforilación oxidativa (cap. 13). Catalíticos multifuncionales participan en la biosíntesis de nucleótido purina En procariotas, un polipéptido diferente cataliza cada reacción de la figura 33­2. En contraste, en eucariotas las enzimas son polipépti­ dos con múltiples actividades catalíticas, cuyos sitios catalíticos ad­ yacentes facilitan la canalización de intermediarios entre sitios. Tres enzimas multifuncionales catalizan las reacciones ,  y ; las reacciones  y , y las reacciones  y , de la figura 33­2. Fármacos antifolato o análogos de glutamina bloquean la biosíntesis de nucleótido purina Derivados del tetrahidrofolato contribuyen con los carbonos añadi­ dos en las reacciones  y  de la figura 33­2. Los estados de defi­ ciencia de purina, aunque son raros en seres humanos, por lo gene­ ral reflejan una deficiencia de ácido fólico. En la quimioterapia de cáncer se han usado compuestos que inhiben la formación de te­ trahidrofolatos y que, por ende, bloquean la síntesis de purina. Los compuestos inhibidores y las reacciones que inhiben comprenden azaserina (reacción , fig. 33­2), diazanorleucina (reacción , fig. 33­2), 6-mercaptopurina (reacciones  y , fig. 33­3) y ácido micofenólico (reacción , fig. 33­3). LAS “REACCIONES DE RECUPERACIÓN” CONVIERTEN PURINAS Y SUS NUCLEÓSIDOS EN MONONUCLEÓTIDOS La conversión de purinas, sus ribonucleósidos, y sus desoxirribonu­ cleósidos en mononucleótidos incluye “reacciones de recuperación” que requieren mucho menos energía que la síntesis de novo. El me­ canismo más importante comprende fosforribosilación por PRPP 33 Bender.indd 293 293 (estructura II, fig. 33­2) de una purina (Pu) libre para formar una purina 5ʹ­mononucleótido (Pu­RP). Glicina Aspartato N1 Metabolismo de nucleótidos purina y pirimidina La transferencia de fosforilo desde ATP, catalizada por la adenosina e hipoxantina fosforribosil transferasas, convierte a la adenina, hi­ poxantina y guanina en sus mononucleótidos (fig. 33­4). Un segundo mecanismo de recuperación incluye la transfe­ rencia de fosforilo desde ATP hacia una purina ribonucleósido (Pu­R): Pu-R + ATP → PuR-P + ADP La fosforilación de los nucleótidos purina, catalizada por la adeno­ sina cinasa, convierte la adenosina y la desoxiadenosina en AMP y dAMP. De manera similar, la desoxicitidina cinasa fosforila a la des­ oxicitidina y a la 2ʹ­desoxiguanosina, lo que forma dCMP y dGMP. El hígado, el principal sitio de biosíntesis de nucleótido purina, proporciona purinas y nucleósidos purina para recuperación y para utilización por tejidos incapaces de su biosíntesis. El tejido del cere­ bro de seres humanos tiene cifras bajas de PRPP glutamil amido­ transferasa (reacción , figura 33­2) y, por consiguiente, depende en parte de purinas exógenas. Los eritrocitos y los leucocitos poli­ morfonucleares no pueden sintetizar 5­fosforribosilamina (estruc­ tura III, fig. 33­2) y, por tanto, utilizan purinas exógenas para for­ mar nucleótidos. LA BIOSÍNTESIS HEPÁTICA DE PURINA ESTÁ REGULADA DE MODO ESTRICTO La retroacción por aMP y gMP regula a la PrPP glutamil amidotransferasa Dado que la biosíntesis de IMP consume glicina, glutamina, deri­ vados de tetrahidrofolato, aspartato y ATP, es ventajoso regular la biosíntesis de purina. El principal determinante del índice de la biosíntesis de novo de nucleótido purina es la concentración de PRPP, que está en función de sus índices de síntesis, utilización y degradación. El índice de síntesis de PRPP depende de la disponi­ bilidad de ribosa 5­fosfato, y de la actividad de la PRPP sintasa, una enzima sensible a inhibición por retroacción por AMP, ADP, GMP y GDP (fig. 33­5). La retroacción por aMP y gMP regula su formación a partir de iMP Dos mecanismos regulan la conversión de IMP en ATP y GTP (fig. 33­6). El AMP y GMP inhiben por retroacción a la adenilosuccinato sintasa y a la IMP deshidrogenasa (reacciones  y , fig. 33­3), respectivamente. Además, la conversión de IMP en adenilosuccina­ to en ruta hacia AMP necesita GTP, y la conversión de xantinilato (XMP) en GMP requiere ATP. Así, esta regulación cruzada entre las vías del metabolismo del IMP, sirve para disminuir la síntesis de una nucleótido purina cuando hay una deficiencia del otro nucleótido. El AMP y GMP también inhiben a la hipoxantina­guanina fosforri­ bosiltransferasa, que convierte a la hipoxantina y la guanina en IMP 27/11/09 14:35:20 33 Bender.indd 294 H H OH H OH OH H O CH 2 C O C C 1 CH R-5- P N N PRPP sintasa Mg 2+ ATP H 2 1 H O H OH OH 3 H 4 O CH 2 P 3 6 H2 N N1 H C O 5 4 C C CH R-5- P N N O C O C CH R-5- P N N 3 6 C O H2 N –O H OH OH H 9 + NH 3 O 4 5 CH R-5- P N N IMP ciclohidrolasa Cierre de anillo 11 H2O 3 P 7 O CO2 N C H R-5- P N CH C C CH R-5- P N N Aminoimidazol ribosil-5-fosfato (VII) C HC N _ _ Inosina monofosfato (IMP) (XII) HC HN O H NH OH OH H O C4 + Glicinamida ribosil-5-fosfato (IV) H H2C O H2N ADP + Pi Mg 2+ O– ATP C4 VII carboxilasa Aminoimidazol carboxilato ribosil-5-fosfato (VIII) NH3 + H H O CH 2 5-Fosfo-β-D-ribosilamina (III) Formimidoimidazol carboxamida ribosil-5-fosfato (XI) C C H N H H2N O 8 – OOC CH2 HC – OOC IX sintetasa H2O 2 PRPP glutamil amidotransferasa Aspartato P Glutamina H 2O P O Glutamato PPi H2C 5 Biosíntesis de purina a partir de la ribosa 5-fosfato y ATP. Considere las explicaciones en el texto.  P , PO32 o PO2 .) Formiltransferasa 10 N 10 -FormilH 4 folato H 4 folato Aminoimidazol succinil carboxamida ribosil-5-fosfato (IX) – OOC H 2C HC – OOC Fosforribosil pirofosfato (PRPP) (II) P O AMP Aminoimidazol carboxamida ribosil-5-fosfato (X) H2N H2 N Adenilosuccinasa 9 Fumarato – OOC HC CH COO – α-D-Ribosa 5-fosfato (I) O 5 H2C 5 7 NH 3 H 4 folato VII sintetasa 6 ATP, Mg 2 + H2O Cierre de anillo O O R-5- P 9 NH 7 8 CH N H Gln ATP 2 Mg + Glu Formilglicinamidina ribosil-5-fosfato (VI) 3 HN C4 H2C5 5 Formilglicinamida ribosil-5-fosfato (V) R-5- P NH 7 8 CH H N C4 9 H2C5 O VI sintetasa Formiltransferasa 4 N 5,N10MetenilH 4 folato SEccIÓN IV Figura 33-2 P 5 NH 3+ 7 Glicina 294 Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales 27/11/09 14:35:22 capítulo 33 – OOC O N HN N 12 GTP, Mg 2 N R-5- P Monofosfato de inosina (IMP) NAD + 14 OOC H C H C 13 COO – NH 2 N N + N N Adenilosuccinato sintasa Adenilosuccinasa R-5- P Adenilosuccinato (AMPS) N N R-5- P Monofosfato de adenosina (AMP) IMP deshidrogenasa O Glutamina N HN N H ATP N Figura 33-3 O Glutamato 15 R-5- P Xantosina monofosfato (XMP) Transamidinasa N HN H2N N N R-5- P Monofosfato de guanosina (GMP) Conversión de IMP en AMP y GMP. y GMP (fig. 33­4), y el GMP inhibe por retroacción a la PRPP gluta­ mil amidotransferasa (reacción , fig. 33­2). LA REDUCCIÓN DE RIBONUCLEÓSIDO DIFOSFATOS FORMA DESOXIRRIBONUCLEÓSIDO DIFOSFATOS La reducción del 2ʹ­hidroxilo de purina y pirimidina ribonucleóti­ dos, catalizada por el complejo de ribonucleótido reductasa (fig. 33­7), forma desoxirribonucleósido difosfatos (dNDP). El complejo enzimático sólo es funcional cuando las células están sintetizando de modo activo DNA. La reducción necesita tiorredoxina, tiorre­ doxina reductasa y NADPH. El reductor inmediato, tiorredoxina reducida, se produce por la NADPH: tiorredoxina reductasa (fig. 33­7). La reducción de ribonucleósido difosfatos (NDP) hacia dNDP está sujeta a controles reguladores complejos que logran pro­ ducción equilibrada de desoxirribonucleótidos para la síntesis de DNA (fig. 33­8). BIOSÍNTESIS DE NUCLEÓTIDOS PIRIMIDINA La figura 33­9 ilustra los intermediarios y las enzimas de la biosín­ tesis de nucleótido pirimidina. El catalítico para la reacción inicial es la carbamoil fosfato sintasa II citosólica, una enzima diferente de la carbamoil fosfato sintasa I mitocondrial de la síntesis de la urea 33 Bender.indd 295 – H 2O NADH + H+ O H – C C COO H2 NH N N – H – OOC C C COO H2 + H 2O NH 3 295 Metabolismo de nucleótidos purina y pirimidina (fig. 28­12). De esta manera, la compartamentalización proporcio­ na dos fondos comunes independientes de carbamoil fosfato. El PRPP, un participante temprano de la síntesis de nucleótido purina (fig. 33­2), es un participante mucho más tardío en la biosíntesis de pirimidina. Proteínas multifuncionales catalizan las reacciones tempranas de la biosíntesis de pirimidina Cinco de las primeras seis actividades enzimáticas de la biosíntesis de pirimidina residen en polipéptidos multifuncionales. Uno de esos polipéptidos cataliza las tres primeras reacciones de la figura 33­9, y asegura canalización eficiente de carbamoil fosfato hacia la biosíntesis de pirimidina. Una segunda enzima bifuncional cataliza las reacciones  y  de la figura 33­9. LOS DESOXIRRIBONUCLEÓSIDOS DE URACILO Y CITOSINA SE RECUPERAN Mientras que las células de mamífero reutilizan pocas pirimidinas libres, las “reacciones de recuperación” convierten los pirimidina ribonucleósidos uridina y citidina, y los pirimidina desoxirribonu­ cleósidos timidina y desoxicitidina hacia sus nucleótidos respecti­ vos. Las fosforribosiltransferasas (cinasas) dependientes de ATP catalizan la fosforilación de los difosfatos de la 2ʹ­desoxicitidina, 2ʹ­desoxiguanosina y 2ʹ­desoxiadenosina hacia sus nucleósido 27/11/09 14:35:23 296 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales NH 2 PRPP N N N N N H N Ribosa 5-fosfato + ATP NH 2 PP i P Adenina N N H2C O 1 PRPP O Adenina fosforribosiltransferasa H H 2 H – 5-Fosforribosilamina H OH OH AMP O N HN PRPP O PP i N H Hipoxantina N O O H Guanina H H IMP H OH OH IMP O N N – H2C O H2N – N N P Hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa HN N HN N HN N H H2N PRPP O GMP ADP GDP ATP GTP N N PP i P AMP H2C O H H H H OH OH GMP Figura 33-4 Fosforribosilación de adenina, hipoxantina y guanina para formar AMP, IMP y GMP, respectivamente. Figura 33-5 Control del índice de la biosíntesis de novo de nucleótido purina. Las reacciones  y  son catalizadas por la PRPP sintasa y por la PRPP glutamil amidotransferasa, respectivamente. Las líneas continuas representan el flujo químico. Las líneas de color rojo discontinuas representan inhibición por retroacción por intermediarios de la vía. IMP trifosfatos correspondientes. Más aún, la orotato fosforribosiltrans­ ferasa (reacción , fig. 33­9), una enzima de la síntesis de nucleóti­ do pirimidina, recupera ácido orótico al convertirlo en orotidina monofosfato (OMP). El metotrexato bloquea la reducción de dihidrofolato La reacción  de la figura 33­9 es la única reacción de la biosíntesis de nucleótido pirimidina que requiere un derivado tetrahidrofolato. El grupo metileno del N5,N10­metileno­tetrahidrofolato se reduce hacia el grupo metilo que se transfiere, y el tetrahidrofolato se oxi­ da hacia dihidrofolato. Para que ocurra síntesis adicional de pirimi­ dina, es necesario que el dihidrofolato se reduzca de regreso hacia tetrahidrofolato, una reacción catalizada por la dihidrofolato reduc­ tasa. Así, las células en división, que deben generar TMP y dihidro­ folato, son en especial sensibles a inhibidores de la dihidrofolato reductasa, como el medicamento anticáncer metotrexato. 33 Bender.indd 296 – – + AMPS XMP + AMP GMP ADP GDP ATP GTP Figura 33-6 Regulación de la interconversión de IMP en nucleótidos adenosina y guanosina. Las líneas continuas representan el flujo químico. Las líneas de color verde discontinuas representan asas de retroacción positiva. Las líneas de color rojo discontinuas representan asas de retroacción negativa. 27/11/09 14:35:26 capítulo 33 Ribonucleótido reductasa Ribonucleósido difosfato 2′-Desoxirribonucleósido difosfato Tiorredoxina reducida Tiorredoxina reductasa NADPH + H+ Figura 33-7 Reducción de ribonucleósido difosfatos hacia 2’-desoxirribonucleósido difosfatos. Ciertos análogos de pirimidina son sustratos para enzimas de la biosíntesis de nucleótido pirimidina La orotato fosforribosiltransferasa (reacción , fig. 33­9) convierte el fármaco alopurinol (fig. 32­13) en un nucleótido en el cual el ri­ bosil fosfato está fijo al N­1 del anillo de pirimidina. La orotato fos­ PRPP La expresión de gen y la actividad enzimática están reguladas Las actividades de la primera y segunda enzimas de la biosíntesis de nucleótido pirimidina están controladas por medio de regulación alostérica. La carbamoil fosfato sintasa II (reacción , fig. 33­9) es inhibida por UTP y nucleótidos purina, pero activada por el PRPP. La aspartato transcarbamoilasa (reacción , fig. 33­9) es inhibida por CTP, pero activada por ATP (fig. 33­10). Además, las primeras tres y las últimas dos enzimas de la vía están reguladas por represión y desrepresión coordinadas. Las biosíntesis de nucleótido purina y pirimidina están reguladas de modo coordinado LOS SERES HUMANOS CATABOLIZAN LAS PURINAS HACIA ÁCIDO ÚRICO ATP + ribosa 5-fosfato + – ATP + CO2 + glutamina Aspartato CAP – – CAA – DHOA OMP UMP CTP UTP Los seres humanos convierten la adenosina y guanosina en ácido úrico (fig. 33­11). La adenosina desaminasa convierte primero la adenosina en inosina. En mamíferos que no son los primates supe­ riores, la uricasa convierte el ácido úrico en el producto hidrosolu­ ble alantoína. Empero, dado que los seres humanos carecen de uri­ casa, en ellos el producto terminal del catabolismo de la purina es el ácido úrico. OA PRPP UDP UDP TDP dUDP Figura 33-8 Regulación de la reducción de purina y pirimidina ribonucleótidos hacia sus 2’-desoxirribonucleótidos respectivos. La línea de color verde discontinua representa un asa de retroacción positiva. Las líneas de color rojo discontinuas representan asas de retroacción negativa. 33 Bender.indd 297 forribosiltransferasa también fosforribosila al medicamento anti­ cáncer 5-fluorouracilo (fig. 32­13). Las biosíntesis de purina y pirimidina corren parejas una con otra mol por mol, lo que sugiere control coordinado de su biosíntesis. Varios sitios de regulación cruzada caracterizan la biosíntesis de nu­ cleótido purina y pirimidina. La PRPP sintasa (reacción , fig. 33­2), que forma un precursor esencial para ambos procesos, es in­ hibida por retroacción por los nucleótidos purina y pirimidina. Nucleótidos purina TMP 297 REGULACIÓN DE LA BIOSÍNTESIS DE NUCLEÓTIDO PIRIMIDINA Tiorredoxina oxidada NADP+ Metabolismo de nucleótidos purina y pirimidina LA GOTA ES UN TRASTORNO METABÓLICO DEL CATABOLISMO DE LA PURINA Diversos defectos genéticos de la PRPP sintetasa (reacción , fig. 33­2) se presentan en clínica como gota. Cada defecto —p. ej., una Vmáx alta, afinidad incrementada por la ribosa 5­fosfato, o resisten­ cia a inhibición por retroacción— da por resultado producción y excreción excesivas de catabolitos de purina. Cuando las cifras séri­ cas de urato exceden el límite de solubilidad, el urato de sodio se cristaliza en los tejidos blandos y las articulaciones, y origina una reacción inflamatoria, la artritis gotosa. Con todo, la mayor parte de los casos de gota reflejan anormalidades de la manipulación re­ nal de ácido úrico. 27/11/09 14:35:27 298 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales CO 2 + glutamina + ATP Carbamoil fosfato sintasa II 1 O –O C 4 +H N 3 3 O C O + 2 Carbamoil fosfato (CAP) 5 CH 2 6 1 P + H3 N Aspartato transcarbamoilasa C H COO – O –O C 4 H2 N 3 5 CH 2 O O Pi HN 6 CH 3 1 – N COO H Ácido carbamoil aspártico (CAA) C 2 Ácido aspártico 2 O Dihidroorotasa C H2O C N H CH 2 CH COO – Ácido dihidroorótico (DHOA) NAD + Dihidroorotato deshidrogenasa 4 NADH + H + O HN 3 4 6 5 2 1 6 O O CO 2 N O COO – N R-5- P OMP O PRPP 5 HN Ácido orotidílico descarboxilasa R-5- P PP i Orotato fosforribosiltransferasa OMP HN O N H COO – Ácido orótico (OA) ATP 7 NADPH + H+ ADP NADP+ 10 UDP dUDP (desoxiuridina difosfato) H2O Ribonucleótido reductasa ATP 8 11 ADP UTP ATP N 5,N10 -metileno H4 folato Glutamina Timidilato sintasa CTP sintasa 12 9 H2 folato NH 2 O N O CH 3 HN O N R-5- P - P - P CTP Figura 33-9 N dR-5- P TMP La vía biosintética para nucleótidos pirimidina. OTROS TRASTORNOS DEL CATABOLISMO DE PURINA Aun cuando los estados de deficiencia de purina son raros en seres humanos hay muchos trastornos genéticos del catabolismo de puri­ na. Las hiperuricemias pueden diferenciarse con base en si los en­ fermos excretan cantidades normales o excesivas de uratos totales. Algunas hiperuricemias reflejan defectos enzimáticos específicos. Otras son consecutivas a enfermedades como cáncer o psoriasis que aumentan el recambio de tejido. 33 Bender.indd 298 Pi dUMP Síndrome de Lesch-Nyhan Es una hiperuricemia por producción excesiva, que se caracteriza por episodios frecuentes de litiasis por ácido úrico, y un síndrome raro de automutilación, que refleja un defecto de la hipoxantinaguanina fosforribosiltransferasa, una enzima de la recuperación de purina (fig. 33­4). El incremento acompañante del PRPP intrace­ lular causa producción excesiva de purina. Las mutaciones que ami­ noran o suprimen la actividad de la hipoxantina­guanina fosforri­ bosiltransferasa son deleciones, mutaciones por cambio de marco (también conocida como mutación del marco de lectura), sustitu­ ciones de bases y empalme aberrante de mRNA. 27/11/09 14:35:29 capítulo 33 2′dCDP CDP ATP 2′dUDP – – N N + UDP NH2 2′dCTP + – – – 2′dTTP O – + 2′dGDP N N HO H 2C H GDP 2′dGTP H H H OH OH Adenosina – H2O + NH + ADP 2′dADP Control de la biosíntesis de nucleótido pirimidina. Las líneas continuas representan el flujo químico. Las líneas discontinuas de color verde representan regulación por retroacción positiva ⊕, y las de color rojo, retroacción negativa ⊝. Adenosina desaminasa 4 2′dATP Figura 33-10 O O N HN H2N N N HO H 2C La producción excesiva de purina y la hiperuricemia en la enferme­ dad de von Gierke (deficiencia de glucosa-6-fosfatasa) son una consecuencia de generación aumentada del precursor de PRPP ri­ bosa 5­fosfato. Una acidosis láctica relacionada incrementa el um­ bral renal para urato, lo que aumenta los uratos corporales totales. Hipouricemia La hipouricemia y la excreción incrementada de hipoxantina y xan­ tina muestran vínculo con deficiencia de xantina oxidasa (fig. 33­11) debido a un defecto genético o a daño hepático grave. Los individuos con una deficiencia enzimática grave pueden tener xan­ tinuria o litiasis por xantina. H H La deficiencia de adenosina desaminasa (fig. 33­11) se relaciona con una enfermedad por inmunodeficiencia en la cual los linfocitos derivados tanto del timo (células T) como de la médula ósea (células B) son escasos y disfuncionales. Los afectados sufren inmunodefi­ ciencia grave. En ausencia de remplazo de enzima o de trasplante de médula ósea, los lactantes suelen sucumbir a infecciones mortales. La deficiencia de nucleósido purina fosforilasa muestra vínculo con una deficiencia grave de células T pero función de células B al pa­ recer normal. Las disfunciones inmunitarias parecen depender de acumulación de dGTP y dATP, que inhiben la ribonucleótido reduc­ tasa y, de esta manera, agotan los precursores de DNA en las células. EL CATABOLISMO DE PIRIMIDINAS PRODUCE METABOLITOS HIDROSOLUBLES Al contrario de los productos terminales del catabolismo de la puri­ na, los productos terminales del catabolismo de la pirimidina son 33 Bender.indd 299 N N HO H 2C H H OH OH Inosina H O H H H OH OH Guanosina Pi Pi Ribosa 1-fosfato O O N HN N HN H 2N NH N Hipoxantina NH N Guanina H2O + O2 HN3 O H2O2 N HN Deficiencia de adenosina desaminasa y de nucleósido purina fosforilasa N HN O Enfermedad de von gierke 299 Metabolismo de nucleótidos purina y pirimidina O NH NH Xantina H2O + O2 Xantina oxidasa H2O2 O HN O HN O NH NH Ácido úrico Figura 33-11 Formación de ácido úrico a partir de nucleósidos purina por la vía de las bases purina hipoxantina, xantina y guanina. Los purina desoxirribonucleósidos son degradados por la misma vía catabólica y por las mismas enzimas, todas las cuales existen en la mucosa del tubo digestivo de mamíferos. los productos muy hidrosolubles CO2, NH3, β­alanina y β­amino­ isobutirato (fig. 33­12). Los seres humanos transaminan el β­ami­ noisobutirato hacia metilmalonato semialdehído, que a continua­ ción forma succinil­CoA (fig. 20­2). 27/11/09 14:35:30 300 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales la enzima. Un trastorno del catabolismo de pirimidina, también co­ nocido como uraciluria­timinuria combinada, es asimismo un tras­ torno del metabolismo de β­aminoácido, puesto que la formación de β­alanina y de β­aminoisobutirato está alterada. Cuando se debe a un error congénito hay serias complicaciones neurológicas. Una forma no genética se desencadena por la administración del fárma­ co anticáncer 5­fluorouracilo (fig. 32­13) a pacientes que tienen concentraciones bajas de dihidropirimidina deshidrogenasa. NH2 N O N H Citosina 1/2 O 2 NH 3 O O HN HN O O N H Uracilo NADPH + H CH3 N H Timina Dado que en seres humanos ninguna encima cataliza la hidrólisis o la fosforólisis de la seudouridina, este nucleósido poco común se excreta sin cambios en la orina de individuos normales y, de hecho, se aisló primero a partir de la orina. + Dihidropirimidina deshidrogenasa NADP + O O HN H H H H HN O CH3 H H H N H Dihidrouracilo N H Dihidrotimina H2O H2O O H2N COO − CH2 COO − CH3 C H C CH2 N O H β-Ureidoisobutirato (N-carbamoil-β-aminoisobutirato) H2N C CH2 N H β-Ureidopropionato (N-carbamoil-β-alanina) O CO2 + NH3 CH2 CH2 β-Alanina COO− H 3N + CH2 CH COO− CH3 β -Aminoisobutirato Figura 33-12 Catabolismo de las pirimidinas. La β-ureidopropionasa hepática cataliza la formación tanto de β-alanina como de β-aminoisobutirato a partir de sus precursores de pirimidina. La excreción de β­aminoisobutirato aumenta en la leucemia y en la exposición grave a rayos X, debido al incremento de la destruc­ ción de DNA. Aun así, muchas personas de ascendencia china o ja­ ponesa excretan de modo sistemático β­aminoisobutirato. Los tras­ tornos del metabolismo de la β­alanina y del β­aminoisobutirato surgen por defectos de las enzimas del catabolismo de pirimidina. Éstos comprenden aciduria β-hidroxibutírica, un trastorno debido a deficiencia total o parcial de la enzima dihidropirimidina deshidrogenasa (fig. 33­12). La enfermedad genética refleja una falta de 33 Bender.indd 300 LA PRODUCCIÓN EXCESIVA DE CATABOLITOS DE PIRIMIDINA SÓLO RARA VEZ SE RELACIONA CON ANORMALIDADES IMPORTANTES EN CLÍNICA Dado que los productos terminales del catabolismo de la pirimidina son muy hidrosolubles, la producción excesiva de pirimidina suscita pocos signos o síntomas clínicos. En la hiperuricemia vinculada con producción excesiva grave de PRPP, hay producción exagerada de nucleótidos pirimidina y excreción aumentada de β­alanina. Dado que se necesita N 5,N 10­metileno­tetrahidrofolato para la síntesis del timidilato, los trastornos del metabolismo del folato y de la vitamina B12 producen deficiencias de TMP. acidurias oróticas �-Ureidopropionasa H3N + La seudouridina se excreta sin cambios La aciduria orótica que acompaña al síndrome de Reye probable­ mente es una consecuencia de la incapacidad de mitocondrias da­ ñadas de manera grave para usar carbamoil fosfato, que entonces queda disponible para la producción citosólica excesiva de ácido orótico. La aciduria orótica tipo I refleja una deficiencia tanto de orotato fosforribosiltransferasa como de orotidilato descarboxilasa (reacciones  y , fig. 33­9); la aciduria orótica tipo II, más rara, se debe a una deficiencia sólo de orotidilato descarboxilasa (reac­ ción , fig. 33­9). La deficiencia de una enzima del ciclo de la urea ocasiona excreción de precursores de pirimidina La excreción incrementada de ácido orótico, uracilo y uridina acom­ paña a una deficiencia de ornitina transcarbamoilasa en las mito­ condrias del hígado (reacción , fig. 28­9). El carbamoil fosfato excesivo sale hacia el citosol, donde estimula la biosíntesis de nu­ cleótido pirimidina. Los alimentos con alto contenido de nitrógeno aumentan la aciduria orótica leve resultante. 27/11/09 14:35:32 capítulo 33 La aciduria orótica puede precipitarse por fármacos El alopurinol (fig. 32­13), un sustrato alternativo para la orotato fosforribosiltransferasa (reacción , fig. 33­9), compite con el ácido orótico. El producto nucleótido resultante también inhibe a la oroti­ dilato descarboxilasa (reacción , fig. 33­9), lo que da por resulta­ do aciduria orótica y orotidinuria. La 6­azauridina, después de conversión en 6­azauridilato, también inhibe de manera competi­ tiva a la orotidilato descarboxilasa (reacción , fig. 33­9), lo que incrementa la excreción de ácido orótico y orotidina. rESuMEN ■ ■ ■ ■ ■ ■ 33 Bender.indd 301 Los ácidos nucleicos ingeridos se degradan hacia purinas y pirimidinas. Se forman nuevas purinas y pirimidinas a partir de intermediarios anfibólicos y, de este modo, son no esenciales en la dieta. Varias reacciones de la biosíntesis del IMP requieren derivados del folato y glutamina. En consecuencia, los fármacos antifolato y los análogos de la glutamina inhiben la biosíntesis de purina. La oxidación y aminación del IMP forman AMP y GMP, y la transferencia subsiguiente de fosforilo desde el ATP forma ADP y GDP. La transferencia adicional de fosforilo desde ATP hacia GDP forma GTP. El ADP se convierte en ATP mediante fosforilación oxidativa. La reducción de NDP forma dNDP. La biosíntesis hepática de nucleótido purina está estrictamente regulada por el tamaño del fondo común de PRPP y por inhibición por retroacción de la PRPP­glutamil amidotransferasa por el AMP y GMP. La regulación coordinada de la biosíntesis de nucleótido purina y pirimidina asegura su presencia en proporciones apropiadas para la biosíntesis de ácido nucleico y otras necesidades metabólicas. Los seres humanos catabolizan las purinas hacia ácido úrico (pKa de 5.8), presente como el ácido relativamente insoluble a pH ácido o como su sal urato de sodio más soluble a un pH ■ Metabolismo de nucleótidos purina y pirimidina 301 cercano a la neutralidad. Los cristales de urato son diagnósticos de gota. Otros trastornos del catabolismo de la purina son el síndrome de Lesch–Nyhan, la enfermedad de von Gierke y las hipouricemias. Puesto que los catabolitos de la pirimidina son hidrosolubles, su producción excesiva no origina anormalidades clínicas. Como quiera que sea, la excreción de precursores de pirimidina puede depender de una deficiencia de la ornitina transcarbamoilasa porque el carbamoil fosfato excesivo está disponible para la biosíntesis de pirimidina. rEFErENCiaS Chow EL et al: Reassessing Reye syndrome. Arch Pediatr Adolesc Med 2003;157:1241. Christopherson RI, Lyons SD, Wilson PK: Inhibitors of de novo nucleotide biosynthesis as drugs. Acc Chem Res 2002;35:961. Kamal MA, Christopherson RI: Accumulation of 5­phosphoribosyl­1­ pyrophosphate in human CCRF­CEM leukemia cells treated with antifolates. Int J Biochem Cell Biol 2004;36:957. Lipkowitz MS et al: Functional reconstitution, membrane targeting, genomic structure, and chromosomal localization of a human urate transporter. J Clin Invest 2001;107:1103. Martinez J et al: Human genetic disorders, a phylogenetic perspective. J Mol Biol 2001;308:587. Moyer RA, John DS: Acute gout precipitated by total parenteral nutrition. J Rheumatol 2003;30:849. 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Esta molécula polimérica, el ácido desoxirribonucleico (DNA), es la base química de la herencia, y está organizada en genes, las unidades fundamentales de la información genética. Se ha dilucidado la vía de información básica —es decir, el DNA, que dirige la síntesis de RNA, que a su vez dirige y regula la síntesis de proteína—. Los genes no funcionan de modo autónomo; su replicación y función están controladas por diversos productos génicos, a menudo en colaboración con componentes de diversas vías de transducción de señal. El conocimiento de la estructura y función de los ácidos nucleicos es esencial para entender los aspectos genéticos y muchos aspectos de la fisiopatología, así como la base genética de la enfermedad. EL DNA CONTIENE LA INFORMACIÓN GENÉTICA En 1944, en una serie de experimentos efectuados por Avery, MacLeod y McCarty, se demostró por vez primera que el DNA contiene la información genética. Mostraron que la determinación genética de un rasgo (el tipo) de la cápsula de un neumococo específico podía transmitirse a otro tipo capsular diferente al introducir DNA purificado desde el primer coco hacia el segundo. Estos autores denominaron “factor transformador” al agente que lograba el cambio (que más tarde se mostró que es el DNA). Después, este tipo de manipulación genética se ha hecho común. Recientemente se han llevado a cabo experimentos similares utilizando levaduras, células en cultivo de vegetales y mamíferos, y embriones de insectos y de mamíferos como receptores, y moléculas de DNA clonado como donadores de información genética. El DNA contiene cuatro desoxinucleótidos La naturaleza química de las unidades de desoxinucleótido monoméricas del DNA —desoxiadenilato, desoxiguanilato, desoxicitidilato y timidilato— se describe en el capítulo 32. Estas unidades monoméricas del DNA se mantienen en forma polimérica por medio de enlaces 3ʹ,5ʹ-fosfodiéster que constituyen una cadena única (fig. 34-1). El contenido informacional del DNA (el código genético) A P í t u l o reside en la secuencia en la cual están ordenados estos monómeros —purina y pirimidina desoxirribonucleótidos—. El polímero como se describe posee una polaridad; un extremo tiene un 5ʹ-hidroxilo o fosfato terminal, mientras que el otro tiene un grupo 3ʹ-fosfato o hidroxilo terminal. La importancia de esta polaridad es evidente. Dado que la información genética reside en el orden de las unidades monoméricas dentro de los polímeros, es necesario que haya un mecanismo para reproducir o replicar esta información específica con un alto grado de fidelidad. Ese requerimiento, junto con datos de difracción con rayos X de la molécula de DNA, y la observación de Chargaff de que en las moléculas de DNA la concentración de nucleótidos desoxiadenosina (A) es igual a la de nucleótidos timidina (T) (A = T), mientras que la de nucleótidos desoxiguanosina (G) es igual a la de nucleótidos desoxicitidina (C) (G = C), condujeron a Watson, Crick y Wilkins a proponer a principios del decenio de 1950 un modelo de una molécula de DNA bicatenario. El modelo que propusieron se presenta en la figura 34-2. Las dos cadenas de esta hélice bicatenaria se mantienen en registro por medio tanto de enlaces de hidrógeno entre las bases purina y pirimidina de las moléculas lineales respectivas, como de interacciones de van der Waals e hidrofóbicas entre los pares de bases adyacentes apiladas. La formación de pares entre los nucleótidos purina y pirimidina en las cadenas opuestas es muy específica, y depende de enlaces de hidrógeno de A con T y de G con C (fig. 34-2). Se dice que esta forma común de DNA gira hacia la derecha porque al mirar la doble hélice desde arriba, las bases componentes forman una espiral en el sentido de las manecillas del reloj. En la molécula bicatenaria, las restricciones impuestas por la rotación alrededor del enlace fosfodiéster, la anticonfiguración favorecida del enlace glucosídico (fig. 32-5), y los tautómeros predominantes (fig. 32-2) de las cuatro bases (A, G, T y C) permiten que A únicamente forme par con T, y que G sólo forme par con C (fig. 34-3). Esta restricción de la formación de pares de bases explica la observación más temprana de que en una molécula de DNA bicatenario el contenido de A es igual al de T, y el de G es igual al de C. Las dos cadenas de la molécula de doble hélice, cada una de las cuales posee una polaridad, son antiparalelas; esto es, una cadena corre en la dirección de 5ʹ a 3ʹ, y la otra en la dirección de 3ʹ a 5ʹ. En las moléculas de DNA bicatenario, la información genética reside en la secuencia de nucleótidos en una cadena, la cadena molde. Ésta es la cadena de DNA que se copia durante la síntesis de ácido ribonucleico (RNA). A veces se llama cadena no codificadora. La cadena opuesta se considera la cadena codificadora porque coincide con la secuencia de la transcripción de RNA (pero contiene uracilo en lugar de timina; fig. 34-8) que codifica para la proteína. 302 34 Bender.indd 302 27/11/09 14:36:20 CApíTulo 34 Estructura y función del ácido nucleico 303 O N NH G 5′ CH2 O N NH2 NH2 N N O C P H H H CH2 H O NH O T P O O H3C O H N H H H O H N CH2 H O N O H H N A P O NH2 H CH2 H O H N N O P O H H 3′ H H H P O FigurA 34-1 Un segmento de una cadena de una molécula de DNA en el cual las bases purinas y pirimidinas: guanina (G), citosina (C), timina (T) y adenina (A), se mantienen juntas mediante un esqueleto fosfodiéster entre las porciones 2’-desoxirribosilo fijas a las nucleobases por medio de un enlace N-glucosídico. Note que el esqueleto tiene una polaridad (esto es, una dirección). La convención dicta que una secuencia de DNA de una sola cadena está escrita en la dirección 5’ a 3’ (o sea, pGpCpTpA, donde G, C, T y A representan las cuatro bases, y P representa los fosfatos que se interconectan). Las dos cadenas, en las cuales bases opuestas se mantienen juntas mediante enlaces de hidrógeno intercatenarios, giran alrededor de un eje central en la forma de una doble hélice. En el tubo de ensayo el DNA bicatenario puede existir en al menos seis formas (A a E, y Z). La forma B por lo general se encuentra en condiciones fisiológicas (baja salinidad, alto grado de hidratación). Un solo giro de DNA B alrededor del eje largo de la molécula contiene 10 pares de bases. La distancia abarcada por un giro del DNA B es de 3.4 nm (34 Å). La anchura (el diámetro de la hélice) de la doble hélice en el DNA B es de 2 nm (20 Å). Tres enlaces de hidrógeno, formados por hidrógeno unido a átomos de N u O electronegativos (fig. 34-3), sujetan el nucleótido desoxiguanosina al nucleótido desoxicitidina, mientras que dos enlaces de hidrógeno mantienen junto el otro par, el par A-T. Así, los enlaces G-C son más resistentes a la desnaturalización, o separación de cadena, denominada “fusión”, que las regiones de DNA con alto contenido de A-T. La desnaturalización de DNA se usa para analizar su estructura La estructura bicatenaria del DNA puede separarse en dos cadenas componentes en solución al aumentar la temperatura o disminuir las cifras de sales. Las dos pilas de bases no sólo se separan, 34 Bender.indd 303 sino que las bases mismas se desapilan mientras que aún están conectadas en el polímero por el esqueleto fosfodiéster. Concomitante con esta desnaturalización de la molécula de DNA hay un incremento de la absorbancia óptica de las bases purina y pirimidina, fenómeno llamado hipercromicidad de la desnaturalización. Debido al apilamiento de las bases y a la formación de enlaces de hidrógeno entre las pilas, la molécula de DNA bicatenario muestra propiedades de una varilla rígida, y en solución es un material viscoso que pierde su viscosidad en el momento de la desnaturalización. Las cadenas de una molécula de DNA dada se separan en un rango de temperatura. El punto medio se denomina la temperatura de fusión, o Tm. La Tm está influida por la composición de bases del DNA y por la concentración de sales de la solución. El DNA rico en pares G-C, que tienen tres enlaces de hidrógeno, se fusiona a una temperatura más alta que el que abunda en pares A-T, que tienen dos enlaces de hidrógeno. Un aumento de 10 veces las cifras de cationes monovalentes incrementa la Tm en 16.6°C. El disolvente orgánico formamida, que a menudo se usa en experimentos de DNA recombinante, desestabiliza los enlaces de hidrógeno entre las bases, y por eso aminora la Tm. Esto permite que las cadenas de DNA o los híbridos de DNA-RNA se separen a temperaturas mucho más bajas, y minimiza la rotura de enlaces fosfodiéster que puede ocurrir a temperaturas más altas. 27/11/09 14:36:21 304 SECCIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales La renaturalización del DNA requiere coincidencia de pares de bases Surco menor A S P S P T S T A C S P P o 34 A S P S G G S C S P Surco mayor o 20 A FigurA 34-2 Diagrama que representa el modelo de Watson y Crick de la estructura de doble hélice de la forma B del DNA. La flecha horizontal indica la anchura de la doble hélice (20 Å), y la flecha vertical indica la distancia abarcada por un giro completo de la doble hélice (34 Å). Un giro del B-DNA incluye 10 pares de bases (bp), de manera que el aumento es de 3.4 Å por bp. La varilla vertical indica el eje central de la doble hélice. Las flechas cortas designan la polaridad de las cadenas antiparalelas. Se muestran los surcos mayor y menor. (A, adenina; C, citosina; G, guanina; T, timina; P, fosfato; S, azúcar [desoxirribosa].) Las líneas horizontales, cortas, de color rojo, indican los enlaces de hidrógeno entre bases A/T y G/C. CH3 O H N N N H H N N O Timidina N N Adenosina H N N H O N H O Citosina H N N N N N H Guanosina FigurA 34-3 La formación de pares de bases de DNA entre adenosina y timidina comprende la formación de dos enlaces de hidrógeno. Tres de esos enlaces se forman entre la citidina y guanosina. Las líneas discontinuas representan enlaces de hidrógeno. 34 Bender.indd 304 Es importante señalar que las cadenas separadas de DNA se renaturalizarán o reasociarán cuando se logren condiciones de temperatura y sales fisiológicas apropiadas; este proceso de realineamiento suele llamarse hibridación. El índice de reasociación depende de la concentración de las cadenas complementarias. La reasociación de las dos cadenas de DNA complementarias de un cromosoma luego de transcripción es un ejemplo fisiológico de renaturalización (véase más adelante). A una temperatura y concentración de sal dadas, una cadena de ácido nucleico particular se asociará de manera estrecha sólo con una cadena complementaria. Las moléculas híbridas también se formarán en condiciones apropiadas. Por ejemplo, el DNA formará un híbrido, con un DNA complementario (cDNA) o con un RNA mensajero (mRNA; véase más adelante) cognado. Cuando se combinan con técnicas de electroforesis en gel que separan ácidos nucleicos por tamaño, junto con marcado radiactivo o fluorescente para proporcionar una señal detectable, las técnicas analíticas resultantes se denominan electrotransferencia tipo Southern (DNA/DNA) y tipo Northern (RNA-DNA), respectivamente. Estos procedimientos permiten identificación muy clara, y muy sensible, de especies de ácidos nucleicos específicas a partir de mezclas complejas de DNA o RNA (cap. 39). La molécula de DNA tiene surcos El examen cuidadoso del modelo descrito en la figura 34-2 revela un surco mayor y un surco menor que dan vueltas a lo largo de la molécula paralelos a los esqueletos fosfodiéster. En estos surcos, las proteínas pueden interactuar de modo específico con átomos expuestos de los nucleótidos (por medio de interacciones hidrofóbicas y iónicas específicas) y por ello reconocen, y se unen a, secuencias de nucleótido específicas, regularmente sin alterar la formación de pares de bases de la molécula de DNA de doble hélice. Proteínas reguladoras controlan la expresión de genes específicos mediante esas interacciones (caps. 36 y 38). El DNA existe en formas relajada y superenrollada En algunos organismos, como bacterias, bacteriófagos, muchos virus de animales que contienen DNA, así como organelos como las mitocondrias (fig. 35-8), los extremos de las moléculas de DNA están unidos para crear un círculo cerrado sin extremos libres de enlaces covalentemente. Claro que esto no destruye la polaridad de las moléculas, pero elimina todos los grupos hidroxilo y fosforilo 3ʹ y 5ʹ. Los círculos cerrados existen en formas relajada y superenrollada. Las superhélices se introducen cuando un círculo cerrado se gira alrededor de su propio eje o cuando un fragmento lineal del DNA dúplex, cuyos extremos están fijos, se tuerce. Este proceso que necesita energía coloca a la molécula bajo tensión de torsión, y mientras mayor es el número de superhélices, mayor es la tensión o torsión (como ocurre al torcer una bandera de caucho). Las superhélices negativas se forman cuando la molécula se tuerce en la dirección opuesta desde las vueltas en la dirección de las manecillas del reloj de la doble hélice dextrógira que se encuentra en el DNA B. Se dice que ese DNA está subgirado. La energía requerida para lograr este 27/11/09 14:36:23 CApíTulo 34 estado se encuentra, en cierto sentido, almacenada en las superhélices. Por ello, el subgiro facilita la transición hacia otra forma que requiere energía. Una transición de ese tipo es la separación de cadena, que es un prerrequisito para la replicación y transcripción del DNA. En consecuencia, el DNA superenrollado es una forma preferida en sistemas biológicos. Las enzimas que catalizan cambios topológicos del DNA se llaman topoisomerasas, las cuales pueden relajar o insertar superhélices, usando ATP como una fuente de energía. Hay homólogos de esta enzima en todos los organismos, y son blancos importantes de la quimioterapia de cáncer. EL DNA PROPORCIONA UN MOLDE PARA REPLICACIÓN Y TRANSCRIPCIÓN La información genética almacenada en la secuencia de nucleótido del DNA tiene dos propósitos. Es la fuente de información para la síntesis de todas las moléculas de proteína de la célula y el organis- Estructura y función del ácido nucleico 305 mo, y proporciona la información heredada por células hijas o por la descendencia. Ambas funciones requieren que la molécula de DNA sirva como un molde, en el primer caso para la transcripción de la información hacia el RNA, y en el segundo para la replicación de la información hacia moléculas de DNA hijas. Cuando cada cadena de la molécula de DNA bicatenario madre se separa desde su complemento en el transcurso de la replicación, cada una sirve de manera independiente como un molde con base en la cual se sintetiza una nueva cadena complementaria (fig. 34-4). Las dos moléculas de DNA bicatenario hijas recién formadas, cada una de las cuales contiene una cadena (pero complementaria más que idéntica) de la molécula de DNA bicatenario madre, a continuación se separan entre las dos células hijas (fig. 34-5). Cada célula hija contiene moléculas de DNA con información idéntica a la que poseía la célula madre; sin embargo, en cada célula hija la molécula de DNA de la célula madre únicamente se ha semiconservado. LA NATURALEZA QUÍMICA DEL RNA DIFIERE DE LA DEL DNA El ácido ribonucleico (RNA) es un polímero de purina y pirimidina ribonucleótidos unidos entre sí por enlaces 3ʹ,5ʹ-fosfodiéster VIEJA VIEJA 5′ G 3′ C C G C G A T A A T G Molécula madre original C G C A A T T A G C G C 3′ T 5′ A C T G C G C A Moléculas hijas de primera generación A C T A A T T T A A G T T A C G C G A 3′ VIEJA T FigurA 34-4 T T A A Moléculas hijas de segunda generación G A 5′ NUEVA 3′ NUEVA T T T A A 5′ VIEJA La estructura bicatenaria del DNA y la función de molde de cada cadena vieja (anaranjada) sobre la cual se sintetiza una nueva cadena complementaria (azul). 34 Bender.indd 305 FigurA 34-5 La replicación del DNA es semiconservadora. Durante una ronda de replicación, cada una de las dos cadenas de DNA se usa como un molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria. 27/11/09 14:36:25 306 SECCIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales O N NH G 5′ CH2 O N NH2 NH2 N N O C P H H H CH2 H O N O O NH O HO U P H H H O N CH2 H O NH2 N O O HO N A P H H H CH2 H O O N N O HO P H H H H O 3′ HO P O FigurA 34-6 Un segmento de una molécula de ácido ribonucleico (RNA) en el cual las bases purina y pirimidina —guanina (G), citosina (C), uracilo (U) y adenina (A)— se mantienen juntas mediante enlaces fosfodiéster entre porciones ribosilo fijas a las nucleobases por medio de enlaces N-glucosídicos. Note que el polímero tiene una polaridad según lo indican los fosfatos marcados fijos a 3’ y 5’. análogos a los que están en el DNA (fig. 34-6). Aun cuando comparte muchas características con el DNA, el RNA posee varias diferencias específicas: 1. En el RNA, la parte azúcar a la cual los fosfatos y las bases púricas y pirimídicas se fijan es ribosa en lugar de la 2ʹ-desoxirribosa del DNA. 2. Los componentes pirimídicos del RNA difieren de los del DNA. Si bien el RNA contiene los ribonucleótidos de adenina, guanina y citosina, no posee timina excepto en el raro caso que se menciona más adelante. En lugar de timina, el RNA contiene el ribonucleótido de uracilo. 3. El RNA típicamente existe como una cadena única, mientras que el DNA existe como una molécula helicoidal bicatenaria. Empero, dada la secuencia de bases complementaria apropiada con polaridad opuesta, la cadena única de RNA —como se demuestra en la figura 34-7— tiene la capacidad de plegarse sobre sí misma a manera de horquilla y, de este modo, adquirir características bicatenarias: la base G que forma pares con C, y A con U. 4. Puesto que la molécula de RNA es una cadena única complementaria a sólo una de las dos cadenas de un gen, su contenido de guanina no necesariamente es igual a su contenido de citosina, ni su contenido de adenina es necesariamente igual a su contenido de uracilo. 34 Bender.indd 306 5. Los álcalis pueden hidrolizar al RNA hacia diésteres 2ʹ,3ʹ cíclicos de los mononucleótidos, compuestos que no se pueden formar a partir de DNA tratado con álcali debido a la ausencia de un grupo 2ʹ-hidroxilo. La labilidad del RNA a álcali es útil con fines tanto diagnósticos como analíticos. La información dentro de la cadena única de RNA está contenida en su secuencia (“estructura primaria”) de nucleótidos purina y pirimidina dentro del polímero. La secuencia es complementaria a la cadena molde del gen a partir del cual se transcribió. Debido a esta complementariedad, una molécula de RNA puede unirse de manera específica por medio de las reglas de formación de pares de bases a su cadena de DNA molde; no se unirá (“hibridará”) con la otra cadena (codificadora) de su gen. La secuencia de la molécula de RNA (salvo por U que remplaza a T) es la misma que la de la cadena codificadora del gen (fig. 34-8). Casi todas las especies de rNA participan en algún aspecto de la síntesis de proteína Las moléculas de RNA citoplásmico que sirven como moldes para la síntesis de proteína (es decir, que transfieren información genética desde el DNA hacia la maquinaria sintetizadora de proteína) se designan RNA mensajeros, o mRNA. Muchas otras moléculas de RNA citoplásmicas muy abundantes (RNA ribosómicos; rRNA) 27/11/09 14:36:26 CApíTulo 34 CuADro 34-1 Algunas de las especies de rNA estables pequeñas que se encuentran en células de mamífero Asa C C G A A A U U C G U U U U U C G G G C U U U G G C C A A C A G G C 5' 307 Estructura y función del ácido nucleico Nombre Tallo 3' FigurA 34-7 Diagrama que representa la estructura secundaria de una molécula de RNA de cadena única en la cual se ha formado un tallo con asa, u “horquilla”. La formación de esta estructura depende de la formación intramolecular de pares de base indicada (líneas horizontales coloreadas entre las bases). Note que A forma enlaces de hidrógeno con U en el RNA. tienen funciones estructurales en donde contribuyen a la formación y función de ribosomas (la maquinaria en el ámbito de organelo para la síntesis de proteína) o sirven como moléculas adaptadoras (RNA de transferencia; tRNA) para la traducción de información del RNA hacia secuencias específicas de aminoácidos polimerizados. Es interesante que algunas moléculas de RNA tienen actividad catabólica intrínseca. La actividad de estas ribozimas a menudo incluye la división de un ácido nucleico. Dos enzimas de RNA bien estudiadas, o ribozimas, son la peptidil transferasa que cataliza la formación de enlaces peptídicos en el ribosoma, y ribozimas involucradas en el empalme del RNA. En todas las células eucarióticas hay especies de RNA nuclear pequeño (snRNA) que no participan de modo directo en la síntesis de proteína pero desempeñan funciones cruciales en el proce- Longitud (nucleótidos) Moléculas por célula Localización U1 165 1 × 106 Nucleoplasma U2 188 5 × 105 Nucleoplasma U3 216 3 × 105 Nucleolo U4 139 1 × 10 5 Nucleoplasma U5 118 2 × 10 5 Nucleoplasma U6 106 3 × 10 5 Gránulos pericromatina 4.5S 95 3 × 10 5 Núcleo y citoplasma 7SK 280 5 × 10 5 Núcleo y citoplasma samiento del RNA. El tamaño de estas moléculas relativamente pequeñas varía desde 90 hasta alrededor de 300 nucleótidos (cuadro 34-1). El material genético para algunos virus de animales y vegetales es RNA en lugar de DNA. Aunque algunos virus RNA nunca transcriben su información hacia una molécula de DNA, muchos virus RNA de animales —en específico, los retrovirus (p. ej., el VIH)— se transcriben mediante DNA polimerasa dependiente de RNA viral, la denominada transcriptasa inversa, para producir una copia de DNA bicatenario de su genoma de RNA. En muchos casos, la transcripción de DNA de doble cadena resultante se integra en el genoma del huésped y después sirve como un molde para la expresión de gen a partir de la cual pueden transcribirse nuevos genomas de RNA viral y mRNA virales. Hay varias clases de rNA En todos los organismos procarióticos y eucarióticos hay cuatro clases principales de moléculas de RNA: mensajero (mRNA), de transferencia (tRNA), ribosómico (rRNA) y RNA pequeños. Cada uno difiere de los otros en su abundancia, tamaño, función y estabilidad general. rNA mensajero (mrNA) Esta clase es la de abundancia, tamaño y estabilidad más heterogéneos; por ejemplo, en la levadura de cerveza mRNA específicos están presentes en cientos/célula hasta, en promedio, ≤0.1 mRNA/ Cadenas de DNA: Codificadora Molde Transcripción de RNA: T GG A A T T G T G A GCGG A T A A C A A T T T C A C A C A GG A A A C A GC T A T G A C C A T G A C C T T A A C A C T CGC C T A T T G T T A A A G T G T G T C C T T T G T CG A T A C T GG T A C 5′ ppp A U U G U G A G C G G A U A A C A A U U U C A C A C A G G A A A C A G C U A U G A C C A U G 3′ FigurA 34-8 La relación entre las secuencias de una transcripción de RNA y su gen, en la cual las cadenas codificadora y molde se muestran con sus polaridades. La transcripción de RNA con una polaridad 5’ a 3’ es complementaria a la cadena molde con su polaridad 3’ a 5’. Note que la secuencia en la transcripción de RNA y su polaridad es la misma que la que hay en la cadena codificadora, salvo porque la U de la transcripción remplaza a la T del gen. 34 Bender.indd 307 27/11/09 14:36:28 308 SECCIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales DNA 5 3 3 5 mRNA 5 3 Síntesis de proteína sobre plantilla de mRNA 5 FigurA 34-9 Ribosoma célula. Mecanismos tanto transcripcionales como postranscripcionales específicos contribuyen a este rango dinámico grande en el contenido de mRNA (caps. 36 y 38). En células de mamífero la abundancia de mRNA probablemente varía en un rango de 104 veces. Todos los miembros de la clase funcionan como mensajeros que transmiten la información en un gen hacia la maquinaria sintetizadora de proteína, donde cada mRNA sirve como un molde con base en la cual una secuencia específica de aminoácidos se polimeriza para formar una molécula de proteína específica, el producto final de gen (fig. 34-9). Los mRNA eucarióticos tienen características químicas singulares. El extremo terminal 5ʹ del mRNA está “cubierto” por un 7-metilguanosina trifosfato que está enlazado a un 2ʹ-O-metil ribonucleósido adyacente en su 5ʹ-hidroxilo por medio de los tres fosfatos (fig. 34-10). Las moléculas de mRNA suelen contener 6-metiladenilatos internos y otros nucleósidos 2ʹ-O-ribosa metilados. La cubierta participa en el reconocimiento del mRNA por la maquinaria de traducción, y ayuda también a estabilizar el mRNA al evitar el ataque de 5ʹ-exonucleasas. La maquinaria sintetizadora de proteína empieza a traducir el mRNA hacia proteínas empezando torrente abajo de la terminal 5ʹ o cubierta. El otro extremo de las moléculas de mRNA, el 3ʹ-hidroxilo terminal, tiene un polímero fijo de residuos adenilato de 20 a 250 nucleótidos de longitud. La “cola” poli(A) en el 3ʹ-hidroxilo terminal de mRNA mantiene la estabilidad intracelular del mRNA específico al impedir el ataque de 3ʹ-exonucleasas y facilita también la traducción (fig. 37-7). Algunos mRNA, incluso aquellos para algunas histonas, no contienen una cola poli(A). Tanto la “cubierta” como la “cola poli(A)” de mRNA se agregan luego de la transcripción por enzimas no dirigidas por el molde a moléculas precursoras de mRNA (pre-mRNA). El mRNA representa 2 a 5% del RNA total de células eucarióticas. En células de mamífero, incluso las de seres humanos, las moléculas de mRNA presentes en el citoplasma no son los productos del RNA inmediatamente sintetizados a partir del molde de DNA, sino que deben formarse por procesamiento desde el pre-RNA antes de que entre al citoplasma. De esta manera, en núcleos de mamífero, los productos inmediatos de la transcripción de gen (transcritos primarios) son muy heterogéneos y pueden ser más de 10 a 50 veces más largos que las moléculas de mRNA maduras. Las moléculas de pre-mRNA se procesan para generar las moléculas de mRNA que después entran al citoplasma para servir como moldes para la síntesis de proteína (cap. 36). rNA de transferencia (trNA) La expresión de información genética en el DNA hacia la forma de una transcripción de mRNA. Los ribosomas después traducen esto hacia una molécula de proteína específica. 34 Bender.indd 308 3 Molécula de proteína completada La longitud de las moléculas de tRNA varía desde 74 hasta 95 nucleótidos. También se generan por procesamiento nuclear de una molécula precursora (cap. 36). Las moléculas de tRNA sirven como adaptadoras para la traducción de la información en la secuencia de nucleótidos del mRNA hacia aminoácidos específicos. Hay al menos 20 especies de moléculas de tRNA en cada célula, y por lo menos una (y a menudo varias) corresponde a cada uno de los 20 aminoácidos requeridos para la síntesis de proteína. Aun cuando cada tRNA específico difiere de los otros en su secuencia de nucleótidos, las moléculas de tRNA como clase tienen muchas características en común. La estructura primaria —es decir, la secuencia de nucleótido— de todas las moléculas de tRNA permite plegamientos y complementariedad intracatenaria extensos para generar una estructura secundaria que aparece en dos dimensiones como una hoja de trébol (fig. 34-11). Todas las moléculas de tRNA contienen cuatro brazos principales. El brazo aceptor termina en los nucleótidos CpCpAOH. Una enzima nucleotidil transferasa específica añade estos tres nucleótidos luego de la transcripción. El aminoácido apropiado para el tRNA se fija, o “carga” sobre el grupo 3ʹ-OH de la porción A del brazo aceptor (fig. 37-1). Los brazos D, TψC y extra ayudan a definir un tRNA específico. Los tRNA constituyen a grandes rasgos 20% del RNA celular total. rNA ribosómico (rrNA) Un ribosoma es una estructura nucleoproteínica citoplásmica que actúa como la maquinaria para la síntesis de proteínas a partir de los moldes de mRNA. En los ribosomas, las moléculas de mRNA y tRNA interactúan para traducirse hacia una información acerca de molécula de proteína específica transcrita desde el gen. Durante periodos de síntesis activa de proteína, muchos ribosomas pueden asociarse con cualquier molécula de mRNA para formar un montaje llamado el polisoma (fig. 37-7). En el cuadro 34-2 se muestran los componentes del ribosoma de mamífero, que tiene un peso molecular de aproximadamente 4.2 × 106, y un coeficiente de velocidad de sedimentación de 80S (S = unidades Svedberg, un parámetro sensible al tamaño y la forma moleculares). El ribosoma de mamífero contiene dos subunidades nucleoproteínicas principales, una de mayor tamaño con un peso molecular de 2.8 × 106 (60S), y una subunidad de menor tamaño 27/11/09 14:36:29 CApíTulo 34 HC OH OH C C H H Estructura y función del ácido nucleico 309 CH O N H2N HN N N O H2C 5′ O O– P NH2 O O O P O– CH3 N O O P O 5′ CH2 O CASQUETE N – N N O HC H H 3′ C C CH 2′ O OCH3 O Extremo 5ʹ del mRNA O O NH 5′ CH2 P O– N O O HC H H 3′ C C CH OH O O P O– FigurA 34-10 La estructura del casquete fija a la terminal 5’ de casi todas las moléculas de RNA mensajero eucariótico. Un 7-metilguanosina trifosfato (negro) está fijo en la terminal 5’ del mRNA (que se muestra en color), que por lo general también contiene un nucleótido 2’-O-metilpurina. Estas modificaciones (el casquete y el grupo metilo) se añaden luego de que el mRNA se transcribe desde el DNA. con un peso molecular de 1.4 × 106 (40S). La unidad 60S contiene un RNA ribosómico (rRNA) 5S, un rRNA 5.8S, y un rRNA 28S; también hay más de 50 polipéptidos específicos. La subunidad 40S es de menor tamaño y contiene un rRNA 18S único, y alrededor de 30 cadenas polipeptídicas distintas. Todas las moléculas de RNA ribosómico, y excepto el rRNA 5S, que se transcribe de modo independiente, se procesan a partir de una molécula de RNA precursora 45S única en el nucléolo (cap. 36). Las moléculas de RNA ribosómico muy metiladas están aglomeradas en el nucléolo con las proteínas ribosómicas específicas. En el citoplasma, los ribosomas permanecen bastante estables y capaces de muchos ciclos de traducción. No se entienden por completo las funciones precisas de las moléculas de RNA ribosómico en la partícula ribosómica, 34 Bender.indd 309 pero se necesitan para el montaje ribosómico, y desempeñan también funciones clave en la unión de mRNA a ribosomas y su traducción. Estudios recientes indican que el componente de rRNA grande realiza la actividad de peptidil transferasa y, así, es una ribozima. Los RNA ribosómicos (28S + 18S) representan a grandes rasgos 70% del RNA celular total. rNA pequeño En las células eucarióticas se encuentra gran número de especies de RNA separadas, muy conservadas, y pequeñas; algunas son bastante estables. Casi todas estas moléculas forman complejos con proteínas para formar ribonucleoproteínas, y están distribuidas en el núcleo, el citoplasma, o ambos. Su tamaño varía de 20 a 300 nucleótidos, y 27/11/09 14:36:30 310 SECCIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales que carece de una cola poli(A). El RNA 7SK se asocia con varias proteínas para formar un complejo de ribonucleoproteína, denominado P-TEFb, que modula el elongamiento de la transcripción de gen de mRNA por la RNA polimerasa II (cap. 36). aa 3′ A C Brazo aceptor C 5′P Región de enlaces de hidrógeno entre pares de bases Brazo TψC G G Brazo D T ψ C Brazo extra Purina alquilada U Brazo anticodón FigurA 34-11 tRNA aminoacilo típico en el cual el aminoácido (aa) está fijo a la terminal 3’ CCA. El anticodón, TψC, y los brazos dihidrouracilo (D) están indicados, al igual que las posiciones del enlace de hidrógeno intramolecular entre estos pares de bases. ψ es la seudouridina, un isómero de la uridina que se forma después de la transcripción. (Reimpresa, con autorización, de Watson JD: Molecular Biology of the Gene, 3rd ed. Copyright © 1976, 1970, 1965, por W.A. Benjamin, Inc., Menlo Park, California.) están presentes en copias 100 000 a 1 000 000 moléculas por célula, lo que representa en conjunto ≤ 5% del RNA celular. RNA nucleares pequeños (snRNA) Los snRNA, un subgrupo de los RNA pequeños, participan de manera importante en el procesamiento de rRNA y mRNA, y en la regulación de gen. De las varias especies de snRNA, el U1, U2, U4, U5 y U6 participan en la eliminación de intrón y en el procesamiento de precursores de mRNA hacia mRNA (cap. 36). El snRNA U7 participa en la producción de los extremos 3ʹ correctos del mRNA histona, Micro-RNA, miRNA y RNA que interfieren pequeños siRNA Uno de los descubrimientos más interesantes e inesperados en el transcurso del último decenio de la biología reguladora eucariótica fue la identificación y caracterización de miRNA, una clase de RNA pequeños que se encuentra en casi todos los eucariotas (cap. 38). Casi todos los miRNA y siRNA conocidos originan inhibición de la expresión génica al aminorar la producción de proteína específica, si bien mediante distintos mecanismos. Los miRNA típicamente tienen 21 a 25 nucleótidos de largo, y se generan por medio de procesamiento nucleolítico de diferentes genes o unidades de transcripción (fig. 36-17). Los precursores del miRNA son monocatenarios, pero tienen estructura secundaria intramolecular extensa. El tamaño de estos precursores varía desde aproximadamente 500 hasta 1 000 nucleótidos; es característico que los miRNA maduros procesados pequeños se hibriden mediante la formación de dúplex de RNA-RNA imperfectos dentro de las regiones 3ʹ-no traducidas (3ʹUTR; fig. 38-19) de mRNA blanco específicos, lo que lleva, por medio de mecanismos que se entienden poco, a detener la traducción. Hasta la fecha se han descrito cientos de miRNA distintos en seres humanos. Los siRNA se derivan mediante la división nucleolítica específica de RNA bicatenarios de mayor tamaño para formar de nuevo productos pequeños de 21 a 25 nucleótidos de largo. Estos siRNA cortos por lo general forman híbridos RNA-RNA perfectos con sus potenciales blancos separados en cualquier sitio dentro de la longitud del mRNA donde existe la secuencia complementaria. La formación de esos dúplex RNA-RNA entre siRNA y mRNA causa producción reducida de proteína específica porque maquinaria nucleolítica dedicada degrada los complejos de siRNA-mRNA; parte de esta degradación de mRNA, o toda, sucede en organelos citoplásmicos específicos llamados cuerpos p (fig. 37-11). Tanto los miRNA como los siRNA representan interesantes nuevos blancos potenciales para la creación de fármacos terapéuticos. Además, los siRNA suelen usarse para disminuir o “noquear” (“knock-down”) concentraciones de proteínas específicas (por medio de degradación de mRNA dirigida hacia homología de siRNA) en contextos experimentales en el laboratorio, una alternativa en extremo útil y potente para la tecnología de noqueo de gen (cap. 39). CuADro 34-2 Componentes de ribosomas de mamífero Proteína Componente Masa (MW) rNA Número Masa Tamaño Masa Bases Subunidad 40S 1.4 × 106 33 7 × 105 18S 7 × 105 1 900 Subunidad 60S 2.8 × 10 50 1 × 10 5S 35 000 120 5.8S 45 000 160 28S 1.6 × 106 6 6 4 700 Nota: las subunidades ribosómicas se definen de acuerdo con su velocidad de sedimentación en unidades Svedberg (40S o 60S). Se listan el número de proteínas singulares y su masa total (MW) y los componentes RNA de cada subunidad en tamaño (unidades Svedberg), masa y número. 34 Bender.indd 310 27/11/09 14:36:31 CApíTulo 34 Despierta interés que las bacterias también contienen RNA reguladores heterogéneos pequeños denominados sRNA. El tamaño de los sRNA bacterianos varía desde 50 hasta 500 nucleótidos, y al igual que los mi/siRNA eucarióticos también controlan una gama grande de genes. De modo similar, los sRNA a menudo reprimen, pero en ocasiones activan, la síntesis de proteína al unirse a mRNA específico. ■ ■ ■ NUCLEASAS ESPECÍFICAS DIGIEREN A LOS ÁCIDOS NUCLEICOS Durante muchos años se han reconocido enzimas que tienen la capacidad de degradar ácidos nucleicos; tales nucleasas pueden clasificarse de varias maneras. Las que muestran especificidad por el DNA reciben el nombre de desoxirribonucleasas. Las que hidrolizan de modo específico RNA son las ribonucleasas. Algunas nucleasas degradan tanto el DNA como el RNA. Dentro de estas clases hay enzimas que tienen la capacidad de romper enlaces fosfodiéster internos para producir terminales 3ʹ-hidroxilo y 5ʹ-fosforilo, o terminales 5ʹ-hidroxilo y 3ʹ-fosforilo, las cuales se denominan endonucleasas. Algunas tienen la capacidad de hidrolizar ambas cadenas de una molécula bicatenaria, mientras que otras únicamente pueden dividir cadenas únicas de ácidos nucleicos. Algunas nucleasas sólo pueden hidrolizar cadenas únicas no pareadas, mientras que otras son capaces de hidrolizar cadenas únicas que participan en la formación de una molécula bicatenaria. Hay clases de endonucleasas que reconocen secuencias específicas en el DNA; casi todas éstas son las endonucleasas de restricción, que en los últimos años se han convertido en instrumentos importantes en genética molecular y ciencias médicas. El cuadro 39-2 presenta una lista de algunas de las endonucleasas de restricción reconocidas en la actualidad. Ciertas nucleasas tienen la capacidad de hidrolizar un nucleótido únicamente cuando está presente en una terminal de una molécula; éstas se llaman exonucleasas, y sólo actúan en una dirección (3ʹ → 5ʹ o 5ʹ → 3ʹ). En bacterias, una exonucleasa 3ʹ → 5ʹ es una parte integral de la maquinaria de replicación de DNA, y ahí sirve para editar —o corregir pruebas— del desoxinucleótido añadido más recientemente respecto a errores de la formación por apareamiento de bases. rESuMEN ■ 34 Bender.indd 311 El DNA consta de cuatro bases —A, G, C y T— que se mantienen en disposición lineal mediante enlaces fosfodiéster a través de las posiciones 3ʹ y 5ʹ de residuos adyacentes de desoxirribosa. ■ ■ Estructura y función del ácido nucleico 311 El DNA se organiza en dos cadenas por medio de la formación de pares de bases A a T y G a C en cadenas complementarias. Estas cadenas forman una doble hélice alrededor de un eje central. Los 3 × 109 pares de bases del DNA en seres humanos están organizados hacia el complemento haploide de 23 cromosomas. La secuencia exacta de estos 3 000 000 000 de nucleótidos define la singularidad de cada individuo. El DNA proporciona un molde para su propia replicación y, de esta manera, el mantenimiento del genotipo, y para la transcripción de los alrededor de 30 000 genes humanos hacia diversas moléculas de RNA. El RNA existe en varias estructuras monocatenarias diferentes, la mayor parte de las cuales participa de modo directo o indirecto en la síntesis de proteína o en su regulación. La disposición lineal de nucleótidos en el RNA consta de A, G, C y U, y el residuo de azúcar es ribosa. Las principales formas de RNA son el mensajero (mRNA), ribosómico (rRNA), de transferencia (tRNA), y RNA nucleares pequeños (snRNA; miRNA). Ciertas moléculas de RNA actúan como moléculas catalíticas (ribozimas). rEFErENCiAS Chapman EJ, Carrington JC: Specialization and evolution of endogenous small RNA pathways. Nature Rev Genetics 2007;8:884. Green R, Noller HF: Ribosomes and translation. Annu Rev Biochem 1997;66:689. Guthrie C, Patterson B: Spliceosomal snRNAs. Ann Rev Genet 1988;22:387. 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Anthony Weil, PhD IMPORTANCIA BIOMÉDICA* La información genética en el DNA de un cromosoma puede trans­ mitirse por medio de replicación precisa, o se puede intercambiar mediante diversos procesos, entre ellos entrecruzamiento, recombi­ nación, transposición y conversión. Éstos proporcionan un medio para asegurar la adaptabilidad y diversidad para el organismo pero, cuando estos procesos tienen errores, también pueden dar por re­ sultado enfermedad. Varios sistemas enzimáticos participan en la replicación, alteración y reparación del DNA. Las mutaciones se de­ ben a un cambio de la secuencia de bases de DNA, y en ocasiones dependen de defectos de la replicación, el movimiento o la repa­ ración del DNA, y ocurren con una frecuencia de alrededor de una en cada 106 divisiones celulares. A veces, las anormalidades en pro­ ductos de gen (sea en el RNA, la función o la cantidad de proteína) son el resultado de mutaciones que suceden en DNA codificador o de región reguladora. Una mutación en una célula germinal se transmite hacia la descendencia (la denominada transmisión vertical de enfermedad hereditaria). Diversos factores, entre ellos virus, sustancias quími­ cas, luz ultravioleta y radiación ionizante, aumentan el índice de mutación. Las mutaciones suelen afectar células somáticas y, así, se transmiten hacia generaciones sucesivas de células, pero sólo dentro de un organismo (es decir, de modo horizontal). Cada vez es más claro que varias enfermedades —y tal vez casi todos los cánce­ res— se deben a los efectos combinados de la transmisión vertical de mutaciones, así como a la transmisión horizontal de mutacio­ nes inducidas. LA CROMATINA ES EL MATERIAL CROMOSÓMICO EN LOS NÚCLEOS DE CÉLULAS DE ORGANISMOS EUCARIÓTICOS La cromatina consta de moléculas de DNA de doble cadena muy largas, y una masa casi igual de proteínas básicas más bien pequeñas llamadas histonas, así como una cantidad menor de proteínas no histona (la mayor parte de las cuales son ácidas y de mayor tamaño *Hasta donde es posible, la exposición en este capítulo y los capítulos 36, 37 y 38 se referirá a organismos mamíferos, que figuran, por supuesto, entre los eucariotas superiores. En ocasiones será necesario hacer referencia a observa­ ciones en organismos procarióticos, como por ejemplo bacterias y virus, pero en esos casos la información que se presenta puede extrapolarse a organismos mamíferos. A P í t u l O que las histonas), y una pequeña cantidad de RNA. Las proteínas no histona incluyen enzimas involucradas en la replicación y repara­ ción del DNA, y las proteínas participantes en la síntesis, el procesa­ miento y el transporte hacia el citoplasma, del RNA. La hélice de DNA bicatenario en cada cromosoma tiene una longitud que es mi­ les de veces el diámetro del núcleo de la célula. Un propósito de las moléculas que comprenden la cromatina, en especial las histonas, es condensar el DNA. Sin embargo, es importante notar que las his­ tonas también tienen una participación fundamental en la regulación de gen (caps. 36, 38 y 42). En estudios de microscopia electrónica de cromatina se han demostrado partículas esféricas densas denomi­ nadas nucleosomas, que tienen alrededor de 10 nm de diámetro y están conectadas por medio de filamentos de DNA (fig. 35­1). Los nucleosomas están compuestos de DNA enrollado alrededor de un conjunto de moléculas de histona. Las histonas son las proteínas más abundantes de cromatina Las histonas son una familia pequeña de proteínas básicas estrecha­ mente relacionadas. Las histonas H1 son las que están menos estre­ chamente unidas a la cromatina (fig. 35­1) y, en consecuencia, se eliminan con facilidad con una solución salina, tras lo cual la croma­ tina se hace más soluble. La unidad organizacional de esta cromatina soluble es el nucleosoma. Los nucleosomas contienen cuatro tipos de histonas: H2A, H2B, H3 y H4 —las llamadas histonas centrales que forman el nucleosoma— cuya estructura se ha conservado mu­ cho entre las especies. Esta conservación extrema indica que la fun­ ción de las histonas es idéntica en todos los eucariotas, y que toda la molécula participa de manera bastante específica en esta función. Los dos tercios carboxilo terminal de las moléculas de histona son hidrofóbicos, mientras que sus tercios amino terminal son en par­ ticular ricos en aminoácidos básicos. Estas cuatro histonas cen­ trales están sujetas a por lo menos seis tipos de modificación covalente: acetilación, metilación, fosforilación, ADP­ribosilación, monoubiquitilación y sumoilación. Estas modificaciones de histo­ nas tienen importancia en la estructura y la función de la cromatina (cuadro 35­1). Las histonas interactúan entre sí de modos muy específicos. H3 y H4 forman un tetrámero que contiene dos moléculas de cada una (H3­H4)2, mientras que H2A y H2B forman dímeros (H2A­H2B). En condiciones fisiológicas, estos oligómeros de histona se asocian para formar el octámero de histonas de la composición (H3­H4)2­ (H2A­H2B)2. 312 35 Bender.indd 312 27/11/09 14:42:05 cApítulo 35 Figura 35-1 Microfotografía electrónica de nucleosomas (esféricos, de color blanco) fijos a cadenas de DNA (línea gris delgada); véase la figura 35-2. (Reproducida, con autorización, de Shao Z. Probing nanometer structures with atomic force microscopy. News Physiol Sci, 1999, Aug.;14:142-149. Cortesía del Professor Zhifeng Shao, University of Virginia.) El nucleosoma contiene histona y dNa Cuando el octámero de histonas se mezcla con DNA bicatenario purificado en condiciones iónicas apropiadas, se forma el mismo modelo de difracción de rayos X que el que se observa en cromatina recién aislada. Estudios de microscopia electrónica confirman la existencia de nucleosomas reconstituidos. Además, la reconstitu­ ción de nucleosomas a partir del DNA e histonas H2A, H2B, H3 y H4 es independiente del origen de organismo o celular de los diver­ sos componentes. Ni la histona H1 ni las proteínas no histona se requieren para la reconstitución del centro del nucleosoma. En el nucleosoma, el DNA está superenrollado en una hélice hacia la izquierda sobre la superficie del octámero de histonas en forma de disco (fig. 35­2). Casi todas las proteínas histona centrales interactúan con el DNA en el interior de la superhélice sin sobresa­ Organización, replicación y reparación del DNA 313 lir, aun cuando las colas amino terminal de todas las histonas proba­ blemente se extienden fuera de esta estructura y están disponibles para modificaciones covalentes reguladoras (cuadro 35­1). El tetrámero (H3­H4)2 en sí puede conferir propiedades pareci­ das a nucleosoma sobre el DNA y, de esta manera, tiene una función fundamental en la formación del nucleosoma. La adición de dos dí­ meros H2A­H2B estabiliza la partícula primaria y une firmemente dos medias vueltas adicionales de DNA previamente unidas sólo de modo laxo al (H3­H4)2. De esta manera, 1.75 giros de superhéli­ ce de DNA están enrollados alrededor de la superficie del octámero de histonas, lo que protege 146 pares de bases de DNA y forma la partícula central del nucleosoma (fig. 35­2). En la cromatina, las par­ tículas centrales están separadas por una región de DNA de alrededor de 30 pb denominada “enlazador”. La mayor parte del DNA está en una serie repetitiva de estas estructuras, lo que da el llamado aspecto en “cuentas sobre un hilo” en la microscopia electrónica (fig. 35­1). El ensamble de nucleosomas está mediado por uno de varios factores de montaje de cromatina nucleares facilitados por chapero­ nes de histona, un grupo de proteínas que muestran unión de alta afinidad a histona. Conforme el nucleosoma se monta, las histonas se liberan de los chaperones de histona. Los nucleosomas muestran preferencia por ciertas regiones sobre moléculas de DNA específi­ cas, pero la base de esta distribución no al azar, denominada ajuste de fase, aún no se entiende por completo. El ajuste de fase probable­ mente se relaciona con la flexibilidad física relativa de ciertas se­ cuencias de nucleótido que tienen la capacidad de acomodarse en las regiones de curvatura dentro de la superhélice, así como con la presencia de otros factores unidos a DNA que limitan los sitios de depósito de nucleosoma. ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR MANTIENEN COMPACTADA LA CROMATINA La microscopia electrónica de la cromatina revela dos órdenes de estructura superiores —la fibrilla de 10 nm y la fibrilla de cromatina Cuadro 35-1 Posibles funciones de histonas modificadas Octámero de histonas 1. La acetilación de histonas H3 y H4 se relaciona con la activación o desactivación de la transcripción de gen. 2. La acetilación de histonas centrales muestra vínculo con el ensamble cromosómico durante la replicación de DNA. 3. La fosforilación de histona H1 se relaciona con la condensación de cromosomas durante el ciclo de replicación. 4. La ADP-ribosilación de histonas muestra vínculo con reparación de DNA. 5. La metilación de histonas se correlaciona con activación y represión de la transcripción génica. 6. La monoubiquitilación se relaciona con activación de gen, represión y silenciamiento de gen heterocromático. 7. La sumoilación de histonas (SUMO; modificador vinculado con ubiquitina pequeño [small ubiquitin-related modifier]) se relaciona con represión de la transcripción. 35 Bender.indd 313 Histona H1 DNA Figura 35-2 Modelo para la estructura del nucleosoma, en el cual el DNA está envuelto alrededor de la superficie de un cilindro proteínico plano que consta de dos de cada una de las histonas H2A, H2B, H3 y H4 que forman el octámero de histonas. Los 146 pares de bases de DNA, que constan de 1.75 vueltas superhelicoidales, están en contacto con el octámero de histona. Esto protege al DNA contra digestión por una nucleasa. El óvalo punteado en la parte inferior de la figura indica la posición de la histona H1, cuando está presente. 27/11/09 14:42:06 314 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales de 30 nm— más allá que la del nucleosoma mismo. La estructura del nucleosoma parecida a disco tiene 10 nm de diámetro y 5 nm de altura. La fibrilla de 10 nm consta de nucleosomas dispuestos con sus bordes separados por una distancia pequeña (30 bp de DNA) con sus caras planas paralelas al eje de la fibrilla (fig. 35­3). La fibri­ lla de 10 nm probablemente está más superenrollada con 6 o 7 nu­ cleosomas por cada vuelta, para formar la fibrilla de cromatina de 30 nm (fig. 35­3). Cada giro de la superhélice es relativamente plano y las caras de los nucleosomas de vueltas sucesivas serían casi para­ lelas entre sí. Las histonas H1 parecen estabilizar la fibra de 30 nm, pero no están claras su posición ni la del DNA espaciador de longi­ tud variable. Es probable que los nucleosomas puedan formar diver­ sas estructuras condensadas. Para formar un cromosoma mitótico, la fibra de 30 nm debe compactarse en longitud otras 100 veces (véase más adelante). En los cromosomas en interfase, las fibrillas de cromatina pa­ recen estar organizadas hacia asas o dominios de 30 000 a 100 000 bp anclados en andamiaje (o matriz de soporte) dentro del núcleo, la llamada matriz nuclear. Dentro de estos dominios, algunas se­ cuencias de DNA pueden estar ubicadas de modo no al azar. Se ha Cromosoma en metafase 1400 nm Asas condensadas 700 nm Forma asociada a andamio nuclear Andamio de cromosoma Asas no condensadas Figura 35-3 Se muestra la extensión de la aglomeración de DNA en cromosomas en metafase (arriba) a DNA dúplex desnudo (abajo). El DNA cromosómico está empaquetado y organizado en varios niveles como se muestra (cuadro 35-2). Cada fase de condensación o compactación y organización (de abajo a arriba) disminuye la accesibilidad general del DNA hasta un grado en que las secuencias de DNA en cromosomas en metafase son casi por completo inertes desde el punto de vista transcripcional. En total estos cinco niveles de compactación del DNA suscitan una disminución lineal de 104 veces de la longitud de un extremo a otro del DNA. La compactación y descompactación completas del DNA lineal en cromosomas ocurren en horas en el transcurso del ciclo celular replicativo normal (fig. 35-20). 35 Bender.indd 314 300 nm Fibrilla de cromatina del 30 nm compuesta de nucleosomas 30 nm H1 “Cuentas sobre un hilo”, fibrilla de cromatina de 10 nm DNA de doble hélice desnudo H1 Oct Oct Oct 10 nm H1 2 nm 27/11/09 14:42:07 cApítulo 35 sugerido que cada dominio de cromatina en asa corresponde a una o más funciones genéticas separadas, que contienen regiones tanto codificadoras como no codificadoras del gen o los genes cognados. Esta estructura nuclear probablemente es dinámica y tiene impor­ tantes efectos reguladores sobre la regulación de gen. Datos recien­ tes sugieren que ciertos genes o regiones génicas son móviles dentro del núcleo y que se mueven hacia loci separados dentro del núcleo en el momento de la activación (caps. 36 y 38). Investigación adicio­ nal determinará si éste es un fenómeno general. ALGUNAS REGIONES DE LA CROMATINA SON “ACTIVAS” Y OTRAS SON “INACTIVAS” En general, cada célula de un organismo metazoario individual con­ tiene la misma información genética. Así, las diferencias entre los tipos de célula dentro de un organismo deben explicarse por expre­ sión diferencial de la información genética común. Se ha mostrado que la cromatina que contiene genes activos (esto es, cromatina ac­ tiva desde el punto de vista transcripcional, o en potencia activa desde dicho punto de vista) difiere en varios aspectos de la cromati­ na de regiones inactivas. La estructura de nucleosoma de la croma­ tina activa parece estar alterada, a veces de manera bastante extensa, en regiones muy activas. El DNA en cromatina activa contiene re­ giones grandes (de alrededor de 100 000 bases de largo) que son relativamente más sensibles a la digestión por una nucleasa como la DNasa I; esta última hace cortes en una de las cadenas en casi cualquier segmento del DNA (es decir, especificidad baja de secuen­ cia). Digerirá DNA que no está protegido, o unido a proteína, hacia los desoxinucleótidos que lo componen. La sensibilidad a DNasa I de regiones de cromatina activas refleja sólo un potencial para transcripción más que transcripción en sí y en varios sistemas pue­ de correlacionarse con una falta relativa de la 5­metildesoxicitidina (meC) en el DNA y modificaciones covalentes de la histona particu­ lar (fosforilación, acetilación, etc.; cuadro 35­1). Dentro de las regiones grandes de cromatina activa hay tramos más cortos, de 100 a 300 nucleótidos, que muestran una sensibilidad aun mayor (otras 10 veces) a la de DNasa I. Estos sitios hipersensi­ bles probablemente se producen por una conformación estructural que favorece el acceso de la nucleasa al DNA; dichas regiones a me­ nudo están localizadas justo torrente arriba del gen activo, y son la ubicación de estructura nucleosómica interrumpida por unión de proteínas factor de transcripción reguladoras no histona (caps. 36 y 38). En muchos casos, parece ser que si un gen tiene la capacidad de ser transcrito, muy a menudo tiene uno o varios sitios hipersensi­ bles a DNasa en la cromatina justo torrente arriba. Como se men­ cionó, las proteínas reguladoras no histona involucradas en el con­ trol de la transcripción y las comprendidas en mantener acceso a la cadena molde conducen a la formación de sitios hipersensibles. Esos sitios a menudo proporcionan el primer indicio respecto a la presencia y ubicación de un elemento de control de transcripción. En contraste, la cromatina inactiva en el aspecto transcripcio­ nal está densamente aglomerada durante la interfaz, como se obser­ va mediante estudios con microscopia electrónica, y se denomina heterocromatina; la cromatina activa desde el punto de vista trans­ cripcional se tiñe menos densamente, y se llama eucromatina. En general, la eucromatina se replica antes que la heterocromatina en el 35 Bender.indd 315 Organización, replicación y reparación del DNA 315 ciclo de células de mamífero (véase más adelante). La cromatina en estas regiones de inactividad suele tener contenido alto de meC, y las histonas allí contienen relativamente menos modificaciones co­ valentes. Hay dos tipos de heterocromatina: constitutiva y facultativa. La heterocromatina constitutiva siempre está condensada y, de este modo, es en esencia inactiva. Se encuentra en las regiones cercanas al centrómero cromosómico y en terminaciones cromosómicas (teló­ meros). La heterocromatina facultativa en ocasiones está conden­ sada, pero algunas veces se transcribe de manera activa y, así, está no condensada y aparece como eucromatina. De los dos miembros del par de cromosomas X en hembras de mamífero, un cromosoma X es casi por completo inactivo en el aspecto transcripcional, y es hetero­ cromático. Empero, el cromosoma X heterocromático se desconden­ sa en el transcurso de la gametogénesis y se torna activo desde el punto de vista transcripcional durante la embriogénesis temprana; de este modo, es heterocromatina facultativa. Ciertas células de insectos, p. ej., Chironomus y Drosophila, contienen cromosomas gigantes que se han replicado durante múl­ tiples ciclos sin separación de cromátides hijas. Estas copias de DNA se alinean lado a lado en el registro exacto, y producen un cromoso­ ma con bandas que contiene regiones de cromatina condensada y bandas más claras de cromatina más extendida. Las regiones activas en el aspecto transcripcional de estos cromosomas politénicos se descondensan en especial hacia “abultamientos” (“puffs”) que pue­ de mostrarse que contienen las enzimas de las cuales depende la transcripción, y que son los sitios de síntesis de RNA (fig. 35­4). Al usar sondas de hibridación marcadas con fluorescencia, muy sensi­ bles, es posible “mapear” secuencias de gen específicas, o “pintarlas”, dentro de los núcleos de células de ser humano, incluso sin forma­ ción del cromosoma politeno, usando técnicas de FISH (hibridación in situ fluorescente; cap. 39). EL DNA ESTÁ ORGANIZADO EN CROMOSOMAS En el transcurso de la metafase, los cromosomas de mamífero po­ seen una simetría doble, con las cromátides hermanas duplicadas idénticas conectadas en un centrómero, cuya posición relativa es característica para un cromosoma dado (fig. 35­5). El centrómero es una región rica en adenina­timina (A­T) que contiene secuencias de DNA repetidas que varían en tamaño desde 102 (levadura de cer­ veza) hasta 106 (mamíferos) pares de bases. Los centrómeros de me­ tazoario están unidos por nucleosomas que contienen la proteína variante histona H3 CENP­A y otras proteínas de unión a centróme­ ro específicas. Este complejo, denominado el cinetócoro, proporcio­ na la fijación para el huso mitótico. De esta manera, es una estructu­ ra esencial para la segregación cromosómica durante la mitosis. Los extremos de cada cromosoma contienen estructuras llama­ das telómeros, que constan de repeticiones cortas ricas en TG. En seres humanos, los telómeros tienen un número variable de repeti­ ciones de la secuencia 5ʹ­TTAGGG­3ʹ, que puede extenderse por varias kilobases. La telomerasa, un complejo que contiene RNA de múltiples subunidades vinculado con DNA polimerasas depen­ dientes de RNA virales (transcriptasas inversas), es la enzima que se encarga de la síntesis de telómero y, de este modo, de mantener la longitud del mismo. Dado que el acortamiento de telómero se ha 27/11/09 14:42:07 316 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales Telómeros (TTAGG)n Cromátide hermana 1 Cromátide hermana 2 Centrómero Centrómero 5C BR3 A BR3 5C B Figura 35-4 Ilustración de la estrecha correlación entre la presencia de RNA polimerasa II (cuadro 36-2) y la síntesis de RNA mensajero. Varios genes, marcados como A, B (arriba) y 5C, no así los genes en el locus (la banda) BR3 (5C, BR3, abajo) se activan cuando larvas de Chironomus tentans quedan sujetas a choque por calor (39°C durante 30 min). (a) Distribución de la RNA polimerasa II en el cromosoma IV aislado de la glándula salival (en las flechas). La enzima se detectó por medio de inmunofluorescencia usando un anticuerpo dirigido contra la polimerasa. El 5C y BR3 son bandas específicas del cromosoma IV, y las flechas indican los abultamientos. (B) Autorradiograma de un cromosoma IV que se incubó en 3H-uridina para marcar el RNA. Note la correspondencia de la inmunofluorescencia y la presencia de RNA radiactivo (puntos negros). Barra = 7 μm. (Reproducida, con autorización, de Sass H: RNA polymerase B in polytene chromosomes. Cell 1982;28:274. Copyright ©1982. Reimpresa con autorización de Elsevier.) Telómeros (TTAGG)n Figura 35-5 Las dos cromátides hermanas del cromosoma 12 de ser humano. La localización de la región centromérica rica en A+T que conecta las cromátides hermanas está indicada, al igual que dos de los cuatro telómeros que residen en los extremos mismos de las cromátides que están fijas una a la otra en el centrómero. (Cortesía de Biophoto Associates/Photo Researchers, Inc.) Cuadro 35-2 Las proporciones de condensación de cada uno de los órdenes de estructura de dNa Forma de cromatina DNA de doble hélice desnudo relacionado tanto con transformación maligna como con envejeci­ miento, la telomerasa se ha convertido en un blanco atractivo para la quimioterapia de cáncer y el desarrollo de fármacos. Cada cromá­ tide hermana contiene una molécula de DNA bicatenario. Durante la interfase, la condensación de la molécula de DNA es menos densa que en el cromosoma condensado durante la metafase. Los cromo­ somas en metafase son casi por completo inactivos desde el punto de vista transcripcional. El genoma haploide de seres humanos consta de alrededor de 3 × 109 bp, y alrededor de 1.7 × 107 nucleosomas. Así, cada una de las 23 cromátides en el genoma haploide humano contendría en promedio 1.3 × 108 nucleótidos en una molécula de DNA bicatena­ rio. Por ende, la longitud de cada molécula de DNA debe compri­ mirse alrededor de 8 000 veces para generar la estructura de un cro­ mosoma en metafase condensado. En cromosomas en metafase, las fibras de cromatina de 30 nm también están plegadas hacia una se­ rie de dominios en asa, cuyas porciones proximales están fijas a un andamiaje de matriz nuclear proteináceo no histona dentro del nú­ cleo (fig. 35­3). El cuadro 35­2 resume las proporciones de conden­ sación de cada uno de los órdenes de estructura del DNA. 35 Bender.indd 316 Proporción de aglomeración ~1.0 Fibrilla de 10 nm de nucleosomas 7 a 10 Fibrilla de cromatina de 30 nm de nucleosomas superhelicoidales 40 a 60 Asas de cromosoma condensados en metafase 8 000 El empaquetamiento de nucleoproteínas dentro de cromátides no es al azar, según queda de manifiesto por los modelos típicos observados cuando los cromosomas se tiñen con colorantes especí­ ficos, como tinción de quinacrina o Giemsa (fig. 35­6). De un individuo a otro dentro de una especie única, el mo­ delo de tinción (bandeo) de la totalidad del cromosoma es muy reproducible; con todo, difiere de manera significativa entre las es­ pecies, incluso las que están muy relacionadas. De este modo, el empaquetamiento de nucleoproteínas en cromosomas de eucario­ tas superiores debe depender de alguna manera de características específicas de las moléculas de DNA para la especie. Una combinación de técnicas de coloración especializada y microscopia de alta resolución ha permitido a los citogenetistas 27/11/09 14:42:12 cApítulo 35 1 6 2 3 7 8 13 14 15 19 20 9 10 16 4 5 11 12 17 21 22 18 XY Organización, replicación y reparación del DNA 317 Figura 35-6 Un cariotipo de ser humano (de un hombre con una constitución 46,XY normal), en el cual los cromosomas en metafase se han teñido mediante el método de Giemsa y alineado de acuerdo con la Paris Convention. (Cortesía de H Lawce y F Conte.) “mapear” de modo bastante preciso miles de genes a regiones espe­ cíficas de cromosomas de ratón y ser humano. Con la elucidación reciente de las secuencias del genoma de ser humano y de ratón (en­ tre otras), ha quedado claro que muchos de estos métodos de mapeo visual son bastante exactos. do de reordenamiento genético de dominios funcionales podría permitir una evolución más rápida de la función biológica. En la figura 35­7 se ilustran las vínculos entre DNA cromosómico, agru­ paciones de gen en el cromosoma, la estructura de exón­intrón de genes y el producto mRNA final. Las regiones codificadoras a menudo están interrumpidas por secuencias intermedias GRAN PARTE DEL GENOMA DE MAMÍFERO PARECE REDUNDANTE Y GRAN PARTE NO SE TRANSCRIBE MUCHO Las regiones codificadoras de proteína del DNA, cuyas transcrip­ ciones aparecen en el citoplasma como moléculas de mRNA únicas, por lo general están interrumpidas en el genoma eucariótico por secuencias interpuestas grandes de DNA que no codifica para proteína. Por consiguiente, las transcripciones primarias del DNA, los precursores de mRNA (al inicio denominados hnRNA porque esta especie de RNA fue bastante heterogénea en tamaño [longitud] y en su mayor parte estaba restringida al núcleo), contienen secuen­ cias de RNA interpuestas no codificadoras que deben eliminarse en un proceso que también junta los segmentos codificadores apro­ piados para formar el mRNA maduro. Casi todas las secuencias co­ dificadoras para un mRNA único están interrumpidas en el genoma (y, de esta manera, en la transcripción primaria) por al menos una —y en algunos casos hasta 50— secuencia interpuesta no codifica­ dora (intrones). Casi siempre, los intrones son mucho más largos que las regiones codificadoras (exones). El procesamiento de la transcripción primaria, que comprende eliminación precisa de in­ trones y empalme de los exones adyacentes, se describe con detalle en el capítulo 36. La función de las secuencias intermedias, o intrones, no está por completo clara; tal vez sirvan para separar dominios funcionales (exones) de información codificadora en una forma que permite que el reordenamiento genético por medio de recombinación suce­ da con mayor rapidez que si todas las regiones codificadoras para una función genética dada fueran contiguas. Ese índice incrementa­ 35 Bender.indd 317 El genoma haploide de cada célula de ser humano consta de 3 × 109 pares de bases de DNA subdivididos en 23 cromosomas. El genoma haploide completo contiene suficiente DNA para codificar para cer­ ca de 1.5 millones de genes de tamaño promedio. Aun así, estudios de índices de mutación y de las complejidades de los genomas de organismos superiores sugieren fuertemente que los seres humanos tienen mucho menos de 100 000 proteínas codificadas por ~1% del genoma humano que está compuesto de DNA exónico. De hecho, estimados actuales sugieren que hay ≤ 25 000 genes codificadores de proteína en los seres humanos. Esto implica que casi todo el DNA es no codificador de proteína; es decir, su información nunca se tra­ duce hacia una secuencia de aminoácidos de una molécula de pro­ teína. Es cierto que algunas de las secuencias de DNA excesivas sir­ ven para regular la expresión de genes en el transcurso del desarrollo, la diferenciación y la adaptación al ambiente, ya sea al servir como sitios de unión para proteínas reguladoras o al codificar para RNA reguladores (esto es, miRNA). Está claro que parte del exceso cons­ tituye las secuencias intermedias o intrones (24% del genoma hu­ mano total) que dividen las regiones codificadoras de genes, y otra parte del exceso parece estar compuesta de muchas familias de se­ cuencias repetidas cuyas funciones todavía no se han definido con claridad. En el capítulo 39 se resumen las características sobresa­ lientes del genoma humano. Es interesante que el ENCODE Project 27/11/09 14:42:13 318 SEccIÓN IV Figura 35-7 Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales Las relaciones entre DNA y mRNA cromosómicos. La totalidad de DNA haploide humano de 3 × 109 pares de bases (bp) está distribuido entre 23 cromosomas. Los genes están agrupados en estos cromosomas. Un gen promedio tiene 2 × 104 bp de longitud, incluso la región reguladora (área con trama), que por lo general está localizada en el extremo 5’ del gen. La región reguladora se muestra aquí como adyacente al sitio de inicio de transcripción (flecha). Casi todos los genes eucarióticos tienen exones e intrones que alternan. En este ejemplo, hay nueve exones (áreas oscuras) y ocho intrones (áreas claras). Los intrones se eliminan de la transcripción primaria por medio de las reacciones de procesamiento, y los exones se ligan juntos en secuencia para formar en el mRNA maduro. (nt, nucleótidos.) Cromosoma (1 a 2 × 103 genes) 1.5 × 108 bp Agrupación de gen (~20 genes) 1.5 × 106 bp Gen 2 × 104 bp Transcripción primaria 8 × 103 nt mRNA 2 × 103 nt Consortium (cap. 39) ha mostrado que para el 1% del genoma estu­ diado, la mayor parte de la secuencia genómica de hecho se transcri­ bió a un índice bajo. Investigación adicional elucidará la función o funciones de esos transcritos. El DNA en un genoma eucariótico puede ser dividido en dife­ rentes “clases de secuencia”, a saber, DNA de secuencia única, o DNA no repetitivo y DNA de secuencia repetitiva. En el genoma haploide, el DNA de secuencia única por lo regular incluye los genes de copia única que codifican para proteínas. El DNA repetitivo en el genoma haploide comprende secuencias cuyo número de copias va­ ría desde 2 hasta 107 por célula. Más de la mitad del dNa en los organismos eucarióticos está en secuencias únicas o no repetitivas Tal estimación (y la distribución del DNA de secuencias repetitivas) se basa en diversas técnicas de hibridación de DNA­RNA y, en fecha más reciente, en la secuenciación directa de DNA. Se usan técnicas similares para estimar el número de genes activos en una población de DNA de secuencia única. En la levadura de cerveza (Saccharomyces cerevisiae, un eucariota inferior), alrededor de dos tercios de sus 6 200 genes se expresan, pero sólo ~1/5 se necesita para la viabilidad en condiciones de crecimiento en el laboratorio. En los tejidos típi­ cos en un eucariota superior (p. ej., hígado y riñón de mamífero), entre 10 000 y 15 000 genes se expresan de modo activo. Diferentes combinaciones de genes se expresan en cada tejido, por supuesto, y cómo se logra esto es una de las principales preguntas sin respues­ ta en biología. En el dNa de seres humanos, al menos 30% del genoma consta de secuencias repetitivas El DNA de secuencia repetitiva se clasifica en términos generales como moderadamente repetitivo o como muy repetitivo. Las se­ cuencias muy repetitivas constan de tramos de 5 a 500 pares de ba­ ses repetidos muchas veces en tándem. Estas secuencias suelen estar 35 Bender.indd 318 agrupadas en centrómeros y telómeros del cromosoma, y algunas están presentes en alrededor de 1 a 10 millones de copias por cada genoma haploide. Casi todas estas secuencias son inactivas en el as­ pecto transcripcional, y algunas tienen una función estructural en el cromosoma (fig. 35­5; véase cap. 39). Las secuencias moderadamente repetitivas, que se definen como estar presentes en números de menos de 106 copias por cada genoma haploide, no están agrupadas sino que están entremezcla­ das con secuencias únicas. En muchos casos, estas repeticiones entremezcladas largas son transcritas por la RNA polimerasa II, y contienen casquetes indistinguibles de las que se encuentran en el mRNA. Según su longitud, las secuencias moderadamente repetitivas se clasifican como secuencias repetidas entremezcladas largas (lINE, del inglés, long interspersed repeat sequences) o secuencias repetidas entremezcladas cortas (SINE del inglés, short interspersed repeat sequences). Ambos tipos parecen ser retrotransposones, es decir, surgieron por movimiento desde una ubicación hacia otra (transposición) a través de un RNA intermediario mediante la ac­ ción de la transcriptasa inversa que transcribe un molde de RNA hacia DNA. Los genomas de mamífero contienen 20 000 a 50 000 copias de las LINE de 6 a 7 kpb, las cuales representan familias de elementos repetidos específicas para especie. Las SINE son más cor­ tas (70 a 300 bp) y llegan hasta más de 100 000 copias por cada ge­ noma. De las SINE en el genoma humano, una familia, la familia Alu, está presente en alrededor de 500 000 copias por cada genoma haploide y explica 5 a 6% del genoma humano. Los miembros de la familia Alu humana y sus análogos estrechamente relacionados en otros animales se transcriben como componentes integrales de pre­ cursores de mRNA o moléculas de RNA separadas, incluso los bien estudiados RNA 4.5S y RNA 7S. Estos miembros de la familia par­ ticulares están muy conservados dentro de una especie, de igual ma­ nera entre especies de mamíferos. Los componentes de las repeticio­ nes entremezcladas cortas, incluso los miembros de la familia Alu, pueden ser elementos móviles, capaces de saltar hacia adentro y ha­ cia afuera de diversos sitios dentro del genoma (véase más adelante). Estos eventos de transposición llegan a tener resultados desastrosos, como se ejemplifica por la inserción de secuencias Alu hacia un gen que, cuando queda así mutado, origina neurofibromatosis. 27/11/09 14:42:14 cApítulo 35 Secuencias repetidas de microsatélite Una categoría de secuencias repetidas existe como disposiciones en tándem tanto dispersas como agrupadas. Las secuencias constan de 2 a 6 bp repetidas hasta 50 veces. Estas secuencias de microsatélite se encuentran con mayor frecuencia como repeticiones de dinu­ cleótido de AC en una cadena, y TG en la cadena opuesta, pero se encuentran varias otras formas, entre ellas CG, AT y CA. Las se­ cuencias repetidas AC ocurren en 50 000 a 100 000 ubicaciones en el genoma. En cualquier locus, el número de estas repeticiones pue­ de variar en los dos cromosomas, lo que proporciona heterocigosi­ dad del número de copias de un número de microsatélite particular en un individuo. Se trata de un rasgo hereditario, y debido a su nú­ mero y a la facilidad para detectarlas usando la reacción en cadena de polimerasa (pcR) (cap. 39), esas repeticiones son útiles para construir mapas de enlace genético. Casi todos los genes muestran vínculo con uno o más marcadores microsatélite, de manera que es posible evaluar la posición relativa de genes en cromosomas, al igual que la relación de un gen con una enfermedad. Usando PCR, un gran número de miembros de la familia se puede investigar con ra­ pidez para un cierto polimorfismo de microsatélite. La asociación de un polimorfismo específico con un gen en miembros de una fa­ milia afectados —y la ausencia de este vínculo en miembros no afec­ tados— puede ser el primer indicio en cuanto a la base genética de una enfermedad. Las secuencias de trinucleótido que aumentan de número (ines­ tabilidad de microsatélite) pueden causar enfermedad. La secuencia de repetición p(CGG)n inestable se relaciona con el síndrome de X frágil. Otras repeticiones de trinucleótido que pasan por mutación dinámica (por lo general un incremento) muestran vínculo con corea de Huntington (CAG), distrofia miotónica (CTG), atrofia muscular espinobulbar (CAG) y enfermedad de Kennedy (CAG). Organización, replicación y reparación del DNA 319 genes que se encuentran en DNA mitocondrial (mt). En el ser hu­ mano, las mitocondrias contienen 2 a 10 copias de una pequeña mo­ lécula de DNA bicatenario circular que constituye alrededor de 1% del DNA celular total. Este mtDNA codifica para RNA ribosómico y de transferencia específicos para mt, y para 13 proteínas que des­ empeñan funciones clave en la cadena respiratoria (cap. 13). La fi­ gura 35­8 muestra el mapa estructural linearizado de los genes mi­ tocondriales de ser humano. El cuadro 35­3 lista algunas de las características del mtDNA. Una característica importante del mtDNA mitocondrial del ser humano es que —puesto que el huevo contribuye con todas las mi­ tocondrias durante la formación del cigoto— se transmite por he­ rencia no mendeliana materna. De este modo, en enfermedades que se producen por mutaciones del mtDNA, una madre afectada en teoría transmitiría la enfermedad a todos sus hijos, pero sólo sus hijas transmitirían el rasgo. Como quiera que sea, en algunos casos, las deleciones en el mtDNA suceden durante la oogénesis y, de esta manera, no se heredan desde la madre; de manera reciente ha que­ dado demostrado que varias enfermedades se deben a mutaciones del mtDNA, entre ellas están diversas miopatías, trastornos neuro­ lógicos y algunos casos de diabetes mellitus. EL MATERIAL GENÉTICO SE PUEDE ALTERAR Y REORDENAR Una alteración de la secuencia de bases púricas y pirimídicas en un gen debido a un cambio —una eliminación o una inserción— de una o más bases puede suscitar un producto de gen alterado. Esa alteración del material genético produce una mutación cuyas con­ secuencias se comentan con detalle en el capítulo 37. UNO POR CIENTO DEL DNA CELULAR ESTÁ EN MITOCONDRIAS La recombinación cromosómica es un modo de reordenar el material genético Casi todos los péptidos en mitocondrias (alrededor de 54 de 67) están codificados por genes nucleares. El resto está codificado por La información genética puede intercambiarse entre cromosomas similares u homólogos. El intercambio, o evento de recombinación, kb 2 4 6 8 10 12 14 16 PH1 12S 16S ND1 ND2 CO1 CO2 CO3 OH ND4L ATPasa 8 6 PH2 ND3 OH ND4 ND5 CYT B ND6 PL OL Figura 35-8 Mapas de genes mitocondriales de ser humano. Los mapas representan las cadenas pesada (cadena superior) y ligera (mapa inferior) de DNA mitocondrial (mt) proyectado en forma lineal, que muestra los genes para las subunidades de NADHcoenzima Q oxidorreductasa (ND1 a ND6), citocromo c oxidasa (CO1 a CO3), citocromo b (CYT B) y ATP sintasa (ATPasa 8 y 6) y para los mt rRNAs ribosómicos 12S y 16S. Los RNA de transferencia están denotados mediante cuadros de color azul pequeños. El origen de la replicación de cadena pesada (OH) y cadena ligera (OL) y los promotores para el inicio de transcripción de cadena pesada (PH1 y PH2) y cadena ligera (PL) se indica por medio de flechas. (Reproducida, con autorización, de Moraes CT et al.: Mitochondrial DNA deletions in progressive external ophthalmoplegia and Kearns-Sayre syndrome. N Engl J Med 1989;320:1293. Copyright ©1989. Massachusetts Medical Society. Todos los derechos reservados.) 35 Bender.indd 319 27/11/09 14:42:16 320 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales Cuadro 35-3 algunas características importantes de la estructura y función del dNa mitocondrial de humano • Es circular, bicatenario, y está compuesto de cadenas pesadas (H) y ligeras (L) • Contiene 16 569 bp • Codifica para 13 subunidades proteínicas de la cadena respiratoria (de un total de alrededor de 67) Siete subunidades de NADH deshidrogenasa (complejo I) Citocromo b del complejo III Tres subunidades de citocromo oxidasa (complejo IV) Dos subunidades de ATP sintasa • Codifica para RNA ribosómicos grande (16S) y pequeño (12S) • Codifica para 22 moléculas de tRNA mt • El código genético difiere un poco del código estándar UGA (codón de detención estándar) se lee como Trp AGA y AGG (codones estándar para Arg) se leen como codones de detención • Contiene muy pocas secuencias no traducidas • Índice de mutación alto (5 a 10 veces el del DNA nuclear) • Las comparaciones de secuencias de mtDNA proporcionan evidencia acerca de los orígenes evolutivos de primates y otras especies Fuente: Adaptado de Harding AE: Neurological disease and mitochondrial genes. Trends Neurol Sci 1991;14:132. Copyright ©1991. Reimpreso con autorización de Elsevier. se produce principalmente en el transcurso de la meiosis en células de mamífero, y requiere alineamiento de cromosomas en metafase homólogos, un alineamiento que casi siempre sucede con gran exactitud. Ocurre un proceso de entrecruzamiento (fig. 35­9). Esto generalmente ocasiona un intercambio igual o recíproco de infor­ mación genética entre cromosomas homólogos. Si los cromosomas homólogos poseen diferentes alelos de los mismos genes, el entre­ cruzamiento llega a producir diferencias de enlace genético nota­ bles y hereditarias. En el raro caso en el cual el alineamiento de cromosomas homólogos es impreciso, el evento de entrecruza­ miento o recombinación puede traducirse en un intercambio des­ igual de información. Un cromosoma quizá reciba menos material genético y, así, una deleción, mientras que el otro miembro del par de cromosomas recibe más material genético y, de esta manera, una inserción o duplicación (fig. 35­9). El entrecruzamiento des­ igual ocurre en seres humanos, según se demuestra por la existen­ cia de hemoglobinas designadas Lepore y anti­Lepore (fig. 35­10). Mientras más separadas están dos secuencias en un cromosoma individual, mayor es la probabilidad de un evento de recombina­ ción por entrecruzamiento. Tal es la base de los métodos de mapeo genético. El entrecruzamiento desigual afecta disposiciones en tándem de DNA repetidos independientemente de si son genes que codifican para globina relacionados (fig. 35­10) o DNA repetitivo más abundante. El entrecruzamiento desigual por deslizamiento en la formación de pares puede dar por resultado expansión o con­ tracción del número de copias de la familia repetida, y contribuir a 35 Bender.indd 320 Figura 35-9 El proceso de entrecruzamiento entre cromosomas en metafase homólogos para generar cromosomas recombinantes. Véase también la figura 35-12. la expansión y fijación de miembros variantes en toda la disposi­ ción de repetición. ocurre integración cromosómica con algunos virus Algunos virus bacterianos (bacteriófagos) tienen la capacidad de re­ combinarse con el DNA de un huésped bacteriano de tal modo que la información genética del bacteriófago se incorpora de una manera lineal hacia la del huésped. Esta integración, que es una forma de re­ combinación, sucede por medio del mecanismo que se ilustra en la figura 35­11. El esqueleto del genoma de bacteriófago circular se rompe, al igual que el de la molécula de DNA del huésped; los extre­ mos apropiados se vuelven a sellar con la polaridad apropiada. El DNA del bacteriófago se endereza (“lineariza”) de modo figurativo, a medida que se integra en la molécula de DNA bacteriano, a menudo también un círculo cerrado. El sitio en el cual el genoma del bacterió­ fago se integra o se recombina con el genoma bacteriano se elige me­ diante uno de dos mecanismos. Si el bacteriófago contiene una se­ cuencia de DNA homóloga a una secuencia en la molécula de DNA huésped, puede producirse un evento de recombinación análogo al que ocurre entre cromosomas homólogos. De cualquier manera, al­ gunos bacteriófagos sintetizan proteínas que unen sitios específicos en cromosomas bacterianos a un sitio no homólogo característico de la molécula de DNA del cromosoma del bacteriófago. La integra­ ción sucede en el sitio y se dice que es “específica de sitio”. 27/11/09 14:42:17 cApítulo 35 Gγ Aγ δ βδ Aγ δ Gγ Aγ β Gγ Aγ δβ Lepore Muchos virus de animales, en especial los virus oncogénicos —sea de modo directo o, en el caso de virus RNA como el VIH que origina el SIDA, sus transcripciones de DNA generadas por medio de la acción de la DNA polimerasa dependiente de RNA viral, o transcriptasa inversa— pueden integrarse hacia cromosomas de la célula de mamífero. La integración del DNA del virus de animal ha­ cia el genoma del animal por lo general no es “específica de sitio” sino que despliega preferencias por sitio. La transposición puede producir genes procesados En células eucarióticas, elementos de DNA pequeños que clara­ mente no son virus tienen la capacidad de transponerse ellos mis­ mos hacia adentro y hacia afuera del genoma del huésped de mane­ ras que afectan la función de secuencias de DNA vecinas. Estos elementos móviles, a veces llamados “DNA saltador”, o genes sal­ tadores, pueden portar regiones flanqueantes de DNA y, por tanto, afectar de manera profunda la evolución. Como se mencionó, la familia Alu de secuencias de DNA moderadamente repetidas tiene B A C 1 A C 2 A 1 2 C 1 B A 2 Figura 35-11 La integración de un genoma circular de un virus (con genes A, B y C) hacia la molécula de DNA de un huésped (con genes 1 y 2) y el ordenamiento consiguiente de los genes. 35 Bender.indd 321 características estructurales similares a los términos de retrovirus, lo que explicaría la capacidad de estos últimos para entrar y salir del genoma de mamífero. El descubrimiento de “genes procesados” para moléculas de inmunoglobulina, moléculas de α­globulina, y varias otras, ha pro­ porcionado evidencia directa de la transposición de otros elementos de DNA pequeños hacia el genoma humano. Dichos genes procesa­ dos constan de secuencias de DNA idénticas o casi idénticas a las del RNA mensajero para el producto de gen apropiado. Así que la re­ gión 5ʹ­no traducida, la región codificadora sin representación de intrón, y la cola 3ʹ poli(A) están presentes de modo contiguo. Este ordenamiento de secuencia de DNA particular debe haberse produ­ cido por la transcripción inversa de una molécula RNA mensajero procesada de modo apropiado, de la cual las regiones intrón se ha­ bían eliminado y a la cual la cola poli(A) se había añadido. El único mecanismo reconocido que esta transcripción inversa podría haber usado para integrarse en el genoma habría sido un evento de trans­ posición. De hecho, estos “genes procesados” tienen repeticiones terminales cortas en cada extremo, al igual que las secuencias trans­ puestas conocidas en organismos inferiores. En ausencia de su transcripción y, de esta manera, de selección genética para función, muchos de los genes procesados se han alterado al azar mediante evolución, de modo que ahora contienen codones sin sentido que eliminan su capacidad para codificar para una proteína funcional intacta (cap. 37). Así, se denominan “seudogenes”. Además de entrecruzamiento desigual y transposición, un tercer mecanismo puede producir cambios rápidos en el material genético. Secuencias similares en cromosomas homólogos o no homólogos en ocasiones pueden parearse y eliminar cualquier secuencia des­ proporcionada entre ellas. Esto puede llevar a la fijación accidental de una variante u otra en toda una familia de secuencias repetidas y, de esta manera, homogeneizar las secuencias de los miembros de las familias de DNA repetitivo. Este último proceso se llama conver­ sión de gen. C B 1 Figura 35-10 El proceso de entrecruzamiento desigual en la región del genoma de mamífero que alberga los genes estructurales que codifican para hemoglobinas y la generación de los productos recombinantes desiguales hemoglobina delta-beta Lepore y beta-delta anti-Lepore. Los ejemplos dados muestran las ubicaciones de las regiones de entrecruzamiento entre residuos aminoácido. (Redibujada y reproducida, con autorización, de Clegg JB, Weatherall DJ: β0 Thalassemia: Time for a reappraisal? Lancet 1974;2:133. Copyright ©1974. Reimpresa con autorización de Elsevier.) La conversión de gen produce reordenamientos 2 B 321 β AntiLepore Gγ Organización, replicación y reparación del DNA Cromátides hermanas se intercambian En organismos eucarióticos diploides, como los seres humanos, des­ pués de que las células progresan por la fase S, tienen un contenido tetraploide de DNA, que se encuentra en la forma de cromátides 27/11/09 14:42:19 322 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales LA SÍNTESIS Y REPLICACIÓN DE DNA ESTÁN CONTROLADAS DE FORMA ESTRICTA Figura 35-12 Intercambios de cromátides hermanas entre cromosomas de ser humano, los cuales son detectables mediante tinción de Giemsa de los cromosomas de células replicadas durante dos ciclos en presencia de bromodesoxiuridina. Las flechas indican algunas regiones de intercambio. (Cortesía de S Wolff y J Bodycote.) hermanas de pares de cromosomas (fig. 35­6). Cada cromátide her­ mana contiene información genética idéntica dado que cada una es un producto de la replicación semiconservadora de la molécula de DNA madre original de ese cromosoma. Puede haber entrecruza­ miento entre estas cromátides hermanas idénticas desde el punto de vista genético. Por supuesto, estos intercambios de cromátides her­ manas (fig. 35­12) carecen de consecuencias genéticas en tanto el intercambio sea el resultado de un entrecruzamiento igual. Los genes que codifican para inmunoglobulina se reordenan En células de mamífero, algunos reordenamientos génicos intere­ santes se producen en circunstancias normales durante el desarrollo y la diferenciación. Por ejemplo, en ratones los genes VL y CL que codifican para una molécula única de inmunoglobulina (cap. 38) están ampliamente separados en el DNA de la línea germinal. En el DNA de una célula productora de inmunoglobulina (plasmática) diferenciada, los mismos genes VL y CL se han movido físicamente para acercarse en el genoma, y hacia la misma unidad de transcrip­ ción. No obstante, incluso entonces, este reordenamiento de DNA en el transcurso de la diferenciación no produce contigüidad de los genes VL y CL en el DNA. En lugar de eso, el DNA contiene una se­ cuencia intercalada o de interrupción de alrededor de 1 200 pares de bases en la unión de las regiones V y C o cerca de la misma. La se­ cuencia intercalada se transcribe hacia RNA junto con los genes VL y CL, y la información entremezclada se elimina del RNA durante su procesamiento nuclear (caps. 36 y 38). 35 Bender.indd 322 Queda claro que la función primaria de la replicación del DNA es el suministro de progenie con la información genética poseída por el progenitor. De este modo, la replicación del DNA debe ser com­ pleta y efectuarse de tal manera que mantenga estabilidad genética dentro del organismo y la especie. El proceso de replicación del DNA es complejo y comprende muchas funciones celulares y varios proce­ dimientos de verificación para asegurar fidelidad en la replicación. Alrededor de 30 proteínas participan en la replicación del cromoso­ ma de E. coli, y este proceso es más complejo en organismos eucarió­ ticos. Arthur Kornberg hizo las primeras observaciones enzimológi­ cas acerca de replicación de DNA; describió en E. coli la existencia de una enzima ahora denominada DNA polimerasa I. Esta enzima tie­ ne múltiples actividades catalíticas, una estructura compleja, y un requerimiento de los trifosfatos de los cuatro desoxirribonucleósidos de adenina, guanina, citosina y timina. La reacción de polimerización catalizada por la DNA polimerasa I de E. coli ha servido como proto­ tipo para todas las DNA polimerasas tanto de procariotas como de eucariotas, aun cuando ahora se reconoce que la principal función de esta polimerasa es la corrección de pruebas y la reparación. En todas las células, la replicación únicamente puede ocurrir a partir de un molde de DNA monocatenario (ssDNA). En conse­ cuencia, debe haber mecanismos para dirigir el sitio de inicio de la replicación y para desenrollar el DNA bicatenario (dsDNA) en esa región. A continuación debe formarse el complejo de replicación. Luego de que se completa la replicación en un área, las cadenas ma­ dre e hija tienen que volver a formar dsDNA. En células eucarióticas se requiere un paso adicional. El dsDNA debe volver a formar la estructura de cromatina, incluso nucleosomas, que existió antes del inicio de la replicación. Aunque todo este proceso no se entiende por completo en células eucarióticas, la replicación se ha descrito con bastante exactitud en células procarióticas, y los principios ge­ nerales son los mismos en ambas. Los principales pasos se listan en el cuadro 35­4, se ilustran en la figura 35­13, y se comentan, en se­ cuencia, a continuación. Este proceso involucra varias proteínas, casi todas con acción enzimática específica (cuadro 35­5). El origen de la replicación En el origen de replicación (ori) hay una asociación de proteínas de unión a dsDNA específicas para secuencia, con una serie de se­ Cuadro 35-4 Pasos comprendidos en la replicación de dNa en eucariotas 1. Identificación de los orígenes de replicación 2. Desenrollado (desnaturalización) de dsDNA para proporcionar un molde de ssDNA 3. Formación de la horquilla de replicación; síntesis de RNA iniciador 4. Inicio de la síntesis y el alargamiento de DNA 5. Formación de burbujas de replicación con ligadura de los segmentos de DNA recién sintetizados 6. Reconstitución de la estructura de cromatina 27/11/09 14:42:20 cApítulo 35 323 Organización, replicación y reparación del DNA Ori Región rica en A+T Proteína de Desnaturalización de la región A+T unión a ori ( ) Unión de SSB ( ) Unión de factores, formación de la horquilla de replicación, inicio de la replicación 3′ 5′ Cadena adelantada Polimerasa Helicasa Primasa 3′ SSB 5′ 3′ 5′ 3′ Cadena retrasada 5′ = Proteína de unión a ori = Polimerasa = DNA naciente = Preparador de RNA Horquilla de replicación = Helicasa = Primasa = SSB Figura 35-13 Pasos incluidos en la replicación de DNA. Esta figura describe la replicación de DNA en una célula de E. coli, pero los pasos generales son similares en eucariotas. Una interacción específica de una proteína (la proteína dnaA) con el origen de replicación (oriC) produce desenrollado local del DNA en una región adyacente rica en A + T. El DNA en esta área se mantiene en la conformación de cadena única (ssDNA) por medio de proteínas de unión a cadena única (SSB). Esto permite que diversas proteínas, entre ellas la helicasa, primasa y DNA polimerasa, se unan e inicien la síntesis de DNA. La horquilla de replicación procede conforme la síntesis de DNA sucede de manera continua (flecha roja larga) sobre la cadena adelantada, y de modo discontinuo (flechas de color negro cortas) en la cadena retrasada. El DNA naciente siempre se sintetiza en la dirección 5’ a 3’, dado que las DNA polimerasas sólo pueden añadir un nucleótido al extremo 3’ de una cadena de DNA. cuencias de DNA repetidas directas. En el bacteriófago λ, el oriλ es unido por la proteína O codificada por λ a cuatro sitios adyacentes. En E. coli, el oriC es unido por la proteína dnaA. En ambos casos se forma un complejo que consta de 150 a 250 bp de DNA y multíme­ ros de la proteína de unión a DNA. Esto da pie a la desnaturaliza­ ción y el desenrollado locales de una región de DNA rica en A+T. En células de levadura se han identificado secuencias de replicación autónoma (ARS) o replicadores, similares en el aspecto funcional. Las ARS contienen una secuencia de 11 bp un poco degenerada lla­ mada el elemento de replicación de origen (oRE). El ORE se une a un grupo de proteínas, análogas a la proteína dnaA de E. coli; el grupo de proteínas se denomina en conjunto el complejo de reco­ nocimiento de origen (oRc). Se han encontrado homólogos de ORC en todos los eucariotas examinados. El ORE está ubicado ad­ yacente a una secuencia rica en A+T de unos 80 bp que es fácil de desenrollar, la cual recibe el nombre de elemento de desenrollado de DNA (DuE). El DUE es el origen de la replicación en levaduras y es unido por el complejo de proteínas MCM. En células de mamífero no se ha logrado un consenso en la definición precisa de secuencias similares en estructura a ori o ARS, 35 Bender.indd 323 Cuadro 35-5 Clases de proteínas comprendidas en la replicación Proteína Función DNA polimerasas Polimerización de desoxinucleótido Helicasas Desenrollamiento procesivo de DNA Topoisomerasas Alivia la tensión de torsión que se produce por desenrollado inducido por helicasa DNA primasa Inicia la síntesis de RNA iniciadores Proteínas de unión de cadena sencilla Evita el retemplado prematuro de dsDNA DNA ligasa Sella la muesca de cadena sencilla entre la cadena naciente y fragmentos de Okazaki en la cadena retrasada 27/11/09 14:42:21 324 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales aun cuando se han identificado varias de las proteínas que partici­ pan en el reconocimiento y la función de ori, y parecen bastante si­ milares a sus homólogos en levaduras tanto en secuencia de ami­ noácidos como en función. desenrollado del dNa La interacción de proteínas con ori define el sitio de inicio de la re­ plicación, y proporciona una región corta de ssDNA esencial para el inicio de la síntesis de la cadena de DNA naciente. Este proceso ne­ cesita la formación de varias interacciones entre una proteína y otra, y entre proteína y DNA. Una DNA helicasa que permite el desenro­ llado procesivo de DNA proporciona un paso crítico. En E. coli no infectada, un complejo de dnaB helicasa y la proteína dnaC provee esta función. Proteínas de unión a DNA monocatenario (SSB) esta­ bilizan este complejo. En E. coli infectada por fago λ, la proteína P del fago se une a dnaB, y el complejo de P/dnaB a oriλ al interactuar con la proteína O. La dnaB no es una helicasa activa cuando está en el complejo de P/dnaB/O. Tres proteínas de choque por calor de E. coli (dnaK, dnaJ y GrpE) cooperan para eliminar la proteína P y activar la dnaB helicasa. En cooperación con SSB, esto lleva al des­ enrollado y replicación activa del DNA. Así, la replicación del fago λ se logra a expensas de la replicación de la célula de E. coli huésped. Formación de la horquilla de replicación Una horquilla de replicación consta de cuatro componentes que se forman en la secuencia que sigue: 1) la DNA helicasa desenrolla un segmento corto del DNA dúplex madre; 2) una primasa inicia la síntesis de una molécula de RNA que es esencial para preparar la síntesis de DNA; 3) la DNA polimerasa inicia la síntesis de la ca­ dena hija, naciente, y 4) las SSB se unen al ssDNA y evitan el reali­ neamiento prematuro de ssDNA hacia dsDNA. Dichas reacciones se ilustran en la figura 35­13. La enzima polimerasa III (el producto del gen dnaE en E. coli) se une a DNA molde como parte de un complejo de múltiples pro­ teínas que consta de varios factores accesorios de polimerasa (β, γ, δ, δʹ y τ). Las DNA polimerasas sólo sintetizan DNA en la dirección 5ʹ a 3ʹ, y únicamente uno de los varios tipos diferentes de polimera­ sas participa en la horquilla de replicación. Puesto que las cadenas de DNA son antiparalelas (cap. 34), la polimerasa funciona de modo asimétrico. En la cadena líder (hacia adelante, también denomina­ da cadena guía o conductora), el DNA se sintetiza de manera conti­ nua. En la cadena retrasada (retrógrada, también llamada cadena rezagada o retardada), el DNA se sintetiza en fragmentos cortos (1 a 5 kb; fig. 35­16), los denominados fragmentos de okazaki. Varios de estos fragmentos (hasta mil) deben sintetizarse de modo secuen­ cial para cada horquilla de replicación. Con el fin de asegurar que esto suceda, la helicasa actúa sobre la cadena retrasada para desen­ rollar dsDNA en una dirección 5ʹ a 3ʹ. La helicasa se asocia con la primasa para permitir a esta última acceso apropiado al molde, lo anterior permite que sea formado el iniciador de RNA y, a su vez, que la polimerasa empiece a replicar el DNA. Se trata de una se­ cuencia de reacción importante dado que las DNA polimerasas no pueden iniciar la síntesis de DNA de novo. El complejo móvil entre helicasa y primasa se ha llamado un primosoma. Conforme se com­ pleta la síntesis de un fragmento de Okazaki y se libera la polimera­ sa, se ha sintetizado un nuevo iniciador. La misma molécula de po­ 35 Bender.indd 324 limerasa permanece asociada con la horquilla de replicación, y procede a sintetizar el siguiente fragmento de Okazaki. El complejo de dNa polimerasa Varias moléculas de DNA polimerasa diferentes se encargan de la replicación de DNA y comparten tres propiedades importantes: 1) alargamiento de cadena; 2) procesividad, y 3) corrección de pruebas. El alargamiento de cadena explica el índice (en nucleóti­ dos por segundo, ntd/s) al cual ocurre la polimerización. La proce­ sividad es una expresión del número de nucleótidos añadidos a la cadena naciente antes de que la polimerasa se separe del molde. La función de corrección de pruebas identifica errores de copiado y los corrige. En E. coli, la polimerasa III (pol III) funciona en la horqui­ lla de replicación. De todas las polimerasas, cataliza el índice más alto de alargamiento de cadena, y es la más procesiva. Tiene la capa­ cidad de polimerizar 0.5 Mb de DNA durante un ciclo en la cadena líder. La Pol III es un complejo proteínico de múltiples subunida­ des, grande (> 1 MDa), en E. coli. La DNA pol III se asocia con las dos subunidades β idénticas de la “abrazadera” de deslizamiento de DNA; esta asociación aumenta de manera notoria la estabilidad del complejo de pol III­DNA, la procesividad (10 ntd a > 50 000 ntd) y el índice de alargamiento de cadena (20 a 50 ntd/s), lo que genera el alto grado de procesividad que demuestra la enzima. Las polimerasas I (pol I) y II (pol II) participan en su mayor parte en la corrección de pruebas y la reparación de DNA. Las célu­ las eucarióticas tienen homólogos para cada una de estas enzimas, más un número grande de DNA polimerasas adicionales que parti­ cipan de modo primario en la reparación del DNA. El cuadro 35­6 muestra una comparación. En células de mamífero, la polimerasa tiene la capacidad de polimerizar a un índice que es un poco más lento que el índice de polimerización de desoxinucleótidos por el complejo de DNA polimerasa bacteriano. Este índice disminuido quizá depende de interferencia por nucleosomas. inicio y alargamiento de la síntesis de dNa El inicio de la síntesis de DNA (fig. 35­14) requiere preparación por un tramo corto de RNA, de alrededor de 10 a 200 nucleótidos de largo. Cuadro 35-6 una comparación de dNa polimerasas procariótica y eucariótica E. coli Eucariótica Función I Llenado de brecha después de replicación, reparación y recombinación de DNA II Lectura de pruebas y reparación de DNA β Reparación de DNA γ Síntesis de DNA mitocondrial III ε Síntesis de cadena adelantada, procesiva DnaG α Primasa δ Síntesis de cadena retrasada, procesiva 27/11/09 14:42:22 cApítulo 35 En E. coli esto es catalizado por la dnaG (primasa); en eucario­ tas la DNA Pol α sintetiza estos RNA iniciadores. El proceso de pre­ paración incluye ataque nucleofílico por el grupo 3ʹ­hidroxilo del iniciador de RNA sobre el fosfato del desoxinucleósido trifosfato que entra primero (N en la fig. 35­14) con separación de pirofosfato; Organización, replicación y reparación del DNA 325 esta transición hacia síntesis de DNA es catalizada por las DNA polimerasas apropiadas (DNA pol III en E. coli; DNA pol δ y ε en eucariotas). El grupo 3ʹ­hidroxilo del desoxirribonucleósido mono­ fosfato recientemente fijado queda libre entonces para llevar a cabo un ataque nucleofílico sobre el siguiente desoxirribonucleósido X1 C O H H H HO H X2 C O Preparador de RNA O P O H H H HO H X3 C O O P O H H H HO H X4 C O O P O H H H H OH N OH C O O O P dNTP que entra primero O O– O P O– O H O– P O O– H H OH H H X4 C O O P O H H H H N C HO O O P O H H H H H N+1 OH C O Segundo dNTP que entra O O O P O 35 Bender.indd 325 O P – O O P O– O– O – H H H OH H H Figura 35-14 El inicio de la síntesis de DNA sobre un iniciador de RNA, y la fijación subsiguiente del segundo desoxirribonucleósido trifosfato. 27/11/09 14:42:23 326 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales 3′ T 5′ P C A A G H O G U H O A C H O Preparador de RNA A U H O H C T O Plantilla de DNA A G T T T A G A C C Polímero de DNA en crecimiento A G G T H T O P Figura 35-15 La síntesis de DNA utilizando un RNA iniciador y que demuestra la función de molde de la cadena complementaria del DNA parental. P P A A C TTP que entra trifosfato que entre (N+1 en la fig. 35­14), de nuevo en su porción fosfato α, con la separación de pirofosfato. Por supuesto, la selección del desoxirribonucleótido apropiado cuyo grupo 3ʹ­hidroxilo termi­ nal va a ser atacado depende de la formación apropiada de pares de bases con la otra cadena de la molécula de DNA de acuerdo con las reglas propuestas originalmente por Watson y Crick (fig. 35­15). Cuando una porción adenina desoxirribonucleósido monofosforilo está en la posición de molde, una timidina trifosfato entrará, y el grupo 3ʹ­hidroxilo del desoxirribonucleósido monofosforilo añadi­ do más recientemente al polímero atacará su fosfato α. Por medio de este proceso por pasos, el molde dicta cuál desoxirribonucleósido trifosfato es complementario, y mediante enlaces de hidrógeno lo sostiene en su sitio mientras el grupo 3ʹ­hidroxilo de la cadena en crecimiento ataca e incorpora el nuevo nucleótido hacia el polímero. 3′ G H 3′ O 5′ Estos segmentos de DNA fijos a un componente de RNA iniciador son los fragmentos de okazaki (fig. 35­16). En mamíferos, después de que se generan muchos de estos fragmentos, el complejo de repli­ cación empieza a eliminar los iniciadores de RNA, a llenar las bre­ chas dejadas por su eliminación con el desoxinucleótido pareado con base apropiado, y luego a sellar los fragmentos de DNA recién sintetizado, por medio de enzimas denominadas DNA ligasas. La replicación muestra polaridad Como se mencionó, las moléculas de DNA son bicatenarias, y las dos cadenas son antiparalelas. La replicación de DNA en procario­ tas y eucariotas sucede en ambas cadenas a la vez. Sin embargo, una enzima que tiene la capacidad de polimerizar DNA en la dirección Plantilla de DNA 5′ Preparador de RNA 5′ Cadena de DNA recién sintetizada 3′ 10 bp 10 bp 100 bp Fragmentos de Okazaki Figura 35-16 La polimerización discontinua de desoxirribonucleótidos en la cadena retrasada; se ilustra la formación de fragmentos de Okazaki durante la síntesis de DNA de cadena retrasada. Dichos fragmentos tienen 100 a 250 nt de largo en eucariotas, y 1 000 a 2 000 bp en procariotas. 35 Bender.indd 326 27/11/09 14:42:25 cApítulo 35 3ʹ a 5ʹ no existe en organismo alguno, de manera que las dos cadenas de DNA recién replicadas no pueden crecer en la misma direc­ ción de modo simultáneo. Empero, la misma enzima replica a am­ bas cadenas al mismo tiempo. La enzima única replica una cadena (“cadena adelantada”) de una manera continua en la dirección 5ʹ a 3ʹ, con la misma dirección hacia adelante. Replica la otra cadena (“cadena retrasada”) de modo discontinuo mientras polimeriza los nucleótidos en sucesiones cortas de 150 a 250 nucleótidos, de nuevo en la dirección 5ʹ a 3ʹ, pero al mismo tiempo mira hacia el extremo posterior del iniciador de RNA precedente en lugar de hacia la por­ ción no replicada. Este proceso de síntesis de DNA semidisconti­ nua se muestra en un diagrama en las figuras 35­13 y 35­16. Formación de burbujas de replicación La replicación procede desde un ori único en el cromosoma bacte­ riano circular, compuesto de aproximadamente 5 × 106 bp de DNA. Este proceso se completa en alrededor de 30 min, un índice de repli­ cación de 3 × 105 bp/min. El genoma de mamífero completo se re­ plica en aproximadamente 9 h, el periodo promedio requerido para la formación de un genoma tetraploide a partir de un genoma di­ ploide en una célula en replicación. Si un genoma de mamífero (3 × 109 bp) se replica al mismo índice que en las bacterias (es decir, 3 × 105 bp/min) a partir de un ori único, la replicación tardaría más de 150 h. Los organismos metazoarios sortean este problema usan­ do dos estrategias. En primer lugar, la replicación es bidireccional. En segundo lugar, la replicación procede desde orígenes múltiples en cada cromosoma (un total de hasta 100 en seres humanos). De esta manera, la replicación se produce en ambas direcciones a lo largo de todos los cromosomas, y ambas cadenas se replican a la vez. Este pro­ ceso de replicación genera “burbujas de replicación” (fig. 35­17). Los múltiples sitios que sirven como orígenes para la replica­ ción de DNA en eucariotas están poco definidos, excepto en algu­ nos virus de animales, y en levaduras. Con todo, está claro que el inicio está regulado en los aspectos tanto espacial como temporal, puesto que agrupaciones de sitios adyacentes inician la replicación de modo sincrónico. La activación de la replicación, o el inicio de la replicación de DNA en un replicador/ori, está influida por varias propiedades bien determinadas de la estructura de cromatina, que apenas están empezando a entenderse. Aun así, está claro que hay más replicadores y ORC excesivo que los necesarios para replicar el Organización, replicación y reparación del DNA 327 genoma de mamíferos dentro del tiempo de una fase S típica; por ende, debe haber mecanismos para controlar el exceso de replicado­ res unidos a ORC. El entendimiento del control de este proceso es un desafío importante. Durante la replicación de DNA, debe haber una separación de las dos cadenas para permitir que cada una sirva como un molde al unir con hidrógeno sus bases nucleótido al desoxinucleótido trifos­ fato que está entrando. La separación de la doble hélice de DNA es promovida por SSB en E. coli, una proteína llamada proteína de re­ plicación a (RPA) en eucariotas. Estas moléculas estabilizan la es­ tructura monocatenaria a medida que progresa la horquilla de repli­ cación. Las proteínas estabilizantes se unen de manera cooperadora y estequiométrica a las cadenas únicas sin interferir con las capaci­ dades de los nucleótidos para servir como plantillas (fig. 35­13). Además de separar las dos cadenas de la doble hélice, debe haber un desenrollado de la molécula (una vez cada 10 pares de nucleótidos) para permitir la separación de cadena. El complejo proteínico de DNA β hexamérico desenrolla DNA en E. coli, mientras que el com­ plejo hexamérico MCM desenrolla el DNA eucariótico. Este desen­ rollado ocurre en segmentos adyacentes a la burbuja de replicación, para contrarrestarlo hay múltiples “uniones giratorias” entremezcla­ das en las moléculas de DNA de todos los organismos. La función de giro es proporcionada por enzimas específicas que introducen “muescas” en una cadena de la doble hélice que se está desenro­ llando, lo que permite que proceda el proceso de desenrollado. Las muescas se vuelven a sellar con rapidez y sin requerir ingreso de energía, debido a la formación de un enlace covalente de alta ener­ gía entre el esqueleto de fosfodiéster que tiene la muesca y la enzima de resellado de muescas; este último tipo de enzima recibe el nom­ bre de DNA topoisomerasas. Dicho proceso se describe en un diagrama en la figura 35­18, y ahí se compara con el resellado de­ pendiente de ATP llevado a cabo por las DNA ligasas. Las topoiso­ merasas también tienen la capacidad de desenrollar DNA superen­ rollado; éste es una estructura de orden superior que se encuentra en moléculas de DNA circulares envueltas alrededor de un centro (fig. 35­19). En una especie de virus de animales (retrovirus) hay una clase de enzimas capaz de sintetizar una molécula de DNA monocatena­ ria y después una bicatenaria a partir de un molde de RNA monoca­ tenario. Esta polimerasa, la DNA polimerasa dependiente de RNA, o “transcriptasa inversa”, sintetiza primero una molécula híbrida Origen de replicación “Burbuja de replicación” 3′ 5′ 5′ 3′ Proteínas que se están desenrollando en horquillas de replicación Direcciones de replicación Figura 35-17 La generación de “burbujas de replicación” durante el proceso de síntesis de DNA. Se describen la replicación bidireccional y las posiciones propuestas de proteínas que se están desenrollando en las horquillas de replicación. 35 Bender.indd 327 27/11/09 14:42:26 328 SEccIÓN IV Estructura, función y replicación de macromoléculas informacionales Paso 1 DNA ligasa = E DNA topoisomerasa I = E E + ATP E R P A (AMP-enzima) 5′ 5′ P -E O 3′ H 3′ P Muesca de cadena única generada por enzima (E) 5′ O 3′ H 3′ Muesca de cadena única presente 5′ E Paso 2 P R P R A E 5′ 5′ P -E P Formación de enlace de alta energía O H Paso 3 Figura 35-18 Comparación de dos tipos de reacciones de sellado de muescas en el DNA. La serie de reacciones a la izquierda es catalizada por la DNA topoisomerasa I, y la de la derecha por la DNA ligasa; P, fosfato; R, ribosa; A, adenina. (Modificada un poco, y reproducida, con autorización, de Lehninger AL: Biochemistry, 2nd ed. Worth, 1975. Copyright ©1975 por Worth Publishers. Usado con autorización de W. H. Freeman and Company.) E A O H P R A (AMP) Muesca reparada Muesca reparada de DNA­RNA utilizando el genoma de RNA como una plantilla. Una nucleasa codificada por virus específica, la RNasa H, degrada a la cadena de RNA plantilla hibridada y la cadena de DNA restante, a su vez, sirve como una plantilla para formar una molécula de DNA bicatenaria que contiene la información originalmente presente en el genoma RNA del virus de animal. reconstitución de la estructura de cromatina Hay evidencia de que la organización nuclear y la estructura de cro­ matina están involucradas en la determinación de la regulación y el inicio de la síntesis de DNA. Como se comentó, el índice de polime­ rización en células eucarióticas, que tienen cromatina y nucleoso­ mas, es más lento que el que se observa en células procariotas, que tienen DNA desnudo. También está claro que la estructura de cro­ matina debe volver a formarse luego de la replicación. El DNA re­ cién replicado se ensambla con rapidez hacia nucleosomas, y los octámeros de histonas preexistentes y recién ensamblados se distri­ buyen al azar hacia cada brazo de la horquilla de replicación. Estas reacciones se facilitan mediante las acciones de proteínas chapero­ nas de histona que trabajan conjuntamente con complejos remode­ ladores de cromatina. 35 Bender.indd 328 Figura 35-19 Superenrollamiento de DNA. Una superhélice toroidal siniestra (solenoidal), a la izquierda, se convertirá en una superhélice diestra que gira sobre sí misma, a la derecha, cuando se elimina el centro cilíndrico. Esa transición es análoga a la que se produce cuando los nucleosomas se alteran mediante la extracción de histonas desde la cromatina en un medio con concentración alta de sal. 27/11/09 14:42:28 cApítulo 35 El dNa se sintetiza durante la fase S del ciclo celular En células de animales, incluso células de seres humanos, el genoma de DNA sólo se replica en un momento especificado en el transcurso del lapso de vida de las células. Este periodo se llama la fase sintética o S. Esto por lo general está separado temporalmente de la fase mitó­ tica o fase M, por periodos no sintéticos denominados gap 1 (G1) y gap 2 (G2), que ocurren antes y después de la fase S, respectivamen­ te (fig. 35­20). Entre otras cosas, la célula se prepara para la síntesis de DNA durante G1, y para la mitosis durante G2. La célula regula el proceso de síntesis de DNA al permitir que únicamente suceda en momentos específicos y en su mayor parte en células que se están preparando para dividirse por medio de un proceso mitótico. Todas las células eucarióticas tienen productos de gen que ri­ gen la transición desde una fase del ciclo celular hacia la otra. Las ciclinas son una familia de proteínas cuya concentración se incre­ menta y disminuye durante todo el ciclo celular; de ahí su nombre. Las ciclinas activan, en el momento apropiado, diferentes proteína cinasas dependientes de ciclina (cDK) que fosforilan sustratos esenciales para la progresión por el ciclo celular (fig. 35­21). Por ejemplo, las cifras de ciclina D aumentan al final de la fase G1 y permiten la progresión más allá del punto de inicio (levadura) o de restricción (mamíferos), donde las células proceden de modo irre­ vocable hacia la fase S o de síntesis de DNA. Las ciclinas D activan CDK4 y CDK6. Estas dos cinasas tam­ bién se sintetizan en el transcurso de G1 en células que se están di­ vidiendo de manera activa. Las ciclinas D y CDK4 y CDK6 son pro­ teínas nucleares que se ensamblan como un complejo al final de la fase G1. El complejo es una serina­treonina proteína cinasa activa. Un sustrato para esta cinasa es la proteína de retinoblastoma (Rb). Huso inadecuado detectado M G2 DNA dañado detectado Gl S DNA dañado detectado Replicación incompleta detectada Figura 35-20 Ciclo celular de mamífero y puntos de control del ciclo celular. La integridad del DNA, el cromosoma y la segregación del cromosoma se monitorea de manera continua durante todo el ciclo celular. Si se detecta daño del DNA en la fase G1 o la G2 del ciclo celular, si el genoma está replicado de modo incompleto, o si la maquinaria de segregación de cromosoma normal es incompleta (o sea, un huso defectuoso), las células no progresarán por la fase del ciclo en el cual se detectan defectos. En algunos casos, si es imposible reparar el daño, esas células pasan por muerte celular programada (apoptosis). 35 Bender.indd 329 Organización, replicación y reparación del DNA 329 Cdk1-ciclina B Cdk1-ciclina A