UNIVERSIDADE ESTADUAL DE SANTA CRUZ - UESC

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIAS E COMPUTAÇÃO - DEC

ENGENHARIA QUÍMICA

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA

Disciplina: CET 996 – Engenharia Bioquímica

Professora: Elizama Aguiar de Oliveira
Semestre: 24.2

Relatório 02
Data: 05 / 10 /24
Tema: Contagem de células de leveduras em câmara de Neubauer
Grupo:
João Fausto Figueiredo da Silva / 201711620
João Felipe Carvalho / 202211361

ILHÉUS-BAHIA
Setembro - 2024
 RESUMO

As técnicas de contagem de células desempenham um papel relevante no estudo da microbiologia.

Ela consiste em determinar a quantidade de células em uma amostra seja no meio de cultura, em
uma amostra sanguínea ou produto. Na indústria, por exemplo, contribui para o acompanhamento
da taxa de crescimento de bactérias, fungos e outros microrganismos relevantes para processos de
fermentação, produção de fármacos e outras substâncias de interesse comercial. Neste trabalho, foi
permitido visualizar e contar células de leveduras na Câmara de Neubauer através do microscópio
óptico e, assim, determinar a quantidade dos microrganismos presentes na amostra analisada.

Palavras-chave: Câmara de Neubauer, microrganismos.

 SUMÁRIO

1) INTRODUÇÃO E REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

2) OBJETIVOS DA AULA PRÁTICA

3) MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Materiais

3.2) Métodos

4) RESULTADOS E DISCUSSÕES

5) CONCLUSÕES E CONSIDERAÇÕES FINAIS

6) REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Câmara de Neubauer

Figura 2 - Contagem da concentração de células

Figura 3 - Micropipeta com ponteira

Figura 4 - Agitação no vortex

Figura 5- Transferência para a câmara de Neubauer

Figura 6 - Orientação da contagem

Figura 7 - Quadrante A da câmara de Neubauer

 1) INTRODUÇÃO E REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

A contagem de células de leveduras é uma etapa crucial em diversos processos, desde a pesquisa
básica até a produção industrial, como na indústria cervejeira e biocombustíveis. A câmara de
Neubauer, um instrumento óptico preciso, tem sido amplamente utilizada para essa finalidade
devido à sua simplicidade e custo relativamente baixo.

A câmara de Neubauer é um dispositivo utilizado para contagem de células em solução aquosa

como células sanguíneas e/ou seres unicelulares. Ela consiste em uma lâmina de vidro plana com
com um quadrado marcado no centro cujo há uma série de quadrados no qual cada uma desses
quadrados tem seu volume específico, o que permite que o observador possa calcular a
concentração de células no líquido testado. (SPLABOR, 2024)

A análise microscópica revela a presença de três tipos de quadrantes (A, B e C), subdivididos em
áreas de diferentes dimensões, formando um quadrado maior. A escolha do quadrante para
contagem microbiana é determinada pelo tamanho dos microrganismos. Quadrantes menores (C)
são utilizados para a contagem de microrganismos de menor porte, enquanto quadrantes de
tamanho intermediário (B) são empregados para microrganismos de tamanho médio. Por fim, os
quadrantes maiores (A) são destinados à contagem de microrganismos de maior dimensão.
(VIEIRA, 2012)

Figura 1 - Câmara de Neubauer

Fonte: http://citologia-biomedicina.blogspot.com/2011/03/camaras-de-contagem.html
O procedimento envolve diluir a amostra para que o número de células possam ser contáveis,
colocá-la na câmara usando uma pequena alíquota a qual preenche o espaço entre a lâmina e a
lumíla e utilizando o microscópio, contar as células em um ou mais quadrados. Nesse sentido, o
número total de células por mililitro é calculado usando o número de células no volume de cada
quadrado e no fator de diluição. (SPLABOR, 2024)

Para a contagem, há vários fatores que influenciam como: a diluição que quando excessiva pode
levar à subestimativa do número de células, a viabilidade celular a qual a câmara de Neubauer não
consegue distinguir células vivas de células mortas e, por isso, deve-se usar corantes vitais, a
contaminação a qual na presença de outros organismos pode interferir na contagem de células.

Além disso, pode-se destacar as vantagens em usar a câmara de Neubauer que consiste em ter um
design eficiente composta por placa de vidro com bordas elevadas e um quadrado central onde as
células ficam concentradas o que pode facilitar a contagem, também é um método relativamente
simple necessitando de equipamentos básicos e pode ser facilmente lavada e reutilizada o que
economiza custos. (SPLABOR, 2024)

O cálculo na câmara de Neubauer é utilizado para determinar a concentração de células na solução

indicada. Visto isso, temos:

Figura 2 - Cálculo da concentração de células

Fonte:https://www.splabor.com.br

onde o cálculo depende do número de células vistas em microscópio, do fator de diluição e volume
do quadrado.

Em resumo, a câmara de Neubauer é um método eficiente para contagem de células, simples e de

baixo custo o qual necessita apenas de um bom manuseio e visualização do operador.
 2) OBJETIVOS DA AULA PRÁTICA
Contagem em câmara de Neubauer é preparar o aluno para realizar a contagem de células e
partículas microscópicas de forma precisa e eficiente. A câmara de Neubauer é um dispositivo
laboratorial que permite a contagem de células em uma área específica, com o uso de um
microscópio.

3) MATERIAIS E MÉTODOS

3.1) Materiais
● Solução estoque (Saccharomyces Cerevisiae);

● Solução salina NaCl (0,85% p/v);

● Solução azul de metileno/eritrosina;

● Tubos de ensaio;

● Galeria para tubos;

● Micropipeta 1000µL;

● Ponteiras;

● Pipeta volumétrica de 10mL;

● Pera de sucção;

● Vortex;

● Câmara de contagem Neubauer;

● Lamínula;

● Microscópio.
 3.2) Métodos

Etapa 1 – Preparo e diluição de amostra:

Inicialmente foi pipetado 1mL da solução de Saccharomyces cerevisiae com o auxílio da

micropipeta, que pode ser observada na figura 1, e transferido para o primeiro tubo de ensaio com
diluição de 10-1.

Figura 3 – Micropipeta com ponteira

Fonte: autoria própria

Posteriormente, foi adicionado no mesmo tubo 9mL de solução salina NaCl 0,85% com o auxílio
de uma pipeta, podemos observar o procedimento. Depois o tubo foi levado para agitação no
Vortex por aproximadamente, temos a agitação no Vortex Thermolyne modelo Maxi Mix Plus.

Figura 4 – Agitação no Vortex

Fonte: autoria própria

As diluições foram feitas adicionando 1mL da solução anterior em um tubo de ensaio com 9mL de
solução salina e levando para agitação no Vortex até chegar na diluição de 10-7.
Etapa 2 – Preparo da câmara de Neubauer

A lamínula foi colocada cuidadosamente sobre a câmara de Neubauer, de forma que ficasse
bem encaixada. É importante que a lamínula estivesse limpa e seca, para evitar contaminação da
suspensão. Com o auxílio da micropipeta, foi coletada uma pequena alíquota (em torno de 10 µL)
da suspensão preparada. É importante que a alíquota fosse coletada de forma uniforme, para evitar
que a suspensão ficasse concentrada em uma área específica da câmara. A coleta da alíquota com o
auxílio da micropipeta, já na figura 3 podemos observar a transferência para a câmara de Neubauer.

Figura 5 - Transferência para a câmara de Neubauer

Fonte: autoria própria

Etapa 3 – Contagem das células

Levou-se a câmara de Neubauer com a lamínula ao microscópio óptico. Após isso, ajustou-se a
objetiva de 40x. Por fim, a contagem das células de leveduras em cada um dos quatro quadrantes
da câmara de Neubauer, seguindo as regras de contagem. Na figura abaixo temos o microscópio
ajustado para iniciar a contagem.

Etapa 4 - Regras de contagem

O quadrante contado na prática foi o quadrante A, foram contados os 16 quadrantes internos (grid)
e a contagem foi realizada seguindo a orientação das setas da figura 4.
 Figura 6 - Orientação da contagem

Fonte: autoria própria

Depois que a contagem dos quadrantes internos foi realizada, dispensando as células sobre as
linhas e aglomerado pequeno de células sendo considerada apenas uma, deve ser feita a média de
células do quadrante A.

4) RESULTADOS E DISCUSSÕES
Com as orientações da docente utilizamos a imagem retirada de um relatório aleatório da disciplina
no semestre 2023.2, a qual foi encaminhada.

Figura 7 - Quadrante A da câmara de Neubauer

Fonte: Discentes do semestre 2023.2

Na tabela 1 temos a contagem que foi feita nos quadrantes internos da câmara de Neubauer. Foram
16 quadrantes internos, ou grids, e em todos foram seguidas as regras de contagem apresentadas
anteriormente.

Tabela 1 – Contagem das células do quadrante A superior esquerdo

Quadrante 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Contagem 31 36 41 38 28 34 37 27 34 31 39 31 37 29 39 33

O primeiro passo para o cálculo de viabilidade é encontrar a média de células do quadrante, para
isso é realizada a soma de todas as contagens de todos os quadrantes e dividimos este valor pelo
número de quadrantes externos, que no caso do quadrante A são 4. Contudo, na prática foi
realizada a contagem de apenas um quadrante superior esquerdo e encontramos uma soma de 545
células para o quadrante A e uma média de 34,06. Posteriormente o valor encontrado da soma
dentro do quadrante é multiplicado por 104 que representa o volume da amostra, assim temos que a
M(cél) deste quadrante é 545 x 104. O valor encontrado é substituído na equação abaixo:

(eq.1)
Onde, M(cél) é a média das células dos quadrantes, V(a) é o volume da amostra que
utilizamos na câmara e FD é o fator de diluição utilizado. Substituindo o valor médio por 545 x
104, o volume de amostra que foi de 10 µL e o fator de diluição de 10-7. A contagem na amostra das
células de leveduras é de 5450 cel/mL.
Com o uso do corante no laboratório não foi possível realizar a contagem de células mortas e
células viáveis. Por conta disso, ficou impossibilitado o cálculo da viabilidade da amostra.

5) CONCLUSÃO

Contagem de células de levedura usando uma câmara de Neubauer é um método simples e preciso
para estimar o número de células em uma suspensão. No caso descrito, a contagem foi feita em
apenas um dos quadrantes da câmara, resultando em 5450 células vivas por mm³ de suspensão, o
que corresponde a uma concentração de 5450 células por mL de suspensão. Embora a viabilidade
da amostra não tenha sido calculada, esse parâmetro é crucial para avaliar se a atividade celular
está ocorrendo corretamente. Apesar de não termos realizado a prática completa, foi possível
observar uma quantidade aproximada de células na amostra.

6) REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] SPLABOR. O que é uma câmara de Neubauer e como ela funciona? Disponível em:
https://www.splabor.com.br/blog/30-produtos-para-laboratorio-de-quimica/o-que-e-uma-camar
a-de-neubauer-e-como-ela-funciona/. Acesso em: 15 out. 2024.

[2] TORTORA, J. G.; FUNKE, R. B.; CASE, L. C. Microbiologia, 12.ed. Artmed, Porto Alegre,
2017.

[3] VIEIRA, D.A.P.; FERNANDS, N.C.A. Microbiologia Geral. Rede e-Tec. Inhumas, 2012.