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O perxido de hidrognio formado reage com 4-aminoantipirina e fenol, sob ao catalisadora da peroxidase, atravs de uma reao oxidativa de acoplamento, formando uma antipirilquinonimina vermelha cuja intensidade de cor proporcional concentrao da glicose na amostra. 2H2O2 + 4-Aminoantipirina + fenol Antipirilquinonimina + 4H2O

AMOSTRA Preparo do paciente Glicemia de jejum: recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Tipos de amostra Usar plasma ou soro. Realizar a colheita do sangue utilizando um anticoagulante contendo um inibidor da gliclise. O uso do anticoagulante Glistab (Labtest cat. 29) permite a colheita de uma s amostra para as dosagens de creatinina, glicose e uria. As amostras de sangue no contendo antiglicoltico devem ser centrifugadas imediatamente aps a colheita e o plasma ou soro separados das clulas ou cogulo. No lquor e lquidos (asctico, pleural e sinovial) adicionar anticoagulante contendo antiglicoltico na mesma proporo usada para a amostra de sangue e devem ser centrifugados antes de iniciar a medio. Armazenamento e estabilidade da amostra

O analito estvel por 8 horas em amostras colhidas com antiglicoltico. No plasma, soro e outros lquidos separados das clulas, a glicose permanece estvel por 3 dias entre 2 8 C, quando no ocorre contaminao bacteriana.
Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra Presena de cogulo. Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Glicose PAP Liquiform, Catlogo 84-2/250, 84-2/500 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010003

Reagente 1: Armazenar entre 2 8 C. Contm tampo 50 mmol/L; pH 7,5; glicose oxidase 11.000 U/L; peroxidase 700 U/L; 4aminoantipirina 290 mol/L; fenol 1 mmol/L e azida sdica 7,5 mmol/L. Padro - 100 mg/dL: Armazenar entre 2 30 C. Aps o manuseio, sugere-se armazenar bem vedado para evitar evaporao. Contm glicose 100 mg/dL e biocida no txico. O estabilizador do padro pode precipitar-se em baixas temperaturas, fato que no interfere na sua qualidade. Precaues e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos

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contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. O Reagente 1 contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.

EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 505 nm ou filtro verde (490 a 540 nm). 2. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C). 3. Pipetas para medir amostras e reagentes. 4. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Procedimento manual Mtodo Direto 1. Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Amostra Padro (n 2) Reagente 1 Branco --------1,0 mL Teste 0,01 mL ----1,0 mL Padro ----0,01 mL 1,0 mL

2. Misturar vigorosamente e colocar em banho-maria a 37 C durante 15 minutos. O nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. 3. Determinar as absorbncias do teste e padro em 505 nm ou filtro verde (490 a 540 nm), acertando o zero com o branco. A cor estvel por 60 minutos. Mtodo cintico O procedimento utiliza uma cintica de 2 pontos e no requer o branco da reao. O controle da temperatura absolutamente indispensvel para a reprodutibilidade dos resultados. fundamental tambm que as operaes com amostras e padres sejam realizadas sempre de modo idntico, mantendo-se constante, ao mximo possvel, o intervalo entre a mistura da amostra ou padro com o reagente e o incio da incubao no fotmetro. Como o tempo de reao muito pequeno, necessrio utilizar um fotmetro que tenha controle de temperatura na cubeta, a 37 C. 1. Acertar o zero do fotmetro em 505 nm ou filtro verde (490 a 540 nm) com gua destilada ou deionizada. 2. Adicionar 0,01 mL da amostra ou padro a 1,0 mL do Reagente 1, previamente aquecido a 37 C. 3. Misturar e iniciar imediatamente a medida fotomtrica. Ler as absorbncias aos 30 e 90 segundos, mantendo a reao com temperatura controlada em 37 C.

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Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos < 0,1 mg/l (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. 3. Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. CLCULOS Ver linearidade. Efetuar clculos distintos para o mtodo direto e mtodo com desproteinizao. Absorbncia do teste Glicose (mg/dL) = x 100 Absorbncia do padro Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o mtodo do fator pode ser empregado. 100 Fator de calibrao = Absorbncia do padro Glicose (mg/dL) = Absorbncia do teste x Fator Mtodo cintico Calcular as diferenas de absorbncias para o teste e o padro: A = A 90 segundos A 30 segundos Glicose (mg/dL) = A do teste A do padro RESULTADOS Unidade de medida mg/dL = Converso de mg/dL para unidade SI: mmol/L = mg/dL x 0,0556 Valores de referncia Plasma: (jejum de 8 horas): 70 a 99 mg/dL Glicemia de jejum normal 100 a 125 mg/dL Glicemia de jejum alterada maior ou igual a 126 mg/dL Provvel Diabetes Mellitus Lquor: 2/3 da glicemia quando a medio realizada em amostras colhidas simultaneamente. Valores crticos Plasma: >400 mg/dL <40 mg/dL Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico. x 100

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LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade A reao linear at 500 mg/dL. Quando for obtido valor igual ou maior que 500 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L, realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 80 e 200 mg/dL. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio. Interferncias 1- Mtodo de ponto final: Valores de Bilirrubina maiores que 10 mg/dL produzem interferncias negativas. Para amostras com Triglicrides maiores que 1100 mg/dL pode-se minimizar o efeito da turvao utilizando o branco de amostra ou diluindo a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%) e repetindo a medio. 2- Mtodo Cintico: Valores de Bilirrubina at 10 mg/dL, Hemoglobina at 150 mg/dL e Triglicrides at 3500 mg/dL no produzem interferncias significativas. 3- cido Ascrbico em concentraes acima de 100 mg/dL interfere na reao produzindo resultados falsamente diminudos. 4- Pacientes diabticos em uso continuado de clorpropamida (Diabinese) podem desenvolver hipoglicemias importantes que so muito difceis de corrigir. 5- Publicaes demonstram que a urina pode conter numerosas substncias que interferem nos mtodos que utilizam a reao GOD-POD. 6- Vrias drogas podem afetar o metabolismo da glicose, dentre elas encontram-se os corticides, tiazdicos e outros diurticos. 7- Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia sugere-se consultar Clin Chem 1975; 21: 1D-432D. SIGNIFICADO CLNICO Valores elevados de glicose ocorrem nos vrios tipos de diabetes primrias, nos estados de intolerncia glicose e nas diabetes secundrias a vrias doenas (hipertireoidismo, hiperpituitarismo e hiperadrenocorticismo, entre outras). Valores diminudos de glicose ocorrem nas hipoglicemias devido a vrias causas. Quando a ocorrncia de sintomas de hipoglicemia relacionada alimentao, duas formas de hipoglicemia podem ser definidas: hipoglicemia do jejum e ps-prandial. As causas mais comuns de hipoglicemia do jejum so: (1) hiperinsulinismo endgeno (insulinoma e sulfonilurea), (2) hiperinsulinismo exgeno (factcio), (3) tumores extrapancreticos, (4) sndrome autoimune ( formao espontnea de anticorpos para receptores da insulina), (5) insuficincia supra-renal e ou hipofisria, (6) doena heptica grave e (7) alcoolismo. A hipoglicemia ps-prandial, dependendo da histria clnica e da resposta ao teste oral de tolerncia glicose, classificada em (1) hipoglicemia alimentar, (2) hipoglicemia ao diabtico tipo II e do paciente com intolerncia glicose e (3) hipoglicemia funcional ou reativa. Para uma reviso dos critrios diagnsticos e classificao do diabetes mellitus consultar Diabetes Care 1997;20:1183-94. A reduo da concentrao de glicose nos lquidos corporais encontra-se usualmente relacionada a processos inflamatrios ou infecciosos. A determinao da concentrao de glicose no lquor representa um dos parmetros para a distino entre meningite bacteriana e virtica, tendo, porm, sensibilidade inferior avaliao da celularidade no mesmo material. REFERNCIAS 1. Bergmeyer HU. Methods of Enzimatic Analysis, 3a. edio, Vol VI, Deerfield Beach: VCH, 1986:178184. 2. Blaedel WJ, Uhl JM. Clin Chem 1975;21:119-124. 3. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests, 1a edio, Washington: AACC pPress, 1993. 4. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Rio de Janeiro: Qualitymark eds, 1997. 5. Sachs DB Bruns DE, Goldstein DE, Maclaren NK, McDonald JM, Parrot M. Clin Chem 2002;48:43672. 6. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia: W.B. Saunders, 1970:154-166. 7. Tonks DB Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcot Laboratories, Diagnostic Reagent Division, Scarborough, Canada, 1972. 8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-501. 9. Glicose PAP Liquiform, Instrues de Uso, Labtest Diagnstica.

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Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino

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