Fertilização e Clivagem PDF

Fertilização e Clivagem embrionária
FERTILIZAÇÃO
Fertilização- “Diálogo entre os
gametas”
• Interação do gameta masculino (n) com o gameta
feminino (n), dando origem a um novo “ ser “ (2n),
fenômeno este que ocorre na ampola da tuba uterina na
maioria dos mamíferos.
-Fertilização externa em ouriço-do-mar.

-Fertilização in vivo (tuba uterina).
-Fertilização in vitro (FIV)  1978
Ocorre quando o gameta
Autofecundação masculino fecunda o
gameta feminino do próprio
indivíduo (ex: tênias).
Fecundação externa
Alto custo energético na produção de gametas.

Fecundação interna
Menor custo energético na produção de gametas.

Transporte dos sptz
• Contração
• Muco favorável
• Movimento próprio
• Quimiotaxia??? Resacina(ouriço)
x103
x102 x104
x105
x106
Transporte do oócito
• Fímbrias “varredura”
• Cumulus oophorus
• Contrações
• Movimento ciliar (não essencial)
• Substâncias quimiotáteis
• Vida fértil do oócito estimada entre 12 a 24h; do
sptz, de 48 a 72h
Capacitação
• As mudanças fisiológicas que levam os espermatozoides a estarem competentes para
a fertilização.
7 horas
•Em 1949, Noyes, Finkle e Rocke –

registraram a capacitação em coelhos
•Tem início no epidídimo e completa na vagina, colo, útero e tuba

•Durante o percurso pelo epidídimo, as
macromoléculas que recobrem a membrana do
espermatozóide são em parte perdidas e em parte
modificadas, e outras macromoléculas (produzidas
pelo epidídimo) são incorporadas à membrana.
O início da capacitação varia entre as espécies e

dependeria do local onde ocorre a ejaculação
Capacitação
Após mais de cinquenta anos da descoberta da capacitação, as bases
moleculares não foram totalmente entendidas
• Alterações na composição glico-proteica da

membrana plasmática do espermatozóide.
• sequestro de colesterol,
• íons de cálcio desempenhariam o papel de
desencadeadores do processo da capacitação
espermática.
• Hipertativação(aumento resp. celular)
•Muitos espermatozóides poderão não reagir a estímulos indutores

da capacitação ou ainda se deteriorarem sobre estas condições
Um influxo de Ca2+ provoca a fusão da
membrana externa do acrossomo com a
membrana plasmática do espermatozoide em
vários pontos.
FERTILIZAÇÃO
1-Reação Acrossômica
e Penetração na zona
pelúcida (reação de
zona)
• hialuronidase , acrosina e
B-galactosidade)
• glicoproteinas
ZP1,ZP2,ZP3(reconhecimento
espécie-específico)
• Cada gameta une-se a 10.000/50.000
receptores da zona pelúcida
Anfibios -regiões
especializadas em
reconhecimento do sptz
Zona pelúcida (ZP)
• Camada protéica
• Funções:
▫ Manter os blastômeros agrupados
▫ Cria barreira específica- Presença no ZP3 de
receptores para proteínas espécie-específica da
superfície do sptz.
▫ Necessita ser rompida para implantação.
▫ Previne implantação prematura.
▫ Barreira p/ polispermia
“Geleia do oócito”-ouriço
-membrana de fecundação
Reação Cortical (bloqueio a polispermia)
Grânulos corticais contendo N-acetilglucosaminidases e proteases
clivam N-acetilglucosamina de ZP3 e degradam parcialmente ZP2
FERTILIZAÇÃO
2-Fusão das membranas(oócito x sptz) na
região equatorial. A fusão das membranas é promovida pela
fertilina, uma glicoproteína do espermatozóide e a integrina do oócito
• Ativação oocitária (química e mecânica)

• Bloqueio a polispermia:Extrusão de grânulos
corticais(enzimas lisossomais)
1. Endurecimento da ZP
2. Modificação ZP3
3. Quebra parcialmente a ZP2
4. Bloqueio 2º (definitivo).
Influxo de Na+ e de um efluxo de H+, eleva o

pH intracelular- eliminação dos granulos e
ativação oocitaria
Bloqueio rápido
Descoberta de proteína da fecundação pode revolucionar
tratamentos de fertilidade
• 2005 –IZUMO ,proteína no espermatozoide

•2014- JUNO- proteina no oocito
Polispermia
A incidência da polispermia aumenta em casos como:
• Oócitos que não tem habilidade em liberar os grânulos corticais;
• Anormalidades na conformação das camadas da zona;
• Elevado número de espermatozóides capacitados no sítio de fertilização, não tendo
tempo do oócito desencadear o sistema de bloqueio;
• (in vitro)- Condições externas na fertilização in vitro ,temperatura, pH, suplementos
protéicos e concentração de cálcio).
Ovos ricos em vitelo- muitos

sptz entram- mecanismo
desconhecido.
Ativação oocitária
As oscilações do cálcio tem como funções a promoção de maturação
e ainda participação da indução da exocitose dos grânulos corticais, extrusão do
segundo corpúsculo polar e formação dos pronúcleos
IP3- inositol trifosfato

•Em humanos a migração dos pro- núcleos dura 12h
•SINGAMIA- quebra dos envoltórios e união do material genético
•O centríolo, provindo do espermatozóide,
se dividirá para formar os dois pólos do
fuso mitótico durante a clivagem.
Em insetos e em alguns mamíferos, como os

roedores, onde há a perda da integridade dos
centríolos do espermatozoide, o fuso surge a
partir do centrossoma materno.
SINGAMIA
PARTENOGÊNESE
ÓVULO  NOVO SER

Sem
fecundação
DNAmt paterno
• Degeneração (estresse oxidativo);
• Devido a baixa quantidade não se expressa no
ambiente oocitário;
• Inativação por moléculas do oocito;
• Seria conduzido para cels. do trofoblasto
Se tudo der certo...
CLIVAGEM
Clivagem
• Segmentação ou clivagem: série de divisões mitóticas.
• Cada tipo de zigoto apresenta um padrão de segmentação .
• As células resultantes da segmentação do zigoto são chamadas
BLASTÔMEROS .
• Não há aumento de tamanho do embrião.
• Velocidade maior que cels. tumorais.(Ex:Rã-37.000cels em 43 hs)
• Blastocisto- implantação!!!
OURIÇO
A - oócito
B – oócito
fecundado
C – início da 1ª
clivagem
D – 2 células
E e F – 4 células
G – 8 células
H – mórula
I - blástula
Padrões de clivagem embrionária
• Quantidade de vitelo no citoplasma
• Fatores citoplasmáticos que influenciam o ângulo do fuso
mitótico e ritmo de sua formação
Igual Óvulos Oligolécitos

Total ou
Holoblástica Desigual Óvulos Heterolécitos
Segmentação
ou Clivagem Discoidal Óvulos Telolécitos
Parcial ou
meroblática Superficial Óvulos Centrolécitos
HOLOBLÁSTICA / TOTAL
TOTAL IGUAL
É próprio dos oligolécitos, onde a distribuição uniforme de vitelo permite a
divisão em blastômeros de mesmo tamanho.
TOTAL DESIGUAL
Ocorre em ovos heterolécitos e, devido à desigual distribuição do vitelo,
produz blastômeros de tamanhos diferentes. Ex: anfíbios.
MEROBLÁSTICA / PARCIAL
MEROBLÁSTICA
DISCOIDAL
-É típico dos ovos

telolécitos e atinge
apenas o disco
germinativo.
(blastodisco)
MEROBLÁSTICA
SUPERFICIAL
-Ocorre em ovos
centrolécitos dos
artrópodes. (sucessivas
divisões nucleares do
zigoto)
DESENVOLVIMENTO
EMBRIONÁRIO em
mamíferos
ZIGOTO
Relacionado com fragmentação ,parada

de clivagem, multinucleação,constituição
cromossomica e potencial de implantação
Erros na fertilização
D 1 – CLASSIFICAÇÃO DO ZIGOTO E
AVALIAÇÃO PRECOCE DA CLIVAGEM
• Fase de pronucleo (2PN, 2CP) - 12 a 18h apos
fertilização.
• Morfologia dos PNs: tamanhos normais e
semelhantes (regulares), juntos e centrais.
• Nucléolos (corpos precursores de nucléolos-
CPN): tamanhos regulares, distribuição
homogênea, e quantidade semelhante(> 7 de
menor tamanho ou < 7 polarizados)
• Citoplasma: heterogêneo, claro, liso.
Scott 2000
E agora???????????
D2 – AVALIAÇÃO QUANTO AO NÚMERO DE CÉLULAS DO
EMBRIÃO, PRESENÇA DE MULTINUCLEAÇÃO E
FRAGMENTAÇÃO
• Ritmo de clivagem (2 a 5) ideal 4
• Numero de núcleos presente nos
blastômeros
• Morfologia dos blastômeros(simetria) S,A
ou D
Embriões assimétricos mais afetados por alterações
cromossômicas numéricas (29,4%), quando comparados a
blastômeros derivados de embriões simétricos (8,5%)
Dia 2
Fragmentação
• Tipo de fragmentação (quantitativo) presentes
em 40% dos embriões in vitro:
D3 – AVALIAÇÃO QUANTO AO RITMO DE CLIVAGEM, REGULARIDADE
E GRAU DE ADESÃO DOS BLASTÔMEROS, PRESENÇA E TIPO
DE FRAGMENTAÇÃO
• Ritmo de clivagem (6 a 10) -ativação genômica

Morfologia dos blastômeros(simetria)S,A ou D
• Adesão celular
• Tipo de fragmentação (quantitativo):
Compactação
Junções TIGHT
Junções GAP
D+ 4 – AVALIACAO QUANTO AO GRAU
DE COMPACTACAO E MORFOLOGIA
DOS BLASTOMEROS
D+5 e D+6 – AVALIAÇÃO DO ESTÁGIO DE FORMAÇÃO DO
BLASTOCISTO E CARACTERÍSTICAS
DA MASSA CELULAR INTERNA E TROFECTODERMA
DESENVOLVIMENTO DO EMBRIAO D +5
Blastocisto precoce ou jovem(cavitando)
Blastocisto expandido
CARACTERISTICA DO HATCHING (D+6)

Blastocisto em hatching
Blastocisto com hatching completo
Grau de
Desenvolvimento e estagio do Blastocisto
Expansão
1 Blastocele menos que o volume do embrião
2 Blastocele mais que a metade do volume do embrião

Blastocisto completo , cavidade preenchendo
3
completamente o embriao
4 Blastocisto expandido,
5 Eclodindo
6 Eclodido
Gardner et al, 1999

Grau
Qualidade IMC
IMC
A Muitas células agrupadas
B Várias celulas, frouxamente agrupadas
C Poucas células
Grau da
Qualidade da Trofoectoderme
TE
A Muitas celulas , formando camada coesiva
B Poucas celulas formando epitélio solto
C Poucas células grandes

Qualidade embrionária
• MORFOLOGIA
• MORFOCINÉTICA-Idade e estagio (TIME-
LAPSE)
• OMICS-metabolômica , Tanscriptoma
(expressão de genes) e proteômica.
• Inteligência Artificial
• NICS(Análse cromossômica não invasiva)
• Biópsia-Invasivo

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Fertilização e Clivagem embrionária

-Fertilização externa em ouriço-do-mar.

Alto custo energético na produção de gametas.

Menor custo energético na produção de gametas.

•Em 1949, Noyes, Finkle e Rocke –

•Tem início no epidídimo e completa na vagina, colo, útero e tuba

O início da capacitação varia entre as espécies e

• Alterações na composição glico-proteica da

•Muitos espermatozóides poderão não reagir a estímulos indutores

• Ativação oocitária (química e mecânica)

Influxo de Na+ e de um efluxo de H+, eleva o

• 2005 –IZUMO ,proteína no espermatozoide

Ovos ricos em vitelo- muitos

IP3- inositol trifosfato

Em insetos e em alguns mamíferos, como os

ÓVULO  NOVO SER

Igual Óvulos Oligolécitos

-É típico dos ovos

Relacionado com fragmentação ,parada

• Ritmo de clivagem (6 a 10) -ativação genômica

CARACTERISTICA DO HATCHING (D+6)

1 Blastocele menos que o volume do embrião

2 Blastocele mais que a metade do volume do embrião

Gardner et al, 1999

A Muitas celulas , formando camada coesiva

B Poucas celulas formando epitélio solto

C Poucas células grandes

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