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1. Exame direto das fezes

Material:

 Lâminas de microscopia
 Lamínulas
 Água ou solução salina (0,85%)
 Bastão de vidro ou palito
 Lugol (solução de iodo/iodeto de potássio) – usado como corante para permitir uma melhor
visualização da estrutura interna dos ovos e oocistos.
 Microscópio

O exame direto é utilizado para demonstrar a presença de ovos e larvas de helmintos e cistos de
protozoários.

1. Coloque uma pequena quantidade de fezes em uma lâmina de microscopia.

2. Coloque uma gota de líquido nas fezes e misture bem com uma espátula ou bastão. Se você estiver
examinando trofozoítos (formas vivas e ativas) de protozoários, e necessitar diluir o material, utilize
solução salina. Se estiver buscando ovos de helmintos ou então cistos de protozoários, então dilua o
material em água ou lugol.

3. Cubra com uma lamínula. A suspensão deve ter espessura fina o suficiente para permitir a
passagem da luz. Procure não deixar uma porção não misturada de fezes no centro. A suspensão
deverá ser homogênea.

Errado!

Certo

4. Examine a lâmina com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude para a objetiva de 40X.

5. A inspeção da lâmina deverá ser feita escolhendo-se um canto e então movendo a lâmina para ao
canto oposto, em um movimento de ida e volta, procurando sobrepor parcialmente os campos
microscópicos.
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Observação: Devido à pequena quantidade fezes examinada por esta técnica, ela somente é
recomendada para os seguintes casos:

a. Fezes líquidas que podem conter trofozoítos de protozoários.

b. Amostras fecais cuja quantidade é pequena demais para permitir a realização de outras técnicas.
Isso é particularmente freqüente em amostras de animais silvestres como peixes, aves, répteis e
anfíbios.

Vantagens da técnica

 Rápida de preparar.
 Se utilizada com solução salina, não causa distorções nos parasitas
 Única maneira de visualizar trofozoítos (obrigatório o uso de solução salina)
 Útil para examinar fezes de pequenas aves e répteis (onde trematóides são comuns)

Desvantagens da técnica

 Como somente se utiliza uma amostra muito pequena das fezes, os parasitas podem não
ser detectados se a sua concentração for muito baixa ou se houver excesso de debris ou
gordura
 Areia, sementes e outros debris fecais podem dificultar a deposição adequada da lamínula
 Pode requerer muito tempo para um exame adequado

Cuidados de segurança

Fezes podem conter patógenos perigosos (bactérias, vírus etc.). Procedimentos adequados de higiene
e segurança devem ser empregados. Use avental e luvas durante a execução da técnica.

Bibliografia

- FAO Agriculture Department Animal Production and Health Division -

http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/multimedia.html.

- VETERINARY PARASITOLOGY VPTH603 LABORATORY-http://cal.vet.upenn.edu/paraav/

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2. Concentração de oocistos, ovos de helmintos e cistos de protozoários por

flutuação em sal

Material:

 Lâminas de microscopia
 Lamínulas
 Bastão de vidro ou palito
 Gaze ou coador de chá
 Tubo de ensaio ou recipiente de filme ou similar
 Provetas graduadas
 Béqueres ou recipientes similares
 Solução para flutuação
 Microscópio

Princípio

A técnica de flutuação é um teste qualitativo para a detecção de ovos de nematóides e oocistos de

protozoários. É uma técnica útil para ensaios preliminares visando identificar que grupos de parasitas
estão presentes em uma amostra. Contudo, ovos de muitas espécies de trematóides e cestóides, bem
como cistos de Giardia não são detectados.

Os ovos e/ou cistos são separados do material fecal e concentrados por uma solução de flutuação em
uma gravidade específica apropriada. Ovos leves, por terem densidade menor do que aquela do fluido
de flutuação tendem a subir e permanecer no topo da coluna de líquido.

Os líquidos de flutuação utilizados são:

Solução saturada de sal (NaCl)

Solução saturada de açúcar (sacarose)

Solução de sulfato de zinco (ZnSO4)

Método

1. Misture em um béquer uma pequena quantidade de fezes (cerca de 1 grama) com 50 ml de solução
de flutuação e homogenize bem com um bastão de vidro ou palito.

2. Transfira a suspensão para um recipiente (caixa de filme, tubo de ensaio, etc.) filtrando-a com o
auxilio de um funil com gaze ou, alternativamente, usando-se uma peneira de chá.

3. Adicione a suspensão até a mesma formar um menisco convexo na extremidade superior do

recipiente.

4. Coloque uma lâmina por sobre a superfície convexa da suspensão.

5. Deixe por 15 minutos para que os ovos e oocistos possam flutuar.

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6. Remova com cuidado a lâmina e coloque uma lamínula sobre lâmina de microscopia.

7. Observe a lâmina ao microscópio com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude para a
objetiva de 40X.

8. A inspeção da lâmina deverá ser feita escolhendo-se um canto e então movendo a lâmina para ao
canto oposto, em um movimento de ida e volta, procurando sobreopor parcialmente os campos
microscópicos.

Gravidade específica de alguns ovos de helmintos, conforme determinada utilizando-se centrifugação

em gradiente de densidade de sacarose*

Espécie Gravidade Específica Média Faixa

Ancylostoma caninum 1,0559 1,0549 – 1,0573

Toxocara canis 1,0900 1,0791 – 1,0910

Toxocara cati 1,1005 1,1004 – 1,1006

Taenia spp. 1,2251 1,2244 – 1,2257

Physaloptera spp. 1,2376 1,2372 – 1,2380

Solução de ZnSO4 1,18 -

Solução saturada de sal ou açúcar 1,20 -

* David and Lindquist, 1982. J. Parasitology 68:916-919.

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Flutuação em sal ou açúcar - Vantagens da técnica

 Técnica flutua os ovos mais comuns de helmintos e oocistos de coccídias

 Soluções empregadas são baratas
 Há poucos debris para dificultar a visão dos parasitas

Flutuação em sal ou açúcar - Desvantagens da técnica

 A técnica não flutua ovos de trematóides e ovos de alguns vermes chatos (ordem
Pseudophyllidea – Ex. Diphyllobothrium)
 Distorce a morfologia de cistos de Giardia
 Pode ser demorada se não for feita com centrifugação
 Não aplicável em amostras de fezes contendo gordura

Flutuação em sulfato de zinco - Vantagens da técnica

 Técnica recomendada para a maioria dos exames de fezes

 Flutua a maior parte dos ovos de helmintos
 Melhor método para cistos de protozoários, especialmente Giardia e para ovos de
Trichuris. Na maioria dos casos recupera larvas de nematóides.

Flutuação em sulfato de zinco - Desvantagens da técnica

 Não flutua ovos de alguns trematóides e vermes chatos (ordem Pseudophyllidea – Ex.
Diphyllobothrium)
 Não aplicável em amostras de fezes contendo gordura
 ZnSO4 é caro e um hidrômetro deve ser usado para se fazer a solução (gravidade
específica de 1,18)

Cuidados de segurança

Fezes podem conter patógenos perigosos (bactérias, vírus, etc.). Procedimentos adequados de higiene
e segurança devem ser empregados. Use avental e luvas durante a execução da técnica.

Bibliografia

- FAO Agriculture Department Animal Production and Health Division -

http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/multimedia.html.

- VETERINARY PARASITOLOGY VPTH603 LABORATORY-http://cal.vet.upenn.edu/paraav/

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3. Contagem de oocistos, ovos de helmintos e cistos de protozoários nas fezes

Material:

 Balança
 Provetas graduadas
 Solução para flutuação
 Bastão de vidro ou palito
 Gaze ou peneira de chá
 Béqueres ou recipientes similares
 Pipetas Pasteur com peras de borracha
 Câmara de contagem de McMaster
 Microscópio

Princípio

A técnica de McMaster é a mais usada para demonstrar a presença de ovos de helmintos e oocistos de
coccídias em amostras de fezes.

O método utilize uma câmara de contagem que permite examinar microscopicamente um volume
conhecido (2 x 0,15 ml) de suspensão fecal. Um peso conhecido de fezes é misturado a um volume
conhecido de solução de flutuação e o número de ovos (ou oocistos) por grama de fezes pode ser
calculado. Esse valor é conhecido como o.p.g.

As quantidades de fezes e líquido são escolhidas de forma que a contagem de ovos possa ser
facilmente derivada pela multiplicação do número de ovos sob a área delimitada por um simples fator
de conversão.

A câmara de McMaster apresenta dois compartimentos, cada um com uma retícula gravada na sua
superfície superior. Quando preenchida com a suspensão de fezes em solução de flutuação, a maior
parte dos debris se sedimenta no fundo, enquanto os ovos leves e oocistos flutuam, aderindo na
superfície. Os parasitas presentes abaixo da retícula podem ser facilmente contados.

As contagens podem ser feitas antes e após um tratamento anti-helmíntico, permitindo monitorar a
resistência a drogas. Contagens realizadas entre tratamentos permitem avaliar a carga parasitária e
assim escolher a melhor estratégia de tratamento.
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Método

1. Pesar 2 gramas de fezes.

2. Diluir com 28 ml de solução salina saturada ou com sulfato de zinco.

3. Homogeneizar bem a suspensão e transferir para um béquer ou recipiente similar passando-a

através de peneira de chá ou em gaze dupla.

4. Ainda sob homogeneização, retirar uma alíquota com pipeta Pasteur e aplicar com cuidado em
cada um dos compartimentos da câmara de McMaster.

5. Deixar a câmara em descanso por 5 minutos e examinar em microscópio. Primeiramente focar as

linhas das retículas. Em seguida posicionar em um dos cantos de uma retícula e alterando
ligeiramente o foco, focar os ovos/oocistos.

6. Cada área definida por uma retícula deverá ser inteiramente coberta e os parasitas detectados
contados progressivamente.

7. Para o cálculo de o.p.g., multiplicar a soma dos ovos encontrados nos dois compartimentos por 50.

Explicação

Cada compartimento embaixo da retícula comporta um volume de 0,15 ml (a área riscada é de 1 cm

por 1 cm, e a profundidade é de 0,15 cm, perfazendo um total de 0,15 cm3 ou 0,15 ml. Examinando-
se os dois compartimentos, o volume total analisado será de 0,3 ml, que corresponde a 1/100 do
volume total em que a amostra de fezes foi originalmente ressupensa (2 gramas em 30 ml). Para o
cálculo de ovos por grama, a multiplicação deve ser feita, portanto, por 50 (100 divido por 2 gramas).

Vantagens da técnica

 Não requer nenhum equipamento especializado.

 Permite quantificar o número de parasitas eliminados pelo hospedeiro.

Desvantagens da técnica

 A contagem pode ser demorada, especialmente se houver grande quantidade de debris.

 Não aplicável em amostras de fezes contendo gordura
 Não flutua alguns tipos de ovos.

Cuidados de segurança

Fezes podem conter patógenos perigosos (bactérias, vírus, etc.). Procedimentos adequados de higiene
e segurança devem ser empregados. Use avental e luvas durante a execução da técnica.

Bibliografia

- FAO Agriculture Department Animal Production and Health Division -

http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/multimedia.html.

- VETERINARY PARASITOLOGY VPTH603 LABORATORY-http://cal.vet.upenn.edu/paraav/