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    Aula 05 Regulação de Glicolise PDF

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    O documento descreve a regulação das enzimas da via glicolítica no nível enzimático, com foco na fosfofructoquinase e piruvato quinase. Essas enzimas podem existir em formas ativas ou inativas dependendo da ligação de moduladores alostéricos como ATP, ADP, AMP, que promovem mudanças conformacionais. A regulação dessas enzimas permite o controle fino do fluxo glicolítico de acordo com as necessidades energéticas da célula.

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    Regulação da Via Glicolítica no Nível da Enzima

    Princípios de Regulação das Vias Metabólicas

    Dois tipos de reação:


    1) Velocidade da reação controlada pela atividade
    catalítica da enzima (“rate-limited”).
    - reações irreversíveis (DG negativa – reações não estão
    em equilíbrio químico).
    - atividade catalítica da enzima regulada (alosterismo).

    2) Velocidade da reação controlada pela concentração


    do substrato (“substrate-limited”).
    - reações reversíveis (DG perto de zero – reações em
    equilíbrio químico).
    - atividade catalítica da enzima limitada somente
    pela concentração do substrato.
    As Enzimas de Glicólise

    1. Hexokinase
    2. Phosphoglucose
    Isomerase

    3. Phosphofructokinase

    5. Triose Phosphate
    4. Fructose 1,6-bisphosphate Aldolase Isomerase

    7. Phosphoglycerate
    6. Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase Kinase

    8. Phosphoglycerate
    9. Enolase Mutase

    10. Pyruvate Kinase


    Enzimas Reguladas da Via Glicolítica.

    Enzima Inibidor alosterico Ativador alosterico

    Hexoquinase G6P

    Fosfofructoquinase ATP, citrato, PEP ADP, AMP, cAMP,


    (PFK-1) FBP, F2,6P, F6P,
    NH4+, PO42-
    Piruvato quinase ATP, acetyl-CoA, PEP, FBP
    acidos graxos

    Substrato Produto
    Integração de sinais pela Fosfofructoquinase (PFK-1).

    - A forma tetramerica

    - O F6P (substrato, em amarelo) liga


    ao sítio ativo da enzima.

    - ATP (em vermelho) e ADP


    (marcadas com estrelas) ligam em
    sítios alostericos.

    A enzima tem vários sítios


    de ligação para compostos
    diferentes.
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) - monômero.
    Dois sítios de ligação de ATP em cada monômero de PFK

    SÍTIO
    REGULATÓRIO

    SÍTIO
    ATIVO
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) - dímero.

    O sítio catalítico é O sítio regulatório de ATP


    localizado na é localizado na interface
    interface entre entre outros monômeros.
    monômeros .
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1): dímero/tetrâmero
    Fosfoenolpiruvato

    M4 2M2
    (Tetrâmero) (Dois dímeros)

    Quinlan e Reinhart, Biochemistry, 2006, 45 (38), pp 11333–11341

    Tetrâmero - atividade pode Dímero - sem atividade


    ser regulado.
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) - tetrâmero.
    Mudança na conformação do tetrâmero induzida pela ligação de
    reguladores alostéricas.

    Forma T Forma R
    (Inativa) (Ativa)

    Ligação de ATP no sítio regulatório Ligação de ADP no sítio regulatório


    favorece a forma T, a forma inativa favorece a forma R, a forma ativa da
    da enzima enzima
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) – sítio catalítico.
    Comparação das estruturas de PFK com ADP (rosa, ativa), e PGC (2-fosfoglicolato,
    um análogo de PEP, inativa em azul claro).
    Modulador positivo (ADP
    PEP causa Glu161 (em azul) se em rosa) e negativo (PEP
    orientar no sítio ativo (carga em azul ) ligam no mesmo
    negativa desfavorece formação sítio regulatório.
    complexo enzima/substrato com
    FDP)

    Substrato: F6P

    ADP causa Arg162 (em verde) de ficar


    próxima ao grupo PO4 do F6P (uma interação
    com carga positiva que favorece a formação
    complexo enzima/substrato)
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) – ligantes múltiplos.
    ATP (inibidor) e AMP (ativador) podem ligar no mesmo sítio
    regulatório

    Modulação da atividade de PFK devido a competição das duas


    compostos para o mesmo sítio.
    Regulação de Fosfofructoquinase (PFK-1) por ATP e AMP
    explica as alterações no fluxo na via glicolítica?.
    Durante atividade intenso no musculo:
    Fluxo na via glicolítica aumenta ~100 x
    [ATP] diminui somente ~10%

    D[ATP] INSUFICIENTE para explicar a aumenta no fluxo

    ATP regenerada no músculo por creatina quinase (fosforilação


    nível substrato) e a partir de ADP por adenilato kinase (miokinase)

    2ADP  ATP + AMP

    AMP gerada na reação – pode ativar PFK?


    Mudanças de [AMP] podem explicar a regulação de
    Fosfofructoquinase (PFK-1) e explica as alterações no
    fluxo na via glicolítica?.
    [ATP][AMP]
    2ADP  ATP + AMP K= 2 = 0.44
    [ADP]
    No músculo esquelético em repouso - [ATP] ~ 8 mM
    [ADP] ~ 0.6 mM
    [AMP] = 0.44 x (6 x 10-4) x (6 x 10-4) = 2 x 10-5 M = 20 mM
    (8 x 10-3)

    No músculo esquelético ativa - [ATP] ~ 7.2 mM ( 10%, por 0.8 mM)


    [ADP] ~ 0.6 + 0.8 mM = 1.4 mM

    [AMP] = 0.44 x (1.4 x 10-3) x (1.4 x 10-3) = 1.2 x 10-4 M = 120 mM


    (7.2 x 10-3)
    6x aumenta na [AMP] é suficiente de aumentar atividade de PFK
    em 10x, ainda longe do fator de 100x observada.
    Reciclagem do substrato F-6-P explica a regulação do fluxo
    na via glicolítica.

    Fosfofructoquinase Fructose-1,6-bisfosfatase
    (define vf com max=100) (define vr com max=10)

    1) Atividade máxima de PFK-1 ~10x atividade máxima de FBPase ( vr = vf / 10)

    2) Redução de [ATP] em 10%  aumenta [AMP] 5-6x   atividade de PFK-1 de 10 até 90% vf
      atividade FBPase de 90 até 10% vr

    Baixa [AMP] (músculo inativo) : vf = (100 x 0.1), e vr = (10 x 0.9)


    vf-vr = 10 – 9 = 1
    alta [AMP] (músculo ativo) : vf = (100 x 0.9), e vr = (10 x 0.1)
    vf-vr = 90 – 1 = 89
    Aumento do fluxo em ~90 x
    Regulação de Piruvato quinase: tetrâmero

    Forma T Forma R
    (Inativa) (Ativa)

    Ligação de ATP no sítio regulatório Ligação de ADP no sítio regulatório


    favorece a forma T, a forma inativa favorece a forma R, a forma ativa da
    da enzima enzima

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