PROSES

KULTUR
Mycobacterium
tuberculosis
Presented By : Kelompok 1
 OUR TEAM
Amelia Dian Savira 2013353001 M. Riyan Rahmadan 2013353014
Andrean Sulaiman Putra 2013353002 Marita Motik Septi W 2013353016
Anjar Dwipaningtyas 2013353003 Nabela Hidayatun Nisa 2013353017
Annisa Diah Tiningrum 2013353004 Nazla Diva Maharani 2013353019
Bunga Ambarestiani 2013353005 Nela Masrurotul Rohma 2013353020
Fauza Nursyifa 2013353007 Novalia Kencana 2013353021
Gita Marista 2013353008 Nur Hasanah 2013353022
Gita Nathania Asri 2013353009 Nur Mega Araswati 2013353023
Indah Dwi Lestari 2013353010 Octa Viana 2013353024
Intan Pramudita 2013352011 Putri Ayu Lestari 2013353025
Karine Niena Paramurthi 2013353012
Laila Kurniati Saumi 2013353013
Pendahuluan
Tuberkulosis (TBC) merupakan penyakit infeksi
menular yang disebabkan oleh bakteri
Mycobacterium tuberculosis. Tuberkulosis (TBC)
masih menjadi masalah utama kesehatan dunia
dimana TBC menjadi penyebab kematian kedua
terdepan penyakit menular setelah penyakit Human
Immunodeficiency Virus (HIV). Mayoritas infeksi
TBC terjadi melalui udara, yaitu inhalasi droplet
yang mengandung bakteri Mycobacterium
tuberculosis dari orang yang terinfeksi.

Raisuli,Ramadhan. Jurnal Deteksi Mycobacterium tuberculosis Dengan Pemeriksaan

Mikroskopis dan Teknik PCR pada penderita TBC Paru di Puskesmas Darul Imarah.
2017
Salah satu pemeriksaan gold standard untuk diagnosis Tuberkulosis adalah kultur
Mycobacterium tuberculosis.
Sensitivitas pemeriksaan kultur lebih tinggi dibandingkan dengan mikroskopis.
BTA positif membutuhkan 5.000 - 10.000 kuman per ml jika diperiksa pada 100-
150 lapang pandang, sedangkan biakan positif hanya membutuhkan jumlah
bakteri hidup antara 10 - 100 kuman per ml.
Kultur/biakan akan meningkatkan penemuan kasus sekitar 20– 30 % dari jumlah
keseluruhan kasus TBC Paru dengan BTA positif. Pemeriksaan kultur juga sangat
bermanfaat untuk kasus pausibasiler (jumlah kuman sedikit) seperti pada TBC
ekstra paru, TBC anak dan TBC pada kondisi sistem imun rendah
(imunokompromais). Kultur juga dapat membedakan antara M. tbc dan NTM.

Kultur merupakan suatu metode pemeriksaan yang kompleks; membutuhkan

sarana, prasarana dan peralatan lebih mahal serta SDM dengan keterampilan
khusus.

Petunjuk Teknis dan Pemantapan mutu : Pemeriksaan Biakan, dan Uji Kepekaan Mtb Complex Terhadap Obat
Anti Tuberculosis Pada Media Padat dan Cair. Jakarta. Kementerian Kesehatan RI. 2021
 Pengumpulan &
Penyimpanan Spesimen
Dahak
 Pengumpulan Spesimen Dahak
● Siapkan wadah steril bertutup, transparan, berulir dan bermulut lebar
(diameter 4-5 cm).
● Spesimen harus dahak , bukan air liur, dengan volume sekitar 2-10
ml.
● Dahak yang baik untuk biakan adalah dahak yang dikeluarkan saat
bangun tidur dipagi hari.
● Pengumpulan dahak diambil di ruang terbuka yang jauh dari
pemukiman atau dalam ruang khusus pengumpulan dahak.

Sumber:Petunjuk juknis dan pemantapan mutu: Pemeriksan Biakan dan Uji Kepekaan M.tb Complex Terhadap Obat Anti
Tuberculosis Pada Media Padat dan Cair. Jakarta. Kementrian Kesehatan RI
 Penyimpanan Spesimen Dahak
● Spesimen harus dikumpulkan dengan benar dan dikirimkan secepat mungkin ke
laboratorium.
● Setiap upaya harus dilakukan untuk meminimalkan keterlambatan pengiriman dan
pengolahan spesimen.
● Walaupun bakteri Mycobacterium Tuberculosis dapat bertahan hidup hingga 1 minggu
pada spesimen dahak tanpa pengawet, tetapi viabilitas bakteri pada spesimen tersebut
semakin lama akan menurun.
● Jika spesimen tidak dalam dikirim dalam waktu 2 jam, maka spesimen sebaiknya
disimpan pada suhu 2-8° C.
● Ketika sampai di laboratorium, maka spesimen harus didinginkan terlebih dahulu sampai
dapat diproses.
● Penundaan antara pengumpulan dan pemeriksaan biakan tidak boleh lebih dari 7 hari.

Sumber:Petunjuk juknis dan pemantapan mutu: Pemeriksan Biakan dan Uji Kepekaan M.tb Complex Terhadap Obat Anti Tuberculosis Pada
Media Padat dan Cair. Jakarta. Kementrian Kesehatan RI
Penerimaan
Sampel
 Penerimaan Spesimen
1. Spesimen diterima oleh bagian penerimaan di laboratorium.
2. Petugas laboratorium harus memeriksa kesesuaian identitas pada kemasan dan
formulir permintaan.
3. Petugas juga harus mencatat data dalam buku register Jika ada ketidaksesuaian
identitas dan kualitas, segera hubungi pengirim untuk klarifikasi. Jika perlu bisa
dimintakan ulang dahak pagi hari.
4. Kemasan sebaiknya dibuka di dalam BSC dengan menggunakan sarung tangan.
5. Petugas harus memeriksa apakah ada kebocoran pada wadah spesimen.
6. Jika terlihat ada kebocoran, kemasan harus langsung dibuang ke tempat sampah
yang sudah diberi disinfektan dan selanjutnya di otoklaf.
7. Jika ada pot dahak yang pecah, lakukan disinfeksi pada pot dahak dengan kapas
yang sudah dibasahi dengan dsinfektan.

Sumber:Kementerian Kesehatan RI. DIrektorat Jenderal Pencegahan dan Pengendalian Penyakit

Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu : Pemeriksaan Biakan, Identifikasi, dan Uji Kepekaan
Mycobacterium Tuberculosis Complex terhadap Obat Anti Tuberkulosis pada Media Padat dan
Media Cair.— Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. 2021
 Kriteria Penolakan Spesimen
Petugas laboratorium bisa menolak spesimen yang tidak sesuai. Beberapa kriteria
penolakan spesimen antara lain:
1) Spesimen tidak sesuai.
2) Spesimen tanpa permohonan pemeriksaan, label atau pelabelan salah.
3) Wadah pecah, rusak, atau bocor.
4) Keterlambatan penerimaan spesimen.
5) Permohonan pemeriksaan yang tidak sesuai ketentuan dalam Program TBC.

Petugas sebaiknya menghubungi dokter atau perawat pengirim untuk melakukan

konfirmasi atau permintaan spesimen baru jika pengumpulan spesimen dilakukan dengan
prosedur non invasif (dahak, urin). Jika spesimen diambil dengan prosedur invasif (aspirasi
jarum, cairan tubuh, atau jaringan), maka spesimen dapat diproses setelah konsultasi
langsung dengan dokter pengirim. Setiap masalah dilaporkan dan dilengkapi dengan
dokumentasi tindakan korektif.

Sumber:Kementerian Kesehatan RI. DIrektorat Jenderal Pencegahan dan Pengendalian Penyakit

Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu : Pemeriksaan Biakan, Identifikasi, dan Uji Kepekaan
Mycobacterium Tuberculosis Complex terhadap Obat Anti Tuberkulosis pada Media Padat dan Media
Cair.— Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. 2021
Pemrosesan Spesimen
Dahak Metode NALC-
NaOH
Larutan yang digunakan adalah NALC-NaOH-Na sitrat. N-acetyl-Lcysteine (NALC)
merupakan agen mukolitik untuk pengenceran lendir dengan cepat, sedangkan NaOH
merupakan agen dekontaminasi untuk membunuh bakteri kontaminan. NALC mudah
menjadi inaktif dalam larutan, sehingga harus selalu dibuat baru (fresh) setiap hari (tidak
dapat disimpan lebih dari 24 jam). Natrium sitrat memberikan efek stabilisasi pada NALC
dengan mengikat ion logam berat dalam specimen. Buffer fosfat menetralisir NaOH dan
mengencerkan homogenat untuk mengurangi viskositas dan berat jenis sebelum proses
sentrifugasi.

Metode ini mempunyai angka positivitas lebih baik dibandingkan metode lain karena hanya
membunuh sekitar 30% bakteri Mycobacterium. Metode ini dapat digunakan untuk biakan
pada media padat maupun cair.
Komposisi Larutan NALC-NaOH
Berikut merupakan prosedur pemrosesan spesimen dahak :

1) Tuang dahak ke dalam tabung sentrifus 50 ml. Tambahkan

NALC – NaOH sama banyak.
2) Kocok hingga homogen sampai tidak lebih dari 30 detik dan
diamkan selama 15 menit pada suhu kamar.
3) Tambah PBS sampai volume 45 ml. Bolak-balik tabung
beberapa kali.
4) Sentrifus selama 15 menit, 4-12 oC, 3000 g.
5) Buang supernatan, kemudian tambahkan 1 ml PBS.
6) Sedimen siap untuk diinokulasi pada media
Pemrosesan Spesimen
Dahak Metode Petrof
NaOh 4%
Natrium hidroksida (NaOH) bersifat toksik, baik untuk kontaminan
maupun bakteri Mycobacterium. NaOH dapat membunuh sekitar
70% bakteri Mycobacterium dalam spesimen. Oleh karena itu,
prosedur ini sangat ketat terhadap pengaturan waktu kontak.
Prosedur dekontaminasi ini hanya dapat digunakan untuk sampel
yang akan diinokulasi pada media padat.

Sumber : Petunjuk teknis dan pemantapan mutu:Pemeriksaan Biakan, Identifikasi, dan Uji Kepekaan
Mycobacterium Tuberculosis Complex terhadap Obat Anti Tuberkulosis pada Media Padat dan Media
Cair. 2021
 Alat dan Bahan
ALAT BAHAN
● Tabung sentrifuge ● Spesimen
50ml dahak
● Vortex
● NaOH 4%
● Sentrifuge
● Wadah limbah ● Larutan PBS
 PROSEDUR KERJA
1. Tuangkan dahak ke dalam tabung sentrifus 50 ml.
2. Campurkan dahak dengan larutan NaOH 4% sebanyak 1:1.
3. Vortex sampai homogen. Diamkan dalam suhu ruang tidak lebih dari
15 menit (jika terlalu lama, kuman akan mati).
4. Tambahkan larutan PBS hingga volume > 45 ml dengan mikropipet
5. Tabung ditutup rapat, sentrifus minimal 3000 g selama 15 menit.
6. Tuang supernatan ke dalam wadah berisi desinfektan. Usap bibir
tabung dengan 95% etanol (jangan sampai masuk ke dalam tabung).
7. Tambahkan 1 ml PBS ke dalam sedimen, kocok agar homogen.
8. Spesimen yang diproses siap diinokulasikan pada media.

Sumber: Petunjuk teknis dan pemantapan mutu:Pemeriksaan Biakan, Identifikasi, dan Uji
Kepekaan Mycobacterium Tuberculosis Complex terhadap Obat Anti Tuberkulosis pada Media
Padat dan Media Cair. 2021
Pembuatan Media Padat (LJ)
 Peralatan Pembuatan Media Padat (LJ)

Botol Mc Autoclave Laminar air flow Gelas ukur Erlenmeyer

Timbangan analitik
Cartney

Pipet steril

Inspisator Corong kaca

Hot Plate
Blender
Sumber :Petunjuk teknis & pemantapan mutu Steril
pemeriksaan biakan dan identifikasi Mtb
 Bahan Pembuatan Media Padat (LJ)
Bahan dasar medium LJ :
1. Monopotassium phosphate (2,4 g)
2. Magnesium sulphate 7H2O (0,24 g)
3. Magnesium citrate (0,6 g)
4. Asparagin (3,6 g)
5. Glyserol (12 ml)
6. Malachite green 2% (20 ml)
7. Aquades (600 ml)
8. telur bebek segar (berumur tidak lebih dari 7 hari)
9. Alhokol 70%

Sumber :Petunjuk teknis & pemantapan mutu

pemeriksaan biakan dan identifikasi Mtb
 Pembuatan Media Lowenstein Jensen
 Pembuatan Medium LJ

1. Larutkan media LJ base komersial dalam 600 ml aquades, pH 6.8 – 7.0. Setelah itu tambahkan 12 ml
glycerol. Dan tambahkan secara aseptik 20 ml larutan malachite green 2%.

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
2. Homogenkan dengan magnetic 3. Setelah tercampur sempurna,masukkan di otoklaf
stirrer diatas hotplate (tanpa selama 15 menit dengan suhu 121 °C . Lalu Dinginkan
dipanaskan) sampai suhu ± 50 derajat celcius.

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
 Prosedur kerja pembuatan media Lowenstain Jensen
 Homogenisasi Telur

1. Bersihkan telur ayam kampung /bebek segar, usia ≤ 7

hari, dengan cara menggosok dengan lap, air dan sabun.
Bilas dengan air mengalir hingga bersih, kemudian
keringkan.

2. Rendam dalam alkohol 70% selama 15 menit.

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
 3. Cuci dan desinfeksi tangan sebelum memegang telur yang telah bersih dan kering

4. Pecahkan telur secara aseptis dan tampung dalam gelas ukur steril atau blender yang sudah di
sterilkan, lalu homogenisasi dengan blender atur kecepatan sedemikian rupa agar tidak terbentuk
gelembung.

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
5. Saring larutan telur menggunakan 6. Campurkan telur yang telah disaring
corong steril yang telah dialasi kasa steril. dengan medium LJ yang sudah dibuat
sebelumnya

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
7. Homogenkan dengan magnetic stirrer diatas 8. Setelah homogen saring Kembali
hotplate (tanpa dipanaskan) hindari terbentuk campuran larutan ke dalam Erlenmeyer
gelembung. Jika ada gelembung, diamkan steril
beberapa waktu untuk menghilangkan
gelembung.

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
9. Tuangkan ke dalam botol McCartney 10. letakkan pada kemiringan 30 derajat dalam
steril sebanyak 6 – 8 ml. inspisator selama 45 menit.

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
11. Setelah itu ambil media dari inspisator 12. Dan susun media yang sudah jadi
lalu beri identitas (tanggal pembuatan)
pada botol McCartney

Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
 Hasil media Lowenstein Jensen

Hasil media yang baik Bila media tida terlalu lembek, tidak terjadi perubahan
warna, tidak terdapat gelembung pada permukaan.
Sumber :
-Dokumentasi video PLP di BBLK Palembang, Februari 2023
-Petunjuk teknis & pemantapan mutu pemeriksaan biakan dan identifikasi mtb
 07
Kelengkapan Media MGIT
 1. Modified Middlebrook broth 7H9
Komposisi per 1000 ml air murni, mengandung:
• Kaldu Middlebrook 7H9 modifikasi 5.9 g
• Casein pepton 1.25 g

Tabung MGIT mengandung O2 quenched fluorochrome - tris (4,7-diphenyl-1,10-phenonthroline) ruthenium

chloride pentahydrate - yang ditanam pada silikon bagian dasar tabung dan dilengkapi tutup ulir polypropylene.
Tutup tabung harus selalu dalam kondisi tertutup sampai tabung siap digunakan dan disimpan pada suhu 2-25 °C
serta minim pencahayaan. Kaldu harus bening dan tidak berwarna jangan digunakan jika keruh. Tabung MGIT yang
belum digunakan dapat disimpan sampai tanggal kadaluwarsa dan diinkubasi sampai 8 minggu setelah inokulasi.

2. Suplemen Pertumbuhan MGIT (enrichment)

Suplemen pertumbuhan harus ditambahkan ke media MGIT sebelum inokulasi spesimen. Volume suplemen adalah
15 ml dengan komposisi:
• Albumin Bovine 50,0 g
• Dextrose 20.0 g
• Catalase 0,03 g
• Asam Oleat 0,1 g
• Polyoxyethyline state (POES) 1.1 g

Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. 2021.ISBN 978-623-301-332-1
 Proses penambahan suplemen dilakukan di dalam BSC untuk menghindari kontaminasi. Penyimpanan suplemen
OADC di tempat minimal pencahayaan (tempat gelap) pada suhu 2 – 8 °C. Jangan dibuka sampai dengan digunakan.

3. MGIT PANTA
Kontaminasi dapat dikurangi dengan penambahan campuran antimikroba PANTA pada media sebelum inokulasi
spesimen. Setiap botol MGIT PANTA (untuk MGIT 960) mengandung campuran terliofilisasi antimikroba dengan
konsentrasi sebagai berikut:
• Polymyxin B 6.000 unit
• Amphotericin B 600 μg
• Nalidixic Acid 2,400 μg
• Trimetoprim 600 μg
• Azlocillin 600 μg

PANTA liofilisasi disimpan pada suhu 2-8 °C. Setelah dilarutkan, campuran PANTA dapat digunakan dalam waktu 72
jam, jika disimpan pada suhu 2 - 8 °C, atau hingga 6 bulan jika disimpan pada suhu -20 °C atau lebih dingin.

Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. 2021.ISBN 978-623-301-332-1
 08
Proses Inokulasi pada media Padat (LJ)
 Alat inokulasi pada media padat (LJ)

LJ Media Pipet transfer Spidol Kertas/tisu yang Desinfektan

steril permanen direndam tuberkuloisidal
desinfektan

Tempat pembuangan
biohazard

PETUNJUK TEKNIS DAN PEMANTAPAN MUTU Kementerian Kesehatan 2021

 Cara Inokulasi pada media LJ
1. Beri label tabung LJ atau 7H10 / 7H11 agar plate sesuai dengan penomoran laboratorium.
2. Pastikan bahwa media tabung LJ atau media agar tidak mengandung air kondensasi. Buang
sisa air pada tabung media LJ, posisikan miring dengan pipet transfer steril.
3. Ambil 200 µl sedimen dengan pipet ke dalam media LJ atau media 7H10 / 7H11 agar, buat
duplo jika perlu.
4. Tutup tabung LJ, tetapi jangan terlalu rapat. Sedangkan, media 7H10 / 7H11 agar plate diseal
dan dimasukkan dalam kantong polyethylene.
5. Sebar secara merata bahan pemeriksaan tersebut di atas permukaan media dengan
menggerakkan botol atau plate.
6. Bersihkan permukaan botol dengan disinfektan.
7. Letakkan tabung LJ pada rak dengan kemiringan 300 di dalam inkubator suhu 35–37oC
selama 24 jam, sedangkan media plate dimasukkan di dalam incubator.

PETUNJUK TEKNIS DAN PEMANTAPAN MUTU Kementerian Kesehatan 2021

 Cara Inokulasi pada media LJ
8. Setelah inkubasi 24 jam, kencangkan tutup tabung LJ dan letakkan pada rak tabung dengan
posisi tegak dan lanjutkan inkubasi.
9. Amati pertumbuhan M.tbc setiap minggu. Pengamatan dilakukan sampai dengan 8 minggu.
Hasil dilaporkan negatif jika tidak ada pertumbuhan setelah 8 minggu.

Ciri khas Mycobacterium tuberculosis adalah :

➢ Pertumbuhan akan terlihat pada 2 – 4 minggu.
➢ Koloni warna putih kekuningan (buff coloured), permukaan kering dan rapuh dengan tepi tidak
beraturan, dan seperti bunga kol.

PETUNJUK TEKNIS DAN PEMANTAPAN MUTU Kementerian Kesehatan 2021

Cara Pembacaan dan pencatatan

PETUNJUK TEKNIS DAN PEMANTAPAN MUTU Kementerian Kesehatan 2021

 Interpretasi Hasil
1) Bila biakan POSITIF, lanjutkan proses identifikasi:
(a) Pelaporan sebagai “M. tbc positif” setelah hasil identifikasi minimal 2 (dua) uji identifikasi menunjukkan positif
untuk M. tbc.
(b) Pelaporan sebagai NTM, ditulis sebagai:
• “NTM tumbuh cepat (rapid grower) positif”, apabila koloni tumbuh pada media LJ dalam waktu < 7 hari dan hasil
identifikasi (minimal 2 uji identifikasi) menunjukkan sebagai NTM
• “NTM tumbuh lambat (slow grower) positif”, apabila koloni tumbuh pada media LJ dalam waktu ≥ 7 hari dan hasil
identifikasi (minimal 2 uji identifikasi) menunjukkan sebagai NTM.
(2) Bila biakan NEGATIF, laporan akhir (final) dibuat setelah minggu ke-8 -- Pelaporan sebagai “M. tbc negatif”
(3) Jika biakan pada media LJ mengalami kontaminasi, maka cara identifikasi masalah dan penyelesaiannya
sebagai berikut:
• Permukaan media kultur yang terkontaminasi mungkin sepenuhnya tertutup oleh pertumbuhan non-mikobakter i
➢ Beberapa spesies bakteri dapat mencairkan media (media rusak).
➢ Beberapa spesies mengubah warna dari media padat (perubahan warna hijau-biru menjadi lebih gelap atau krem)
dikarenakan spesies kontaminan menghasilkan asam dan menurunkan pH.
➢ Jika hal ini terjadi, maka biakan harus disterilkan, dibuang dan dilakukan pengulangan biakan dari spesimen atau
sedimen dekontaminasi yang disimpan di lemari es 2-8 °C dengan waktu penyimpanan maksimal 7 hari atau
menggunakan spesimen baru.
• Jika kontaminasi hanya sebagian di permukaan miring media LJ dan tidak merubah karakteristik media, maka
biakan dapat dipertahankan sampai dengan minggu ke-8

PETUNJUK TEKNIS DAN PEMANTAPAN MUTU Kementerian Kesehatan 2021

 10
Proses Inokulasi pada Media Cair (MGIT)
Tujuan Inokulasi pada media MGIT

Meningkatkan jumlah organisme M. tbc dalam sampel dan dapat

mendeteksi sampel positif dengan cepat. Penilaian semikuantitatif
jumlah bakteri dapat ditentukan dengan perhitungan waktu mulai dari
sinyal positif (TTD = time to detection = waktu deteksi) dalam sistem
BACTEC MGIT 960. Hasil biakan MGIT positif yang dilanjutkan
konfirmasi BTA dengan ZN dan tes identifikasi cepat merupakan
indikator utama untuk deteksi M. tbc dalam dahak.

Sumber : Petunjuk Teknis Dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021
 Prinsip Inokulasi pada media MGIT
Media MGIT terdiri dari kaldu Middlebrook 7H9 modifikasi dengan volume 7 ml. Sistem MGIT otomatis memerlukan
instrumen yang disebut BACTEC 960 (ukuran lain juga tersedia) Untuk biakan spesimen rutin, suplemen pertumbuhan atau
OADC (asam oleat, albumin, dekstrosa, katalase) ditambahkan ke medium sebelum inokulasi untuk melengkapi medium.
Asam oleat digunakan oleh basil tuberkel untuk metabolisme mikobakterium. Albumin sebagai agen pelindung, mengikat
asam lemak bebas (yang mungkin beracun bagi spesies Mycobacterium) sehingga meningkatkan daya hidup bakteri.
Dextrose adalah sumber energi. Katalase menghancurkan peroksida beracun yang mungkin ada dalam medium. Suplemen
ini sangat penting untuk pertumbuhan banyak jenis mikobakteri, terutama M. tbc. Selain itu, koktail antibiotik (PANTA)
juga perlu ditambahkan untuk menghambat untuk bakteri kontaminasi.
Tabung MGIT mengandung senyawa fluoresen yang tertanam dalam silikon di bagian bawah tabung dan peka terhadap
keberadaan oksigen terlarut dalam kaldu. Emisi senyawa tersebut akan dipadamkan oleh oksigen. Selama pertumbuhan
bakteri di dalam tabung, oksigen bebas digunakan dan digantikan oleh CO2. Penipisan oksigen bebas menghasilkan sensor
fluoresensi dalam tabung MGIT saat visualisasi di bawah sinar ultraviolet (UV). Intensitas fluoresensi berbanding lurus
dengan tingkat penipisan oksigen. Instrumen BACTEC MGIT 960 secara otomatis mendeteksi fluoresensi ini.

Sumber : Petunjuk Teknis Dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021
 Ilustrasi prinsip biakan M. tbc pada media cair – MGIT
Sumber : Petunjuk Teknis Dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021

Sumber : Petunjuk Teknis Dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021
 Alat dan Bahan
1. Tabung MGIT tubes, 7 ml
2. MGIT PANTA
3. MGIT Growth Supplement
4. Rak tabung 15 ml
5. Pipet transfer steril (terdapat penanda volume)
6. Pipet serologi steril (10 atau 20 ml)
7. Tip pipet
8. Pipet p1000 dengan tip berfilter steril
9. Desinfektan
10. Tempat pembuangan dari plastik biohazard berisi
desinfektan
11. Label
12. Spidol permanen

Sumber : Petunjuk Teknis Dan Pemantapan Mutu MTB

Kementerian Kesehatan 2021
Inokulasi pada media cair MGIT
1. Periksa semua tabung MGIT apakah ada kontaminasi atau rusak. Pastikan tabung MGIT dalam
kondisi baik. Inokulasi ke dalam tabung MGIT harus dilakukan di dalam BSC dengan
perlengkapan APD.
2. Saat spesimen sedang diproses (homogenisasi dan dekontaminasi), siapkan suplemen antibiotik
(PANTA). Rekonstitusi/campur MGIT PANTA dengan 15 ml MGIT Growth Supplement.
Campuran ini stabil selama 5 hari jika disimpan pada suhu 2 – 8 °C. Beri label antara lain tanggal
pembuatan, tanggal kadaluwarsa, dan nama inisial pembuat pada sisa campuran yang akan
disimpan.
3. Beri label sisi masing-masing tabung MGIT sesuai dengan penomoran laboratorium. Catat
nomor tabung MGIT (dari label barcode) di lembar kerja laboratorium MGIT.
4. Buka tutup tabung MGIT dan tambahkan 0,8 ml campuran PANTA dan growth supplement ke
masing-masing tabung MGIT menggunakan mikropipet dengan tip steril (aseptik)
5. Tambahkan 0,5 ml spesimen yang telah diproses/terkonsentrasi dengan pipet transfer steril ke
dalam tabung MGIT berlabel.
6. Segera tutup tabung dengan rapat dan homogenisasi dengan membalik tabung beberapa kali.
 Inokulasi pada media cair MGIT
7. Bersihkan tabung dan tutup tabung dengan desinfektan mycobacterisidal dan diamkan
pada suhu kamar selama 30 menit.
8. Masukkan tabung ke dalam mesin MGIT sesegera mungkin sesuai dengan buku petunjuk
alat.
9. Instrumen MGIT akan menginkubasi dan memonitor secara otomatis.
10. Tabung MGIT tetap berada di dalam mesin sampai terdapabsinyal "positif" jika ada
pertumbuhan, atau sinyal "negatif" jika tidak ada pertumbuhan setelah inkubasi selama 42
hari.
11. Tabung yang menunjukkan sinyal positif segera diambil. Lanjutkan identifikasi BTA
dengan pewarnaan ZN untuk melihat bakteri mikobakterium dan subbiakan pada media
agar darah/BHI agar (inkubasi suhu 35-37 oC selama 24-72 jam) untuk melihat ada
tidaknya kontaminan
12. Tabung yang menunjukkan sinyal negatif segera diambil. Pastikan secara visual bahwa
benar tidak ada pertumbuhan.

Sumber : Petunjuk Teknis Dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian

Kesehatan 2021
 Interpretasi Hasil Biakan MGIT
1. Jika waktu deteksi MGIT ≥ 7 hari, hasil BTA negatif dan terdapat pertumbuhan pada media agar darah/BHI agar
berarti tabung MGIT terkontaminasi dan segera buang.
2. Jika waktu deteksi MGIT < 7 hari, hasil BTA negatif dan terdapat pertumbuhan pada media agar darah/BHI agar,
maka reinkubasi maksimal 14 hari dan ulangi lagi identifikasi BTA dan subbiakan pada media agar darah. Hal ini
bertujuan untuk memastikan jumlah bakteri M.tbc sangat sedikit sehingga tidak terdeteksi. Apabila hasil ulangan
menunjukkan BTA negatif, berarti tabung MGIT terkontaminasi. Apabila hasil ulangan positif. Maka lanjutkan
seperti langkah di di poin (c).
3. Jika waktu deteksi MGIT berapapun, hasil BTA positif dan terdapat pertumbuhan pada media agar darah/BHI
agar, maka:
• Apabila BTA positif dari koloni yang tumbuh di media agar darah/BHI agar. Lakukan identifikasi MPT64 untuk
menentukan M.tbc atau NTM. Jika perlu murnikan terlebih dahulu, sehingga kontaminan tidak mengganggu
identifikasi MPT64. Apabila BTA positif dan identifikasi MPT64 negatif, maka reinkubasi selama 48 jam dan
ulang kembali MPT64. Jika hasil ulangan menunjukkan positif, maka laporkan sebagai “M.tbc positif dan
terkontaminasi”. Apabila hasil ulangan negatif, maka laporkan sebagai “NTM”.
• Apabila hasil BTA dari koloni yang tumbuh pada media agar darah/BHI agar negatif, maka lakukan identifikasi
dengan MPT64. Apabila MPT64 positif, maka laporkan sebagai “M.tbc positif dan terkontaminasi”. Apabila
MPT64 negatif, maka reinkubasi 48 jam dan ulangi kembali uji MPT64. Jika hasil ulangan menunjukkan positif,
maka laporkan sebagai “M.tbc positif dan terkontaminasi”. Apabila hasil ulangan negatif, maka laporkan sebagai
“NTM
Sumber: Final Draft Juknis CDST_Compile_Lampiran SE.pdf
 Interpretasi Hasil Biakan MGIT
4. Jika waktu deteksi MGIT berapapun, hasil BTA positif dan tidak ada pertumbuhan pada media agar
darah/BHI agar, maka: • Lakukan identifikasi MPT64 dan bila positif, maka laporkan sebagai “M.tbc”.
• Identifikasi MPT64 negatif atau invalid, maka reinkubasi kembali selama 48 jam dan dilakukan
pengulangan MPT64. Apabila hasil ulangan positif, maka laporkan sebagai “M.tbc”. Apabila hasil
pengulangan negatif, maka laporkan sebagai “NTM”.

5. Jika waktu deteksi MGIT berapapun, hasil BTA negatif dan tidak ada pertumbuhan pada media agar
darah/BHI agar (kasus jarang), maka:
• Reinkubasi kembali tabung MGIT minimal 3 (tiga) hari sampai menunjukkan sinyal positif
kembali.
• Apabila BTA positif dan media agar darah/BHI agar tidak ada pertumbuhan, maka lakukan
langkah (5).
• Apabila BTA positif dan media agar darah/BHI agar terkontaminasi, maka lakukan langkah (3).
• Apabila BTA negatif dan media agar darah/BHI agar terkontaminasi, maka lakukan langkah (2).
• Apabila BTA negatif dan tidak ada pertumbuhan pada media agar darah/BHI agar, maka
reinkubasi kembali sampai dengan 42 hari sesuai dengan protokol.

Sumber: Final Draft Juknis CDST_Compile_Lampiran SE.pdf

 Interpretasi Hasil Biakan MGIT

Catatan:

• Jika pada MGIT menunjukkan tabung positif, tetapi BTA negatif, tabung dapat dimasukkan kembali ke
dalam instrumen untuk pemantauan lebih lanjut, tetapi masih dalam waktu 5 jam pengambilan tabung.
Jika tabung tidak kembali ke mesin lebih dari 5 jam, data dihapus dari basis data instrumen dan tabung
akan dipantau sebagai tabung yang baru dimasukkan.
• Jika biakan pada media MGIT kontaminasi dan dibuang, maka dilakukan pengulangan biakan dari
spesimen atau sedimen dekontaminasi yang disimpan di lemari pendingin 2-8 °C dengan waktu
penyimpanan maksimal 7 (tujuh) hari atau spesimen baru.

Sumber: Final Draft Juknis CDST_Compile_Lampiran SE.pdf

Gambaran visual dari tabung MGIT positif yang
menunjukkan adanya pertumbuhan koloni.
(Sumber: koleksi gambar BBLK Surabaya)
 Kelemahan Media MGIT

MGIT (Mycobacterium Growth Indicator Tube) adalah salah satu

media kultur cair yang mampu mendeteksi TB relatif lebih
singkat dibandingkan kultur pada medium solid. Namun,
kelemahan media MGIT adalah memiliki angka kejadian
kontaminasi yang tinggi. Salah satu bakteri yang dapat
menjadi kontaminan adalah Pseudomonas sp.
Untuk mencegah pertumbuhan kontaminan tersebut, perlu
digunakan antibiotik seperti Piperasilin dan Gentamisin.

Sumber : PENGARUH PEMBERIAN ANTIBIOTIK GENTAMISIN, PIPERASILIN DAN CAMPURAN

(GENTAMISIN-PIPERASILIN) TERHADAP PERTUMBUHAN Pseudomonas sp. PADA KULTUR
Mycobacterium, Perpustakaan Universitas Gadjah Mada
Sub Biakan / Sub Kultur
 Sub Biakan / Sub Kultur
• Subbiakan adalah suatu kegiatan untuk menumbuhkan strain
bakteri baru dari isolat atau biakan bakteri lama pada media baru.
Subbiakan bisa dilakukan baik dari media padat atau cair.

• Prinsip subbiakan sama dengan prinsip biakan tanpa proses

dekontaminasi. Isolat yang diambil harus dipastikan murni dan
tidak tekontaminasi. Hasil subbiakan dapat digunakan untuk
memperbanyak isolat, identifikasi, uji kepekaan, stok kuman
(jangka pendek maupun panjang) atau kepentingan pemeriksaan
lain.
Sumber : Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021
Prosedur subbiakan sesuai dengan media yang digunakan dapat dilihat di bawah
ini.
a) Subbiakan dari Media Padat LJ Ke Media Padat LJ

Alat dan bahan yang diperlukan :

• Isolat dari Media LJ
• Media LJ
• Tabung reaksi dengan tutup ulir
• Glass beads, diameter 1.5-3 mm
• Vortex mixer
• Aquades steril
• Micropipette 100 μl
• Tip mikropipet

Sumber : Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021
 Cara Kerja
1. Pilih isolat dengan pertumbuhan koloni yang paling baik.
2. Ambil koloni sebanyak 1 (satu) sengkelit penuh.
3. Masukkan dalam tabung reaksi yang berisi 1 ml akuades steril dan glass bead, tutup
tabung.
4. Homogenisasi dengan vortex selama ± 1 menit.
5. Diamkan minimal 5-10 menit.
6. Ambil 100 μl suspensi kuman dari bagian terbawah 1/3 atas .
7. Inokulasikan pada tabung LJ, tutup kembali.
8. Sebarkan inokulum merata di atas permukaan media dengan cara menggerakkan
tabung.
9. Tutup tabung dilonggarkan, letakkan pada rak dengan kemiringan 30 derajad,
simpan dalam inkubator suhu 35–37 oC selama 24 jam.
10. Setelah 24 jam, kencangkan tutup dan letakkan tabung pada rak posisi tegak dan
lanjutkan inkubasi sampai 2-3 minggu.
11. Amati pertumbuhan tiap minggu.

Sumber : Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu MTB Kementerian Kesehatan 2021
b) Subbiakan Media Cair MGIT ke Media Padat LJ

Alat Dan Bahan :

 Isolat dari media MGIT
 Media LJ
 Vortex
 Pipet disposibel

Cara Kerja :
 Vortex tabung MGIT dengan baik, diamkan minimal 5-10 menit dan buka tutup tabung.
 Ambil satu aliquot kecil kaldu (~ 200 µl) dengan pipet disposibel.
 Inokulasikan pada 1-2 tabung LJ.
 Inkubasi pada inkubator suhu 37 °C (± 1 °C).
Sumber : Petunjuk Teknis dan Pemantapan Mutu : Pemeriksaan Biakan, Identifikasi, dan Uji Kepekaan
Mycobacterium Tuberculosis Complex terhadap Obat Anti Tuberkulosis pada Media Padat dan Media Cair.—
Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. 2021
DAFTAR PUSTAKA
• Raisuli,Ramadhan. 2017. Jurnal Deteksi Mycobacterium
tuberculosis Dengan Pemeriksaan Mikroskopis dan Teknik PCR
pada penderita TBC Paru di Puskesmas Darul Imarah. Aceh
• Petunjuk Teknis dan Pemantapan mutu : Pemeriksaan Biakan,
dan Uji Kepekaan Mtb Complex Terhadap Obat Anti
Tuberculosis Pada Media Padat dan Cair. Jakarta. Kementerian
Kesehatan RI. 2021
Thank You