Pemeriksaan Endokrin
Pemeriksaan Endokrin
Pemeriksaan Endokrin
Gangguan endokrin adalah penyakit yang terkait dengan kelenjar endokrin pada tubuh. Sistem
endokrin adalah jaringan kelenjar yang menghasilkan hormin, yang merupakan sinyal kimia yang
dikeluarkan melalui aliran darah. Pemeriksaan hormon tiroid meliputi pemeriksaan T3, T4, TSH dan
fT4. Pemeriksaan terhadap hormon tiroid mulai berkembang setelah diperkenalkan teknik
radioimmunoassay (RIA) pada awal tahun 1970-an, diikuti dengan immunoradiometric assay (IRMA),
enzyme-linked immunoassay (ELISA) dan enzyme immunoassay (EIA), serta yang terbaru
electrochemiluminescent assay (ECLIA). (Suryaatmadja 2010).
Ada beberapa metode pemeriksaan endokrin, yaitu metode enzyme immunoassay (EIA),
enzyme linked immunofluorescent assay (ELFA) dan electrochemiluminescent assay (ECLIA).
Tidak perlu persiapan khusus, tidak perlu mengubah pola makan dan aktifitas fisik, hanya saja
pasien diminta untuk menghentikan obat-obatan tertentu sampai tes selesai dikerjakan, Ada juga obat-
obatan yang tetap diminta untuk diminum karena ingin diketahui pengaruhnya. Bisaanya diukur kadar
hormon dari serum
yang dipisahkan dari spesimen darah vena, namun bisa pula digunakan plasma EDTA atau heparin.
Bila tidak segera diperiksa, serum sebaiknya disimpan pada suhu 2-8oC untuk 3-5 hari, bila dibekukan
akan stabil sampai ± 30 hari. Sebaiknya serum tidak hemolisis atau lipemik
A. PEMERIKSAAN T3
Hormon Thyroxine (T4) dan 3,5,3’ Triiodothyronine (T3) berada dalam sirkulasi darah, sebagian
besar terikat pada protein plasma Thyroxine Binding Globuline (TBG). Konsentrasi T3 jauh lebih kecil
daripada T4, namun memiliki potensi metabolik yang lebih besar. Pengukuran T3 merupakan faktor
penting untuk mendiagnosis penyakit tiroid. Pengukurannya dapat menentukan adanya varian pada
kelainan hipertiroid pada pasien tirotoksik dengan peningkatan kadar T3 namun T4 nya normal.
Peningkatan T3 tanpa adanya peningkatan T4 kebanyakan merupakan gejala awal dari tirotoksikosis
rekuren pada pasien yang telah mendapat terapi.
Pemeriksaan T3 juga dapat digunakan untuk monitoring pasien hipertiroid yang sedang
mendapatkan terapi maupun pasien yang telah berhenti menggunakan obat anti tiroid, dan sangat
bermanfaat untuk membedakan pasien eutiroid dan hipertiroid. Pada wanita, kadar T3 akan meningkat
selama kehamilan, terapi estrogen, dan pemakaian kontrasepsi hormonal. Jika peningkatan T3 diikuti
oleh peningkatan TBG dan T4, maka perubahan ini tidak menggambarkan adanya kelainan tiroid
Prinsip Pemeriksaan T3 metode ECLIAPemeriksaan T3 metode ECLIA menggunakan prinsip
kompetitif dengan waktu pemeriksaan selama 18 menit.
Prosedur pemeriksaan
Pasca Analitik
Rentang nilai untuk T3 adalah 1.3 – 3.1 nmol/L atau 0.8-2.0 ng/mL. dengan batas deteksi
terendah adalah 0.300 nmol/L atau 0.195ng/mL.
Sampel sebaiknya tidak diambil pada pasien yang mendapatkan terapi biotin dosis tinggi ( >
5mg/ hari). Penggunaan amiodarone juga menyebabkan penurunan pada hasil T3.
Prosedur Pemeriksaan
a) Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke temperatur ruangan paling tidak 30
menit.
b) Gunakan satu T3 dan satu strip SPR T3 untuk setiap sampel
c) Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing sebanyak 100 µl
d) Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
e) Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis oleh alat dalam waktu kira – kira 40
menit.
f) Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip reagen dari alat.
Antibodi kedua (gout anti-mouse IgG) dilekatkan pada microwells. Serum pasien, monoklonal
antibodi anti T3 dari tikus dan T3 conjugated dengan horseradish peroxidase ditambahkan ke dalam
microwells. Selama inkubasi, anti T3 antibodi tikus akan terikat pada pada antibodi kedua dalam wells,
dan T3 dan conjugated T3 berkompetisi untuk berikatan dengan antibodi anti T3. Setelah inkubasi 60
menit pada suhu kamar, wells dicuci 5 kali dengan air untuk menghilangkan konjugat T3 yang tidak
terikat. Kemudian ditambahan larutan substrat TMB dan diinkubasi selama 20 menit, sehingga timbul
warna biru. Pembentukan warna biru dihentikan dengan menambahkan stop solution dan absorbans
diukur secara spektrofotometrik pada 450 nm. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan
jumlah enzim yang ada dan berbanding terbalik engan jumlah T3 yang tak berlabel, selanjutnya kadar
T3 dalam sampel dapat dihitung berdasarkan pemeriksaan standar dengan cara yang sama.
Prosedur pemeriksaan T3
Penghitungan hasil
a) Hitung rata-rata absorbans (A450) untuk tiap set standar, control dan sampel.
b) Buat kurva standar dengan meletakkan mean absorbans yang diperoleh untuk
c) tiap standar terhadap konsentrasinya dalam ng/mL pada kertas gambar linear,
d) absorbans pada garis vertikal (sumbu y) dan konsentrasi pada garis horizontal
e) (sumbu x)
f) 3. Konsentrasi T3 dalam ng/mL ditentukan dengan memasukkan nilai absorbans
g) tiap sampel ke dalam kurva standar.
h) Range pada individu normal berkisar 0,6-1,85 ng/mL. Pada umumnya, kadar
i) T3 total dalam serum cenderung pararel dengan TBG. Peningkatan kadar T3 dapat
j) terjadi pada penderita hipotiroid yang sedang mendapatkan terapi. Konsentrasi
k) minimal yang dapat terdeteksi adalah 0,2 ng/mL.
B. PEMERIKSAAN T4
L-Thyroxine (T4) merupakan hormon yang disintesis dan disimpan dalam kelenjar tiroid.
Proses pemecahan proteolisis Thyroglobulin akan melepaskan T4 ke dalam aliran darah. Lebih dari
99% T4 terikat pada 3 protein plasma secara reversibel, yaitu : Thyroxine binding globulin (TBG) 70%,
thyroxine binding pre albumin (TBPA) 20% dan albumin 10%. Sekitar 0,03% T4 yang berada dalam
keadaan tidak terikat. Penyakit yang mempengaruhi fungsi tiroid dapat menimbulkan gejala yang sangat
bervariasi. Pengukuran T4 total dengan immunoassay merupakan metode skrining yang paling
memungkinkan dan dapat dipercaya untuk mengetahui adanya gangguan tiroid pada pasien.
Peningkatan kadar T4 ditemukan pada hipertiroidisme karena Grave’s disease dan Plummer’s disease
pada akut dan subakut tiroiditis. Kadar T4 yang rendah berhubungan dengan hipotiroidisme kongenital,
myxedema, tiroiditis kronis (Hashimoto’s disease) dan beberapa kelainan genetik.
a) Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke temperatur ruangan paling tidak 30
menit.
b) Gunakan satu T4 dan satu strip SPR T4 untuk setiap sampel
c) Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing sebanyak 200 µl
d) Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
e) Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis oleh alat dalam waktu kira – kira 40
menit.
f) Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip reagen dari alat.
Antibodi anti T4 dilekatkan pada microtiter wells. Serum pasien dan T4 yang telah
dilabel dengan horseradish peroxidase ditambahkan ke dalam microtiter wells. Selama
inkubasi, T4 dan T4 yang telah dilabel enzim akan berkompetisi untuk berikatan dengan dengan
antibodi anti T4. Setelah inkubasi selama 60 menit pada suhu kamar, wells dicuci 5 kali dengan
air untuk menghilangkan T4 berlabel enzim yang tidak terikat. Larutan substrat TMB
ditambahkan dan diinkubasi selama 20 menit, sehingga terbentuk warna biru. Pembentukan
warna biru dihentikan dengan menambahkan stop solution dan absorbans diukur secara
spektrofotometrik pada 450 nm. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan jumlah
enzim yang ada dan berbanding terbalik dengan jumlah T4 yang tak berlabel, selanjutnya kadar
T4 dalam sampel dapat dihitung berdasarkan pemeriksaan standar dengan cara yang sama.
Prosedur pemeriksaan
Penghitungan hasil
a) Hitung rata-rata absorbans (A450) untuk tiap set standar, kontrol dan sampel.
b) Buat kurva standar dengan meletakkan mean absorbans yang diperoleh untuk tiap standar
terhadap konsentrasinya dalam ng/mL pada kertas gambar linear, absorbans pada garis vertikal
(sumbu y) dan konsentrasi pada garis horizontal (sumbu x)
c) Konsentrasi T4 dalam ng/mL ditentukan dengan memasukkan nilai absorbans tiap sampel ke
dalam kurva standar. Kadar T4 rentang antara 5,0 - 13,0 ng/mL. Direkomendasikan agar setiap
laboratorium menentukan kadarnya sendiri disesuaikan dengan keadaan geografis dan populasi
yang ada. Konsentrasi minimal yang dapat terdeteksi adalah 0,4 ng/mL.
C. PEMERIKSAAN TSH
Pemeriksaan kadar TSH plasma atau serum merupakan metode yang sensitif untuk
mendiagnosis hipotiroidisme primer atau sekunder. TSH disekresi oleh lobus anterior kelenjar
hipofisis (pituitary) dan mempengaruhi produksi dan pelepasan thyroxine dan triiodothyronine dari
kelenjar tiroid. TSH merupakan glikoprotein dengan berat molekul ± 28.000 dalton, terdiri dari 2
subunit yang berbeda, alpha dan beta. TSH dan glikoprotein hipofisis seperti : Luteinizing Hormon
(LH), follicle stimulating hormon (FSH), dan human chorionic gonadotropin (hCG), memiliki
rantai alpha yang identik. Rantai beta berbeda namun mengandung regio dengan urutan asam
amino yang identik. Regio yang homolog ini dapat menyebabkan reaksi silang (cross reaction)
dengan beberapa antisera TSH poliklonal. Penggunaan antibodi monoklonal pada pemeriksaan
TSH dengan metode ELISA akan dapat menghilangkan reaksi silang ini, sehingga mencegah
terjadinya hasil tinggi palsu pada wanita menopause atau wanita hamil.
a) Inkubasi pertama: 50 ul sampel, antibodi spesifik TSH monoclonal biotinylasi dan antibodi
spesifik T4 yang dilabel dengan komplek ruthenium membentuk komplek sandwich.
b) Inkubasi kedua: setelah ditambahkan mikropartikel yang dilapisi streptavidin, komplek yang
terbentuk berikatan dengan fase solid melalui interaksi biotin dengan streptavidin.
c) Campuran reaksi diaspirasi dalam cell pengukur dimana mikropartikel secara magnetic
ditangkap pada permukaan elektroda. Substansi yang tidak berikatan dibuang melalui Procell.
Aplikasi voltase (tegangan) pada elektroda kemudian menginduksi emisi chemiluminescent
yang diukur oleh photomultiplier.
d) Hasil ditetapkan melalui kurva kalibrasi yang merupakan instrument yang dihasilkan secara
khusus oleh kalibrasi 2 titik dan master kurva dihasilkan melalui reagen barcode.
Perhitungan Hasil
Sampel sebaiknya tidak diambil pada pasien yang mendapatkan terapi biotin dosis tinggi ( >
5mg/ hari). Rentang nilai untuk TSH adalah 0.270 – 4.20 μIU/mL. dengan batas deteksi terendah adalah
0.005 μIU/mL.
Prosedur Pemeriksaan
a) Memindahkan reagen yang diperlukan dari lemari es ke temperatur ruangan paling tidak 30
menit.
b) Gunakan satu TSH dan satu strip SPR TSH untuk setiap sampel
c) Masukan kalibrator, control dan sampel masing – masing sebanyak 200 µl
d) Masukan SPR dan strip reagen ke dalam alat.
e) Semua langkah pemeriksaan dilakukan secara otomatis oleh alat dalam waktu kira – kira 40
menit.
f) Setelah pengujian selesai, pindahkan SPR dan strip reagen dari alat.
3. Pemeriksaan TSH dengan metode EIA
Pemeriksaan TSH berdasarkan prinsip ELISA menggunakan antibodi monoklonal
terhadap TSH. Mouse monoclonal anti TSH antibody digunakan sebagai fase padat (dalam
microwells). Anti TSH antibody dari goat digunakan dalam larutan enzim konjugat
(horseradish peroxidase). Sampel akan bereaksi dengan 2 antibodi tersebut, sehingga
molekul TSH akan diikat diantara fase padat dan enzyme-linked antibody. Setelah inkubasi
60 menit pada suhu ruang, wells dicuci dengan diluted wash buffer untuk menghilangkan
antibodi berlabel yang tidak terikat. Ditambahkan TMB substrate solution dan diinkubasi
selama 20 menit, sehingga terbentuk warna biru. Pembentukan warna biru dihentikan
dengan menambahkan stop solution, sehingga warna berubah menjadi kuning. Konsentrasi
TSH berbanding lurus dengan intensitas warna sampel. Absorbans diukur secara
spectrophotometric pada 450 nm.
Penghitungan Hasil
a) Hitung rata-rata absorbans (A450) untuk tiap set standar, kontrol dan sampel.
b) Buat kurva standar dengan meletakkan mean absorbans yang diperoleh untuk tiap standar
terhadap konsentrasinya dalam ng/mL pada kertas gambar linear, absorbans pada garis vertikal
(sumbu y) dan konsentrasi pada garis horizontal (sumbu x)
c) Konsentrasi TSH dalam µIu/mL ditentukan dengan memasukkan nilai absorbans tiap sampel
ke dalam kurva standar.
d) Rata-rata kadar TSH dewasa normal adalah 1,6 (0,4 - 6,0) µIU/mL. Kadar yang rendah juga
dapat terjadi akibat hipersekresi T3 dan T4 pada Grave’s disease atau tiroiditis. Diagnosis
banding diperoleh dengan cara memeriksa kadar TSH dan fT4 dalam serum secara simultan.
Konsentrasi minimal yang dapat terdeteksi adalah 0,2 µIU/mL.
Keterbatasan Prosedur
a) Hasil yang benar dan akurat diperoleh jika prosedur pemeriksaan dilakukan dengan
pemahaman penuh sesuai instruksi yang ada.
b) Prosedur pencucian sangat penting. Pencucian yang tidak benar akan menghasilkan presisi
yang buruk dan pembacaan absorbans yang tinggi palsu.
c) Hasil yang diperoleh harus digunakan bersama dengan prosedur diagnosis yang lain dan
informasi yang diperoleh oleh klinisi.
STUDI KASUS
1. Seorang pria datang ke Rumah Sakit dan memeriksa diri ke dokter dengan gejala gangguan
kelainan tiroid. Dokter menduga pasien tersebut mengidap Hipertiroidisme. Pemeriksaan
yang tepat yang dilakukan oleh ATLM adalah…
a. Pemeriksaan Triiodothyronine (T3)
b. Pemeriksaan Thyroxine (T4)
c. Pemeriksaan TSH
d. Pemeriksaan FT4
e. Pemeriksaan SGOT
2. Seorang wanita memeriksakan diri ke dokter untuk memeriksakan hormone tiroid. Dari hasil
Laboratorium menunjukan bahwa kadar T3 meningkat. Nilai rujukan dari pemeriksaan
tersebut adalah…
a. 1,3-3,1 nmol/L
b. 64-164 nmol/L
c. 5,0-13,0 ng/mL
d. 0,270-4,20 µIU/mL
e. 0,4-6,0 µIU/mL
TUGAS PRAKTIKUM KIMIA KLINIK III
“PEMERIKSAAN ENDOKRIN”
KELOMPOK 2 :
Felani Saidina
Harmila
Helga Febrianti
Ivana Rini
La Kariadin
Melani
2019