Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

STRESS OXYDANT
I. Pro-oxydants :
I.1. Définitions :
a) Radical libre :
Espèce chimique déséquilibrée par la présence d’e- libre (non apparié) sur la couche externe.
Ce déséquilibre n’est que transitoire et doit être rétablit soit par l’acceptation d’un autre e- soit
par le transfert de cet e- libre sur une autre molécule.
▪ Très grande réactivité.
▪ Durée de vie très courte (10-3 à 10-6 seconde).

b) Espèces Réactives d’Oxygène :

Espèces électrophiles ubiquitaires de courte durée de vie (quelques nanosecondes), elles
possèdent une réactivité chimique délétère à l’égard des biomolécules, cette réactivité est
proportionnelle au pouvoir oxydant (OH° > RO° > HOO° > ROO°).
Ils sont classés en :
▪ ERO radicalaires : Anion superoxyde (O2 °-), Radical hydroxyle (OH°), Radical peroxyle
(ROO°), Radical hydroperoxyle (HOO°), Radicaux alkoxyles (RO°), Monoxyde d’azote
(NO°).
▪ ERO non radicalaires : Oxygène singulet (1O2), Peroxyde d’hydrogène (H2O2),
hydroperoxydes (ROOH), Peroxynitrite (ONOO-), hypochlorite (ClO-).

I.2. Mécanismes de formation des ERO :

I.2.1. ERO radicalaires :
➢ Anion superoxyde O2 °- :
▪ Produit de la réduction mono-électronique de O2 lors de la respiration mitochondriale.
▪ Relativement stable.
▪ Réagit très lentement avec les molécules biologiques.
▪ Nucléophile.
➢ Radical hydroxyle OH° :
▪ Espèce la plus réactive.
▪ Durée de vie en milieu biologique : < 10-6 sec.
▪ Fort pouvoir oxydant sur les molécules environnantes et non pas à distance
▪ Il peut être généré de plusieurs manières :
a. Réaction de Fenton : Décomposition de H2O2 en présence de métaux (Fe II, Cu I, Co II, Ti
III, Cr V) selon la réaction suivante :

b. Réaction d’Haber-Weiss : Interaction de H2O2 avec O2 •- selon la réaction suivante :

Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

c. Coupure homolytique de H2O2 sous l’influence de rayonnements UV.

d. Réaction de l’acide hypochloreux avec l’O2 •-
e. Décomposition des ions peroxynitrites (ONOO-).
I.2.2. ERO non radicalaires :
➢ Oxygène singulet 1O2 : Il représente l’état excité de l’oxygène moléculaire par des électrons
périphériques à spins antiparallèles.
▪ Très instable.
▪ Extrêmement réactif face à des molécules riches en électrons.
▪ Il se forme principalement lors des processus physicochimiques (UVA).
➢ Peroxyde d’hydrogène H2O2 :
▪ Molécules oxydantes et réductrices au même temps
▪ Peu réactif en l’absence de métaux de transition.
▪ Diffuse rapidement à travers les membranes cellulaires.
▪ Résulte de la dismutation de l’O2•- selon la réaction suivante :
Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

I.3. Sources de production des ERO :

I.3.1. Sources endogènes :
a) Sources Enzymatiques :
➢ Complexes enzymatiques mitochondriaux :
La réduction de l’oxygène moléculaire par les cytochromes respiratoires cellulaires
s’accompagne d’une production parallèle d’ion superoxyde O2• -, d’eau oxygénée et de radicaux
hydroxyles OH•.
➢ Enzymes de l’inflammation :
▪ NAD(P)H oxydase (ubiquitaire) : Au cours de la phagocytose, elle est capable de réduire l’O2
en O2•- selon la réaction suivante :

▪ NO Synthase (I, II, III, m) : Formation du monoxyde d’azote radicalaire (NO°)

▪ Myélopéroxydase MPO : A l’intérieur de la vacuole de phagocytose, l’anion superoxyde O2•-
est dismuté en peroxyde d’hydrogène qui à son tour va subir l’action de la myélopéroxydase et
former de l’acide hypochloreux (HClO).
➢ Systèmes des CYP450 : CYP2E1 :
La NADPH oxydase transforme le NADPH en NADP+, l’électron perdu réduit le CYP450 Fe
III en CYP450 Fe II par la NADPH Cytochrome P450 réductase. L’auto-oxydation du CYP450
Fe II en CYP450 Fe III permet la réduction d’O2 en O2°-.

➢ Autres enzymes :
▪ Xanthine oxydase : Formation de O2°-.
▪ Monoamine oxydase : Formation de H2O2.
▪ Cyclo-oxygénases : Métabolisme de l’acide arachidonique.
b) Non enzymatiques :
Auto-oxydation de l’adrénaline, dopamine, flavines, hydroquinone, hémoglobine :
O2°-, H2O2, OH°.
I.3.2. Sources exogènes :
a) Agents chimiques :
➢ Métaux : le Cuivre et le Fer libres génèrent des radicaux hydroxyles OH•, très réactifs, à
partir de l’H2O2, par la réaction de Fenton.
Arsenic : Production de H2O2 lors de l’oxydation de l’As3+ en As5+.
Plomb, cadmium...
➢ Particules inhalées : Amiante, Silice, sont des sources de RL par la phagocytose exacerbée
qu’elles déclenchent et car elles sont recouvertes de sels de Fer en surface.
➢ Ethanol, tabac, drogues, …
Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

➢ Médicaments : paracétamol, barbituriques, …

➢ Pesticides : paraquat …
➢ Solvants : tétrachlorure de carbone….
b) Agents physiques :
❑ Radiations ionisantes (RI) : la radiolyse de l’eau cellulaire conduit à la génération de OH•
qui est responsable de 65% des effets des RI.
❑ Rayonnements UV : Formation de l’oxygène singulet sous l’action d’un rayonnement UVA.
c) Agents microbiologiques : virus, bactéries…

II. Anti-oxydants :
II-1- Définition :
Toute substance même à faible concentration est capable d’inhiber l’oxydation du substrat
oxydable et d’empêcher l’accumulation des radicaux libres. On distingue :
▪ Antioxydants enzymatiques
▪ Antioxydants non enzymatiques

II-2- Antioxydants enzymatiques : 1 ère ligne de défense

➢ Superoxyde Dismutase (SOD) : Métalloenzyme, ubiquitaire (présente dans toutes les
cellules) qui se présente sous 03 isoenzymes :
CuZn-SOD1 (cytosolique), Mn-SOD2 (mitochondriale), CuZn-SOD3 (extracellulaire).
Elle est capable d’éliminer l’anion superoxyde O2•- par une réaction de dismutation :

➢ Catalase : Enzyme héminique, ubiquitaire (foie, GR ++) et localisation subcellulaire

(peroxysomes). Elle catalyse la réaction de dismutation de H2O2 qui se fait en deux étapes :

➢ Système Glutathion peroxydase / glutathion réductase (GPx / GR) : Ce sont des

sélénoprotéines (enzyme à sélénium), il existe 07 isoformes. C’est la voie majeure de
dégradation des hydroperoxydes (ROOH, H2O2). Elle a comme Co-facteur le glutathion réduit
(GSH).

➢Thiorédoxines peroxydases (Trx) : Sélénoenzymes, NADPH dépendante.

Substrats : H2O2, ROOH, ONOO-

L’efficacité catalytique de Trx est inférieure à celle de GPx et de la catalase.

Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

II-2- Antioxydants non enzymatiques :

➢ Glutathion : Tripeptide naturel riche en groupements thiol (-SH) :
L-γ-glutamyl + L-cystéinyl + glycine. La forme réduite (GSH) constitue 90% du glutathion
total. C’est une molécule hydrosoluble (cytoplasme, noyau, mitochondries) possédant des
propriétés réductrices (anti oxydant).
Co-facteur de nombreuses enzymes anti oxydantes comme la (GPx)
Substrats : protéines oxydées, ROS (OH•, 1O2, …) ,4-HNE, espèces électrophiles
▪ Conjugaison aux espèces électrophiles :

➢ Vitamines :
▪ Vitamine E : α-tocophérol est la forme la plus active et la mieux absorbée. Elle a une capacité
d’insertion dans les membranes donc Antioxydant majeur des structures lipidiques. Elle capte
les ERO dans les membranes par déplacement (mouvement de navette).
Autres actions : neutralisation de 1O2.
▪ Vitamine C : Acide ascorbique (AscH2). C’est un agent réducteur et chélateur.
Ses actions sont :
❑ Interaction directe avec les radicaux O2 °-, OH° et 1O2
❑ Elimination du H2O2
❑ Régénère la vitamine E active

▪ Provitamine A (caroténoïdes) : Chef de fil : β-carotène = précurseur de la vitamine A et réagit

avec les ERO : ROO°, OH° et O2 °-
▪ Autres vitamines :
-Flavonoïdes (vitamine P) : Interaction avec ROO° et chélateurs des métaux de transition
-Coenzyme Q10 : C’est une vitamine-like liposoluble. Neutralisation O2 °-, OH°, ROO°, RO°
et régénération de la vitamine E.
➢ Oligo-éléments : Cofacteurs de systèmes enzymatiques. L’activité des enzymes anti
oxydantes dépend de l’apport en oligo-éléments par l’alimentation.
▪ Sélénium : Co-facteur GPx, Trx (↓ [Se] facteur limitant synthèse sélénoenzymes).
▪ Zinc : Co-facteur SOD1, SOD3.
Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

III. Stress oxydant :

III-1- Définition : Un déséquilibre entre les pro-oxydants et les systèmes de défense
antioxydants, avec comme conséquence, l’apparition de dégâts souvent irréversibles pour la
cellule.
III-2- Dommages oxydatifs :
a) Dommages oxydatifs lipidiques :
Peroxydation lipidique : c’est l’ensemble des phénomènes d’oxydation non enzymatique
(Dégradation) non spécifiques des lipides.

➢ Cible :
❑ Les constituants membranaires principalement les acides gras polyinsaturés (-CH=CHCH2-
CH=CH-)
❑ Les lipides circulants : lipoprotéines, et le cholestérol non estérifié (libre).

Elle se déroule en trois étapes :

1) Initiation : Le radical libre initiateur de la réaction, par transfert d’un atome d’hydrogène
du groupement méthylène séparant deux doubles liaisons de l’acide gras polyinsaturé
créé un site radicalaire.
2) Propagation : L ° radical lipidique subit une série de réactions, dont la première avec
l’oxygène qui aboutit à la formation d’un radical peroxyl LOO°.
LOO° :
▪ Réagir sur une molécule lipidique formant un LOOH (hydroperoxyde) et nouveau site
radicalaire
▪ Former un endoxyde qui, par scission homolytique de la liaison dioxygène et par
réarrangement électronique génère malonaldéhyde (MDA) et 4-hydroxynonénal (4-
HNE).
3) Terminaison : Il se peut aussi qu’il réagisse avec un autre RL assurant ainsi la
terminaison de la chaîne.
Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

➢ Métabolites réactifs issus de la peroxydation lipidique :

❑ Métabolites primaires : ROO°, HOOR, RO°.
❑ Métabolites secondaires : Aldéhydes : 4-hydroxynonénal (4-HNE) considéré comme
le plus génotoxique, Malonedialdéhyde (MDA) mutagène et atherogène.
➢ Conséquences de la peroxydation lipidique : Les conséquences de la peroxydation
lipidiques proviennent de l’action conjuguée des métabolites primaires et secondaires :
❑ Une atteinte de l’intégrité des structures membranaires.
❑ Dysfonctionnements cellulaires.

b) Dommages oxydatifs protéiques :

➢ Cibles : AA soufrés + AA aromatiques, peptides, protéines (les protéines les plus sensibles
sont celles qui ont un groupement sulfhydryle (SH)).
➢ Métabolites réactifs :
❑ Directe : formation de métabolites primaires : RO• et ROO• de la chaine peptidique et
latérale.
❑ Indirecte : formation de métabolites secondaires par glycation (formation de groupements
carbonyles)
➢ Conséquences :
- Modification des propriétés des protéines (protéines oxydées plus thermolabiles)
- Altération du fonctionnement cellulaire par altération des enzymes :
❑ Inhibitions enzymatiques.
❑ Perte de spécificité ligand-récepteur.
❑ Dénaturation des épitopes antigéniques.
❑ Perturbations métaboliques.

c) Dommages oxydatifs de l’ADN :

➢ Cibles : ADN mitochondrial et ADN nucléaire.
➢ Mécanisme : La réaction de OH• avec l’ADN est susceptible de conduire à :
-Formation d’adduits à l’AND
-Oxydation des bases et des résidus des sucres
-Cassures de chaîne par arrachement d’un atome d’hydrogène du 2-désoxyribose (simple,
double brins).
-Pontages ADN-protéines dans les nucléoprotéines.
-Formation de sites abasiques, oxydation et modification des bases, mutations.
➢ Conséquences :
-Altération mitochondriale
-Si les systèmes de réparations sont dépassés →mutation ponctuelle ou apoptose.
Cours de Toxicologie 5 éme Année Pharmacie 2024/2025 Dr MECHERI I.

III-3-Pathologies associées au stress oxydatif :

Maladies où le stress Maladies où le stress Maladies entraînant un
oxydant oxydant stress oxydant secondaire
=cause primordiale = facteur potentialisant
Cancers, auto-immunité, Diabète, stérilité masculine, SIDA, IR, parkinson,
cataracte, œdème rhumatismes, athéromes, thalassémie, maladies
pulmonaire, vieillissement Maladie d’Alzheimer, cardiovasculaires…
accéléré… asthme, …

III-4-Évaluation du stress oxydatif :

1) Quantification des ERO : Elle se fait soit par mesure directe (chimiluminescence, par
résonance paramagnétique électronique) soit par mesure indirecte (marqueurs
immunohistochimiques).
2) Quantification des marqueurs d’oxydation :
❑ Marqueurs d’oxydation lipidique :
- Malonedialdéhyde (MDA)
- 4-hydroxynonénal (4-HNE) est un marqueur plus spécifique.
❑ Marqueurs d’oxydation protéique : Dosage des protéines carbonylées ++++….
❑ Marqueurs d’oxydation nucléique :
- 8-OHDG (8Oxoguanosine) = marqueur de choix
3) Quantification des antioxydants :
➢ Enzymes (Catalase, SOD…)
➢ Vitamines (vit E, vit C……)
➢ Oligoéléments (Zn, Se…...)