Table des matières

Introduction ..................................................................................................................... 1

But de TP ........................................................................................................................ 1

Partie Théorique .............................................................................................................. 2

1 Sirop de menthe........................................................................................................ 2

2 Les colorants alimentaires ........................................................................................ 2

3 Méthodes d’analyse .................................................................................................. 3

Partie Expérimentale ....................................................................................................... 4

1 Matériels & Produits utilisés .................................................................................... 4

2 Mode opératoire ....................................................................................................... 4

Préparation de la colonne : ................................................................................ 4

Conditionnement de la colonne : ....................................................................... 4

Dépôt de l'échantillon à séparer : ...................................................................... 5

3 Traitement des résultats............................................................................................ 6

Réponses :.......................................................................................................... 6

Conclusion ...................................................................................................................... 9

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Introduction
La diététique ne rend pas indispensable l’usage des colorants et des arômes
alimentaires, mais la vue et l’odorant des consommateurs sont attirés par les couleurs
vives et les odeurs agréables.
De nombreux colorants sont utilisée pour améliorer l’aspect des produits alimentaires,
ils sont répertoriés par un numéro de la série E100 selon leur couleur et leur nature.
La chromatographie est une des méthodes les plus employé pour identifier ces colorants
dans les aliments.

But de TP
 Séparation du colorants alimentaires présents dans un sirop de menthe par
chromatographie sur colonne.
 Identifier et quantifier ces colorants par spectrophotomètre UV-visible.

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Partie Théorique
1 Sirop de menthe
Définition : Le sirop de menthe industriel est généralement coloré en vert avec un
mélange de deux colorants alimentaires, le jaune de tartrazine E102 et le bleu patenté
E131. En outre, l’aromatisation est obtenue non pas directement avec des plantes mais
avec des extraits raffinés, généralement de l’essence menthe ou du menthol.

2 Les colorants alimentaires

Généralités : Les colorants alimentaires sont utilisés depuis plusieurs siècles, elles sont
utilisées pour ajouter de la couleur à une denrée alimentaire, ou pour en rétablir la
couleur originale, elles possèdent généralement un effet sur notre perception de celui-
ci, elle peut augmenter par exemple l’appétence du consommateur. Les colorants n’ont
aucune valeur nutritive mais permettent en améliorant l’aspect et de donner envie de
consommer cet aliment.
La classification des colorants permet à l’utilisation de connaitre le mode d’application
du colorant et donc ses domaines d’utilisations et on a colorants naturels, colorants
synthétiques.

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3 Méthodes d’analyse
Les méthodes chromatographiques sont des méthodes permettent de séparer les
éléments d’un extrait végétale en solution plus ou moins complexe
Chromatographie sur colonne :
C’est une technique basée sur des phénomènes d’adsorption. La phase solide est le plus
souvent d’alumine ou la silice, remplit une colonne de longueur et de section variable
l’échantillon en solution concentrée est déposée en haut de la colonne et la séparation
des composants résulte l’écoulement continu d’un éluant, traversant la colonne par
gravité ou sous l’effet d’une faible pression.
Les molécules sont entrainées vers le bas à des vitesses variables selon leur affinité pour
l’adsorbant et leur solubilité dans l’éluant. Le chromatogramme se développe en formant
une succession de zones cylindriques qui se séparent en migrant vers le bas. La
séparation dépend de l’éluant, de l’adsorbant de la dimension de la colonne et de la
vitesse d’élution.

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Partie Expérimentale
1 Matériels & Produits utilisés

Matériels & Produits

Colonne chromatographique, Pipette pasteur, Deux béchers de 50 ml,

Spectrophotomètre UV-visible, Silice en poudre, Solution NaCl saturée, Ethanol,
Eau distillée, Sirop de menthe, Une pompe.

2 Mode opératoire
Préparation de la colonne :

- Maintenir une burette sèche de 25 ml verticalement à l’aide d’une pince fixée à une
potence.
- Verser quelques grammes de silice dans un petit bécher sec.
- Introduire la poudre de silice dans la burette en s’aidant d’un petit entonnoir sec (en
verre) & tapoter sur la burette pour tasser la silice.

Conditionnement de la colonne :

- Placer un bécher propre sous la pointe de la burette.

- Ouvrir le robinet de la burette.
- Verser tout doucement à l’aide d’une pipette un peu d’eau salée (Eluant 1) sur la paroi
de la colonne.
- Laisser l’eau s’écouler librement, si l’écoulement est trop lent, activer-le en
appliquant une pression à l’aide d’une pompe.
- Pendant l’écoulement, tapoter légèrement ou tournoyer la burette pour s’assurer que
le sable et la silice sont disposés de manière homogène (absence de bulles d’air
emprisonnées).
- Expulser l’excès d’eau salée jusqu’au niveau de la couche de sable supérieure.
- La colonne est ainsi conditionnée et elle est prête à recevoir l’échantillon à analyser.

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 Dépôt de l'échantillon à séparer :

- Déposer très doucement à l'aide d'une pipette, sans toucher les parois de la colonne,
5 gouttes de sirop de menthe : attention à ne pas déformer la surface de la phase
stationnaire pendant cette opération.
- Lorsque le sirop de menthe a pénétré la surface de la phase stationnaire, éluer avec
l'eau salée en remplissant la colonne doucement à la pipette.
- Lorsque le premier colorant arrive en bas de la colonne le récupérer dans un premier
erlenmeyer.
- Éluer ensuite avec un autre éluant : Ethanol.
- Lorsque le second colorant parvient en bas de la colonne, le récupérer dans un second
erlenmeyer.
- Mesurer les volumes de chaque colorant.

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3 Traitement des résultats
Les volumes des colorants (Jaune & Bleu) :

Colorants Jaune Bleu

Volume (ml) 44 105.7

Réponses :

o Le rôle du coton : il jouait le rôle de filtre et de bouchon.

o Il ne faut pas qu'il y ait de bulles d’air : car on aurait alors des chemins préférentiels
nuisant à une bonne séparation des composés. Pendant la phase d'élution avec le
solvant.
o Confirmation d’identité :
 En réalisant le spectre d’absorption du bleu patenté V, nous pouvons observer que
ce colorant absorbe pour un maximum de λ = 640 nm, qui correspond à la couleur
orange. Cela signifie que ce même colorant diffuse très bien dans la couleur
complémentaire de celle qui peut parfaitement absorber à savoir dans ce cas, la
couleur bleue (complémentaire de l’orange). Cette courbe d’absorption justifie bien
la couleur bleue du bleu patenté V.

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  En réalisant le spectre d’absorption du jaune de tartrazine colorant absorbe pour un
maximum de λ = 415 nm, qui correspond à la couleur violette. Cela signifie que ce
même colorant diffuse très bien dans la couleur complémentaire de celle qui peut
parfaitement absorber à savoir dans ce cas, la couleur jaune (complémentaire de
violet). Cette courbe d’absorption justifie bien la couleur jaune du jaune de
tartrazine.

o Calcul de la concentration :
. .
.

.
é / A (Bleu) = 1
1 1
é 6.25 10
160

.
!" / A (Jaune) = 450 x 10-3
#$% & '%() *
!" 1.12 10
#%

o L’utilité de l’addition de ces deux colorants dans le sirop de menthe :

En générale, de nombreuses préparations alimentaires industrielles utilisent des

colorants alimentaires mais l’utilisation est réglementée, ainsi qu’ils ont des colorants

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interdis, les colorants portent le nom de code (E 1) peu explicite pour le consommateur
qui essaie de déchiffrer une étiquette, le tartrazine (E 102), bleu patenté (E 131), le
mélange donne le vert pour la coloration du sirop. Le tartrazine E102 est un colorant
azoïque employé pour l’aromatisation, même rôle que le bleu patenté est utilisé pour
colorer et aromatiser.

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Conclusion
La chromatographie sur colonne est une technique expérimentale qui permet de séparer
les constituants d’un mélange. Ici, la chromatographie a permis de séparer deux
colorants d’un sirop de menthe. Dans ce cas la chromatographie sur colonne peut être
utilisée couplée à un moyen de détection, comme par exemple une spectroscopie UV –
visible ou une spectrométrie de masse et on obtient ainsi une chaîne complète
automatisable d'analyse.