TEISSIER Thomas Universit de Crteil-Paris XII

MADET Nicolas
Licence IUP SIAL

COMPTE-RENDU DE TP DE CHROMATOGRAPHIE:

Chromatographie en Phase Gazeuse

CPG.

Anne universitaire 2003/2004

 Sommaire.

I OBJECTIF........................................................................................................................ 3
II MATERIEL. ..................................................................................................................... 3
II.1 CHROMATOGRAPHE EN PHASE GAZEUSE. .................................................................... 3
II.1.1 Principe. ............................................................................................................. 3
II.1.2 Materiel .............................................................................................................. 4
III MANIPULATIONS ..................................................................................................... 5
III.1 ETUDE DES PARAMETRES. ........................................................................................... 5
III.1.1 La rsolution. ..................................................................................................... 5
III.1.2 Le facteur de capacit. ....................................................................................... 5
III.1.3 Lfficacit.......................................................................................................... 5
IV INTERPRETATIONS ET OPTIMISATION ........................................................... 6
IV.1 OPTIMISATION DU DEBIT. ............................................................................................ 6
IV.2 OPTIMISATION DE LA TEMPERATURE........................................................................... 7
IV.3 OPTIMISATION DE LA SEPARATION. ............................................................................. 8
V CONCLUSION................................................................................................................. 9

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 La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est une mthode sparative parmi les
plus employes car elle allie rapidit et efficacit de sparation. Elle permet danalyser
qualitativement et quantitativement des mlanges complexes de gaz ou de composs qui
peuvent tre volatiliss sans tre dcompos. Cette mthode permet la sparation comme les
autres techniques chromatographique par une suite dquilibre entre une phase gazeuse (phase
mobile qui entrane les chantillons analyser) et une phase liquide (chromatographie de
partage) ou solide (chromatographie dadsorption).
Pour concurrencer lutilisation de lHPLC, la CPG offre :
- Une grande adaptabilit par un grand choix de phases stationnaires, de tempratures,
et de dbit de phase mobile ainsi que sa composition (azote, argon, hlium, hydrogne, )
- Lutilisation de mthodes physiques de dtection trs sensibles (de lordre du
picogramme)
- Lautomatisation assurant lutilisation de trs nombreux chantillons.

I Objectif.
Cette manipulation a pour objectif de nous familiariser avec lutilisation dun
chromatographe en phase gazeuse et doptimiser quelques paramtres de sparation tel que le
dbit de phase mobile et la temprature du four de la colonne.
Loptimisation seffectuera sur la sparation dhydrocarbures lgers.

II Matriel.

II.1 Chromatographe en phase gazeuse.

II.1.1 Principe.
Le schma gnral dun chromatographe en phase gazeuse coupl un dtecteur
ionisation de flamme (FID ou DIF) est rendu sur la figure 1 suivante.

Figure 1 : schma gnral dun chromatographe en phase

gazeuse coupl un dtecteur ionisation de flamme

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 Le principe de la sparation repose sur la diffrence daffinit entre les composs pour
la phase mobile et la phase stationnaire.
Un compos qui aura plus daffinit pour la phase mobile, aura peut dinteraction avec
la phase stationnaire et sera donc moins ralenti par celle-ci et sera donc lu plus rapidement
quun compos qui aura plus daffinit avec la phase stationnaire et sera plus souvent en
interaction avec la phase stationnaire quavec la phase mobile.

II.1.2 Materiel

Les donnes techniques sont regroupes en annexes 12.

o Seringue : La seringue permet dinjecter un volume de 10 L. Nous injecterons un

volume de 1 L lors de ce TP.

o Injecteur : linjecteur permet la fois de

vaporiser les chantillons et de les entraner par la phase
mobile. Parmi les nombreux types dinjecteurs utilisables,
linjecteur Split/Splitless est le plus souvent utilis pour des
chantillons en solutions.
Le terme Split se rapporte une fuite qui est
contrle et qui permet dliminer une partie de
lchantillon lors de linjection et ceci est utilis pour des
chantillons concentrs. Les chantillons qui seront les plus
volatils seront en plus grande concentration au dbut de la
colonne.
Figure 2 : schma dun injecteur Split/Splitless
On peut vrifier par le rapport de Split si la colonne ne risque pas dtre surcharg par
lchantillon. Par exemple, le fabricant indiquant que la quantit maximale de la colonne est
de 100 200 ng pour chaque constituant, si on travaille avec un rapport de Split de 1: 50 et
que lon injecte 1 L de 5 constituants de masses volumiques de 1 g/cm3. Est-ce que
linjection prvue rpond bien aux consignes donnes par le fabricant ? Quantit injecte :
1L=1*1=1 mg, Quantit dans la colonne : 1/50=0,02 mg
Quantit par constituants : 0,02/5=4 g ce qui est suprieur 200 ng donc il y a surcharge de
la colonne.

o Colonne : La colonne est constitue dune phase stationnaire greff la paroi de la

colonne est qui est constitue de Poly(5% diphnyl, 95% dimthylsiloxane). Elle permet la
sparation dhydrocarbures lgers en fonctions de la temprature. La colonne les
caractristiques suivantes : Longueur = 30 m , Diamtre interne = 0,25 mm,
paisseur du film = 0,25 m.

o Four : Le four permet de maintenir la colonne une temprature constante ou de

travailler avec un gradient de temprature. On peut ainsi travailler de -99C 250C.

-4-
 o Dtecteur : Le dtecteur est donc un
dtecteur ionisation de flamme. L'luat pntre dans
une flamme obtenue par combustion d'hydrogne et
d'air. Les composs organiques forment alors des ions
collects par deux lectrodes, entre lesquelles on
applique une diffrence de potentiel. Il en rsulte un
courant lectrique recueilli par un lectromtre qui le
transforme en courant que l'on peut enregistrer.
Figure 3 : schma dun dtecteur
ionisation de flamme

III Manipulations
Nous allons sparer un mlange de 4 constituants. Tous sont des hydrocarbures dont
seul la longueur de leur chane carbone change : C5, C7, C8, C9.
Les composs lues en fonction de la longueur de leur chane carbon, ainsi le C9 est
celui qui aura le plus dinteraction avec la phase stationnaire donc il sera lu en dernier et
cest celui-ci qui sera tudi pour le calcul des paramtres doptimisation.

III.1 Etude des paramtres.

III.1.1 La rsolution.
Ce paramtre permet de dfinir la qualit de la sparation en qualifiant la distance
entre les pics de chaque constituant et leur chevauchement.

Rs =
2 (t r 2t r1) Avec :la largeur du pic la base.
+
2 1
tr : temps de rtention des composs
Rs doit tre suprieur 1,5 tout en
tant porche de 1,5 pour que la sparation puisse tre qualifi de bonne.

III.1.2 Le facteur de capacit.

k est le facteur de capacit, il est spcifique de chaque constituants et exprime le
rapport entre la concentration du constituant dans la phase stationnaire sur la concentration du
constituant dans la phase mobile.

k' = tr2 tm
Avec : tr le temps de rtention dun des compos
t r1 t m
tm le temps mort.

III.1.3 Lfficacit.
Lefficacit thorique dune colonne, cest le nombre de plateaux ncessaires la sortie
complte de la quantit initiale de solut. On a :

(t r t m) 2 Avec : tr le temps de rtention dun des compos (calculer en

fonction du temps mort : tm).
N =
Et la largeur du pic de ce compos la hauteur de 60%
e 2

-5-
 Avec lefficacit thorique de la colonne on peut calculer la hauteur quivalente un
plateau thorique (HEPTe) :
L Avec : L la longueur de la colonne
HEPT e = Ne le nombre de plateaux thoriques
N e

IV Interprtations et optimisation
IV.1 Optimisation du dbit.
A temprature constante (t=70 C), nous allons effectuer la sparation en faisant varier
le dbit de la phase mobile. Les dbits tudis sont 0,5-0,8-1-1,2-1,5 mL/min.
Les courbes de sparation ainsi que les rapports danalyses et dintgration sont
donns dans les annexes 1 11. Sur ces rapports danalyses ont calculs pour chaque
composs : le temps de rsolution, la largueur la base du pic, lefficacit thorique, le
facteur de capacit et le facteur de rsolution. Toutes ces donnes sont regroupes dans le
tableau 1 donn en annexe 13.
A partir de ces donnes nous allons pouvoir tracer des courbes de Van-Deemter (Ne
ou HEPTe =f(dbit ou de la temprature)). Lanalyse de ces courbes nous permet de dduire
tour tour le dbit et la temprature optimale de sparation des composs.
Sur le graphique suivant on peut observer la courbe defficacit permettant de
dterminer le dbit optimal.
Figure 4 : Courbe de Van-Deemter donnant lefficacit thorique ou lHEPTe en
fonction du dbit pour le nonane (C9) 70 C (temprature de colonne).
100000 0,0012

90000
0,001
80000

70000
0,0008
Efficacit thorique

60000
HEPTe

Ne
50000 0,0006
HEPTe
40000
0,0004
30000

20000
0,0002
10000

0 0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8
Dbit de phase mobile en mL/min

Lallure des courbes obtenues est contradictoire avec ce que lon aurait pu sattendre
obtenir car la courbe de Ne=f(dbit) devrait tre dabord croissante puis dcroissante et
inversement pour le courbe donnant lHEPTe=f(dbit).
On peut supprimer le premier point et essayer de tracer nouveaux les courbes avec
ses nouvelles valeurs et on obtient la figure suivante.

-6-
 Figure 4 : Courbe de Van-Deemter donnant lefficacit thorique ou lHEPTe en
fonction du dbit pour le nonane (C9) 70 C sans le dbit de 0,5 mL/min
100000 0,0012

90000

0,001
80000

70000
0,0008
Efficacit thorique

60000

HEPTe
Ne
50000 0,0006
HEPTe
40000

0,0004
30000

20000
0,0002

10000

0 0
0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5 1,7 1,9

Dbit de phase mobile en mL/min

On nobtient toujours pas les courbes souhaites mais on saperoit que le dbit
permettant davoir une efficacit thorique et une HEPTe la plus faible possible correspond
1,2-1,3 mL/min. Pour la suite des manipulations nous avons donc dcid de travailler avec un
dbit de 1,2 mL/min.

IV.2 Optimisation de la temprature.

Le trac des courbes de Van-Deemter un dbit de 1,2 mL/min en fonction de la
temprature est donn par la figure suivante.
Figure 5: Courbe de Van-Deemter donnant lefficacit thorique ou lHEPTe en
fonction de la temprature pour le nonane (C9) 1,2 mL/min
250000 0,0007

0,0006
200000

0,0005
Efficacit thorique

150000
0,0004
HEPTe

Ne
HEPTe
0,0003
100000

0,0002

50000
0,0001

0 0
60 70 80 90 100 110 120 130 140 150
Temprature de la colonne en C

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 Pour cette figure, les courbes de Van-Deemter correspondent bien ce que lon
attendait, on peut donc dduire de ces courbes la temprature optimale pour un dbit de 1,2
mL/min, c'est--dire que la sparation sera la plus efficace une temprature de 107C.

IV.3 Optimisation de la sparation.

Si on observe lvolution de la rsolution en fonction du dbit et de la temprature sur la
figure suivante on observe une diminution de la rsolution vers des valeurs acceptable (proche
de 1,5) quand la temprature alors que des dbits croissants fait augmenter la rsolution de
manire peut acceptable.
Figure 6: Courbe dvolution de la rsolution Rs en fonction du dbit et de la
temprature

Temprature en C
70 100 120 140
12

10

8
Rsolution Rs

Dbit 70C
6
Temprature 1,2 mL/min

0
0,5 0,8 1 1,2 1,5 1,7
Dbit en mL/min

Pour avoir la meilleure rsolution il faudrait donc avoir un dbit de 0,8 mL/min et une
temprature de 140 C.
En effectuant deux autres analyses avec les paramtres suivants :
- dbit = 1,3 mL/min Temprature = 106 C
- dbit = 1,4 mL/min Temprature = 110 C
On obtient les courbes danalyses et rapports dintgrations donns en annexes 10 et 11.
On saperoit que les rsolutions sont de lordre de 5, ce qui est trop important. Car
mme si la sparation de composs est effective et bonne, le temps danalyse en devient
considrablement plus long.

-8-
V Conclusion
Il aurait donc t prfrable deffectuer des analyses avec les paramtres de dbit et de
temprature trouv plus haut, c'est--dire : 140 C et 0,8 mL/min mais lors de notre tude
nous navons pas trac les courbes de dbit et temprature en fonction de la rsolution, et
nous ne pouvions savoir quels paramtres utiliser pour loptimisation.
Loptimisation na donc pas pu rellement tre men bout car nous ne savions pas quel
dbit ou quelle temprature nous donnerait la meilleure rsolution avec un temps danalyse
correct. Mais la dmarche doptimisation t effectue mais les courbes que nous avons
obtenus ne nous permettait pas de trouver directement par les courbes de Van-Deemter (en
particulier pour loptimisation du dbit) les paramtres optimums de sparation de ces
composs.

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 Tableau 1 : Rcapitulatif des donnes obtenu sur les rapports danalyse

Dbit en Temprature en
Ne HEPTe k' Rs
mL/min C
0,5 70 47644 0,00062967 3,77 9,5
0,8 70 29051 0,001032667 2,29 7,7
1 70 40415 0,000742299 1,76 8,7 Essai temprature =70
1,2 70 47130 0,000636537 1,41 9,1 C en fonction du dbit.
1,5 70 61245 0,000489836 1,05 10
1,7 70 92278 0,000325105 0,87 11

1,2 70 47130 0,000636537 1,41 9,1

Essai dbit =1,2 mL/min
1,2 100 214367 0,000139947 0,97 6,6
1,2 120 197611 0,000151813 0,82 3,8
en fonction de la
1,2 140 93912 0,000319448 0,74 1,8
temprature.

1,3 106 17588 0,001705708 0,81 5,1

1,4 110 189225 0,000158541 0,69 5 Essais supplmentaires.

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 Bibliographie

cole Polytechnique, Palaiseau.

Chromatographie en phase gazeuse [en ligne] disponible sur :
<http://www.collegepolytechnique.com/cdx/site/fiche_seminaire.cfm?seminaire_id=68>
(consult le 19/01/04)

Pascale Richardin. La chromatographie en phase gazeuse [en ligne] disponible sur :

<http://www.culture.gouv.fr/culture/conservation/fr/methodes/chrom_01.htm>
(consult le 19/01/04)

Ren Lafont. Mthodes physiques de sparation et danalyse et mthodes de dosages des

biomolcules [en ligne] disponible sur :
<http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/lafont/chromato/A3.html> (consult le 19/01/04)

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