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    TP Chromato Colonne Colorants Alimentaire

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    TP : Chromatographie sur colonne

    Objectifs : Le but de ce TP est de séparer différents colorants d’un mélange en utilisant la


    chromatographie sur colonne.

    I) Théorie
    La technique de chromatographie sur colonne repose sur le même principe que la
    chromatographie sur couche mince : les espèces chimiques à séparer sont plus ou moins
    entraînées par un éluant sur une phase fixe :
    - La phase fixe est un solide, le plus souvent de la silice ou de l’alumine remplissant une
    colonne
    - L’échantillon est déposé en haut de la colonne. La séparation des espèces chimiques est
    obtenue par l’écoulement continu d’une phase mobile (l’éluant) à travers la colonne

    La séparation est basée sur une différence de vitesses d’entraînement des espèces
    chimiques vers le bas de la colonne. L’objectif de ce TP est donc de séparer les constituants
    colorés d’un colorant vert (colorants alimentaires : le E102 et le E131) puis de montrer l’intérêt
    de la chromatographie sur colonne vis à vis de la chromatographie sur couche mince.

    II) Manipulation
    1) Expériences préliminaires : choix des éluants et identification du colorant bleu
    Pour séparer les deux colorants, il va nous falloir trouver un premier éluant qui n’entraîne
    que l’un des colorants puis un second qui entraînera le second colorant. Nous allons faire une
    CCM du colorant vert en utilisant le même support que pour la chromatographie sur colonne :
    la silice.
     Manipulation : Réaliser une CCM avec comme éluant :
    -1 -1
    • l’eau salée (3,4.10 mol.L )
    • l’éthanol absolu.
     Observer les chromatogrammes obtenus et conclure. Quel est le colorant bleu présent
    dans le colorant vert ?

    2) Préparation de la colonne
    L'opération de remplissage de la colonne conditionne l'efficacité de la séparation
    • Fixer verticalement le cône de pipette faisant office de colonne à l'aide d'une pince.
    • Mélanger environ 0,5 g de silice avec l’éluant.
    • Verser le gel de silice dans la colonne
    • Faire couler l’éluant sans que la partie supérieur de la silice ne sèche.
    • Mettre un petit bout de coton au-dessus de la poudre.
    • Mettre de l'eau salée au dessus du coton. Il ne faut pas qu'il y ait de bulles d'air ou de
    zone sans phase stationnaire
    3) Dépôt de l'échantillon à séparer
    Déposer, très doucement, avec une pipette trois gouttes de sirop de menthe: veiller à ne
    pas déformer la surface de la phase stationnaire pendant cette opération. Avant que la colonne
    ne se dessèche ajouter de l'eau salée.

    4) Alimentation de la colonne en éluant


    • Remplir régulièrement la colonne en éluant (eau salée)
    • Recueillir (dans des petits tubes placés sous la colonne) le premier colorant
    • Lorsque tout le premier colorant a été recueilli éluer avec de l'éthanol en veillant toujours
    à conserver la colonne imbibée d'éluant
    • Mettre des autres tube sous la colonne pour recueillir le second colorant
    • Regrouper les tubes contenant le même colorant (L’appréciation se fait à l’œil nu pour
    gagner du temps mais il faudrait faire des CCM pour valider l’observation)

    5) Analyse des solutions recueillies


    A l'aide d'un spectrophotomètre, tracer les spectres d'absorption ( A = f(λ)) des solutions
    recueillies.

    III) Compte-rendu
    1) Schématiser la colonne en cours d’élution et classer les fractions
    colorées suivant leur aptitude à se lier avec l’eau d’une part et avec
    le gel de silice d’autre part.

    2) Expliquer le déroulement d’une chromatographie sur colonne à l’aide


    des mots suivants :
    phase fixe – phase mobile – adsorbant (substance qui retient) – éluant –
    constituants d’un mélange à analyser – affinité – séparer – recueillir

    3) Au vu des formules chimiques, expliquer pourquoi le jaune de tartrazine est moins


    soluble dans l’éthanol que le bleu patenté.

    4) En vous aidant des résultats obtenus en chromatographie, conclure sur les solubilités
    comparées des deux colorants selon la nature de l’éluant.

    5) Faire une analyse sur la polarité des phases stationnaire et mobile avec les colorants

    6) Confirmer de deux façons différentes que le colorant bleu est du bleu patenté.
    Annexe

    a) Document 1 : Le sirop de menthe

    b) Document 2 : Les colorants et additifs alimentaires

    Les colorants sont des additifs alimentaires. Les additifs alimentaires sont des produits
    ajoutés aux produits alimentaires de base dans le but d'en améliorer la conservation, la
    couleur, le goût, l'aspect…

    c) Document 3 : Principe de la technique de séparation des colorants : la chromatographie


    sur colonne
    Dans une colonne remplie de silice, un éluant coule par gravité ou par surpression en
    appuyant sur la tétine, entraînant différemment les constituants du mélange selon l’affinité
    dans l’éluant utilisé. On se sert successivement de 2 éluants : le premier entraîne l’un colorant
    puis le second entraîne l’autre colorant. On peut alors recueillir séparément les constituants en
    bas de la colonne.
    d) Colorants

    BLEU PATENTE
    Il est utilisé en agroalimentaire comme colorant (numéro
    E131). En Europe, ce colorant peut être employé seul ou en
    combinaison dans les denrées alimentaires, son niveau
    autorisé dépend de l'application.

    Son utilisation est interdite en Australie, au Canada, aux


    États-Unis et en Norvège, parce qu'il est responsable
    d'allergies (urticaire, rares cas de choc anaphylactique).

    Il est utilisé comme colorant dans la boisson alcoolisée


    Get 27 ainsi que dans les bonbons Schtroumpf, Dragibus Haribo et les pastilles Valda.

    JAUNE DE TARTRAZINE
    Aucun effet secondaire n'est connu pour la tartrazine
    pure, excepté chez les personnes qui sont intolérantes
    aux salicylates (aspirine, baies, fruits) : dans ce cas la
    tartrazine peut également induire des symptômes
    d'intolérance. En association avec les benzoates (E210-
    E215), la tartrazine serait impliquée dans un grand pourcentage des cas du syndrome d'ADHD
    (hyperactivité) chez les enfants

    e) Courbes d’absorption

    Il n'existe que deux choses infinies, l'univers et la bêtise humaine... mais


    pour l'univers, je n'ai pas de certitude absolue.

    Albert Einstein

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