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    Invertase 1 Partie

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    Amine Mohamed Qassifi
    Ce document décrit une expérience visant à démontrer l'activité catalytique de l'invertase sur le saccharose et à comparer cette hydrolyse à une hydrolyse chimique. Il présente également la méthode pour mettre en évidence les sucres réducteurs libérés par l'invertase.

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    INVERTASE 1 PARTIE

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    Ce document décrit une expérience visant à démontrer l'activité catalytique de l'invertase sur le saccharose et à comparer cette hydrolyse à une hydrolyse chimique. Il présente également la méthode pour mettre en évidence les sucres réducteurs libérés par l'invertase.

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    sur 11

    TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE

    Etude de l’activité catalytique de l’invertase


    (1ére partie)

    Prof.ass Aboulmakarim Siham

    1
    1ére année Médecine
    Objectifs
    - Démontrer l’activité catalytique de l’invertase sur le
    saccharose et de la comparer à l’hydrolyse chimique par
    l’acide chlorhydrique.

    - Interpréter une réaction de recherche des sucres


    réducteurs par la méthode à l’acide 3,5-dinitrosalicylique
    (DNS).

    - Etudier l’effet des inhibiteurs sur l’activité de l’invertase

    2
    L’enzyme:

    Introduction
    - Protéine avec des propriétés de catalyse spécifiques
    d’une réaction chimique.

    -Catalyseur,

    - Possède un site actif qui a la forme d'une cavité ou d'un


    sillon.

    3
    Substrat Enzyme
    Enzyme
    ES : Produits
    complexe
    enzyme
    substrat

    S: substrat (la molécule qui subit l’action enzymatique et est définitivement


    modifiée)

    P: produit ( la nouvelle molécule qui résulte de cette transformation)

    4
    Manipulation 1

    Etude de l’hydrolyse catalytique du saccharose

    5
    Saccharose
    - Diholoside

    Principe
    - Formé d'une molécule
    de glucose et d'une molécule
    de fructose liées par
    une liaison osidique α (1↔2) β
    par leur extrémité réductrice, ce
    qui en fait un sucre non
    réducteur.

    6
    L’hydrolyse du saccharose, sucre non réducteur, peut

    Principe
    être effectuée:

    - Chimiquement par chauffage en milieu chlorhydrique,

    - Enzymatiquement par une α-glucosidase (saccharase


    intestinale) ou par une β-fructosidase (l’invertase de la
    levure).

    7
    L’invertase ?
    - Glycoside hydrolase ;

    - Hydrolyse le saccharose à pH optimal = 4,8 et à T= 30°C.

    - Permet la libération de deux sucres réducteurs : β-


    fructose et α-glucose qui ont un pouvoir réducteur selon la
    réaction suivante

    8
    Saccharose α-glucose
    6
    6 CH2OH
    CH2OH

    H 5 OH H 5 O OH
    O

    H H
    4 OH H 1 INVERTASE 4
    OH H 1

    OH H OH H

    H OH H
    O OH
    Ou

    CH2OH O OH
    Hcl
    CH2OH O
    H OH

    H CH2OH
    H OH

    OH H H CH2OH

    OH H

    9
    β-fructose
    Mise en évidence des sucres réducteurs par la
    méthode à l’acide 3,5-dinitro-salicylique

    • L'activité enzymatique de l’invertase peut être étudiée en


    mettant en évidence les sucres réducteurs libérés après
    hydrolyse.

    • La présence de sucres réducteurs peut se faire par la


    méthode à l’acide 3,5-dinitrosalicylique ou DNS.

    10
    Acide 3,5-dinitrosalicylique Acide 3-amino-5-nitrosalicylique

    Sucre réducteur

    Sucre oxydé

    JAUNE ROUGE
    11

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