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    Cours 4 Carte de Restriction

    Transféré par

    Hasna El Bakhouch
    Ce document décrit la méthode pour construire une carte de restriction à partir de la digestion d'un ADN avec des enzymes de restriction. Il explique comment déterminer si la digestion est complète ou partielle, le nombre de sites de restriction et leurs positions relatives en fonction de la taille des fragments obtenus.

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    Hasna El Bakhouch
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    carte restriction

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    sur 21

    République Algérienne Démocratique et Populaire

    Université des Sciences et de la Technologie d’Oran Mohamed BOUDIAF


    Département de Génétique Moléculaire et Appliquée

    COURS 4:
    CARTE DE RESTRICTION

    Dr ABDI Meriem
    Génie génétique, Licence 3 Biochimie
    CARTE DE RESTRICTION

    • Une carte de restriction identifie dans l’ADN une suite linéaire de sites de restriction

    séparés par une distance réelle (en nombre de paires de bases). Ces sites correspondent à

    des coupures de la séquence par des enzymes de restriction.

    • Elle permet de déterminer les positions des sites de restrictions:

    1. Sur un ADN linéaire Cartes d’ADN linéaire

    2. Sur un plasmide Cartes d’ADN circulaire


    CARTE DE RESTRICTION

    • L’utilisation de modèles mathématiques pour constituer la carte de restriction

    s’appuie sur les résultats obtenus après digestion de la séquence d’ADN.

    • En contrôlant les conditions expérimentales, on peut réaliser soit une digestion totale

    ou partielle de la séquence d’ADN.

    • En condition de digestion totale, tous les sites de coupure sont coupés.

    • Dans une digestion partielle, une proportion des sites de coupures restent intactes.
    CARTE DE RESTRICTION: APPROCHE

    1. Déterminer si l’ADN a été digéré

    2. La digestion est elle complète ou partielle?

    3. Nombre de coupures?

    4. Les positions relatives


    1 2 3 4
    Comparez au témoin non digéré

    Quelles échantillons n’ont pas été digérés?

    Quelles échantillons ont été digérés?


    1 2 3 4
    Comparez au témoin non digéré

    Quelles échantillons n’ont pas été digérés?

    1 et 4

    Quelles échantillons ont été digérés?

    2 et 3
    CARTE DE RESTRICTION: APPROCHE

    1. Déterminer si l’ADN a été digéré

    2. La digestion est complète ou partielle?

    3. Nombre de coupures?

    4. Les positions relatives


    DIGESTION COMPLETE

    Digestion
    DIGESTION PARTIELLE

    Non digéré
    Digestion
    COMPLETE OU PARTIELLE?

    1 2 3 4

    1. Comparez au témoin

    2. Vérifiez l’intensité des bandes

    3. Vérifiez les tailles des fragments


    CARTE DE RESTRICTION: APPROCHE

    1. Déterminer si l’ADN a été digéré

    2. La digestion est complète ou partielle?

    3. Nombre de coupures?

    4. Les positions relatives


    NOMBRE DE COUPURE

    • Le nombre de sites de restriction dépend de la nature de l’ADN.

    • Pour un ADN circulaire, le nombre de site de restriction=nombre de fragments

    ADN obtenus

    • Pour un ADN linéaire, le nombre de site de restriction=nombre de fragments

    ADN obtenus-1
    CARTE DE RESTRICTION: APPROCHE

    1. Déterminer si l’ADN a été digéré

    2. La digestion est complète ou partielle?

    3. Nombre de coupures?

    4. Les positions relatives


    LES POSITIONS RELATIVES

    • La taille des fragments représente la distance entre les sites de restriction.


    EXEMPLE CARTE LINEAIRE

    Enzyme Tailles des fragments en Kb


    HindIII 3 et 4
    SalI 2 et 5
    HindIII + SalI 2 et 3
    Pour une molécule d’ADN linéaire de 7Kb.

    La digestion avec l’enzyme HindIII permet

    l’obtention de 2 fragments : 4 et 3 Kb

    Il existe donc 1 site de restriction pour cette enzyme.


    3.0 4.0

    HindIII
    La digestion avec l’enzyme SalI permet l’obtention

    de 2 fragments : 5 et 2 Kb

    Il existe donc 1 site de restriction pour cette enzyme.


    2.0 5.0

    SalI
    La double digestion avec HindIII et SalI permet

    l’obtention de 2 fragments : 3 et 2 Kb.


    3.0 2.0 2.0 HindIII + SalI
    HindIII SalI

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