BIOLABO

www.biolabo.fr BIO-FIBRI
FABRICANT :
BIOLABO SAS, Dosage c hronométri que du fibri nogène
Les Hautes Rives Réactif pour la détermination de la concentration en fibrinogène du plasma humain
02160, Maizy, France
REF 13450 R1 6 x 4 mL R2 1 x 125 mL
REF 13451 R1 6 x 10 mL R2 2 x 150 mL

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SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50
USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) (2) STABILITE ET CONSERVATION

Le fibrinogène est la principale protéine plasmatique affectant la vitesse Stocker à 2-8°C dans le flacon d’origine bien rebouché et à l’abri
de la lumière.
de sédimentation. La concentration plasmatique en fibrinogène est
• Avant ouverture, les réactifs sont stables jusqu'à la date de
augmentée dans des cas d’inflammation, de nécrose tissulaire, de péremption indiquée sur l’étiquette.
diabète ou d’obésité. L’administration d’oestrogène et la grossesse
• Après ouverture (dans son flacon d‘origine ou en tube plastique), en
conduisent également à une élévation du fibrinogène plasmatique. Une l’absence de contamination, stockés et utilisés comme indiqué dans
augmentation du fibrinogène plasmatique constitue un facteur de risque la notice :
pour les maladies coronariennes ou du système cérébro-vasculaire. Flacon R1 (après reconstitution) :
Une diminution de la concentration plasmatique en fibrinogène est en au moins 24 heures à température ambiante
général à mettre en rapport avec une anomalie du métabolisme 7 jours à 2-8°C et 30 jours à –20°C.
hépatique (cirrhose, ictère...) ou des cas de fibrinolyse ou CIVD Flacon R2 :
(coagulation intravasculaire disséminée) au moins 3 mois en l’absence de contamination
rejeter tout réactif trouble.
PRINCIPE (5) (6) ● Ne pas utiliser les réactifs si les valeurs des contrôles se trouvent en
Technique basée sur les travaux de Von Clauss et Al., validés par dehors des limites de confiance recommandées.
Destaing F. et al. En présence d'un excès de thrombine, le temps de ● Ne pas utiliser le réactif de travail après la date de péremption
coagulation d'un plasma préalablement dilué est inversement indiquée sur l’étiquette du coffret.
proportionnel à la concentration en fibrinogène.
PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (6) (2)
REACTIFS Plasma
Prélever par ponction veineuse franche (blue top-citrate) :
flacon R1 THROMBINE • Sur citrate liquide (0,5 mL de citrate trisodique 0,109 M et 4,5 mL
Thrombine calcique lyophilisée d’origine animale. de sang).
Kaolin (en faible quantité pour améliorer la détection optique). • Eviter les prélèvements à la seringue qui favorisent la formation de
micro-caillots.
flacon R2 TAMPON DE DILUTION (pour plasmas) • Centrifuger 10 minutes à 2500 g.
Le fibrinogène est stable dans le plasma :
Tampon HEPES 0,02 M pH 7,35 • 4 h à température ambiante
Anticoagulant (citrate) • 18 mois congelé à -70°C
Inhibiteur de fibrinolyse Le dosage peut également être réalisé sur microprélèvements de
sang capillaire sous réserve de respecter des conditions de
PRECAUTIONS prélèvement et de dosage strictes.
Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
usage in vitro. INTERFERENCES (2) (3) (8)
• Vérifier l’intégrité des réactifs avant leur utilisation. Les inhibiteurs à action antithrombinique tels que l'héparine, les
• Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes). produits de dégradation du fibrinogène peuvent conduire à une sous-
• Ne pas pipeter avec la bouche. estimation. Dans ce cas, recommencer le test à une dilution supérieure.
• En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à La présence d'un antifibrinolytique dans le tampon diluant permet un
l’eau et consulter un médecin. dosage chez les patients sous traitement thrombolytique. Diluer
• Les réactifs peuvent contenir de l’azide de sodium (concentration l'échantillon juste après le prélèvement.
< 0,1%) qui peut réagir avec les métaux tel que le cuivre ou le plomb Résultats des tests d’interférence réalisés sur plasmas (env. 2.3 g/L)
des canalisations. Rincer abondamment. sur BIO SOLEA 4 :
• La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur simple Interférant Résultats
demande. Hémoglobine Pas d’interférence jusqu’à 327 µmol/L
• Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
Turbidité Pas d’interférence jusqu’à 2%
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen ou réactif d’origine
biologique comme potentiellement infectieux. Respecter la législation Bilirubine Interférence positive à partir de 450 µmol/L
en vigueur.
Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le
PREPARATION DES REACTIFS dosage. Voir également Norbert W. Tietz.

• Thrombine : Utiliser un objet non coupant (pointe de spatule) pour REACTIF ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES
soulever la capsule aluminium et la déchirer. Reconstituer avec le 1. Equipement de base du laboratoire d’analyse médicale.
volume d'eau déminéralisée indiqué sur l’étiquette. 2. Eau déminéralisée pour la reconstitution du réactif.
• Tampon de dilution pour plasmas : prêt à l’emploi 3. Plasma de référence
4. Plasma de contrôle normal et pathologique.
5. Papier millimétré.

IVD REF LOT →

Fabricant Date de péremption Usage “In vitro” Température de conservation Référence Produit Consulter la notice Numéro de lot Conserver à l’abri de la lumière Suffisant pour diluer avec

Made in France Dernière version : www.biolabo.fr Version : 18/12/2012

CONTRÔLE DE QUALITE MODE OPERATOIRE
REF 13961 Plasma de Contrôle Taux 1 6 x 1 mL Diluer le plasma à étudier au 1/10 dans du tampon de dilution (flacon
R2). Pour les plasmas normaux, cette dilution équivaut à une
REF 13962 Plasma de Contrôle Taux 2 6 x 1 mL
concentration en fibrinogène dans le plasma de 2 à 4 g/L, correspondant à
REF 13963 Plasma de Contrôle Taux 3 6 x 1 mL la zone de précision optimale.
ou tout autre plasma de contrôle titré pour cette méthode. Technique au crochet
• Programme externe de contrôle de la qualité. Placer la thrombine au bain-marie à 37°C et distribuer dans des tubes à
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants : hémolyse. Agiter le réactif pendant l'utilisation :
• Au moins un contrôle par série.
Plasma dilué 0,2 mL
• Au moins un contrôle par 24 heures.
• Changement de flacon de réactif. Incuber 2 minutes à 37°C
• Après opération de maintenance sur l’analyseur. Thrombine 0,2 mL
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de Déclencher le chronomètre simultanément, plonger le crochet à
confiance recommandées, appliquer les actions correctives suivantes : intervalles réguliers et noter le temps de coagulation.
1. Répéter l’opération en utilisant le même contrôle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un plasma de Technique semi automatique (lecture optique)
contrôle fraîchement reconstitué et répéter le test. Placer la thrombine à température ambiante (20-25°C).
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer en utilisant le
Distribuer dans les cupules :
même flacon de plasma de référence et un autre flacon de réactif et
répéter le test. Plasma dilué 0,2 mL
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre flacon Incuber 2 minutes à 37°C
de plasma de référence ou un plasma de référence fraîchement Thrombine 0,2 mL
reconstitué et répéter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service Démarrer la mesure par l'appareil simultanément.
technique BIOLABO ou le revendeur local. Commencer par les 3 dilutions du plasma de référence (voir § calibration),
rentrer les temps et concentrations correspondantes dans la méthode, puis
INTERVALLES DE REFERENCE (1) (2) procéder aux mesures de la même manière sur les plasmas de patients.
Méthode de Clauss Fibrinogène (g/L) 1,50-4,00 Technique automatique
Ces valeurs peuvent varier en fonction du couple réactif-instrument
Se référer au manuel d'emploi du fabricant.
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres valeurs de
référence pour la population concernée Remarque : Si le temps de coagulation ainsi mesuré n’est pas
compris entre 8 et 25 secondes, adapter les dilutions (voir § LIMITES
PERFORMANCES DE LINEARITE).
Etudes réalisées avec plasmas de contrôles sur BIO SOLEA
CALCUL
Intra-série Plasma Plasma Plasma Inter-série Plasma Plasma Plasma
N = 20 1 2 3 N = 20 1’ 2’ 3’ Concentration en Fibrinogène dans le plasma
Moyenne g/L 3,17 2,58 2,33 Moyenne g/L 2,64 2,43 2,44
à partir de la droite d’étalonnage (voir § Calibration) :
S.D. g/L: 0,09 0,07 0,05 S.D. g/L: 0,12 0,12 0,10
C.V. % : 2,8 2,8 1,97 C.V. % : 4,5 4,73 4,15 Sur papier millimétré, porter en abscisses (a), l’inverse des dilutions effectuées
(dans l’exemple 10-15-20) et en ordonnées (t), la moyenne des temps de
Comparaison avec réactif du commerce (méthode sans Kaolin) : coagulation mesurés pour chaque dilution, on obtient ainsi la droite
40 plasmas situés entre 2 et 4 g/L ont été testés avec les 2 réactifs sur d’étalonnage :
coagulomètre BIO SOLEA4 : Fxd
Fibrinogène (en g/L) =
y = 1,037 – 0,2185 r= 0,9505 a
où : F : Concentration en fibrinogène du plasma de référence.
LIMITE DE LINEARITE d : Inverse de la dilution du plasma testé (d = 10 si dilution 1/10)
a : Valeur trouvée en abscisse en reportant t (temps mesuré) en ordonnée
Plasma dilué 1/10 : la réaction est linéaire de 2 à 4 g/L dans le plasma,
c’est à dire des temps de coagulation compris entre 8 et 25 secondes
à partir du tableau de correspondance :
environ. En dehors de cette fourchette de concentrations, adapter les
Dans le cas d'une dilution au 1/10, la concentration en fibrinogène peut être
dilutions pour rester dans la zone de précision optimale :
obtenue par simple lecture du tableau joint au coffret.
• Concentration dans le plasma < 2 g/L : dilution du plasma 1/5
Si la concentration en fibrinogène du plasma étudié impose une dilution
• Concentration dans le plasma > 4 g/L : dilution du plasma 1/20 différente de 1/10, tenir compte du facteur de dilution.
Exemples : Pour une dilution au 1/20, multiplier la valeur par 2.
CALIBRATION
Pour une dilution au 1/5, diviser la valeur par 2.
• Utiliser le plasma de référence REF 13970 ou tout autre plasma de
référence raccordé sur WHO International Standard NIBSC Code : Correction pour anticoagulant liquide, hématocrite normal :
98/612. Dans le cas de prélèvement effectué sur citrate liquide (1 volume pour 9
• Effectuer 3 à 5 dilutions de ce plasma de référence, dans du tampon de volumes de sang) et pour un hématocrite normal, majorer le résultat de 20%.
dilution (flacon R2). Déterminer en triplicate les temps de coagulation Correction pour anticoagulant liquide, hématocrite anormal :
pour chacune des dilutions La concentration en fibrinogène plasmatique sera obtenue en multipliant le
• Technique au Crochet : Tracer la droite de calibration (voir § calculs) résultat trouvé par le facteur de correction suivant :
• Technique semi-automatique (BIO SOLEA 2, BIO SOLEA 4) : rentrer les 10 - (9 x Hématocrite)
moyennes des temps et concentrations correspondantes dans la
9 - (9 x Hématocrite)
méthode
Exemple : Plasma de référence 3.3 g/L
REFERENCES
Dilutions 1/d 1/10 1/15 1/20
(1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Curtis, E.R. Ashwood,
Plasma (mL) 0,1 0,1 0,1 W.B. Saunders (1999) p.1133, 1145, 1740-41, 1813, 1846.
th
Tampon (mL) 0,9 1,4 1,9 (2) Clinical Guide to Laboratory Test, 4 Ed., N.W. TIETZ (2006) p.404-405
th
Fibrinogène (g/L) dans la dilution 0,330 0,220 0,165 (3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4 Ed. (1995)
p.3\260 à 3-261
Ou (4) VON CLAUSS A. ACTA HAEMATOLOGICA 1957. 17, 237-246.
• Utiliser le tableau de correspondance joint au coffret (5) DESTAING F-DUZER A. PATHOLOGIE ET BIOLOGIE 1960, 8, 1615.
(6) HURLET A.-JOSSO F: PATHOLOGIE BIOLOGIE 1972, 20, 3-4,165-173
L'activité propre à chaque lot de thrombine dépend de la technique utilisée (7) CAEN-LARRIEU-SAMAMA : L’HEMOSTASE, 1968, EXPANSION SCIENTIFIQUE.
et des conditions opératoires. Il est recommandé de calibrer à chaque (8) Technique en hématologie, Flammarion médecine-sciences, 2nd éd . 1978,
nouveau lot de réactif. p.184-186

Made in France Dernière version : www.biolabo.fr Version : 18/12/2012