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    Uree Indole1

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    Ce document décrit la composition et l'utilisation du milieu urée-indole pour identifier les caractéristiques biochimiques des entérobactéries, notamment la présence d'uréase, de tryptophanase et de tryptophane désaminase.

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    1re STL

    Fiche technique n26

    LE MILIEU UREE-INDOLE
    1. Intrt
    Ce milieu permet de mettre en vidence les caractres suivants :
    prsence dune urase
    prsence dune tryptophanase
    prsence dune tryptophane dsaminase (TDA)
    Ce milieu est utilis pour lidentification des entrobactries (bacille gram -, oxydase -).

    Milieu synthtique

    2. Composition
    Composant

    Quantit (g/L)

    Rle

    Ure

    Lecture dun caractre biochimique (substrat de lurase)

    L-tryptophane

    0,3

    Lecture dun caractre biochimique (acide amin, permet la


    recherche de lindole et de la TDA)

    Chlorure de sodium
    Dihydrognophosphate
    de potassium
    Hydrognophosphate
    de potassium

    0,5

    Rouge de phnol

    0,0025

    0,1

    Source de sels minraux


    Maintien de la pression osmotique

    0,1

    pH

    Indicateur de pH
    7

    3. Principe

    recherche de lurase

    Lurase dgrade lure selon la raction suivante :


    Ure

    H2O

    2 NH4+

    CO32-

    Les ions CO32- vont entraner une forte alcalinisation du milieu qui sera rvle par un virage
    de lindicateur de pH (le rouge de phnol) sa teinte basique (rouge).

    recherche de la production dindole (mise en vidence de la tryptophanase)

    La tryptophanase hydrolyse le tryptophane selon la raction suivante :


    Tryptophane + H2O indole + acide pyruvique + NH3
    Lindole forme un complexe color en rouge en prsence dun ractif : le ractif de Kovacs.

    recherche de la tryptophane dsaminase

    La TDA dgrade le tryptophane selon la raction suivante :


    Tryptophane + H2O acide indole pyruvique + NH3
    Lacide indole pyruvique forme un prcipit marron fonc en prsence dun ractif : le
    chlorure de fer en solution acide.
    4. Ensemencement

    Ensemencer avec quelques gouttes de suspension bactrienne ou avec une colonie prleve
    lanse sur un milieu solide.
    Incubation 24 heures 37.

    1re STL

    Fiche technique n26

    5. Lecture

    Recherche de
    l'urase

    Recherche de
    la tryptophanase
    (production dindole)

    Ajout de ractif de
    Kovacs

    Ajout de chlorure de
    fer III

    Recherche de
    la TDA

    Milieu
    Ure-Indole

    24h
    dincubation

    Caractre
    recherch

    Urase
    (lecture aprs
    24 heures
    dincubation)

    Observation

    Milieu rouge

    Milieu orang
    (inchang)

    Interprtation
    Alcalinisation du milieu
    due la dgradation de
    lure

    Pas dalcalinisation du
    milieu

    Conclusion
    La bactrie possde lurase
    Elle est dite urase +

    La bactrie ne possde pas lurase


    Elle est dite urase -

    Aprs avoir effectu la lecture, sparer le milieu ure indole en deux (prlever une partie du milieu et le
    transvaser dans un tube hmolyse propre) puis raliser les tests suivants :
    1er tube : recherche de la production dindole :

    Ajouter 3 gouttes du ractif de Kovacs et effectuer la lecture sans agiter le milieu


    Apparition dun
    anneau rouge

    Prsence dindole.
    Le tryptophane a donc
    t hydrolys

    La bactrie a produit de lindole


    Elle est dite indole +

    Indole
    Lanneau reste
    orang

    La bactrie na pas produit dindole


    Absence dindole
    Elle est dite indole -

    2me tube : recherche de la tryptophane dsaminase (TDA) :

    Ajouter 3 gouttes du ractif (= chlorure de fer III en solution acide) et effectuer la lecture
    Coloration
    marron fonc

    Prsence dacide indole


    pyruvique.
    Le tryptophane a t
    dsamin.

    La bactrie possde la tryptophane


    dsaminase.
    Elle est dite TDA +

    TDA
    Coloration inchang

    Absence dacide indole


    pyruvique

    La bactrie ne posssde pas la


    tryptophane dsaminase.
    Elle est dite TDA -

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